Способ получения фактора, связанного с контролем над потреблением пищи и/или массой тела, полипептид, обладающий активностью подавления потребления пищи и/или прибавления в весе, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, способы и применение полипептида

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Разработан способ получения фактора, который участвует в процессе контроля над аппетитом и/или массой тела. Также описаны гены, полученные указанным способом, полипептиды, кодируемые указанными генами, предназначенные для лечения, контролирования или диагностики заболеваний, связанных с расстройствами пищевого поведения и/или контролированием массы тела. Также изобретение относится к веществам, которые ингибируют действия указанных генов или указанных полипептидов, предназначенных для лечения, контролирования или диагностики заболеваний, связанных с процессом контролирования аппетита и/или массы тела. При использовании тиазолидиндионов, обладающих PPARγ-агонистической активностью, могут быть получены гены и полипептиды, вовлеченные в регуляцию аппетита и/или снижения массы тела. 18 н. и 9 з.п. ф-лы, 41 ил.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Способ получения фактора, связанного с контролем над потреблением пищи и/или массой тела, содержащий следующие этапы:
воздействие соединения тиазолидиндиона, имеющего PPARγ-агонистическую активность, на клетку млекопитающего, и
получение генов, экспрессия которых индуцирована указанным соединением, и селекция и идентификация гена, кодирующего белок, содержащий сигнальный пептид из указанных полученных генов.

2. Полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, указанной в любой из SEQ ID NO: 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 или 107-115, обладающий активностью подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе.

3. Полипептид по п.2, в котором аминокислотная последовательность указана в любой из SEQ ID NO: 13-15.

4. Полипептид по п.3, в котором, по меньшей мере, один аминокислотный остаток химически модифицирован соединением или пептидом.

5. Полипептид, имеющий активность подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую гомологию, по меньшей мере, в 80% с аминокислотной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 и 107-115.

6. Полипептид по п.5, который состоит из аминокислотной последовательности, имеющей гомологию, по меньшей мере, в 80% с аминокислотной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 13-15.

7. Полипептид по п.5, где указанная активность подавления прибавления в весе является активностью подавления прибавления телесного жира.

8. Полипептид по п.6, в котором, по меньшей мере, один аминокислотный остаток химически модифицирован соединением или пептидом.

9. Фрагмент полипептида по п.5, обладающий активностью подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 39-41, 65-73, 101-103 или 107-115.

10. Фрагмент полипептида по п.9, в котором, по меньшей мере, один аминокислотный остаток химически модифицирован соединением или пептидом.

11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, указанный в любом из пп.2, 5 и 7, где полипептид обладает активностью подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе.

12. Молекула нуклеиновой кислоты, состоящая из нуклеотидной последовательности, указанной в любой из SEQ ID NO: 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 или 116-124, кодирующая полипептид, обладающий активностью подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе.

13. Молекула нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 18-20, 44-46, 74-82, 104-106, или 116-124, или ее частичной последовательностью при очень строгих условиях, и которая кодирует полипептид, имеющий активность подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе.

14. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.11-13, где указанная активность подавления прибавления в весе является активностью подавления прибавления телесного жира.

15. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.11-14.

16. Трансформант, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.11-14, экспрессирующий полипептид, обладающий активностью подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе.

17. Фармацевтическая композиция для подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе, содержащая полипептид по любому из пп.2, 5 и 7 или его фрагмент, сохраняющий свойства полипептида по любому из пп.2, 5 и 7, вектор по п.15 или трансформант по п.16, в качестве активного ингредиента.

18. Фармацевтическая композиция по п.17, в которой указанная активность подавления прибавления в весе является активностью подавления прибавления телесного жира.

19. Антитело против полипептида по любому из пп.2, 5 и 7.

20. Способ получения полипептида по любому из пп.2, 5 и 7, включающий следующие стадии (а) или (b):
(a) культивирование трансформанта по п.16 и извлечение продуцированного полипептида из трансформанта; или
(b) осуществление способа пептидного синтеза.

21. Аналитический способ прогнозирования или диагностики состояния повышенного потребления пищи или повышенного прибавления в весе, содержащий стадию:
обнаружения содержащегося количества молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 и 116-124, или полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 и 107-115, в биологическом образце из млекопитающего; и
прогнозирования или диагностики, что млекопитающее находится в состоянии повышенного потребления пищи или повышенного прибавления в весе, когда указанное обнаруженное количество является более низким по сравнению с количеством, содержащимся в биологическом образце, полученном от нормального индивидуума.

22. Набор реактивов для применения в аналитическом способе по п.21, содержащий:
по меньшей мере, один из: праймера для ПЦР, зонда или ДНК-чипа для обнаружения молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 и 116-124; или антитело, распознающее полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 или 107-115, стандартный пептид, или модифицированный пептид для конкурентной реакции связывания.

23. Способ скрининга терапевтического или профилактического агента, обладающего подавляющим действием в отношении потребления пищи и/или прибавления в весе, содержащий следующие стадии:
приведение в контакт исследуемого вещества с клеткой млекопитающего, и обнаружение повышенной экспрессии гена в указанной клетке, содержащего нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 и 116-124, или повышенного количества полипептида, содержащегося внутриклеточно в указанной клетке или секретированного внеклеточно, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 и 107-115.

24. Способ скрининга терапевтического или профилактического агента, обладающего подавляющим действием в отношении потребления пищи и/или прибавления в весе, содержащий следующие стадии:
введение исследуемого вещества млекопитающему и
обнаружение повышенной экспрессии гена, содержащего нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 или 116-124, или повышенной продукции полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 или 107-115, в биологическом образце из указанного исследуемого животного.

25. Способ скрининга терапевтического или профилактического агента, обладающего подавляющим действием в отношении потребления пищи и/или прибавления в весе, содержащий следующие стадии:
введение исследуемого вещества нокаутированному животному, не являющемуся человеком, в котором вся область или часть гена, содержащего нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 74-82, 104-106 и 116-124, была удалена, и обнаружение подавления потребления пищи или прибавления в весе у указанного животного, не являющегося человеком.

26. Терапевтический или профилактический агент, обладающий подавляющим действием в отношении потребления пищи и/или прибавления в весе, полученный в соответствии со способом по любому из пп.23-25.

27. Фармацевтическая композиция для подавления потребления пищи и/или подавления прибавления в весе, содержащая:
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 13-15, 39-41, 65-73, 101-103 и 107-115, или его фрагмент, сохраняющий свойства полипептида по любому из пп.2, 5 и 7; или
вектор или трансформант, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-12, 18-20, 44-46, 65-73, 74-82, 104-106 или 116-124 в качестве активного ингредиента.