Способ количественного определения сульфамидных препаратов в лекарственных формах
Владельцы патента RU 2419091:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный университет" (АГУ) (RU)
Изобретение относится к медицине и описывает способ количественного определения сульфамидных препаратов в таблетках путем обработки анализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученного раствора, причем анализируемую пробу дополнительно обрабатывают раствором хромотроповой кислоты в присутствии карбоната натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 530 нм относительно воды и определяют количество исследуемого вещества с помощью градуировочного графика. Данный способ обеспечивает высокочувствительную эксперсс-методику определения содержания сульфамидных препаратов в таблетках. 2 табл., 1 ил.
Изобретение относится к аналитической химии, может быть использовано для контроля за содержанием сульфамидных препаратов в различных объектах.
Целью изобретения является создание высокочувствительной экспресс-методики определения содержания сульфамидных препаратов в лекарственных формах. Сульфамидные препараты со свободной первичной аминогруппой легко диазотируются в кислой среде. В результате азосочетания образовавшихся диазосоединений с щелочным раствором β-нафтола в присутствии ацетата Na образуются интенсивно окрашенные азосоединения. Методика рекомендована Государственной Фармакопеей как общегрупповое испытание на подлинность лекарственных веществ, содержащих первичную ароматическую аминогруппу [Фармацевтическая химия. Под ред. проф. А.П.Арзамасцева. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006, 640 с.] [1].
Вместе с тем, при азосочетании диазотированных сульфамидных препаратов с β-нафтолом формируются окрашенные осадки, а скорость их формирования сильно зависит от концентрации сульфамидов. Это обстоятельство является препятствием к дальнейшему использованию данной реакции.
Целью изобретения является создание высокочувствительной экспресс-методики определения содержания сульфамидных препаратов в лекарственных формах. Поставленная задача достигается тем, что диазотированные по свободной аминогруппе сульфамиды сочетают с хромотроповой кислотой, в результате чего образуются воднорастворимые окрашенные в красный цвет азосоединения с молярным коэффициентом светопоглощения 4,5·104 при 530 нм. Азосоединения формируются быстро, они не меняют своих оптических характеристик во времени.
Образование соли диазония. Сульфамиды общей формулы
в солянокислой среде в присутствии нитрита натрия образуют соли диазония
В присутствии хромотроповой кислоты и соли диазония образуется азосоединение, окрашенное в яркий алый цвет (λ=530 нм).
Выполнение определения. Навеску сульфамидного препарата 0,01 г, взятого после измельчения таблетки, растворяют в HCl и доливают воду до 10 см3. Отдельно приготавливают раствор нитрита натрия (0,01 г в 10 см3 воды) и хромотроповой кислоты (0,03 г в 10 см3 воды +2 кристаллика Na2CO3·10 H2O). Мелко дробят лед, помещают в стакан емкостью 100 см3 20 г льда, вносят раствор сульфамида и нитрита натрия. Через 1 мин добавляют хромотроповую кислоту и доводят объем раствора до 50 см3 водой. Формируется азосоединение, окрашивающее раствор в алый цвет. В зависимости от интенсивности окраски отбирают в кюветы толщиной от 0,1 до 1,0 см3 полученный раствор и измеряют оптическую плотность его при 530 нм.
Градуированные графики. В серию стаканчиков отбирают разбавленный в 100 раз исходный раствор: 0; 0,05; 0,1; 0,20; 0,40; 0,60; 1,0; 2,0; 5,0 см3, вносят, как в прописи для определения лед, нитрит натрия, соляную кислоту и через 1 мин хромотроповую кислоту и доводят объем до 50 см3 водой. Измеряют оптические плотности при 530 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды. Градуировочные графики для определения сульфамидов в индивидуальных препаратах приведены на чертеже.
Результаты определения индивидуальных сульфамидных препаратов в их растворах приведены в таблице 1.
| Таблица 1. Метрологические характеристики методики определения азосоединений сульфамидов в индивидуальных препаратах фотометрическим методом, n=6. P=0,95; tp=2,57. |
|||
| Препарат | Внесено в воду, мг/дм3 | Найдено, мг/дм3 | |
| Данным методом | По методике [1] | ||
| Стрептоцид | 0,01 | 0,01±0,005 | 0,01±0,01 |
| 0,10 | 0,10±0,01 | 0,10±0,05 | |
| 1,00 | 1,00±0,15 | 1,00±0,25 | |
| Норсульфазол | 0,01 | 0,01±0,005 | 0,01±0,01 |
| 0,10 | 0,10±0,01 | 0,10±0,05 | |
| 1,00 | 1,00±0,10 | 1,00±0,30 | |
| Этазол | 0,01 | 0,01±0,005 | 0,01±0,01 |
| 0,10 | 0,10±0,01 | 0,10±0,05 | |
| 1,00 | 1,00±0,15 | 1,00±0,30 | |
| Сульфадимезин | 0,01 | 0,01±0,005 | 0,01±0,01 |
| 0,10 | 0,10±0,01 | 0,10±0,05 | |
| 1,00 | 1,00±0,15 | 1,00±0,30 |
Как видно из табл.1, разработанная методика по метрологическим характеристикам превосходит широко используемую.
Тонкослойная хроматография соединений. Образующиеся соединения хорошо растворимы в воде и водно-этанольных смесях до содержания этанола на уровне 60%. Соединения хорошо адсорбируются силикагелями (например, силикагелем А-60), на крахмале и целлюлозе, что обеспечивает возможность разделения их с помощью хроматографии, в том числе и тонкослойной хроматографии (ТСХ). Было проверено ТСХ разделение полученных азосоединений на пластинках Sorbfil ПТСХ-АВ-В (ТУ 26-11-17-89).
Выполнение разделения. На пластинку Sorbfil ПТСХ-АВ-В через 1 см на линии старта вносят по 0,03 см3 (1 капля) 10-3 М раствора каждого из азопроизводных сульфамидов. Пластинку опускают в стакан, на дно которого на высоту 0,5 см налита смесь этанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 50:1:49. Стакан накрывают колпаком. После того как подвижная фаза достигнет верхней отметки пластины (1 см от верхнего края), пластинку вынимают, подсушивают в токе воздуха (вентилятор) и измеряют расстояния, пройденные отдельными компонентами. Эти расстояния достаточно близки, однако они различаются. Рассчитывают коэффициент разделения Rf
где h0 - расстояние, пройденное подвижной фазой, hx - расстояние, пройденное азосоединением. Результаты разделения приведены в таблице 2.
| Таблица 2. Хроматографические характеристики (Rf) азопроизводных сульфамидных препаратов. |
||||
| Производные сульфамидов | Rf | Цвет пятна | Смесь производных | Rf |
| Стрептоцид | 0,65 | Алый | Стрептоцид, | 0,65 |
| Норсульфазол | 0,45 | Алый | норсульфазол, этазол, | 0,45 |
| Этазол | 0,55 | Алый | сульфадимазин пятна хорошо | 0,55 |
| Сульфадимазин | 0,60 | Алый | разделяются и различаются | 0,60 |
Таким образом, при диазотировании смеси сульфамидов получают смесь их азопроизводных, которые при ТСХ хроматографировании хорошо разделяются. По отдельным пятнам можно легко судить о наличии в смеси различных сульфамидов.
Способ количественного определения сульфамидных препаратов в таблетках путем обработки анализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученного раствора, отличающийся тем, что анализируемую пробу дополнительно обрабатывают раствором хромотроповой кислоты в присутствии карбоната натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 530 нм относительно воды и определяют количество исследуемого вещества с помощью градуировочного графика.
