Способ получения стафилококковой вакцины
Владельцы патента RU 2421240:
Государственное научное учреждение Самарская научно-исследовательская ветеринарная станция Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)
Изобретение относится к области микробиологии. Для получения вакцины берут 6-8 штаммов стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus. Культивирование штаммов осуществляют порознь в течение 14-16 дней при температуре 37°С и, затем, при температуре 3-5°С в течение 6-8 суток. После чего полученный материал смешивают и сразу автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 минут. Получают вакцину, обеспечивающую создание напряженного иммунитета против стафилококков, а также обеспечивающую создание неспецифического иммунитета, достаточного для лечения гнойной инфекции, вызванной другими возбудителями. 3 табл.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения вакцины, предназначенной для профилактики и лечения гнойных инфекций у животных и человека.
Известен способ получения стафилококковой вакцины путем длительного (15-20 дней) выращивания моновалентной культуры стафилококка в бульоне с последующей фильтрацией или стерилизацией при 100°С (А.М.Безредка, "Антивирусотерапия", Л., 1932 г.).
Недостатком известного способа является то, что изготовленная вакцина не учитывает разнообразия серологических вариантов стафилококка, содержит только растворимые в среде антигенные компоненты и вследствие этого недостаточно эффективна.
Известен способ получения анатоксин-вакцины против стафилококкоза птиц, включающий выращивание культуры стафилококков в питательной среде, стерилизацию биомассы с последующей детоксикацией токсина формалином, причем перед выращиванием в среду добавляют 4 об.% глицерина, культуру выращивают в течение 7-10 дней до концентрации 5-7 млрд микробных клеток в 1 мл, стерилизацию проводят при 85-100°С в течение 1-1,5 ч, а детоксикацию осуществляют 0,6-0,8%-ным раствором формалина при экспозиции 45-55°С в течение 7-10 дней (АС СССР №1706631, кл. А61К 39/085 от 17.01.89, опубл. 23.01.92, Бюл. №3).
Недостатком известного способа является то, что за 7-10 дней в выращиваемой биомассе не происходит достаточного накопления продуктов метаболизма стафилококков, и, кроме того, обработка формалином придает вакцине раздражающее действие, что допустимо при аэрозольном распылении препарата, но нежелательно при внутривенном введении вакцины животным.
Наиболее близким к предлагаемому способу получения стафилококковой вакцины является «Способ получения вакцины стафилококковой и стрептококковой поливалентной» - Vaccinum staphylococcicum (streptococcicum)». Взвесь стафилококков или стрептококков (1 млрд микробных тел в 1 мл) убивают формалином (http://www.micro-biology.ru/main-microbiology/medicine/93-vakciny-iz-ubitykh-bakterijj.html). Применяется для повышения защитных сил организма при хроническом фурункулезе, гидрадените, сикозе и других стафилококковых и стрептококковых заболеваниях кожи.
Недостатком указанного способа является то, что получаемая вакцина содержит ограниченное количество антигенов - убитые микробные клетки без биологически активных продуктов жизнедеятельности их не содержат угнетающих размножение стафилококков продуктов обмена (в процессе длительного культивирования в питательной среде накапливаются специфические только для стафилококка антимикробные вещества), а также содержит формалин.
Задачей изобретения является устранение указанных недостатков.
Поставленная задача решается следующим образом.
Для получения вакцины по заявленному способу берут 6-8 штаммов стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus. Затем выделенные штаммы помещают в стандартный мясопептонный питательный бульон - каждый штамм в отдельную емкость и культивируют в течение 14-16 дней, в течение которых вакцина приобретает антистафилококковую активность вследствие накопления продуктов метаболизма и антигенов самого стафилококка, а также его токсинов. Культивирование производят при температуре 37°С.
Далее культуры выдерживают в течение 6-8 дней при температуре 3-5°С для накопления в ней большего количества биогенных стимуляторов, аналогично консервации по методу В.П.Филатова (БМЭ, издание третье, том 3, с.140), что происходит в неблагоприятных для живых клеток условиях.
Затем культуры смешивают, разливают по флаконам и тут же автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 минут.
Антистафилококковая активность полученной вакцины показала следующие результаты (см. табл.1).
| Таблица 1 | |
| Сравнительная антистафилококковая активность предлагаемой вакцины и аналога в log | |
| Способ культивирования | Антимикробная активность |
| Раздельное выращивание | 25,86 |
| Совместное выращивание | 21,32 |
Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что антистафилококковая активность полученной вакцины превышает активность вакцины, полученной при совместном выращивании.
Лечение животных предлагаемой вакциной производят так же, как и лечение стафилококковым анатоксином, но в дозе в полтора раза большей, что было установлено в опытах по иммунизации кроликов. Результаты опытов приведены в таблице 2.
Титр агглютининов в сыворотке крови иммунизированных животных.
| Таблица 2 | |
| Вид вакцины | Титр агглютининов |
| Раздельное выращивание | 1/320 |
| Совместное выращивание | 1/160 |
Как видно из таблицы 2, предлагаемая вакцина вызывает более высокий титр нарастания антител, а следовательно, обладает более высокими иммуногенными свойствами.
Положительный пример
Полученная по предлагаемому способу вакцина испытывалась в одном из животноводческих хозяйств Приволжского района Самарской области.
Результаты испытаний приведены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||
| Результаты лечебного действия вакцины | ||
| Инвентарный номер коровы | Диагноз | Результат лечения |
| 851 | катаральный мастит | Вылечена |
| 1437 | катаральный мастит | Вылечена |
| 1292 | серозный мастит | Вылечена |
Вакцина вводилась животным подкожно, троекратно, с интервалом в один день: в первый день - 3,75 мл, во второй день - 7,5 мл, в третий день - 7,5 мл.
Предлагаемое изобретение позволяет создать стафилококковую вакцину, обеспечивающую создание достаточно напряженного иммунитета против стафилококков для лечения гнойной инфекции, с учетом того, что первичным иммунным раздражителем является сам возбудитель. Использование при изготовлении вакцины шести штаммов стафилококков, выделенных от больных животных, позволяет расширить спектр действия вакцины за счет расширения набора антигенных детерминант как самого стафилококка, так и продуктов его жизнедеятельности. Применение для стерилизации вакцины автоклавирования при указанных параметрах позволяет обеспечить, помимо стерилизации, и деструкцию клеток и денатурацию белка, вследствие чего вакцина приобретает также и неспецифические свойства и может применяться для лечения гнойных инфекций, вызванных другими возбудителями. В силу того, что вакцина обладает неспецифическим действием на организм, определение этиотропного возбудителя не является обязательным. Поскольку предлагаемая вакцина не содержит формалина, она может вводиться как внутримышечно, так и подкожно. Раздельное выращивание штаммов стафилококков повышает ее антимикробные, иммуногенные свойства, лечебный эффект и является более экономичным.
Способ получения стафилококковой вакцины для лечения и профилактики гнойных инфекций, включающий выращивание шести-восьми штаммов гноеродных стафилококков в жидкой питательной среде и стерилизацию биомассы, отличающийся тем, что культивирование шести-восьми штаммов гноеродных стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus, осуществляют порознь в течение 14-16 дней при температуре 37°С, затем культивируют порознь при температуре 3-5°С в течение 6-8 суток, после чего полученный материал смешивают и сразу автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 мин.
