Способы экспансии популяций миелоидных клеток и их использование

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу приготовления терапевтической композиции для кратковременного восстановления кроветворения, к терапевтической композиции для кратковременного восстановления кроветворения и к способу лечения пациента-человека с помощью данной терапевтической композиции. Предложенное изобретение может быть использовано для восстановления системы кроветворения и лечения состояний, связанных с ослабленным или разрушенным кроветворением. Способ приготовления терапевтической композиции для кратковременного восстановления кроветворения включает культивирование ex vivo исходной клеточной популяции, содержащей CD34+CD90+ кроветворные стволовые клетки (HSC) из множества аллогенных доноров в культуральной среде. При этом культуральная среда включает тромбопоэтин (ТРО) или его аналог, которые связывают с-Мр1 и фактор стволовых клеток (SCF) или его аналог, которые связывают c-kit. После чего осуществляют ресуспендирование упомянутых экспансированных миелоидных клеток-предшественников в фармацевтически приемлемой среде, подходящей для введения млекопитающему хозяину. Предложенное изобретение позволяет кратковременно восстанавливать кроветворение у млекопитающего. 3 н. и 37 з.п. ф-лы, 34 ил., 7 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Способ приготовления терапевтической композиции для кратковременного восстановления кроветворения у млекопитающего, включающий
a) культивирование ex vivo исходной клеточной популяции, содержащей CD34+CD90+ кроветворные стволовые клетки (HSC) из множества аллогенных доноров в культуральной среде, содержащей:
тромбопоэтин (ТРО) или его аналог, которые связывают с-Мр1 и
фактор стволовых клеток (SCF) или его аналог, которые связывают c-kit,
для продуцирования популяции экспансированных миелоидных клеток-предшественников, содержащей меньше чем 5% CD34+CD90+ HSC; и
b) ресуспендирование упомянутых экспансированных миелоидных клеток-предшественников в фармацевтически приемлемой среде, подходящей для введения млекопитающему хозяину.

2. Способ по п.1, дополнительно включающий криоконсервацию упомянутой популяции экспансированных миелоидных клеток-предшественников.

3. Способ по п.1, в котором упомянутая популяция экспансированных клеток-предшественников ресуспендируется в содержащей криопротектор среде.

4. Способ по п.1 или 2, в котором упомянутую исходную клеточную популяцию предварительно хранят при низкой температуре.

5. Способ по п.1, в котором упомянутая клеточная популяция является очищенными CD34+CD90+ кроветворными стволовыми клетками (HSC).

6. Способ по п.1, в котором аллогенные доноры являются, по меньшей мере, частично несочетаемыми по МНС по отношению друг к другу.

7. Способ по п.1, в котором аллогенные доноры являются полностью несочетаемыми по МНС по отношению друг к другу.

8. Способ по п.1, в котором культуральная среда дополнительно содержит FL или его аналог, который связывает рецептор flt-3.

9. Способ по п.1, в котором культуральная среда дополнительно содержит дополнительный фактор, выбранный из IL-3, IL-6, IL-11 и их комбинаций.

10. Способ по п.1, в котором смесь цитокина и ростового фактора имеет состав:
SCF или аналог SCF;
FL или аналог FL;
ТРО или аналог ТРО; и
IL-3.

11. Способ по п.1, в котором миелоидные клетки-предшественники являются выделенными из экспансированной клеточной популяции перед упомянутой стадией ресуспендирования, где упомянутое выделение содержит отбор клеток, по меньшей мере, с одним из следующих маркеров: CD38+, CD3-, CD4-, CD7-, CD8-, CD10-, CD11b-, CD14-, CD19-, CD20-, CD56-, CD90- и CD235a-.

12. Способ по п.11, в котором выделенные миелоидные клетки-предшественники являются общими миелоидными клетками-предшественниками (СМР).

13. Способ по п.11, в котором выделенные миелоидные клетки-предшественники являются клетками предшественниками гранулоцита/макрофага (GMP).

14. Способ по п.11, в котором выделенные миелоидные клетки-предшественники являются клетками предшественниками мегакариоцита/эритроида (МЕР).

15. Терапевтическая композиция для кратковременного восстановления кроветворения у млекопитающего, полученная способом по п.1, содержащая терапевтически эффективное количество экспансированных миелоидных клеток-предшественников и фармацевтически приемлемый носитель, в которой упомянутые миелоидные клетки-предшественники являются смесью аллогенных миелоидных клеток-предшественников.

16. Терапевтическая композиция по п.15, в которой упомянутые миелоидные клетки-предшественники составляют, по меньшей мере, 75% от общего числа клеток в экспансированной культуре.

17. Терапевтическая композиция по п.15, в которой упомянутые миелоидные клетки-предшественники составляют, по меньшей мере, 85% от общего числа клеток в экспансированной культуре.

18. Терапевтическая композиция по п.15, в которой упомянутые миелоидные клетки-предшественники составляют, по меньшей мере, 95% от общего числа клеток в экспансированной культуре.

19. Терапевтическая композиция по п.15, в которой миелоидные клетки-предшественники являются человеческими клетками.

20. Терапевтическая композиция по п.15, в которой аллогенные миелоидные клетки-предшественники являются, по меньшей мере, частично несочетаемыми по МНС.

21. Терапевтическая композиция по п.15, в которой миелоидные клетки-предшественники предварительно хранят при низкой температуре.

22. Терапевтическая композиция по п.15, в которой миелоидные клетки-предшественники являются выделенными общими миелоидными клетками-предшественниками (СМР).

23. Терапевтическая композиция по п.15, в которой миелоидные клетки-предшественники являются выделенными клетками предшественниками гранулоцита/макрофага (GMP).

24. Терапевтическая композиция по п.15, в которой миелоидные клетки-предшественники являются выделенными клетками предшественниками мегакариоцита/эритроида (МЕР).

25. Способ лечения пациента-человека, страдающего от нарушенного кроветворения, включающий введение упомянутому пациенту терапевтической композиции по п.15.

26. Способ по п.25, дополнительно включающий введение изолированных CD34+CD90+ кроветворных стволовых клеток (HSC).

27. Способ по п.25, дополнительно включающий введение упомянутому пациенту, по меньшей мере, одного антивирусного соединения, антигрибкового соединения, антибактериального соединения, цитокина или ростового фактора.

28. Способ по п.25, в котором упомянутый пациент-человек подвергается трансплантации кроветворных стволовых клеток (HSC).

29. Способ по п.28, в котором экспансированные миелоидные клетки-предшественники вводятся последовательно с HSC трансплантацией.

30. Способ по п.28, в котором экспансированные миелоидные клетки-предшественники вводятся параллельно с HSC трансплантацией.

31. Способ по п.25, в котором упомянутый пациент страдает от нейтропении.

32. Способ по п.31, в котором упомянутые экспансированные миелоидные клетки-предшественники вводятся с терапевтической композицией для лечения связанных с нейтропенией осложнений.

33. Способ по п.32, в котором терапевтическая композиция содержит, по меньшей мере, одно антивирусное соединение, антигрибковое соединение, антибактериальное соединение.

34. Способ по п.32, в котором терапевтическая композиция содержит G-CSF.

35. Способ по п.32, в котором терапевтическая композиция содержит GM-CSF.

36. Способ по п.25, в котором упомянутый пациент страдает от тромбоцитопении.

37. Способ по п.36, в котором упомянутые экспансированные миелоидные клетки-предшественники дополнительно вводятся в терапевтическую композицию для лечения связанных с тромбоцитопенией осложнений.

38. Способ по п.37, в котором терапевтическая композиция содержит, по меньшей мере, одно антивирусное соединение, антигрибковое соединение, антибактериальное соединение.

39. Способ по п.37, в котором терапевтическая композиция содержит тромбоциты.

40. Способ по п.37, в котором терапевтическая композиция содержит ЕРО.