Днк, кодирующая модифицированное антитело или соединение с активностью агониста тро, способ их получения и животная клетка или микроорганизм, их продуцирующие

Изобретение относится к ДНК, кодирующей модифицированное антитело, способное распознавать и поперечно сшивать рецептор ТРО и содержащее две или более V-области Н-цепи и две или более V-области L-цепи исходного антитела, соединенные напрямую или через линкер ковалентной или нековалентной связью, с меньшим размером по сравнению с исходным антителом. ДНК включает по две или более ДНК-последовательности, кодирующие V-области L-цепи и Н-цепи, при этом ДНК, кодирующая по меньшей мере одну из V-областей L-цепи и/или Н-цепи включает определенные нуклеотидные последовательности, приведенные в описании. В изобретении раскрыта ДНК, кодирующая соединение, проявляющее равное или большее агонистическое действие (ED50) сравнительно с тромбопоэтином (ТРО), при этом соединение может представлять собой модифицированное антитело, целое антитело или F(ab')₂, способного специфически распознавать и поперечно сшивать рецептор ТРО. Изобретение также относится к вектору, содержащему указанную ДНК, животной клетке и микроорганизму, которые содержат ДНК или вектор и продуцируют модифицированное антитело или соединение с активностью агониста ТРО. В изобретении описаны способы получения модифицированного антитела - агониста ТРО и соединения, которые предусматривают культивирование трансформированной животной клетки или микроорганизма, содержащих ДНК изобретения. Продукты изобретения могут применяться как ТРО-агонисты трансдукции сигнала и могут быть использованы как профилактическое и/или лечебное средство при заболеваниях крови, связанных со снижением количества тромбоцитов, тромбопении, сопровождающей химиотерапию при раке или лейкемии и т.д. 7 н. и 26 з.п. ф-лы, 61 ил., 3 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. ДНК, кодирующая модифицированное антитело, способное специфически распознавать и поперечно сшивать рецептор ТРО, содержащее 2 или более V-области Н-цепи и две или более V-области L-цепи антитела, соединенные напрямую или через линкер ковалентной связью или нековалентной связью, и имеющее меньший размер, чем исходное(ые) антитело(а) к рецептору ТРО, обладающее(ие) агонистическим действием или по существу не обладающее(ие) агонистическим действием, где указанная ДНК включает две или более ДНК-последовательности, кодирующие V-область Н-цепи, и две или более ДНК-последовательности, кодирующие V-области L-цепи, и где ДНК, кодирующая по меньшей мере одну из V-областей Н-цепи, включает последовательность SEQ ID NO:66 или SEQ ID NO:94, и/или ДНК, кодирующая по меньшей мере одну из V-областей L-цепи, включает последовательность SEQ ID NO:75 или SEQ ID NO:104.

2. ДНК по п.1, где ДНК линкера кодирует пептидный линкер, содержащий по крайней мере одну аминокислоту.

3. ДНК по п.1 или 2, где ДНК кодирует одноцепочечный полипептид, содержащий 2 или более V-области Н-цепи и две или более V-области L-цепи.

4. ДНК по п.3, где ДНК кодирует одноцепочечный полипептид, содержащий две V-области Н-цепи и две V-области L-цепи.

5. ДНК по п.1, где ДНК дополнительно содержит ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность (последовательности) для очистки пептида.

6. ДНК по п.1, где ДНК, кодирующая V-область Н-цепи и/или V-область L-цепи, происходит из ДНК антитела человека.

7. ДНК по п.1, где ДНК, кодирующая V-область Н-цепи и/или V-область L-цепи, является гуманизированной.

8. ДНК по п.1, где ДНК кодирует моноспецифическое модифицированное антитело.

9. ДНК по п.1, где ДНК кодирует мультиспецифическое модифицированное антитело.

10. ДНК по п.9, где ДНК кодирует биспецифическое модифицированное антитело.

11. ДНК по п.8, где ДНК, кодирующая V-область L-цепи, и ДНК, кодирующая V-область Н-цепи, происходят из одного и того же моноклонального антитела.

12. ДНК по п.1, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое проявляет равное или более сильное агонистическое действие (ED50) сравнительно с исходным моноклональным антителом.

13. ДНК по п.12, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое проявляет по крайне мере двухкратное агонистическое действие (ED50) сравнительно с исходным моноклональным антителом.

14. ДНК по п.13, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое проявляет по крайней мере 10-кратное агонистическое действие (ED50) сравнительно с исходным моноклональным антителом.

15. ДНК по п.1, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое происходит из исходного антитела, по существу, не обладающего агонистическим действием.

16. ДНК по п.1, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 20 пМ.

17. ДНК по п.16, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 10 пМ.

18. ДНК по п.17, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 2 пМ.

19. ДНК по п.1, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое обладает межклеточным адгезивным действием (ED50), не превышающим 1/10 сравнительно с исходным антителом.

20. ДНК по п.1, где ДНК кодирует модифицированное антитело, которое, по существу, не обладает межклеточным адгезивным действием.

21. ДНК, кодирующая соединение, проявляющее равное или большее агонистическое действие (ED50) сравнительно с тромбопоэтином (ТРО), выбранное из группы, состоящей из:
a) модифицированного антитела, кодируемого ДНК по любому из пп.1-20, и
b) целого антитела или F(ab')₂, способного специфически распознавать и поперечно сшивать рецептор ТРО,
где указанная ДНК включает две или более ДНК-последовательности, кодирующие V-область Н-цепи исходного моноклонального антитела, которое распознает рецепторы ТРО и поперечно сшивает их межклеточно, и две или более ДНК-последовательности, кодирующие V-области L-цепи указанного исходного антитела, причем ДНК, кодирующая по меньшей мере одну из V-областей Н-цепи, включает последовательность SEQ ID NO:66 или SEQ ID NO:94, и/или ДНК, кодирующая по меньшей мере одну из V-областей L-цепи, включает последовательность SEQ ID NO:75 или SEQ ID NO:104.

22. ДНК по п.21, где ДНК кодирует соединение, которое проявляет по крайней мере двукратное агонистическое действие (ED50) сравнительно с ТРО.

23. ДНК по п,22, где соединение проявляет по крайней мере десятикратное агонистическое действие (ED50) сравнительно с ТРО.

24. ДИК по любому из пп.21-23, где ДНК кодирует соединение, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 20 пМ.

25. ДНК по п.24, где ДНК кодирует соединение, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 10 пМ.

26. ДНК по п.24, где ДНК кодирует соединение, которое имеет ED50 ТРО-агонистической активности, не превышающее 2 пМ.

27. ДНК по п.21, где ДНК кодирует соединение, которое обладает межклеточным адгезивным действием (ED50), не превышающим 1/10 сравнительно с исходным антителом.

28. ДНК по п.21, где ДНК кодирует соединение, которое, по существу, не обладает межклеточным адгезивным действием.

29. Экспрессионный вектор, содержащий ДНК по любому из пп.1-28.

30. Животная клетка, продуцирующая модифицированное антитело - агонист ТРО, содержащая ДНК по любому из пп.1-28 или вектор по п.29.

31. Микроорганизм, продуцирующий модифицированное антитело - агонист ТРО, содержащий ДНК по любому из пп.1-28 или вектор по п.29.

32. Способ получения модифицированного антитела - агониста ТРО, включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей ДНК по любому из пп.1-28 или вектор по п.29.

33. Способ получения соединения, проявляющего равное или большее агонистическое действие (ED50) сравнительно с тромбопоэтином (ТРО), включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей ДНК по любому из пп.21-28 или вектор по п.29.