Пролекарства амфетаминов с защитой от неправильного употребления

Изобретение относится к фармацевтической области и касается композиции для лечения синдрома дефицита внимания с гиперактивностью, которая содержит L-лизин-d-амфетамин димезилат, микрокристаллическую целлюлозу, кроскармеллозу натрия и стеарат магния. Изобретение также относится к способу лечения дефицита внимания с гиперактивностью у субъекта, в том числе в возрасте 6-12 лет, с использованием предложенных композиций. Изобретение обеспечивает композиции, полезные для уменьшения вероятности возникновения или предотвращения неправильного употребления амфетамина и передозировки амфетамина. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 70 ил., 72 табл., 37 пр.

 

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ С ПЕРЕКРЕСТНЫМИ ССЫЛКАМИ

[001] Настоящая заявка испрашивает приоритет в соответствии с 119(е) 35 Свода Законов США согласно предварительным заявкам на патент США под номерами: 60/669385, поданной 8 апреля 2005 г., 60/669386, поданной 8 апреля 2005 г., 60/681170, поданной 16 мая 2005 г., 60/756548, поданной 6 января 2006 г., и 60/759958, поданной 19 января 2006 г., а также заявке на патент США US №10/857619, поданной 1 июня 2004; настоящая заявка также является частичным продолжением заявки на патент США №10/858526, поданной 1 июня 2004 г., которая, в свою очередь, является частичным продолжением международной заявки PCT/US03/05525, поданной 24 февраля 2003 г., которая испрашивает приоритет согласно предварительным заявкам на патент США №№60/358368, поданной 22 февраля 2002 г., и 60/362082, поданной 7 марта 2002 г.; Заявка №10/858526 также испрашивает приоритет в соответствии с 119(е) 35 Свода Законов США согласно предварительным заявкам на патент США №№60/473929, поданной 29 мая 2003 г., и 60/567801, поданной 5 мая 2004 г. Все упомянутые выше заявки полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[002] Настоящее изобретение относится к соединениям амфетаминов, более конкретно - к пролекарствам амфетаминов, содержащим амфетамин, ковалентно связанный с химическим фрагментом. Настоящее изобретение относится также к композициям, которые содержат амфетамин, и способам изготовления, доставки и применения соединений амфетаминов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[003] Амфетамины стимулируют центральную нервную систему (ЦНС), их применяют в медицине для лечения разнообразных заболеваний, включая синдром дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ), ожирение и нарколепсию. Мощные стимуляторы ЦНС в течение нескольких десятилетий применяли у детей с СДВГ в качестве лекарственной терапии, назначаемой либо отдельно, либо как дополнение к поведенческой терапии. Хотя наиболее часто выписываемым стимулятором до настоящего времени является метилфенидат (Ritalin®), одновременно с ним, и особенно интенсивно - в последние годы, применяют прототип данного класса, амфетамин (альфа-метил фениламин). (Bradley С, Bowen M, "Amphetamine (benzedrine) therapy of children′s behavior disorders." (Лечение поведенческих расстройств у детей амфетаминами (Бензедрином)) American Journal of Orthopsychiatry 11:92-103 (1941).

[004] Вследствие своего стимулирующего воздействия амфетамины, включая производные и аналоги амфетаминов, часто являются предметом неправильного употребления. При приеме амфетаминов пациент может со временем стать зависимым от этих лекарственных средств и их физического и физиологического действия, даже в случае применения этих лекарственных средств в законных терапевтических целях. Пациенты, принимающие амфетамины на законных основаниях, у которых развилась лекарственная устойчивость, особенно подвержены риску случайно стать зависимыми, поскольку, для противодействия растущей устойчивости к прописанному лекарству, они увеличивают его дозу. Кроме того, возможны ситуации, когда пациенты самостоятельно принимают количества лекарственного средства, превышающие прописанные, или изменяют форму или путь введения (например, ингаляция (вдыхание), инъекции и курение), что может привести к мгновенному высвобождению лекарственного средства в количествах, превышающих прописанные. При приеме в дозах, превышающих прописанные, амфетамины могут вызвать временные ощущения оживления, а также повышенной энергичности и умственной активности.

[005] Последние достижения в изучении зависимости от прописываемых лекарственных продуктов существенно усилили беспокойство относительно злоупотрбеления амфетаминами, прописываемыми при СДВГ. Согласно данным национального исследования в области применения лекарственных средств и здравоохранения (NSDUH) в 2003 г. 1.2 миллиона американцев в возрасте от 12 и старше страдают зависимостью от стимуляторов, таких как амфетамины. Из-за высокой способности амфетаминов вызывать зависимость, их внесли в Реестр II Акта об обращении с контролируемыми веществами США (Controlled Substances Act, CSA)). Классификация Реестра II включает лекарственные средства, применение которых допустимо в медицинской практике, но которые обладают самой высокой способностью вызывать зависимость.

[006] Лекарственные формы амфетаминов с замедленным высвобождением, например Adderall XR®, обладают более высокой способностью вызывать зависимость, чем таблетки, содержащие единичную дозу, поскольку каждая единица формы с замедленным высвобождением содержит более высокую концентрацию амфетамина. Лица, страдающие зависимостью от химических веществ, могут получать высокие дозы амфетамина с быстрым началом действия путем размалывания таблеток в порошок и вдыхания полученного порошка либо путем растворения порошка в воде и введения его путем инъекции. Формы с замедленным высвобождением могут также обеспечить неравномерное высвобождение.

[007] Дополнительную информацию относительно амфетаминов и зависимости от амфетаминов можно найти в публикации патентной заявки США №2005/0054561 (USSN 10/858526).

[008] Существует потребность в дополнительных соединениях амфетаминов, в частности в соединениях амфетаминов, защищенных от неправильного употребления (abuse resistant, т.е. устойчивых к неправильному употреблению). Кроме того, существует потребность в фармацевтических композициях, содержащих амфетамин, которые обеспечивают замедленное высвобождение и пролонгированное терапевтическое действие.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

[009] ФИГ.1. Синтез конъюгатов амфетамина с пептидом.

[010] ФИГ.2. Синтез лизин-амфетамин димезилата.

[011] ФИГ.3. Синтез лизин-амфетамин HCl.

[012] ФИГ.4. Синтез конъюгата амфетамина и серина.

[013] ФИГ.5. Синтез конъюгата амфетамина и фенилаланина.

[014] ФИГ.6. Синтез конъюгата амфетамина и триглицина.

[015] ФИГ.7. Концентрации d-амфетамина в плазме крови отдельных крыс, которым орально вводили d-амфетамин или L-лизин-d-амфетамин гидрохлорид.

[016] На следующих фигурах (ФИГ.8-16) изображены результаты исследований орального введения крысам d-амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин димезилата (Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA)):

[017] ФИГ.8. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 1.5 мг/кг основания d-амфетамина).

[018] ФИГ.9. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина).

[019] ФИГ.10. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 6 мг/кг основания d-амфетамина).

[020] ФИГ.11. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 12 мг/кг основания d-амфетамина).

[021] ФИГ.12. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 30 мг/кг основания d-амфетамина).

[022] ФИГ.13. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 60 мг/кг основания d-амфетамина).

[023] ФИГ.14. Биодоступность в процентах (Площадь под кривой (AUC) и максимальная концентрация(C_max)) L-лизин-d-амфетамин димезилата по сравнению с d-амфетамин сульфатом при дозах 1.5, 3, 6, 12, 30 и 60 мг/кг основания d-амфетамина.

[024] ФИГ.15. Концентрации d-амфетамина в плазме крови через 30 минут после введения для увеличивающихся доз основания d-амфетамина.

[025] ФИГ.16. Концентрации d-амфетамина в плазме крови (при дозе 60 мг/кг основания d-амфетамина).

[026] ФИГ.17. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после интраназального введения крысам L-лизин-d-амфетамин гидрохлорида или d-амфетамин сульфата (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина) (твердофазный иммуноферментный анализ ELISA).

[027] ФИГ.18. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после интраназального введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина) (твердофазный иммуноферментный анализ).

[028] ФИГ.19. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после внутривенного введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 1.5 мг/кг основания d-амфетамина) путем внутривенных болюсных инъекций (твердофазный иммуноферментный анализ).

[029] ФИГ.20. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после орального введения крысам капсул Dexedrine Spansule®, измельченных капсул Dexedrine Spansule® или L-лизин-d-амфетамин димезилата (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина) (твердофазный иммуноферментный анализ).

[030] На следующих Фигурах (ФИГ.21-30) приведены результаты исследований орального введения крысам d-амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин димезилата (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия):

[031] ФИГ.21А и ФИГ.21В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.21А) и в нМ (ФИГ.21В) (при дозе 1.5 мг/кг основания d-амфетамина).

[032] ФИГ.22А и ФИГ.22В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.22А) и в нМ (ФИГ.22В) (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина).

[033] ФИГ.23А и ФИГ.23В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.23А) и в нМ (ФИГ.23В) (при дозе 6 мг/кг основания d-амфетамина).

[034] ФИГ.24А и ФИГ.24В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.24А) и в нМ (ФИГ.24В) (при дозе 12 мг/кг основания d-амфетамина).

[035] ФИГ.25А и ФИГ.25В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.25А) и в нМ (ФИГ.25В) (при дозе 60 мг/кг основания d-амфетамина).

[036] ФИГ.26. Сравнительная биодоступность (C_max) L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина по отношению к увеличивающимся дозам, эквивалентным человеческим.

[037] ФИГ.27. Сравнительная биодоступность (AUC_inf) L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина по отношению к увеличивающимся дозам основания d-амфетамина.

[038] ФИГ.28. Сравнительная биодоступность (AUC_inf) L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина по отношению к увеличивающимся дозам, эквивалентным человеческим.

[039] ФИГ.29. Сравнительная биодоступность (C_max) интактного L-лизин-d-амфетамина по отношению к увеличивающимся дозам, эквивалентным человеческим.

[040] ФИГ.30. Сравнительная биодоступность (AUC_inf) интактного L-лизин-d-амфетамина по отношению к увеличивающимся дозам, эквивалентным человеческим.

[041] ФИГ.31. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после интраназального введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина) (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[042] ФИГ.32А и ФИГ.32В. Концентрации d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.32А) и в нМ (ФИГ.32В) после интраназального введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 3 мг/кг основания d-амфетамина) (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[043] ФИГ.33. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 1.5 мг/кг основания d-амфетамина) путем болюсных инъекций (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[044] ФИГ.34А и ФИГ.34В. Концентрации d-амфетамина в плазме крови в нг/мл (ФИГ.34А) и в нМ (ФИГ.34В), после внутривенного введения крысам L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 1.5 мг/кг основания d-амфетамина) (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[045] На следующих Фигурах (ФИГ.35-40) приведены результаты исследований орального и внутривенного введения (при дозе 1 мг/кг основания d-амфетамина) d-амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин димезилата находящимся в сознании самцам собак породы бигль (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия):

[046] ФИГ.35. Зависимость от времени средней концентрации L-лизин-d-амфетамина после внутривенного или орального введения L-лизин-d-амфетамина (n=3).

[047] ФИГ.36. Зависимость от времени концентрации d-амфетамина в плазме крови после внутривенного или орального введения L-лизин-d-амфетамина (n=3).

[048] ФИГ.37А и ФИГ.37В. Зависимость от времени средней концентрации L-лизин-d-амфетамина и уровней d-амфетамина в нг/мл (ФИГ.37А) и в нМ (ФИГ.37В) после внутривенного введения L-лизин-d-амфетамина (n=3).

[049] ФИГ.38А и ФИГ.38В. Зависимость от времени средней концентрации в плазме крови L-лизин-d-амфетамина и уровней d-амфетамина в нг/мл (ФИГ.38А) и в нМ (ФИГ.38В) после орального введения L-лизин-d-амфетамина (n=3).

[050] ФИГ.39А и ФИГ.39В. Зависимость от времени индивидуальных концентраций L-лизин-d-амфетамина в плазме крови после внутривенного введения (ФИГ.39А) или орального введения (ФИГ.39В) L-лизин-d-амфетамина.

[051] ФИГ.40А и ФИГ.40В. Зависимость от времени индивидуальных концентраций d-амфетамина в плазме крови после внутривенного введения (ФИГ.40А) или орального введения (ФИГ.40В) L-лизин-d-амфетамина.

[052] ФИГ.41. Концентрации d-амфетамина в плазме после орального введения самцам собаки L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 1.8 мг/кг основания d-амфетамина).

[053] ФИГ.42. Концентрации d-амфетамина в плазме крови после орального введения самкам собак L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата (при дозе 1.8 мг/кг основания d-амфетамина).

[054] ФИГ.43. Среднее давление крови у самцов и самок собак после внутривенных инъекций увеличивающихся количеств L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамина.

[055] ФИГ.44. Давление крови в левом желудочке самцов и самок собак после внутривенных инъекций увеличивающихся количеств L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамина.

[056] На следующих фигурах (ФИГ.45-49) приведены результаты исследований орального (при дозе 6 мг/кг основания d-амфетамина), интраназального (при дозе 1 мг/кг основания d-амфетамина) и внутривенного введения (при дозе 1 мг/кг основания d-амфетамина) d-амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин гидрохлорида:

[057] ФИГ.45. Двигательная активность крыс после орального введения (5-часовое действие).

[058] ФИГ.46. Двигательная активность крыс после орального введения (12-часовое действие).

[059] ФИГ.47. Двигательная активность крыс после интраназального введения (1-часовое действие).

[060] ФИГ.48. Двигательная активность крыс после интраназального введения (с карбоксиметилцеллюлозой) (2-часовое действие).

[061] ФИГ.49. Двигательная активность крыс после внутривенного введения (3-часовое действие).

[062] На следующих Фигурах приведены результаты (ФИГ.50-58) исследований орального, интраназального и внутривенного введения крысам d-амфетамина или солей хлороводородной кислоты конъюгатов амфетаминов (твердофазный иммуноферментный анализ):

[063] ФИГ.50. Биодоступность при интраназальном введении конъюгатов амфетамина с аминокислотой, ди- и три-пептидами, защищенных от неправильного употребления.

[064] ФИГ.51. Биодоступность при оральном введении конъюгатов амфетамина с аминокислотой, ди- и три-пептидами, защищенных от неправильного употребления.

[065] ФИГ.52. Биодоступность при внутривенном введении конъюгатов амфетамина с аминокислотой, ди- и три-пептидами, защищенных от неправильного употребления.

[066] ФИГ.53. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с аминокислотой при интраназальном введении.

[067] ФИГ.54. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с аминокислотой при оральном введении.

[068] ФИГ.55. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с аминокислотой при внутривенном введении.

[069] ФИГ.56. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с аминокислотой и три-пептидами при интраназальном введении.

[070] ФИГ.57. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с аминокислотой и ди-пептидами при интраназальном введении.

[071] ФИГ.58. Биодоступность защищенных от неправильного употребления конъюгатов амфетамина с ди-петидами, содержащими D- и L-изомеры аминокислот.

[072] ФИГ.59А и ФИГ.59В. Концентрации d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме крови в нг/мл для уровней в сыворотке (ФИГ.59А) и в нг/г для ткани мозга (ФИГ.59В), после орального введения крысам L-лизин-d-амфетамин гидрохлорида или d-амфетамин сульфата (при дозе 5 мг/кг основания d-амфетамина) (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[073] ФИГ.60. Стационарные уровни d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина, полученные в ходе клинических исследований орального введения людям 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия).

[074] На следующих Фигурах (ФИГ.61-70) изображены результаты, полученные в ходе клинических исследований орального введения людям L-лизин-d-амфетамин димезилата (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия):

[075] ФИГ.61А и ФИГ.61В. Уровни d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме крови (ФИГ.61А, нг/мл; ФИГ.61В, нМ) на протяжении 72 часов после орального введения людям L-лизин-d-амфетамина (25 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата, содержащего 7.37 мг основания d- амфетамина).

[076] ФИГ.62А и ФИГ.62В. Уровни d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме крови (ФИГ.62А, нг/мл; ФИГ.62В, нМ) на протяжении 72 часов после орального введения людям L-лизин-d-амфетамина (75 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата, содержащего 22.1 мг основания d-амфетамина).

[077] ФИГ.63А и ФИГ.63В. Уровни d-амфетамина (ФИГ.63А, 0-12 часов; ФИГ.63В, 0-72 часов) после орального введения людям L-лизин-d-амфетамина (75 мг L-лизин-d-амфетамина, содержащего 22.1 мг основания d-амфетамина) или препарата Adderall XR® (35 мг, содержащих 21.9 мг основания амфетамина).

[078] ФИГ.64А и ФИГ.64В. Уровни d-амфетамина в плазме крови (ФИГ. 64А, 0-12 часов; ФИГ.64В, 0-72 часов) после орального введения людям L-лизин-d-амфетамина (75 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата, содержащего 22.1 мг основания d-амфетамина) или препарата Dexedrine Spansule® (30 мг, содержащего 22.1 мг основания амфетамина).

[079] ФИГ.65. Средние концентрации d-амфетамина в плазме крови после орального введения однократных доз 30 мг, 50 мг и 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата натощак пациентам - детям с СДВГ.

[080] ФИГ.66. Связь между нормализованной по дозе AUC d-амфетамина и полом после орального введения капсул L-лизин-d-амфетамин димезилата один раз в день взрослым добровольцам и детям с СДВГ.

[081] ФИГ.67. Связь между нормализованной по дозе максимальной концентрацией d-амфетамина в плазме и полом после орального введения капсул L-лизин-d-амфетамин димезилата один раз в день взрослым добровольцам и детям с СДВГ.

[082] ФИГ.68. Связь между нормализованным по дозе временем достижения максимальной концентрации d-амфетамина в плазме и полом после орального введения капсул L-лизин-d-амфетамин димезилата один раз в день взрослым добровольцам и детям с СДВГ.

[083] ФИГ.69. Оценка по шкале ADHD-RS в конце педиатрического клинического исследования.

[084] ФИГ.70. Оценка по шкале SKAMP (эффективность) против времени педиатрического клинического исследования.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[085] Настоящее изобретение обеспечивает пролекарства амфетаминов, содержащие амфетамин, ковалентно связанный с химическим фрагментом. Пролекарства амфетаминов также можно описать как конъюгаты, поскольку они имеют ковалентное присоединение. Их также можно описать как условно биообратимые производные ("УБО"), в которых пролекарство амфетамина предпочтительно остается неактивным до тех пор, пока при оральном введении не произойдет освобождение амфетамина от указанного химического фрагмента.

[086] В одном из своих способов реализации настоящее изобретение обеспечивает пролекарство формулы I:

[087] где А представляет собой амфетамин;

[088] каждый Х независимо представляет собой химический фрагмент;

[089] каждый Z независимо представляет собой химический фрагмент, который действует как адъювант и отличается от по меньшей мере одного X;

[090] n представляет собой число в промежутке от 1 до 50, предпочтительно от 1 до 10; и

[091] m представляет собой число в промежутке от 0 до 50, предпочтительно 0.

[092] Если m равно 0, пролекарство амфетамина представляет собой соединение формулы (II):

[093] где каждый Х независимо представляет собой химический фрагмент.

[094] Формулу (II) также можно написать, выделив химическое соединение, которое физически присоединено к амфетамину:

[095] где А представляет собой амфетамин; X₁ представляет собой химический фрагмент, предпочтительно одиночную аминокислоту; каждый Х независимо представляет собой химический фрагмент, который может быть таким же, как X₁ или отличаться от X₁; a n представляет собой число в промежутке от 1 до 50.

[096] Амфетамин, А, может представлять собой любое производное фениламина со свойствами симпатомиметика, которое обладает активностью стимулятора центральной нервной системы, такое как амфетамин, либо любое производное, аналог или соль такого соединения. Примеры амфетаминов включают, без ограничения, амфетамин, метамфетамин, метилфенидат, р-метоксиамфетамин, метилэнедиоксиамфетамин, 2,5-диметокси-4-метиламфетамин, 2,4,5-триметоксиамфетамин и 3,4-метилендиоксиметамфетамин, N-этиламфетамин, фенетиллин, бензфетамин и хлорфентермин, а также соединения амфетаминового ряда, такие как Adderall®; актедрон; актемин; адипан; акедрон; аллоден; альфа-метил-(±)-бензолэтанамин; альфа-метилбензолэтанамин; альфа-метилфенэтиламин; амфетамин; амфат; анорексин; Benzebar; бензедрин; бензолметил карбинамин; бензолон; бета-амино пропилбензол; бет-фенилизопропиламин; бифетамин; дезоксинорэфедрин; диэтамин; DL-амфетамин; эластонон; фенопромин; финам; изоамин; изомин; мекодрин; монофос; мидриал; норэфедран; новидрин; обесин; обесайн (obesine); обетрол; октедрин (octedrine, oktedrin); фенамин; фенедрин, фенэтиламин, альфа-метил-; перкомон (percomon); провамина (profamina); профетамин; пропизамин; рацефен; рафэтамин; риналатор (rhinalator), симпамин (sympamine); симпатедрин (simpatedrin); симпатина (simpatina); симпатедрин (sympatedrine) и веткамин (weckamine). Предпочтительные амфетамины включают метамфетамин, метилфенидат и амфетамин. Наиболее предпочтительным является амфетамин.

d-амфетамин (1) Метилфенидат (2)

[097] Амфетамин может иметь любую пространственную конфигурацию, включая как правые, так и левые изомеры. Предпочтительными являются правые изомеры, в частности декстро-амфетамин.

[098] Предпочтительно амфетамин представляет собой соль амфетамина. В данной области известны фармацевтически приемлемые соли, например нетоксичные неорганические и органические кислотно-аддитивные соли. Примеры солей включают, без ограничения, 2-гидроксиэтансульфонат, 2-нафталенсульфонат, 3-гидрокси-2-нафтоат, 3-фенилпропионат, ацетат, адипат, альгинат, амсонат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, безилат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, кальциевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, каронат, цитрат, клавуланат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, эдетат, эстолат, эзилат, этансульфонат, finnarate, глюцептат, глюкогептаноат, глюконат, глютамат, глицерофосфат, гликолиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексафторфосфат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфонат, малат, малеат, манделат, мезилат, метансульфонат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, нафтилат, напсилат, никотинат, нитрат, соль N-метилглюкамин аммония, олеат, оксалат, пальмитат, памоят, пантотенат, пектинат, персульфат, фосфат, фомфатедилфосфат, пикрат, пивалат, полигалактуронат, пропионта, р-толуолсульфонат, сахарат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат (suramate), таннат, тартрат, теоклат, тиоцианат, тозилат, триэтйодид, ундеканоат и валерат и т.п. (См. Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts"(фармацевтические соли), J Pharm. Sci. 66:1-19). Предпочтительная соль амфетамина представляет собой мезилат (например, как в L-лизин-d-амфетамин димезилате).

[099] Конкретные соли могут быть менее гигроскопичными, что облегчает обращение с ними. В предпочтительном варианте реализации содержание воды в пролекарстве амфетамина составляет (анализ по Karl Fischer) примерно от 0% до примерно 5%, примерно от 0.1% до примерно 3%, примерно от 0.25% до примерно 2%, или равно промежуточным значениям. Если пролекарство амфетамина включают в состав фармацевтической композиции, содержание воды в этой фармацевтической композиции составляет преимущественно примерно от 1% до примерно 10%, примерно от 1% до примерно 8%, примерно от 2% до примерно 7%, или равно промежуточным значениям.

[0100] В тексте данной заявки термин «промежуточное значение» обозначает численное значение с различными степенями точности, например, до ближайших 10, 1, 0.1, 0.01 и т.д. Промежуточное значение можно округлять с любой измеряемой степенью точности. Например, диапазон от 1 до 100 или промежуточные значения включает такие диапазоны, как от 20 до 80, от 5 до 50, от 0.4 до 98 и от 0.04 до 98.05.

[0101] Амфетамин связан с одним или более химических фрагментов, обозначенных Х и Z. Химический фрагмент может представлять собой любой химический фрагмент, который снижает фармакологическую активность амфетамина, пока он связан с этим химическим фрагментом, по сравнению с несвязанным (свободным) амфетамином. Присоединенный химический фрагмент может быть как встречающимся в природе, так и синтетическим. Примеры химических фрагментов включают, без ограничения, пептиды, включая отдельные аминокислоты, дипептиды, трипептиды, олигопептиды и полипептиды, углеводороды, липиды, нуклеозиды, нуклеиновые кислоты и витамины. Предпочтительно, химический фрагмент относится к признанным безвредными (generally recognized as safe, "GRAS").

[0102] Термин "Углеводороды" включает сахара, крахмалы, целлюлозу и родственные соединения, например (CH₂O)_n, в которых n представляет собой целое число, превышающее 2, и C_n(H₂O)_n-1, где n представляет собой целое число, превышающее 5. Углеводород может представлять собой моносахарид, дисахарид, олигосахарид, полисахарид или их производное (например, сульфо- или фосфо-замещенное). Примеры углеводородов включают, без ограничения, фруктозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, глицеральдегид, дигидроксиацетон, эритрозу, рибозу, рибулозу, ксилулозу, галактозу, маннозу, седогептулозу, нейраминовую кислоту, декстрин и гликоген.

[0103] "Гликопептид" представляет собой углеводород, связанный с олигопептидом. Аналогично химический фрагмент может также представлять собой гликопротеин, гликоаминокислоту. "Гликопротеин" пердставляет собой углеводород (например, гликан), ковалентно связанный с белком. "Гликоаминокислота" предоставляет собой углеводород (например, сахарид), ковалентно связанный с единственной аминокислотой. "Гликозил-аминокислота" представляет собой углеводород (например, сахарид), связанный гликозильной связью (О-, N- или S-) с аминокислотой.

[0104] Термин "Пептид" включает отдельную аминокислоту, дипептид, трипептид, олигопептид, полипептид или пептид-носитель. Олигопептид содержит от 2 до 70 аминокислот.

[0105] Предпочтительно, химический фрагмент представляет собой пептид, более конкретно - отдельную аминокислоту, дипептид или трипептид. Пептид предпочтительно содержит меньше 70 аминокислот, меньше 50 аминокислот, меньше 10 аминокислот или меньше 4 аминокислот. Если химический фрагмент представляет собой одну или более аминокислот, амфетамин предпочтительно связан с лизином, серином, фенилаланином или глицином. В другом варианте реализации амфетамин предпочтительно связан с лизином, глютаминовой кислотой или лейцином. В одном варианте реализации амфетамин связан с лизином и, возможно, дополнительными химическими фрагментами, например дополнительными аминокислотами. В предпочтительном варианте реализации амфетамин связан с одной аминокислотой - лизином.

[0106] В одном варинате реализации химический фрагмент представляет собой от 1 до 12 аминокислот, предпочтительно от 1 до 8 аминокислот. В другом варианте реализации число аминокислот составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7. В другом варианте реализации молекулярная масса химического фрагмента меньше примерно 2,500 кДа, более предпочтительно - меньше примерно 1,000 кДа, и наиболее предпочтительно -меньше примерно 500 кДа.

[0107] Каждая аминокислота может представлять собой один из L- или D-энантиомеров, предпочтительны L-энантиомеры, встречающихся в природе аминоксилот: аланина (Ala или А), аргинина (Arg или R), аспарагина (Asn или N), аспарагиновой кислоты (Asp или D), цистеина (Cys или С), глицина (Gly или G), глютаминовой кислоты (GIu или Е), глютамина (Gh или Q), гистидина (His или Н), изолейцина (Не или I), лейцина (Leu или L), лизина (Lys или К), метионина (Met или М), пролина (Pro или Р), фенилаланина (Phe или F), серина (Ser или S), триптофана (Trp или W), треонина (Thr или Т), тирозина (Tyr или Y) и валина (Val или V). В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения, пептид содержит только аминокислоты, встречающиеся в природе и/или только L-аминокислоты. Каждая аминокислота может представлять собой неприродную, нестандартную или синтетическую аминокислоту, такую как аминогексаноевая кислота, бифенилаланин, циклогексилаланин, циклогексилглицин, диэтилглицин, дипропилглицин, 2,3-диаминопропионовая кислота, гомофенилаланин, гомосерин, гомотирозин, нафтилаланин, норлейцин, орнитин, фенилаланин (4-фтор), фенилаланин(2,3,4,5,6-пентафтор), фенилаланин(4-нитро), фенилглицин, пипеколовая кислота, саркозин, тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота и терт-лейцин. Предпочтительно, синтетические аминокислоты с алкильными боковыми цепями выбраны из C₁-C₁₇ алкилов, предпочтительно С₁-С₆алкилов. В одном варианте реализации пептид содержит одну или более аминокислот со спиртовыми группами, например, серин или треонин. В другом варианте реализации пептид содержит одну или более N-метиловых аминокислот, например N-метил аспарагиновую кислоту.

[0108] В одном варианте реализации пептиды применяют в виде последовательностей основных аминокислот с короткими цепями и добавляют дополнительные аминокислоты к конечной или боковой цепи. В другом варианте реализации пептид может содержать одну или более замен аминокислот. Предпочтительно, чтобы замещающая аминокислота по структуре, заряду или полярности была сходна с замещаемой аминокислотой. Например, изолейцин сходен с лейцином, тирозин сходен с фенилаланином, серин сходен с треонином, цистеин сходен с метионином, аланин сходен с валином, лизин сходен с аргинином, аспарагин сходен с глютамином, аспарагиновая кислота сходна с глютаминовой кислотой, гистидин сходен с пролином, а глицин сходен с триптофаном.

[0109] Пептид может содержать гомополимер или гетерополимер из встречающихся в природе или синтетических аминокислот. Например, полипептид, к боковой цепи которого присоединен амфетамин, может представлять собой гомополимер или гетерополимер, содержащий глютаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, серин, лизин, цистеин, треонин, амперегин, аргинин, тирозин или глютамин.

[0110] Примеры пептидов включают: Lys, Ser, Phe, Gly-Gly-Gly, Leu-Ser, Leu-Glu, гомополимеры из Glu и Leu и гетерополимеры (Glu)_n-Leu-Ser. В предпочтительном варианте реализации указанный полипептид представляет собой Lys, Ser, Phe или Gly-Gly-Gly.

[0111] В одном варианте реализации химический фрагмент имеет одну или более свободных групп боковых цепей карбокси-и/или амино-конца, отличных от положения присоединения амфетамина. Химический фрагмент может находиться в свободном состоянии либо в форме эфира или соли.

[0112] Химический фрагмент может быть ковалентно присоединен к амфетамину либо непосредственно, либо опосредованно - через линкер. Ковалентное присоединение может включать эфирную или карбонатную связь. Сайт присоединения обычно определяется доступной функциональной группой (группами) на амфетамине. Например, пептид можно присоединить к амфетамину N-концом, С-концом или боковой цепью аминокислоты. Дополнительные способы присоединения амфетамина к различным типичным химическим фрагментам описаны в Заявке на патент США №10/156527, заявках PCT/US03/05524 и PCT/US03/05525, каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки.

[0113] Описанные выше соединения - пролекарства амфетаминов можно синтезировать, как описано в Примере 1 и на ФИГ.1. В предпочтительном варианте для получения продукта высокой степени чистоты нет необходимости в дополнительных этапах очистки и/или кристаллизации. В одном варианте реализации чистота пролекарства амфетамина составляет по меньшей мере примерно 95%, более предпочтительно - по меньшей мере примерно 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, 99.5%, 99.9%, или их промежуточные значения. В случае синтеза L-лизин-d-амфетамина известные примеси включают Lys-Lys-d-амфетамин, Lys(Lys)-d-амфетамин, d-амифетамин, Lys(Boc)-d-амфетамин, Boc-Lys-d-амфетамин и Вос-Lys(Вос)-d-амфетамин. В одном варианте реализации содержание примеси составляет менее примерно 3%, более предпочтительно - менее примерно 2%, 1%, 0.5%, 0.25%, 0.15%, 0.1%, 0.05%, или промежуточные значения.

[0114] В одном варианте реализации пролекарство амфетамина (соединение, имеющее одну из описанных выше формул) может демонстрировать одно или более из следующих преимуществ по сравнению со свободными амфетаминами. Пролекарство амфетамина может предотвращать передозировку путем проявления пониженной фармакологической активности при введении в дозах, превышающих терапевтические, например в дозах, превышающих прописанные. Однако, если пролекарство амфетамина вводят в терапевтических дозах, пролекарство амфетамина может сохранять фармакологическую активность, близкую к достигаемой, путем введения несвязанного амфетамина, например Adderall XR®. Пролекарство амфетамина может также предотвращать неправильное употребление путем проявления стабильности в условиях, которые обычно используют химики, пытающиеся незаконным путем выделить амфетамины. Пролекарство амфетамина может предотвращать злоупотребление путем проявления пониженной биодоступности при введении парентеральными путями, в частности внутривенным путем ("уколы"), интраназальным путем ("вдыхание") и/или путем ингаляции ("курение"), которые часто применяют для незаконного употребления. При таких способах введения пролекарство амфетамина может уменьшать чувство эйфории, связанное с неправильным употреблением амфетаминов. Таким образом, пролекарство амфетамина может предотвращать и/или снижать возможность неправильного употребления и/или передозировки в случае применения пролекарства амфетамина способом, не соответствующим инструкциям производителя, например употребления пролекарства амфетамина в дозе, превышающей терапевтическую и/или не пероральным путем.

[0115] Применение таких фраз, как "сниженный", "ослабленный", "уменьшенный" или "пониженный" включает по меньшей мере 10% изменение фармакологической активности, причем в случае снижения риска неправильногоупотребления или передозировки предпочтительными являются более высокие процентные изменения. Например, изменения могут составлять больше, чем 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или другие промежуточные значения, большие, чем 10%.

[0116] Применение фразы "близкая фармакологическая активность" означает, что два соединения демонстрируют кривые с практически одинаковыми параметрами AUC, C_max, T_max, C_min и/или t_1/2, предпочительно, отличающимися друг от друга не более чем на 30%, более предпочтительно не более чем на 25%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1% или на другие промежуточные значения, меньшие 30%.

[0117] Предпочтительно пролекарство амфетамина проявляет биодоступность несвязанного амфетамина при по меньшей мере примерно 60% AUC (площадь под кривой), более предпочтительно по меньшей мере примерно 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или другими промежуточными значениями, превышающими 60%. Предпочтительно пролекарство амфетамина демонстрирует биодоступность несвязанного амфетамина, вводимого парентеральным например, интраназальным, путем с по меньшей мере примерно 70% AUC, более предпочтительно менее примерно 50%, 30%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или, с другими промежуточными значениями, превышающими 70%. Для определенных способов лечения желательно, чтобы пролекарство амфетамина демонстрировало описанные выше характеристики биодоступности и для орального и для парентерального введения. См., например, Таблицу 61.

[0118] Предпочтительно пролекарство амфетамина остается неактивным до высвобождения амфетамина при пероральном введении. Без привязки к теории считают, что пролекарство амфетамина неактивно, поскольку присоединение химического фрагмента снижает связывание амфетамина с сайтами, являющимися его биологическими мишенями (например, сайты транспортировки допамина ("DAT") и норэпинефрина ("NET") человека). (См. Hoebel, В. G., L. Hernandez, et al., "Microdialysis studies of brain norepinephrine, serotonin, and dopamine release during ingestive behavior, Theoretical and clinical implications." («Микродиализные исследования высвобождения норэпинефрина, серотонина и допамина в процессе пищевого поведения: Теоретическое и клиническое значение») Ann KY Acad Sd 575: 171-91 (1989)). Присоединение химического фрагмента может снизить связывание амфетамина с DAT и/или NET, отчасти потому, что пролекарство амфетамина не может преодолевать гематоэнцефалический барьер. Активация пролекарства амфетамина происходит при оральном введении, т.е. амфетамин освобождается от химического фрагмента в результате гидролиза, например, ферментами желудка, кишечного тракта или сыворотки крови. Поскольку пероральное введение облегчает активацию, при введении парентеральными путями, часто применяемыми незаконными пользователями, активация снижается.

[0119] Кроме того, считают, что указанные пролекарства амфетаминов предотвращают неправильное употребление и/или передозировку благодаря механизму естественного ограничения пропускания в месте гидролиза, а именно - в желудочно-кишечном тракте. Предполагается, что механизм ограничения пропускания обеспечивает высвобождение терапевтических количеств амфетамина из пролекарства амфетамина, но ограничивает высвобождение более высоких количеств амфетамина.

[0120] В другом варианте реализации токсичность пролекарства амфетамина существенно ниже, чем токсичность несвязанного амфетамина. Например, в предпочтительном варианте реализации острая токсичность в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз менее, или в промежуточное количество раз менее детальна, чем при оральном введении несвязанного амфетамина.

[0121] Предпочтительно пролекарство амфетамина обеспечивает кривую высвобождения в сыворотке, которая не превосходит уровень токсичности амфетамина при введении в дозах, превышающих терапевтические дозы. Пролекарство амфетамина может демонстрировать пониженную скорость всасывания и/или повышенную скорость выведения (клиренса) по сравнению со свободным амфетамином. Пролекарство амфетамина может также демонстрировать стационарную (steady state) кривую высвобождения в сыворотке. Предпочтительно пролекарство амфетамина обеспечивает биодоступность, но не допускает образования пиковых значений C_max или повышения концентрации в плазме крови. Параметры фармакокинетики описаны в приведенных ниже Примерах, в частности в примерах клинической фармакокинетики. В одном варианте реализации пролекарство амфетамина обеспечивает фармакокинетическую активность, близкую к фармакокинетической активности L-лизин-d-амфетамин димезилата. Например, параметры фармакокинетики (AUC, C_max, T_max, C_min и/или t_1/2) предпочтительно лежат в пределах от 80% до 125%, от 80% до 120%, от 85% до 125%, от 90% до 110%, или промежуточных значений, данных значений. Должно быть очевидно, что эти диапазоны могут, но не обязательно должны, быть симметричными, например от 85% до 105%. В Таблице 72 приведены параметры фармакокинетики d-амфетамина, высвобождаемого из L-лизин-d-амфетамин димезилата, для педиатрического исследования.

[0122] Пролекарство амфетамина может проявлять свойства замедленного и/или отложенного высвобождения. Отложенное высвобождение предотвращает быстрое начало фармакологического действия, а замедленное высвобождение является желательным для конкретных режимов дозирования, например для режима с однократным введением в сутки. Пролекарство амфетамина может независимо достигать такого профиля высвобождения. В качестве альтернативы пролекарство амфетамина можно изготовить в форме фармакологической композиции, чтобы улучшить такой профиль высвобождения или достигнуть его. Может быть желательным уменьшение промежутка времени до начала фармакологического действия, например, путем приготовления состава с продуктом немедленного высвобождения.

[0123] Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает также способы, включающие обеспечение, введение, назначение или употребление пролекарства амфетамина. Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие пролекарство амфетамина. Состав такой фармацевтической композиции может обеспечить улучшение желаемого профиля высвобождения или его достижение.

[0124] В одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способ лечения пациента, включающий введение терапевтически эффективного количества пролекарства амфетамина, т.е. количества, достаточного для того, чтобы предотвратить, ослабить и/или устранить симптомы заболевания. Указанный способ можно применять для лечения любого заболевания, при котором могут быть полезны лекарственные средства типа амфетаминов, включая, без ограничения, расстройства, связанные с дефицитом внимания, например. Синдром дефицита внимания и синдром дефицита внимания с гиперактивностью, а также другие нарушения обучения, ожирение, болезнь Альцгеймера, амнезию и другие расстройства и нарушения памяти, фибромиалгию, усталость и хроническую усталость, депрессию, эпилепсию, синдром навязчивых состояний (СНС), оппозиционно-вызывающее расстройство (ОВР), тревожность, устойчивую депрессию, реабилитацию после инсульта, болезнь Паркинсона, аффективное расстройств, шизофрению, болезнь Хантинггона, деменцию, например, деменцию при СПИДе и деменцию, связанную с поражением лобных долей двигательную дисфункцию, апатию, болезнь Пика, болезнь Крейтцфельда-Якоба, нарушения сна, например, нарколепсию, каталепсии, сонный паралич и гипнагогические галлюцинации, состояния, связанные с поражением мозга или дегенерацией нейронов, например, множественный склероз, синдром Турэтта и импотенцию, а также никотиновую зависимость и синдром отмены. Предпочтительные показания включают СДВ, СДВГ, нарколепсию и ожирение, наиболее предпочтительный является СДВГ.

[0125] Способы лечения включают способы комбинированной терапии, которые включают введение одного или более терапевтических агентов в дополнение к введению пролекарства амфетамина. Активные компоненты можно приготовить в форме для однократного введения, либо вместе или отдельно в составе формы многократного дозирования. Активные компоненты можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке. Примеры способов комбинированной терапии, включают введение лекарственных препаратов, приведенных в Таблице 1.

Таблица 1
Примеры способов лекарственной терапии, которые предполагается применять в комбинации с пролекарством амфетамина
Заболевание	Примеры класса лекарственных соединений	Конкретные примеры лекарственных средств
СДВГ	Амфетамин	Ritalin®, Dexedrine®, Adderall®, Cylert®,
Клонидин, Гуанфацин
Болезнь Альцгеймера		Rcminyl®, Cognex®, Aricept®, Exelon®, Akatinol®, Неотропин, Eldepryl®, Эстроген, Клиохинол, Ибупрофен, Гинко Билоба
Тревожность	Антидепрессант (Селективный ингибитор обратного захвата серотонина, бензодиазепин, ингибитор моноаминооксидазы),	Элавил, Ascndin®,
Wellbutrin®, Tegretol®,
	Анксиолитик	Anafranil®, Norpramine®, Adapin®, Sinequan®, Tofranil®, Epitol®,
Janimire®, Pamelor®, Ventyl®, Aventyl®, Sunnontil®, Prozac®, Luvox®, Serzone®, Paxil®, Zoloft®, Effexor®, Xanax®, Librium®, Klonopin®, Valium®, Zctran®, Valrelease®, Dalmane®, Ativan®, Alzapam®, Serax®, Halcion®, Aurorix®, Manerix®, Nardil®, Parnate®.
Апатия		Амисульприд (Amisulpride), Олазапин (Olanzapine), Висперидон (Visperidone), Кветиапин (Quetiapine), Клозапин (Clozapine), Зотепин (Zotepine)
Каталепсия		Xyrem®
Деменция		Тиоридазин (Thioridazine), Галоперидол (Haloperidol), Рисперидон (Risperidone), Cognex®, Aricept®, Exelon®
Депрессия	Антидепрессант	Флюоксетин (например, Prozac®), Zoloft®, Paxil®, Ребоксетин (Reboxetine), Wellbutrin®, Оланзапин (Olanzapine), Elavil®, Totranil®, Pamelor®, Nardil®, Parnate®, Desyrel®, Effexor®

[0126] Термин "Композиция" в целом относится к любой композиции, которая содержит одно или более пролекарств амфетаминов. Композиция может содержать сухой состав, водный раствор или стерильную композицию. Композиции, содержащие описанные в настоящей заявке соединения, можно хранить в лиофилизованной форме, и можно соединять со стабилизирующим агентом, таким как углеводород. На практике композицию можно применять в водном растворе, содержащем соли, например NaCl, поверхностно-активные вещества, такие как натрия додецил сульфат (SDS), и другие компоненты.

[0127] В одном варианте реализации пролекарство амфетамина само по себе демонстрирует замедленный профиль высвобождения. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, демонстрирующие замедленный профиль высвобождения благодаря пролекарству амфетамина.

[0128] В другом варианте реализации замедленный профиль высвобождения улучшают или достигают его путем включения в фармацевтическую композицию гидрофильного полимера. Подходящие гидрофильные полимеры включают, без ограничения, природные или частично или полностью синтетические гидрофильные смолы, такие как гуммиарабик, трагакантовая камедь, смола плодоворожкового дерева, гуаровая кмедь и камедь карайи; производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза; белковоподобные вещества, такие как агар, пектин, карраген и альгинаты; гидрофильные полимеры, такие как карбоксиполиметилен; желатин; казеин; зеин; бентонит; магния алюминия силикат; полисахариды; модифицированные производные крахмала и другие гидрофильные полимеры, известные в данной области. Предпочтительно гидрофильный полимер образует гель, который медленно растворяется в кислой водной среде, позволяя, таким образом, пролекарству амфетамина диффундировать из геля в желудок. Затем, когда гель достигает кишечника с более высоким рН среды, гидрофильный полимер растворяется в контролируемых количествах, чтобы обеспечить замедленное высвобождение. Предпочтительными гидрофильными полимерами являются гидроксипропилметилцеллюлозы, такие как эфиры Methocel, например Methocel E 10® (Dow Chemical Company, Мидлэнд, Мичиган, США). Для специалиста в данной области очевидны разнообразные структуры, такие как конструкции из гранул и покрытия, которые можно применять для получения определенных профилей высвобождения. См., например, US 6913768.

[0129] В дополнение к пролекарству амфетамина, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат также одну или более фармацевтическую добавку. Фармацевтические добавки включают разнообразные материалы, включая, без ограничения, разбавители и вещества-наполнители, связывающие и клейкие вещества, смазывающие вещества и вещества, способствующие скольжению, пластификаторы, дезинтегрирующие вещества, носители, растворители, буферы, красители, ароматизаторы, подслащивающие вещества, консерванты и стабилизаторы, а также другие известные в данной области фармацевтические добавки. Например, в предпочтительном варианте реализации, фармацевтическая композиция содержит стеарат магния. В другом предпочтительном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит микрокристаллическую целлюлозу (например, Avicel® PH-102), кроскармеллозу натрия и стеарат магния. См., например, Таблицу 62.

[0130] Разбавители увеличивают объем лекарственной формы и могут облегчить обращение с ней. Примеры разбавителей включают, без ограничения, лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, крахмал и фосфат кальция для твердых лекарственных форм, например таблеток и капсул; оливковое масло и этил олеат для мягких капсул; воду и растительое масло для жидких лекарственных форм, например суспензий и эмульсий. Дополнительные подходящие разбавители включают, без ограничения, сахарозу, декстраты, декстрин, мальтодекстрин, микрокристаллическую целлюлозу (например, Avicel®), сверхчистую целлюлозу, порошковую целлюлозу, прежелатинизированный крахмал (например, Starch 1500®), кальция фосфат дигидрат, полисахарид сои (например, Emcosoy®), желатин, диоксид кремния, кальция сульфат, кальция карбонат, магния карбонат, магния оксид, сорбитол, маннитол, каолин, полиметакрилаты (например, Eudragit®), калия хлорид, натрия хлорид и тальк. Предпочтительным разбавителем является микрокристаллическая целлюлоза (например, Avicel® PH-102). Предпочтительные диапазоны количества разбавителя в весовых процентах включают от примерно 40% до примерно 90%, от примерно 50% до примерно 85%, от примерно 55% до примерно 80%, от примерно 50% до примерно 60% и промежуточные значения.

[0131] В тех способах реализации, где фармацевтическая композиция спрессована в виде твердой лекарственной формы, например таблетки, связующее вещество может помочь удерживать компоненты вместе. Связующие вещества включают, но не ограничиваются ими, сахара, такие как сахароза, лактоза и глюкоза, кукурузный сироп, полисахариды сои, желатин, повидон (например, Kollidon®, Plasdone®); Пуллулан (Pullulan); производные целлюлозы, такие как микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (например, Methocel®), гидроксипропилцеллюлоза (например, Klucel®), этилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия; сополимеры акриловой и метакриловой кислоты; карбомер (например, Carbopol®); поливинилпирролидин, полиэтиленгликоль (Carbowax®); фармацевтическая глазурь; альгинаты, такие как альгиновая кислота и альгинат натрия; смолы, такие как гуммиарабик, гуаровая камедь и аравийские камеди; трагакант; декстрин и мальтодекстрин; производные молока, такие как сыворотка; крахмалы, такие как прежелатинизированный крахмал и крахмальный клейстер; гидрогенезированное растительное масло и магния алюминия силикат.

[0132] Для формы дозирования, представляющей собой таблетки, фармацевтическую композицию подвергают давлению между пуансоном и формой. Помимо других целей, смазывающее вещество может помочь предотвратить налипание композиции между поверхностями пуансона и формы. Смазывающее вещество можно применять также для покрытия форм дозирования с покрытием. Смазывающие вещества включают, но не ограничиваются ими, стеарат магния, стеарат кальция, стеарат цинка, порошковую стеариновую кислоту, глицерил моностеарат, глицерил пальмитостеарат, глицерил бегенат, кремний, магния силикат, коллоидный диоксид кремния, диоксид титана, бензоат атрия, натрия лаурил сульфат, натрия стеарил формат, гидрогенезированное растительное масло, тальк, полиэтиленгликоль и минеральое масло. Предпочтительным смазывающим веществом является стеарат магния. Количество смазывающего вещества в весовых процентах меньше чем примерно 5%, боле предпочтительно 4%, 3%, 2%, 1.5%, 1% или 0.5%, или любых промежуточных значений.

[0133] Вещества, обеспечивающие скольжение, могут улучшить текучесть несжатых твердых форм дозирования и улучшить точность дозирования. Вещества, обеспечивающие скольжение, включают, но не ограничиваются ими, коллоидный диоксид кремния, силикагель, тальк, магния трисиликат, магния или кальция стеарат, порошковую целлюлозу, крахмал и триосновный фосфат кальция.

[0134] Пластификаторы включают как гидрофобные, так и гидрофильные пластификаторы, включая, но не ограничиваясь ими, такие как диэтил фталат, бутил фталат, диэтил себакат, дибутил себакат, триэтил цитрат, ацетилтриэтил цитрат, ацетилтрибутил цитрат, кротоновая кислота, пропиленгликоль, касторовое масло, триацетин, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, глицерин и сорбит. Пластификаторы особенно полезны для фармацевтических композиций, содержащих полимер, и в мягких капсулах и таблетках с пленочным покрытием. В одном варианте реализации пластификатор облегчает высвобождение пролекарства амфетамина из лекарственной формы.

[0135] Дезинтегрирующие вещества могут увеличить скорость растворения фармацевтической композиции. Дезинтегрирующие вещества включают, но не ограничиваются ими, альгинаты, такие как альгеновая кислота и альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу кальция, карбоксиметилцеллюлозу натрия (например, Ac-Di-Sol®, Primellose®), коллоидный диоксид кремния, кроскармеллозу натрия, кросповидон (например, Kollidon®, Polyplasdone®), поливинилпирролидон (Plasone-XL®), гуаровую камедь, магния алюминия силикат, метилцеллюлозу, макрокристаллическую целлюлозу, полакрилин калия, порошковую целлюлозу, крахмал, прежелатинизированный крахмал, натрия крахмал гликолат (например, Explotab®, Primogel®). Предпочтительные дезинтегрирующие вещества включают кроскармеллозу натрия и микрокристаллическую целлюлозу (например, Avicel® PH-102). Предпочтительные диапазоны количества дезинтегрирующего вещества в весовых процентах включают от примерно 1% до примерно 10%, от примерно 1% до примерно 5%, от примерно 2% до примерно 3% и промежуточные значения.

[0136] В тех способах реализации, где фрамацевтическая кмпозиция изготовлена в виде жидкой лекарственной формы, указанная фармацевтическая композиция может включать один или более растворитель. Подходящие растворители включают, но не ограничиваются ими, воду; спирты, такие как этанол и изопропиловый спирт; метиленхлорид; растительное масло; полиэтиленгликоль; пропиленгликоль и глицерин.

[0137] Фрамацевтическая композиция может содержать буфер. Буферы включают, но не ограничиваются ими, молочную кислоту, лимонную кислоту, уксусную кислоту, лактат натрия, цитрат натрия и ацетат натрия.

[0138] Для улучшения внешнего вида или облегчения идентификации фармацевтической композиции можно применять любой фармацевтически приемлемый краситель. См. 21 Свод федеральных правил. Часть 74. Примеры красителей включают красный D&C Red №28, желтый D&C Yellow №10, синий FD&C Blue №1, красный FD&C Red №40, зеленый FD&C Green №3, желтый FD&C Yellow №6 и съедобные чернила. Предпочтительные цвета для капсул из желатина включают белый, умеренно-оранжевый и светло-голубой.

[0139] Ароматизаторы улучшают вкусовые качества и могут быть особенно полезны для жевательных таблеток или жидких форм дозирования. Ароматизаторы включают, но не ограничиваются ими, мальтол, ванилин, этил ванилин, ментол, лимонную кислоту, фумаровую кислоту, этил мальтол и тартаровую кислоту. Подсластители включают, без ограничения: сорбит, сахарин, натрия сахарин, сахарозу, аспартам, фруктозу, маннитол и инвертный сахар.

[0140] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут также содержать один или более консервантов и/или стабилизаторов для улучшения способности к хранению. Эти вещества включают, но не ограничиваются ими, спирт, бензоат натрия, бутилированный гидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол и бутилированный гидроксианизол, а также этилендиамин тетрауксусную кислоту.

[0141] Другие фармацевтические добавки включают желирующие агенты, такие как коллоидные глины; загустители, такие как трагакантовая камедь и альгинат натрия; смачивающие агенты, такие как лецитин, полисорбаты и лаурилсульфаты; влагоудерживающие вещества; антиоксиданты, такие как витамин Е, каротин и бутилированный гидрокситолуол; адсорбенты; пенящиеся вещества; эмульгаторы, вещества, увеличивающие вязкость; поверхностно-активные вещества, такие как натрия лаурил сульфат, диоцил натрия сульфосукцинат, триэтаноламин, полиоксиэтилен сорбитан, полоксалкол и соли четвертичного аммония; а также другие вспомогательные наполнители, такие как лактоза, маннитол, глюкоза, фруктоза, ксилоза, галактоза, сахароза, мальтоза, ксилитол, сорбит, хлорид, сульфаты и фосфаты калия, натрия и магния.

[0142] Фармацевтические композиции можно изготавливать согласно любому способу, известному специалистам в области фармацевтического производства, такому как, например, влажное гранулирование, сухое гранулирование, заключение в капсулу, прямое прессование, комкование и т.д. Например, фармацевтическую композицию можно приготовить путем смешивания пролекарства амфетамина с одной или более фармацевтических добавок с аликвотой жидкости, предпочтительно - воды, для образования массы для влажной грануляции. Потом влажную грануляционную массу можно высушить и получить сухие гранулы. Полученные в результате гранулы можно размолоть, просеять и смешать с различными фармацевтическими добавками, такими как нерастворимые в воде полимеры и дополнительные гидрофильные полимеры. В одном варианте реализации пролекарство амфетамина смешивают с гидрофильным полимером и аликвотой воды, затем сушат, чтобы получить гранулы пролекарство амфетамина, окруженные гидрофильным полимером.

[0143] После грануляции фармацевтическую композицию предпочтительно заключают в капсулу, например в желатиновую капсулу. Желатиновая капсула может содержать, например, кошерный желатин, диоксид титана и, возможно, красители. В качестве альтернативы фармацевтическую композицию можно таблетировать, например спрессовать, и, возможно, нанести защитное покрытие, которое растворяется или распадается в желудочном соке.

[0144] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить в различных формах дозирования. Предусмотрена любая биологически приемлемая форма дозирования, известная в данной области, а также их комбинации. Примеры предпочтительных форм дозирования включают, без ограничения, таблетки, включая жевательные таблетки, таблетки с пленочным покрытием, быстрорастворимые таблетки, шипучие таблетки, многослойные таблетки и двухслойные таблетки; каплеты; порошки, включая восстанавливаемые порошки; гранулы; диспергируемые гранулы; частицы; микрочастицы; капсулы, включая мягкие и твердые желатиновые капсулы; пастилки; жевательные пастилки; саше; драже; жидкости; растворы; суспензии; эмульсии; эликсиры и сиропы.

[0145] Фармацевтическую композицию предпочтительно вводят перорально. Оральное введение допускает максимальное высвобождение амфетамина, обеспечивает замедленное высвобождение амфетамина и предотвращает его неправильное употребление. Предпочтительно пролекарство амфетамина высвобождает амфетамин через более продолжительное время, чем это происходит при введении несвязанного амфетамина.

[0146] Формы дозирования для перорального введения могут существовать в виде дискретных единиц, таких как капсулы, каплеты или таблетки. В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает твердую форму дозирования для орального введения, содержащую пролекарство амфетамина, которая по размеру меньше, чем твердая форма дозирования для перорального введения, содержащая терапевтически эквивалентное количество несвязанного амфетамина. В одном варианте реализации лекарственная форма для перорального введения содержит желатиновую капсулу размера 2, размера 3 или меньшего размера (например, размера 4). Меньший размер лекарственной формы пролекарства амфетамина облегчает ее проглатывание.

[0147] Мягкие гелевые или желатиновые капсулы можно приготовить, например, путем диспергирования состава в подходящей среде (например, растительном масле), чтобы получить смесь с высокой плотностью. Эту смесь затем запечатывают в пленку на основе желатина. Затем получаемые промышленным способом единицы лекарственной формы сушат для получения постоянного веса.

[0148] Жевательные таблетки можно приготовить путем смешивания пролекарства амфетамина с носителями, предназначенными для образования относительно мягких, ароматизированных форм дозирования - таблеток, которые предназначены для жевания. Можно применять обычное оборудование и методики для изготовления таблеток (например, прямое прессование, грануляцию и комкование).

[0149] Таблетки с пленочным покрытием можно приготовить путем нанесения на таблетки покрытия с применением таких методик, как способы нанесения покрытия во вращающемся баке и способы воздушной суспензии для сохранения непрерывного слоя пленки на таблетке.

[0150] Прессованные таблетки можно приготовить путем смешивания пролекарства амфетамина с наполнителями, которые привносят связующие свойства. Смесь можно прессовать непосредственно либо гранулировать, а затем прессовать.

[0151] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно, в качестве альтернативы, изготавливать в виде жидкой формы дозирования, такой как раствор или суспензия в водной или неводной жидкой среде. Жидкая форма дозирования может представлять собой эмульсию, такую как жидкие эмульсии «масло в воде» или «вода в масле». Масла можно вводить путем добавления очищенных и стерилизованных жидкостей к готовому составу для энтерального введения, который затем помещают в трубку для искусственного кормления пациента, который не способен глотать.

[0152] Для перорального введения тонкие порошки или гранулы, содержащие разбавляющие, диспергирующие и/или поверхностно-активные агенты, могут присутствовать в жидкости, в воде или сиропе, в капсулах или саше в сухом состоянии, в неводной суспензии, которая может содержать суспендирующие агенты, или в суспензии в воде или сиропе. Жидкие дисперсии для перорального введения могут представлять собой сиропы, эмульсии или суспензии. Сиропы, эмульсии или суспензии могут содержать носитель, например природную смолу, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, сахарозу, сахарозу с глицерином, маннитол, сорбит и поливиниловый спирт.

[0153] Диапазон доз пролекарства амфетамина для человека будет зависеть от ряда факторов, включая возраст, массу и состояние пациента. Таблетки и другие формы дозирования, обеспеченные в дискретных единицах, могут содержать дневную дозу или подходящие доли дневной дозы одного или более пролекарств амфетамина. Форма дозирования может содержать дозу от примерно 2.5 мг до примерно 500 мг, от примерно 10 мг до примерно 250 мг, от примерно 10 мг до примерно 100 мг, от примерно 25 мг до примерно 75 мг, или промежуточные количества одного или более пролекарств амфетамина. В предпочтительном варианте реализации форма дозирования содержит 30 мг, 50 мг или 70 мг пролекарства амфетамина.

[0154] В форме дозирования можно применять любой из профилей высвоождения или любую их комбинацию, включая без ограничения, немедленное высвобождение (immediate release), пролонгированное высвобождение, импульсное высвобождение, переменное высвобождение, контролируемое высвобождение, хронометрированное высвобождение, отложенное высвобождение и пролонгированное действие.

[0155] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить частями, т.е. долями дозы, один или более раз на протяжении 24 часов. Дробные, разовые, двойные или другие множественные дозы можно принимать одновременно или в разное время на протяжении 24 часов. Дозы, принимаемые в разные моменты, могут быть неодинаковыми относительно друг друга или по содержанию отдельных компонентов. Предпочтительно вводят разовую дозу один раз в день. Дозу можно вводить после еды или натощак.

[0156] Формы дозирования фармацевтической композиции можно упаковывать согласно рыночным требованиям, например, в форме разовых доз, рулонов, больших бутылей, блистерных упаковок и т.д. Фармацевтическая упаковка, например блистерная упаковка, может далее включать или сопровождаться указаниями, которые позволят пациентам идентифицировать фармацевтическую композицию, показания к применению (например, СДВГ), и/или периоды времени введения (например, время дня, день недели и т.д.). Блистерная упаковка или другая фармацевтическая упаковка может также содержать другой фармацевтический продукт для комбинированной терапии.

[0157] Очевидно, что фармакологическую активность составов согласно настоящему изобретению можно продемонстрировать с применением стандартных фармакологических моделей, известных в данной области. Кроме того, очевидно, что композиции согласно настоящему изобретению можно внедрить или заключить в подходящую полимерную матрицу или мембрану для сайт-специфической доставки, либо можно функционализировать специфическими нацеливающими агентами, способными обеспечивать эффективную сайт-специфическую доставку. Эти методики, а также другие методики доставки лекарственных средств хорошо известны в данной области.

[0158] Любой признак описанных выше способов реализации можно применять в сочетании с любым другим признаком описанных выше способов реализации.

[0159] Чтобы облегчить более полное понимание изобретения ниже приведены Примеры. Однако объем изобретения не ограничен конкретными способами реализации, описанными в этих примерах, которые даны только с целью иллюстрации.

ПРИМЕРЫ [0160] В Примерах и тексте патента встречаются следующие сокращения:

[0161] Lys-Amp = L-лизин-d-амфетамин, Лизин-Амфетамин, K-Amp,

K-амфетамин или 2,6-диаминонексаноевая кислота-(1-метил-2-фенилэтил)-амин или Лиздексамфетамин

[0162] Phe-Amp = Фенилаланин-Амфетамин, F-Amp или 2-амино-3-фенилпропаноевая кислота-(1-метил-2-фенилэтил)-амид

[0163] Ser-Amp = Серин-амфетамин, S-Amp или 2-амино-3-гидроксилпропаноевая кислота-(1-метил-2-фенилэтил)-амид

[0164] Gly₃-Amp = GGG-амфетамин, GGG-Amp или 2-амино-N-({[(1-метил-2-фенил-этилкарбомил)-метил]-карбомил-метил)-ацетамид

[0165] ВОС = t-бутилоксикарбонил

[0166] CMC = карбоксиметилцеллюлоза

[0167] DIPEA = диизопропилэтиламин

[0168] т.п. = точка плавления

[0169] ЯМР = ядерный магнитный резонанс

[0170] OSu = гидроксисукцинимид-эфир

[0171] В тексте Примеров, если не указано другое, дозы приведены в количестве основания d-амфетамина. Примеры перевода величин приведены в Таблице 2.

Таблица 2
Перевод доз d-амфетамина (мг)
L-лизин-d-амфетамин димезилат (29.5% d-амфетамина)	основание d-амфетамина	d-амфетамин сульфат (72.8% d-амфетамина)
5.08	1.5	2.06
10.17	3	4.12
20.34	6	8.24
40.68	12	16.48
101.69	30	41.21
203.39	60	82.42
25.00	7.375	10.13
75.00	22.125	30.39
70.00	20.65	28.37
50.00	14.75	20.26
30.00	8.85	12.16

Пример 1. Общая схема синтеза конъюгатов амфетамина с пептидом

[0172] Конъюгаты с пептидом синтезировали, следуя общему способу, показанному на ФИГ.1. Можно применять итерационный способ для идентификации полезных конъюгатов: синтезируют конъюгаты с одной аминокислотой и тестируют их, затем на каждом шаге увеличивают длину пептида на одну аминокислоту и получают конъюгаты с дипептидом, трипептидом и т.д. Исходное пролекарство-кандидат, содержащее одну аминокислоту, может демонстрировать характеристики, более или менее желательные, чем полученные из него соединения-кандидаты, содержащие ди- или трипептиды. Итерационный подход позволяет быстро установить, влияет ли длина пептида на биодоступность.

Общая схема синтеза конъюгатов амфетамина с единичной аминокислотой.

[0173] К раствору сукцинимидил эфира аминокислоты с защитной группой (2.0 экв.) в 1,4-диоксане (30 мл) добавляли d-амфетамин сульфат (1.0 экв.) и NMM (N-метилморфин, 4.0 экв.). Полученную в результате смесь оставляли для перемешивания на 20 ч при 20°С. Добавляли воду (10 мл) и перемешивали раствор в течение 10 минут, а затем удаляли растворитель при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали 2% АсОН_вод (3×100 мл), насыщенным раствором NaHCO₃ (2×50 мл) и насыщенным солевым раствором (1×100 мл). Органический экстракт сушили на MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния, в результате чего получали конъюгат амфетамина и аминокислоты с защитной группой. Это промежуточное вещество освобождали от защиты путем добавления 4 Н HCl в 1,4-диоксане (20 мл). Раствор перемешивали в течение 20 ч при 25°С. Выпаривали растворитель и сушили продукт в вакууме, в результате чего получали соответствующий конъюгат аминокислоты с гидрохлоридом амфетамина. Синтез примеров конъюгатов с одной аминокислотой изображен на ФИГ.2 - ФИГ.6.

Общая схема синтеза конъюгатов амфетамина с дипептидом.

[0174] К раствору сукцинимидил эфира аминокислоты с защитной группой (1.0 экв.) в 1,4-диоксане добавляли амфетамин сульфат (2.0 экв.) и NMM (4.0 экв.). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 20 ч при 25°С. Растворители удаляли при пониженном давлении. Добавляли насыщенный раствор NaHCO₃ (20 мл) и перемешивали суспензию в течение 30 мин. Добавляли IPAC (изопропил ацетат, 100 мл), промывали органические фазы 2% АсОН_вод (3×100 мл) и насыщенным солевым раствором (2×100 мл). Сушили органический экстракт на Na₂SO₄ и выпаривали растворитель до сухого состояния, в результате чего получали конъюгат амфетамина и дипептида с защитной группой. Защитную группу удаляли путем добавления 4 Н HCl в 1,4-диоксане (20 мл) и перемешивали раствор в течение 20 ч при 25°С. Выпаривали растворитель и сушили в вакууме, в результате чего получали соответствующий конъюгат дипептида с гидрохлоридом амфетамина.

Общая схема синтеза конъюгатов трипептида с амфетамином

[0175] Синтезировали конъюгат с аминокислотой и удаляли защиту, следуя общей процедуре, описанной выше. К раствору конъюгата гидрохлорида амфетамина и аминокислоты (1.0 экв.) в диоксане (20 мл) добавляли NMM (5.0 экв.) и сукцинат дипептида с защитной группой (1.05 экв.). Раствор перемешивали в течение 20 ч при 25°С. Удаляли растворитель при пониженном давлении. Добавляли насыщенный раствор NaHCO₃ (20 мл) и перемешивали суспензию в течение 30 минут. Добавляли IPAC (100 мл) и промывали органическую фазу 2% АсОН_вод (3×100 мл) и насыщенным солевым раствором (2×100 мл). Сушили органический экстракт на Na₂SO₄ и выпаривали растворитель до сухого состояния, в результате чего получали трипептид амфетамин с защитной группой. Удаление защиты проводили непосредственно путем добавления 4 Н HCl в 1,4-диоксане (20 мл). Смесь перемешивали в течение 20 ч при 25°С, выпаривали растворитель и сушили продукт в вакууме, в результате чего получали соответствующий конъюгат гидрохлорида амфетамина и трипептида.

[0176] Конъюгаты гидрохлоридов не требуют дополнительной очистки, но многие соли-гидрохлориды без защитной группы были гигроскопичными и требовали особых условий обращения при проведении анализа и последующего исследования in vivo.

Пример 2. Синтез L-лизин-d-амфетамина

[0177] L-лизин-d-амфетамин синтезировали следующими способами:

а. Приготовление соли HCl (см. ФИГ.3)

i. Присоединение

Реагенты	Молекулярная масса	Масса	ммоль	Молярные эквиваленты
свободное основание d-амфетамина	135.2	4.75 г	35.13	1
Boc-Lys(Boc)-OSu	443.5	15.58 г	35.13	1
Di-iPR-Et-амин	129	906 мг	7.03	0.2, d=0.74, 1.22 мл
1,4-Диоксан	-	100 мл	-	-

[0178] К раствору Boc-Lys(Boc)-OSu (15.58 г, 35.13 ммоль) в диоксане (100 мл) в инертной атмосфере добавляли свободное основание d-амфетамина (4.75 г, 35.13 ммоль) и DIPEA (0.9 г, 1,22 мл, 7.03 ммоль). Полученную в результате смесь оставляли для перемешивания на ночь. Растворитель и избыток основания удаляли путем выпаривания при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в этилацетате и загружали в колонку для флэш-хроматографии (шириной 7 см, заполненная кремнием до уровня 24 см) и элюировали этилацетатом. Выделяли продукт, удаляли растворитель путем ротационного выпаривания и сушили очищенный защищенный амид в высоком вакууме. В результате получали белое твердое вещество. ¹Н ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1.02-1.11 (m, 2H, Lys γ-CH₂), δ 1.04 (d, 3H, Amp α-СН₃), δ 1.22-1.43 (m, 4H, Lys-β и δ-СН₂), δ 1.37 (18Н, Boc, 6х СН₃), δ 2.60-2.72 (2H, Amp CH₂), δ 3.75-3.83, (m, 1H, Lys α-H) δ 3.9-4.1 (m, 1H, Amp α-Н), δ 6.54-6.61 (d, 1H, амид NH), δ 6.7-6.77 (m, 1, амид NH), δ 7.12-7.29 (m, 5H, ArH), δ 7.65-7.71 (m, 1, амид NH); т.п.=86-88°С.

ii. Удаление защитных групп

Реагенты	Молекулярная масса	Масса	ммоль	Молярные эквиваленты
4М HCl в диоксане	4 ммоль/мл	50 мл	200	6.25
Boc-Lys(Boc)-Amp	463.6	14.84 г	32	1
1,4-диоксан	-	50 мл	-	-

[0179] Амид с группой растворяли в 50 мл безводного диоксана и перемешивали, добавляя 50 мл (200 ммоль) смеси 4М HCl/диоксан, после чего перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворители удаляли путем ротационного выпаривания и получали в результате вязкое масло. Добавление 100 мл МеОН с последующим ротационным выпариванием давало твердый материал золотого цвета, который сушили в высоком вакууме для хранения при комнатной температуре. ¹Н ЯМР (ДМСО-dβ) δ 0.86-1.16 (m, 2Н, Lys γ-СН₂), δ 1.1 (d, 3H, Amp α-СН₃), δ 1.40-1.56 (m, 4H, Lys-β и δ-СН₂), δ 2.54-2.78 (m, 2Н, Amp СН₂, 2Н, Lys ε-CH₂), 3.63-3.74 (m, 1H, Lys α-H), δ 4.00-4.08 (m, 1H, Amp α-Н), δ 7.12-7.31 (m, 5H, Amp ArH), δ 8.13-8.33 (d, 3H, Lys амин) δ 8.70-8.78 (d, 1H, амид NH); т.п.=120-122°С.

b. Приготовление соли-мезилата (и см. ФИГ.2)

[0180] Аналогично можно приготовить мезилат конъюгата с пептидом путем применения метансульфоновой кислоты на этапе удаления защитной группы, как подробно описано ниже

i. Присоединение

[0181] Реактор с круглым дном объемом 72 л, оборудованный механической мешалкой, цифровой термопарой, воронкой для заполнения и продуваемый азотом. В сосуд помещали Boc-Lys(Boc)-OSu (3.8 кг, 8.568 моль, 1.0 экв.) и 1,4-диоксан (20.4 л), полученный в результате мутный раствор перемешивали при 20±5°С в течение 10 мин. К смеси в течение 1 мин добавляли N-метилморфолин (950 г, 9.39 моль, 1.09 экв.) и перемешивали эту смесь в течение 10 мин. Затем к слегка мутной реакционной смеси в течение 30 мин добавляли раствор декстро-амфетамина (1.753 кг, 12.96 моль, 1.51 экв.) в 1,4-диоксане (2.9 л), одновременно охлаждая реакционную смесь снаружи в ванне со смесью лед/вода. На протяжении добавления внутреннюю температуру поддерживали на уровне ниже 25°С. В конце добавления образовывался густой белый осадок. Промывали воронку для заполнения, вливая в реактор 1,4-диоксан (2.9 л), и перемешивали реакционную смесь при 22±3°С. Проверка способом хроматографии в тонком слое, которую проводили через 30 мин после завершения добавления не выявила остатков Boc-Lys(Boc)-OSu, и реакцию гасили деионизованной H₂O (10 л). Смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды, а затем концентрировали при пониженном давлении, получая в результате плотное белое твердое вещество.

[0182] Для экстрагирования готовили два раствора: NaCl (15 кг) и кристаллическая уксусная кислота (2 кг) в деионизованной H₂O (61 л), и раствор бикарбоната: NaHCO₃ (1.5 кг) в деионизованной Н₂О (30 л).

[0183] Твердое вещество снова растворяли в изопропил ацетате (38 л) и растворе уксусная кислота/соль (39 кг) и переносили в реактор объемом 150 литров. Перемешивали фазы в течение 10 мин, а затем оставляли для разделения. Сливали органическую фазу и промывали другую часть (39 кг) раствора в смеси уксусная кислота/соль, после чего следовала промывка раствором бикарбоната (31.5 кг). Фазы полностью разделялись через 5 минут. К органическому раствору добавляли силикагель (3.8 кг; Silica-gel 60). Полученную в результате взвесь перемешивали в течение 45 мин и фильтровали через фильтровальную бумагу. Отфильтрованный осадок промывали изопропил ацетатом (5×7.6 л). Фильтрат и промывную жидкости анализировали путем хроматографии в тонком слое. Определили, что и то и другое содержит продукт. Смешивали фильтрат и промывные воды и концетрировали при пониженном давлении. В результате получали неочищенный продукт в форме белого твердого вещества.

ii. Удаление защитной группы

[0184] В бутыль объемом 45 л помещали ди-Boc-Lys-Amp (3.63 кг, 7.829 моль) и 1,4-диоксан (30.8 л, 8.5 моль) и быстро перемешивали смесь в атмосфере азота в течение 30 мин. Полученный в результате раствор фильтровали и промывали отфильтрованный осадок 1,4-диоксаном (2×1.8 л).

[0185] Затем фильтраты переносили в сосуд объемом 72 л с круглым дном, оборудованный механической мешалкой, цифровой термопарой, впускным и выпускным отверстием для азота и 5 л воронкой для заполнения. Температуру реакционной смеси регулировали в диапазоне 21±3°С в водяной ванне. К прозрачному, светло-желтому раствору на протяжении 1 ч добавляли метансульфоновую кислоту (3.762 кг, 39.15 моль, 5 экв.), поддерживая внутреннюю температуру на уровне 21±3°С. Примерно через 1 ч после завершения добавления начинается образование белого преципитата. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 20.5 ч, после чего проверка путем ВЭЖХ показала исчезновение всех исходных материалов. Смесь фильтровали через фильтровальную бумагу, реакционный сосуд промывали диоксаном (3×3.6 л) и сушили резиновым изолятором в течение 1 ч. Затем материал переносили в сушильне подносы и сушили в вакуумной печи при 55°С в течение ~90 ч. В результате получали Lys-Amp димезилат [3.275 кг, выход 91.8%; >99% (AUC)] в форме белого твердого вещества.

Пример 3. Синтез Ser-Amp

[0186] Ser-Amp синтезировали аналогичным способом (см. ФИГ.4), за тем исключением, что исходным материалом был Boc-Ser(O-tBu)-OSu, а защитную группу удаляли раствором трифторуксусной кислоты вместо HCl.

Пример 4. Синтез Phe-Amp

[0187] Phe-Amp синтезировали аналогичным способом (см. ФИГ.5) за тем исключением, что исходным материалом был Boc-Phe-OSu.

[0188] Phe-Amp гидрохлорид: гигроскопичный; Н ЯМР(400 МГц, ДМСО-d6): δ 8.82 (d, J=8.0 Гц, 1H), 8.34 (bs, 3Н), 7.29-7.11 (m, 10Н), 3.99 (m, 2H), 2.99 (dd, J=13.6, 6.2 Гц, 1H), 2.88 (dd, J=13.6, 7.2 Гц, 1H), 2.64 (dd, J=13.2, 7.6 Гц, 1H), 2.53 (m, 1H), 1.07 (d, J=6.4 Гц, 3Н);¹³С ЯМР (100 МГц, ДМСО-d₆): δ 167.31, 139.27, 135.49, 130.05, 129.66, 128.78, 128.61, 127.40, 126.60, 53.83, 47.04, 42.15, 37.27, 20.54; HRMS (масс-спектроскопия высокого разрешения): (электроспрей) для C₁₈H₂₃N₂O (М+Н)⁺: расчетн., 283.1810: эксп., 283.1806.

Пример 5. Синтез Gly₃-Amp

[0189] Gly₃-Amp синтезировали аналогичным способом (см. ФИГ.6), за тем исключением, что исходная аминокислота представляла собой Boc-GGG-OSu.

[0190] Gly₃-Amp гидрохлорид: т.п. 212-214°С; ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7.28 (m, 5Н), 3.96 (m, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.66 (m, 4H), 2.76 (m, 1H), 2.75 (m, 1H), 1.02 (d, J=6.8 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (100 МГц, ДМСО-d₆) δ 168.91, 168.14, 166.85, 139.45, 129.60, 128.60, 126.48, 46.60, 42.27, 20.30. HRMS: (электроспрей) для C₁₅H₂₂N₄O₃Na (M+Na)⁺: расчетн., 329.1590: эксп., 329.1590.

Пример 6. Фармакокинетика L-лизин-d-амфетамина диНСl по сравнению с d-амфетамин сульфатом (твердофазный иммуноферментный анализ)

[0191] Самцов крыс Sprague-Dawley обеспечивали водой без ограничения, не давали им пищи в течение ночи и вводили L-лизин-d-амфетамин диНСl или d-амфетамин сульфат путем орального гаважа (через зонд). Во всех исследованиях дозы содержали эквивалентные количества основания d-амфетамина. Концентрации d-амфетамина в плазме измеряли путем твердофазного иммуноферментного анализа (Amphetamine Ultra, 109319, Neogen Corporation, Лексингтон, Кентукки, США). Этот анализ специфичен к d-амфетамину при минимальной реактивности (0.6%) с основным метаболитом d-амфетамина (пара-гидрокси-d-амфетамин). Как было установлено, L-лизин-d-амфетамин диНСl также практически не реагирует в этом анализе (<1%).

[0192] Средние (n=4) кривые концентраций d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина в плазме показаны на ФИГ.7. У всех четырех животных, которым вводили L-лизин-d-амфетамин диНС наблюдали пролонгированное высвобождение, а C_max существенно снижалась по сравнению с животными, которым вводили d-амфетамин сульфат. Концентрации d-амфетамина в плазме у отдельных животных для d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамин диНСl показаны в Таблице 3. Средние концентрации d-амфетамина в плазме показаны в Таблице 4. Время пика концентрации для L-лизин-d-амфетамин диНСl было близко к времени для d-амфетамина. Параметры фармакокинетики для орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамин диНСl приведены в Таблице 5.

Таблица 3
Концентрации d-амфетамина в плазме у отдельных животных после орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамин диНСl (3 мг/кг основания d-амфетамина)
Время (часы)	d-амфетамин (нг/мл)	L-лизин-d-амфетамин (нг/мл)
Крыса №1	Крыса №2	Крыса №3	Крыса №4	Крыса №1	Крыса №2	Крыса №3	Крыса №4
0.5	144	157	101	115	52	62	74	44
1	152	78	115	78	48	72	79	57
1.5	85	97	117	95	42	62	76	53
3	34	45	72	38	61	60	71	43
5	20	14	12	15	49	33	44	22
8	3	3	2	2	15	14	12	8

Таблица 4
Средние концентрации d-амфетамина в плазме после орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD		Среднее	±SD
0.5	129	25	20	58	13	22
1	106	35	33	64	14	22
1.5	99	13	14	58	14	25
3	47	17	36	59	11	19
5	15	4	24	37	12	32
8	2	1	35	12	3	24

Таблица 5
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина
Лекарственное средство	AUC (0-8 ч) нг·ч/мл	Процент амфетамина	(нг/мл)	Процент амфетамина	Средний пик (нг/мл)	Процент амфетамина
Амфетамин	341±35	100	111±27	100	129	100
Lys-Amp	333±66	98	61±13	55	64	50

[0193] Этот пример показывает, что если с активным веществом (амфетамином) конъюгирован лизин, пиковые уровни амфетамина снижаются, в то время как биодоступность остается примерно равной биодоступности амфетамина. Биодоступность амфетамина, высвобождаемого из L-лизин-d-амфетамина, близка биодоступности амфетамин сульфата в эквивалентной дозе; таким образом, L-лизин-d-амфетамин сохраняет свое терапевтическое значение. Постепенное высвобождение амфетамина из L-лизин-d-амфетамина и снижение пиковых уровней снижает вероятность передозировки.

Пример 7. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата при оральном введении в различных дозах

а. Дозы, тождественные терапевтическим дозам для человека (1.5, 3 и 6 мг/кг)

[0194] Средние (n=4) кривые концентрации d-амфетамина в плазме в сравнении с кривыми L-лизин-d-амфетамина для крыс, которым орально вводили 1.5, 3 и 6 мг/кг, показаны на ФИГ.8, ФИГ.9 и ФИГ.10 соответственно. У животных, которым вводили L-лизин-d-амфетамин, наблюдали пролонгированное высвобождение при всех трех дозах. Средние концентрации в плазме для 1.5, 3, и 6 мг/кг показаны в Таблице 6, Таблице 7 и Таблице 8 соответственно. Параметры фармакокинетики для орального введения d-амфетамина в сравнении с параметрами L-лизин-d-амфетамина в различных дозах приведены в таблице 9.

Таблица 6
Средние концентрации d-амфетамина в сравнении с концентрациями L-лизин-d-амфетамина после орального введения (1.5 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	0	0	0	0	0	0
0.25	103	22	21	31	11	37
0.5	126	20	16	51	23	45
1	101	27	27	68	23	34
1.5	116	28	24	72	10	14
3	66	13	20	91	5	5
5	40	7	18	75	16	22
8	17	2	115	39	13	34

Таблица 7
Средние концентрации d-амфетамина в сравнении с концентрациями L-лизин- d-амфетамина после орального введения (3 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	0			0
0.25	96	41	43	51	49	97
0.5	107	49	46	36	35	96
1	121	17	14	81	44	54
1.5	120	33	27	97	32	33
3	91	30	33	88	13	15
5	62	22	36	91	21	23
8	19	6	33	46	16	34

Таблица 8
Средние концентрации d-амфетамина в сравнении с концентрациями L-лизин-d-амфетамина после орального введения (6 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин		L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	0			0
0.25	204	14	7	74	38	51
0.5	186	9	5	106	39	37
1	167	12	7	133	33	24
1.5	161	24	15	152	22	15
3	111	29	26	157	15	10
5	78	9	11	134	18	13
8	35	5	15	79	12	15

Таблица 9
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина
Параметр	1.5 мг/кг	3 мг/кг	6 мг/кг
Amp	K-Amp	Amp	K-Amp	Amp	K-Amp
AUC (нг·ч/мл)	481	538	587	614	807	1005
Процент	100	112	100	105	100	125
Cmax (нг/мл)	133	93	141	104	205	162
Процент	100	70	100	74	100	79
Tmax (часы)	0.938	3.5	1	1.56	0.563	2.625
Процент	100	373	100	156	100	466

b. Увеличенные дозы (12, 30 и 60 мг/кг)

[0195] Средние (n=4) кривые концентрации амфетамина d-амфетамина в сравнении с кривыми L-лизин-d-амфетамина показаны для крыс, которым орально вводили 12, 30 и 60 мг/кг. При таких повышенных дозах биодоступность L-лизин-d-амфетамина была значительно ниже, чем биодоступность d-амфетамина.

Таблица 10
Средние концентрации d-амфетамина в плазме в сравнении с концентрациями L-лизин-d-амфетиамина после перорального введения (12 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±.SD	CV	Среднее	SD	CV
0	NA	NA	NA	NA	NA	NA
0.25	530	279	53	53	34	64
0.5	621	76	12	99	32	33
1	512	91	18	220	77	35
1.5	519	113	22	224	124	55
3	376	149	40	300	153	51
5	314	123	39	293	153	52
8	103	64	63	211	45	22
*NA=неприменимо

Таблица 11
Средние концентрации d-амфетамина в плазме в сравнении с концентрациями L-лизин-d-амфетиамина после перорального введения (30 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	NA	NA	NA	NA	NA	NA
0.25	2,036	1,262	62	29	16	54
0.5	2,583	1,465	57	88	29	34
1	3,162	772	24	328	30	9
1.5	3,445	191	6	368	99	27
3	2.620	72	3	620	79	13
5	1,535	21	1	730	169	23
8	164	52	32	NA	NA	NA

Таблица 12
Средние концентрации d-амфетамина в плазме в сравнении с концентрациями L-лизин-d-амфетамина после орального введения (60 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
	d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамин
Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	NA	NA	NA	NA	NA	NA
0.25	3.721	286	8	169	93	55
0.5	3,566	560	16	259	138	53
1	3,556	442	12	420	173	41
1.5	4,142	381	9	506	169	33
3	NA	NA	NA	686	222	32
5	NA	NA	NA	612	67	11
8	NA	NA	NA	870	NA	NA

Таблица 13
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после орального введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина
Параметр	12 мг/кг	30 мг/кг	60 мг/кг
Amp	К-Amp	Amp	К-Amp	Amp	К-Amp
AUC (нг·ч/мл)	2,738	1,958	12,623*	2,387*	5,081**	476**
Процент	100	72	100	19	100	9
Cmax (нг/мл)	621	352	3,726	231	4,101	647
Процент	100	57	100	6	100	16
Tmax (часы)	0.938	3.5	NA	NA	NA	NA
Процент	100	373	NA	NA	NA	NA
*0-5 ч
**0-1.5 ч

Пример 8. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата при оральном введении в различных дозах, аналогичных диапазону терапевтических доз для человека, по сравнению с дозами, превышающими фармакологические

[0196] Самцов крыс Sprague-Dawley обеспечивали водой без ограничения, не давали им пищи в течение ночи и путем орального гаважа (через зонд) вводили 1.5, 3, 6, 12 и 60 мг/кг амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин, содержащий эквивалентные количества d-амфетамина. Концентрации d-амфетамина определяли путем твердофазного иммуноферментного анализа.

[0197] Было показано, что если активный компонент d-амфетамин конъюгирован с лизином, уровни d-амфетамина через 30 минут после введения были примерно на 50% ниже уровней для диапазона доз от 1.5 до 12 мг/кг. Однако при введении доз, превышающих фармакологические (60 мг/кг), уровни d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина достигали только 8% уровней, которые наблюдали для d-амфетамин сульфата (См. Таблицу 14, Таблицу 15 и ФИГ.15). Существенное снижение биодоступности при пероральном введении в высоких дозах значительно снижает вероятность развития зависимости от L-лизин-d-амфетамина.

Таблица 14
Уровни d-амфетамина в зависимости от дозы через 0.5 ч после введения d-амфетамин сульфата
Доза, мг/кг	1.5	3	6	12	60
нг/мл 0.5 ч	109±59	196±72	294±202	344±126	3239±73
процент	100	100	100	100	100

Таблица 15
Уровни d-амфетамина в зависимости от дозы через 0.5 ч после введения L-лизин-d-амфетамина
Доза, мг/кг	1.5	3	6	12	60
нг/мл 0.5 ч	45±10	86±26	129±46	172±113	266±18
процент	41	44	44	50	8

Пример 9. Снижение биодоступности L-лизин-d-амфетамина димезилата при пероральном введении в высокой дозе

[0198] Дополнительное исследование фармакокинетики при оральном введении иллюстрирует ФИГ.16, на котором показаны уровни d-амфетамина в крови при дозе 60 мг/кг на протяжении 8 ч. В случае d-амфетамина уровни в крови быстро достигали очень высокого уровня, и 8 из 12 животных либо умерли, либо были умерщвлены из-за острых симптомов отравления. Уровни в крови (Таблица 16 и Таблица 17) у животных, которым вводили L-лизин-d-амфетамин, напротив, не достигали пиковых значений ранее 5 часов, и при этом достигали только долей значений уровней, которые наблюдали у животных, получавших амфетамин (Замечание: Невозможно было получить достоверные данные для d-амфетамина через 3 часа, поскольку животные умерли или были забиты).

Таблица 16
Средние концентрации d-амфетамина в зависимости в сравнении с концентрациями L-лизиин-d-амфетамина после орального введения в высокой дозе (60 мг/кг)
Часы	Концентрации амфетамина в плазме (нг/мл)
d-амфетамин	L-лизин-d-амфетамина
	Среднее	±SD	CV	Среднее	±SD	CV
0	NA	NA	NA	NA	NA	NA
0.25	2174	907	42	35	17	48
0.5	2643	578	22	81	33	41
1	2828	1319	47	212	30	14
1.5	2973	863	29	200	79	40
3	2944*	95	3	440	133	30
5	153*	NA	NA	565	100	18
8	1309**	NA	NA	410	206	50
*n=2
**n=1

Таблица 17. Параметры фармакокинетики d-амфетамина в сравнении с параметрами L-лизин-d-aмфетамина

Пример 10. Биодоступность d-амфетамина при оральном введении лекарственной формы с пролонгированным высвобождением (целого или раздробленного) или L-лизин-d-амфетамин димезилата.

[0199] Дозы лекарственной формы d-амфетамин сульфата с пролонгированным высвобождениением (капсулы Dexedrine Spansule®, GlaxoSmithKline) вводили крысам перорально в форме целых капсул или в форме раздробленных капсул, и сравнивали с дозами L-лизин-d-амфетамина, содержащего эквивалентное количество основания d-амфетамина (ФИГ.20). Раздробленные капсулы продемонстрировали увеличение C_max и AUC_inf на 84 и 13 процентов, соответственно, по сравнению с целыми капсулами (Таблица 18 и Таблица 19). Напротив, C_max и AUC_inf d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина были близки значениям этих параметрам для целой капсулы, что говорит о том, что пролонгированное высвобождение присуще самому соединению и его нельзя обойти путем простых манипуляций.

Таблица 18
Динамика концентраций d-амфетамина после перорального введения капсул Dexedrine Spansule® с пролонгированным высвобождением, раздробленных капсул Dexedrine Spansule® с пролонгированным высвобождением или L-лизин-d-амфетамина (3 мг/кг основания d-амфетамина)
Часы	Концентрации в плазме (нг/мл)
Целая капсула Spansule®	Раздробленная капсула Spansule®	L-лизин-d-амфетамин
0	0	0	0
0.25	32	46	3
0.5	33	85	5
1	80	147	34
1.5	61	101	60
3	64	66	76
5	46	39	66
8	34	12	38

Таблица 19
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после перорального введения капсул Dexedrine Spansule® с пролонгированным высвобождением, раздробленных капсул в пролонгированным высвобождением Spansule® или L-лизин-d-амфетамина (3 мг/кг основания d-амфетамина)
Параметр	Концентрации в плазме (нг/мл)
Целая капсула Spansule®	Раздробленная капсула Spansule®	L-лизин-d-амфетамин
AUC 0-8 ч (нг·ч/мл)	399	449	434
Процент	100	113	109
Cmax (нг/мл)	80	147	76
Процент	100	184	95
Tmax (часы)	1	1	3
Процент	100	100	300

[0200] Этот пример иллюстрирует преимущества данного изобретения над традиционными лекарственными формами d-амфетамина с контролируемым высвобождением.

Пример 11. Снижение биодоступности L-лизин-d-амфетамина при интраназальном введении по сравнению с амфетамином

a. Биоактивность L-лизин-d-амфетамин гидрохлорида при интраназальном введении (IN)

[0201] Самцам крыс Sprague-Dawley интраназальным путем вводили 3 мг/кг амфетамин сульфата или L-лизин-d-амфетамин гидрохлорида, содержащих эквивалентные количества d-амфетамина. L-лизин-d-амфетамин при интраназальном введении не высвобождал в циркулирующую кровь сколько-нибудь значительного количества d-амфетамина. Средние (n=4) кривые концентрации амфетамина в плазме в зависимости от L-лизин-d-амфетамина показаны на ФИГ.17. Параметры фармакокинетики для интраназального введения L-лизин-d-амфетамина представлены в Таблице 20.

Таблица 20
Параметры фармакокинетики d-амфетамина в зависимости от концентрации L-лизин- d-амфетамина при интраназальным введении
Лекарственное средство	AUC (0-1.5 ч) нг·ч/мл	Процент d-амфетамина	Cmax (нг/мл)	Процент d-амфетамина
Амфетамин	727	100	1,377	100
Lys-Amp	4	0.5	7	0.5

b. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата при интраназальном введении

[0202] Способ для раздела а. повторили с применением соли L-лизин-d-амфетамин мезилата:

Таблица 21
Параметры фармакокинетики d-амфетамина в зависимости от дозы L-лизин-d-амфетамин мезилита при интраназальном введении
Лекарственное средство	AUC (0-1.0 ч) нг·ч/мл	Процент d-амфетамина	Cmax (нг/мл)	Процент d-амфетамина
Амфетамин	573	100	1114	100
соль L-лизин-d-амфетамин мезилат	25	4	26	2

[0203] Этот пример показывает, что если активный компонент d-амфетамин конъюгирован с лизином, биодоступность при интраназальном давлении существенно снижается, что соответственно снижает способность данного лекарственного средства вызывать зависимость при введении таким путем.

Пример 12. Биодоступность амфетамина при внутривенном введении по сравнению с L-лизин-d-амфетамин димезилатом

[0204] Самцам крыс Sprague-Dawley путем внутривенной инъекции в хвостовую вену вводили 1.5 мг/кг d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамин, содержащий эквивалентное количество амфетамина. Как это наблюдали при интраназальном введении, конъюгат не высвобождал значительного количества d-амфетамина. Средние (n=4) кривые концентрации амфетамина в плазме в сравнении с L-лизин-d-амфетамином показаны на ФИГ.19. Параметры фармакокинетики для интраназального введения L-лизин-d-амфетамина приведены в Таблице 22.

Таблица 22
Параметры фармакокинетики для интраназального введения L-лизин-d-амфетамина
Лекарственное средство	AUC (0-1.5 ч) нг·ч/мл	Процент d-амфетамина	Cmax (нг/мл)	Процент d-амфетамина
Амфетамин	727	100	1,377	100
L-лизин-d-амфетамин	4	0.5	7	0.5

[0205] Этот пример показывает, что если активный компонент амфетамин конъюгирован с лизином, биодоступность амфетамина при внутривенном пути введения существенно снижается, что снижает способность лекарственного средства вызывать зависимость при таком пути введения.

Пример 13. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата при оральном введении в сравнении с d-амфетамином в возрастающих дозах

[0206] Доля интактного L-лизин-d-амфетамина, который всасывается после перорального введения крысам, увеличивалась в нелинейной зависимости от увеличивающихся доз от 1.5 до 12 мг/кг (ФИГ.21 - ФИГ.25). Доля всосавшегося вещества при дозе 1.5 мг/кг составляла только 2.6 процента, в то время как при 12 мг/кг она увеличивалась до 24.6 процентов. При высокой дозе, равной 60 мг/кг, доля всосавшегося вещества падала до 9.3 процентов. Т_макс лежало в диапазоне от 0.25 до 3 часов и пиковая концентрация в случае L-лизин-d-амфетамина достигалась раньше, чем в случае d-амфетамина. Выведение L-лизин-d-амфетамина происходило быстрее, чем выведение d-амфетамина, при этом через 8 часов концентрации для самой низкой дозы были практически необнаружимы.

[0207] Значения биодоступности (AUC) d-амфетамина из каждого вводимого лекарственного средства при низких дозах были примерно одинаковыми. T_max для d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина лежало в диапазоне от 1.5 до 5 часов по сравнению с 0.5-1.5 часами после введения d-амфетамин сульфата. Различия в T_max были больше при более высоких дозах. C_max d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина снижалась примерно на половину по сравнению с C_max d-амфетамина из d-амфетамин сульфата, который вводят в дозах от 1.5 до 6 мг/кг, которые приближаются к дозам, эквивалентным человеческим (HED, ЧЭД). Таким образом, при терапевтических дозах фармакокинетика d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина напоминала фармакокинетику формы с замедленным высвобождением.

[0208] ЧЭД определяют как эквивалентную дозу для человека массой 60 кг в соответствии с площадью поверхности тела модельного животного. Например, поправочный коэффициент для крыс равен 6.2. ДЭЧ для крысы при дозе 1.5 мг/кг d-амфетамина эквивалентна 1.5/6.2×60=14.52 основания d-амфетамина, что эквивалентно 14.52/.7284=19.9 мг d-амфетамин сульфата, после поправки на содержание в соли.

Таблица 23
Дозы, эквивалентные человеческим (ЧЭД), d-амфетамин сульфата
Доза d-амфетамина для крыс (мг/кг)	Доза, эквивалентная человеческой, (ЧЭД), d-амфетамин сульфата (мг)
1.5	19.9
3	39.9
6	79.7
12	159.4
30	399
60	797.2

[0209] При дозах, превышающих фармакологические (12 и 60 мг/кг), C_max снижалась на 73 и 84 процента, соответственно, по сравнению с d-амфетамин сульфатом. Для этих высоких доз значения AUC для d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина были существенно ниже, чем значения для d-амфетамин сульфата, причем AUC_inf при самой высокой дозе (60 мг/кг) была ниже на 76%. При 60 мг/кг уровни d-амфетамина из d-амфетамин сульфата быстро достигали пика; эксперимент невозможно было довести до конца вследствие крайней гиперактивности, которая требовала гуманной эвтаназии.

[0210] В целом, биодоступность d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина при пероральном введении при высоких дозах в некоторой степени снижается. Однако зависимость фармакокинетики от дозы для L-лизин-d-амфетамина была почти линейной при дозах от 1.5 до 60 мг/кг, причем всасываемая доля лежит в пределах от 52 до 81 процента (экстраполяция от дозы 1.5 мг/кг). Фармакокинетика d-амфетамин сульфата также была почти линейной при более низких дозах от 1.5 до 6 мг/кг, причем всасываемая доля лежала в диапазоне от 62 до 84 процентов. Однако, в отличие от L-лизин-d-амфетамина, параметры при высоких дозах d-амфетамин сульфата были непропорционально увеличены, при этом всосавшаяся доля, согласно расчетам, составляла 101 и 223 процентов (экстраполяция от дозы 1.5 мг/кг), соответственно, для превышающих фармакологические доз, равных 12 и 60 мг/кг.

[0211] Эти результаты позволяют предположить, что способность к выведению d-амфетамина, если его вводят в форме сульфатной соли, при высоких дозах насыщается, в то время как последовательный гидролиз L-лизин-d-амфетамина предотвращает насыщение механизма выведения d-амфетамина при высоких дозах. Различия в пропорциональности дозы биодоступности и (C_max и AUC) для d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина показаны на ФИГ.26 - ФИГ.28. Фармакокинетические свойства L-лизин-d-амфетамина по сравнению с d-амфетамином при более высоких дозах снижают способность увеличивать дозы. Это повышает безопасность L-лизин-d-амфетамина и снижает его способность вызывать зависимость, как способа доставки d-амфетамина для лечения СДГГ и при других состояниях, являющихся показаниями.

Пример 14. Биоактивность L-лизин-d-амфетамин димезилата по сравнению с d-амфетамином при интраназальном введении

[0212] Как показано на ФИГ.31 и ФИГ.32, биодоступность d-амфетамина после интраназального болюсного введения L-лизин-d-амфетамина составляла примерно 5 процентов биодоступности эквивалентной дозы d-амфетамин сульфата, значения AUC_inf составляли при этом 56 и 1032 соответственно. C_max d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина интраназальным путем также составляла около 5 процентов эквивалентного количества d-амфетамин сульфата; значения C_max составляли 78.6 нг/мл и 1962.9 нг/мл соответственно. Т_макс концентрации d-амфетамина было существенно увеличено для L-лизин-d-амфетамина (60 минут) по сравнению с T_max d-амфетамин сульфата (5 минут), отражая постепенный гидролиз L-лизин-d-амфетамина. Также регистрировали высокую концентрацию интактного L-лизин-d-амфетамина после интраназального введения. Эти результаты позволяют предположить, что интраназальное введение L-лизин-d-амфетамина обеспечивает лишь минимальный гидролиз L-лизин-d-амфетамина и, следовательно, минимальное высвобождение d-амфетамина.

Пример 15. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата по сравнению с d-амфетамином при внутривенном введении

[0213] Как показано на ФИГ.33 и ФИГ.34, биодоступность d-амфетамина после интраназального болюсного введения L-лизин-d-амфетамина составляла примерно половину биодоступности эквивалентной дозы d-амфетамин сульфата, значения AUC_inf составляли 237.8 и 420.2 соответственно. C_max d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина составляло только около одной четвертой C_max эквивалентного количества d-амфетамина со значениями 99.5 и 420.2 соответственно. T_max концентрации d-амфетамина было значительно отложено для L-лизин-d-амфетамина (30 минут) по сравнению с T_max d-амфетамин сульфата (5 минут), что отражает постепенный гидролиз L-лизин-d-амфетамина. В заключение, биодоступность d-амфетамина при внутривенном пути введения в форме L-лизин-d-амфетамина существенно ниже и медленнее. Кроме того, биодоступность меньше, чем биодоступность, которую получают при оральном введении эквивалентной дозы L-лизин-d-амфетамина.

Обзор результатов исследования биодоступности у крыс путем жидкостной хроматографии/масс-спектроскопии/масс-спектрометрии

[0214] В приведенных ниже таблицах собраны данные по биодоступности, полученные в экспериментах, обсуждавшихся в Примерах 13-15. В Таблице 24, Таблице 25 и Таблице 26 собраны параметры фармакокинетики d-амфетамина после орального, интраназального и внутривенного введения, соответственно, d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина.

Таблица 24
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после орального введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамина в увеличивающихся дозах
Лекраственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-8 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)	AUCinf альт. расч.*	F (%)	AUC/Дозу (нг·кг/мл/мг)	Cmax/Дозу (нг·кг/мл/мг)
K-Amp	1.5	59-6	3	308	331	376	61	220.7	39.7
Amp	1.5	142.2	0.5	446	461	483	84	307.3	94.8
K-Amp	3	126.9	1.5	721	784	963	72	261.3	42.3
Amp	3	217.2	1.5	885	921	1,059	84	307.0	72.4
K-Amp	6	310.8	3	1,680	1,797	2,009	82	299.5	51.8
Amp	6	815.3	0.25	1,319	1,362	1429	62	227.0	135.9
K-Amp	12	412.6	5	2,426	2,701	2,701	62	225.1	34.4
Amp	12	1,533.1	0.25	4,252	4,428	4,636	101	369.0	127.8
K-Amp	60	2,164.3	5	9995.1	11,478	11,478	52	191.3	36.1
Amp	60	13,735	1	14,281	48,707	48,707	223	811.8	228.9
* Можно выполнить альтернативный расчет AUCinf при помощи программы WinNonlin® software (Версия 4.1, Pharsight, Inc., Mountain View, шт. Калифорния, США).
**AUC (0-1.5)

Таблица 25
Параметры фармакокинетики d-амфетамина после внутривенного введения болюсов L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамина (1.5 мг/кг)
Путь	Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-24 (нг·ч/мл)	AUC0-24 альт.расч.*	AUCinf (нг·ч/мл)	AUCinf альт.расч.*
внутривенно	К-Amp	1.5	99.5	0.5	237.8	207	237.9	218
внутривенно	Amp	1.5	420.2	0.083	546.7	511	546.9	521

Таблица 26
Параметры кинетики d-амфетамина после интраназального введения L-лизин-d-амфетамина
Путь	Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-24 (нг·ч/мл)	AUC0-24 альт.расч.*	AUCinf (нг·ч/мл)	AUCinf альт.расч.*
внутривенно	K-Amp	3	78.6		1	56	91	NA
внутривенно	Amp	3	1962.9		0.083	1032	7291	1,267

[0215] В Таблице 27, Таблице 28 и Таблице 29 собраны параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина после орального, интраназального и внутривенного введения, соответственно, d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина.

Таблица 27
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина после перорального введения L-лизин-d-амфетамина в возрастающих дозах
Путь	Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-24 (нг·ч/мл)	AUC0-24 альт.расч.*	AUCinf (нг·ч/ мл)	AUCinf альт.расч.*
орально	K-Amp	1.5	36.5	0.25	59.4	60	60	2.6
орально	K-Amp	3	135.4	1.5	329.7	332.1	331	7.2
орально	K-Amp	6	676.8	0.25	1156.8	1170.8	1,176	12.8
орально	K-Amp	12	855.9	1	4238.6	4510.4	5,169	24.6
орально	K-Amp	60	1870.3	3	8234.3	8499.9	8,460	9.3

Таблица 28
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина после внутривенного введения болюсов L-лизин-d-амфетамина
Путь	Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-24 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)
внутривенно	K-Amp	1.5	4513.1	0.083	2,282	2,293

Таблица 29
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина после интраназального введения L-лизин-d-амфетамина
Путь	Лекарственное средство	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC0-24 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)
внутривенно	K-Amp	3	3345.1	0.25	2,580	9,139

[0216] В таблице 30 и Таблице 31 суммирована процентная биодоступность d-амфетамина после перорального, интраназального и внутривенного введения, соответственно, L-лизин-d-амфетамина по сравнению с d-амфетамин сульфатом.

Таблица 30
Процентная биодоступность (AUCinf) d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина различными путями по сравнению с биодоступностью после введения d-амфетамин сульфата.
Доза (мг/кг) (основание d-амфетамина)	1.5	3	6	12	60
ЧЭД	19.9	39.9	79.7	159.4	797.2
Орально	72	85	132	61	24
Внутривенно	43	NA	NA	NA	NA
Интраназально	NA	1	NA	NA	NA

Таблица 31
Процентная биодоступность (Cmax) d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина различными путями по сравнению с биодоступностью после введения d-амфетамин сульфата
Доза (мг/кг) (основание d-амфетамина)	Доза (мг/кг) основания d-амфетамина	1.5	3	6	12	60
ЧЭД	ЧЭД	19.9	39.9	79.7	159.4	797.2
Орально	Орально	42	58	38	27	16
Внутривенно	Внутривенно	24	NA	NA	NA	NA
Интраназально	Интраназально	NA	4	NA	NA	NA

[0217] В Таблицах 32-37 показана динамика концентраций d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина после перорального, интраназального и внутривенного введения d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина.

Таблица 32
Динамика концентраций d-амфетамина после внутривенного болюсного введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамин сульфата (1.5 мг/кг)
Время (часы)	Концентрация (нг/мл)
K-Amp	Amp сульфат
0	0	0
0.083	52.8	420.2
0.5	99.5	249.5
1.5	47.1	97.9
5	21.0	38.3
5	9.0	13.2
8	3.7	4.3
24	0.1	0.2

Таблица 33
Динамика концентраций d-амфетамина после внутривенного введения болюсов L-лизин-d-амфетамина (1.5 мг/кг)
Время (часы)	Концентрация K-Amp (нг/мл)
0	0
0.083	4513.1
0.5	1038.7
1.5	131.4
3	19.3
5	17.9
8	8.7
24	11.5

Таблица 34
Динамика концентраций d-амфетамина после орального введения L-лизин-d-амфетамина в различных дозах
Время (часы)	Концентрация (нг/мл)
	1.5 мг/кг	3 мг/кг	6 мг/кг	12 мг/кг	60 мг/кг
0	0	0	0	0	0
0.25	20.5	25.3	96	54.3	90.9
0.5	34	40.9	140.2	96	175.1
1	46.7	95.1	225.9	233.3	418.8
1.5	40.7	126.9	268.4	266	440.7
3	59.6	105	310.8	356.8	1145.5
5	38.6	107.6	219.5	412.6	2164.3
8	17.1	48	86	225.1	1227.5

Таблица 35
Динамика концентраций d-амфетамина после орального введения d-амфетамин сульфата в различных дозах
Время (часы)	Концентрация (нг/мл)
1.5 мг/кг	3 мг/кг	6 мг/кг	12 мг/кг	60 мг/кг
0	0	0	0	0	0
0.25	107.1	152.6	815.3	1533.1	6243.6
0.5	142.2	198.4	462.7	1216	7931.6
1	105.7	191.3	301.3	828.8	13735.2
1.5	129.5	217.2	314	904.8	11514.9
3	52.6	135.3	134.6	519.9	NA
5	29.5	73.5	77.4	404.3	NA
8	11.5	25.7	31.8	115.4	NA

Таблица 36
Динамика концентраций d-амфетамина после интраназального введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамин сульфата (3 мг/кг)
Время (часы)	Концентрация (нг/мл)
K-Amp	Amp сульфат
0	0	0
0.083	31.2	1962.9
0.25	45.3	1497.3
0.5	61.3	996.2
1	78.6	404.6
AUC	56	1032.3

Таблица 37
Динамика концентраций L-лизин-d-амфетамина после интраназального введения L-лизин-d-амфетамина (3 мг/кг)
Время (часы)	Концентрация (нг/мл) K-Amp
0	0
0.083	3345.1
0.25	3369.7
0.5	2985.8
1	1359.3

Пример 16. Биодоступность L-лизин-d-амфетамин димезилата или d-амфетамин сульфата у собак (анализ: жидкостная хроматография/масс-спектроскопия/масс-спектрометрия)

[0218] Пример плана экспримента:

[0219] Это было нерандомизованное перекрестное исследование двух способов лечения. Всех животных содержали с нормальной для них диетой и не кормили перед введением каждой дозы в течение ночи. Дозу L-лизин-d-амфетамина определяли исходя из массы тела, которую измеряли утром в каждый день введения. Фактическую введенную дозу определяли путем взвешивания шприца до и после введения дозы. У каждого животного брали серию проб крови путем прямой венопункции яремной вены с применением вакуумных пробирок vacutainer, содержащих гепарин натрия в качестве антикоагулянта. Полученные образцы плазмы хранили замороженными до отправки в Quest Pharmaceutical Services, Inc. (Newark, Дэлавер, США). Фармакокинетический анализ результатов исследования плазмы проводили по Calvert. Лечение животных проводили следующим образом:

Число/пол собак	Путь введения	Лечение	Конц. дозы (мг/мл)	Объем дозы (мл/кг)	Уровень дозы (мг/кг)
3/самцы	РО (орально)	1	0.2	10	1
3/самцы	IV (внутривенно)	2	1	2	1

[0220] Введение исследуемого вещества

[0221] Орально: Исследуемое вещество вводили каждому животному путем однократного орального гаважа. В день 1 животные получали дозу орально путем гаважа с применением пищеводной трубки, присоединенной к шприцу. В трубки для введения заливали примерно 20 мл водопроводной воды, чтобы обеспечить доставку раствора с необходимой дозой исследуемого вещества.

[0222] Внутривенно: В день 8 животные получали L-лизин-d-амфетамин в форме однократной 30-минутной внутривенной инфузии в головную вену.

[0223] Отбор проб

[0224] Лекарственные формы: После дозирования остатки лекарственной формы сохраняли и хранили замороженными.

[0225] Кровь: Последовательные пробы крови (2 мл) брали с применением пробирок для венопункции, содержащих натрий гепарин. После орального введения дозы пробы крови брали через 0, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48 и 72. После внутривенной инфузии пробы крови брали через 0, 0.167, 0.33, 0.49 (до прекращения инфузии), 0.583, 0.667, 0.75, 1, 2, 3, 4, 8, 12 и 23 часа после начала внутривенной инфузии. Взятые пробы крови немедленно охлаждали.

[0226] Плазма: Пробы плазмы получали путем центрифугирования проб крови. Пробы плазмы в дупликатах (примерно по 0.2 мл каждый) переносили в заранее помеченные пластиковые сосуды и хранили замороженными примерно при -70°С.

[0227] Анализ проб

[0228] Пробы крови исследовали на L-лизин-d-амфетамин и d-амфетамин утвержденным способом жидкостной хроматографии/масс-спектроскопии/масс-спектрометрии с нижним пределом количественного определения, равным 1 нг/мл для обоих анализов.

[0229] Для расчета средних концентраций в плазме и построения графиков концентрации в плазме от времени применяли Microsoft Excel (Версия 6, Microsoft Corp., Redmond, WA). Фармакокинетический анализ (не-компартментный) проводили с применением программы WinNonlin® (Версия 4.1, Pharsight, Inc. Mountain View, Калифорния, США). В качестве максимальной концентрации (C_max) и времени до достижения C_max (T_max) брали наблюдаемые значения. Площадь под кривой концентрации в плазме (AUC) определяли по правилам линейно-логарифмических трапеций. Кажущуюся константу конечной скорости (λz) определяли с применением метода наименьших квадратов для модели линейной регрессии, подходящее количество точек (не меньше трех) для расчета λz определяли визуально. AUC_inf рассчитывали как сумму AUCo-t и С_предск/λz, где С_предск представляла собой предсказанную концентрацию на момент времени последней расчетной концентрации. Выведение из плазмы (клиренс, CL/F) определяли как отношение Доза/AUC_0-inf. Среднее время удерживания (MRT) рассчитывали как отношение AUMC_0-inf/AUC_0-inf, где AUMC_0-inf - это площадь под кривой от момента попадания в организм (ноль) до бесконечности. Объем распределения в стационарном состоянии (V_ss) оценивали как CL*MRT. Время полужизни рассчитывали как ln2/λz. Биодоступность при оральном введении (F) рассчитывали как отношение AUC_0-inf после орального введения к AUC_0-inf после внутривенного введения. Описательная статистика (среднее и стандартное отклонение (SD)) параметров фармакокинетики рассчитывали в Microsoft Excel.

[0230] Целью этого исследования было описать фармакокинетику L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина самцам собак породы бигль. Как показано на ФИГ.35, в перекрестном плане эксперимента, L-лизин-d-амфетамин вводили 3 кобелям породы бигль орально или внутривенно. Пробы крови брали через 24 и 72 часа после введения доз внутривенно и орально соответственно.

[0231] Профили зависимости средней концентрации L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина в плазме от времени после внутривенного или орального введения L-лизин-d-амфетамина представлены на ФИГ.37 и ФИГ.38 соответственно. Сравнительные профили L-лизин-d-амфетамина и d-амфетамина после введения обоими путями изображены на ФИГ.35 и ФИГ.36. Индивидуальные графики изображены на ФИГ.39 и ФИГ.40. Параметры фармакокинетики приведены в Таблицах 38-46.

[0232] После 30-минутной внутривенной инфузии L-лизин-d-амфетамина концентрация в плазме достигала пика в конце инфузии. По окончании инфузии концентрация L-лизин-d-амфетамина очень быстро снижалась биоэкспоненциальным образом, и примерно через 8 часов после введения дозы опускалась ниже предела количественного измерения (1 нг/мл). Результаты некомпартментализированного фармакокинетического анализа показывают, что L-лизин-d-амфетамин представляет собой быстровыводящееся соединение со средним объемом распределения (V_ss), приближающимся к общему объему воды в организме (0.7 л/кг). Среднее значение клиренса составляло 2087 мл/ч·кг (34.8 мл/мин·кг) и было близким к печеночному кровотоку собаки (40 мл/мин·кг).

[0233] L-лизин-d-амфетамин быстро всасывался после перорального введения, T_max составляло 0.5 у всех трех собак. Средняя абсолютная биодоступность при оральном введении составляла 33%, что позволяет предположить, что у собак L-лизин-d-амфетамин всасывается очень хорошо. После внутривенного введения видимое конечное время полужизни составляло 0.39 часа, указывая на быстрое выведение.

[0234] Профили зависимости концентрации d-амфетамина в плазме от времени после внутривенного введения или орального введения L-лизин-d-амфетамина были сходны. См. Таблицу 39. При оральном введении дозы L-лизин-d-амфетамина, равной 1 мг/кг, средняя C_max d-амфетамина составляла 104.3 нг/мл. Время полужизни d-амфетамина составляло от 3.1 до 3.5 часов, что намного больше, чем у L-лизин-d-амфетамина.

[0235] В этом исследовании L-лизин-d-амфетамин вводили путем инфузии на протяжении 30 минут. Поскольку L-лизин-d-амфетамин быстро выводится из организма, вероятно, что биодоступность d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина будет ниже при введении той же дозы путем внутривенной болюсной инъекции. Даже при введении в форме инфузии биодоступность d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина не превосходит биодоступность близкой дозы, вводимой орально, а время достижения пиковой концентрации существенно увеличивается. Эти данные также подтверждают, что L-лизин-d-амфетамин обеспечивает снижение вероятности злоупотрбеления d-амфетамина при введении путем внутривенной инъекции.

Таблица 38
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина у самцов собак породы бигль после орального или внутривенного введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основание d-амфетамина)
Путь введения	Доза, мг/кг	Cmax нг/мл	Tmax a ч	AUCinf нг·ч/мл	tl/2 ч	MRT ч	CL/F мл/ч·кг	Vss, мл/кг	F %
Внутривенно	1	1650	0.49	964	0.88	0.33	2087	689	NA
	(0.00)	(178)	(0.49-0.49)	(97.1)	(0.2)	(0.03)	(199)	(105.9)
Орально	1	328.2	0.5	319	0.39	0.81	6351	NA	33
	(0.00)	(91.9)	(0.5-0.5)	(46.3)	(0.1)	(0.19)	(898.3)		(1.9)
а: медиана (диапазон)

Сокращения названий параметров фармакокинетики:

C_max, максимальная наблюдаемая концентрация в плазме;

T_max, время, при котором наблюдают С_max;

AUC_o-t, общая площадь под кривой концентрация в плазме - время от 0 до последней экспериментальной точки;

AUC_0-inf, общая площадь под кривой концентрация в плазме - время;

t_1/2, видимое конечное время полувыведения;

MRT, среднее время удерживания;

CL/F, клиренс при оральном введении;

V_ss, объем распределения в стационарном состоянии;

F, биоактивность.

Таблица 39
Параметры фармакокинетики d-амфетамина у самцов собак породы бигль после орального или внутривенного введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основания d-амфетамина)
Путь введения	Доза, мг/кг	Cmax, нг/мл	Tmax a, ч	AUCinf нг·ч/мл	tl/2, ч
Внутривенно	1	113.2	1.0	672.5	3.14
	(0.00)	(3.2)	(0.67-2.0)	(85.7)	(0.4)
Орально	1	104.3	2.0	728.0	3.48
	(0.00)	(21.8)	(2-2)	(204.9)	(0.4)

а.: медиана (диапазон)

Таблица 40
Параметры фармакокинетики d-амфетамина у самцов собак породы бигль после 30-минутного внутривенного введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основания d-амфетамина)
Собака	Cmax (нг/мл)	Tmax a (ч)	AUC0-4 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)	tl/2 (ч)	CL (мл/ч/кг)	Vss (мл/кг)	MRT (ч)
1	1470.3	0.49	898.2	900.2	0.72	2222	807.4	0.36
2	1826.4	0.49	1072.3	1076.1	NDb	1859	603.4	0.32
3	1654.2	0.49	914.1	916.9	1.05	2181	656.0	0.30
Среднее	1650	0.49	961.5	964.4	0.88	2087	689.0	0.33
SD	178	0.49-0.49	96.0	97.1	0.2	199	105.9	0.03
а: медиана (диапазон);b: не определили

CL, клиренс после внутривенного введения

Таблица 41
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина у самцов собак породы бигль после орального введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основание d-амфетамина)
Собака	Cmax (нг/мл)	Tmax a (ч)	AUC0-4 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)	tl/2 (ч)	CL (мл/ч/кг)	Vss (мл/кг)	MRT (ч)
1	350.2	0.5	275.3	277.1	0.24	7218	0.68	30.8
2	407.7	0.5	367.8	368.7	0.48	5424	0.74	34.3
3	227.4	0.5	310.8	312.0	0.45	6410	1.03	34.0
Среднее	328.2	0.5	318.0	319.3	0.39	6351	0.81	33.0
SD	91.9	0.0	46.7	46.3	0.1	898.3	0.19	1.9

: медиана (диапазон)

Таблица 42
Параметры фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина у самцов собак породы бигль после 30-минутного внутривенного введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основания d-амфетамина)
Собака	Cmax (нг/мл)	Tmax a (ч)	AUC0-4 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)	tl/2 (ч)
1	11.2	2.0	751.9	757.6	3.35
2	116.8	0.67	668.5	673.7	3.43
3	111.4	1.0	557.8	586.1	2.65
Среднее	113.2	1.00	659.4	672.5	3.14
SD	3.2	0.67-2.0	97	85.7	0.4

а: медиана (диапазон)

Таблица 43
Фармакокинетика d-амфетамина у самцов собак породы бигль после перорального введения L-лизин-d-амфетамина (1 мг/кг основания d-амфетамина)
Собака	Cmax (нг/мл)	Tmax a  (ч)	AUC0-4 (нг·ч/мл)	AUCinf (нг·ч/мл)	tl/2 (ч)
1	102.1	2.0	686.34	696.89	3.93
2	127.2	2.0	937.57	946.62	3.44
3	83.7	2.0	494.61	540.38	3.06
Среднее	104.3	2.0	706.2	728.0	3.48
SD	21.8	2.0-2.0	222.1	204.9	0.4

: медиана (диапазон)

Таблица 44
Фармакокинетика d-амфетамина у самцов собак породы бигль после перорального введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамин сульфата (1.8 мг/кг основания d-амфетамина)
Время (часы)	Средние концентрации в плазме	Стандартное отклонение (SD)	Коэффициент вариации (CV)
Amp	K-Amp	Amp	K-Amp	Amp	K-Amp
0	0	0	0	0	0	0
1	431.4	223.7	140.7	95.9	32.6	42.9
2	360	291.8	87.6	93.6	24.3	32.1
4	277.7	247.5	68.1	66	24.5	26.7
6	224.1	214.7	59.3	62.1	26.5	28.9
8	175.4	150	66.7	40.1	38.0	26.7
12	81.4	47.6	58.7	19	72.1	39.9
16	33	19.6	28.1	9	85.2	45.9
24	7.2	4.5	4.5	1.7	62.5	37.8

Таблица 45
Фармакокинетика d-амфетамина у самцов собак породы бигль после перорального введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамин сульфата (1.8 мг/кг основания d-амфетамина)
Время (часы)	Средние концентрации в плазме	Стандартное отклонение (SD)	Коэффициент вариации (CV)
Amp	K-Amp	Amp	K-Amp	Amp	K-Amp
0	0	0	0	0	0	0
1	217.8	308.8	141.7	40.7	63.1	13.2
2	273.5	308	113.7	29.6	41.6	9.6
4	266	260.9	132.7	37.3	49.9	14.3
6	204.7	212.1	84.5	38.7	41.3	18.2
8	160.1	164.3	72.7	43.5	45.4	26.5
12	79.4	68.7	41.3	31	52,0	45.1
16	25.5	22.3	13.4	4.7	52.5	21.1
24	5.6	5.4	4.1	1.9	73.2	35.2

Таблица 46
Параметры фармакокинетики d-амфетамина у самок и самцов собак породы бигль после орального введения L-лизин-d-амфетамина или d-амфетамин сульфата (1.8 мг/кг основания d-амфетамина)
Параметр	Самцы	Самки
	Соединение	Соединение
Amp	K-Amp	Amp	K-Amp
AUCinf	3088.9	2382.2	2664.5	2569.9
Процент	100	77	100	96
Cmax	431.4	291.8	308.8	273.5
Процент	100	67	100	89
Tmax (часы)	1	2	1	2
Процент	100	200	100	200

Пример 17. Отложенное кардиоваскулярное действие L-лизин-d-амфетамин димезилата по сравнению с d-амфетамином после внутривенной инфузии

[0236] d-амфетамин повышает систолическое и диастолическое давление крови (КД) даже в терапевтических дозах. Поскольку ожидается, что L-лизин-d-амфетамин высвобождает (хотя и медленно) d-амфетамин в результате системного метаболизма, было проведено предварительное исследование с применением эквимолярных доз d-амфетамина или L-лизин-d-амфетамина на 4 собаках (2 самца и 2 самки). Результаты указывают на то, что амидное пролекарство неактивно и медленное высвобождение некоторого количества d-амфетамина происходит, начиная с 20 минут после введения дозы. Однако, что касается d-амфетамина, эти эффекты, наоборот, менее устойчивы. Например, среднее давление крови показано на ФИГ.43. Наблюдали, что малые дозы d-амфетамина оказывают быстрое действие на давление крови, что согласуется с опубликованными ранее данными (Kohli, Goldberg, 1982). Самая низкая доза (0.202 мг/кг, эквимолярна 0.5 мг/кг L-лизин-d-амфетамина) вызывала резкое удвоение среднего КД, после которого следовало медленное восстановление на протяжении 30 минут.

[0237] L-лизин-d-амфетамин, напротив, вызывал очень незначительное изменение в среднем КД примерно до 30 минут после инъекции. В это время давление возрастало примерно на 20-50%. Непрерывное высвобождение d-амфетамина, возможно, отвечает за медленное и устойчивое увеличение кровяного давления на протяжении оставшегося времени эксперимента. После последующих инъекций видно, что d-амфетамин повторяет свое действие дозонезависимым образом. Таким образом, увеличение дозы в 10 раз после первой инъекции вызывало возрастание до того же максимального давления. Это может отражать состояние уровней катехоламинов в нервных окончаниях после последовательной стимуляции болюсными инъекциями d-амфетамина. Отметим, что повышение среднего давления крови после последовательных доз L-лизин-d-амфетамина (ФИГ.43) вызывает постепенное и менее интенсивное действие. Аналогичные результаты наблюдали для давления в левом желудочке (ФИГ.44). Эти результаты являются еще одним подтверждением значительного снижения биодоступности d-амфетамина при внутривенном введении в форме L-лизин-d-амфетамина. В результате исключается быстрое начало фармакологического действия d-амфетамина, которого стремятся достичь лица, вводящие себе амфетамин.

Таблица 47
Эффекты L-лизин-d-амфетамина на параметры сердечно-сосудистой системы у анестезированных собак (средние значения, n=2)
Лечение	Время	САД	% изменение	ДАД	% изменение	САД	% изменение	ДЛЖ	% изменение
0.9% физраствор	0	81	0	48	0	61	0	87	0
1 мл/кг	30	87	7	54	11	67	10	87	0
К-Amp	0	84	0	51	0	64	0	86	0
0.5 мг/кг	5	87	4	52	3	66	3	87	2
	15	93	11	51	1	67	5	95	11
	25	104	25	55	8	73	15	105	22
	30	107	28	58	14	77	21	108	26
K-Amp	0	105	0	55	0	74	0	108	0
1.0 мг/кг	5	121	15	63	15	85	15	120	11
	15	142	35	73	33	100	35	140	29
	25	163	55	97	75	124	68	162	50
	30	134	28	73	32	98	32	144	33
K-Amp	0	132	0	71	0	95	0	144	0
5.0 мг/кг	5	142	7	71	0	99	4	151	5
	15	176	33	98	39	130	37	184	28
	25	126	-5	69	-3	96	1	160	11
	30	132	0	70	-1	99	4	163	13

САД: систолическое артериальное давление (мм рт.ст.); САД: среднее артериальное давление (мм рт.ст.); ДАД: диастолическое артериальное давление (мм рт.ст.); ДЖЛ: давление в левом желудочке (мм рт.ст.); % изменение: процентное изменение от соответствоющего момента времени 0.

Таблица 48
Действие d-амфетамина на кардиоваскулярные параметры у анестезированной собаки (средние значения, n=2)
Лечение	Время	САД	% изменение	ДАД	% изменение	САД	% изменение	ДЛЖ	% изменение
0.9% физраствор	0	110	0	67	0	84	0	105	0
1 мл	30	108	-2	65	-3	82	-2	101	-3
d-амфетамин	0	111	0	67	0	84	0	104	0
0.202 мг/кг	5	218	97	145	117	176	109	214	107
	15	168	52	97	45	125	49	157	52
	25	148	34	87	30	110	31	142	37
	30	140	26	80	20	103	23	135	30
d-амфетамин	0	139	0	78	0	101	0	133	0
0.404 мг/кг	5	240	73	147	88	187	85	238	79
	15	193	39	112	44	145	43	191	43
	25	166	19	92	17	122	20	168	26
	30	160	16	87	11	117	16	163	22
d-амфетамин	0	158	0	78	0	115	0	162	0
2.02 мг/кг	5	228	44	128	48	169	47	227	40
	15	196	24	107	23	142	73	200	24
	25	189	20	102	17	135	17	192	19
	30	183	16	98	13	129	12	187	16

Пример 18. Фармакокинетический (двигательный) ответ на амфетамин по сравнению с L-лизин-d-амфетамин дигидрохлоридом при пероральном введении

[0238] Самцов крыс Sprague-Dawley обеспечивали водой без ограничения и лишали пищи в течение ночи, а затем вводили путем орального гаважа 6 мг/кг амфетамина или L-лизин-d-амфетамина, содержащего эквивалентное количество d-амфетамина. Регистрировали горизонтальную двигательную активность (ГДА) на протяжении светового цикла в камерах в специальных камерах с фотодатчиками (San Diego Instruments). Каждые 12 минут на протяжении эксперимента регистрировали общий счет. За крысами следили в трех независимых экспериментах, которые длились 5, 8 и 12 часов соответственно. График время - показатели ГДА показан на ФИГ.45 и ФИГ.46. В каждом эксперименте промежуток времени до достижения пика был увеличен, а фармакодинамическое действие наблюдали в течение более длительного периода для L-лизин-d-амфетамина, чем для d-амфетамина. Во всех трех экспериментах общие показатели активности ГДА у крыс, которым вводили Lys-Amp, было увеличено (11-41%) по сравнению с вызванными d-амфетамином.

Таблица 49
Двигательная активность крыс, которым орально вводили d-амфетамин в сравнении с L-лизин-d-амфетамином (5 ч)
Исследуемый материал	Общие показатели активности	Превышение общими показателями активности фона	Пик активности (Импульсов за 0.2 ч)	Время пика (Импульсов на 0.2 ч)	Время последнего импульса выше 200 за 0.2 ч
Среда	4689	4174	80	1.4	-
K-Amp	6417	5902	318	1.8	5 ч
Amp	515	0	291	0.6	2.6 ч

Таблица 50
Двигательная активность крыс, которым перорально вводили d-амфетамин в сравнении с введением L-лизин-d-амфетамина (12 ч)
Иссле-дуемый материал	Общие показатели активности	Превышение общими показателями активности фона	Пик активности (Импульсов за 0.2 ч)	Время пика (Импульсов на 0.2 ч)	Время последнего импульса выше 200 за 0.2 ч
Среда	936	0	81	7.2	-
K-Amp	8423	7487	256	1.8	8.6 ч
Amp	6622	5686	223	0.6	6.4 ч

Пример 19. Фармакодинамический ответ на d-амфетамин по сравнению с L-лизин-d-амфетамин дигидрохлоридом при интраназальном введении

[0239] Самцам крыс Sprague-Dawley интраназально вводили d-амфетамин или L-лизин-d-амфетамин (1.0 мг/кг). Во второй группе животных, получавших аналогичные дозы, к раствору лекарственного средства добавляли карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ) в концентрации 62.6 мг/мл (примерно в 2 раза выше, чем концентрация L-лизин-d-амфетамина, и в 5 раз выше, чем содержание d-амфетамина). Перед введением каждой дозы смесь КМЦ с лекарственным средством тщательно суспендировали. Двигательную активность отслеживали, следуя процедуре, описанной в Примере 18. На ФИГ.47 и ФИГ.48 показана зависимость активности от времени (1 час или 2 часа) для смеси амфетамин/КМЦ в сравнении с L-лизин-d-амфетамином и сопоставляется активностью амфетамина в сравнении с L-лизин-d-амфетамином/КМЦ. Как показано на ФИГ.47, добавление КМЦ к L-лизин-d-амфетамину снижает активность ответа крысам, подвергнутым интраназальному введению, до уровней, близких к контролям вода/КМЦ, в то время как заметное влияние добавления КМЦ на активность амфетамина отсутствовало. Увеличение активности относительно фоновой L-лизин-d-амфетамина с КМЦ составляло только 9% по сравнению с 34% для L-лизин-d-амфетамина без КМЦ при сопоставлении с активностью, которую наблюдали для животных, которым вводили d-амфетамин (Таблица 51). КМЦ не оказывала видимого действия на активность d-амфетамина при интраназальном введении.

Таблица 51
Двигательная активность при введении интраназально d-амфетамина по сравнению L-лизин-d-амфетамином с КМЦ и без нее
Лекарственное средство	n	Общее число импульсов активности (1 ч)	Общее число импульсов над фоном	Процент Amp
Amp	3	858	686	100
Аmр КМЦ	3	829	657	100
K-Amp	4	408	237	35
K-Amp КМЦ	4	232	60	9
Вода	1	172	0	0
Вода КМЦ	1	172	0	0

Пример 20. Фармакодинамический ответ на d-амфетамин по сравнению с L-лизин-d-амфетамин дигидрохлоридом при внутривенном введении

[0240] Самцам крыс Sprague-Dawley внутривенным путем вводили d-амфетамин или L-лизин-d-амфетамин (1.0 мг/кг). Активность, выраженная в форме общего числа импульсов активности на протяжении трех часов, показана на ФИГ.49. Активность, вызванная L-лизин-d-амфетамином, была существенно ниже, и момент достижения пика активности был отложен. Повышение активности над фоном L-лизин-d-амфетамина составляло 34% для L-лизин-d-амфетамина, при сравнении с активностью, которую наблюдали у животных, которым вводили d-амфетамин (Таблица 52).

Таблица 52
Общее количество счетов активности после внутривенного введения d-амфетамина по сравнению с L-лизин-d-амфетамином
Лекарственное средство	n	Общее число импульсов активности (1 ч)	Общее число импульсов над фоном	Процент Amp
Amp	3	1659	1355	100
K-Amp	4	767	463	34
Вода	1	304	0	0

Пример 21. Снижение токсичности L-лизин-d-амфетамин дигидрохлорида при пероральном введении

[0241] Трем самцам и трем самкам крыс Sprague Dawley на группу орально вводили однократную дозу L-лизин-d-амфетамина, равную 0.1, 1.0, 10, 60, 100 или 1000 мг/кг (Таблица 53). Каждое животное наблюдали, чтобы зафиксировать признаки токсичности или смерть на протяжении Дней 1-7 (День 1 - это день введения дозы). После смерти (запланированной или незапланированной) проводили аутопсии одной крысы каждого пола из каждой группы.

Таблица 53
Таблица дозирования для перорального введения в исследовании токсичности L-лизин-d-амфетамина
Группы	Число животных	Исследуемое вещество	Доза (мг/кг)	Концентрация (мг/мл)
Самцы	Самки
1	3	3	L-лизин-d-амфетамин	0.1	0.01
2	3	3	L-лизин-d-амфетамин	1.0	0.1
3	3	3	L-лизин-d-амфетамин	10	1.0
4	3	3	L-лизин-d-амфетамин	60	6.0
5	3	3	L-лизин-d-амфетамин	100	10
6	3	3	L-лизин-d-амфетамин	1000	100

[0242] Основные наблюдения этого исследования включают:

[0243] Ни у одного из животных Групп 1-3 не обнаружили никаких видимых признаков на протяжении всего исследования.

[0244] Все животные Групп 4-6 продемонстрировали повышенную двигательную активность на протяжении двух часов после введения, которая продолжалась до Дня 2.

[0245] Одна самка крысы, получившая дозу 1000 мг/кг, умерла в День 2.

Аутопсия выявила хромокариорею, хроморинорею, вздутие желудка (газ), увеличенные надпочечники, отек и расширение кишечника.

[0246] В День 3 у 4 крыс были поражения кожи разной степени тяжести.

[0247] Одного самца крысы, которому вводили дозу 1000 мг/кг, подвергли эвтаназии в День 3, чтобы вскрыть поражения кожи на вентральной стороне шеи.

[0248] Все оставшиеся животные на протяжении Дней 4-7 выглядели нормальными.

[0249] Животных осматривали, чтобы обнаружить признаки токсичности, через 1, 2 и 4 ч после введения дозы, и один раз в день в течение 7 дней после введения дозы. Также регистрировали наблюдения в клетке. Животных, которые были обнаружены мертвыми или умирающим, подвергали аутопсии и исключали из исследования.

[0250] Наблюдения в клетке и результаты аутопсии описаны выше. LD50 d-амфетамин сульфата при оральном введении составляет 96.8 мг/кг. В случае L-лизин-d-амфетамин димезилата, хотя данных и недостаточно для того, чтобы определить смертельную дозу, исследование показывает, что летальная доза L-лизин-d-амфетамина в случае орального введения, превышает 1000 мг/кг, поскольку в группе из 6 животных была зафиксирована только одна смерть. Хотя еще одно животное из этой группы подвергли эвтаназии в День 3, это сделали из гуманных соображений и предполагали, что эти животные полностью бы поправились. Наблюдения указывают на то, что вызванный лекарственным средством стресс в Группах 4-6 является характерным признаком токсичности амфетамина (NTP (нетоксичные продукты), 1990; Номер свидетельства NIOSH (Национальный институт по охране труда и промышленной гигиене): SI1750000; Goodman et. al., 1985). Ни одно из животных не демонстрировало анормальных признаков в Дни 4-7, что говорит о полном выздоровлении при каждом уровне лечения.

[0251] Считают, что причиной отсутствия данных, которые подтверждали бы установленную летальную дозу, является предполагаемый защитный эффект конъюгирования амфетамина с лизином. Было показано, что интактный L-лизин-d-амфетамин неактивен, но становится активным после перехода в результате метаболизирования в неконъюгированную форму (d-амфетамин). Таким образом, в высоких дозах насыщение процесса метаболизирования L-лизин-d-амфетамина в неконъюгированную форму может объяснять отсутствие наблюдаемой токсичности, чего ожидали при дозах, превышающих 100 мг/кг, что соответствует d-амфетамин сульфату (NTP, 1990). Скорость образования d-амфетамина и степень образования амфетамина могут вносить вклад в снижение токсичности. Либо при таких высоких концентрациях всасывание L-лизин-d-амфетамина при оральном введении также может достигать насыщения, что может говорить о том, что причиной низкой токсичности является ограниченная биодоступность L-лизин-d-амфетамина.

Пример 22. In vitro оценка фармакокинетической активности L-лизин-d-амфетамин дигидрохлорида

[0252] Ожидали, что ацетилирование амфетамина, как и описанные в настоящей заявке конъюгаты с аминокислотами, значительно снизит стимулирующую активность исходного лекарственного средства. Например, Marvola (1976) продемонстрировала, что N-ацетилирование амфетамина полностью уничтожало эффект повышения двигательной активности у мышей. Чтобы убедиться, что конъюгат не действует непосредственно как стимулятор, мы исследовали (NovaScreen, Hanover, MD (Мэриленд, США)) специфическое связывание Lys-Amp (10^-9 до 10^-5 М) с рекомбинантным допамином человека и транспортными сайтами связывания норэпинефрина с применением стандартных способов анализа по связыванию радиолиганда. Результаты (Таблица 54) указывают на то, что Lys-Amp не связывает эти сайты. В свете этих результатов кажется маловероятным, что конъюгат сохраняет активность стимулятора. (Marvola M. (1976) "Effect of acetylated derivatives of some sympathomimetic amines on the acute toxicity, locomotor activity and barbiturate anesthesia time in mice." (Действие ацетилированных производных некоторых аминов-симпатомиметиков на острую токсичность, двигательную активность и анестезию барбитуратами у мышей) Acta Pharmacol Toxicol (Copenh) 38(5):474-89).

Таблица 54
Результаты по радиолигандному связыванию L-лизин-d-амфетамина
Анализ	Радиолиганд	Эталонное соединение	Ki (М)для эталонного соединения	Активность*
Транспортер Норэпинефрина	[3H]-Nisoxetine (низоксетин)	Desipramine (дезипрамин)	4.1×10-9	Нет
Транспортер Допамина	[3H]-WIN35428	GBR-12909	7.7×10-9	Нет
*Не обнаружено активности, вызывающей ингибирование связывания радиолиганда в диапазоне от -20% до 20% (Novascreen).

Таблица 55
Процент ингибирования транспортера допамина и транспортера норэпинефрина L-лизин-d-амфетамином
L-лизин-d-амфетамин	% ингибирования транспортера допамина	% ингибирования транспортера норэпинефрина
10-9	-10.46	8.15
10-7	11.52	-11.75
10-5	-0.71	13.89

Пример 23. In vitro оценка высвобождения амфетамина из L-лизин-d-амфетамин димезилата

[0253] Чтобы предусмотреть попытки не имеющих на это права химиков выделить свободный амфетамин из конъюгатов амфетамина, провели опыты без специального оборудования (кухонные). Предпочтительными являются конъюгаты амфетаминов, устойчивые к таким попыткам. В первичных «кухонных» опытах оценивали устойчивость конъюгатов в воде, к действию кислот (уксус) и оснований (пекарский порошок и пищевая сода). В каждом случае образец нагревали до кипения в течение 20-60 минут. В результате тестирования L-лизин-d-амфетамина и GGG-Amp не происходило высвобождения обнаруживаемых количеств амфетамина.

Таблица 56
In vitro оценка
	Уксус	Водопроводная вода	Пекарский порошок	Пищевая сода
L-лизин-d-амфеамин	0%	0%	0%	0%
Cly3-Amp	0%	0%	0%	0%

[0254] Стабильность конъюгатов амфетаминов оценивали в концентрированных средах, включая концентрированный раствор HCl в 10 Н NaOH при повышенных температурах. Готовили исходные растворы Lys-Amp в H₂O и разбавляли в 10 раз до конечной концентрации 0.4 мг/мл и конечного объема 1.5 мл. Образцы нагревали на водяной бане до примерно 90°С в течение 1 часа, охлаждали до 20°С, нейтрализовали и анализировали путем ВЭЖХ на свободный d-амфетамин. Все результаты указывают на то, что в таких концентрированных средах высвобождается лишь незначительное количество d-амфетамина.

Таблица 57
Стабильность в концентрированных средах
раствор	% AUC
Lys-Amp	d-амфетамин
10 Н NaOH	99	<1
конц. HCl	96	4

[0255] Оценивали стабильность конъюгата амфетамина в кислой среде.

Таблица 58
Кислоты, применявшиеся для анализа стабильности
Кислота	Концентрации
Хлороводородная кислота	10%, 25%, 50%, 75% и насыщенная
Уксусная кислота	10%, 25% 50%, 75% и насыщенная
Серная кислота	10%, 25%, 50%, 75% и насыщенная
Фосфорная кислота	10%, 25%, 50%, 75% и насыщенная
Азотная кислота	10%, 25%, 50%, 75% и насыщенная
Лимонная кислота	10%, 25%, 50%, 75% и насыщенная

[0256] При комнатной температуре высвобождалось лишь ограниченное количество d-амфетамина. При 90°С выделялось также лишь незначительное количество d-амфетамина, но разложение L-лизин-d-амфетамина было более выраженным. Это указывает на то, что амидная связь стабильна и что конъюгат обычно разрушается до того, как произойдет гидролиз существенного количества. В условиях нагревания с обратным холодильником в концентрированной хлороводородной кислоте и 50% серной кислоте высвобождалось 85% и 59%, соответственно, содержания d-амфетамина, но образовывался раствор лекарственного средства в нежелательном кислотном растворе. Процесс выделения d-амфетамина их кислого раствора еще более снижает выход.

[0257] В аналогичном опыте нагревание с обратным холодильником в концентрированной HCl после 5 часов приводило к некоторому гидролизу (28%), дальнейший гидролиз имел место через 22 часа (76%). Нагревание с обратным холодильником в концентрированной H₂SO₄ в течение 2 часов приводило к полному разложению Lys-Amp и, возможно, высвобождению d-амфетамина. Как было описано выше, выделение d-амфетамина из кислого раствора еще более снизило бы выход.

[0258] Стабильность конъюгата амфетамина также оценивали в щелочных средах, включая различные концентрации гидроксида натрия, гидроксида калия, карбоната натрия и триэтиламина. Максимальное высвобождение d-амфетамина составляло 25.4% и было получено в 3М гидроксида натрия; все остальные щелочные среды обеспечивали высвобождение менее чем 3%.

Пример 24. Стабильность L-лизин-d-амфетамин димезилата в условиях обработки коммерчески доступными продуктами

[0259] Оценивали стабильность L-лизин-d-амфетамин димезилата в условиях обработки имеющимися на рынке кислотами, основаниями и коктейлями ферментов. В случае кислот и оснований (Таблица 59), смешивали 10 мг Lys-Amp с 2 мл каждого исходного раствора и перемешивали полученный раствор при 20°С. В случае обработки ферментами (Таблица 60), смешивали 10 мг Lys-Amp с 5 мл каждого коктейля ферментов и встряхивали раствор при 37°С. Каждую аликвоту (0, 1 и 24 ч) нейтрализовали и фильтровали, а затем очищали путем ВЭЖХ. Многие из имеющихся на рынке реагентов также содержали разнообразные растворители и/или поверхностно-активные вещества.

[0260] Если не указано другое, растворы брали прямо из контейнера и смешивали с чистым твердым Lys-Amp. Lewis Red Devil® Lye, Enforcer Drain Care® Septic Treatment и Rid-X® Septic Treatment готовили в форме насыщенных растворов в Н₂О. Ферменты приобретали в Sigma и непосредственно растворяли в воде (3 мг/мл пепсин, 10 мг/мл панкреатин, 3 мг/мл проназа, 3 мг/мл эстераза), а фермент-содержищие нутрицевтики, такие как Omnigest® и VitalZym®, сначала либо дробили, либо вскрывали (1 таблетка или капсула на 5 мл Н₂О).

[0261] Коммерчески доступные кислоты и основания не были эффективны в гидролизе Lys-Amp. Высвобождение продемонстрировала лишь обработка Miracle-Gro® (7% высвобождение) и Olympic® Deck Cleaner (4% высвобождение), но даже после 24 часов количество d-амфетамина было пренебрежимо мало. Среди продуктов-ферментов только смеси с чистой эстеразой (19% высвобождение) или проназой (24% высвобождение) успешно отщепляли лизин (через 24 часа).

Таблица 59
Стабильность L-лизин-d-амфетамин димезилата в условиях обработки имеющимися на рынке кислотами и основаниями
Раствор (активные компоненты)	d-амфетамин (1) (вес.% d-амфетамина)
1 ч	24 ч
Lysol® Toilet (HCl)	0	0
Crete-nu (75% H3PO4)	0	0
CLR® (сульфаминовая кислота, гидроксиуксусная кислота)	0	0
Roebic® Жидкость для прочистки стока (90% H2SO4)	0	0
Crown® Соляная кислота (31.45% HCl)	0	0
Liquid-Plumr® (NaOH, NaClO, H2O2)	0	0
Brasso® (NH4OH)	0	0
Johnson® Удалитель воска (К2СО3)	0	0
Miracle-Gro® (мочевина, K3PO4)	0	7
Lewis Red Devil® Lye (NaOH)	0	0
Drain Power (NaOH, NaClO)	0	0
Savogran TSP (Na2PO4))	0	0
Johnson® Удалитель воска (NaOH)	0	0
Olympic® Для очистки стола (NaOH, NaClO)	0	4
Windex® (NH4OH)	0	0
Greased Lightning® (основные компоненты)	0	0

Таблица 60
Стабильность L-лизин-d-амфетамин димезилата в условиях обработки имеющимися в продаже коктейлями ферментов
Раствор	d-амфетамин (1) (вес.% d-амфетамина)
1 ч	24 ч
Cell food®	0	0
Drano® Max with Bacteria	0	0
VitalZym©	0	0
Omnigests©	0	0
Enforcer® Septic	0	0
Rid-X® Septic	0	0
Эстераза	0	19
Панкреатин	0	0
Пепсин	0	0
Проназа	0	24

Пример 25. Биодоступность различных конъюгатов пептидов с амфетаминами (соли HCl), вводимых пероральным, интраназальным или внутривенным путями

[0262] Оральное введение: Самцов крыс Sprague-Dawley обеспечивали водой без ограничения и не давали им пищи в течение ночи, затем путем орального гаважа вводили амфетамин или конъюгаты амфетамина с аминокислотами, содержащие эквивалентные количества амфетамина.

[0263] Интраназальное введение: самцам крыс Sprague-Dawley интраназальным путем вводили амфетамин или лизин-амфетамин (1.8 мг/кг).

[0264] Соответствующее поведение in vivo различных соединений аминокислота-амфетамин показано на ФИГ.50 - ФИГ.58, данные собраны в Таблице 61. Интраназальная биодоступность амфетамина из Ser-Amp была несколько ниже биодоступность свободного амфетамина. Однако это соединение не является биоэквивалентом амфетамина при оральном пути введения. Фенилаланин был биоэквивалентен амфетамину при оральном пути введения, однако при парентеральном пути введения наблюдали отсутствие снижения или небольшое снижение биодоступности. Gly₃-Amp при пероральном введении обладал почти эквивалентной недоступностью (90%) при введении оральным путем. Одновременно наблюдали снижение C_max (74%). Кроме того, Gly₃-Amp продемонстрировал снижение биодоступности по сравнению с амфетамином при интраназальном и внутривенном введении.

Таблица 61
Процент биодоступности соединений аминокислот с амфетамином, вводимых пероральным, интраназальным и внутривенным путями
Препарат	Орально	Интраназально	Внутривенно
Процент AUC	Процент Cmax	Процент AUC	Процент Cmax	Процент AUC	Процент Cmax
Амфетамин	100	100	100	100	100	100
Е-Amp	73	95	NA	МА	NA	NA
ЕЕ-Amp	26	74	NA	NA	NA	NA
ЕЕЕ-Amp	69	53	10	10	NA	NA
L-Amp	65	81	NA	NA	NA	NA
S-Amp	79/55	62/75	76	65	NA	NA
G-Ainp	81	78	65	53	NA	NA
GG-Amp	79	88	88	85	NA	NA
GGG-Amp	111/68	74/73	32	38	45	46
F-Amp	95	91	97	95	87	39
EEF-Amp	42	73	39	29	NA	NA
FF-Amp	27	64	NA	NA	NA	NA
Гулонат-Amp	1	1	0.4	3.5	3	5
K-Amp	98	55	0.5	0.5	3	3
KG-Amp	69	71	13	12	NA	NA
sKK-Amp	16	7	2	2	NA	NA
LE-Amp	40	28	6	6	NA	NA
H-Amp	16	21	22	42	NA	МА
P-Amp	6	3	2	2	NA	NA
PP-Amp	61	80	47	43	NA	МА
Y-Amp	25	20	21	20	NA	NA
I-Amp	71	52	73	97	NA	NA

[0265] Некоторые конъюгаты с одной аминокислотой имели при пероральном введении биодоступность, сравнимую (80-100%) с d-амфетамином. Например, конъюгаты с Lys, Gly и Phe при оральном введении продемонстрировали биодоступность, близкую к биодоступности исходного препарата. Пролекарства, содержащие дипептид, обычно имеют более низкую биодоступность, чем соответствующие аналоги, содержащие аминокислоты, а соединения с трипептидами не продемонстрировали различимого тренда. Некоторые конъюгаты аминокислот с амфетамином обладали пониженной биоактивностью при парентеральном введении. Предпочтительные конъюгаты, такие как Lys-Amp, демонстрируют биодоступность при оральном введении, сравнимую с d-амфетамином, и одновременно их биодоступность при парентеральном введении ниже, чем у d-амфетамина.

[0266] Самцам крыс Sprague-Dawley обеспечивали неограниченный доступ к воде и не давали пищи в течение ночи, а затем путем орального гаважа вводили конъюгат амфетамина или d-амфетамин сульфат. Все дозы содержали эквивалентные количества основания d-амфетамина. Концентрации d-амфетамина в плазме измеряли путем твердофазного иммуноферментного анализа ELISA (Amphetamine Ultra, 109319, Neogen Corporation, Lexington, Кентукки, США)). Этот анализ специфичен к d-амфетамину и имеет лишь минимальную реактивность (0.6%) с основным образующимся метаболитом d-амфетамина (пара-гидрокси-d-амфетамин). В примерах, где это указано, концентрации d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме измеряли путем ЖХ/МС/МС.

Пример 27. Пониженная биодоступность коньюгатов d-амфетамина при интраназальном введении (AUC и C_max)

[0267] Самцам крыс Sprague-Dawley обеспечивали неограниченный доступ к воде и вводили дозы путем помещения 0.02 мл воды, содержащей конъюгат амфетамина или d-амфетамин сульфат в носовые пазухи. Все дозы содержали эквивалентные количества основания d-амфетамина. Концентрации d-амфетсмина в плазме измеряли путем твердофазного иммуноферментного анализа ELISA (Amphetamine Ultra, 109319, Neogen, Corporation, Lexington, Кунтукки, США). Этот способ анализа специфичен к d-амфетамину и имеет лишь минимальную реактивность (0.6%) с основным образующимся метаболитом d-амфетамина (пара-гидрокси-d-амфетамин). В примерах, где это указано, концентрации d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме измеряли путем ЖХ/МС/МС.

Пример 28. Сниженная биодоступность конъюгатов d-амфетамина при внутривенном введении (AUC и C_max)

[0268] Самцам крыс Sprague-Dawley обеспечивали неограниченный доступ к воде и вводили дозы путем внутривенных инъекций 0.1 мл воды, содержащей конъюгат амфетамина или d-амфетамин сульфат. Все дозы содержали эквивалентные количества основания d-амфетамина. Концентрации d-амфетамина в плазме измеряли путем твердофазного иммуноферментного анализа ELISA (Amphetamine Ultra, 109319, Neogen, Corporation, Lexington, Кунтукки, США). Этот анализ специфичен к d-амфетамину и имеет лишь минимальную реактивность (0.6%) с основным образующимся метаболитом d-амфетамина (пара-гидрокси-d-амфетамин). В примерах, где это указано, концентрации d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамина в плазме измеряли путем ЖХ/МС/МС.

Пример 29. Присоединение амфетамина к различным химическим фрагментам

[0269] Приведенные выше примеры демонстрируют применения амфетамина, конъюгированного с каким-либо химическим фрагментом, таким как аминокислота, что полезно для снижения вероятности превышения дозы, но сохраняет его терапевтическими значениями. Эффективность связывания амфетамина с химическим фрагментом продемонстрировали посредством присоединения к амфетамину лизина (К), однако приведенные выше примеры предназначены только для иллюстрации. Присоединение амфетамина к любому из разнообразных химических фрагментов (т.е. пептиды, гликопептиды, углеводороды, нуклеозиды или витамины) описано ниже посредством аналогичных процедур с применением типичных исходных материалов.

[0270] Примеры синтеза амфетаминов:

[0271] Синтез Gly₂-Amp

[0272] Gly₂-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-Gly-Gly-OSu.

[0273] Синтез Glu₂-Phe-Amp

[0274] Glu₂-Phe-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu, а конъюгат исходного препарата представлял собой Phe-Amp (см. Синтез Phe-Amp).

[0275] Синтез His-Amp

[0276] His-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-His(Trt)-OSu.

[0277] Синтез Lys-Gly-Amp

[0278] Lys-Gly-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-Lys(Boc)-OSu, а исходный конъюгат препарата представлял собой Gly-Amp (см. синтез Gly-Amp).

0279] Синтез Lys-Glu-Amp

[0280] Lys-Glu-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-Lys(Boc)-OSu, а исходный конъюгат препарата представлял собой Glu-Amp.

[0281] Синтез Glu-Amp

[0282] Glu-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой BoC-Glu(OtBu)-OSu.

[0283] Синтез (d)-Lys-(l)-Lys-Amp

[0284] (d)-Lys-(l)-Lys-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный материал представлял собой Boc-(d)-Lys(Boc)-(l)-Lys(Boc)-OSu.

[0285] Синтез конъюгата глюконовая кислота-Amp

[0286] Glu-Amp синтезировали аналогичным способом за тем исключением, что исходный углеводород представлял собой глюконовая кислота-OSu.

Пример 30. Невозможность обнаружения L-лизин-d-амфетамин диНСl в ткани мозга после перорального введения

[0287] Самцам крыс Sprague-Dawley обеспечивали неограниченный доступ к воде, не давали в течение ночи пищи и путем орального гаважа вводили L-лизин-d-амфетамин или d-амфетамин сульфат. Все дозы содержали эквивалентные количества основания d-амфетамина. Как показано на ФИГ.59, после введения d-амфетамин сульфата или L-лизин-d-сульфата в плазме крови и в ткани мозга обнаруживали близкие уровни d-амфетамина. d-Амфетамин из L-лизин-d-амфетамин продемонстрировал устойчивое присутствие в мозге по сравнению с уровнями d-амфетамина из d-амфетамин сульфата. Конъюгат L-лизин-d-амфетамина присутствовал в сыворотке крови в существенных количествах, но его не обнаружили в ткани мозга, что указывает на то, что конъюгат не пересекает гематоэнцефалический барьер, чтобы достигнуть сайта действия в центральной нервной системе.

Пример 31. Фармацевтическая композиция L-лизин-d-амфетамин димезилат

[0288] Форму дозирования, представляющую собой желатиновые капсулы, готовили с тремя различными дозировками. На твердых желатиновых капсулах печатали NRP 104 и дозировку. Внутри капсулы находится однородный по виду тонкоизмельченный порошок. Цвет порошка: от белого до грязно-белого.

Таблица 62
Состав капсул L-лизин-d-амфетамин димезилата
Компонент		Количество (мг)		Функция	Класс
30	50	70	Плацебо
L-лизин-d- Амфетамин димезилат	30.0	50.0	70.0	0.0	Активный
Микрокристаллическая целлюлоза	151	70.0	98.0	144.0	Наполнитель/ разбавитель, дезинтегрирующее вещество	NF (Avicel® РН-102)
Кроскармеллоза натрия	4.69	3.12	4.37	3.75	дезинтегрирующее вещество	NF
Магния стеарат	1.88	1.88	2.63	2.25	Смазывающее вещество	NF (5712)
Желатиновые капсулы Размера 3	Белая/Умерен но-оранжевая	Белая/Светло-синяя	Умеренно-оранжевая/Светло-синяя	Белая/Белая	Носитель	NF
Итого	187.5	125	175	150

[0289] Можно применять другие разбавители, дезинтегрирующие агенты, смазывающие агенты, красители и т.д. Конкретный компонент может также выполнять функцию, отличную от указанной выше.

[0290] Фармацевтическую композицию готовили путем размалывания предварительно измельченного L-лизин-d-амфетамин димезилата (размер 20 меш) с микрокристаллической целлюлозой. Смесь просеивали через сито с размером ячеек 30 меш и затем смешивали с кроскармеллозой натрия. Добавляли предварительно просеянный стеарат магния (размер 30 меш) и перемешивали композицию до получения однородного наполнителя для капсул.

Пример 32. Клиническая оценка фармакокинетики и биодоступность 70 мг капсул L-лизин-d-амфетамин димезилата, вводимых здоровым взрослым пациентам натощак в течение 7 дней

[0291] В этом открытом одноцентровом исследовании здоровым взрослым в возрасте от 18 до 55 лет 1 раз в день в течение 7 последовательных дней вводили 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата с 8 унциями воды. Пациенты не получали пищи в течение по меньшей мере 10 часов до и 4 после последнего введения дозы. Пробы крови из вены (7 мл) отбирали в вакуумные пробирки с ЭДТА перед введением препарата в дни 0, 1, 6, и 7 (в ходе мониторинга) и в 16 временных точках (0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 16, 24, 48 и 72 часов) после последнего ввода дозы в день 7. Сразу после взятия проб вакуумные пробирки центрифугировали на 3000 об/мин при 4°С в течение 10 минут; на протяжении 1 часа взятия их хранили при -20°С. Образцы плазмы анализировали на L-лизин-d-амфетамин и d-амфетамин одобренным способом ХЖ/МС/МС.

[0292] К дозе 5 концентрация d-амфетамина достигала стационарного состояния. После дозы 7, средняя AUC_0-24 составляла 1113 нг·ч/мл, средняя AUC_0-∞ составляла 1453 нг·ч/мл, средняя C_max составляла 90.1 нг·ч/мл, а среднее T_max составляло 3.68 часов. См. Таблицу 63 и ФИГ.60. Для сравнения, соли амфетамина с пролонгированным высвобождением после ночи без пищи демонстрируют Т_max, равное 5.8 часов и AUC_0-∞, равную 853 нг·ч/мл. J.F.Auiler et al., "Effect of food on early drug exposure from extended-release stimulants: results from the Concerta, Adderall XR Food Evaluation (CAFE) study." (Действие пищи на ранний выход препарата из стимуляторов с пролонгированным высвобождением: Результаты исследования действия пищи Concerta, Adderall XR Food Evaluation (CAFE)) Curr Med Res Opin 18: 311-316 at 313 (2002).

[0293] Интактный L-лизин-d-амфетамин быстро превращался в d-амфетамин. После 7, средняя AUC_0-24 составляла 60.66 нг·ч/мл, а средняя AUC_0-∞ составляла 61.06 нг·ч/мл. См. Таблицу 63 и ФИГ.60. Кроме того, для интактного L-лизин-d-амфетамина средняя С_max составляла 47.9 нг·ч/мл, а средняя T_max составляло 1.14 часов. L-лизин-d-амфетамин полностью исчезал в течение примерно 6 часов.

[0294] При системном воздействии d-амфетамина не было системных различий, хотя C_max после нормализации по массе тела у мужчин была на 12% выше.

[0295] Фармакокинетический профиль d-амфетамина, высвобождаемого из пролекарства L-лизин-d-амфетамина, при мультидозовом введении соответствует свойству пролонгированного высвобождения. Возникающие в этом исследовании нежелательные явления соответствуют другим стимуляторам и указывают на то, что L-лизин-d-амфетамин (70 мг) хорошо переносится.

Таблица 63
Стационарные параметры кинетики (n=11)
Параметр	Среднее	SD	CV %
d-амфетамин
Cmax (нг/мл)	90.1	29.6	32.84
Cmin (нг/мл)	18.2	14.2	78.12
Tmax (ч)	3.68	1.42	38.54
tl/2 (ч)	10.08	2.76	27.37
АUС0-24 (нг·ч/мл)	1113	396.8	35,65
AUC0-∞ (нг·ч/мл)	1453	645.7	44-45
AUQ0-t (нг·ч/мл)	1371	633.5	46.19
FI (%)	163.55	37.20	22.74
Интактный L-лизин-d-амфетамин
Cmax (нг/мл)	47.9	18.6	38.81
Cmin (нг/мл)	0.0	0.0	-
Tmax (ч)	1.14	0.32	28.45
t1/2 (ч)	0.43	0.09	21.90
АUС0-24(нг·ч/мл)	60.66	21.00	34.61
AUC0-∞ (нг·ч/мл)	61.06	20.63	33.79
AUQ0-t (нг·ч/мл)	59.44	21.47	36.12
FI (%)	1896.06	340.24	17.94

Пример 33. Клиническая оценка фармакокинетики и биодоступности L-лизин-d-амфетамина при пероральном введении по сравнению с продуктами с пролонгированным высвобождением амфетамина, Adderall XR® и Dexedrine Spansule®, применяемых для лечения СДВГ

Таблица 64
Группы лечения и дозировки для клинической оценки фармакокинетики L-лизин-d-амфетамина по сравнению с Adderall XR® или Dexedrine Spansule®
Препарат	Группа лечения	Кол-во субъектов	Доза	Доза (мг)	Доза (основание амфетамина)
L-лизин-d-амфетамин	А	10	1×25 мг капсула	25	7.37
L-лизин-d-амфетамин	В	10	3×25 мг капсул	75	22.1
Dexedrine Spansule®	С	10	3×10 мг капсул	30	22.1
Adderall XR®	D	10	1×30 мг капсула плюс 1×5 мг капсула	35	21.9

[0296] Провели клиническую оценку фармакокинетики и биодоступности L-лизин-d-амфетамина при оральном введении у людей. L-лизин-d-амфетамин вводили оральным путем в дозах, приближающихся к нижнему (25 мг) и верхнему (75 мг) пределам терапевтического диапазона по содержанию основания d-амфетамина в дозах. Дополнительно, более высокую дозу сравнивали с дозами Adderall XR® (Shire) или Dexedrine Spansule® (Glaxo SmithKline), содержащими количество основания амфетамина, эквивалентное его количеству в верхней дозе L-лизин-d-амфетамина. Группы лечения и дозы собраны в Таблице 64. Для анализа фармакокинетики все уровни ниже предела количественного определения (blq<0.5 нг/мл) считали нулем.

[0297] Концентрации d-амфетамина и интактного конъюгата L-лизин-d-амфетамина при низкой и высокой дозе для каждого субъекта, а также параметры фармакокинетики представлены в Таблицах 65-70. Концентрации d-амфетамина после введения Adderall XR® или Dexedrine Spansule® для каждого конкретного субъекта представлены в Таблице 69 и Таблице 70 соответственно. Кривые концентрация-время для интактного конъюгата L-лизин-d-амфетамина представлены на ФИГ. 61 и ФИГ. 62. При сравнении результатов для низкой и высокой доз наблюдали пролонгированное высвобождение d-амфетамина из L-лизин-d-амфетамина для обеих доз, а параметры фармакокинетики (C_max и AUC) были пропорциональны дозам (ФИГ.61 и ФИГ.62), До истечения первого часа после введения не наблюдали значительных уровней d-амфетамина. При достижении пиковых уровней через примерно один час обнаруживали только небольшие количества (1.6 и 2.0 процента общего количества всосавшегося препарата для доз 25 и 75 мг соответственно; AUC_inf - молярный базис) интактного конъюгата L-лизин-d-амфетамина (Таблица 66 и Таблица 68). Небольшие количества всосавшегося конъюгата быстро и полностью исчезали и даже при самой высокой дозе к пяти часам не оставалось выявляемых концентраций.

[0298] В перекрестном исследовании (те же субъекты получали дозы Adderall XR® после 7-дневного периода выведения), более высокую дозу L-лизин-d-амфетамина сравнивали с эквивалентной дозой Adderall XR®. Adderall XR® представляет собой препарат с пролонгированным высвобождением для введения один раз в день для лечения СДВГ, который содержит смесь d-амфетамина и солей d-амфетамина (равные количества d-амфетамин сульфата, d-/l-амфетамин сульфата, d-амфетамин сахарата и d-/l-амфетамин аспартата). В это исследование также включили эквивалентную дозу Dexedrine Spansule® с пролонгированным высвобождения (содержит форму d-амфетамин сульфата с пролонгированным высвобождением). В исследованиях фармакокинетики на крысах наблюдали, что оральное введение L-лизин-d-амфетамина давало кривые концентрация d-амфетамина-время, сходные с кривыми для Adderall XR® и Dexedrine Spansule® (ФИГ.63 и ФИГ.64). Биодоступность (AUC_inf) d-амфетамина после введения L-лизин-d-амфетамина была примерно эквивалентна для обоих продуктов с пролонгированным высвобождением амфетамина (Таблица 71). На протяжении двенадцати часов, что является обычным временем, необходимым для одноразового лечения СДВГ, биодоступность для L-лизин-d-амфетамина была примерно эквивалентна биодоступности Adderall XR® (уровни d-амфетамина плюс l-амфетамина) и более чем на двадцать процентов выше, чем биодоступность Dexedrine Spansule®. На основе результатов этого клинического исследования, L-лизин-d-амфетамин может быть эффективным лечением СДВГ, применяемым 1 раз в день. Более того, L-лизин-d-амфетамин имел сходную фармакокинетику в моделях на людях и на животных, а именно: отложенное высвобождение d-амфетамина, приводящее к кинетике пролонгированного высвобождения. Исходя из этих наблюдений, L-лизин-d-амфетамин также должен характеризоваться устойчивостью к неправильному употреблению человеком.

Таблица 66
Концентрации интактного конъюгата L-лизин-d-амфетамина и параметры фармакокинетики после орального введения 25 мг дозы L-лизин-d-амфетамина
Время, часы	Субъект 102	Субъект 103	Субъект 105	Субъект 107	Субъект 110	Субъект 112	Субъект 113	Субъект 116	Субъект 117	Субъект 120	Среднее	SD	CV %
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5	4.1	5.5	10.0	0.0	3.6	0.0	9.2	9.6	8.9	0.0	5.1	4.2	82.0
1	9.2	11.2	15.2	12.5	9.1	2.7	20.1	10.5	10.8	10.9	11.2	4.5	39.7
1.5	4.0	4.4	6.1	7.5	3.6	6.2	6.6	2.8	4.2	8.4	5.4	1.8	34.1
2	2.1	1.4	2.5	2.9	1.9	4.0	2.3	0	1.7	3.1	2.2	1.1	48.8
3	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
4	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
5	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
6	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
7	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
8	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
12	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
16	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
24	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
48	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
72	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

Таблица 66 (продолжение)
Параметр	Субъект 102	Субъект 103	Субъект 105	Субъект 107	Субъект 110	Субъект 112	Субъект 113	Субъект 116	Субъект 117	Субъект 120	Среднее	SD	CV %
AUClast (нг·ч/мл)	9.18	10.95	16.31	10.68	8.583	5.439	18.51	10.77	12.35	10.41	11.32	3.74	33.1
AUCinf (нг·ч/мл)	10.62	11.64	17.66	12.65	9.759	-	19.56	-	13.3	12.83	13.50	3.40	25.2
Cmax (нг/мл)	9.18	11.2	15.2	12.5	9.05	6.18	20.1	10.5	10.8	10.9	11.56	3.80	32.9
Tmin (ч)	1	1	1	1	1	1.5	1	1	1	1	1.05	0.16	15.1
Т1/2 (ч)	0.27	0.34	0.38	0.47	0.44	-	0.32	-	0.38	0.55	0.419	0.077	18.5

Таблица 68
Концентрации интактного конъюгата L-лизин-d-амфетамина и параметры фармакокинетики после орального введения 75 мг дозы L-лизин-d-амфетамина
Время, ч	Субъект 101	Субъект 104	Субъект 106	Субъект 108	Субъект 109	Субъект 110	Субъект 114	Субъект 115	Субъект 118	Субъект 119	Среднее	SD	CV %
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5	10.4	22.6	6.92	10.3	0	9.21	7.88	14.5	87.8	35.5	20.5	25.6	124.7
1	18	40.5	29	41.5	21.2	30.8	23.4	127	88.9	80.1	53.0	34.6	65.2
1.5	28.4	15.7	16.1	20.3	26.5	19	12.7	38.7	28.6	38	24.4	9.2	37.5
2	3.87	5.53	4.91	9	18.1	5.62	6.29	12.1	9.75	11.3	9.1	4.0	44.0
3	3.15	1.29	1.76	1.82	10.6	0	2.31	2.57	1.73	1.73	2.6	2.9	111.6
4	3	0	1.09	0	4.65	0	1.53	1.01	0	0	0.8	1.5	176.9
5	3	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
6	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
7	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
8	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
10	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
12	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
16	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
24	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
48	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
72	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

Таблица 68 (продолжение)
Параметр	Субъект 102	Субъект 103	Субъект 105	Субъект 107	Субъект 110	Субъект 112	Субъект 113	Субъект 116	Субъект 117	Субъект 120	Среднее	SD	cv %
AUClast (нг·ч/мл)	51.2	44.2	32.0	43.7	50.4	30.9	29.8	102.1	110.8	86.1	58.1	30.2	52.0
AUCinf (нг·ч/мл)	52.5	45.0	33.0	44.9	52.3	342	31.4	102.9	111.7	87.0	59.5	29.9	50.2
Cmax (нг/мл)	48.0	40.5	29.0	41.5	26.5	30.8	23.4	127.0	88.9	80.1	53.6	34.1	63.6
Tmin (ч)	1	1	1	1	1.5	1	1	1	1	1	1.05	0.16	15.1
Т1/2 (ч)	0.43	0.4	0.61	0.43	1.02	0.41	0.75	0.56	0.38	0.35	0.534	0.211	39.6

Таблица 69
Концентрации d-амфетамина и параметры фармакокинетики у отдельных пациентов после орального введения 35 мг дозы Adderall XR® (эквивалент 75 мг дозы L-лизин-d-амфетамина по содержанию амфетамина) людям
Время, ч	Субъект 101	Субъект 104	Субъект 106	Субъект 108	Субъект 109	Субъект 110	Субъект 114	Субъект 115	Субъект 118	Субъект 119	Среднее	SD	CV %
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5	7.9	2.3	2.8	0.6	2.2	5.7	0	16	2.3	5.3	4.5	4.7	104.3
1	37.6	28.9	23.3	13.7	29.8	38.2	17.9	46.2	28.8	48.8	31.3	11.5	36.6
1.5	49.9	42.3	31.1	23.7	39.1	34.4	30.8	65.4	34.1	53	40.4	12.5	31.0
2	65.9	45.8	29.2	37.4	46.2	65.4	10	64.4	37	67.8	49.9	14.6	29.2
3	95.3	51.7	36.7	23.6	64.7	62.9	44.7	56.5	31.1	64.8	53.2	20.7	38.9
4	83.7	73.3	56.7	40	67	76.6	56.3	53.1	33.5	73.3	61.4	16.3	26.6
5	77.4	75.2	71.6	62.1	75.9	76.4	51.5	61.4	56.8	82.4	69.1	10.3	14.9
6	71.5	72.1	64	59.8	66.9	63.5	56.8	59.8	58.7	85.7	65.9	8.7	13.2
7	72.3	63.6	71	57.9	70.6	69.7	51.9	48.1	53.7	79.7	63.9	10.5	16.4
8	60.4	57.1	53.8	53	72	66.9	56.2	56.4	51.7	66.7	59.4	6.9	11.6
10	50.4	45.5	53	50.7	67.6	57.4	49.1	66.6	48	71.3	56.0	9.3	16.6
12	42.5	41.3	45.4	32.9	53.1	16	37.3	74.7	42.2	60.2	47.6	12.2	25.7
16	31.1	29.6	35.7	39	45.2	33.9	34.3	64.9	29	40.5	38.3	10.6	27.7
24	14.9	15.1	22.1	19.5	21.7	21.2	20.7	35.7	17.9	20.5	20.9	5.8	27.7
48	2.5	4.2	3.8	5.9	14	3.8	7.3	5.1	3.9	3	4.5	1.4	32.1
72	0	0.3	1	1	0.3	1.1	7.7	0.3	0	0	0.7	0.8	124.7

Таблица 70
Концетрации d-амфетамина и параметры фармакокинетики у отдельных пациентов после орального введения 30 мг дозы Dexedrine Spansule® (эквивалент 75 мг дозы L-лизин-d-амфетамина по содержанию основания амфетамина) людям
Время, ч	Субъект 101	Субъект 104	Субъект 106	Субъект 108	Субъект 109	Субъект 111	Субъект 114	Субъект 115	Субъект 118	Субъект 119	Среднее	SD	CV %
0	0	0	0	0	0	0	0	0	3	0	0	0	0
0.5	1.2	2.68	1.37	1.4	1.16	2.36	6.75	2.63	4.95	3.43	2.8	1.8	65.5
1	14.8	26.5	16.7	21.4	25.2	12.7	33.1	22.3	26	21.5	22.0	6.1	27.8
1.5	24.2	36.9	23.2	28.5	37.2	21.3	42.4	29.2	33.7	39.2	31.6	7.3	23.2
2	28.6	43.4	27.3	34.6	38.5	27.6	46.2	31.3	38.5	42	35.8	6.9	19.4
3	27.4	37.3	30.6	40.1	41.7	30.9	52	36.5	42.9	60.1	40.0	10.0	252
4	27.1	44.1	33.5	48.7	45.2	34.7	49.1	40.7	42.4	53.2	41.9	8.1	19.2
5	35.1	53	40.2	43.4	46.5	42.4	58.1	47	52.1	68.7	48.7	9.7	20.0
6	33.8	58.5	40.2	46.5	43.5	37.5	56.2	40	51	63	47.0	9.8	20.8
7	37.2	50.7	31.2	41.4	44.9	42	57.8	43.6	51.6	65.7	46.6	10.1	21.7
8	35.9	54.3	34.9	45	45	36	58.7	41.8	53.9	59.2	46.5	9.5	20.4
10	33.1	49.1	34.3	35.5	45	37	51.4	38.9	46.3	60.1	43.1	8.8	20.4
12	34	51	28.6	34.1	40.8	32.6	51.6	37.7	38.1	50.9	39.9	8.4	21.1
16	30.2	40.8	25.2	28	33	25.8	41	26.8	29.6	44.9	32.5	7.1	22.0
24	20.5	27.8	18.2	19.5	17.1	17.8	22.5	19.1	15.5	27.3	20.5	4.2	20.3
48	3.83	6.89	3.7	5.11	2.56	4.31	6.51	4.43	2.77	5.47	4.6	1.4	31.8
72	0.715	1.63	1	1.7	0	0.622	1.29	1.22	0	1.31	0.9	0.6	64.0

Таблица 70 (продолжение)
Параметр	Субъект 101	Субъект 104	Субъект 106	Субъект 108	Субъект 109	Субъект 111	Субъект 114	Субъект 115	Субъект 118	Субъект 119	Среднее	SD	CV %
AUC0-12ч (нг·ч/мл)	356.2	539.3	366.4	444.3	480.8	387.0	591.4	436.5	512.8	634.2	474.9	94.7	19.9
AUClast (нг·ч/мл)	1033	1517	966	1135	1065	1003	1473	1100	1048	1589	1193	236	19.8
AUCinf (нг·ч/мл)	1043	1544	983.5	1168	1097	1013	1495	1121	1085	1610	1216	238	19.5
Cmax.(нг/мл)	37.2	58.5	40.2	48.7	46.5	42.4	58.7	47	53.9	68.7	50.18	9.74	19.4
Tmin (ч)	7	6	5	4	5	5	8	5	8	5	5.80	1.40	24.1
Т1/2 (ч)	9.92	11.74	12.07	13.8	8.7	10.76	11.47	12.23	9.36	10.92	11.10	1.50	13.6

Таблица 71
Параметры фармакокинетики после орального введения L-лизин-d-амфетамина, Adderall XR® или Dexedrine Spansule®
Параметр	Лекарственное средство
L-лизин-d-амфетамин 25 мг	Процент1	L-лизин-d-амфетамин 75 мг	Процент1	Adderall®	Процент1	Dexedrine Spansule®	Процент1
AUC0-12ч (нг·ч/мл)	205.4	33.6	611.5	100	637.5	104	474.9	78
AUClast (нг·ч/мл)	396.7	31.5	1237	100	1401.1	113	1193	96
AUCinf (нг·ч/мл)	415±80.3	32.9	1260±192	100	1429±223	113	1217±237	97
Cmax (нг/мл)	25.0±5.57	33.8	74.0±12.9	100	73.3±11.9	99	50.2±9.74	68
Tmin (часы)	3.10±0.88	79.5	3.90±0.99	100	5.70±2.41	146	5.8±1.40	149
Т1/2 (часы)	9.66±1.45	94	10.3±1.66	100	10.2±2.62	99	11.1±1.48	108
Процент относительно 75 мг дозы L-лизин-d-амфетамина

Пример 34. Клиническое исследование фармакокинетики биодоступности L-лизин-d-амфетамин димезилата при пероральном введении

[0299] У педиатрических пациентов (6-12 лет) с СДВГ, T_max d-амфетамина составило примерно 3.5 часа после однократного орального введения L-лизин-d-амфетамин димезилата в дозе 30 мг, 50 мг или 70 мг после того, как пациенты на протяжении 8 часов в течение ночи не получали пищи. См. ФИГ.65. T_max L-лизин-d-амфетамин димезилата составило примерно 1 час. При оральном введении детям L-лизин-d-амфетамин димезилита выявили линейную кинетику в диапазоне доз от 30 мг до 70 мг.

Таблица 72
Параметры фармакокинетики d-амфетамина и L-лизин-d-амфетамин димезилата
	d-амфетамин
Доза	Cmax (нг/мл)	Tmax (ч)	AUC (нг·ч/мл)	tl/2 (ч)
30 мг	53.2±9.62	3.41±1.09	845±117	8.90±1.33
50 мг	93.3±18.2	3.58±1.18	1510±242	8.61±1.04
70 мг	134±26.1	3.46±1.34	2157±383	8.64±1.32
	Интактный L-лизин-d-амфетамин димезилат
30 мг	21.9	0.97	27.9
50 мг	46.0	0.98	57.9
70 мг	89.5	1.07	108.9

[0300] После введения по одному разу в течение 7 последовательных дней детям с СДВГ неожиданное накопление d-амфетамина в стационарном состоянии и накопление L-лизин-d-амфетамина димезилата отсутствовали.

[0301] Пища не влияет на степень всасывания d-амфетамина у здоровых взрослых после однократного орального введения 70 мг L-лизин-d-амфетамина димезилата, но откладывает Т_max примерно на 1 час (с 3.78 часов натощак до 4.72 часов после приема пищи с высоким содержанием жира). После 8-часового поста степень всасывания d-амфетамина одинакова для орального введения L-лизин-d-амфетамина димезилата в растворе и в форме целых капсул.

[0302] Заметной разницы между мальчиками и девочками по воздействию, определяемому как нормализованные по дозе C_max и AUC, не было, хотя диапазон значений у детей был выше, чем у взрослых. Это является следствием значительной корреляции между нормализованными по дозе C_max и AUC и массой тела, и, следовательно, эти различия объясняются тем, что дети получают более высокие дозы в мг/кг. Не было ни заметной разницы по t_1/2 между мальчиками и девочками, ни очевидной связи между t_1/2 и полом или массой тела.

[0303] Примеры результатов клинической оценки параметров фармакокинетики представлены на ФИГ.66 (AUC), ФИГ.67 (C_max) и ФИГ.68 (T_max).

Пример 35. Эффективность L-лизин-d-амфетамина димезилата в педиатрических клинических испытаниях

[0304] Эффективность L-лизин-d-амфетамина димезилата исследовали в двойном слепом рандомизированном исследовании в параллельных группах, проведенном среди детей в возрасте 6-12 (N=290), которые соответствовали критериям американской классификации болезней DSM-IV для СДВГ (комбинированного или гиперактивно-импульсивного типа). Пациентов рандомизировали в группы лечения с фиксированными дозами (30, 50 или 70 мг) L-лизин-d-амфетамин димезилата или плацебо, вводимыми один раз в день по утрам с течение четырех недель. Для пациентов, которые попали в группы, получающие 50 и 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата, дозировку увеличивали путем принудительного титрования. Значительное улучшение признака и симптомов СДВГ, согласно оценкам исследователей (Шкала оценок СДВГ; (ADHD-RS)) и родителей (Шкала оценок для родителей Коннора (Connor′s Parent Rating Scale; CPRS)) продемонстрировали для всех доз L-лизин-d-амфетамин димезилата в сравнении с плацебо, для всех четырех недель, включая первую неделю введения, когда все пациенты из группы L-лизин-d-амфетамин димезилата получали дозу 30 мг/день. Дополнительно дозозависимое улучшение продемонстрировали в группах, получавших 50 и 70 мг соответственно. Пациенты, получавшие лечение L-лизин-d-амфетамин димезилатом, продемонстрировали значительные улучшения, которые оценивали по баллам шкалы CPRS, утром (~10:00), днем (~14:00) и вечером (~18:00) по сравнению с пациентами, получавшими плацебо, причем эффективность наблюдали на протяжении всего дня. Результаты основного анализа эффективности, изменение общей оценки по шкале ADHD-RS произошло в популяции ITT (в зависимости от назначенного лечения), показаны на ФИГ.69.

[0305] Эффективность также определяли по шкале оценки синдрома дефицита внимания с гиперактивностью (SKAMP). В двойное слепое рандомизированное плацебо контролируемое исследование включили 52 ребенка в возрасте от 6 до 12 лет, отвечающих критериям DSM-IV для СДВГ (комбинированного типа или гиперактивно-импульсивного типа).

Пациентов рандомизировали для получения фиксированных и оптимальных доз L-лизин-d-амфетамина (30, 50, 70 мг), Adderall XR® (10, 20 или 30 мг) или плацебо один раз в день. Каждое назначенное лечение мониторировали в течение 1 недели. Основным результатом этого исследования по эффективности была оценка по шкале SKAMP-Deportment (Шкала оценки Swanson, Kotkin, Agler, M. Flynn и Pelham). И L-лизин-d-амфетамин и Adderall XR® были высоко эффективны по сравнению с плацебо. Значительное действие L-лизин-d-амфетамина возникало в течение 2 часов поле введения утренней дозы и продолжалось вплоть до последней оценки, через 12 часов после введения утренней дозы, по сравнению с плацебо, обеспечивая эффект на протяжении 12-часов. См. ФИГ.70.

Пример 36. Способность L-лизин-d-амфетамина вызывать зависимость при внутривенном введении

[0306] Для оценки способности вызывать зависимость в двойном слепом перекрестном исследовании лицам с зависимостью от стимуляторов вводили 50 мг L-лизин-d-амфетамин, 20 мг d-амфетамина и плацебо вводили внутривенно на протяжении 2 минут с интервалами в 48 часов. Лекарственные средства давали согласно сбалансированному латинскому квадрату 3×3. В каждый день введения дозы оценивали основные показатели жизнедеятельности и поведенческие эффекты при помощи опросников. Оценки проводили перед введением и через 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 16 и 24 часа после введения. В указанные моменты времени, а также через 5 минут брали пробы крови (5 мл) для определения уровней d-амфетамина.

[0307] В случае d-амфетамина средний пик концентрации в плазме, равный 11.1 нг/мл d-амфетамина, появлялся на 5 минуте, а затем уровень быстро снижался. Введение d-амфетамина приводило к ожидаемым d-амфетамин-подобным эффектам со средними пиками реакций, возникающими через 15 минут. Средняя максимальная реакция на d-амфетамин по основному параметру визуально-аналоговой шкалы (VAS, ВАШ) для субъектов была значительно выше, чем для плацебо (р=0.01).

[0308] Для L-лизин-d-амфетамина, средний пиковый уровень концентрации в плазме, равный 33.8 нг/мл d-амфетамина, возникал через 3 часа. Этот уровень сохранялся на протяжении 4 часов наблюдений.

L-лизин-d-амфетамин порождал d-амфетамин-подобные субъективные и поведенческие эффекты, а также значения показателей жизнедеятельности. Пик реакции приходился на 1-3 часа. По основному параметру субъективной ВАШ реакция не превосходила реакцию на плацебо (р=0.29). После введения L-лизин-d-амфетамина наблюдали значительные изменения давления крови.

[0309] В конце исследования субъектов спрашивали, какое лечение они хотели бы получить еще раз.

Шесть субъектов выбрали d-амфетамин в дозе 20 мг, два субъекта не выбрали ни одного лечения, и один субъект выбрал L-лизин-d-амфетамин в дозе 50 мг. В целом, L-лизин-d-амфетамин в дозе 50 мг не давал эйфории или амфетамин-подобных эффектов, хотя и наблюдали поздние повышения давления крови. Эти данные указывают на то, что L-лизин-d-амфетамин сам по себе не активен. Через 1-2 часа L-лизин-d-амфетамин превращается в d-амфетамин. При внутривенном приеме L-лизин-d-амфетамин характеризуется значительно более низким риском неправильного употребления, чем d-амфетамин с немедленным высвобождением, содержащий эквивалентное количество основания d-амфетамина.

Пример 37. Предварительные оценки способности вызывать зависимость L-лизин-d-амфетамина по сравнению с d-амфетамином у взрослых с историей злоупотребления стимуляторами

[0310] В этом рандомизированном одноцентровом простом слепом исследовании с увеличением дозы применяли параметры фармакокинетики для получения предварительных оценок возможного риска неправильного употребления L-лизин-d-амфетамина (30-150 мг) здоровыми взрослыми, отвечающими критериям DSM-IV, характеризующим злоупотребление стимуляторами. Проводили сравнение L-лизин-d-амфетамина с d-амфетамин сульфатом (40 мг) и плацебо. Субъектов делили на 3 группы, каждая из которых включала 4 пациентов; каждый получал одну дозу L-лизин-d-амфетамина с минимальным интервалом 48 часов, с распределенными случайным образом d-амфетамин сульфатом (40 мг) и плацебо. Группе 1 вводили дозы L-лизин-d-амфетамина, равные 30, 50, 70 и 100 мг; когорта 2 получала дозы 50, 70, 100, 130 мг, а когорта 3 получала дозы 70, 100, 130 и 150 мг.

[0311] AUC_last d-амфетамина на протяжении первых 4 часов была значительно ниже для 100 мг L-лизин-d-амфетамина (165.3-213.1 нг/мл), чем для 40 мг d-амфетамина (245.5-316.8 нг/мл). C_max и AUC_last увеличивались при увеличении дозы от 30 до 130 мг L-лизин-d-амфетамина, затухая между дозой 130 мг и дозой 150 мг. T_max лежало в пределах от 3.78-4.25 ч для L-лизин-d-амфетамина по сравнению с d-амфетамин сульфатом (1.88-2.74 ч). Время полужизни L-лизин-d-амфетамина (диапазон, 0.44-0.76 ч) указывает на быстрое выведение. Нежелательные реакции были легкими по степени тяжести, без значительных изменений показателей жизнедеятельности или параметров ЭКГ. L-лизин-d-амфетамин высвобождает d-амфетамин медленнее, чем d-амфетамин сульфат. При дозах 150 мг (высоких), максимальная концентрация, видимо, затухает, указывая на то, что более высокие дозы L-лизин-d-амфетамина не приведут к дальнейшему увеличению C_max и AUC_last. Эти результаты указывают на профиль лекарственного средства, соответствующий пониженному риску неправильного употребления.

[0312] Очевидно, что показанные и описанные в настоящей заявке конкретные способы реализации настоящего изобретения являются только примерами. Специалист в данной области может придумать многочисленные варианты, изменения, замены и эквиваленты, не выходящие за пределы сущности и объема изобретения. Соответственно, предполагается, что предмет изобретения, описанный в настоящей заявке и проиллюстрированный на прилагающихся фигурах, следует рассматривать только как имеющий иллюстративное, но не ограничивающее значение. Объем изобретения определяется исключительно прилагаемой формулой изобретения.

1. Фармацевтическая композиция для лечения синдрома дефицита внимания с гиперактивностью, которая содержит:
a) примерно от 10 мг до примерно 250 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) примерно от 40 мас.% до примерно 90 мас.% микрокристаллической целлюлозы;
c) примерно от 1 мас.% до примерно 10 мас.% кроскармеллозы натрия; и
d) меньше чем примерно 5 мас.% стеарата магния.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) примерно от 20 мг до примерно 30 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) примерно от 80 мас.% до примерно 81 мас.% микрокристаллической целлюлозы;
c) примерно 2,5 мас.% кроскармеллозы натрия; и
d) примерно 1 мас.% стеарата магния.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) примерно 40 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) примерно 71,3 мас.% микрокристаллической целлюлозы;
c) примерно 2,5 мас.% кроскармеллозы натрия; и
d) примерно 1,5 мас.% стеарата магния.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) примерно от 50 мг до примерно 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) примерно 56 мас.% микрокристаллической целлюлозы;
c) примерно от 2,4 мас.% до примерно 2,5 мас.% кроскармеллозы натрия; и
d) примерно 1,5 мас.% стеарата магния.

5. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) 30 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) 151 мг микрокристаллической целлюлозы;
c) 4,69 мг кроскармеллозы натрия; и
d) 1,88 мг стеарата магния.

6. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) 50 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) 70 мг микрокристаллической целлюлозы;
c) 3,12 мг кроскармеллозы натрия; и
d) 1,88 мг стеарата магния.

7. Фармацевтическая композиция по п.1, которая содержит:
a) 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата;
b) 98 мг микрокристаллической целлюлозы;
c) 4,37 мг кроскармеллозы натрия; и
d) 2,63 мг стеарата магния.

8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-7, отличающаяся тем, что L-лизин-d-амфетамин димезилат имеет формулу

9. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 10 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 20 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 30 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

12. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 40 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 или 4, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 50 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

14. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 или 4, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 60 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

15. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1 или 4, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит примерно 70 мг L-лизин-d-амфетамин димезилата.

16. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-15 для приготовления медикамента для лечения синдрома дефицита внимания с гиперактивностью.

17. Способ лечения синдрома дефицита внимания с гиперактивностью у субъекта, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.1-15.

18. Способ лечения синдрома дефицита внимания с гиперактивностью у субъекта в возрасте 6-12 лет, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.1-15.