Способ повышения пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови
Владельцы патента RU 2465001:
Суховей Юрий Геннадьевич (RU)
Учреждение Российской академии наук Тюменский научный центр Сибирского отделения РАН (ТюмНЦ СО РАН) (RU)
Зурочка Александр Владимирович (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для повышения пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови. Для этого применяют синтетическое средство в лекарственной основе. В качестве синтетического средства используют синтетические пептиды, имеющие структуру LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO, м.м. от 1794 до 1397 дальтон, в концентрациях от 10-4 до 10-5 мг/мл лекарственной основы, в качестве которой используют физиологический раствор, применяют один раз в сутки. Использование данного способа позволяет повысить пролиферативную активность лимфоцитов, необходимую для патогенетической терапии заболеваний. Табл. 1.
Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, микробиологии, терапии, фармакологии, клинической фармакологии и может использоваться как способ, повышающий пролиферативную активностью лимфоцитов периферической крови.
Усиление пролиферации лимфоцитов - один из необходимых механизмов патогенетической терапии заболеваний, сопровождающихся синдромом вторичной иммунной недостаточности. Поиск веществ и способов направленного усиления пролиферации актуален по сей день.
Известен способ повышения пролиферативной активности лимфоцитов с использованием лекарственного препарата Ронколейкин, принятый за прототип. Ронколейкин представляет собой генно-инженерный (рекомбинантный) ИЛ-2 (рИл-2), являясь негликозилированным аналогом полипептидного фрагмента эндогенного интерлейкина, одним из фармакологических эффектов которого является активация клональной пролиферации Т-и В-лимфоцитов. (Справочник Видаль «Лекарственные препараты в России». 2009 г. М.: АстраФармСервис 1760 с.; Гусева С.А., Курищук К.В. Клиникоиммунологические аспекты использования ронколейкина (интерлейкина-2) в клинической практике. - К.: Лотос. 2004 г.)
К недостатком данного способа можно отнести не только ограничение способов введения (невозможность внутримышечного введения из-за формирования постинъекционных абсцессов) и довольно широкого спектра осложнений, но и недостаточную активацию пролиферации лимфоцитов.
Технической задачей заявляемого в изобретении способа является повышение пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови.
Поставленная задача решается тем, что в способе повышения пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови, заключающимся в применении синтетического средства в лекарственной основе, согласно изобретению в качестве синтетического средства используют синтетические пептиды, имеющие структуру от LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и до THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO, м.м. от 1794 до 1397 дальтон, в концентрациях от 10-4 до 10-5 мг/мл лекарственной основы, в качестве которой используют физиологический раствор, применяют один раз в сутки.
За счет того что в способе повышения пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови в качестве синтетического средства используют синтетические пептиды, имеющие структуру от LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и до THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO, м.м. от 1794 до 1397 дальтон, в концентрациях от 10-4 до 10-5 мг/мл лекарственной основы, в качестве которой используют физиологический раствор, применяя один раз в сутки, повышается пролиферативная активность организма в отношении лимфоцитов периферической крови.
Заявляемый способ обладает новизной в сравнении с прототипами, отличается существенными признаками, повышающими пролиферативную активность в отношении лимфоцитов периферической крови.
Заявителю не неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, обеспечивающие в совокупности достижение заданного результата, поэтому он считает, что заявляемое средство соответствует критерию «изобретательский уровень».
Заявляемое средство может найти широкое применение в аллергологии и иммунологии, микробиологии, терапии, фармакологии, клинической фармакологии.
Оценка активности заявляемого средства осуществляется следующим образом.
Главную роль в иммунных реакциях играет лимфоцит - подвижный носитель генетической информации. Лимфоциты не только реализуют иммунный ответ, но и принимают участие в физиологических процессах поддержания гомеостаза. Лимфоциты принимают участие в процессах воспаления и регенерации, влияют на митотическую активность различных тканей, стимулируют и регулируют их рост.
При изучении функциональной активности лимфоцитов широкое распространение получил метод бластной трансформации лимфоцитов. Этот метод позволяет моделировать одно из важнейших звеньев иммунного ответа - реакцию лимфоидной ткани на иммунный стимул. При заболеваниях, сопровождающихся угнетением иммунологической реактивности, наблюдается резкое снижение или отсутствие трансформации лимфоцитов в бластоподобные клетки. Тест бластной трансформации лимфоцитов широко используется в клинической практике для оценки функциональной активности иммунитета у человека.
Оценку пролиферативной активности лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии (Справочник "Медицинские лабораторные технологии", Изд. "Интермедика", С-Петербург, 1999 г., том 2, стр.303).
В качестве контроля был использован ФГА («Дифко», США). Данные сравнительной оценки интесивности активации пролиферации лимфоцитов представлены в таблице 1.
В исследовании участвовали образцы пептид ZP-1 со структурой LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и пептид ZP-2, структура которого имеет следующий вид THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO м.м. от 1794 до 1397 дальтон. Пептид ZP-1 и пептид ZP-2 применяли в концентрации от 10-4 до 10-5 мг/мл физиологического раствора, применяли один раз в сутки. Сравнивали следующие группы:
1. Уровень спонтанной митогенной активности лимфоцитов (% бластных клеток в суспензии МНК без добавления активных веществ).
2. Уровень митогенной активности, обусловленной оптимальной дозой ФГА (% бластных клеток в суспензии МНК после инкубации со стандартным митогеном ФГА в концентрации 10 мг/мл). Согласно мтендартной методике.
3. Уровень митогенной активности, обусловленной оптимальной дозой препарата-прототипа (% бластных клеток в суспензии МНК после инкубации с Ронколейкином в концентрации 10 мг/мл).
4. Уровень митогенной активности, обусловленной оптимальной дозой заявляемого пептида ZP1 (% бластных клеток в суспензии МНК после инкубации с ZP1 в концентрации от 10-4 до 10-5 мг/мл).
5. Уровень митогенной активности, обусловленной оптимальной дозой заявляемого пептида ZP2 (% бластных клеток в суспензии МНК после инкубации с ZP2 в концентрации от 10-4 до 10-5 мг/мл). Результаты исследования представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | ||
| № | Вещество | Содержание бластных клеток, % |
| 1 | Спонтанный уровень | 15,65±1,3 |
| 2 | ФГА (оптимальная доза) | 62,85±2,8 |
| 3 | Ронколейкин (прототип) | 56,62±3,1 |
| 5 | ZP1 | 59,55±4,1 |
| 6 | ZP2 | 97,35±5,4 |
Таким образом, заявляемые пептиды ZP-1, ZP-2 обладают способностью вызывать бластную трансформацию лимфоцитов in vitro, превышающей прототип. При этом надо отметить, что пептид ZP-2, состоящий из 12 аминокислот, обладал значительно более высокой активностью по сравнению с пептидом ZP-1, состоящим из 16 аминокислот.
В заявляемом способе повышается пролиферативная активность лимфоцитов периферической крови, за счет того, что в качестве синтетического средства используют синтетические пептиды, имеющие структуру от LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и до THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO, м.м. от 1794 до 1397 дальтон, в концентрациях от 10-4 до 10-5 мг/мл лекарственной основы, в качестве которой используют физиологический раствор, применяют один раз в сутки.
Способ повышения пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови, заключающийся в применении синтетического средства, в лекарственной основе, согласно изобретения, в качестве синтетического средства используют синтетические пептиды, имеющие структуру LYS GLY PRO LEY THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO и THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO, м.м. 1794 и 1397 дальтон, в концентрациях от 10-4 до 10-5 мг/мл лекарственной основы, в качестве которой используют физиологический раствор, применяют один раз в сутки.
