Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии

Авторы патента:

G01N30/90 - плоскостная хроматография, например хроматография в тонком слое или бумажная хроматография

Владельцы патента RU 2467323:

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Омский государственный аграрный университет" (RU)

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств имидаклоприда в органах или тканях животных при подозрении на отравление инсектицидом, а также продуктах животного происхождения. Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии включает отбор пробы, экстракцию, фильтрацию. Также способ включает дегидратацию натрия сульфатом безводным и упаривание. Кроме того, способ включает нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан: ацетон (4:3), обработку раствором ортотолидина с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 минут и обработку результатов анализа. Причем в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил». Техническим результатом изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа при сокращении продолжительности проведения анализа. 1 табл.

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление имидаклопридом, а также в продуктах животного происхождения.

Известен способ определения имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде, включающий экстракцию имидаклоприда хлороформом, последующую очистку экстрактов от коэкстрактивных веществ смесью ацетона с гексаном на колонке с оксидом алюминия, выпаривание, нанесение элюента ацетоном на пластинки для хроматографии «Силуфол» или «Сорбфил» с последующей разгонкой в разных системах подвижных растворителей, идентификацию реагентами ортотолидином либо раствором бромфенолового синего и лимонной кислоты. Диапазон определяемых концентраций 0,2-0,5 мкг, предел обнаружения 0,07 мг/кг. Процент определения составляет 73-84% [Методические указания по определению имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде методом тонкослойной хроматографии. Сборник №30. - Киев, 2001. - С.63-68].

Недостатками данного способа являются его трудоемкость и длительность, затрудняющие воспроизведение указанной чувствительности. Использование большой навески способствует образованию большого количества коэкстрактивных веществ, мешающих проведению анализа и требующих включение этапа очистки экстракта, что ведет к снижению чувствительности метода и увеличению времени для проведения анализа.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является метод определения имидаклоприда в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке. 25 г измельченной средней пробы анализируемого образца помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, приливают 50 мл смеси ацетон+вода (9+1, об.+об.) и перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 минут. Полученный экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «синяя лента» в колбу Бунзена. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 мл смеси ацетон+вода (9+1, об.+об.). Остаток на фильтре промывают 20 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 50 мл. Остаток помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 50 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия, 50 мл хлороформа и энергично встряхивают в течение 3 минут. Отделяют нижний слой хлороформа. Экстракцию повторяют дважды, порциями хлороформа по 30 минут. Хлороформный экстракт сушат настаиванием над натрием сульфатом безводным (20 г) в течение 30 минут при периодическом перемешивании и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл. Остаток хлороформа удаляют в токе азота или сухого воздуха досуха. Остаток в колбе растворяют в 50 мл ацетонитрила и помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 15 мл гексана и энергично встряхивают в течение 1-3 минут. Гексан отбрасывают. Операцию повторяют дважды порциями гексана по 15 мл. Ацетонитрил упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл. Остаток ацетонитрила удаляют в токе азота или сухого воздуха досуха. Сухой остаток растворяют 25 мл этилацетата и пропускают через колонку, заполненную 10 г флоризила и 2 г безводного сульфата натрия. Этилацетат, прошедший через колонку, отбрасывают. Затем элюируют имидаклоприд из колонки 25 мл ацетонитрила со скоростью 2 мл/мин. Упаривают элюат на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл, а затем досуха в токе азота или сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл ацетона и количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3). Для проявления имидаклоприда пластинку обрабатывают раствором ортотолидина и помещают под УФ-лампу на 3-5 минут. Имидаклоприд проявляется в виде синего пятна на светлом фоне. Обработку результатов анализа проводят по формуле:

где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

A - количество имидаклоприда в пробе, найденное на пластинке, мкг;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

[Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Сборник №30. - Киев, 2001. - С.80-86.]

Недостатком данного метода определения имидаклоприда является его низкая чувствительность и избирательность, длительность проведения анализа.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение продолжительности проведения анализа.

Технический результат достигается тем, что в способе определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающем отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3), обработку раствором ортотолидина с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 минут, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил».

Уменьшение массы пробы биологического объекта позволяет снизить количество коэкстрактивных веществ в экстракте, мешающих проведению анализа, что повышает чувствительность и избирательность метода.

Использование в качестве экстрагента ацетона связано с высокой растворимостью имидаклоприда в растворителе, быстрым испарением при выпаривании экстракта, которое проводят сразу после экстракции без этапа очистки. Очистка экстракта не требуется, так как ацетон хорошо растворяет остатки имидаклоприда и не смывает со дна колбы Бунзена налет коэкстрактивных веществ, при этом потери имидаклоприда минимальны, что повышает чувствительность и избирательность метода, снижает его продолжительность.

Использование пластинок для тонкослойной хроматографии «Сорбфил» позволяет получить хорошо визуализируемые с достаточной концентрацией пятна имидаклоприда и адекватно оценить содержание его в пробе (в диапазоне от 0,1 до 10 мкг), что повышает чувствительность и избирательность метода.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 200 мг органов или тканей, измельчают и экстрагируют ацетоном по 4 мл трижды по 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром «синяя лента», заполненным натрием сульфатом безводным, в колбу Бунзена. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл, а затем досуха в токе азота или сухого воздуха. Сухой остаток растворяют 0,2 мл ацетона и наносят на пластину для тонкослойной хроматографии «Сорбфил». Пластинку помещают в камеру, насыщенную парами гексан:ацетон (4:3). После подъема фронта растворителя на 10 см пластинку высушивают, обрабатывают свежеприготовленным раствором ортотолидина и помещают под УФ-лампу. Имидаклоприд проявляется в виде синего пятна на светлом фоне. Обработку результатов проводят по формуле:

где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

A - количество имидаклоприда в пробе, найденное на пластинке, мкг;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

Метрологическая характеристика метода определения представлена таблице 1.

Таблица 1
Метрологическая характеристика метода определения имидаклоприда (n=5, P=0,95)
Анализируемая проба	Предел количественного определения, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал при α=0,05, %
Кровь	0,04	90,6	2,88	87,02-94,17
Содержимое желудка	0,05	88,8	3,03	85,03-92,56
Почка	0,05	89,8	2,59	86,6-93,01
Легкое	0,05	89,2	2,86	85,64-92,76
Мышечная ткань	0,04	89,8	2,28	86,97-92,63

Анализ метрологических характеристик способа определения имидаклоприда в биологических объектах показывает высокую чувствительность и избирательность за счет уменьшения навески пробы и точного подбора экстрагента - ацетона. Исключение многочисленных этапов очистки позволяет сократить продолжительность проведения анализа в два раза. Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии прост и экономичен в осуществлении.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии может быть использован в лабораториях для контроля качества продуктов животного происхождения при использовании в рационе животных кормовых культур, обработанных пестицидами, содержащими имидаклоприд, а также осуществлять прижизненную или посмертную диагностику токсикоза при случайных острых отравлениях.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии был апробирован в условиях научной лаборатории кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней и фармакологии ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет».

Источники информации

1. Методические указания по определению имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде методом тонкослойной хроматографии. Сборник №30. - Киев, 2001. - С.63-68.

2. Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Сборник №30. - Киев, 2001. - С.80-86 (прототип).

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3), обработку раствором ортотолидина с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 мин, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил».

Сэндвич-камера малого объема для тонкослойной хроматографии // 2428685

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. .

Способ идентификации природного красителя кармина в присутствии сульфоазокрасителей // 2414702

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации природного красителя кармина в присутствии сульфоазокрасителей Е102, Е110, Е122, Е124 и Е129 при аналитическом контроле пищевых продуктов и фармацевтических препаратов.

Способ идентификации углеводов // 2396560

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации углеводов (глюкоза, лактоза, галактоза, фруктоза, тагатоза) при аналитическом контроле пищевых продуктов.

Способ количественного определения резвератрола // 2390772

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других биологических исследованиях при хроматографическом определении транс-резвератрола в биологически активных добавках, а также в вине.

Способ определения альфа-токоферола в растительных маслах // 2349913

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть применено для определения -токоферола (альфа-токоферола) в различных объектах растительного и животного происхождения.

Способ определения диспергирующе-стабилизирующих свойств и загрязненности масел // 2312344

Изобретение относится к экспресс-методам определения диспергирующе-стабилизирующих свойств и загрязненности работающих масел. .

Способ оценки качества антоцианового красителя, полученного бескислотным способом // 2306557

Изобретение относится к области исследования материалов химическими способами, а именно путем хроматографии, и может найти применение при оценке качества антоциановых красителей, полученных безкислотным способом из растительного сырья, в фармацевтической, ликероводочной и других отраслях пищевой промышленности.

Способ определения n-(бензимидазолил-2)-о-метилкарбамата в биологическом материале // 2300765

Изобретение относится к биологии, токсикологической и ветеринарной химии, а именно к способам определения N-(бензимидазолил-2)-O-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий.

Способ определения качественного состава органических веществ в объектах окружающей среды // 2299432

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения качественного состава органических веществ в объектах на основе органической матрицы: в осадках избыточного активного ила промышленных и коммунальных биологических очистных сооружений, в донных отложениях водных объектов, в органоминеральных удобрениях и почвах при экологических и санитарно-химических исследованиях.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2484458

Способ хроматографического анализа в закрытом тонком слое сорбента и устройство для его осуществления // 2494391

Способ и устройство могут использоваться в различных научных и практических областях медицины, биологии, химии, пищевой промышленности, охране окружающей среды и других отраслей народного хозяйства для анализа смесей органических и неорганических веществ методом тонкослойной хроматографии. Способ, при котором разделение пробы на отдельные компоненты происходит в капиллярной колонке с сорбентом под давлением восходящего потока жидкой подвижной фазы, расход которой регулируют изменением избыточного давления инертного газа на входе колонки. Устройство содержит капиллярную колонку, заполненную сорбентом, емкость с инертным газом под избыточным давлением, соединенную с выходом капиллярной колонки и с помощью регулируемого пневмосопротивления с линией сброса. Техническим результатом изобретения является повышение эффективности разделения и точности результатов анализа. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Способ разделения методом тонкослойной хроматографии // 2494392

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. Способ разделения исследуемой смеси методом тонкослойной хроматографии включает нанесение исследуемой смеси на разделяющую хроматографическую пластинку и последующее разделение компонентов исследуемой смеси подвижной фазой в сэндвич-камере, включающей разделяющую хроматографическую пластинку и сухую контрпластинку, которая не касается подвижной фазы. В качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, сорбционный слой которой характеризуется большей сорбционной емкостью по сравнению с разделяющей пластинкой. Этого достигают одним из двух способов: в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, идентичный сорбенту разделяющей пластинки и характеризующийся большей толщиной сорбционного слоя, или же в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, отличный от сорбента разделяющей пластинки и характеризующийся большей удельной сорбционной емкостью. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение величин подвижностей, эффективности разделения и других хроматографических характеристик. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 пр., 1 ил.

Сэндвич-камера с контрпластинкой для тонкослойной хроматографии // 2494393

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (TCX) и может быть использовано в аналитической химии и в физической химии. Сэндвич-камера с контрпластинкой для TCX содержит разделяющую хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке и контрпластинку - хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке. Обе пластинки расположены параллельно, их адсорбционные слои обращены друг к другу. Для фиксации конструкции используют зажимы, скрепляющие пластинки. Расстояние между адсорбционными слоями разделяющей и контрпластинки - менее 0,3 мм, а разделяющая пластинка сдвинута относительно контрпластинки на 3-10 мм. Для регулирования расстояния между адсорбционными слоями используют ограничитель П-образной формы. Линейные части ограничителя могут быть изготовлены из кварцевых капилляров диаметром 0,1-0,3 мм. В качестве разделяющей пластинки и/или контрпластинки используют пластинки не только на стеклянной, но и на гибкой алюминиевой или полимерной подложке, расположенные на дополнительных стеклянных пластинках, размеры которых превышают с одной или с четырех сторон размеры используемых хроматографических пластинок на 10-40 мм. По крайней мере, одна из дополнительных пластинок имеет на одной из сторон выступы для обеспечения ограничения контакта между подвижной фазой и разделяющей пластинкой. Хроматографичсская контрпластинка и дополнительная пластинка могут иметь сквозные прорези для контроля движения подвижной фазы по разделяющей пластинке и разделения исследуемой смеси. Сквозные прорези представляют собой линейные прорези, ширина которых не превышает 3 мм или круговые прорези с диаметром не более 5 мм. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение эффективности и других хроматографических характеристик разделения. 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Способ хроматографического анализа органических веществ // 2512252

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и позволяет осуществить анализ органических веществ. Способ хроматографического анализа органических веществ включает растворение исследуемого органического вещества в летучем растворителе с получением раствора пробы, последующее нанесение капли раствора пробы на хроматографическую пластину со слоем сорбента, при этом в качестве растворителя выбирают вещество, не вступающее в химическое взаимодействие с пробой и сорбентом, последующий качественный и количественный анализ проявившихся колец. Причем качественный анализ осуществляют по отношению к эталонному веществу/группе веществ, наносимому на пластину в тех же условиях, что и исследуемая проба, а количественный анализ осуществляют по весу или площади кольца, соответствующего конкретному веществу/группе веществ. Техническим результатом является упрощение способа хроматографического анализа органических веществ, сокращение времени, необходимого для анализа. 2 ил.

Способ выделения монослоя вещества // 2512630

Изобретение относится к области аналитической химии и предназначено для выделения монослоя вещества для целей последующего анализа свойств вещества. Способ выделения монослоя вещества включает нанесение жидкой пробы с растворенным в ней веществом на линию старта на хроматографическую пластину, содержащую слой сорбента. При этом на линию старта наносят несколько капель пробы вещества одинаковой концентрации, но разного количества, начиная с минимально возможного количества, пропускают через пластинку элюент для разделения. Затем осуществляют регистрацию на пластине выделенных пятен проб вещества и измеряют диаметр пятен пробы вещества на линии старта и высоту пика каждого пятна. Далее строят кривую зависимости высоты пика пятна от диаметра пятна на линии старта и фиксируют точки перелома кривой. Детектирование пятен пробы с монослоем вещества осуществляют по характеру кривой от первой минимальной пробы до пробы, соответствующей точке первого перелома кривой. Техническим результатом является обеспечение выделения монослоя исследуемого вещества, повышение точности хроматографического анализа вещества, повышение точности исследования свойств вещества, возможность прогнозирования применения вещества в различных областях промышленности. 4 ил.

Способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах // 2517086

Настоящее изобретение относится к области биохимии и описывает способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах, заключающийся в том, что методом тонкослойной хроматографии разделяют общие липиды на классы и фосфолипиды на подклассы, проявляют их на хроматограмме и количество определяют с использованием денситометрии, причем липиды, остающиеся на старте после разделения общих липидов на классы, сдвигают на 0,5 см выше, проявляют классы липидов и подклассы фосфолипидов на хроматограмме парами йода и рассчитывают площади пиков, соответствующие интенсивности окраски треков на хроматограмме с помощью денситометра, а количество общих фосфолипидов, других классов липидов и подклассов фосфолипидов определяют расчетным методом, выделяя линиями каждый трек отдельно и производят суммарный расчет площадей треков, берут эту цифру за 100% и определяют процент каждого класса липидов от общих липидов или каждого подкласса фосфолипидов от общих фосфолипидов, составляя пропорцию. Способ обеспечивает упрощение процедуры определения содержания классов липидов и подклассов фосфолипидов в липидных экстрактах биологических материалов и повышение точности полученных результатов. 1 пр., 4 ил.

Способ определения кодеина // 2523408

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах. Способ определения кодеина включает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, при этом количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм. Изобретение обеспечивает сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента. 2 табл., 3 пр.

Способ определения жирорастворимых витаминов а, d2, е и в-каротина при совместном присутствии методом тонкослойной хроматографии // 2530620

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах. Способ определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии включает выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, согласно изобретению в качестве элюентов использованы гексан:хлороформ (19:1) и гексан:хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете. Способ обеспечивает упрощение и ускорение процесса определения жирорастворимых витаминов. 10 ил., 3 пр.

Способ определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной // 2572337

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона. Изобретение характеризуется упрощенной стадией пробоподготовки, а также улучшенной методикой определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной и позволяет объективно оценивать качество данной лекарственной формы. 1 ил., 1 пр.