Способ определения степени тяжести пародонтита

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии. Для диагностики активности воспалительного процесса в пародонте определяют концентрацию молекул sICAM-1 в ротовой жидкости. При значении концентрации до 5 нг/мл диагностируют отсутствие патологии, в пределах 5,5-6,9 нг/мл диагностируют пародонтит легкой степени, в пределах 7-9,9 нг/мл диагностируют пародонтит средней степени тяжести, 10 нг/мл и более - пародонтит тяжелой степени. Использование изобретения позволяет объективно оценить степень тяжести пародонтита при неинвазивности метода. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для определения степени тяжести и активности воспаления в тканях пародонта.

При диагностике и лечении пародонтита очень важной задачей является объективная оценка степени тяжести пародонтита. Возможность точного биохимического контроля степени тяжести на различных этапах заболевания позволяет повысить эффективность лечения и индивидуального прогнозирования течения заболевания.

Известен способ диагностики воспалительных заболеваний пародонта путем биохимического исследования перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты слюны [Безрукова И.В. Быстропрогрессирующий пародонтит. Этиология. Клиника. Лечение. // Автореф. дисс. докт. мед. наук, М., 2001]. Накопление перекисных продуктов является патогенетическим признаком развития и дальнейшего прогрессирования острого воспаления. Недостатком метода является то, что он недостаточно точен для постановки диагноза и для определения степени тяжести пародонтита, так как перекисное окисление непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов. Это требует дополнительного, более дифференцированного подхода в диагностике пародонтита.

Известен способ диагностики пародонтита по содержанию R-белка в десневой жидкости [Патент РФ №2061961, G01N 33/68, 1996]. Данный способ позволяет определить наличие воспалительного процесса пародонта. Однако данный метод не является достаточно точным для постановки диагноза на ранних стадиях и для определения степени тяжести пародонтита.

Известен способ диагностики степени тяжести пародонтита, включающий определение в крови из десны содержание фосфатидилинозитов в н.моль на 1 мг белка и при их концентрации 7 н.моль диагностируют отсутствие патологии, при повышении до 10 н.моль диагностируют легкую степень, при концентрации от 10 до 15 н.моль диагностируют среднюю тяжесть, а выше 15 н.моль - тяжелую степень тяжести пародонтита [патент РФ №2269138, 2006 г., G01N 33/92]. Однако данный способ позволяет определять тяжесть заболевания по крови десны, по данной методике объем исследуемой биосреды является минимальным и в связи с этим показатели могут быть неточными, инвазивность метода также является недостатком.

Известен способ диагностики степени тяжести пародонтита, который включает определение в крови из десны пациента простагландина Е2, арахидоновой кислоты и фосфатидилинозитов, и по уровню указанных веществ диагностируют тяжелую, среднюю и легкую стадии [патент РФ №2280874, 2006 г., G01N 33/88, G01N 33/92].

Известен способ диагностики пародонтита, заключающийся в том, что определяют уровень остеопротегерина в сыворотке крови, при содержании остеопротегерина от 8,000 пмоль/л до 11,999 пмоль/л регистрируют пародонтит легкой степени; от 3,000 пмоль/л до 7,999 пмоль/л - пародонтит средней степени тяжести; от 1,000 пмоль/л до 2,999 пмоль/л - пародонтит тяжелой степени [патент РФ №2389028, 2010 г., G01N 33/68]. Недостатками способа являются его низкая достоверность, заключающаяся в том, что любой остеогенный деструктивный процесс и необязательно в тканях пародонта приводит к повышению этих параметров, также данный способ не позволяет проведения ранней диагностики пародонтита и является инвазивным, требуется проведение анализа крови больного.

Воспалительный ответ слизистой оболочки пародонта на внедрение патогенных микроорганизмов сопровождается активацией фагоцитарной системы и способствует выведению чужеродных агентов из организма. Увеличение проницаемости сосудов и локальное накопление жидкости обеспечивает концентрацию иммуноглобулинов, комплемента и других функционально значимых белков в очаге проникновения инфекции. Под влиянием цитокинов увеличивается диаметр сосудов в очаге инфекции, что приводит к локальному усилению кровотока и на эндотелиальных клетках экспрессируются адгезивные молекулы ICAM-1 из суперсемейства иммуноглобулинов, в результате чего усиливается приток фагоцитов в очаг воспаления, что крайне важно для локализации инфекции (Cook-Mills, 2005).

Основной функцией ICAM-1 является обеспечение адгезии лейкоцитов к активированному сосудистому эндотелию, что происходит благодаря взаимодействию ICAM-1 с лигандами LFA-1 и МАС-1. Кроме того, ICAM-1 участвует в контактных взаимодействиях клеток в иммунных реакциях: Т-лимфоцитов с моноцитами, цитотоксических Т-лимфоцитов с клетками-мишенями. Описано, что ICAM-1 передает внутриклеточные сигналы, что приводит к перестройке актинового цитоскелета эндотелиальных клеток и способствует миграции лейкоцитов [Lawson, 2009]. Также в ряде работ показано, что связывание ICAM-1 индуцирует продукцию провоспалительных цитокинов и хемокинов и способствует поддержанию воспаления. Показано, что sICAM-1 маркер, запускающий воспалительные реакции [Cook-Mills, 2005].

Наиболее близким аналогом изобретения является способ оценки тяжести пародонтита, заключающийся в том, что определяют секрецию ферментов ММР-1 и TIMP-1 в фибробластах десны, содержание ICAM-1 в тканях пародонта, при увеличении данных показателей диагностируют деструктивную форму пародонтита [Helena Domeij. Expression and regulacion of MMR-1 and MMR-3 in human gingival fibroblasts // Stockholm. 2005 - 43 p.].

Технический результат при использовании изобретения - повышение точности диагностики пародонтита за счет определения объективных параметров степени тяжести заболевания.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики активности воспалительного процесса в пародонте, включающем определение содержания ICAM-1 в полости рта, согласно изобретению определяют концентрацию молекул sICAM-1 в ротовой жидкости, при ее значении до 5 нг/мл диагностируют отсутствие патологии, в пределах 5,5-6,9 нг/мл диагностируют пародонтит легкой степени, в пределах 7-9,9 нг/мл диагностируют пародонтит средней степени тяжести, 10 нг/мл и более - пародонтит тяжелой степени.

Предлагаемый способ определения степени тяжести пародонтита осуществляется следующим образом: после полоскания рта пятьюдесятью миллилитрами бидистиллированной воды в течение 5 минут ротовую жидкость в количестве 2,0 мл набирают в сухую чистую полиэтиленовую пробирку. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) проводят определение количественного содержания молекул межклеточной адгезии sICAM-1 с использованием коммерческих наборов Human sICAM ELISA, BMS 201" фирмы "Bender MedSystems для количественного определения растворимого человеческого sICAM-1 в человеческой сыворотке, плазме, культуральной среде и других биологических жидкостях. При значении концентрации до 5 нг/мл диагностируют отсутствие патологии, в пределах 5,5-6,9 нг/мл диагностируют пародонтит легкой степени, в пределах 7-9,9 нг/мл диагностируют пародонтит средней степени тяжести, 10 нг/мл и более - пародонтит тяжелой степени.

Достоинством предлагаемого способа является неинвазивность метода и возможность повышения точности диагностики в определении степени тяжести пародонтита, местных патологических процессов в тканях пародонта у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом.

Предлагаемый показатель - молекула sICAM-1 (сокр. от англ. soluble-растворимый) представляет собой экстрацеллюлярную часть клеточно-связанной ICAM-1. Секреция sICAM-1 осуществляется моноцитами, эпителиальными клетками, гладкомышечными клетками сосудов, клетками гемопоэза. Описано, что ICAM-1 передает внутриклеточные сигналы, приводящие к перестройке актинового цитоскелета эндотелиальных клеток и способствует миграции лейкоцитов.

Связывание ICAM-1 индуцирует продукцию провоспалительных цитокинов и хемокинов и способствует поддержанию воспаления. В эксперименте доказано, что отмечается повышенная секреция ICAM-1 на фибробластах десны, облегчая взаимодействия между фибробластами и лейкоцитами [Helena Domeij. 2005]. ICAM-1 плохо выявляется на покоящемся эндотелии при отсутствии воспаления и экспрессия этих молекул быстро усиливается при активации эндотелия, сопровождающее воспаление в тканях пародонта.

С целью определения степени активности воспаления пародонтита и эффективности данного способа количественной диагностики воспалительного процесса в тканях пародонта было проведено определение количественного содержания молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости у 60 пациентов в возрасте от 20 до 50 лет, с последующим проведением у этих обследуемых основных диагностических методов оценки состояния пародонта. Было выяснено, что количество молекул sICAM-1 в группе обследуемых, не имеющих патологию пародонта, составило 4,9±0,5, (p<0,05). При легкой степени пародонтита 7,6±0,5, при средней степени 8,5±0,7, при тяжелой 11,3±1,1 (p < 0,01).

Достоверные различия между данными интервалами количественного содержания молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости у обследуемых говорят о том, что значения данного показателя действительно являются точной характеристикой степени выраженности воспалительных процессов, протекающих в слизистой оболочки полости рта, и могут быть приняты в качестве объективного критерия оценки воспалительного процесса в тканях пародонта и эффективности проведенного лечения заболеваний тканей пародонта.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружен тождественный способ выявления активности воспаления в тканях пародонта путем определения концентрации молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости, что позволяет сделать вывод о новизне предлагаемого технического решения.

Исследованиями авторов впервые было установлено и доказано, что определение концентрации молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости является достоверным критерием определения активности воспаления в тканях пародонта при генерализованном пародонтите. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Сущность изобретения иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациентка К.Е.Ф., 1963 г.р., обратилась с жалобами на кровоточивость десен при чистке зубов, периодически неприятный запах изо рта.

Индексы гигиены Грина-Вермильона 1,5. При зондировании десны резко болезненны, легко кровоточат. Индекс Мюллемана 1,3. В области 16, 17, 26, 27, 37, 36, 35, 34 глубина пародонтальных карманов 3-4 мм. Подвижность зубов 17, 26 - 1 степени. При рентгенологическом обследовании выявлены очаги деструкции альвеолярной кости с разрушением кортикальной пластины в области 16, 17, 26, 27, 31, 32, 37, 36, 35,34, 41, 42.

С помощью анализа ротовой жидкости методом ИФА с использованием коммерческих наборов определено содержание sICAM-1 в ротовой жидкости: sICAM-1=5,6 нг/мл.

После подробного стоматологического обследования и анализа ротовой жидкости поставлен диагноз: хронический генерализованный пародонтит легкой степени.

Заключение: По результатам клинического обследования и количественной оценки содержания молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости пациентки К.Е.Ф. установлен диагноз: Хронический генерализованный пародонтит легкой степени тяжести

Пример 2. Пациентка Ю.Ж.Г.., 1960 г.р., обратилась с жалобами на кровоточивость десен при чистке зубов, периодически появляющееся гноетечение из десен, подвижность зубов, неприятный запах изо рта. Диагноз: Генерализованный пародонтит, средняя степень.

Индексы гигиены Грина-Вермильона 1,9. При зондировании десны резко болезненны, отмечается кровоточивость. Индекс Мюллемана 1,9. В области 37, 36, 46, 47 из пародонтальных карманов выделяется гной экссудат. Подвижность зубов 1-2 степени; 37, 36, 46, 47-2 степени. Пародонтальные карманы 4-5 мм.

При рентгенологическом обследовании выявлены очаги активной деструкции кортикальной пластины межальвеолярных перегородок, с нарушением структуры и снижением высоты межальвеолярных гребней на 1/2- длины корней зубов.

Методом ИФА с использованием коммерческих наборов определено содержание sICAM-1 в ротовой жидкости: sICAM-1=8,75 нг/мл.

После подробного стоматологического обследования и анализа ротовой жидкости поставлен диагноз: Хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести.

Заключение: По результатам клинического обследования и количественной оценки содержания молекул межклеточной адгезии sICAM-1 в ротовой жидкости пациентки Ю.Ж.Г. установлен диагноз: Хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести.

Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях поликлиники или стационара. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «промышленная применимость».

Способ диагностики активности воспалительного процесса в пародонте, включающий определение содержания ICAM-1 в полости рта, отличающийся тем, что определяют концентрацию молекул sICAM-1 в ротовой жидкости, при ее значении до 5 нг/мл диагностируют отсутствие патологии, в пределах 5,5-6,9 нг/мл диагностируют пародонтит легкой степени, в пределах 7-9,9 нг/мл диагностируют пародонтит средней степени тяжести, 10 нг/мл и более - пародонтит тяжелой степени.