Способ получения хромогенного комплекса трутовика плоского

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно способу получения хромогенного комплекса гриба трутовика плоского. Способ получения хромогенного комплекса гриба трутовика плоского, включающий ступенчатое экстрагирование измельченного плодового тела трутовика водным раствором гидроокиси натрия, при этом сначала получают экстракт первой ступени экстрагирования и жом, затем жом экстрагируют с получением экстракта второй ступени экстрагирования, экстракты первой и второй ступеней объединяют, а хромогенный комплекс осаждают добавлением к объединенному экстракту хлористоводородной кислоты, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход конечного продукта, обладающего повышенной антиоксидантной активностью. 1 табл., 4 пр.

 

Способ получения хромогенного комплекса трутовика плоского Изобретение относится к фармацевтической, пищевой и косметической промышленности и касается получения хромогенного комплекса трутовика плоского.

Известно, что трутовые грибы содержат темно окрашенные вещества, хромогенные комплексы, обладающие биологической активностью (противораковой, тонизирующей и т.п.). К трутовым грибам относятся, в частности, чага, трутовик плоский, трутовик окаймленный и другие.

Хромогенные комплексы получают из разных видов трутовых грибов. Например, разработаны способы получения хромогенных комплексов из чаги, обладающих высокой антиоксидантной и терапевтической активностями (патент RU №2336085, МПК⁷ А61К 36/06, опубл. 20.10.08; патент RU №2339390, МПК⁷ А61К 36/06, А61Р 39/06, опубл. 27.11.08; Исследование золя вводных извлечений чаги IV. Антиоксидантная активность. Влияние способа извлечения и применение комплексонов, гидроксида натрия / М.А. Сысоева [и др.] // Химия растительного сырья, 2005 - №1. - С.41-47). Однако, чага в природных условиях встречается реже, чем другие виды трутовых грибов, к которым относится трутовик плоский.

Так же, известен способ получения экстрактов из трутовика плоского, содержащих флавоноиды, танины, сапонины (Lignicolous fungi from northern Serbia as natural sources of antioxidants / M.A. Karaman, N.M. Mimica-Dukic, M.N. Matavuly // Central European journal of biology. - 2009. - №3. - P.387-396). Но, в указанном способе из гриба не извлекают хромогенный комплекс.

Наиболее близким техническим решением, принятым в качестве прототипа, является способ получения хромогенного комплекса трутовика плоского, в котором сырье, предварительно обезжиренное, экстрагируют водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л (0,1н) в течение 2 часов при температуре 45-50°С, затем экстракт отделяют, меланин (хромогенный комплекс) осаждают добавлением к экстракту раствора хлористоводородной кислоты до рН 1,5 (Бакулин А.В. Физико-химические характеристики хитозан-меланиновых комплексов / А.В. Бакулин и [и др.] // Труды Белорусского государственного университета - 2006. - 4(2). - С.290-297).

Недостатками известного способа является низкий выход хромогенного комплекса.

Технической задачей изобретения является увеличение выхода хромогенного комплекса с сохранением его антиоксидантной активности.

Поставленная задача достигается тем, что в способе получения хромогенного комплекса гриба трутовика плоского, включающем экстрагирование измельченного плодового тела трутовика плоского водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, отфильтровывание экстракта, осаждение из экстракта хромогенного комплекса добавлением хлористоводородной кислоты до значения рН 1,5, согласно изобретению экстрагирование проводят при температуре 65-75°С ступенчато в течение 2-3 часов при массовом соотношении гриб:экстрагент на первой ступени 1:6, а на второй ступени 1:4 или 1:6, при этом на первой ступени экстрагирование проводят в течение 1 часа с получением экстракта первой ступени экстрагирования и жома, затем жом экстрагируют с получением экстракта второй ступени экстрагирования, экстракты первой и второй ступеней объединяют.

Техническим результатом изобретения является увеличение выхода хромогенного комплекса с сохранением его антиоксидантной активности на высоком уровне.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Трутовые грибы накапливают в плодовом теле и мицелии хромогенные комплексы, выполняющие различные биологические функции (участвуют в дыхании, нейтрализации ядов, повышении резистентности к внешним физическим факторам и т.д.). Однако, хромогенные комплексы могут проявлять и антиоксидантную активность, открывая возможность для их применения в фармацевтической промышленности.

Экстракция хромогенных комплексов из клеток гриба затруднена ввиду плохой их растворимости в воде. Процесс экстракции интенсифицируется при повышении температуры за счет увеличения растворимости компонентов гриба и коэффициентов диффузии, что приводит к увеличению выхода хромогенного комплекса. Однако увеличение температуры выше 75°С отрицательно сказывается на терапевтических свойствах готового продукта (Андреева СМ. К характеристике доброкачественности препарата из чаги / СМ. Андреева // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений: сб. науч. тр. - М. - Л.: Наука, 1961. - С.144-150). При проведении процесса при температуре ниже 65°С снижается выход хромогенного комплекса. Таким образом, проведение экстракции при температуре 65-75°С способствует увеличению выхода целевого продукта с сохранением его терапевтических свойств.

Проведение процесса в две стадии поддерживает градиент концентрация хромогенного комплекса между экстрагируемым сырьем и экстрагентом на высоком уровне, что приводит к интенсификации экстракции и, в итоге, к увеличению выхода продукта.

Выбор массового соотношения гриб:экстрагент обусловлен тем, что именно при массовом соотношении гриб:экстрагент 1:6 или 1:4 достигаются условия для формирования коллоидной системы экстракта, благоприятной для экстрагирования хромогенного комплекса (Сысоева М.А. Исследование золя водных извлечений чаги Ч. II. Изменение изучаемой системы при проведении экстракции различными способами / М.А. Сысоева [и др.] // Вестник Казанского технологического университета (КГТУ). - 2003. - №2. - С.172-176). Использование соотношения менее 1:4 не позволяет экстрагенту закрыть поверхность сырья при проведении экстракции. Использование соотношения более 1:6 приведет к перерасходу экстрагента.

Проводить экстракцию продолжительностью более 3 часов нецелесообразно, поскольку это может привести к изменению физико-химических свойств хромогенного комплекса, например, к гидролизу его компонентов с образованием продуктов распада с меньшей терапевтической активностью, при этом выход продукта практически не изменится. Проведение первой ступени экстрагирования в течение 1 ч обусловлено тем, что при меньшей продолжительности выход хромогенного комплекса резко падает, а при большей продолжительности выход продукта возрастает незначительно.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход хромогенного комплекса в 1,8-2,4 раза и сохранить его высокую антиоксидантную активность (33-40 кКл/100 г).

Способ осуществляют следующим образом. Измельченное плодовое тело трутовика плоского заливают водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л при массовом соотношении трутовик:экстрагент 1:6, настаивают в течение 1 часа при температуре 65-75°С, затем экстракт отделяют от жома фильтрованием, получая экстракт первой ступени экстрагирования. Оставшийся жом заливают водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л при массовом соотношении жом:экстрагент 1:4 или 1:6, настаивают в течение 1-2 часов при температуре 65-75°С, отделяют экстракт от жома фильтрованием, получая экстракт второй ступени экстрагирования. Экстракты, полученные на первой и второй ступенях экстрагирования, объединяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса, хромогенный комплекс отделяют.

Способ иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Навеску 10 г измельченного плодового тела трутовика плоского заливают 60 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 1 часа при температуре 70°С, затем экстракт отделяют от жома фильтрованием, получая экстракт первой ступени экстрагирования. Оставшийся жом заливают 40 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 2 часов при температуре 70°С, отделяют экстракт от жома фильтрованием, получая экстракт второй ступени экстрагирования. Экстракты, полученные на первой и второй ступенях экстрагирования, объединяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса. Хромогенный комплекс отделяют центрифугированием.

Примеры 2-3 аналогичны примеру 1, режимные условия приведены в таблице.

Пример 4. Получение хромогенного комплекса максимально близко к условиям, указанным в прототипе. Навеску 10 г измельченного плодового тела трутовика плоского заливают 100 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 2 часов при температуре 48°С, затем экстракт отделяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса. Хромогенный комплекс отделяют центрифугированием. В прототипе соотношение гриба:экстрагента не было указано, для проведения экстракции было использовано соотношение 1:10, т.к. использование данного соотношения было показано для экстракции трутовых грибов (патент RU №2343930, МПК⁷ А61К 36/06, B01D 11/02, опубл. 20.01.09; патент RU №2406514, МПК⁷ А61К 36/06, B01D 11/02, А61Р 39/06, опубл. 20.12.10).

Выход хромогенного комплекса определяли согласно Государственной Фармакопее СССР (Государственная фармакопея СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 390 с.)

Антиоксидантную активность хромогенного комплекса определяли по способу определения интегральной антиоксидантной емкости биологических жидкостей (патент RU №2253114, МПК G01N 33/48, опубл. 27.05.05).

Результаты экспериментов обработаны с помощью программы «Статистика 6» и приведены в таблице, при доверительной вероятности Р=0,95, n=7 (n - объем выборки или количество экспериментов).

Таблица
№ примера	Условия проведения экстракции	Выход хромогенного комплекса, % от сырь	О Антиоксидантная активность хромогенно комплекса, кКл/100 г
	Температура процесса, °С	Массовое соотношение гриб:экстрагент	Продолжительность процесса, ч
1	4,0	70	I стадия	1:6	1	4,82	33±2
II стадия		1:4	2
2		65	I стадия	1:6	1	6,28	40±2
II стадия		1:6	2
3		75	I стадия	1:6	1	5,69	37±2
II стадия		1:6	1
Прототип	48	-	1:10	2	2,63	39±2

Из таблицы видно, что выход хромогенного комплекса увеличивается в 1,8-2,4 раза по сравнению с прототипом, а антиоксидантная активность практически не изменяется (33-40 кКл/100 г).

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить выход хромогенного комплекса трутовика плоского более чем в 2 раза и сохранить его высокую антиоксидантную активность.

Использование хромогенных комплексов трутовика плоского, полученных с применением водных растворов гидроокиси натрия, может быть рекомендовано для создания лекарственных препаратов, биологически активных добавок для фармацевтической, пищевой и косметической промышленности.

Способ получения хромогенного комплекса гриба трутовика плоского, включающий экстрагирование измельченного плодового тела трутовика плоского водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, отфильтровывание экстракта, осаждение из экстракта хромогенного комплекса добавлением хлористоводородной кислоты до значения рН 1,5, отличающийся тем, что экстрагирование проводят при температуре 65-75°С ступенчато в течение 2-3 ч при массовом соотношении гриб: экстрагент на первой ступени 1:6, а на второй ступени 1:4 или 1:6, при этом на первой ступени экстрагирование проводят в течение 1 ч с получением экстракта первой ступени экстрагирования и жома, затем жом экстрагируют с получением экстракта второй ступени экстрагирования, экстракты первой и второй ступеней объединяют.