Полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний
Изобретение относится к медицине и касается нового полифункционального комбинированного лекарственного средства широкого спектра действия на основе интерферона. Препарат в виде суппозитория включает синергидную комбинацию иммуномодулятора интерферона альфа-2b и растительного биостимулятора алоэ экстракта, содержит витамин Е, глицин, буферные растворы солей, тизоль, лецитин и твердый жир в качестве основы при заданном соотношении компонентов. Изобретение обеспечивает получение комбинированного лекарственного средства в виде стабильного в процессе длительного хранения суппозитория, обладающего стандартными физико-химическими, структурно-механическими, полифункциональными биологическими свойствами, повышенной биодоступностью и синергидной терапевтической эффективностью интерферона альфа-2b с биостимулятором растительного происхождения алоэ экстрактом. 5 табл., 3 ил.
Изобретение относится к медицине и к фармацевтической промышленности и касается нового полифункционального комбинированного лекарственного средства широкого спектра действия на основе интерферона, а именно суппозитория ректального для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения инфекционных вирусных заболеваний. Лекарственное средство содержит синергидную комбинацию иммуномодулятора интерферона альфа-2b с натуральным биостимулятором алоэ экстрактом. В состав данного средства также входят глицин, тизоль, лецитин, витамин Е, буферный раствор и твердый жир в качестве суппозиторной основы.
Иммунная система - одна из важнейших систем нашего организма. Ее роль сложно переоценить, ведь именно иммунная система защищает наш организм от вредных факторов как внешней, так и внутренней среды, помогает нам справиться с множеством заболеваний.
Современный ритм жизни, состояние экологии и ряд других факторов отрицательно сказываются на иммунитете. Известно, что снижение иммунитета приводит к возникновению инфекционных заболеваний, трудно поддающихся лечению и зачастую усугубленных развитием осложнений или формированием жизнеугрожающих состояний.
В терапии различных инфекционных заболеваний используется достаточно широкий ассортимент лекарственных средств, воздействующих на иммунную систему, среди наиболее перспективных - препараты интерферона. Интерфероны широко применяются для коррекции и лечения хронических вирусных заболеваний печени и являются единственными противовирусными препаратами, которые снижают риск формирования цирроза печени и трансформацию его в гепатоцеллюлярную карциному [Блохина Н.П. Новые стратегии интерферонотерапии больных хроническим гепатитом С // Вирусные гепатиты. 1999. Т.2. №6. С.11-18; Ариненко Р.Ю., Аникин В.Б., Головкин В.И. Система интерферона: первая линия защиты организма // Terra Medica. 1997. №4. С.11-14].
Значительные успехи для лечения иммунодефицитных состояний, усугубленных различными клиническими патологиями, достигнуты в области разработки лекарственных средств на основе человеческого интерферона альфа-2b, при производстве которого используют технологии рекомбинантной ДНК, что значительно удешевляет производство, а также сводит к нулю вероятность передачи какой-либо инфекции от донора.
Признано, что количество побочных эффектов снижается при ректальном использовании лекарственных средств. В частности, при таком способе введения не происходит выработки антител к интерферону, значительно снижающих эффективность терапии.
Известно лекарственное средство Кипферон на основе интерферона человеческого рекомбинантного альфа-типа с комплексным иммуноглобулиновым препаратом, содержащим иммуноглобулины классов А, М, G, и обладающее противовирусной и иммуномодулирующей активностью, которые могут быть использованы при лечении широкого спектра вирусных заболеваний [Патент №2073522 RU, МПК А61К 9/02. Лекарственный препарат противовирусного действия].
Препарат содержит антитела, получаемые из крови человека, что может привести к потенциальной контаминации его человеческими вирусами или другими агентами донора.
Известно лекарственное средство Генферон, содержащее природный интерферон или рекомбинантный интерферон альфа-, или бета-, и/или гамма-типов и таурин (тауфон), а также вспомогательные вещества в определенном соотношении [Патент №2201212 RU, МПК А61К 9/00. Суппозитории, обладающие иммуномодулирующим, противовирусным, противобактериальным, регенерирующим, репаративным, мембрано- и гепатопротекторным действием].
В состав Генферона входит анестезин, который может вызывать аллергические реакции и стойкое снижение чувствительности в месте применения.
Известно лекарственное средство для лечения тяжелых форм инфекционных заболеваний и смешанных инфекций. Оно содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-, и/или гамма-типов, антиоксидантный комплекс, витаминный комплекс, а также оротовую кислоту и/или орнитин или его производное - цитрулина малат, или глутоксим, антибактериальные, антимикотические вещества [Патент №2366450 RU, МПК А61К 38/21, А61К 31/195, А61К 31/355, А61К 31/375, А61К 31/525, А61Р 31/00, А61Р 37/04. Средство для лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний и смешанных инфекций].
Состав сложен, что увеличивает степень риска индивидуальной непереносимости препарата. Его действие обусловлено биологически активными компонентами, повышающими активность и обеспечивающими синергидное действие лекарственного средства, включает антибиотики и другие синтетические биологически активные вещества, обладающие рядом побочных эффектов. Суппозиторная форма хотя и приводит к уменьшению побочных действий, но не исключает формирования устойчивых к антибиотикам штаммов микрофлоры.
Следует, однако, отметить преимущества комбинированной лекарственной формы, которые, в свою очередь, можно разделить на субъективные и объективные.
К «субъективным» преимуществам относятся:
- удобство применения для пациента (избавляет его память и внимание от необходимости составлять сложные комбинации из различных лекарственных форм и принимать их «горстями» и т.д.);
- психологический и социальный комфорт (существенно проще применять одну единицу лекарственной формы, чем несколько, во время работы, в общественном месте и др.);
- экономический фактор - в большинстве случаев цена комбинированных препаратов ниже суммарной цены монопрепаратов.
«Объективные» достоинства комбинированных препаратов - потенцирование действия за счет:
- однонаправленного эффекта ингредиентов;
- уменьшения инактивации лекарственного вещества в организме (подавление биотрансформации);
- создание одним ингредиентом условий для проявления эффекта другого;
- снижение риска побочных эффектов;
- моделирование естественных процессов в организме.
Проблемы лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, связанные со снижением иммунитета и развитием осложнений, обусловливают целесообразность разработки новых комплексных препаратов синергидного действия.
Известно лекарственное средство Виферон, содержащее генно-инженерный интерферон альфа-2, антиоксиданты - аскорбиновую кислоту и альфа-токоферол [Патент №2024253 RU, МПК А61К 9/02. Ректальные свечи и устройство для введения ректальных свечей в полость организма]. Средство может быть использовано для лечения различных заболеваний, при которых эффективны препараты интерферона, в том числе вирусного гепатита, ОРВИ, ревматоидного артрита, менингитов. Показано, что специфическая активность интерферона существенно возрастает в присутствии антиоксидантов. Данное лекарственное средство принято как ближайший аналог (прототип).
Второй заявленный в патенте объект - устройство обеспечивает сразу три функции: оно является формой для разливки свечей, их хранения и введения больному.
К недостаткам группы решений можно отнести: усложнение препаративной формы лекарственного средства для целей изготовления и удорожание лекарства за счет применения для его введения одноразового специального устройства, что хотя и препятствует попаданию средства на кожу и способствует снижению микробной контаминации организма больного в процессе введения препарата, однако не решает проблемы неизбежного снижения устойчивости слизистых оболочек к действию повреждающих агентов (чаще всего синтетического происхождения) и не обладает собственным ресурсом противомикробного действия. В то же время не указаны сроки хранения заявленного состава (т.е. соответствие требованиям фармакопеи) вне использования заявленного устройства.
В настоящее время все больший интерес клиническая медицина проявляет к лекарственным средствам растительного происхождения, обладающим достаточной эффективностью и минимально проявляющим токсические свойства. Находят широкое применение в комплексной терапии многих заболеваний биогенные стимуляторы, способные при введении в организм оказывать стимулирующее влияние и ускорять процессы регенерации и в то же время являющиеся малотоксичными.
Исходя из изложенного очевидна целесообразность разработки суппозиторных форм с улучшенной специфической активностью иммуномодуляторов совместно с натуральными биостимуляторами растительной природы для лечения тяжелых инфекционных заболеваний.
Задачей настоящего изобретения является разработка полифункционального комбинированного лекарственного средства для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний на основе комбинации интерферона альфа-2b с биостимулятором растительного происхождения, обладающего заданными и соответствующими требованиям фармакопеи физико-химическими, структурно-механическими и биологическими свойствами, с улучшенной специфической активностью и эффективностью препарата, с повышенной биодоступностью.
Сущность изобретения состоит в экспериментально обоснованном подборе компонентов и их концентраций, обладающих необходимыми свойствами для обеспечения препарата заданными характеристиками, подтверждении технологических возможностей реального осуществления найденного решения.
Техническим результатом является получение комбинированного лекарственного средства в виде стабильного в процессе длительного хранения суппозитория, обладающего стандартными физико-химическими, структурно-механическими, полифункциональными биологическими свойствами, повышенной биодоступностью и синергидной терапевтической эффективностью интерферона альфа-2b с биостимулятором растительного происхождения алоэ экстрактом.
Технический результат достигается тем, что суппозиторная масса также содержит эффективные количества природного антиоксиданта и эмульгатора и вспомогательных веществ, обладающих определенной терапевтической активностью и способностью улучшать технологические характеристики действующих субстанций. В качестве вспомогательных веществ в состав заявляемого средства входят промотор всасывания действующих веществ, стабилизатор активности интерферона, природный эмульгатор и буферный раствор солей. Полученное лекарственное средство характеризуется стабильностью физико-химических и биологических свойств, их полифункциональностью, улучшением переносимости, снижением токсичности, увеличением биодоступности, эффективности, увеличением срока хранения.
Полифункциональный препарат на основе синергидной комбинации иммуномодулятора интерферона альфа-2b и биостимулятора алоэ экстракта, а также витамина Е содержит вспомогательные вещества, стабилизирующие интерферон, такие как глицин и буферные растворы солей, тизоль и эмульгатор лецитин, увеличивающие биодоступность средства, и твердый жир в качестве суппозиторной основы при следующих соотношениях компонентов для получения суппозитория массой 1,45 г (г):
| Интерферон человеческий рекомбинантный | |
| альфа-2b | 400000 МЕ-675000 ME |
| Алоэ экстракт сухой | 0,05-0,07 |
| Витамин Е | 0,04-0,06 |
| Глицин | 0,014-0,016 |
| Буферный раствор | 0,100-0,104 |
| Лецитин | 0,012-0,016 |
| Тизоль | 0,04-0,06 |
| Твердый жир | остальное |
Описание изобретения иллюстрировано таблицами 1-5 и фиг.1-3.
Фиг.1 - спектр ЯМР 1Н твердого жира (произв. Loders Croklaan, Голландия).
Фиг.2 - спектр ЯМР 1Н суппозиториев комбинированного состава.
Фиг.3 - кривые «доза - ответ» дифференциальные (а) и интегральные (б); слева - фармакологический ответ; справа - токсический ответ.
В таблице №1 представлены составы модельных смесей заявляемого средства.
Рекомбинантный человеческий интерферон альфа-2b представляет собой водорастворимый белок с молекулярной массой около 19300 Да. Его получают из клона Escherichia coli, содержащего плазмидный гибрид, полученный методом генной инженерии, включающий в себя ген интерферона альфа-2b из лейкоцитов человека. Интерферон действует в нескольких направлениях. Во-первых, он оказывает влияние на клетки, соседние с инфицированной, запуская в них цепь событий, приводящих к подавлению синтеза вирусных белков. Вторым направлением действия интерферонов является стимуляция иммунной системы для борьбы с вирусами. Интерферон вызывает и целый ряд других биологических эффектов, в том числе подавляет размножение клеток. Недавние исследования показали, что в определенных условиях он может препятствовать развитию злокачественных новообразований.
Высокий профилактический и лечебный эффект в отношении многих вирусных и бактериальных инфекций показали препараты с основным действующим веществом - интерферон альфа. Выяснилось, что интерферон альфа обладает уникальной способностью почти мгновенно запускать механизмы уничтожения вирусов, патогенных бактерий и грибов, аллергенов и других антигенов. Благодаря альфа-интерферону обеспечивается координация действий различных клеток иммунной системы, останавливающих рост и размножение инфекционных агентов. Интерферон альфа предотвращает и замедляет действие T-супрессоров, подавляющих иммунный ответ В-лимфоцитов и других Т-лимфоцитов на антигены. Интерферон альфа за счет увеличения количества рецепторов на мембране иммунных клеток усиливает процесс захвата и поглощения ими чужеродных агентов, активирует выработку специфических антител, разрушающих антигены. Интерферон альфа участвует в формировании механизма защиты против внутриклеточных возбудителей. Под его воздействием усиливается образование белков на клеточной мембране, тем самым улучшается процесс распознавания и уничтожения антигенов Т-клетками. Альфа интерферон активирует факторы, повышающие вероятность того, что чужеродные агенты будут распознаны иммунными клетками, а также способствуют быстрому выведению антигенов из организма. В результате укрепляется иммунитет и возрастает устойчивость организма к инфекции, происходит замедление или остановка развития онкологического процесса.
На сегодняшний день общепризнано, что альфа-интерфероны наиболее эффективны при лечении хронических вирусных заболеваний, они являются единственными противовирусными препаратами, которые снижают риск формирования цирроза печени и трансформацию его в гепатоцеллюлярную карциному. Препараты рекомбинантного альфа-2b интерферона востребованы при лечении больных гриппом и другими острыми респираторными заболеваниями [Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитации больных / Под ред. С.С.Афанасьева [и др.]. М., 2005].
Наиболее часто употребляемым биогенным стимулятором является экстракт алоэ. Он оказывает адаптогенное, общетонизирующее, слабительное, антисептическое и желчегонное действие. Улучшает клеточный метаболизм, трофику и регенерацию тканей, повышает общую неспецифическую резистентность организма и устойчивость слизистых оболочек к действию повреждающих агентов, ускоряет процессы регенерации. Алоэ воздействует на систему иммунитета, активируя макрофаги, вызывает высвобождение интерферонов и интерлейкинов. Обладает некоторой противомикробной активностью в отношении стрептококков, стафилококков, брюшнотифозной и дизентерийной палочек, протея. Стимулирует защитные функции гранулоцитов, возбуждает аппетит. Повышает энергетические запасы в сперматозоидах и усиливает их подвижность. Алоэсодержащие препараты широко применяются во многих областях медицины (гинекология, стоматология, дерматология, хирургия, терапия, иммунология) [Олейников Д.Н., Зилфикаров И.Н., Ибрагимов Т.А. Исследование химического состава алое древовидного (AloeArborescensMill.), 2010. №3. С.77-82].
В состав заявленного средства алоэ экстракт введен как вещество, повышающее специфическую активность интерферона. Было проведено изучение специфической активности в зависимости от состава комбинированных суппозиториев в сравнении с суппозиториями, содержащими в качестве активной субстанции только интерферон альфа-2b. В эксперименте было установлено, что противовирусная активность образца заявляемого средства почти на 40% превышает противовирусную активность образца №1, содержащего только интерферон альфа-2b (См. таблицу 2).
Определение специфической противовирусной активности
Стандартный образец:
- международный стандарт Interferon alpha 2b, (Human r DNA derived), NIBSC Code: 95/566, или стандартный образец предприятия (СОП), противовирусная активность которого установлена относительно Международного стандарта Interferon alpha 2b, (Human r DNA derived), NIBSC Code: 95/566 при доверительной вероятности 0,95.
Индикаторный вирус:
- вирус везикулярного стоматита, штамм Индиана, депонированный в Институте вирусологии им. Д.И.Ивановского (номер в коллекции ГКВ-29).
Противовирусную активность препарата определяют в сравнении со стандартным образцом. Разведение Международного стандарта Interferon alpha 2b проводят в соответствии с инструкцией.
Для определения специфической активности препарата подготавливают 96-луночные планшеты культуральные с культурой клеток для титрования.
За титр интерферона принимают величину, обратную разведению препарата, в котором клеточная культура в 50% лунок оказалась полностью защищенной от цитопатического действия вируса.
Витамин Е включает группу соединений (токоферолы и токотриенолы), обладающих активностью α-токоферола [Блажеевич Н.В., 1984].
Жирорастворимый витамин, функция которого до конца остается невыясненной. Как антиоксидант тормозит развитие свободнорадикальных реакций, предупреждает образование перекисей, повреждающих клеточные и субклеточные мембраны, что имеет важное значение для развития организма, нормальной функции нервной и мышечной систем, предупреждает гемолиз эритроцитов, тормозит окисление ненасыщенных жирных кислот. Нехватка витамина Е может служить одной из причин вялости и малокровия.
В состав заявленного лекарственного средства витамин Е введен как вещество, предотвращающее отрицательное действие свободных радикалов в организме и возникновение процессов окисления твердого жира при хранении суппозиториев. Изучалась стабильность физико-химических показателей суппозиториев в зависимости от концентрации витамина Е. Результаты опытов представлены в таблице №3.
Данные таблицы 3 свидетельствуют о влиянии глицина и витамина Е на стабильность действующих веществ в суппозиториях. Как видно из данных таблицы интерферон альфа-2b имеет тенденцию к снижению активности в процессе хранения. Уже через полгода хранения его активность падает на 10% в составе №1, где содержатся минимальные количества глицина и витамина Е. Наилучшую сохранность интерферона альфа-2b и гликозидов антраценпроизводных алоэ-экстракта в пересчете на алоэ-эмодин обеспечивает комбинация глицина и витамина Е в сочетании 0,015 г и 0,05 г, соответственно. Так через 15 месяцев хранения в составах №3 и №10 содержание интерферона альфа-2b по сравнению с исходным уменьшилось незначительно. Аналогичная зависимость выявлена и для алоэ-эмодина.
Глицин - простейшая алифатическая аминокислота, является регулятором обмена веществ, нормализует и активирует процессы защитного торможения в центральной нервной системе, уменьшает психоэмоциональное напряжение, повышает умственную работоспособность. В состав заявляемого лекарственного средства, помимо терапевтических свойств, глицин введен в качестве стабилизатора активности интерферона (см. таблицу 1).
Лецитин - это натуральный эмульгатор, позволяет получать устойчивые эмульсии в системах масло-вода. Состоит из сложных эфиров аминоспирта холина и диглицеридфосфорных кислот; является важнейшим представителем фосфолипидов. Лецитин обладает мощным антиоксидантным действием, предупреждает образование высокотоксичных свободных радикалов в организме. При дефиците лецитина снижается эффективность воздействия лекарственных препаратов. В состав заявляемого лекарственного средства лецитин введен как эмульгатор. В опытах in vitro изучалось влияние лецитина на скорость высвобождения действующих веществ из суппозиториев. Следует отметить, что при разработке состава и технологии получения комбинированных суппозиториев заданная концентрация интерферона альфа-2b в готовом продукте очень мала (500000 МЕ/суппозиторий, что соответствует 0,001182 г). Определение концентрации интерферона альфа-2b в диализате затруднительно, так как количественное определение по специфической активности является затратным и трудоемким, и недостаточна чувствительность методики ЯМР-спектроскопии. Поэтому при выборе концентрации лецитина в суппозиториях оценивали степень высвобождения действующих веществ (алоэ-эмодин) алоэ экстракта в диализат, при этом отбор проб проводили через 60 минут после начала диализа. Это связано также с низким содержанием алоэ экстракта в суппозиториях и с чувствительностью метода количественного определения. Кроме того оценивались также физико-химические показатели качества суппозиториев в зависимости от вида применяемых эмульгаторов. Результаты исследования представлены в таблице 4.
Тизоль® - оригинальный отечественный препарат, не имеющий аналогов. Является проводником лекарственных средств, обеспечивает проводимость через кожу, слизистые и другие биологические ткани на глубину до 8 см. Служит основой для приготовления мягких лекарственных форм, хорошо сочетается с лекарственными веществами, доставляет в патологический очаг внесенное в него лекарственное вещество, не разрушая его, а полностью высвобождая в неизменном виде. Тизоль® обладает противовоспалительным, дегидратирующим, протекторным, противоотечным, местным анальгезирующим, увлажняющим, противозудным действием, ускоряет репаративные процессы. Важной технологической особенностью тизоля является обеспечение микробиологической чистоты и стерильности лекарственных композиций, что исключает необходимость введения антимикробных консервантов, которые могут вызывать нежелательные побочные эффекты. Кроме того, тизоль значительно увеличивает сроки хранения лекарственных композиций и сокращает сроки лечения по сравнению с традиционными методами лечения (см. таблицы №3 и №5).
Учитывая физико-химические и терапевтические свойства используемых компонентов и благодаря экспериментально найденному оригинальному их сочетанию и соотношению при разработке заявляемого средства в виде суппозиториев, становится возможным достичь высокой эффективности и стабильности заявленного лекарственного средства.
Таким образом, отличительной особенностью предлагаемого лекарственного средства в виде суппозиториев является именно сочетание иммуномодулятора интерферона альфа-2b и натурального биостимулятора растительного происхождения алоэ экстракта, а также комплекса веществ с определенными свойствами, повышающими специфическую активность, терапевтическую эффективность и стабильность лекарственной формы в процессе хранения, и которое ранее не использовалось в медицинской практике.
Такое сочетание позволило получить стабильное полифункциональное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и для лечения целого ряда тяжелых инфекционных заболеваний с осложнениями различной тяжести, включая онкологические.
Препарат изготавливают в форме суппозиториев традиционным методом в соответствии с «Фармацевтической технологией: Технология лекарственных форм», 2-е изд., Москва: Издательский центр «Академия», 2006.
Технология производства суппозиториев сводится к последовательному добавлению активных компонентов в основу, что значительно упрощает процесс производства и обеспечивает качество получаемого продукта ввиду снижения количества критических параметров процесса.
Для обеспечения стабильности интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного необходимо использование буферного раствора, содержащего натрия гидрофосфат додекагидрат (ГОСТ 4172-76) и натрия дигидрофосфат дигидрат (ГОСТ 245-76).
Учитывая результаты исследований при выборе состава, технология производства разрабатываемых суппозиториев основывалась на методе выливания. Способ выливания в настоящее время в России используется чаще других ввиду несложного технологического оснащения.
Вспомогательные стадии, касающиеся подготовки воды очищенной и подготовки производства, осуществляются в соответствии с правилами GMP.
Использовали стерильные компоненты суппозитория: основу стерилизовали автоклавированием, водные растворы действующих веществ и буферный раствор стерилизовали путем стерилизующей фильтрации.
Заявленное средство было изучено методом спектроскопии ЯМР Н твердого тела (Фиг.1, Фиг.2). Изучалась возможность взаимодействия активных компонентов с указанной основой и друг с другом. Наблюдаемое отсутствие смещений сигналов протонов компонентов в спектрах суппозиториев можно считать доказательством отсутствия взаимодействия между всеми активными и вспомогательными компонентами готовой лекарственной формы, что в свою очередь свидетельствует о стабильности заявленного средства в процессе длительного хранения.
Было проведено доклиническое изучение заявленного средства. В системе доклинического исследования лекарственных препаратов первым этапом является оценка токсичности соединения для культуры клеток и лабораторных животных [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005].
Оценка токсичности заявленного средства проводилась на лабораторных животных: мышах массой от 19 г до 21 г и крысах. Общая продолжительность наблюдения за животными составляла 2 недели, причем в первые сутки после введения животные находились под непрерывным наблюдением. Регулярно фиксировали общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, частоту и глубину дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова, положение хвоста, потребление корма и воды, изменение массы тела. Регистрировали сроки развития интоксикации и гибели животных.
Исследование заявленного средства на токсичность проводили в центре диагностических исследований ЦКП (НОЦ) РУДН при финансовой поддержке Министерства образования и науки.
В лабораторных условиях устанавливали острую и хроническую токсичность заявляемого средства. Исследования строго регламентировались соответствующими нормативными документами, в которых определяется схема и порядок проведения опытов, условия содержания и рацион кормления животных, их число, способы введения препаратов, время, объем вводимого препарата, продолжительность наблюдения, описание состояния животных и т.д.
При изучении острой токсичности устанавливали зависимость доли погибших мышей, % от дозы испытываемого средства (Фиг.3). По экспериментальной кривой «доза - ответ» определяли показатели: ЛД10 (доза, при которой гибнет 10% подопытных мышей) и ЛД50 (доза, при которой гибнет 50% подопытных мышей). В наших исследованиях для заявляемого средства ЛД50 определить для этих животных не представлялось возможным. Так мы вводили мышам внутривенно водную вытяжку из суппозитория. Вытяжку готовили следующим образом: один суппозиторий растворяли в 1 мл воды для инъекций при температуре 37°С в течение 15 минут. Затем фильтровали полученную смесь через бумажный фильтр и вводили мышам внутривенно и внутрибрюшинно при дозе интерферона более 10000000 ME на мышь. Мыши при этом остаются живы более 5 суток. (Тест-доза при контроле интерферона на токсичность составляет 1000000 ME / 0,5 мл физиологического раствора на мышь).
Определение хронической токсичности заявляемого средства проводили на 56 крысах мужского пола и 56 крысах женского пола при его ежедневном введении в течение 14 дней в большой дозе (4 суппозитория) и в малой дозе (1 суппозиторий). Животные были поделены на 8 групп. В таблице 3 представлена схема изучения хронической токсичности заявляемого средства. В течение эксперимента снимали следующие показатели: объем потребления животными корма и воды; динамику изменения массы тела, изменение общего состояния и поведения; гематологические и биохимические показатели и др.
Из результатов проведенного эксперимента следует, что заявляемое средство является не токсичным лекарственным средством, хорошо переносится лабораторными животными, так как при его введении не наблюдалось видимых отклонений в поведении животного и его физиологического состояния.
Таким образом, отличительной особенностью предлагаемого лекарственного средства в виде суппозиториев является именно сочетание и количественное соотношение иммуномодулятора интерферона альфа-2b и натурального биостимулятора растительного происхождения алоэ экстракта, а также комплекса веществ с определенными свойствами, повышающими специфическую активность, терапевтическую эффективность и стабильность лекарственной формы в процессе хранения, обеспечивающими низкую токсичность препарата. Лекарственное средство не включает антимикробных консервантов, содержит натуральные антиоксидант витамин Е и эмульгатор лецитин. Оригинальный отечественный препарат тизоль повышает биодоступность и стабильность суппозиториев в процессе хранения.
Лекарственное средство реализуемо в экспериментально подобранном соотношении компонентов, соответствует требованиям фармакопеи и ранее не использовалось в медицинской практике.
| Таблица 1 | ||||||||||
| Составы композиций при выборе рецептуры заявляемого средства | ||||||||||
| Наименование сырья | № состава | |||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
| ИФН альфа-2b человеческий рекомбинантный, тыс. ME | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
| Алоэ экстракт сухой, г | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,250 | 0,06 | 0,06 |
| Глицин, г | 0,005 | 0,01 | 0,015 | 0,005 | 0,005 | 0,01 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 |
| Витамин Е, г | 0,005 | 0,01 | 0,05 | 0,05 | 0,01 | 0,005 | 0,005 | 0,01 | 0,01 | 0,05 |
| Тизоль, г | 0 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| Раствор буферный*, г | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 | 0,012 |
| Лецитин, г | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0,014 |
| Твердый жир, г | 1,399 | 1,384 | 1,294 | 1,304 | 1,344 | 1,339 | 1,334 | 1,104 | 1,289 | 1,249 |
| Примечание: * Раствор буферный натрия гидрофосфат додекагидрат и натрия дигидрофосфат дигидрат |
| Таблица 2 | ||
| Противовирусная активность препаратов в одном суппозитории | ||
| № образца | Наименование ингредиентов | Активность, ME* |
| 1 | Интерферон альфа-2b (буферный раствор), лецитин, твердый жир | 606000 |
| 2 (Заявля- емое средство) |
Интерферон альфа-2b, (буферный раствор), алоэ экстракт сухой, тизоль, глицин, витамин Е, лецитин, твердый жир | 849333 |
| Таблица 3 | |||||||||||||
| Зависимость стабильности от состава композиции (от концентрации стабилизатора, антиоксиданта и промоутера всасывания) | |||||||||||||
| Срок наблюде- ния |
Определяемое количество интерферона альфа-2b в одном суппозитории должно быть 500 (от 400 до 675) тыс. ME (Определение противовирусной активности на культуре клеток) | Определяемое количество алоэ-эмодина (ВЭЖХ)*, мг/суппозиторий | |||||||||||
| № состава | № состава | ||||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 8 | 9 | 10 | |
| Свежеприг. | 435 | 465 | 510 | 490 | 450 | 450 | 460 | 450 | 450 | 500 | 250 | 63,0 | 65,0 |
| 6 месяцев | 400 | 438 | 500 | 485 | 420 | 410 | 425 | 430 | 420 | 500 | 210 | 62,0 | 62,4 |
| 12 месяцев | 370 | 395 | 500 | 480 | 390 | 380 | 387 | 400 | 400 | 500 | 210 | 61,7 | 62,3 |
| 15 месяцев | 350 | 385 | 500 | 475 | 380 | 345 | 342 | 400 | 388 | 495 | 200 | 61,5 | 62,3 |
| * не указаны пределы количественного содержания алоэ-эмодина в суппозитории, так как оно разное в зависимости от состава композиции |
| Таблица 4 | ||||
| Выбор поверхностно-активных веществ | ||||
| Наименование ПАВ | Показатели качества | |||
| Температура плавления, °С | Время полной деформации, мин | Твердость, кг/суппозит. | % Высвобождения действующих веществ (алоэ-эмодина) из суппозиториев через 2 часа после начала диализа через полупроницаемую мембрану в опытах (in vitro) (метод ВЭЖХ) | |
| Эмульгатор №1 | 37,2±0,1 | 12,4±0,15 | 4,2±0,2 | 51,3±1,3 |
| Эмульгатор №2 | 37,1±0,3 | 13,23±0,17 | 4,2±0,4 | 54,6±1,8 |
| Твин-80 | 36,2±0,2 | 4,15±0,26 | 3,2±0,1 | 65,0±1,2 |
| Цетеарет-25 | 36,6±0,5 | 6,46±0,14 | 4,0±0,5 | 63,9±0,9 |
| Gelucire 44/14 | 36,7±0,2 | 5,10±0,54 | 3,5±0,2 | 62,2±1,1 |
| Lanette SX | 36,8±0,5 | 4,26±0,31 | 3,7±0,1 | 68,2±0,8 |
| Лецитин | 36,2±0,1 | 3,17±0,22 | 2,9±0,1 | 75,2±0,5 |
| Без эмульгатора | 36,9±0,3 | 9,35±0,47 | 3,9±0,8 | 49,2±1,6 |
Полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний на основе интерферона альфа-2b, отличающееся тем, что оно выполнено в виде суппозиториев, включающих интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2b, алоэ экстракт сухой, буферный раствор, витамин Е, глицин, лецитин, тизоль и твердый жир при следующих соотношениях компонентов для получения суппозитория массой 1,45 г (г):
| Интерферон человеческий рекомбинантный | |
| альфа-2b | 400000 МЕ-675000 ME |
| Алоэ экстракт сухой | 0,05-0,07 |
| Витамин Е | 0,04-0,06 |
| Глицин | 0,014-0,016 |
| Буферный раствор | 0,100-0,104 |
| Лецитин | 0,012-0,016 |
| Тизоль | 0,04-0,06 |
| Твердый жир | остальное |
