Модулирующие апоптоз композиции с контролируемым высвобождением и способы лечения заболеваний уха

Изобретение относится к медицине и касается композиции для использования при лечении заболеваний уха путем внутрибарабанного введения в мембрану окна улитки или вблизи мембраны окна улитки, содержащей приемлемый для лечения уха термообратимый водный гель, содержащий полимер полиоксипропилена и полиоксиэтилена и антиапоптотический агент, причем замедленное высвобождение антиапоптического агента в улитку происходит в течение, как минимум, 4 дней. Изобретение обеспечивает постоянное замедленное пролонгированное высвобождение активного агента. 9 з.п. ф-лы, 26 пр. 5 ил., 8 табл.

 

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Позвоночные имеют пару ушей, размещенных симметрично на противоположных сторонах головы. Ухо служит как органом чувств, улавливающим звук, так и органом, поддерживающим равновесие и положение тела. Ухо, как правило, разделено на три части: наружное ухо, среднее ухо (или auris media) и внутреннее ухо (или auris interna).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем описании, в ряде примеров осуществления настоящего изобретения, рассмотрены композиции, способы производства, терапевтические методы, применение, комплекты и средства доставки с обеспечением контролируемого высвобождения антиапоптотического агента или проапоптотического агента, как минимум, к одной структуре или области уха. Изложенные в ряде примеров осуществления настоящего изобретения композиции с контролируемым высвобождением для доставки антиапоптотического агента или проапоптотического агента к уху. В ряде примеров осуществления настоящего изобретения объектом внимания является среднее ухо (или auris media). В некоторых примерах осуществления настоящего го изобретения объектом внимания является внутреннее ухо (или auris interna). В других примерах осуществления настоящего изобретения объектом внимания является как среднее ухо (auris media), так и внутреннее ухо (auris interna). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции с контролируемым высвобождением, кроме того, включают компонент с быстрым или немедленным высвобождением для доставки антиапоптотического агента или проапоптотического агента в требующую лечения структуру уха. Все композиции включают приемлемые для уха наполнители.

Кроме того, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложены композиции и устройства для лечения заболеваний уха, вышеупомянутые композиции и устройства, содержащие антиапоптотический агент или проапоптотический агент. Далее в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения заболеваний уха путем введения композиций с контролируемым высвобождением, содержащих антиапоптотический агент или проапоптотический агент, индивидууму, нуждающемуся в этом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ушным заболеванием является эксайтотоксичность, ототоксичность, пресбиакузис или их комбинации.

Также в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложены композиции и устройства для селективного индуцирования апоптоза в требующей лечения части уха, включающей среднее ухо (включая находящиеся в настоящем описании структуры) и/или внутреннее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры, например, улитку), вышеупомянутые композиции и устройства, содержащие проапоптотический агент. Кроме того, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложены композиции и устройства для селективного предупреждения апоптоза в обследуемой части уха, включающей среднее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры) и/или внутреннее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры, например, улитку), вышеупомянутые композиции и устройства, содержащие антиапоптотический агент.

Предложенные в настоящем описании композиции для лечения ушей и терапевтические методы обладают многочисленными преимуществами, которые превосходят ранее непризнанные ограничения композиций и терапевтических методов, описанных в известном уровне технологии.

Стерильность

Пространство внутреннего уха является изолированной средой. Эндолимфа и перилимфа являются статическими жидкостями и не находятся в контакте с кровеносной системой. «Кровь-лабиринт» барьер (BLB), который включает «кровь-эндолимфа» барьер и «кровь-перилимфа» барьер, состоит из непроницаемых перегородок между специализированными эпителиоцитами в пространствах лабиринта (то есть, вестибулярном и улитковом пространствах). Наличие BLB ограничивает доставку активных агентов (например, антиапоптотического агента или проапоптотических агентов) к изолированной микросреде внутреннего уха. Слуховые волосковые клетки погружены в эндолимфатические или перилимфатические жидкости, и кохлеарная рециркуляция ионов калия важна для функции волосковой клетки. При инфицировании внутреннего уха происходит поступление лейкоцитов и/или иммуноглобулинов (например, в ответ на микробную инфекцию) в эндолимфу и/или перилимфу, и ионный композиция жидкостей внутреннего уха нарушается под действием втекания лейкоцитов и/или иммуноглобулинов. В некоторых случаях изменение ионного состава жидкостей внутреннего уха приводит к потере слуха, потере равновесия и/или окостенению слуховых структур. В некоторых случаях ничтожно малые количества пирогенов и/или микробов вызывают инфекции и ассоциированные физиологические изменения в изолированной микросреде внутреннего уха.

Из-за восприимчивости внутреннего уха к инфекциям для ушных композиций требуется уровень стерильности, который до настоящего времени не был установлен в известном уровне техники. В настоящем описании представлены композиции для лечения ушей, стерильность которых обеспечена в соответствии со строгими требованиями стерильности и которые пригодны для введения в среднее и/или внутреннее ухо. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения пригодные для лечения ушей композиции, приведенные в описании, в основном не содержат пирогены и/или микробы.

Совместимость со средой внутреннего уха

В настоящем описании рассмотрены композиции для лечения ушей с ионным балансом, который совместим с перилимфой и/или эндолимфой и не вызывает изменения кохлеарного потенциала. В отдельных примерах осуществления настоящего изобретения осмолярность/осмоляльность данных композиций регулируется, например, путем использования применимых концентраций соли (например, концентрации поваренных солей) или использования агентов тоничности, которые представляют эндолимфа-совместимые и/или перилимфа-совместимые композиции (то есть, изотонический относительно эндолимфы и/или перилимфы). В некоторых случаях эндолимфа-совместимые и/или перилимфа-совместимые композиции, приведенные в данном описании, вызывают минимальное нарушение среды внутреннего уха и минимальный дискомфорт (например, головокружение) у пациента (например, человека) после введения. Кроме того, композиции включают полимеры, биоразлагаемые и/или диспергируемые, и/или иным образом нетоксичные по отношению к среде внутреннего уха. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции не содержат консерванты и вызывают минимальное нарушение (например, изменение рН или осмолярности, раздражение) в слуховых структурах. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают антиоксиданты, нераздражающие и/или нетоксичные для ушных структур.

Частота введения препарата

Существующий стандарт лечения требует в отношении ушных композиций многократных введений капель или инъекций (например, внутрибарабанные инъекции) в течение нескольких дней (например, до двух недель), включая графики многократных инъекций в день. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения ушей - это композиции с контролируемым высвобождением, которые вводятся при более низкой частоте дозирования по сравнению с существующим стандартом лечения. В некоторых случаях, когда ушная композиция вводится с помощью внутрибарабанной инъекции, уменьшенная частота введения снижает дискомфорт, вызванный многократными внутрибарабанными инъекциями у людей, которые проходят лечение болезни, нарушения или состояния среднего и/или внутреннего уха. В некоторых случаях уменьшенная частота введения внутрибарабанных инъекций снижает риск необратимого повреждения (например, перфорации) барабанной перепонки. Приведенные в данном описании композиции обеспечивают постоянное, замедленное, пролонгированное, отсроченное или пульсирующее высвобождение активного агента в среду внутреннего уха и, таким образом, предотвращается любая нестабильность воздействия лекарственного средства при лечении заболеваний уха.

Терапевтический индекс

Приведенные в данном описании композиции для лечения ушей вводятся в наружный слуховой проход или в преддверие уха. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения доступ к вестибулярному и улитковому аппарату происходит через среднее ухо (например, мембрану окна улитки, овальное окно/опорную поверхность стремени, кольцевые связки и через ушную каспулу/височную кость). При введение в ухо указанных в описании композиций исключается токсичность, связанная с системным введением (например, гепатотоксичность, кардиотоксичность, желудочно-кишечные побочные эффекты, почечная токсичность) активных агентов. В некоторых случаях локализованное введение в ухо дает возможность активному агенту достичь цели (например, внутреннего ухо) при отсутствии системного накопления активного агента. В некоторых случаях местное введение в ухо обеспечивает более высокий терапевтический индекс активному агенту, который в противном случае давал бы дозолимитирующую системную токсичность.

Предупреждение дренажа в слуховую трубу

В некоторых случаях недостатком жидких композиций является их предрасположенность стекать в слуховую трубу, что приводит к быстрому выведению композиции из внутреннего уха. В настоящем описании, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения, предлагаются композиции для лечения ушей, включающие полимеры, которые превращаются в гель при температуре тела и остаются в контакте с обрабатываемыми слуховыми поверхностями (например, окном улитки) в течение длительных периодов времени. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции также включают мукоадгезивное средство, которое позволяет композициям приклеиваться к поверхностям слизистой оболочки уха. В некоторых случаях композиции для лечения ушей, приведенные в данном описании, не допускают ослабления терапевтического эффекта по причине дренажа или вытекания активных агентов через слуховую трубу.

Описание некоторых примеров осуществления настоящего изобретения

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приводится описание композиции и устройства с контролируемым высвобождением для лечения заболеваний уха, включающие терапевтически эффективное количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента, приемлемый для лечения наполнитель с контролируемым высвобождением, а также приемлемая для уха основа.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения, также приводится, описание композиции и устройства для селективной индукции апоптоза в обрабатываемой части уха, включающей среднее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры) и/или внутреннее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры, например, улитку), вышеупомянутые композиции и устройства, включающие проапоптотический агент. В настоящем описании в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения также предложены композиции и устройства для селективного предупреждения апоптоза в требующей лечения части уха, включающей среднее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры) и/или внутреннее ухо (включая находящиеся в настоящем описании субструктуры, например, улитку), вышеупомянутые композиции и устройства, включающие антиапоптотический агент.

В одном из аспектов композиций и устройств, приведенных в описании, auris-приемлемый наполнитель с контролируемым высвобождением выбирается из группы: auris-приемлемый полимер, auris-приемлемый усиливающий вязкость агент, auris-приемлемый гель, auris-приемлемый краситель, auris-приемлемая пена, auris-приемлемая микросфера или микрочастица, auris-приемлемый гидрогель, auris-приемлемый формирующийся по месту пористый материал, auris-приемлемый отверждаемый при актиничном излучении гель, приемлемая для уха липосома, auris-приемлемая нанокаспула или наночастица, приемлемый для уха термообратимый гель или их комбинации. В других примерах осуществления настоящего изобретения приемлемый для уха усиливающий вязкость агент представляет собой целлюлозу, простой эфир целлюлозы, альгинат, поливинилпирролидон, эвкалипт, целлюлозный полимер или их комбинациями. В другом примере осуществления настоящего изобретения приемлемый для уха усиливающий вязкость агент присутствует в достаточном для обеспечения вязкости количестве от приблизительно 1000 до приблизительно 1000000 сантипуаз. В другом аспекте приемлемый для уха усиливающий вязкость агент присутствует в достаточном для обеспечения вязкости количестве в пределах от приблизительно 50000 до приблизительно 1000000 сантипуаз.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предлагаемые композиции рассчитаны на значение рН, которое гарантирует их совместимость с требующей лечения структурой уха. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем изобретении композиции рассчитаны на практическую осмоляльность и/или осмолярность, которая гарантирует поддержание гомеостаза требующей лечения структуры уха. Подходящая для перилимфы осмолярность/осмоляльность является фактической осмолярностью/осмоляльностью, которая поддерживает гомеостаз требующей лечения структуры уха при введении приведенных в описании фармацевтических композиций,

Например, осмолярность перилимфы составляет приблизительно 270-300 мосмоль/л, а приведенные в данном описании композиции факультативно разработаны для обеспечения практической осмолярности от приблизительно 150 до приблизительно 1000 мосмоль/л. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции обеспечивают практическую осмолярность в пределах от приблизительно 150 до приблизительно 500 мосмоль/л на целенаправленном участке воздействия (например, внутреннее ухо и/или перилимфа и/или эндолимфа). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции обеспечивают практическую осмолярность в пределах от приблизительно 200 до приблизительно 400 мосмоль/л на целенаправленном участке воздействия (например, внутреннее ухо и/или перилимфа и/или эндолимфа). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции обеспечивают практическую осмолярность в пределах от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/л на целенаправленном участке воздействия (например, внутреннее ухо и/или перилимфа и/или эндолимфа). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции обеспечивают подходящую для перилимфы осмолярность в пределах от приблизительно 150 до приблизительно 500 мосмоль/л, от приблизительно 200 до приблизительно 400 мосмоль/л или от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/л на целенаправленном участке воздействия (например, внутреннее ухо и/или перилимфа и/или эндолимфа). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции обеспечивают подходящую для перилимфы осмоляльность в пределах от приблизительно 150 до приблизительно 500 мосмоль/кг, от приблизительно 200 до приблизительно 400 мосмоль/кг или от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/кг на целенаправленном участке воздействия (например, внутреннее ухо и/или перилимфа и/или эндолимфа). Аналогично рН перилимфы составляет приблизительно 7,2-7,4, а рН данных композиций рассчитано (например, при использовании буферов) на обеспечение подходящего для перилимфы значения рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 9,0, от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0 или от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,6. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения рН композиций имеет значение в пределах от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,6. В некоторых примерах рН эндолимфы составляет приблизительно 7,2-7,9, а рН данных композиций рассчитано (например, при использовании буферов) на значения в пределах от приблизительно 5,5 до приблизительно 9,0, от приблизительно 6,5 до приблизительно 8,0 или от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,6.

В некоторых аспектах приемлемый для уха наполнитель с контролируемым высвобождением биоразлагается и/или биоэлиминируется (например, разлагается и/или выводится с мочой, калом или через другие пути выведения). В другом аспекте композиция с контролируемым высвобождением, кроме того, включает приемлемый для уха мукоадгезив, приемлемый для уха усилитель проникновения, или приемлемый для уха биоадгезив.

В одном из аспектов композиция с контролируемым высвобождением доставляется с помощью устройства доставки лекарственного средства, представляющего собой иглу и шприц, насос, устройство для микроинъекции и формирующегося по месту (по месту) пористого материала или их комбинаций. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент композиции с контролируемым высвобождением имеет ограниченное системное высвобождение или не имеет системного высвобождения, токсичен при системном введении, имеет плохие pK. характеристики или их комбинации.

В других аспектах антиапоптотический агент - это Akt, агонист Akt или его гомолог или имитатор; Bre, агонист Bre или его гомолог или имитатор; эритропоэтин, агонист эритропоэтина или его гомолог или имитатор; фортилин, агонист фортилина или его гомолог или имитатор; белок рекомбинантной FNK (например, FNK-TAT слитый белок); грелин, агонист грелина или его гомолог или имитатор; IAP (ингибитор апоптозного белка), агонист IAP или его гомолог или имитатор; киназа PI3, агонист киназы PI3 или ее гомолог или имитатор; сиртуин, агонист сиртуина или его гомолог или имитатор; ингибитор каскада подачи сигнала MAPK/JNK; ингибитор представителя семейства Bcl-2; ингибитор Fas; ингибитор NF-kB; ингибитор Р38; ингибитор Са²⁺ каналов; ингибитор НО-1; ингибитор каспазы; ингибитор кальпаина; р53; ингибитор семейства Src протеинкиназ; фактор «трилистника», агонист фактора «трилистника» или его гомолог или имитатор; Hsp, агонист Hsp или его гомолог или имитатор; аполипопротеин, агонист аполипопротеина или его гомолог или имитатор; или их комбинации.

В других аспектах проапоптотический агент является антагонистом Akt; антагонистом Bre; антагонистом эритропоэтина; антагонистом фортилина; антагонистом грелина; антагонистом IAP (ингибитор апоптозного белка); антагонистом киназы PI3; антагонистом сиртуина; агонистом каскада подачи сигнала MAPK/JNK; агонистом представителя семейства Bcl-2; агонистом Fas; ингибитором NF-kB, агонистом Р38, агонистом Са²⁺ каналов, агонистом НО-1, агонистом каспазы, агонистом кальпаина, р53, агонистом семейства Src протеинкиназ, или их комбинациями.

В другом аспекте антиапоптотический агент или проапоптотический агент представляет собой соль или пролекарство антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В других аспектах антиапоптотический агент или проапоптотический агент - это миноциклин; SB-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4-метилсульфинил фенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); PD 169316 (4-(4-фторфенил)-2-(4-нитрофинил)-5-(4-пиридил)-1-имидазол); SB 202190 (4-(4-фторфенил)-2-(4-гидроксифенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); RWJ 67657 (4-[4-(4-фторфенил)-1-(3-фенилпропил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-3-бутан-1-ол); SB 220025 (5-(2-амино-4-пиримидинил)-4-(4-фторфенил)-1-(4-пиперидинлил)имидазол); D-JNKI-1 ((D)-hJIP_175-157-DPro-DPro-(D)-HIV-TAT_57-48); AM-111 (Auris); SP 600125 (антра[1,9-cd]пиразол6(2H)-он); JNK I ингибитор ((L)-HIV-TAT48-57-PP-JBD20); JNK ингибитор III ((L)-HIV-TAT47-57-ГАМК-c-Junδ33-57); AS 601245 (1,3-бензотиазол-2-ил(2-[[2-(3-пиридинил)этил]амино]-4пиримидинил)ацетонитрил); JNK ингибитор VI (H2N-RPKRPTTLNLF-NH2); JNK ингибитор VIII (N-(4-амино-5-циано-6-этоксипиридин-2-ил)-2-(2,5-диметоксифенил)ацетамид); JNK ингибитор IX (N-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидро-1-бензотиен-2-ил)-1-нафтамид); дикумарол (3,3'-метиленбис(4-гидроксикумарин)); SC-236 (4-[5-(4-хлорфенил)-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-ил]бензолсульфамид); СЕР-1347 (Cephalon); СЕР-11004 (Cephalon); синтетический белок, включающий, как минимум, часть Bcl-2 полипептида; рекомбинантный FNK; V5 (также известный как Вах ингибитор пептида V5); Вах блокатор каналов ((±)-1-(3,6-дибромокарбазол-9-ил)-3-пиперазин-1-ил-пропан-2-ол); Вах ингибирующий пептид Р5 (также известный как Вах ингибитор пептид Р5); Kp7-6; FAIM(S) (Fas апоптоз ингибирующая молекула короткая); FAIM(L) (Fas апоптоз ингибирующая молекула длинная); Fas:Fc; FAP-1; NOK2; F2051; F1926; F2928; ZB4; Fas М3 mAb; EGF; 740 Y-P; SC 3036 (KKHTDDGYMPMSPGVA); PI 3-киназа активатор (Santa Cruz Biotechnology, Inc.); Pam3Cys ((S)-(2,3-бис(пальмитоилокси)-(2RS)-пропил)-N-пальмитоил-(R)-Cys-(S)-Ser(S)-Lys4-OH, трихлоргидрат); Act1 (NF-kB активатор 1); анти-IkB антитело; ацетил-11-кето-b-босвеллевая кислота; андрографолид; фенэтил сложный эфир кофейной кислоты (САРЕ); глиотоксин; изохенелин (Isohelenin); связывающий пептид NEMO-связывающего домена (DRQIKIWFQNRRMKWKKTALDWSWLQTE); NF-kB ингибитор активации (6-амино-4-(4-феноксифенилэтиламино) хиназолин); NF-kB ингибитор активации II (4-метил-N1-(3-фенилпропил)бензол-1,2-диамин); NF-kB ингибитор активации III (3-хлоро-4-нитро-N-(5-нитро-2-тиазолил)-бензамид); NF-kB ингибитор активации IV ((Е)-2-фтор-4'-метоксистильбен); NF-kB ингибитор активации V (5-гидрокси-(2,6-диизопропилфенил)-1Н-изоиндол-1,3-дион); NF-kB SN50 (AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP); оридонин; партенолид; РРМ-18 (2-бензоиламино-1,4-нафтохинон); Ro 106-9920; сульфасалазин; TIRAP ингибитор пептид (RQIKIWFNRRMKWKKLQLRDAAPGGAIVS); витаферин А; вогонин; BAY 11-7082 ((Е)3-[(4-метилфенил)сульфонил]-2-пропеннитрил); BAY 11-7085 ((E)3-[(4-t-бутилфенил)сульфонил]-2-пропеннитрил); (Е) - каспаицин; ауротиомалат (ATM или AuTM); эводиамин; гипоэстоксид; IKK ингибитор III (BMS-345541); IKK ингибитор VII; IKK ингибитор X; IKK ингибитор II; IKK-2 ингибитор IV; IKK-2 ингибитор V; IKK-2 ингибитор VI; IKK-2 ингибитор (SC-514); IkB киназа ингибитор пептид; IKK-3 ингибитор IX; ARRY-797 (Array BioPharma); SB-220025 (5-(2-амино-4-пиримидинил)-4-(4-фторфенил)-1-(4-пиперидинлил)имидазол); SB-239063 (транс-4-[4-(4-фторфенил)-5-(2-метокси-4-пиримидинил)-1H-имидазол-1-ил]циклогексанол); SB-202190 (4-(4-фторфенил)-2-(4-гидроксифенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); JX-401 (-[2-метокси-4-(метилтио)бензоил]-4-(фенилметил)пиперидин); PD-169316 (4-(4-фторфенил)-2-(4-нитрофинил)-5-(4-пиридил)-1Н-имидазол); SKF-86002 (6-(4-фторфенил)-2,3-дигидро-5-(4-пиридинил)имидазо[2,1-b] тиазол дигидрохлорид); SB-200646 (N-(1-метил-1Н-индол-5-ил)-N'-3-пиридинил мочевина); CMPD-1(2'-фтор-N-(4-гидроксифенил)-[1,1'-бифенил]-4-бутанамид); ЕО-1428 ((2-метилфенил)-[4-[(2-амино-4-бромфенил)амино]-2-хлорфенил] метанон); SB-253080 (4-[5-(4-фторфенил)-2-[4-(метилсульфонил)фенил]-1Н-имидазол-4-ил]пиридин); SD-169 (1Н-индол-5-карбоксамид); SB-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4-метилсульфинил фенил)-5-(4-пиридил) 1Н-имидазол); TZP-101 (Tranzyme Pharma); TZP-102 (Tranzyme Phanna); GHRP-6 (гормон роста-высвобождающий пептид-6); GHRP-2 (гормон роста-высвобождающий пептид -2); EX-1314 (Elixir Pharmaceuticals); MK-677 (Merck); L-692,429 (бутанамид, 3-амино-3-метил-N-(2,3,4,5-тетрагидро-2-оксо-1-((2'-(1Н-тетразол-5-ил)(1,1'-бифенил)-4-ил)метил)-1Н-1-бензазепин-3-ил)-, (R)-); EP1572 (Aib-DTrp-DgTrp-CHO); дилтиазем; метаболиты дилтиазема; BRE (экспрессированный белок мозга и репродуктивных органов); верапамил; нимодипин; дилтиазем; омега-конотоксин; GVIA; амлодипин; фелодипин; лацидипин; мибефрадил; NPPB (5-нитро-2-(3-фенилпропиламино) бензойная кислота); флунаризин; эритропоэтин; пиперин; гемин; бразилин; z-VAD-FMK (бензилоксикарбонил -Val-Ala-Asp(ОМе)-фторметилкетон); z-LEHD-FMK (бензилоксикарбонил-Eeu-Glu(ОМе)-His-Asp(ОМе)-фторметилкетон); B-D-FMK (бок-аспартил(OMe)-фторметилкетон); Ac-LEHD-CHO (N-ацетил-Leu-Glu-His-Asp-CHO); Ac-IETD-СНО (N-ацетил-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO); z-IETD-FMK (бензилоксикарбонил-Ile-Glu(ОМе)-Thr-Asp(OMe)- фторметилкетон); FAM-LEHD-FMK (бензилоксикарбонил Leu-Glu-His-Asp-фторметилкетон); FAM-LETD-FMK (бензилоксикарбонил Leu-Glu-Thr-Asp-фторметилкетон); Q-VD-OPH (хинолин -Val-Asp-CH₂-O-Ph); XIAP; cIAP-1; cIAP-2; ML-IAP; ILP-2; NAIP; сурвивин; Bruce; IAPL-3; фортилин; лейпептин; PD-150606 (3-(4-иодофенил)-2-меркапто-(Z)-2- акриловая кислота); MDL-28170 (Z-Val-Phe-CHO); калпептин; ацетил-калпастатин; MG 132 (N-[(фенилметокси)карбонил]-L-лейцил-N-[(1S)-1-формил-3-метилбутил]-L-лейцинамид); MYODUR; BN 82270 (Ipsen); BN 2204 (Ipsen); AHLi-11 (Quark Pharmaceuticals), mdm2 белок, пифитрин-α (1-(4-метилфенил)-2-(4,5,6,7-тетрагидро-2-имино-3(2Н)-бензотиазолил)этанон); транс-стильбен; цис-стильбен; ресвератрол; пицеатаннол; рапонтин; деоксирапонтин; бутеин; халькон; изоликвиртиген; бутеин; 4,2',4'-тригидроксихалькон; 3,4,2',4',6'-пентагидроксихалькон; флавон; морин; физетин; лутеолин; кверцетин; кемпферол; апигенин; госсипетин; мирицетин; 6-гидроксиапигенин; 5-гидроксифлавон; 5,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон; 3,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон; 3,6,3',4'-тетрагидроксифлавон; 7,3',4',5'-тетрагидроксифлавон; 3,6,2',4'-тетрагидроксифлавон; 7,4'-дигидроксифлавон; 7,8,3',4'-тетрагидроксифлавон; 3,6,2',3'-тетрагидроксифлавон; 4'-гидроксифлавон; 5-гидроксифлавон; 5,4'-дигидроксифлавон; 5,7-дигидроксифлавон; даидзеин; генистеин; нарингенин; флаванон; 3,5,7,3',4'-пентагидроксифлаванон; пеларгонидин хлорид; цианидин хлорид; дельфинидин хлорид; (-)-эпикатехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); (-)-катехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); (-)-галлокатехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4',5') (+)-катехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); (+)-эпикатехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); хинокитиол (b-туяплицин; 2-гидрокси-4-изопропил-2,4,6-циклогептатриен-1-он); L-(+)-эрготионеин ((S)-а-карбокси-2,3-дигидро-N,N,N-триметил-2-тиоксо-1Н-имидазол4- этанаминий внутренняя соль); фенил сложный эфир кофейной кислоты; MCI-186 (3-метил-1-фенил-2-пиразолин-5-он); HBED (N,N'-Di-(2-гидроксибензил) этилендиамин -N,N'-диацетилуксусная кислота·H₂O); амброксол (транс-4-(2-амино-3,5-дибромбензиламино) циклогексан-HCl; и U-83836Е ((-)-2-((4-(2,6-ди-1-пирролидинил-4-пиримидинил)-1-пиперазинил метил)-3,4-дигидро-2,5,7,8-тетраметил-2Н-1-бензопиран-6-ол·2HCl); β-1'-5-метил- никотинамид-2'-дезоксирибоза; β-D-1'-5-метил- никотинамид-2'-дезоксирибофуранозид; β-1'-4,5-диметил-никотинамид-2'-дезоксирибоза; β-D-1'-4,5-диметил-никотинамид-2'-дезоксирибофуранозид; 1-нафтил РР1 (1-(1,1-диметилэтил)-3-(1-нафталинил)-1Н-пиразоло [3,4-d]пирамидин-4-амин); лавендастин А (5-[[(2,5-дигидроксифенил)метил][(2-гидроксифенил)метил]амино]-2-гидроксибензойная кислота); MNS (3,4-метилендиокси -b- нитростирол); РР1 (1-(1,1-диметилэтил)-1-(4-метилфенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пирамидин-4-амин); РР2 (3-(4-хлорфенил) 1-(1,1-диметилэтил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пирамидин-4-амин); KX1-004 (Kinex); KX1-005 (Kinex); KX1-136 (Kinex); KX1-174 (Kinex); KX1-141 (Kinex); KX2-328 (Kinex); KX1-306 (Kinex); KX1-329 (Kinex); KX2-391 (Kinex); KX2-377 (Kinex); ZD 4190 (Astra Zeneca; N-(4-бром-2-фторфенил)-6-метокси-7-(2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)хиназолин-4-амин); АР 22408 (Ariad Pharmaceuticals); AP 23236 (Ariad Pharmaceuticals); AP 23451 (Ariad Pharmaceuticals); AP 23464 (Ariad Pharmaceuticals); AZD 0530 (Astra Zeneca); AZM 475271 (M 475271; Astra Zeneca); дазатиниб (N-(2-хлор-6-метилфенил)-2-(6-(4-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-1-ил)-2-метилпирамидин-4-иламино)тиазол-5- карбоксамид); GN 963 (транс-4-(6,7-диметоксихиноксалин-2иламино)циклогексанол сульфат); босутиниб (4-((2,4-дихлор-5-метоксифенил)амино)-6-метокси-7-(3-(4-метил-1-пиперазинил)пропокси)-3-хинолинкарбонитрил); Hsp70; Hsp72; BiP (или Grp78); mtHsp70 (или Grp75); Hsp70-1b; Hsp70-1L; Hsp70-2; Hsp70-4; Hsp70-6; Hsp70-7; Hsp70-12a; Hsp70-14; Hsp10; Hsp27; Hsp40; Hsp60; Hsp90; Hsp104; Hsp110; Grp94; TFF1; TFF2; TFF3; ApoA; ApoB; ApoC; ApoD; ApoE, ApoH; молекула siRNA; или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой AM 111 (Auris).

Кроме того, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предлагается способ лечения заболевания уха, включающий введение предложенной композиции, как минимум, один раз в 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 дней; как минимум, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в пять недель или один раз в шесть недель; или, как минимум, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца, один раз в четыре месяца, один раз в пять месяцев, один раз в шесть месяцев, один раз в семь месяцев, один раз в восемь месяцев, один раз в девять месяцев, один раз в десять месяцев, один раз в одиннадцать месяцев, или один раз в двенадцать месяцев. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции с контролируемым высвобождением обеспечивают доставку пролонгированной дозы антиапоптотического агента или проапоптотического агента к внутреннему уху в промежутке между последовательными дозами композиции с контролируемым высвобождением. Таким образом, рассматривая только один пример, если новые дозы содержащего антиапоптотический агент или проапоптотический агент композиции с контролируемым высвобождением вводится путем внутрибарабанной инъекции в мембрану окна улитки один раз в 10 дней, композиция с контролируемым высвобождением обеспечивает доставку эффективной дозы антиапоптотического агента или проапоптотического агента к внутреннему уху (например, через мембрану окна улитки) в течение указанного 10-дневного периода.

В одном из аспектов композиция вводится таким образом, чтобы она контактировала с гребнем окна улитки, мембраной окна улитки или барабанной полостью. В одном из аспектов композиция вводится с помощью внутрибарабанной инъекции.

В настоящем описании представлена композиция или указанное устройство для использования в лечении заболевания уха или его состояния, характеризующегося апоптозом множества слуховых клеток, композиция,, включающая (устройство, включающее): терапевтически эффективное количество антиапоптотического агента, содержащего в основном медленно расщепляемые продукты; и в котором устройство доставки имеет две или больше характеристик из следующих:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу антиапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14% до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) стерилизованная вода, по необходимости, буферизованная для обеспечения значения рН в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,0;

(iv) антиапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц;

(v) температура гелеобразования от приблизительно 19°C до приблизительно 42°C;

(vi) менее чем приблизительно 50 колониеобразующих единиц (cfu=KOE) микробиологических агентов на грамм устройства доставки;

(vii) менее чем приблизительно 5 эндотоксиновых единиц (EU=ЭЕ) на кг веса тела пациента;

(viii) среднее время растворения приблизительно 30 часов; и

(ix) кажущаяся вязкость от приблизительно 100000 до приблизительно 500000 сП.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в данном описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу антиапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106; и

(iii) антиапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенная в настоящем описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу антиапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) антиапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц; и

(iv) температура гелеобразования от приблизительно 19 до приблизительно 42°C.

В настоящем описании представлена композиция или указанное устройство для использования в лечении ушного заболевания или состояния, характеризующегося дисфункцией множества слуховых клеток, включающие: терапевтически эффективное количество антиапоптотического агента, содержащего в основном медленно расщепляемые продукты; и в котором устройство доставки имеет две или больше характеристик из следующих:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу антиапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) стерилизованная вода, по необходимости, буферизованная для обеспечения значения рН в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,0;

(iv) антиапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц;

(v) температура гелеобразования от приблизительно 19 до приблизительно 42°C;

(vi) менее чем приблизительно 50 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробиологических агентов на грамм устройства доставки;

(vii) менее чем приблизительно 5 эндотоксиновых единиц (ЭЕ) на кг веса тела пациента;

(viii) среднее время растворения приблизительно 30 часов; и

(ix) кажущаяся вязкость от приблизительно 100000 до приблизительно 500000 сП.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу проапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) проапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу проапоптотического агента или его фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) проапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц и

(iv) температура гелеобразования от приблизительно 19 до приблизительно 42°C.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает практическую осмолярность в пределах от приблизительно 150 до 500 мосмоль/л. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает практическую осмолярность в пределах от приблизительно от 200 до 400 мосмоль/л. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает практическую осмолярность в пределах от приблизительно 250 до 320 мосмоль/л.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из указанной выше фармацевтической композиции или устройства в течение, как минимум, 3 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из указанной выше фармацевтической композиции или устройства в течение, как минимум, 5 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из описанной выше фармацевтической композиции или устройства в течение, как минимум, 10 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из описанной выше фармацевтической композиции или устройства в течение, как минимум, 14 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из описанной выше фармацевтической композиции или устройства в течение, как минимум, одного месяца.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде нейтральной молекулы, свободной кислоты, свободного основания, соли или пролекарства. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде нейтральной молекулы, свободной кислоты, свободного основания, соли или пролекарства или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде множества отдельных частиц, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в форме тонкодисперсных частиц. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде тонкодисперсных порошков.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 10% полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106 по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 15% полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106 по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 20% полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106 по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 25% полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106 по весу композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 1% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 2% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 3% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 4% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 5% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 10% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 15% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 20% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 25% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 30% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 40% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 50% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 60% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 70% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 80% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство включает приблизительно 90% антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли по весу композиции,

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство имеет значение рН в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,0. Указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство имеет значение рН в интервале от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство имеет значение рН в интервале от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,6.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство содержит менее 100 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробиологических агентов на грамм композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство содержит менее 50 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробиологических агентов на грамм композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство содержит менее 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробиологических агентов на грамм композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство содержит менее 5 эндотоксиновых единиц (ЭЕ) на кг веса тела пациента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство содержит менее 4 эндотоксиновых единиц (ЭЕ) на кг веса тела пациента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает температуру гелеобразования в интервале от приблизительно 19 до приблизительно 42°C. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает температуру гелеобразования в интервале от приблизительно 19 до приблизительно 37°C. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная выше фармацевтическая композиция или указанное устройство обеспечивает температуру гелеобразования в интервале от приблизительно 19 до приблизительно 30°C.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция или указанное устройство представляет собой приемлемый для уха термообратимый гель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочный сополимер биоразлагается и/или биоэлиминируется (например, сополимер выводится из организма с помощью процесса биоразложения с мочой, калом или подобными путями выведения). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает, кроме того, мукоадгезив. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство включает усилитель проникновения. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство дополнительно включает загуститель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство дополнительно включает краситель.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство дополнительно включает устройство доставки лекарства из группы: игла и шприц, насос, устройство для микроинъекции, тампон, формирующийся по месту (по месту) пористый материал, или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании фармацевтическая композиция или указанное устройство представляет собой фармацевтическую композицию или указанное устройство, где антиапоптотический агент или проапоптотический агент или их фармацевтически приемлемая соль имеет ограниченное системное высвобождение или не имеет системного высвобождения, системную токсичность, плохие pK характеристики или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент приведенных в описании фармацевтических композиций или устройств находится в форме нейтральной молекулы, свободного основания, свободной кислоты, соли, пролекарства или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент представленных в настоящем описании фармацевтических композиций или устройств вводится в форме фосфатного или сложноэфирного пролекарства. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические композиции для лечения уха или устройства включают один или несколько антиапоптотических агентов или проапоптотических агентов или их фармацевтически приемлемую соль, пролекарство или их комбинацию в виде агента с немедленным высвобождением.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические композиции для лечения уха или устройства, также включают дополнительный терапевтический агент. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дополнительный терапевтический агент представляет собой окисляющий агент, анестезирующий агент, аналгезирующий агент, антибиотик, противорвотный, противогрибковый, антимикробный агент, нейролептик (особенно из класса фенотиазина), антисептик, антивирусный, вяжущий, химиотерапевтический агент, коллаген, кортикостероид, диуретик, кератолитический агент, ингибитор синтазы оксида азота, их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические композиции для лечения уха или устройства являются фармацевтическими композициями или устройствами, в которых значение рН фармацевтической композициями или устройства составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,6.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения в приведенных в описании фармацевтических композиций или устройств отношение полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера, имеющего общую формулу Е106 Р70 Е106, к загустителю составляет от приблизительно 40:1 до приблизительно 5:1. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения загуститель представляет собой карбоксилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу или гидроксипропилметилцеллюлозу.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения заболеванием уха или его состоянием является эксайтотоксичность, ототоксичность, пресбиакузис или их комбинации.

Кроме того, в настоящем описании представлен способ лечения заболеванием уха или его состоянием, включающий введение индивидууму, нуждающемуся в этом, интратимпанальной композиции или устройства, содержащих терапевтически эффективное количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента, композиция или указанное устройство содержит в основном медленно расщепляемые продукты антиапоптотического агента или проапоптотического агента, композиция или указанное устройство, кроме того, имеет две или более характеристик из следующих:

(i) от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% по весу антиапоптотического агента или проапоптотического агента или их фармацевтически приемлемого пролекарства или соли;

(ii) от приблизительно 14 до приблизительно 21% по весу полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочного сополимера с общей формулой Е106 Р70 Е106;

(iii) стерилизованная вода, по необходимости, буферизованная для обеспечения значения рН в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,0;

(iv) антиапоптотический агент или проапоптотический агент, состоящий из множества отдельных частиц;

(v) температура гелеобразования от приблизительно 19 до приблизительно 42°C;

(vi) менее чем приблизительно 50 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробиологических агентов на грамм композиции;

(vii) менее чем приблизительно 5 эндотоксиновых единиц (ЭЕ) на кг веса тела пациента.

В некоторых примерах осуществления настоящего приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 3 дней. В некоторых примерах осуществления представленных в настоящем описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 4 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 5 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в настоящем описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 6 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 7 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 8 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 9 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент высвобождается из композиции или устройства в течение, как минимум, 10 дней. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов антиапоптотический агент или проапоптотический агент находится, в основном, в форме тонкодисперсных частиц.

В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов композиция вводится через окно улитки. В некоторых примерах осуществления приведенных в описании способов заболеванием или состоянием уха является эксайтотоксичность, ототоксичность, пресбиакузис или их комбинации.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На Фигуре 1 иллюстрируется сравнение композиций с недлительным высвобождением и с замедленным высвобождением.

На Фигуре 2 иллюстрируется влияние концентрации на вязкость водных растворов очищенной карбоксиметилцеллюлозы марки Blanose.

На Фигуре 3 иллюстрируется влияние концентрации на вязкость водных растворов метилцеллюлозы.

На Фигуре 4 представлена иллюстрация анатомии уха.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем описании представлены композиции, содержащие антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением, и композиции для лечения (например, улучшения или уменьшения воздействия) эксайтотоксичности, ототоксичности, пресбиакузиса или их комбинаций.

Для лечения заболеваний уха имеется несколько терапевтических продуктов; однако, в настоящее время для доставки этих терапевтических агентов используются пероральный, внутривенный или внутримышечный системные способы. В некоторых случаях при системном введении лекарственного средства создается потенциальная неравномерность концентрации лекарства с более высокими уровнями циркуляции в сыворотке и более низкими уровнями в целенаправленных структурах органа среднего уха и внутреннего уха. В результате, для компенсации этого неравенства требуется довольно большое количество лекарственного средства для доставки достаточных, терапевтически эффективных количеств к внутреннему уху. Кроме того, системное введение лекарственного средства может увеличить вероятность системной токсичности и неблагоприятных побочных эффектов в результате больших сывороточных количеств, требующих выполнения достаточной местной доставки к требуемому участку. Системная токсичность может также возникнуть в результате разрушения печени и переработки терапевтических агентов, образующих токсичные метаболиты, которые фактически аннулируют любую пользу от введения терапевтического агента.

Для преодоления токсичных и сопутствующих побочных эффектов системной доставки в настоящем изобретении предлагаются способы, композиции и устройства для местной доставки терапевтических агентов к требующим лечения структурам уха. Например, доступ к вестибулярному и улитковому аппарату будет осуществляться через среднее ухо, включая мембрану окна улитки, овальное окно/основание стремени, кольцевую связку, и через ушную каспулу/височную кость.

Внутрибарабанная инъекция терапевтических агентов - это процедура впрыскивания терапевтического агента за барабанной перепонкой в среднее ухо и/или внутреннее ухо. При такой процедуре возникает несколько проблем; например, осложняется доступ к мембране окна улитки, участку абсорбции лекарственного средства в внутреннее ухо.

Кроме того, внутрибарабанные инъекции создают несколько непризнанных проблем, которые не рассматриваются в существующих в настоящее время программах лечения, например изменение осмолярности и рН перилимфы и эндолимфы, а также введение патогенов и эндотоксинов, которые могут прямо или косвенно повредить структуры внутреннего уха. Одной из причин, по которой, возможно, эти проблемы не признаются в данной области, является то, что нет утвержденных внутрибарабанных композиций: внутреннее ухо предъявляет уникальные требования к композиции. Таким образом, композиции, разработанные для других частей тела, имеют небольшое значение или не имеют никакого значения для внутрибарабанной композиции.

В известном уровне техники не существует руководства относительно требований (например, уровень стерильности, рН, осмолярность) к композициям для лечения уха, которые пригодны для введения человеку. Между ушами животных разных видов существует большое анатомическое различие. Следствием межвидовых различий слуховых структур является то, что животные модели заболевания внутреннего уха часто недостоверны в качестве инструмента для испытания терапевтических средств, которые разрабатываются для клинического подтверждения.

В настоящем описании представлены композиции для лечения ушей, которые отвечают строгим критериям в отношении рН, осмолярности, ионного баланса, стерильности, уровней эндотоксина и/или пирогена. Приведенные в данном описании композиции для лечения ушей совместимы с микросредой внутреннего уха (например, перилимфой) и пригодны для введения человеку. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают красители и содействуют визуализации вводимых композиций, исключая необходимость использования инвазивных процедур (например, удаление перилимфы) во время преклинической и/или клинической разработки внутрибарабанных терапевтических средств.

В настоящем описании представлены содержащие антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением композиции и композиции для местного лечения требующих лечения ушных структур, тем самым исключаются побочные эффекты в результате системного ввода композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и лечебных составов. Применяемые местно композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и композиции и устройства совместимы с требующими лечения структурами уха и вводятся либо непосредственно в нужную структуру уха (например, улиточную область, барабанную полость или наружное ухо), либо вводятся в структуру, находящуюся в непосредственной связи с зонами внутреннего уха (например, мембрану окна улитки, гребень окна улитки или мембрану овального окна). При специальном выборе ушной структуры-мишени исключаются неблагоприятные побочные эффекты как результат системного лечения. Кроме того, клинические исследования показали преимущество длительного воздействия лекарственного препарата на перилимфу улитки, например, с улучшенной клинической эффективностью внезапной потери слуха, когда терапевтический агент принимается на многократной основе. Таким образом, создание модулирующей апоптоз композиции с контролируемым высвобождением или композиции для лечения заболеваний уха, обеспечивает пациенту, страдающему заболеванием уха, источник постоянного, регулируемого или пролонгированного действия антиапоптотического агента или проапоптотического агента, что уменьшает или исключает неопределенность при лечении. Соответственно, в одном из примеров осуществления настоящего изобретения представлена композиция, которая обеспечивает высвобождение, как минимум, одного антиапоптотического агента или проапоптотического агента в терапевтически эффективных дозах либо с регулируемой скоростью, либо с постоянной скоростью, таким образом, чтобы гарантировать непрерывное высвобождение антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем описании антиапоптотический агент или проапоптотический агент вводится в виде композиции с мгновенным высвобождением или композиции. В других примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент вводится в виде композиции с замедленным высвобождением, которая высвобождается непрерывно, регулируемым или пульсирующем образом, или по их вариантам. В следующих примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент вводится в виде композиции как с мгновенным высвобождением, так и с замедленным высвобождением, которая высвобождается либо непрерывно, регулируемым образом, либо пульсирующим образом, или по их вариантам. Высвобождение факультативно зависит от условий окружающей среды или физиологических условий, например, внешняя ионная среда (см., например, систему высвобождения Oros®, компании Johnson & Johnson).

Кроме того, локализованное лечение нуждающейся в нем структуры уха также дает возможность использовать ранее нежелательные терапевтические агенты, включая агенты с плохими профилями pK, плохим поглощением, низким системным высвобождением и/или проблемами токсичности. Из-за локализованного целенаправленного использования композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и композиций и устройств, а также биологического гематологического барьера, присутствующего во внутреннем ухе, риск неблагоприятных воздействий будет уменьшен в результате лечения антиапоптотическим или проапоптотическим агентами, которые ранее характеризовались как токсичные или неэффективные. Соответственно, также в рамках примеров осуществления настоящего изобретения рассматривается использование антиапоптотического агента или проапоптотического агента в лечении заболеваний, которые ранее отвергались врачами-практиками из-за неблагоприятных эффектов или неэффективности антиапоптотического агента или проапоптотического агента.

Кроме того, в предложенные примеры осуществления настоящего изобретения включено использование дополнительных совместимых с ухом агентов в комбинации с композициями, содержащими антиапоптотический агент или проапоптотический агент, и композициями и устройствами, предложенными данном описании. При использовании такие агенты принимают участие в лечении потери слуха или равновесия или дисфункции в результате эксайтотоксичности, ототоксичности, пресбиакузиса или их комбинаций. Соответственно, дополнительные агенты, которые улучшают или уменьшают эффекты эксайтотоксичности, ототоксичности, пресбиакузиса или их комбинаций, также рассматриваются для применения в комбинации с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой окисляющий агент, анестезирующий агент, аналгезирующий агент, антибиотик противорвотный, противогрибковый, антимикробный агент, нейролептик (особенно из класса фенотиазина), антисептик, антивирусный, вяжущий, химиотерапевтический агент, коллаген, кортикостероид, диуретик, кератолитический агент, ингибитор синтазы оксида азота, или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения указанная в описании приемлемая для уха модулирующая апоптоз композиция с контролируемым высвобождением вводится в целенаправленную область уха и дополнительно вводится пероральная доза антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения пероральная доза антиапоптотического агента или проапоптотического агента вводится перед введением приемлемой для уха модулирующей апоптоз композиции с контролируемым высвобождением, а затем пероральная доза сокращается на протяжении периода времени, когда обеспечивается модулирующая апоптоз композиция с контролируемым высвобождением. Альтернативно, пероральная доза антиапоптотического агента или проапоптотического агента вводится во время введения модулирующей апоптоз композиции с контролируемым высвобождением, а затем пероральная доза сокращается на протяжении периода времени, когда обеспечивается модулирующая апоптоз композиция с контролируемым высвобождением. Альтернативно, пероральная доза антиапоптотического агента или проапоптотического агента вводится после введения модулирующей апоптоз композиции с контролируемым высвобождением, а затем пероральная доза сокращается на протяжении периода времени, когда обеспечивается модулирующая апоптоз композиция с контролируемым высвобождением.

Кроме того, фармацевтические композиции для лечения уха с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом или композиции или устройства, включенные в настоящее описание, также включают носители, адъюванты (например, консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты), усилитель раствора, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. Такие носители, адъюванты и другие наполнители будут совместимы со средой в требующих лечения структурах уха. В частности, рассмотрены носители, адъюванты и наполнители, в которых отсутствует ототоксичность, или они минимально ототоксичны, чтобы обеспечивать эффективное лечение заболеваний уха, рассматриваемое в настоящем описании, с минимальными побочными эффектами в целенаправленных областях или зонах. Для предупреждения ототоксичности фармацевтические композиции для лечения уха с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом или композиции или устройства, предложенные в настоящем описании, факультативно нацелены на различные области требующих лечения структурах уха, включающих, но не ограничивающихся этим, барабанную полость, вестибулярные костные и мембранозные лабиринты, улиточные костные и мембранозные лабиринты и другие анатомические или физиологические структуры, расположенные в внутреннее ухо.

Некоторые определения

Термин «приемлемая для уха» относительно композиции, лечебного состава или ингредиента в соответствии с использованием в настоящем описании включает отсутствие стойкого вредного воздействия на среднее ухо (или auris media) и внутреннее ухо (или auris interna) пациента, лечение которого проводится. «Фармацевтически приемлемый для уха» в соответствии с использованием в настоящем описании относится к материалу, например носителю или разбавителю, который не аннулирует биологическую активность или свойства соединения в отношении среднего уха и является относительно токсичным или имеет пониженную токсичность по отношению к среднему уху и внутреннему уху, то есть, материал вводится индивидууму, не вызывая нежелательных биологических воздействий или вредного взаимодействия с любым из компонентов композиции, в которой он содержится.

В соответствии с использованием в настоящем описании улучшение или уменьшение симптомов конкретного заболевания уха, нарушения в ухе или его состояния при введении конкретного соединения или фармацевтической композиции относится к любому уменьшению серьезности, отсрочки наступления, замедлению развития или сокращению продолжительности заболевания, постоянно или временно, продолжительно или кратковременно, что объясняется введением соединения или композиции или ассоциируется с таким введением.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «агонист» означает молекулу, которая связывается с рецептором и положительно изменяет активность рецептора. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист увеличивает скорость, при которой работает рецептор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист активирует рецептор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист конститутивно активирует рецептор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист повышает доступность связывающего кармана лиганда рецептора (например, изменяет форму связывающего кармана, чтобы сделать его более доступным). Агонисты включают, но не ограничиваются этим, полные агонисты, частичные агонисты и коагонисты.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «антагонист» означает молекулу, которая связывается с рецептором и отрицательно изменяет активность рецептора. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антагонист ингибирует (частично или полностью) активность рецептора. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антагонист уменьшает скорость, при которой работает рецептор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антагонист уменьшает доступность связывающего кармана лиганда рецептора (например, блокирует связывающий карман лиганда или изменяет форму связывающего кармана, чтобы сделать его менее доступным). Антагонисты включают, но не ограничиваются этим, конкурентные антагонисты, частичные агонисты (их связывание ингибирует связывание полного агониста), обратные агонисты, неконкурентные антагонисты, аллостерические антагонисты и/или ортостерические антагонисты.

«Антиоксиданты» представляют собой фармацевтически приемлемые для уха антиоксиданты и включают, например, бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), натрий аскорбат, аскорбиновую кислоту, натрий метабисульфит и токоферол. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиоксиданты усиливают химическую стойкость, при необходимости. Днтиоксиданты также используются для противодействия ототоксичным воздействиям определенных терапевтических агентов, включая агенты, которые используются в комбинации с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом, предложенными в настоящем описании.

«Внутреннее ухо» относится к внутреннему уху, включая улитку и вестибулярный лабиринт, а также окно улитки, которое соединяет улитку со средним ухом.

«Биодоступность в ухо» или «биодоступность во внутреннее ухо» или «биодоступность в среднее ухо» или «биодоступность в наружное ухо» относится к процентному отношению вводимой дозы соединений, предложенных в настоящем описании, которая высвобождается в требующую лечения структуре уха исследуемого животного или человека.

«Среднее ухо» относится к среднему уху, включая барабанную полость, слуховые косточки и овальное окно, которое соединяет среднее ухо с внутренним ухом.

«Auris externa» относится к наружному уху, включая наружное ухо, слуховой канал и барабанную перепонку, которая соединяет наружное ухо со средним ухом.

«Концентрация в плазме крови» относится к концентрации соединений, представленных в настоящем описании, в плазме как компоненте крови пациента.

«Материалы-носители» - это наполнители, совместимые с антиапоптотическими агентами или проапоптотическим агентами, требующими лечения структурами уха и свойствами профиля высвобождения приемлемых для уха фармацевтических композиций. Такие материалы-носители включают, например, связывающие вещества, суспендирующие агенты, измельчающие агенты, наполнители, поверхностно-активные вещества, солюбилизаторы, стабилизаторы, смазывающие вещества, смачивающие агенты, разбавители и т.п.. «Фармацевтически совместимые с ушами материалы-носители» включают, но не ограничиваются этим, камедь, желатин, коллоидный кремний диоксид, кальций глицерофосфат, молочнокислый кальций, мальтодекстрин, глицерин, силикат магния, поливинилпирролидон (PVP), холестерин, сложные эфиры холестерина, натрий казеинат, лецитин сои, таурохолевую кислоту, фосфатидилхолин, натрий хлорид, трикальцийфосфат, дикалий фосфат, целлюлозу и целлюлозы конъюгаты, натрий стеароил лактилат Сахаров, каррагенан, моноглицерид, диглицерид, пептизированный крахмал и т.п.

«Модулятор апоптоза,» «апоптотический модулирующий агент» и «антиапоптотический модулирующий агент или проапоптотический агент» являются синонимами. Они включают агенты, которые (а) защищают нейроны и слуховые волосковые клетки (или другие клетки среднее ухо или внутреннее ухо) от апоптоза (то есть, антиапоптотические агенты); или агенты, которые индуцируют апоптоз в нейроне или слуховой волосковой клетке (или других клетках среднее ухо или внутреннее ухо).

Термин «разбавитель» относится к химическим соединениям, которые используются для разбавления антиапоптотического агента или проапоптотического агента перед доставкой и которые совместимы с требующими лечения структурами уха.

«Диспергирующие агенты» и/или «модулирующие вязкость агенты» представляют собой материалы, которые управляют диффузией и гомогенностью антиапоптотического агента или проапоптотического агента через жидкие среды. Примеры помощников диффузии/диспергирующих агентов включают, но не ограничиваются этим, гидрофильные полимеры, электролиты, Tween® 60 или 80, PEG, поливинилпирролидон (PVP; коммерчески известный как Plasdone®), и диспергирующие агенты на основе углеводов, как например, гидроксипропилцеллюлоза (например, НРС, HPC-SL и HPC-L), гидроксипропилметилцеллюлозы (например, НРМС K100, НРМС K4M, НРМС K15M и НРМС K-100М), карбоксиметилцеллюлоза натрий, метилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза фталат, гидроксипропилметилцеллюлоза ацетат стеарат (HPMCAS), некристаллическая целлюлоза, алюмосиликат магния, триэтаноламин, поливиниловый спирт (PVA), винил пирролидон /винил ацетат сополимер (S630), 4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)-фенол полимер с этиленоксидом и формальдегидом (также известный как тилоксапол), полоксамеры (например, Pluronic F127, Pluronics F68®, F88® и F108®, которые являются блок-сополимерами этиленоксида и пропиленоксида); и полоксамины (например, Tetronic 908®, также известный как Poloxamine 908®, который является тетрафункциональным блок-сополимером, полученным из последовательного присоединения пропиленоксида и этиленоксида к этилендиамину (BASF Corporation, Парсиппани, Нью-Джерси)), поливинилпирролидон K12, поливинилпирролидон K17, поливинилпирролидон К25 или поливинилпирролидон K30, поливинилпирролидон/винилацетат сополимер (S-630), полиэтиленгликоль, например, полиэтиленгликоль имеет молекулярный вес приблизительно 300 до приблизительно 6000 или приблизительно 3350 до приблизительно 4000 или приблизительно 7000 до приблизительно 5400, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, полисорбат-80, натрий альгинат, камеди, как например, трагакант и аравийская-камедь, гуаровая камедь, ксантаты, включающие ксантановую камедь, сахара, целлюлозные полимеры, как например, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, полисорбат-80, натрий альгинат, полиэтоксилированный сорбитанмонолаурат, полиэтоксилированный сорбитанмонолаурат, повидон, карбомеры, поливиниловый спирт (PVA), альгинаты, хитозаны или из комбинации. Пластификаторы, такие как целлюлоза или триэтил целлюлоза, также используются в качестве диспергирующих агентов. Факультативные диспергирующие агенты, применимые в липосомальных дисперсиях и самоэмульгирующихся дисперсиях антиапоптотического агента или проапоптотического агента, предложенных в настоящем описании, представляют собой димиристоил фосфатидилхолин, фосфатидилхолины (с8-с18), фосфатидилэтаноламины (с8-с18), фосфатидилглицерины (с8-с18), природный фосфатидилхолин из яиц или сои, природный фосфатидилглицерин из яиц или сои, холестерин и изопропилмиристат.

«Абсорбция лекарственного средства» или «абсорбция» относится к процессу перемещения антиапоптотического агента или проапоптотического агента из локализованного места введения, только в качестве примера, из мембраны окна улитки внутреннего уха и через барьер (мембраны окна улитки, как описано ниже) в структуры внутреннее ухо или внутреннего уха. Термины «совместное введение» или подобное в соответствии с использованием в настоящем описании означают введение антиапоптотического агента или проапоптотических агентов одному пациенту и рассчитаны на схемы лечения, в которых антиапоптотический агент или проапоптотические агенты вводятся одним и тем способом введения или в одно и тоже или разное время.

Термины «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» в соответствии с использованием в настоящем описании относятся к достаточному количеству вводимых антиапоптотического агента или проапоптотических агентов, которые по расчетам должны снять до некоторой степени один или несколько симптомов болезни или состояния, лечение которых проводится. Например, результатом введения предложенных в настоящем описании антиапоптотического агента или проапоптотических агентов является уменьшение и/или смягчение признаков, симптомов или причин эксайтотоксичности. Например, «эффективное количество» для терапевтического применения - это количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента, включая предложенную в настоящем описании композицию, необходимую для уменьшения или улучшения симптомов болезни без чрезмерных вредных побочных эффектов. Термин «терапевтически эффективное количество» включает, например, профилактически эффективное количество. «Эффективное количество» композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом, предложенной в настоящем описании, - это количество, эффективное для достижения желаемого фармакологического эффекта или терапевтического улучшения без чрезмерных вредных побочных эффектов. Подразумевается, что «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» разное, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения, у разных пациентов, вследствие изменения метаболизма вводимого соединения, в зависимости от возраста, веса, общего состояния пациента, состояние, лечение которого проводится, серьезности состояния, лечение которого проводится, и решения лечащего врача. Также подразумевается, что «эффективное количество» в формате дозировки с продленным высвобождением может отличаться от «эффективного количества» в формате дозировки с быстрым высвобождением, основанных на фармакокинетических и фармакодинамических расчетах.

Термины «усиливать» или «усиление» относится к увеличению или продлению либо действенности, либо продолжительности желаемого эффекта антиапоптотического агента или проапоптотического агента, или уменьшения любых неблагоприятных симптомов, таких как локализованная боль, которая появилась в результате введения терапевтического агента. Таким образом, в отношении усиления эффекта антиапоптотического агента или проапоптотических агентов, предложенных в настоящем описании, термин «усиление» относится к способности увеличивать или продлевать либо действенность, либо продолжительность эффекта других терапевтических агентов, которые используются в комбинации с предложенными в настоящем описании антиапоптотическим агентом или проапоптотическими агентами. «Усиливающее эффективное количество» в соответствии с использованием в настоящем описании относится к количеству антиапоптотического агента или проапоптотического агента или другого терапевтического агента, которого достаточно для усиления эффекта другого терапевтического агента или антиапоптотического агента или проапоптотических агентов в требуемой системе. При назначении пациенту эффективные для такого назначения количества будут зависеть от серьезности и течения болезни, нарушения или состояния, предшествующей терапии, состояния здоровья пациента и реакции на препараты, а также решения лечащего врача.

Термин «ингибирование» включает предупреждение, замедление или способность вызывать обратное развитие состояния, например, эксайтотоксичности, или прогресс состояния пациента, нуждающегося в лечении.

Термины «набор» и «готовое изделие» используются как синонимы.

«Фармакокинетика» относится к факторам, которые определяют достижение и поддержание надлежащей концентрации лекарственного средства в нужном месте в требующей лечения ушной структуры,

В профилактических целях композиции, содержащие приведенные в данном описании антиапоптотический агент или проапоптотический агент, вводятся пациенту, чувствительному к или иным образом подвергающегося риску опасности конкретной болезни, нарушения или состояния, например, эксайтотоксичности, ототоксичности и пресбиакузиса. Такое количество определяется как «профилактически эффективное количество или доза». В соответствии с использованием в настоящем описании точные количества также зависят от состояния здоровья пациента, веса и т.п.. В соответствии с использованием в настоящем описании «фармацевтическое устройство» включает любой описанная в настоящем описании композиция, которая при введении в ухо обеспечивает резервуар для продленного высвобождения описанного в настоящем описании активного агента.

«Пролекарство» относится к антиапоптотическому агенту или проапоптотическому агенту, которое преобразовано в исходное лекарственное средство in vivo. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения Пролекарство ферментно метаболизировано на одной или нескольких стадиях или с помощью процессов в биологически, фармацевтически или терапевтически активную форму соединения. Для получения пролекарства фармацевтически активное соединение модифицируется таким образом, чтобы активное соединение восстанавливалось после введения in vivo. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения пролекарство предназначено для изменения метаболической стабильности или характеристик переноса лекарственного средства, маскировки побочных эффектов или токсичности или изменения других характеристик или свойств лекарственного средства. Представленные в настоящем описании соединения в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дериватизированы в пригодные пролекарства.

«Мембрана окна улитки» - это мембрана у человека, которая закрывает fenestrae cochlea-окно улитки (также известной как кольцевое окно, fenestrae rotunda или круглое окно). У человека толщина мембраны окна улитки составляет приблизительно 70 микрон.

«Солюбилизаторы» относятся к auris-приемлемым соединениям, как например, триацетин, триацетилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, натрий лаурилсульфат, натрий капрат, эфиры сахарозы, алкилглюкозиды, натрий доккузат, витамин Е TPGS, диметилацетамид, N-метилпирролидон, N-гидроксиэтилпирролидон, поливинилпирролидон, гидроксипропилметил целлюлоза, гидроксипропил циклодекстрины, этанол, n-бутанол, изопропиловый спирт, холестерин, желчные соли, полиэтиленгликоль 200-600, гликофурол, транскутол, пропиленгликоль и этан изосорбид и т.п.

«Стабилизаторы» относятся к соединениям, как например, любые антиокислительные агенты, буферы, кислоты, консерванты и т.п., совместимые со средой ушной структуры-мишени. Стабилизаторы включают, но не ограничиваются этим, агенты, которые обеспечат любое из следующих улучшений: (1) повышение совместимости наполнителей с контейнером, или системой доставки, включающей шприц или стеклянный флакон, (2) повышение устойчивости компонента композиции, или (3) повышение устойчивости композиции.

«Равновесное состояние» в соответствии с использованием в настоящем описании означает состояние, когда количество лекарственного средства, введенного в целенаправленную ушную структуру, равно количеству лекарственного средства, выводимого в течение одного интервала между приемами лекарственного средства, приводящее к плато или постоянным уровням действия лекарственного средства в требующей лечения структуре.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «в основном медленно расщепляемые продукты» означает, что менее 5% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В следующих примерах осуществления настоящего изобретения этот термин означает, что менее 3% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В дальнейших примерах осуществления настоящего изобретения этот термин означает, что менее 2% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В дальнейших примерах осуществления настоящего изобретения срок означает, что менее 1% по весу агента составляют продукты расщепления активного агента.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «пациент» используется для обозначения любого животного, предпочтительно млекопитающего, включая человека или не принадлежащего к человеческому роду животного. Термин пациент и пациент могут использоваться попеременно. Ни один из терминов не должен интерпретироваться как требующий наблюдения профессионала-медика (например, врача, медсестры, фельдшера, санитара, работника хосписа).

«Поверхностно-активные вещества» относятся к соединениям, которые являются auris-приемлемыми, такими как натрий лаурилсульфат, натрий докузат, Tween® 60 или 80, триацетин, витамин Е TPGS, сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен сорбитан моноолеат, полисорбаты, полоксамеры, желчные соли, глицерилмоностеарат, сополимеры этиленоксида и пропиленоксида, например, Pluronic® (BASF) и т.п. Некоторые другие поверхностно-активные вещества включают полиоксиэтилен глицериды жирной кислоты и растительные масла, например, полиоксиэтилен (60) гидрированное касторовое масло; и полиоксиэтилен алкил эфиры и алкилфенил эфиры, например, октоксинол 10, октоксинол 40. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения поверхностно-активные вещества включены для усиления физической устойчивости или в других целях.

Термины «лечить» или «лечение» в соответствии с использованием в настоящем описании включают облегчение, уменьшение или улучшение симптомов болезни или состояния, предупреждение дополнительных симптомов, улучшение или предупреждение лежащих в основе метаболических причин симптомов, ингибирование болезни или состояния, например, подавление развития болезни или состояния, ослабление болезни или состояния, регрессию болезни или условия, ослабление состояния, вызванного болезнью или состоянием, или блокирование симптомов болезни или состояния профилактическими и/или терапевтическими методами.

В соответствии с использованием в настоящем описании «в основном в виде тонкодисперсного порошка» означает, только в качестве примера, что более 70% по весу активного агента находится в форме тонкодисперсных частиц активного агента. В следующих примерах осуществления настоящего изобретения термин означает, что более 80% по весу активного агента находится в форме тонкодисперсных частиц активного агента. В других примерах осуществления настоящего изобретения термин означает, что более 90% по весу активного агента находится в форме тонкодисперсных частиц активного агента.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «в основном медленно расщепляемые продукты» означает, что менее 5% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В следующих примерах осуществления настоящего изобретения этот термин означает, что менее 3% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В дальнейших примерах осуществления настоящего изобретения этот термин означает, что менее 2% по весу активного агента составляют продукты расщепления активного агента. В дальнейших примерах осуществления настоящего изобретения срок означает, что менее 1% по весу агента составляют продукты расщепления активного агента.

В соответствии с использованием в настоящем описании термин «воздействие на ухо» означает внешнее повреждение или травму одной или нескольких ушных структур и включает импланты, хирургическую операцию на ухе, инъекции, катетеризации или подобное. Импланты включают медицинские устройства для auris-interna или auris-media, примеры которых включают улиточные импланты, устройства защиты органов слуха, улучшающие слух устройства, короткие электроды, микропротезы или поршневые протезы; иглы; трансплантаты стволовой клетки; устройства доставки лекарства; лекарства на основе клеток; или подобное. Хирургическая операция на ухе включает хирургическую операцию среднего уха, хирургическую операцию внутреннего уха, тимпаностомию, кохлеостомия, лабиринтотомия, мастоидэктомия, стапедэктомия, стапедотомия, эндолимфатическая саккулотомия или подобное. Инъекции включают внутрибарабанные инъекции, внутрикохлеарные инъекции, инъекции через мембрану окна улитки или подобное. Катетеризации включают внутрибарабанные, внутрикохлеарные, эндолимфатические, перилимфатические или вестибулярные катетеризации или подобное.

Другие объекты, особенности и преимущества приведенных в описании способов и композиций будут очевидны из следующего подробного описания. Следует понимать, однако, что подробное описание и конкретные примеры с указанием конкретных примеров осуществления настоящего изобретения приведены только в качестве иллюстрации.

Анатомия уха

Как показано на Фигуре 4, наружное ухо является внешней частью органа и состоит из наружного уха (ушная раковина), слухового канала (внешнее слуховое отверстие) и обращенной наружу части барабанной перепонки, также известной как внутренняя полость среднего уха. Ушная раковина, мясистая часть внешнего уха, видимая по бокам головы, собирает звуковые волны и направляет их к слуховому каналу. Таким образом, функция наружного уха, частично, состоит в сборе и направлении звуковых волн к барабанной перепонке и среднему уху.

Среднее ухо представляет собой заполненную воздухом полость, называемую барабанной полостью, за барабанной перепонкой. Барабанная перепонка - это тонкая мембрана, которая отделяет внешнее ухо от среднего уха. Среднее ухо находится внутри височной кости и имеет в пределах этого пространства три ушные кости (слуховые косточки): молоточек, наковальня и стремя. Слуховые косточки соединены посредством крошечных связок, образующих мост через пространство барабанной полости. Молоточек, прикрепленный к барабанной перепонке на одном конце, связан с наковальней на его переднем конце, которая в свою очередь связана со стременем. Стремя прикреплено к овальному окну, одному из двух окон, расположенных в барабанной полости. Слой фиброзной ткани, известный как кольцевая связка, соединяет стремя с овальным окном. Звуковые волны от наружного уха сначала вызывают вибрацию барабанной перепонки. Вибрация передается по улитке через слуховые косточки и овальное окно, которое передает движение жидкостям во внутреннее ухо. Таким образом, слуховые косточки предназначены для обеспечения механической связи между барабанной перепонкой и овальным окном заполненного жидкостью внутреннего уха, где звук трансформируется и передается во внутреннее ухо для дальнейшей обработки. Неподвижность, негибкость или потеря движения слуховых косточек, барабанной перепонки или овального окна приводят к потере слуха, например, отосклерозу или неподвижности кости стремени.

Барабанная полость также соединяется с гортанью слуховой трубой. Слуховая труба обеспечивает способность выравнивать давление между внешним воздухом и полостью среднего уха. Окно улитки является частью внутреннего уха, но оно также доступно внутри барабанной полости, и открывается в улитку внутреннего уха. Окно улитки закрыто мембраной окна улитки, которая состоит из трех слоев: наружный или слизистый слой, промежуточный или волокнистый слой, и внутренняя мембрана, которая сообщается непосредственно с улиточной жидкостью. Окно улитки, следовательно, имеет прямое сообщение с внутренним ухом через внутреннюю мембрану.

Движения в окне преддверия и в окне улитки взаимосвязаны, то есть поскольку кость стремени передает движение от барабанной перепонки к овальному окну внутрь на жидкость внутреннего уха, окно улитки (мембрана окна улитки) соответственно выступает вперед и выталкивается из улитковой жидкости. Это движение окна улитки обеспечивает движение жидкости в улитке, что в свою очередь вызывает движение улитковых внутренних волосковых клеток, что обеспечивает передачу слуховых сигналов. Неподвижность и негибкость мембраны окна улитки приводят к потере слуха из-за недостаточной возможности движения в улитковой жидкости. В последних исследованиях рассматривается проблема вживления механических датчиков на окно улитки, минуя нормальный проводящий путь через овальное окно и, обеспечивая усиленный входной сигнал в улитковую камеру.

Передача слухового сигнала происходит во внутреннем ухе. Заполненное жидкостью внутреннее ухо, или auris interna, состоит из двух основных частей: улитковый и вестибулярный аппараты. Внутреннее ухо расположено частично в костистом или костном лабиринте, сложном ряду проходов в височной кости черепа. Вестибулярный аппарат - это орган поддержания равновесия; он состоит из трех полукружных каналов и преддверия. Три полукружных канала расположены относительно друг к другу таким образом, что движение головы в трех ортогональных плоскостях в пространстве может определяться движением жидкости и последующей обработкой сигнала сенсорными органами полукружных каналов, называемых гребешками (crista ampullaris). Гребешок содержит волосковые клетки и поддерживающие клетки и покрыт куполообразной желатинозной массой, называемой купулой. Волоски волосковых клеток погружены в купулу. Полукружные каналы определяют динамическое равновесие, равновесие вращательных или угловых движений.

При быстром повороте головы полукружные каналы движутся вместе с головой, а жидкость эндолимфы, расположенная в мембранозных полукружных каналах, стремится остаться неподвижной. Жидкость эндолимфы толкает купулу, которая наклоняется в одну сторону. При наклоне купула сгибает некоторые волоски на волосковых клетках гребешка, что вызывает сенсорный импульс. Поскольку полукружные каналы расположены в разных плоскостях, соответствующий гребешок каждого полукружного канала по-разному реагирует на одно и то же движение головы. Это создает мозаику импульсов, которые передаются в центральную нервную систему по вестибулярной ветви преддверно-улиткового нерва. Центральная нервная система обрабатывает эту информацию и инициирует адекватные реакции для сохранения равновесия. Важным в центральной нервной системе является мозжечок, который опосредует баланс и равновесие.

Преддверие - это центральная часть внутреннего уха; преддверие имеет механорецепторы, содержащие волосковые клетки, которые определяют статическое равновесие или положение головы относительно силы тяжести. Статическое равновесие играет определенную роль, когда голова неподвижна или совершает движение по прямой линии. Мембранозный лабиринт в преддверии разделен на две мешкообразные структуры, маточку и мешочек. Каждая структура в свою очередь содержит малую структуру, под названием пятно, которое отвечает за поддержание статического равновесия. Пятно состоит из сенсорных волосковых клеток, погруженных в желатинозную массу (подобную купуле), которая покрывает пятно. Гранулы карбоната кальция, называемые отолитами, погружены в желатинозный слой на его поверхности.

Когда голова находится в вертикальном положении, волоски расположены вдоль пятна. Когда голова наклоняется, желатинозная масса и отолиты наклоняются соответственно, сгибая некоторые волоски на волосковых клетках пятна. Это сгибающее действие дает сигнальный импульс в центральную нервную систему, распространяющийся по вестибулярной ветви преддверно-улиткового нерва, который в свою очередь переключает двигательные импульсы на соответствующие мышцы для сохранения равновесия (баланса).

Улитка - это часть внутреннего уха, связанная со слухом. Улитка представляет собой клиновидную трубкообразную структуру, свернутую в форме улитки. Внутренняя часть улитки разделена на три отдела, она далее определяется положением вестибулярной мембраны и базилярной мембраны. Над вышеупомянутой вестибулярной мембраной находится участок - вестибулярная лестница, которая простирается от овального окна до вершины улитки и содержит жидкость перилимфы, водянистую жидкость с низким содержанием калия и высоким содержанием натрия. Базилярная мембрана ограничивает область барабанной лестницы улитки, которая простирается от вершины улитки до окна улитки, в ней также содержится перилимфа. В базилярной мембране находятся тысячи жестких волокон, длина которых постепенно увеличивается от окна улитки к вершине улитки. Волокна базальной мембраны вибрируют под действием звука. Между вестибулярной лестницей и барабанной лестницей улитки находится канал улитки, который заканчивается закрытым мешочком на вершине улитки. В канале улитки содержится жидкая эндолимфа, похожая на цереброспинальную жидкость, с высоким содержанием калия.

Орган Корти, сенсорный орган слуха, расположен на базилярной мембране и простирается вверх в канал улитки. В органе Корти находятся волосковые клетки, у которых есть похожие на волосы выступы, простирающиеся от их свободной поверхности, он контактирует с желатинозной поверхностью, называемой покровной мембраной. Хотя у волосковых клеток отсутствуют аксоны, они окружены чувствительными нервными волокнами, которые образуют улитковую ветвь преддверно-улиткового нерва (черепно-мозговой нерв VIII).

Как указано в описании, овальное окно, также известное как эллиптическое окно, сообщается со стременем для передачи звуковых волн, вибрирующих от барабанной перепонки. Вибрация, которая передается на овальное окно, повышает давление в заполненной жидкостью улитке через перилимфу и вестибулярную лестницу/барабанную лестницу, что в свою очередь вызывает в ответ расширение мембраны окна улитки. Одновременное действие нажима внутрь овального окна/расширение наружу окна улитки сообщает движение жидкости внутри улитки без изменения внутриулиткового давления. Однако, поскольку вибрация идет через перилимфу в вестибулярную лестницу, она создает соответствующие колебания в вестибулярной мембране. Эти соответствующие колебания идут через эндолимфу канала улитки и передаются на базилярную мембрану. Когда базилярная мембрана колеблется или движется вверх и вниз, орган Корти движется вместе с ней. Рецепторы волосковых клеток в органе Корти затем движутся к покровной мембране, вызывая механическую деформацию покровной мембраны. Такая механическая деформация инициирует нервный импульс, который проходит через преддверно-улитковый нерв в центральную нервную систему, механически преобразуя полученную звуковую волну в сигналы, впоследствии обрабатываемые центральной нервной системой.

Болезни

Заболевания уха, включая заболевания внутреннего уха, среднего уха и наружного уха, вызывают симптомы, которые включают, но не ограничиваются этим, потерю слуха, нистагм, головокружение, шум в ушах, воспаление, инфекцию и застой. Заболевания уха, которые лечатся предложенными в настоящем описании композициями, многочисленны и включают ототоксичность, эксайтотоксичность и пресбиакузис.

Эксайтотоксичность

Эксайтотоксичность относится к некрозу или повреждению нейронов и/или слуховых волосковых клеток вследствие воздействия глутаматных и/или подобных веществ,

Глутамат - это самый распространенный возбуждающий нейротрансмиттер в центральной нервной системе. Пресинаптические нейроны выделяют глутамат при стимуляции, Он течет через синапс, связывается с рецепторами, расположенными на постсинаптических нейронах, и возбуждает эти нейроны. Глутаматные рецепторы включают NMDA, АМРА и каинатные рецепторы, Глутаматные транспортеры выполняют функцию удаления внеклеточного глутамата из синапса. Некоторые события (например, ишемия или инсульт) поражают глутаматные транспортеры. Это приводит к избыточному накоплению глутамата в синапсе. Избыточный глутамат в синапсах вызывает повышенную активацию глутаматных рецепторов.

Рецептор АМРА активируется связыванием как глутамата, так и АМРА. Активация некоторых изоформ рецептора АМРА вызывает открытие ионных каналов, расположенных в плазменной мембране нейрона. Когда каналы открываются, Na⁺ и Са²⁺ ионы втекают в нейрон, а K⁺ ионы вытекают из нейрона.

Рецептор NMDA активируется связыванием как глутамата, так и NMDA. Активация рецептора NMDA вызывает открытие ионных каналов, расположенных в плазменной мембране нейрона. Однако, эти каналы блокируются Mg²⁺ ионами. Активация рецептора АМРА приводит к выбросу Mg²⁺ ионов из ионных каналов в синапс. Когда ионные каналы открываются и Mg²⁺ ионы очищают ионные каналы, Na⁺ и Са²⁺ ионы втекают в нейрон, а К⁺ ионы вытекают из нейрона.

Эксайтотоксичность возникает, когда рецептор NMDA и рецепторы АМРА сверхактивированы связыванием избыточных количеств лигандов, например, аномальных количеств глутамата. Сверхактивация этих рецепторов вызывает чрезмерное открытие ионных каналов под их контролем. Это приводит к тому, что в нейрон поступают аномально высокие уровни Са²⁺ и Na²⁺. Втекание таких уровней Са²⁺ и Na⁺ в нейрон заставляет нейрон стрелять чаще. Такая повышенная активация дает быстрое накопление свободных радикалов и воспалительных соединений. Свободные радикалы повреждают митохондрию, истощают энергетические запасы клетки. Кроме того, избыточные уровни Са²⁺ и Na⁺ ионов активируют избыточные уровни ферментов, включающих, но не ограничивающихся этим, фосфолипазы, эндонуклеазы и протеазы. Сверхактивация этих ферментов вызывает повреждение цитоскелета, плазменной мембраны, митохондрии и ДНК нейрона. Такое повреждение часто заканчивается активацией апоптотических генов. Кроме того, транскрипция многочисленных проапоптотических генов и апоптоз-модулирующих генов контролируется уровнями Са²⁺. Избыток Са²⁺ часто приводит к повышающей регуляции проапоптотических генов и понижающей регуляции апоптоз-модулирующих генов.

Пресбиакузис

Пресбиакузис - это прогрессирующая двухсторонняя возрастная потеря слуха (тугоухость). Большей частью потеря слуха возникает при повышенных частотах (то есть, частотах выше 15 или 16 Гц), затрудняется восприятие женского голоса (в противоположность мужскому голосу), исчезает способность различать высокие звуки (такие как «с» ["s" и "th"]). Может быть затруднена фильтрация фонового шума. Нарушение чаще всего лечится имплантацией слухового аппарата и/или введением фармацевтических средств, которые предотвращают накопление ROS.

Расстройство вызывается изменениями физиологии внутреннего уха, среднего уха, и/или VII нерва. Изменения во внутреннем ухе, приводящие к пресбиакузису, включают эпителиальную атрофию при потере слуховых волосковых клеток и/или стереоцилий, атрофию нервных клеток, атрофию сосудистой полоски и утолщение/потерю гибкости базилярной мембраны. Дополнительные изменения, которые могут способствовать появлению пресбиакузиса, включают накопление дефектов в барабанной перепонке и мелких костях.

Изменения, приводящие к пресбиакузису, могут происходить в результате накопления мутаций в ДНК и мутаций в митохондриальной ДНК; однако, изменения могут усиливаться под действием громкого шума, под воздействием ототоксичных агентов, инфекций и/или при уменьшении кровотока к уху. Последнее связано с атеросклерозом, диабетом, артериальной гипертензией и курением.

Ототоксичность

Ототоксичность относится к деструкции или повреждению нейрона или волосковых клеток уха, где упомянутое повреждение вызвано токсином. Многократные лекарственные препараты, как известно, ототоксичны. Часто ототоксичность зависит от дозы, Ототоксичность может быть постоянной или обратимой после отмены лекарственного средства.

Известные ототоксичные препараты включают, но не ограничиваются этим, аминогликозидный класс антибиотиков (например, гентамицин и амикацин), некоторые представители макролидного класса антибиотиков (например, эритромицин), некоторые представители гликопептидного класса антибиотиков (например, ванкомицин), салициловая кислота, никотин, некоторые химиотерапевтические средства (например, актиномицин, блеомицин, цисплатин, карбоплатин и винкристин), и некоторые представители семейства петлевых диуретиков (например, фуросемид).

Цисплатин и антибиотики аминогликозидного класса индуцируют продуцирование реактивных кислородных частиц (ROS). ROS могут повредить клетки напрямую и, таким образом, вызвать апоптоз, разрушая ДНК, белки и/или липиды. ROS также вовлечены в каскад передачи сигнала, который приводит к апоптозу. В некоторых случаях антиоксиданты предупреждают повреждение со стороны ROS, предупреждая их формирование или удаляя свободные радикалы до того, как они смогут повредить клетку. Соответственно, некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают использование антиоксидантов. В некоторых случаях нитроны действуют синергично с антиоксидантами, чтобы предупредить острую потерю слуха, вызванную шумом. В некоторых случаях нитроны захватывают свободные радикалы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения нитрон (например, альфа-фенил-терт-бутилнитрон (PBN), аллпуринол) вводится совместно с антиоксидантом. Также считается, что как цисплатин, так и аминогликозидный класс антибиотиков вызывают повреждение уха в результате связывания меланина в сосудистой полоске внутреннего уха.

Салициловая кислота классифицируется как ототоксичная, поскольку она ингибирует функцию белка престин. Престин опосредует подвижность наружных слуховых волосковых клеток, управляя обменом хлорида и карбоната через плазменную мембрану наружных слуховых волосковых клеток. Это проявляется только в наружных слуховых волосковых клеток, но не во внутренних слуховых волосковых клетках.

Ушные и/или вестибулярные нарушения, включающие нарушения внутреннее ухо и нарушения среднее ухо, дают симптомы, которые включают, но не ограничиваются этим, потерю слуха, нистагм, головокружение, шум в ушах, воспаление, опухание, инфекцию и застои. Эти нарушения могут иметь много причин, например, инфекция, рана, воспаление, опухоли побочная реакция на лекарственные препараты или другие химические вещества.

Травма

Травма относится к физическому повреждению ушной структуры в результате применения внешней силы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения травма является результатом воздействия громкого шума (например, фейерверк или громкая музыка). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения травма ушной структуры является результатом имплантации медицинского устройства, хирургических операций на ухе, инъекций, катетеризации или подобного. Импланты включают медицинские устройства для auris-interna или auris-media, примеры которых включают улиточные импланты, устройства защиты органов слуха, улучшающие слух устройства, короткие электроды, микропротезы или поршневые протезы; иглы; трансплантаты стволовой клетки; устройства доставки лекарства; лекарства на основе клеток; или подобное. Хирургическая операция на ухе включает хирургическую операцию среднего уха, хирургическую операцию внутреннего уха, тимпаностомию, кохлеостомию, лабиринтотомию, мастоидэктомию, стапедэктомия, стапедотомия, эндолимфатическую саккулотомию или подобное. Инъекции включают внутрибарабанные инъекции, внутриулитковые инъекции, инъекции через мембрану окна улитки или подобное. Катетеризации включают внутрибарабанную, внутриулитковую, эндолимфатическую, перилимфатическую или вестибулярную катетеризацию или подобное.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент композиции (например, AM 111) или устройства, приведенных в описании, после акустической травмы задерживают или предупреждает повреждение ушных структур, например, раздражение, остеонеогенез некроза клеток и/или последующая нейронная дегенерация, вызванная акустической травмой.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства, приведенных в описании, в комбинации с имплантацией экзогенного материала (например, имплант медицинского устройства или трансплантация стволовый клеток) задерживают или предупреждают поражение ушных структур, например, раздражение, остеонеогенез некроза клеток и/или дальнейшая нейронная дегенерация, вызванные установкой внешнего устройства и/или множества клеток (например, стволовых клеток) в ухе. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства, приведенных в описании, в комбинации с имплантом обеспечивают более эффективное восстановление потери слуха по сравнению с установкой только одного импланта.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства, приведенных в описании, уменьшает повреждение ушных структур, вызванного основным заболеванием, обеспечивая успех имплантации, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства в соответствии с приведенным в настоящем описании описанием в сочетании с хирургическим вмешательством и/или с имплантацией экзогенного материала уменьшают или предупреждают негативные побочные эффекты (например, некроз клетки).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства, приведенных в описании, в комбинации с имплантацией экзогенного материала имеют трофический эффект (то есть содействует нормальному росту клеток и заживлению ткани в зоне импланта или транспланта). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения трофический эффект желательный во время хирургической операции на ухе или во время процедур внутрибарабанных инъекций. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения трофический эффект желательный после установки медицинского устройства или после клеточной трансплантации (например, стволовой клетки). В некоторых из названных примеров осуществления настоящего изобретения содержащая антиапоптотический агент (например, AM 111) композиция или указанное устройство, приведенные в данном описании, вводятся путем прямой улиточной инъекции, с помощью кохлеостомии или путем депонирования на окне улитки.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композиции или устройства, приведенных в описании, уменьшают воспаление и/или инфекции, ассоциированные с хирургической операцией на ухе или имплантацией экзогенного материала (например, медицинского устройства или множества клеток (например, стволовых клеток)). В некоторых случаях перфузия области хирургического вмешательства содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композицией или указанное устройством, приведенных в описании, уменьшают или исключают постоперационные и/или постимплантационные осложнения (например, воспаление, повреждение волосковых клеток, нейронная дегенерация, остеонеогенез или подобное). В некоторых случаях перфузия области хирургического вмешательства содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композицией или устройством, приведенных в описании, сокращает послеоперационный или постимплантационный период выздоровления.

В одном из аспектов приведенные в данном описании композиции и способы их введения приемлемы для способов прямой перфузии отделов = компартментов внутреннего уха.

Таким образом, приведенные в данном описании композиции применимы в комбинации с хирургическими процедурами, включающими, только в виде неограничивающих примеров, кохлеостомию, лабиринтотомию, мастоидэктомию, стапедэктомию, стапедотомию, эндолимфатическую саккулотомиго или подобное. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения отделы внутреннего уха опрыскиваются содержащей антиапоптотический агент (например, AM 111) композицией или указанное устройством, описанными в настоящем описании, перед хирургической операцией на ухе, во время хирургической операции на ухе, после хирургической операции на ухе или при их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения AM 111 вводится пациенту для лечения повреждения ушной структуры в результате травмы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения AM 111 вводится перед хирургической операцией на ухе, во время хирургической операции на ухе, после хирургической операции на ухе с целью уменьшения повреждения в результате хирургического вмешательства.

Фармацевтические агенты

В настоящем описании представлены модулирующие апоптоз композиции, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки уха от апоптоза, и/или улучшают дегенерацию сенсорных нейронов и/или волосковых клеток уха. Кроме того, в настоящем описании представлены модулирующие апоптоз композиции, вызывающие рост и/или регенерацию нейронов и/или волосковых клеток уха. Также представлены модулирующие апоптоз композиции, вызывающие апоптоз нейронов и/или волосковых клеток уха. Ушные нарушения имеют причины и симптомы, чувствительные к фармацевтическим агентам, предложенным в настоящем описании, или другим фармацевтическим агентам. Антиапоптотический агент или проапоптотические агенты, которые в настоящем описании не предлагаются, но которые пригодны для улучшения или устранения слуховых и/или вестибулярных нарушений, однозначно содержатся и рассматриваются в объеме представленных примеров осуществления настоящего изобретения.

Кроме того, фармацевтические агенты, которые ранее были отмечены как токсичные, вредные или неэффективные при системном или локальном применении в системах других органов, например, в результате токсичных метаболитов, образующихся после переработки печенью, токсичности лекарственного средства в определенных органах, тканях или системах, в результате высоких уровней, необходимых для достижения эффективности, в результате неспособности высвобождаться по системным проводящим путям или из-за плохих характеристик pK, применимы в некоторых представленных в настоящем описании примерах осуществления настоящего изобретения. Например, известные побочные эффекты миноциклина, антиапоптотического агента или проапоптотического агента, включают диарею, головную боль, рвоту, лихорадку, желтуху, внутричерепную гипертензию и аутоиммунные нарушения, такие как волчанка. Соответственно, фармацевтические агенты, которые имеют ограниченное системное высвобождение или не имеют системного высвобождения, системную токсичность, плохие pK характеристики или их комбинации, рассматриваются в объеме представленных примеров осуществления настоящего изобретения.

Предложенные в настоящем описании модулирующие апоптоз композиции факультативно направлены непосредственно на ушные структуры, требующие лечения; например, В одном из примеров осуществления настоящего изобретения предполагается прямое нанесение содержащих антиапоптотический агент или проапоптотический агент композиций, предложенных в настоящем описании, на мембрану окна улитки или гребень окна улитки внутреннего уха, обеспечивая прямой доступ к внутреннее ухо и его лечение, или элементов внутреннего уха. В других примерах осуществления настоящего изобретения содержащая антиапоптотический агент или проапоптотический агент композиция, предложенная в настоящем описании, наносится непосредственно на овальное окно. В следующих примерах осуществления настоящего изобретения прямой доступ достигается путем микроинъекции непосредственно в внутреннее ухо, например, посредством улиточной микроперфузии. Такие примеры осуществления настоящего изобретения, кроме того, факультативно включают устройство доставки лекарства, в которых устройство доставки лекарства обеспечивает доставку содержащую антиапоптотический агент или проапоптотический агент композицию с помощью иглы и шприца, насоса, устройства микроинъекции или их любой комбинации.

Некоторые фармацевтические агенты, отдельно или в комбинации, ототоксичны. Например, некоторые химиотерапевтические средства, включающие актиномицин, блеомицин, цисплатин, карбоплатин и винкристин; и антибиотики, включающие эритромицин, гентамицин, стептомицин, дигидрострептомицин, тобрамицин, нетилмицин, амикацин, неомицин, канамицин, этиомицин, ванкомицин, метронидизол, капреомицин, могут быть от слаботоксичных до сильнотоксичных и влияют на вестибулярные и улиточные структуры дифференцированно. Однако, в некоторых случаях комбинация ототоксичного лекарственного средства, например цисплатина, с отопротективным агентом становится защитной за счет уменьшения ототоксичных эффектов лекарственного средства. Кроме того, локализованное применение потенциально ототоксичного лекарственного средства также снижает токсические эффекты, которые в противном случае возникают при системном применении за счет использования меньших количеств с сохранением эффективности или за счет использования предназначенных количеств в течение более короткого периода времени.

Кроме того, некоторые фармацевтические наполнители, разбавители или носители потенциально ототоксичны. Например, бензалконий хлорид, общий консервант, ототоксичен и поэтому потенциально вреден, если вводится в вестибулярные или улиточные структуры. При составлении композиции, содержащей антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением, рекомендуется исключать или сочетать подходящие наполнители, разбавители или носители для уменьшения или устранения потенциальных ототоксичных компонентов из композиции, или уменьшать количество таких наполнителей, разбавителей или носителей. Факультативно содержащая антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением композиция включает отопротективные агенты, такие как антиоксиданты, альфа липоевая кислота, кальций, фосфомицин или хелаторы железа, с целью противодействия потенциальным ототоксичным эффектам, которые могут появиться в результате использования специфических терапевтических агентов или наполнителей, разбавителей или носителей. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения нитрон (например, альфа-фенил-терт-бутилнитрон) вводится совместно с антиоксидантом.

Ингибиторы каскада подачи сигналов MAPK/JNK

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Каскад MAPK/JNK индуцирует апоптоз в клетках. Клеточная нагрузка (например, акустическая травма, воздействие ототоксичного агента, и т.п.). активирует митоген-активированные протеинкиназы (MAPK). Активированные MAPK фосфорилируют Thr и Tyr остатки на представителях c-Jun N-концевых киназ (JNK), таким образом, активируя эти киназы. Киназы JNK затем фосфорилируют c-Jun, компонент комплекса транскрипционного фактора АР-1. Активация АР-1 индуцирует транскрипцию нескольких проапоптотических представителей семейства Bcl-2 (например, Вах, BAD, Bak и Bok).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность каскада подачи сигналов MAPK/JNK. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой миноциклин; SB-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4-метилсульфинил фенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); PD 169316 (4-(4-фторфенил)-2-(4-нитрофинил)-5-(4-пиридил)-1 Н-имидазол); SB 202190 (4-(4-фторфенил)-2-(4-гидроксифенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); RWJ 67657 (4-[4-(4-фторфенил)-1-(3-фенилпропил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-3-бутан-1-ол); SB 220025 (5-(2-амино-4-пирамидинил)-4-(4-фторфенил)-1-(4-пиперидинил)имидазол); или их комбинации. Миноциклин предупреждает апоптоз слуховых волосковых клеток после лечения ототоксичным антибиотическим гентамицином путем ингибирования индукции р38 MAPK фосфорилирования. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который противодействует каскаду подачи сигналов MAPK/JNK, - это D-JNKI-1 ((D)- hJIP_175-157-DPro-DPro-(D)-HIV-TAT_57-48), AM-111 (Auris), SP 600125 (антра[1,9-cd]пиразол-6(2Н)-он), JNK ингибитор I ((L)-HIV-TAT_48-57-PP-JBD₂₀), JNK ингибитор III ((L)-HIV-TAT_47-57-ГАМК-c-Jun_33-57), AS 601245 (1,3-бензотиазол-2-ил (2-[[2-(3-пиридинил) этил]амино]-4пирамидинил)ацетонитрил), JNK ингибитор VI (H₂N-RPKRPTTLNLF-NH₂), JNK ингибитор VIII (N-(4-амино-5-циано-6-этоксипиридин-2-ил)-2-(2,5-диметоксифенил)ацетамид), JNK ингибитор IX (N-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидро-1-бензотиен-2-ил)-1-нафтамид), дикумарол (3,3'-метиленбис(4-гидроксикумарин)); SC-236 (4-[5-(4-хлорфенил)-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]бензолсульфамид); СЕР-1347 (Cephalon); СЕР-11004 (Cephalon); или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АМ-111 (Auris).

Ингибиторы JAK (янус киназа)

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях JAK киназы фосфорилируют и активируют нижележащие белки, вовлеченные в пути трансдукции сигнала рецептора цитокина типа 1 и типа II. В некоторых случаях активация киназы JAK2 индуцирует апоптоз.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность янус киназы (JAK). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность янус киназы 2 (JAK2). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой VX-680. TG101348, TG101209, INCB018424, XL019, СЕР-701, АТ9283 или их комбинации.

Семейство Bcl-2

Для использования с предложенными в описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой Bcl-2. В определенном случае Bcl-2 частично или полностью ингибирует активацию каспазы (например, каспазы 3 и каспазы-6). В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизмом, Bcl-2 (или его сплайс-вариант) улучшает ишемическое поражение нервных клеток. В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизмом, Bcl-2 (или его сплайс-вариант) улучшает индуцированный цисплатином апоптоз. В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизмом, Bcl-2 (или его сплайс-вариант) улучшает индуцированный неомицином апоптоз. В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизмом, Bcl-2 (или его сплайс-вариант) смягчает индуцированный акустической травмой апоптоз.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой искусственный белок, включающий, как минимум, часть модулирующего апоптоз полипептида Bcl-2. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулирующим апоптоз представителем семейства Bcl-2 является базальноклеточная лимфома-сверхкрупная (Bcl-XL). Bcl-XL является модулирующим апоптоз представителем семейства Bcl-2, который часто сверхэкспрессируется в раковых клетках. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения искусственный белок, полученный из Bcl-x (L), является FNK. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения слитый белок построен с включением FNK и трансдукционного домена (TAT) HIV/TAT белковой конструкции. Подробности о кДНК последовательности FNK-TAT конструкции см. в патенте США №7253269, который включен в данный документ путем ссылок в отношении такого раскрытия сущности изобретения. Введение FNK-TAT белковой конструкции ингибирует индукцию апоптоза в нейронах и слуховых волосковых клетках, поврежденных в результате травмы.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность Вах, BAD, Bak, Bok или их комбинаций. В некоторых случаях полипептид Вах (отдельно или в комбинации с другим полипептидом) образует поры в наружной мембране митохондрии клетки. В некоторых случаях полипептид Bak (отдельно или в комбинациях с другим полипептидом) образует пору в наружной мембране митохондрии клетки. Образование поры в митохондрии клетки частично или полностью приводит к выделению цитохрома с и других проапоптотических факторов из митохондрии («проницаемость наружной митохондриальной мембраны»). В некоторых случаях проницаемость наружной митохондриальной мембраны, частично или полностью, приводит к активации множественных каспаз. В некоторых случаях активация каспазы частично или полностью приводит к индукции апоптоза. В некоторых случаях BAD полипептиды связываются с Bcl-2 и Bcl-xL. В некоторых случаях связывание BAD полипептида с Bcl-2 или Bcl-xL полипептидом инактивирует Bcl-2 и/или Bcl-xL полипептид. В некоторых случаях инактивация Bcl-2 или Bcl-xL полипептида стимулирует апоптоз, индуцированный Вах и/или Bak.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотическим агентом является Вах ингибирующий пептид V5 (также известный как пептид V5 ингибитора Вах); блокатор канала Вах ((±)-1-(3,6-дибромкарбазол-9-ил)-3-пиперазин-1-ил-пропан-2-ол); Вах ингибирующий пептид Р5 (также известный как пептид Р5 ингибитора Вах); или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент ингибирует (частично или полностью) активность Bak. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент ингибирует (частично или полностью) активность BAD.

FAS

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Fas (также известный как CD95, Аро-1 и TNFRSf6) является рецептором. В некоторых случаях, когда связывается его лигандом, Fas образует индуцирующий некроз комплекс передачи сигнала (DISC). DISC состоит из тримера Fas рецепторов, связанных их лигандами, и нескольких других полипептидов, включающих, но не ограничивающихся этим, FADD, и каспазы 8. В некоторых случаях DISC эндоцитирован клеткой. В некоторых случаях связывание полипептида каспазы-8 с FADD вызывает активацию полипептидов каспазы 8. В некоторых случаях полипептид активной каспазы-8 выделяется из DISC в цитозоль клетки. В некоторых случаях полипептид активной каспазы-8 расщепляет другие эффекторные каспазы, что вызывает расщепление ДНК, пузырение мембраны, сморщивание клетки, конденсацию хроматина и ядерной и цитоплазматической фрагментации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность FAS. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это Kp7-6; FAIM(S) (Fas апоптоз ингибирующий с короткой молекулой); FAIM(L) (Fas апоптоз ингибирующий с длинной молекулой); Fas:Fc; FAP-1; или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является анти-Fas лиганд антителом; анти-Fas антителом; или их комбинациями. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения анти-Fas антитело представляет собой NOK2; F2051; F1926; F2928; или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения анти-Fas антитело представляет собой ZB4; Фас М3 Мэб; или их комбинации.

Akt

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях Akt1 (также известный как Aktα) ингибирует (отдельно или в комбинации с другими полипептидами) апоптоз. В некоторых случаях Akt связывается с PIP3 и/или PIP2. В некоторых случаях, после связывания с PIP3, Akt фосфорилируется PDPK1, mTORC2 и ДНК-PK. В некоторых случаях Akt регулирует (отдельно иди в комбинации с другими полипептидами) апоптоз путем связывания и регулирования, среди других полипептидов, ядерный фактор - кВ, семейство Bcl-2, MDM2, FOXO1, GSK-3, Raf-1, ASK, Chk1, Bad и MDM2.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность Akt1. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой фактор роста. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фактором роста является EGF.

PI3 киназы

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях фосфоинозитид 3-киназа (PI3 киназа) фосфорилирует 3-позиционную гидроксильную группу инозитольного кольца фосфатидилинозитола (например, фосфатидилинозитол (3,4,5)-трисфосфат). В некоторых случаях PI3 (например, p110α, p110δ и р100γ) активирует PIP3, которая связывается с АКТ. В некоторых случаях АКТ, связанный с PIP3, фосфорилируется PDPK1, mTORC2 и ДНК-PK. В некоторых случаях фосфорилированный AKT ингибирует апоптоз.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент является агентом, который ингибирует (частично или полностью) активность PI3 киназ. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это 740 Y-P; SC 3036 (KKHTDDGYMPMSPGVA); активатор PI3-киназы (Santa Cruz Biotechnology, Inc); или их комбинации.

NF-kB

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях NF-kB (ядерный фактор-каппа В) транскрипционный фактор образуется в результате гомодимеризации и гетеродимеризации нескольких субъединиц. Субъединицы включают, но не ограничиваются этим, NF-кВ1 (р50); NF-κB2 (р52); RelA (p65); RelB; и c-Rel. В некоторых случаях NF-kB состоит из гетеродимера р50 и p65 или гетеродимера р52 и p65. Гетеродимер p65 содержит транскрипционные домены. В некоторых случаях неактивный NF-kB встречается в цитозоли и связан регуляторными белками (например, IkBa и IkBb).

В некоторых случаях представитель семейства NF-κВ активируется в ответ на (среди других триггеров) цитокины, LPS [липополисахарид], ультрафиолетовое излучение, шок (например, тепловой или осмотический), окислительный стресс или их комбинации. В некоторых случаях воздействие вышеупомянутых триггеров приводит к фосфориляции IkB со стороны IKK. В некоторых случаях фосфориляция IkB со стороны IKK приводит к протеолитическому расщеплению IkB. В некоторых случаях расщепление IkB обеспечивает транслокацию NF-kB в ядро, где он связывается с элементами способствующего всасыванию kB вещества генов-мишеней и индуцирует транскрипцию. В некоторых случаях активный NF-κ В транскрипционный фактор ингибирует апоптоз. В некоторых случаях активный NF-κВ транскрипционный фактор ингибирует модулирующие апоптоз гены TRAF1 и TRAF2. В некоторых случаях активный NF-κВ транскрипционный фактор стимулирует апоптоз.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, которые модулируют NF-kB транскрипционный фактор. В некоторых случаях агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, является антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом NF-kB. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, является агонистом NF-kB транскрипционного фактора, частичным агонистом и/или положительным аллостерическим модулятором. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист NF-kB транскрипционного фактора, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор представляют собой Pam₃Cys ((S)-(2,3-бис(пальмитоилокси)-(2RS)-пропил)-N-пальмитоил-(R)-Cys-(S)-Ser(S)-Lys4-ОН, тригидрохлорид); Act1 (NF-kB активатор 1); или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения NF-kB агонист, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор представляет собой IkB антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист.В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения IkB антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист является анти-IkB антителом.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, является антагонистом NF-kB транскрипционного фактора, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антагонист NF-kB транскрипционного фактора, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист - это ацетил-11-кето-b-босвеллевая кислота; андрографолид; фенэтил сложный эфир кофейной кислоты (САРЕ); глиотоксин; изохенелин Isohelenin; связывающий пептид NEMO-связывающего домена (DRQIKIWFQNRRMKWKXTALDWSWLQTE); NF-kB ингибитор активации (6-амино-4-(4-феноксифенилэтиламино) хиназолин); NF-kB ингибитор активации II (4-метил-N1-(3-фенилпропил) бензол-1,2-диамин); NF-kB ингибитор активации III (3-хлоро-4-нитро-N-(5-нитро-2-тиазолил)-бензамид); NF-kB ингибитор активации IV ((Е)-2-фтор-4'-метоксистильбен); NF-kB ингибитор активации V (5-гидрокси-(2,6-диизопропилфенил)-1Н-изоиндол-1,3-дион); NF-kB SN50 (AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP); оридонин; партенолид; РРМ-18 (2-бензоиламино-1,4-нафтохинон); Ro 106-9920; сульфасалазин; TIRAP ингибитор пептид (RQTKIWFNRRMKWKKLQLRDAAPGGAIVS); витаферин А; вогонин; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, ингибирует активацию NF-kB фактором TNF. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, является антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом TNF. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий активацию NF-kB фактором TNF, представляет собой BAY 11-7082 ((Е)3-[(4-метилфенил)сульфонил]-2-пропеннитрил); BAY 11-7085 ((E)3-[(4-t-бутилфенил)сульфонил]-2-пропеннитрил); (Е)-каспаицин; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий NF-kB транскрипционный фактор, является IKK антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения IKK антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист представляет собой ауротиомалат (ATM или AuTM); эводиамин; гипоэстоксид; IKK ингибитор III (BMS-345541); IKK ингибитор VII; IKK ингибитор X; IKK ингибитор II; IKK-2 ингибитор IV; IKK-2 ингибитор V; IKK-2 ингибитор VI; IKK-2 ингибитор (SC-514); IkB киназа ингибитор пептид; IKK-3 ингибитор IX; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения NF-kB антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист представляет собой IKK агонист, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор.

р38

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях р38 (митоген-активированные протеинкиназы (MAPK)) индуцирует (отдельно или в комбинации с другими полипептидами) апоптоз в ответ на наличие (среди других тригерров) цитокинов, LPS, ультрафиолетового излучения, шока (например, теплового или осмотического), окислительного стресса или их комбинаций. В некоторых случаях активированный р38 полипептид фосфорилирует МАРКАР киназу 2, ATF-2, Mac и MEF2. В некоторых случаях фосфориляция МАРКАР киназы 2, ATF-2, Mac и/или MEF2 приводит к апоптозу. В некоторых случаях апоптоз уменьшается в улиточной культуре под воздействием ототоксичного агента (например, неомицина и/или цисплатина), когда культура сначала обрабатывается р38 ингибитором SB-203580.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, модулирующих р38. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий р38, является р38 антагонистом, частичным агонистом, обратными агонистами, нейтральным или конкурентным антагонистами, аллостерическими антагонистами и/или ортостерическими антагонистами. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения р38 антагонист, частичный агонист, обратные агонисты, нейтральные или конкурентные антагонисты, аллостерические антагонисты и/или ортостерические антагонисты представляют собой ARRY-797 (Array BioPharma); SB-220025 (5-(2-амино-4-пирамидинил)-4-(4-фторфенил)-1-(4-пиперидинлил)имидазол); SB-239063 (транс-4-[4-(4-фторфенил)-5-(2-метокси-4-пиримидинил)-1Н-имидазол-1-ил]циклогексанол); SB-202190 (4-(4-фторфенил)-2-(4-гидроксифенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); JX-401(-[2-метокси-4-(метилтио)бензоил]-4-(фенилметил)пиперидин); PD-169316 (4-(4-фторфенил)-2-(4-нитрофинил)-5-(4-пиридил)-1Н-имидазол); SKF-86002 (6-(4-фторфенил)-2,3-дигидро-5-(4-пиридинил)имидозо[2,1-b]триазол дигидрохлорид); SB-200646 (N-(1-метил-1Н-индол-5-ил)-N'-3-пиридинил мочевина); CMPD-1 (2'-фтор-N-(4-гидроксифенил)-[1,1'-бифенил]-4-бутанамид); ЕО-1428 ((2-метилфенил)-[4-[(2-амино-4-бромфенил)амино]-2-хлорфенил]метанон); SB-253080 (4-[5-(4-фторфенил)-2-[4-(метилсульфонил)фенил]-1Н-имидазол-4-ил]пиридин); SD-169 (1Н-индол-5-карбоксамид); SB-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4-метилсульфинил фенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); или их комбинации.

Грелин

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения грелин - это лиганд, который связывается с рецептором стимулятора секреции гормона роста [соматотропин] (GHS-R). В некоторых случаях воздействие грелина ингибирует апоптоз в кардиомиоцитах, эндотелиальных клетках, адипоците, клубочковых клетках надпочечной области, β-клетках поджелудочной железы, остеобластических МС3Т3-Е1 клетках, интестинальных эпителиальных клетках и/или гипоталамических нейронах. В некоторых случаях воздействие грелина приводит к активации ERK1/2. В некоторых случаях воздействие грелина уменьшает продуцирование реактивных кислородных частиц. В некоторых случаях воздействие грелина стабилизирует митохондриальный трансмембранный потенциал. Кроме того, лечение грелином приводит к увеличению Bcl-2/Bax соотношения и антагонизму каспазы-3.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, которые модулируют грелин, В некоторых случаях агент, модулирующий грелин, является антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом грелина. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий грелин, является агонистом, частичным агонистом и/или положительным аллостерическим модулятором грелина. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор грелина представляет собой TZP-101 (Tranzyme Phanna); TZP-102 (Tranzyme Pharma); GHRP-6 (выделяющий гормон роста пептид-6); GHRP-2 (выделяющий гормон роста пептид-2); EX-1314 (Elixir Pharmaceuticals); MK-677 (Merck); L-692,429 (бутанамид, 3-амино-3-метил-N-(2,3,4,5-тетрагидро-2-оксо-1-((2'-(1Н-тетразол-5-ил)(1,1'-бифенил)-4-ил)метил)-1Н-1-бензазепин-3-ил)-, (R)-); EP1572 (Aib-DTrp-DgTrp-CHO); дилтиазем; метаболиты дилтиазема; или их комбинации.

BRE

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотичеекого агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование модулирующих апоптоз полипептидов, агониста, частичного агониста и/или положительных аллостерических модуляторов полипептидов, модулирующих апоптоз, или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулирующий апоптоз полипептид - это BRE ((экспрессированный белок мозга и репродуктивных органов)). В некоторых случаях BRE является антагонистом рецептора. В некоторых случаях BRE является антагонистом TNF-R1. В некоторых случаях BRE является антагонистом Fas. В некоторых случаях антагонизм TNF-R1 и/или Fas со стороны BRE частично или полностью ингибирует активацию каспазы в прямом направлении. В некоторых случаях ингибирование активации каспазы частично или полностью ингибирует апоптоз. В некоторых случаях связывание BRE с TNF-R1 и/или Fas частично или полностью ингибирует митохондриальный апоптотический путь.

Блокаторы кальциевого канала

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотичеекого агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, которые противодействуют открытию Са²⁺ каналов. Транскрипция множественных проапоптотических генов и модулирующих апоптоз генов контролируется уровнями Са²⁺ ионов. Кроме того, Са²⁺ ионы принимают непосредственное участие в активации множественных ферментов, включающих, но не ограничивающихся этим, фосфолипазы, эндонуклеазы и протеазы. Если эти ферменты сверхактивированы, они повреждают цитоскелет, плазменную мембрану, митохондрию и ДНК нейрона. При значительном повреждении нейрон подвергается апоптозу. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент является антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом блокатора Са²⁺ канала. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения блокаторами Са²⁺ канала являются верапамил, нимодипин, дилтиазем, омега-конотоксин, GVIA, амлодипин, фелодипин, лацидипин, мибефрадил, NPPB (5-нитро-2-(3-фенилпропиламино) бензойная кислота), флунаризин или их комбинации.

Аполипопротеины

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это агент, который стимулирует активность аполипопротеина. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АроЕ, агонисты АроЕ, имитаторы=мимики АроЕ, гомологи АроЕ или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АроА, агонисты АроА, имитаторы АроА, гомологи АроА или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АроВ, агонисты АроВ, имитаторы АроВ, гомологи АроВ или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АроС, агонисты АроС, имитаторы АроС, гомологи АроС или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой ApoD, агонисты ApoD, имитаторы ApoD, гомологи ApoD или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой АроН, агонисты АроН, имитаторы АроН, гомологи АроН или их комбинации.

Эритропоэтин

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, которые регулируют активность антиапоптозных генов. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, регулирующий активность антиапоптозных генов, является эритропоэтином (ЕРО). ЕРО - это гликопротеин, который после связывания со своим рецептором активирует каскад JAK2. Это в результате приводит к активации множественных модулирующих апоптоз генов. Рецепторы ЕРО обнаружены в цитоплазме внутренних и наружных фаланговых клеток, внутренних борозчатых клеток, поддерживающих орган Корти клеток и спиральных ганглиозных нейронах.

Лечение экзогенным ЕРО приводит к уменьшению количества клеток, подвергающихся апоптозу. Это также уменьшает повреждение, вызванное акустической травмой и ишемией, и защищает нейроны от индуцированной глутаматом эксайтотоксичности. Таким образом, ЕРО защищает нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза и/или индуцированного повреждением апоптоза. Соответственно, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотический агент представляет собой антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист эритропоэтина.

НО-1

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Экспрессия НО-1 ингибирует индукцию апоптоза. Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование агентов, которые модулируют активность гем-оксигеназы-1 (НО-1). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулятор НО-1 является антагонистом, частичным агонистом, обратным агонистом, нейтральным или конкурентным антагонистом, аллостерическим антагонистом и/или ортостерическим антагонистом НО-1. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулятор НО-1 является агонистом, частичным агонистом и/или положительным аллостерическим модулятором НО-1. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор НО-1 представляют собой пиперин, гемин и/или бразилин.

Каспаза

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включены антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист каспазы-мишени, включающей, но не ограничивающейся этим, каспазу-8 и/или каспазу-9. В некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование ингибиторов каспазы. Каспазы - это протеазы, некоторые из которых опосредуют апоптоз. Как каспаза 8, так и каспаза 9 встречаются в волосковых клетках, подвергшихся акустической травме, лечению аминогликозодом и лечению цисплатином. Когда вестибулярные волосковые клетки подвергаются лечению антагонистом, частичным агонистом, обратными агонистами, нейтральными или конкурентными антагонистами, аллостерическими антагонистами и/или ортостерическими антагонистом каспазы после лечения неомицином сохраняется выживание клеток. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ингибитор каспазы представляет собой z-VAD-FMK (бензилоксикарбонил-Val-Ala-Asp(ОМе)-фторметилкетон); z-LEHD-FMK (бензилоксикарбонил-Leu-Glu(ОМе)-His-Asp(ОМе)-фторметилкетон); B-D-FMK (бок-аспартил(ОМе)-фторметилкетон); Ac-LEHD-CHO (N-ацетил-Leu-Glu-His-Asp-CHO); Ac-IETD-СНО (N-ацетил-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO); z-IETD-FMK (бензилоксикарбонил-Ile-Glu(ОМе)-Thr--Asp(OMe)-фторметилкетон); FAM-LEHD-FMK (бензилоксикарбонил Leu-Glu-His-Asp-фторметилкетон); FAM-LETD-FMK (бензилоксикарбонил Leu-Glu-Thr-Asp-фторметилкетон); Q-VD-OPH (хинолин -Val-Asp-CH₂-O-Ph); или их комбинации.

Ингибитор апоптозного белка (IAP)

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включены антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист модулирующего апоптоз полипептида. В некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование модулирующих апоптоз полипептидов, агониста, частичного агониста и/или положительных аллостерических модуляторов полипептидов, модулирующих апоптоз, или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулирующий апоптоз полипептид является представителем ингибитора семейства апоптозного белка (IAP) (например, XIAP; cIAP-1; cIAP-2; ML-IAP; ILP-2; NATP; сурвивин; Bruce; и IAPL-3). В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизм, XIAP уменьшает развитие и/или прогрессирование пресбиакузиса. В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизм, XIAP уменьшает потерю слуха в высокочастотных диапазонах. В некоторых случаях лечение с помощью, или агонизм, белка XIAP уменьшает индуцированную гентамицином потерю слуха.

В некоторых случаях представитель семейства IAP противодействует каспазе (например, каспазе 3, каспазе 7, каспазе 8 и каспазе 9). В некоторых случаях XIAP противодействует каспазе 3, каспазе, 7 и каспазе 9. В некоторых случаях cIAP-1 противодействует каспазе 3 и каспазе 7. В некоторых случаях cIAP-2 противодействует каспазе 3 и каспазе 7. В некоторых случаях ML-IAP противодействует каспазеЗ и каспазе 9. В некоторых случаях ILP-2 противодействует каспазе 9. В некоторых случаях NIAP противодействует каспазе 3 и каспазе 7. В некоторых случаях сурвивин противодействует каспазе 9. В некоторых случаях антагонизм каспазы частично или полностью ингибирует апоптоз. В некоторых случаях представитель семейства IAP катализирует убиквинацию каспазы. В некоторых случаях XIAP катализирует убиквинацию каспазы. В некоторых случаях cIAP-1 катализирует убиквинацию каспазы. В некоторых случаях cIAP-2 катализирует убиквинацию каспазы (например, каспазы 3 и каспазы 7).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения представитель семейства IAP - это XIAP (Х-связанный IAP); cIAP-1 (клеточный IAP-1); cIAP-2 (клеточный IAP-2); МЛ-IAP (меланомный LAP); ILP-2 (IAP-подобный белок); NAIP (нейронный подавляющий апоптоз белок); сурвивин; Вшсе; IAPL-3; или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения IAP - это XIAP. В некоторых примеры осуществления настоящего изобретения IAP вводится до, после или одновременно с вторым полипептидом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения сурвивин вводится до, после или одновременно с гепатит В Х-взаимодействующим белком (HBXIP). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ILP-2 вводится со связывающим партнером. В некоторых случаях связывающий партнер стабилизирует ILP-2.

Фортилин

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антагониста, частичного агониста, обратного агониста, нейтрального или конкурентного антагониста, аллостерического антагониста и/или ортостерического антагониста модулирующего апоптоз полипептида. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения используются модулирующие апоптоз полипептиды, агонист, частичный агонист и/или положительные аллостерические модуляторы модулирующих апоптоз полипептидов или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулирующий апоптоз полипептид является фортилином. В некоторых случаях фортилин связывается с Са²⁺. В некоторых случаях Са²⁺ опосредует транскрипцию множественных проапоптотических генов. В некоторых случаях связыание Са²⁺ фортилином частично или полностью ингибирует Са²⁺-опосредованную транскрипцию проапоптотических генов.

Кальпаин

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование одного или нескольких антагонистов, частичных агонистов, обратных агонистов, нейтральных или конкурентных антагонистов, аллостерических антагонистов и/или ортостерических антагонистов кальпаина. Кальпаины - это кальций-зависимые, нелизосомальные цистеиновые протеазы. Они участвуют в апоптозе клеток. Лейпептин, ингибитор кальпаина, защищает нейроны и слуховые волосковые клетки от аминогликозидной ототоксичности. Кроме того, кальпаины часто встречаются в нейронах и/или волосковых клетках после лечения цисплатином или после акустической травмы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ингибитором кальпаинов является лейпептин; PD-150606 (3-(4-иодофенил)-2-меркапто-(Z)-2-акриловая кислота); MDL-28170 (Z-Val-Phe-CHO); кальпептин; ацетил-кальпастатин; MG 132 (N-[(фенилметокси)карбонил]-L-лейцил-N-[(1S)-1-формил-3-метилбутил]-L-лейцинамид); MYODUR; BN 82270 (Ipsen); BN 2204 (Ipsen); или их комбинации.

р53

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование одного или нескольких антагонистов, частичных агонистов, обратных агонистов, нейтральных или конкурентных антагонистов, аллостерических антагонистов и/или ортостерических антагонистов р53. р53 - это транскрипционный фактор, который регулирует клеточный цикл и инициирует апоптоз в поврежденных клетках. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антагонист, частичный агонист, обратные агонисты, нейтральные или конкурентные антагонисты, аллостерические антагонисты или и/или ортостерические антагонисты р53 - это молекула siRNA, AHLi-11 (Quark Pharmaceuticals), mdm2 белок, пифитрин-α (1-4-метилфенил)-2-(4,5,6,7-тетрагидро-2-имино-3(2Н)-бензотиазолил)этанон), их аналоги или комбинации.

Белки теплового шока

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента, Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это агент, стимулирующий активность белков теплового шока. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой белок теплового шока. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой Hsp70, Hsp72, BiP (or Grp78), mtHsp70 (or Grp75), Hsp70-1b, Hsp70-1L, Hsp70-2, Hsp70-4, Hsp70-6, Hsp70-7, Hsp70-12a, Hsp70-14, Hsp10, Hsp27, Hsp40, Hsp60, Hsp90, Hsp104, Hsp110, Grp94 или их комбинации.

Факторы «трилистника»

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых случаях фактор «трилистника» индуцирует активацию NF-κВ. В некоторых случаях активация NF-κВ ингибирует апоптоз.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это агент, который стимулирует активность фактора «трилистника». В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой фактор «трилистника». В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент представляет собой фактор «трилистника», агонист фактора «трилистника» или его гомолог или имитатор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент - это TFF1, TFF2, TFF3 или их комбинации.

Модуляторы сиртуина

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование одного или нескольких антагонистов, частичных агонистов, обратных агонистов, нейтральных или конкурентных антагонистов, аллостерических антагонистов и/или ортостерических антагонистов сиртуинов. Сиртуины (или Sir2 белки) включают класс III гистон дезацетилаз (HDAC). Существует семь представителей семейства: Sirt1, Sirt2, Sirt3, Sirt4, Sirt5, Sirt6 и Sirt7, Агонизм Sirti может предупредить апоптоз путем деацетилирования проапоптотических генов р53 и Ku-70. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агониет, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор активности сиртуина представляет собой стильбен, флавон, изофлавон, флаванон, катехин, свободнорадикальное защитное соединение, изоникотинамид, дипиридамол, ZM 336372 (3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)-амино]-4-метилфенил] бензамид), камптотецин, куместрол, нордигидрогуайаретовая кислота, эскулетин, SRT-1720 (Sirtris), SRT-1460 (Sirtns), SRT-2183 (Sirtris), их аналоги или комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агонист, частичный агонист и/или положительный аллостерический модулятор сиртуинов представляет собой стильбен. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения стильбен представляет собой транс-стильбен, цис-стильбен, ресвератрол, пицеатаннол, рапонтин, деоксирапонтин, бутеин или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, модулирующий реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является хальконом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения халькон представляет собой халькон, изоликвиртиген; бутеин; 4,2',4'-тригидроксихалькон; 3,4,2',4',6'-пентагидроксихалькон; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является флавоном. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения флафон представляет собой флавон, морин, физетин; лутеолин; кверцетин; кемпферол; апигенин; госсипетин; мирицетин; 6-гидроксиапигенин; 5-гидроксифлавон; 5,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон; 3,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон; 3,6,3',4'-тетрагидроксифлавон; 7,3',4',5'-тетрагидроксифлавон; 3,6,2',4'-тетрагидроксифлавон; 7,4'-дигидроксифлавон; 7,8,3',4'-тетрагидроксифлавон; 3,6,2',3'-тетрагидроксифлавон; 4'-гидроксифлавон; 5-гидроксифлавон; 5,4'-дигидроксифлавон; 5,7-дигидроксифлавон; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является изофлавоном. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения изофлавон представляет собой даидзеин, генистеин или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является флаваноном. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения флаванон представляет собой нарингенин; флаванон; 3,5,7,3',4'-пентагидроксифлаванон; или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является антоцианидином. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антоцианидин представляет собой пеларгонидин хлорид, цианидин хлорид, дельфинидин хлорид или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является катехин. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения катехин представляет собой (-)-эпикатехин (гидроксильные участки; 3,5,7,3',4'); (-)-катехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); (-)-галлокатехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4',5') (+)-катехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); (+)-эпикатехин (гидроксильные участки: 3,5,7,3',4'); или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, который модулирует реакции сиртуин катализированного дезацетилирования, является свободнорадикальным защитным соединением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения свободнорадикальное защитное соединение представляет собой хинокитиол (b-туяплицин; 2-гидрокси-4-изопропил-2,4,6-циклогептатриен-1-он); L-(+)-эрготионеин((S)-а-карбокси-2,3-дигидро-N,N,N-триметил-2-тиоксо-1Н-имидазол4-этанаминий внутренняя соль); фенил сложный эфир кофейной кислоты; MCI-186 (3-метил-1-фенил-2- пиразолин -5-он); HBED (N,N'-Di(2-гидроксибензил) этилендиамин -N,N'-диацетилуксусная кислота ·H₂O); амброксол (транс-4-(2-амино-3,5-дибромбензиламино)циклогексан-HCl; и LJ-83836E ((-)-2-((4-(2,6-ди-1-пирролидинил-4-пиримидинил)-1-пиперазинил)метил)-3,4-дигидро-2,5,7,8-тетраметил-2Н-1-бензопиран-6-ол·2HCl); или их комбинации.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения никотинамид связывающий антагонист является изоникотинамидом или аналогом изоникотинамида. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения аналог изоникотинамида - это β-1'-5-метил-никотинамид-2'- дезоксирибоза; β-D-1'-5-метил- никотинамид -2'-дезоксирибофуранозид; β-1'-4,5-диметил-никотинамид-2'- дезоксирибоза; или β-D-1'-4,5-диметил-никотинамид-2'-дезоксирибофуранозид. Сведения о дополнительных аналогах изоникотинамида см. в патентах США №№5985848; 6066722; 6228847; 6492347; 6,803,455; и публикации патента США №№2001/0019823; 2002/0061898; 2002/0132783; 2003/0149261; 2003/0229033; 2003/0096830; 2004/0053944; 2004/0110772; и 2004/0181063, которые включены в данный документ путем ссылок в отношении такого раскрытия сущности изобретения.

Src

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть, антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

Ингибирование Src pp60^c-src модулирует апоптоз. Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование одного или нескольких антагонистов, частичных агонистов, обратных агонистов, нейтральных или конкурентных антагонистов, аллостерических антагонистов и/или ортостерических антагонистов семейства Src или протеинкиназ. Семейство Src представляет собой семейство нерецепторных протеинкиназ. Примеры Src киназ, обнаруженных у позвоночных, включают, но не ограничиваются этим, Src, Yes, Fgr, Yrk, Fyn, Lyn, Hck, Lck и Blk. Они катализируют фосфорилирование белков за счет перемещения фосфата из АТР в свободную гидроксильную группу на серине, треонине или тирозине. В качестве неограничивающего примера, мишени Src киназа-катализированного фосфорилирования включают винкулин, контактин, талин, паксилин, FAK, тенсин, эзрин, p130cas, β- и γ-катенин, ZO-1, окклудин, p120ctn, коннексин 43, нектин-2 дельта. Src киназы состоят из N-концевого SH3 домена, центрального SH2 домена и домена тирозинкиназы. Связывание лиганда с SH2 и SH3 доменами индуцирует конформационное изменение, которое ингибирует активность Src киназы.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения Src - это pp60^c-src. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения Src антагонист, частичный агонист, обратный агонист, нейтральный или конкурентный антагонист, аллостерический антагонист и/или ортостерический антагонист представляют собой 1- нафтил РР1 (1-(1,1-диметилэтил)-3-(1-нафталинил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пирамидин-4-амин); лавендастин А (5-[[(2,5-дигидроксифенил)метил][(2-гидроксифенил)метил]амино]-2-гидроксибензойная кислота); MNS (3,4- метилендиокси-b-нитростирол); РР1 (1-(1,1-диметилэтил)-1-(4-метилфенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пирамидин-4-амин); РР2 (3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-1H-пиразоло[3,4-d]пирамидин-4-амин); КХ1-004 (Kinex); KX1-005 (Kinex); КХ1-136 (Kinex); КХ1-174 (Kinex); KX1-141 (Kinex); KX2-328 (Kinex); KX1-306 (Kinex); KX1-329 (Kinex); KX2-391 (Kinex); KX2-377 (Kinex); ZD4190 (Astra Zeneca; N-(4-бром-2-фторфенил)-6-метокси-7-(2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)хиназолин-4-амин); АР22408 (Ariad Pharmaceuticals); AP23236 (Ariad Pharmaceuticals); AP23451 (Ariad Pharmaceuticals); AP23464 (Ariad Pharmaceuticals); AZD0530 (Astra Zeneca); AZM475271 (M475271; Astra Zeneca); дазатиниб (N-(2-хлор-6-метилфенил)-2-(6-(4-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-1-ил)-2-метилпирамидин-4-иламино)тиазол-5-карбоксамид); GN963 (транс-4-(6,7-диметоксихиноксалин-2иламино) циклогексанол сульфат); босутиниб (4-((2,4-дихлор-5-метоксифенил)амино)-6-метокси-7-(3-(4-метил-1-пиперазинил)пропокси)-3-хинолинкарбонитрил); или их соединения.

Сведения о дополнительных аналогах антагонистов, частичных агонистов, обратных агонистов, нейтральных или конкурентных антагонистов, аллостерических антагонистов и/или ортостерических антагонистов Src семейства киназ см. в публикации патента США №2006/0172971, который включен в данный документ путем ссылок в отношении такого раскрытия сущности изобретения.

RNAi

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые защищают нейроны и слуховые волосковые клетки от апоптоза (то есть антиапоптотический агент). Кроме того, для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые индуцируют апоптоз в нейронах и слуховых волосковых клетках (то есть, проапоптотический агент). Соответственно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование антиапоптотического агента. Альтернативно, в некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включено использование проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения, где требуется ингибирование или понижающая регуляция мишени (например, гены в каскаде MAPK/JNK, каспазные гены, Src гены, кальпаиновые гены, гены Са²⁺ канала), может быть использована интерференция РНК. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент, ингибирующий или понижающе регулирующий мишень, является siRNA молекулой. В некоторых случаях siRNA молекула ингибирует транскрипцию мишени РНК интерференцией (RNAi). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения генерируется молекула двунитевой РНК (dsRNA) молекула с комплементарными к мишени последовательностями (например, с помощью PCR). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения генерируется 20-25 bp siRNA молекула с комплементарными к мишени последовательностями. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения 20-25 bp siRNA молекула имеет 2-5 bp выступы на 3' конце каждой нити и 5' фосфатном конце и 3' гидроксильном конце. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения 20-25 bp siRNA молекула имеет обрубленные концы. Сведения о методах создания РНК последовательностей см. в работе «Молекулярное клонирование»: Практикум, второе издание (Sambrook et al., 1989) и «Молекулярное клонирование»: Практикум, третье издание (Sambrook and Russel, 2001), упоминаемые в данном описании совместно как «Sambrook»); «Текущие протоколы молекулярной биологии» (F.M.Ausubel et al., под редакцией, 1987,, включая дополнения до 2001 года); Текущие протоколы химии нуклеиновой кислоты (John Wiley & Sons, Inc, Нью-Йорк, 2000), которые включены в данный документ путем ссылок в отношении такого раскрытия сущности изобретения.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения молекула dsRNA или siRNA встроена в приемлемую для уха с контролируемым высвобождением, микросферу или микрочастицу, гидрогель, липосому или термообратимый гель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для уха микросфера, гидрогель, липосома, краситель, пена, формирующийся по месту пористый материал, нанокаспула или наночастица или термообратимый гель инъецируются во внутреннее ухо. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая микросфера или микрочастица, гидрогель, липосома или термообратимый гель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая микросфера, гидрогель, липосома, краситель, пена, формирующийся по месту пористый материал, нанокаспула или наночастица или термообратимый гель инъецируются в улитку, орган Корти, вестибулярный лабиринт, или их комбинация.

В некоторых случаях после введения dsRNA или siRNA молекулы клетки в месте введения (например, клетки улитки, органа Корти и/или вестибулярного лабиринта) трансформируются молекулой dsRNA или siRNA. В некоторых случаях после трансформации dsRNA молекула расщепляется на множество фрагментов размером приблизительно 20-25 bp с получением siRNA молекул. В некоторых случаях фрагменты имеют приблизительно 2-bp выступы на 3'-конце каждой нити.

В некоторых случаях siRNA молекула разделяется на две нити (прямую нить и непрямую нить) с помощью РНК-индуцированного комплекса сайленсинга (RISC). В некоторых случаях прямая нить входит в состав каталитического компонента RISC (то есть, аргонавт). В некоторых случаях прямая нить связывается с комплементарной последовательностью mRNA-мишени. В некоторых случаях RISC расщепляет mRNA-мишень. В некоторых случаях экспрессия гена-мишени понижающе регулируется.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения последовательность, комплементарная к мишени, лигирована в вектор. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения последовательность расположена между двумя промоторами. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения промоторы ориентированы в противоположных направлениях. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вектор контактирует с клеткой. В некоторых случаях клетка трансформируется вектором. В некоторых случаях после трансформации создаются смысловые и антисмысловые нити последовательности. В некоторых случаях смысловые и антисмысловые нити скрещиваются с образованием dsRNA молекулы, которая расщепляется на молекулы siRNA. В некоторых случаях нити скрещиваются с образованием молекулы siRNA. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой плазмиду (например, pSUPER; pSUPER.neo; pSUPER.neo+gfp).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вектор встроен в приемлемую для уха с контролируемым высвобождением микросферу или микрочастицу, гидрогель, липосому или термообратимый гель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая микросфера, гидрогель, липосома, краситель, пена, формирующийся по месту пористый материал, нанокаспула или наночастица или термообратимый гель инъецируются во внутреннее ухо. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая микросфера или микрочастица, гидрогель, липосома или термообратимый гель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая микросфера, гидрогель, липосома, краситель, пена, формирующийся по месту пористый материал, нанокаспула или наночастица или термообратимый гель инъецируются в улитку, орган Корти, вестибулярный лабиринт, или их комбинация.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения в представленных композициях концентрация активного фармацевтического ингредиента или фармацевтически приемлемого пролекарства или его соли составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 70 мг/мл, от приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 70 мг/мл, от приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, от приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл, от приблизительно 1 мг до приблизительно 70 мг/мл, от приблизительно 1 мг до приблизительно 50 мг/мл, от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл, от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл или от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 5 мг/мл активного агента или фармацевтически приемлемого пролекарства или его соли по объему композиции.

Антитела

Для использования с предложенными в настоящем описании композициями рассматриваются агенты, которые ингибируют рост ушных неоплазм. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агентом является антитело. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антитело ингибирует рост кровеносных сосудов. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антитело вызывает некроз (например, апоптоз) опухолевой клетки. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антитело представляет собой анти-CD-20 антитело, анти-CD22 антитело, анти-CD32b антитело, анти-CD-33 антитело, анти-CD40 антитело, анти-CD52 антитело, анти-EGFR антитело, анти-VEGF антитело, анти-НЕК2 рецептора антитело, анти-17-1A антитело, анти-CCR4 антитело, анти-IGF-IR антитело, анти-CTLA-4 антитело, или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антитело представляет собой анти-CD20 антитело. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антитело представляет собой ритуксимаб, тоситумомаб, ибритумомаб, эпратузумаб, алемтузумаб, окрелизумаб (PRO70769), велтузумаб (IMMU-106 или hA20), офатумумаб (HuMax-CD20 антитело человеческого IgG1 или 2F2), HuMAB 7D8 (Genmab A/S), AME-133v (LY2469298, Applied Molecular Evolution), GA101 (R7159, Genentech), PR0131921 (Genentech), rhuMAb v114, Ведьма-hA20 (Immunomedics), BLX301 (BioLex), Bi20 (FBTA05, TRION Pharma), эпратузумаб, лумиликсимаб, HuM195, алемтузумаб, цетуксимаб, панитумумаб, бевацизумаб, трастузумаб, эдреколомаб, адекатумумаб, КМ2760, rhuCD40 Мэб, Дацетузумаб (SGN40), СР 870 893 (Pfizer), HCD122 (Novartis/Xoma), СР 675 206 (Pfizer), CP 751 871 (Pfizer) или их комбинации.

Комбинированная терапия

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенные композиции, кроме того, включают дополнительный терапевтический агент.В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дополнительный терапевтический агент представляет собой окисляющий агент, анестезирующий агент, аналгезирующий агент, антибиотик, противорвотный, противогрибковый, антимикробный агент, нейролептик (особенно из класса фенотиазина), антисептик, антивирусный, вяжущий, химиотерапевтический агент, коллаген, кортикостероид, диуретик, кератолитический агент, ингибитор синтазы оксида азота или их комбинации,

Окисляющие агенты

Окисляющие агенты используются факультативно в комбинации с предложенными в настоящем описании композициями. Окисляющие агенты понижают уровень вестибулярной среды, что делает ее неблагоприятной для роста большинства микробов. Окисляющие агенты включают, но не ограничиваются этим, уксусную кислоту.

Противорвотные агенты

Противорвотные агенты факультативно используются в комбинации с предложенными в настоящем описании композициями. Противорвотные агенты включают прометазин, прохлорпемазин, триметобензамид и триэтилперазин. Другие Противорвотные агенты включают 5НТ3 антагонисты, например, доласетрон, гранисетрон, ондансетрон, трописетрон и палоносетрон; и нейролептические агенты, например, дроперидол. Кроме того, Противорвотные агенты включают антигистамины, например меклизин; фенотиазины, например перфеназин, и тиэтилперазин; антагонисты допамина, включающие домперидон, проперидол, галоперидол, хлорпромазин, прометазин, прохлорпемазин, метоклопрамид или их комбинации; каннабиноиды, включающие дронабинол, набилон, сативекс или их комбинации; антихолинергические средства, включающие скополамин; и стероиды, включающие дексаметазон; триметобензамин, эметрол, пропофол, мусцимол или их комбинации.

Антимикробные агенты

Антимикробные агенты также рассматриваются как применимые с предложенными в настоящем описании композициями. Антимикробные агенты включают агенты, направленные на ингибирование или ликвидацию микробов, включая бактерии, грибки или паразиты. Специфические антимикробные агенты могут использоваться для борьбы со специфическими микробами. Соответственно, квалифицированный практик должен знать, что антимикробный агент применим или пригоден в зависимости от идентифицированного микроорганизма или проявившихся симптомов. Антимикробные агенты включают антибиотики, антивирусные агенты, противогрибковые агенты и противопаразитарные агенты.

Антибиотики включают, но не ограничиваются этим, амикацин, гентамицин, канамицин, неомицин, нетилмицин, стептомицин, тобрамицин, паромомицин, гельданмицин, гербимицин, лоракарбеф, эрпатенем, дорипенем, имипенем, циластатин, меропенем, цефадроксил, цефазолин, цефалотин, цефалексин, цефаклор, цефамандол, цефокситин, дефпрозил, цефуроксим, цефиксим, цефдинир, цефдиторен, цефоперазон, цефотаксим, цефподоксим, цефтазидим, цефтибутен, цефтизоксим, цефтриаксон, цефепим, цефтобипрол, тейкопланин, ванкомицин, азитромицин, кларитромицин, диритромицин, эритомицин, рокситромицин, тролеандомицин, телитромицин, спектиномицин, азтреонам, амоксициллин, ампициллин, азлоциллин, карбенициллин, клоксациллин, диклоксациллин, флуклоксациллин, мезлоциллин, метициллин, нафциллин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, тикарциллан, бацитрацин, колистин, полимиксин В, ципрофлоксацин, эноксацин, гатифлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин, моксифлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, тровфлоксацин, мафенид, пронтозил, сульфацетамид, сульфаметизол, сульфаниламид. сульфсалазин, сульфисоксазол, триметоприм, демеклоциклин, доксициклин, миноциклин, окстетрациклин, тетрациклин, сальварсан, хлорамфеникол, клиндамицин, линкомицин, этамбутол, фосфомицин, фусидовая кислота, фуразолидон, изониазид, линезолид, метронидазол, мупироцин, нитрофурантоин, платенсимицин, пиразинамид, хинупристин/ дальфопристин, рифампин, тинидазол, или их комбинации.

Антивирусные агенты включают, но не ограничиваются этим, ацикловир, фамцикловир и валацикловир. Другие антивирусные агенты включают абакавир, ацикловир, адфовир, амантадин, ампренавир, арбидол, атазанавир, артипла, бривудин, цидофовир, комбивир, эдоксудин, эфавиренц, эмтрицитабин, энфувиртид, энтекавир, фомвирсен, фосампренавир, фоскарнет, фосфонет, ганцикловир, гардасил, ибацитабин, имуновир, идоксуридин, имиквимод, индинавир, инозин, ингибиторы интегразы, интерфероны, включающие интерферон тип III, интерферон тип II, интерферон тип I, ламивудин, лопинавир, ловирид, МК-0518, маравирок, мороксидин, нелфинавир, невирапин, нексавир, нуклеозидные аналоги, осельтамивир, пенцикловир, перамивир, плеконарил, подофиллотоксин, ингибиторы протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы, рибавирин, римантадин, ритонавир, саквинавир, ставудин, тенофовир, тенофовир дизопроксил, типранавир, трифлуридин, тризивир, тромантадин, трувада, валганцикловир, викривирок, видарабин, вирамидин, зальцитабин, занамивир, зидовудин, или их комбинации.

Противогрибковые агенты включают, но не ограничиваются этим, амролфин, утенафин, нафтифин, тербинафин, флуцитозин, флуконазол, итраконазол, кетоконазол, позаконазол, равуконазол, вориконазол, клотримазол, эконазол, миконазол, оксиконазол, сулконазол, терконазол, тиоконазол, никкомицин Z, каспофунгин, микафунгин, анидулафунгин, амфотерицин В, липосомальный нистатин, пимарицин, гризеофульвин, циклопирокс оламин, галопрогин, толнафтат, ундециленат, или их комбинации. Антипаразитарные агенты могут включать амитраз, амосканат, авермицин, карбадокс, диэтилкарбамицин, диметридазол, диминазин, имермектин, макрофиларицид, малатион, митабан, оксамниквин, перметрин, празиквантел, прантел памоат, селамектин, натрий стибоглюконат, тиабендазол, или их комбинации.

Антисептические агенты

Антисептические агенты также рассматриваются как применимые с предложенными в настоящем описании композициями. Антисептические агенты включают, но не ограничиваются этим, уксусную кислоту, борную кислоту, генцианвиолет, перекись водорода, карбамид пероксид, хлоргексидин, солевой раствор, меркурохром, повидон йод, полихироксин йод, крезолят и алюминий ацетат, а также их смеси.

Вяжущие средства

Вяжущие средства также рассматриваются как применимые с предложенными в настоящем описании композициями. Вяжущие средства включают, но не ограничиваются этим, изопропиловый спирт, этанол и пропиленгликоль.

Кортикостероиды

Кортикостероиды также рассматриваются как применимые с предложенными в настоящем описании композициями. Кортикостероиды включают, но не ограничиваются этим, гидрокортизон, преднизон, флупреднизолон, дексаметазон, бетаметазон, бетаметазон валерат, метилпреднизолон, флуоцинолон ацетонид, флурандренолон ацетонид, флуорометолон, кортизон, преднизолон, алклометазон, амцинонид, бетаметазон, клобетазол, клокортолон, дезонид, дезоксиметазон, дифлоразон, флуоцинонид, флурандренолид, флутиказон, хальцинонид, галобетазол, мометазон, флуметазон, предникарбат и триамцинолон, а также их смеси.

Антагонисты тромбоцитактивирующего фактора

Антагонисты тромбоцитактивирующего фактора также рассматриваются для использования в комбинации с предложенными в настоящем описании композициями, модулирующими апоптоз. Антагонисты тромбоцитактивирующего фактора включают, только в качестве примера, кадсуренон, фомактин G, гинзенозиды, апафант (4-(2-хлорфенил)-9-метил-2[3(4-морфолинил)-3-пропанол-1-ил[6Н-тиено[3.2-f[[1.2.4]триазоло]4,3-1]]1.4]диазепин), А-85783, BN-52063, BN-52021, BN-50730 (тетраэдр-4,7,8,10 метил-1(хлор-1фенил)-6(метокси-4фенил-карбамоил)-9пиридо[4',3'-4,5] тиено[3,2-f]триазоло-1,2,4 [4,3-а] диазепин-1,4), BN 50739, SM-12502, RP-55778, Ro 24-4736, SR27417A, CV-6209, WEB 2086, WEB 2170, 14-деоксиандрографолид, CL 184005, CV-3988, TCV-309, PMS-601, TCV-309 или их комбинации.

Ниже представлены (Таблица 1) примеры активных средств, рассматриваемых для использования с предложенными в настоящем описании композициями и устройствами. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения один или несколько активных агентов, представленных в Таблице 1, используются в описанной в настоящем описании композиции или устройстве.

ТАБЛИЦА 1
Состояние уха	Терапевтический агент
Доброкачественное пароксизмальное постуральное головокружение	Дифенгидрамид
Доброкачественное пароксизмальное постуральное головокружение	Лоразепам
Доброкачественное пароксизмальное постуральное головокружение	Меклизин
Состояние уха	Терапевтический агент
Доброкачественное пароксизмальное постуральное головокружение	Олдансетрон
Потеря слуха	Эстроген
AIED [аутоиммунное заболевание внутреннего уха]	Этанерцепт (Энбрел)
AIED	GW3333
AIED	Копаксон
Потеря слуха	Эстроген и прогестерон (Е+Р)
Потеря слуха	Фолиевая кислота
Потеря слуха	Лактат Рингера с 0,03% офлоксацином
Потеря слуха	Метотрексат
Потеря слуха	N-ацетил цистеин
Болезнь Меньера	Бетагистин
Болезнь Меньера	Силденафил
Болезнь Меньера	Такролимус
Экссудат барабанной полости	Пневмококковая вакцина
Наружный отит	Диклофенак-натрий; dexotc
Наружный отит, острый	AL-15469A/AL-38905
Средний отит	Амоксициллин/клавуланат
Средний отит	Дорназа альфа
Средний отит	Эхинацея пурпурная
Средний отит	Фаропенем медоксомил
Средний отит	Левофлоксацин
Средний отит	PNCRM9
Средний отит	Пневмококковая вакцина
Средний отит	Телитромицин
Средний отит	Zmax
Средний отит с экссудатом	Лансопразол
Средний отит, острый	AL-15469A;AL-38905
Средний отит, острый	Амокеициллин
Состояние уха	Терапевтический агент
Средний отит, острый	Амоксициллин-клавуланат
Средний отит, острый	Азитромицин
Средний отит, острый	Азитромицин SR
Средний отит, острый	Цефдинир
Средний отит, острый	Капли при боли в ухе Хайленда
Средний отит, острый	Монтелукаст
Средний отит, острый	Пневмококковая вакцина
Средний отит, острый с тимпаностомическими трубками	AL-15469A/AL38905
Средний отит, хронический	Сульфаметоксазол- триметоприм
Средний отит, гнойный	Азитромицин
Средний отит, гнойный	Телитромицин
Отосклероз	Ацетилцистеин
Ототоксичность	Аспирин
Шум в ушах	Акампросат
Шум в ушах	Габапентин
Шум в ушах	Модафинил
Шум в ушах	Нерамексан
Шум в ушах	Нерамексан месилат
Шум в ушах	Пирибедил
Шум в ушах	Варденафил
Шум в ушах	Вестиплитант+Пароксетин
Шум в ушах	Вестиплитант
Шум в ушах	Сульфат цинка

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дополнительным терапевтическим агентом является агент с немедленным высвобождением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения дополнительным терапевтическим агентом является агент с контролируемым высвобождением.

Общие методы стерилизации

В настоящем описании представлены композиции для лечения ушей, которые улучшают или облегчают приведенные в данном описании заболевания уха. Кроме того, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения представлены способы, включающие введение упомянутых композиций для лечения уха. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции или устройства стерилизуются. В примерах осуществления настоящего изобретения предложены средства и способы стерилизации фармацевтической композиции или устройства, предлагаемых для использования при лечении человека. Цель состоит в том, чтобы обеспечивался безопасный фармацевтический продукт, соответственно не содержащий вызывающих инфекцию микробов. Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США выпущен нормативный документ «Руководство для промышленности: стерильные лекарственные продукты, полученные с помощью асептической обработки», доступное на сайте: http://www.fda.gov/cder/guidance/5882fnl.htm, которое включено в данный документ путем ссылок во всей полноте.

В соответствии с использованием в настоящем описании «стерилизация» означает процесс, который применяется для уничтожения или удаления микробов, присутствующих в продукте или упаковке. Любой подходящий доступный метод стерилизации объектов и композиций рассматривается как применимый для использования с предложенными в настоящем описании композициями и устройствами. Доступные методы инактивации микробов включают, но не ограничиваются этим, применение очень высоких температур, смертоносных химикатов или гамма излучения. В настоящем описании предложены, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения, способы получения ушной терапевтической композиции, включающие воздействие на композицию одного из следующих методов стерилизации: тепловая стерилизация, химическая стерилизация, лучевая стерилизация или стерилизация фильтрованием. Используемый метод в значительной степени зависит от природы стерилизуемого устройства или композиции. Подробные описания многих методов стерилизации приведены в Главе 40, Remington: Наука и практика фармацевтики, издание Lippincott, Williams & Wilkins, метод включен в данный документ путем ссылок в отношении данной темы.

Тепловая стерилизация

Существует много методов стерилизации в условиях очень высоких температур. Один из этих методов заключается в использовании автоклава с насыщенным паром. В этом методе насыщенный пар при температуре не менее 121°С контактирует со стерилизуемым объектом. Жар воздействует непосредственно на микробы, если речь идет о подвергающемся стерилизации объекте, или косвенно на микробы при нагреве массы стерилизуемого водного раствора. Этот метод широко практикуется, поскольку в процессе стерилизации он обеспечивает гибкость, безопасность и экономию.

Стерилизация сухим жаром - это метод, который используется для уничтожения микробов и дспирогенации при повышенной температуре. Этот процесс происходит в аппарате, пригодном для нагревания воздуха, профильтрованного с помощью высокоэффективного сухого воздушного фильтра [НЕРА] и не содержащего микробов, до температуры как минимум 130-180°C в случае с процессом стерилизации и до температуры как минимум 230-250°C в случае с процессом депирогенации. Вода для восстановления концентрированных или порошковых композиций также стерилизуется в автоклаве. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают тонкодисперсные фармацевтические препараты, которые стерилизуются сухим жаром, например, нагреванием в течение приблизительно 7-11 часов при внутренней температуре порошка 130-140°C или в течение 1-2 часов при внутренней температуре 150-180°C.

Химическая стерилизация

Методы химической стерилизации - это альтернатива для продуктов, которые не выдерживают высоких температур при тепловой стерилизации. При таком методе в качестве антиапоптотического агента или проапоптотических агентов используются многие газы и пары с бактерицидными свойствами, как например этиленоксид, двуокись хлора, формальдегид или озон. Бактерицидная активность этиленоксида, например, является результатом его способности служить в качестве реактивного алкилирующего агента. Таким образом, этот процесс стерилизации требует, чтобы пары этиленоксида непосредственно контактировали с продуктом, подвергающимся стерилизации.

Лучевая стерилизация

Одним из преимуществ лучевой стерилизации является способность стерилизовать продукты многих типов без теплового разрушения или другого повреждения. Обычно используется бета-излучение или, как альтернатива, гамма-излучение из ⁶⁰Со источника. Проникающая способность гамма-излучения позволяет использовать такое излучение для стерилизации продуктов многих типов, включая растворы, композиции и неоднородные смеси. Бактерицидные эффекты облучения обусловлены взаимодействием гамма-излучения с биологическими макромолекулами. При таком взаимодействии образуются заряженные частицы и свободные радикалы. Последующие химические реакции, такие как перегруппировки и процессы перекрестного сшивания, приводят к утрате нормальной функции у этих биологических макромолекул. Приведенные в данном описании композиции также можно факультативно стерилизовать с помощью бета-облучения.

Фильтрация

Стерилизация фильтрованием - это метод, используемый для удаления, но не уничтожения, микробов из растворов. Для фильтрации термочувствительных растворов используют мембранные фильтры. Эти фильтры представляют собой тонкие, прочные, однородные полимеры смешанных целлюлозных сложных эфиров (МСЕ), поливинилиденфторида (PVF; также известного как ПВДФ-PVDF), или политетрафторэтилена (ПТФЭ-PTFE) и имеют поры размером от 0,1 до 0,22 µм. Растворы с разными характеристиками факультативно фильтруются с помощью разных фильтрующих мембран. Например, PVF и PTFE мембраны хорошо подходят для фильтрации органических растворителей, в то время как водные растворы фильтруются через PVF или МСЕ мембраны. В наличии имеются фильтрующие аппараты многих размерностей - от одноразового фильтра одноточечного использования, который присоединяется к шприцу, до фильтров коммерческого масштаба для использования на заводах-изготовителях. Мембранные фильтры стерилизуются в автоклаве или химической стерилизацией. Аттестация систем мембранной фильтрации проводится в соответствии со стандартизированными протоколами (Микробиологическая Оценка Фильтров для Стерилизации Жидкостей, том 4, №3. Вашингтон, D.C: Ассоциация производителей промышленности здравоохранения, 1981) и предполагает загрузку в мембранный фильтр провокационной пробы известного количества (приблизительно 10⁷/cm²) чрезвычайно маленьких микробов, как например Brevundimonas diminuta (ATCC 19146).

Фармацевтические композиции для лечения уха факультативно стерилизуются, проходя через мембранные фильтры. Композиции, включающие наночастицы (патент США №6139870) или многослойные пузырьки (Richard et al., International Journal of Pharmaceutics (2006), 312(1-2):144-50), поддаются стерилизации фильтрованием через 0,22 µм фильтры без разрушения их организованной структуры.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем описании методы включают стерилизацию композиции (или ее компонентов) посредством стерилизации фильтрованием. В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция с терапевтическим агентом включает частицы, в котором дисперсная композиция подходит для стерилизации фильтрованием. В другом примере осуществления настоящего изобретения упомянутая дисперсная композиция включает частицы размером меньше 300 нм, меньше 200 нм, меньше 100 нм. В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция включает дисперсную композицию, в которой стерильность частиц обеспечивается стерилизующим фильтрованием предшествующих растворов компонента. В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция включает дисперсную композицию, в которой стерильность дисперсной композиции обеспечивается низкотемпературным стерилизующим фильтрованием. В следующем примере осуществления настоящего изобретения низкотемпературное стерилизующее фильтрование проводится при температуре в интервале от 0 до 30°C, в интервале от 0 до 20°C, в интервале от 0 до 10°C, в интервале от 10 до 20°C или в интервале от 20 до 30°C.

В другом примере осуществления настоящего изобретения представлен способ получения auris-приемлемой дисперсной композиции, включающий: фильтрацию водного раствора, содержащего дисперсную композицию, при низкой температуре через стерилизационный фильтр; лиофилизацию стерильного раствора; и восстановление дисперсной композиции стерилизованной водой перед введением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция производится как суспензия в композиции в одной пробирке, содержащая тонкодисперсный активный фармацевтический компонент. Композицию в одной ампуле получают путем асептического смешивания стерильного полоксамерного раствора со стерильным тонкодисперсным активным компонентом (например, PD98059) и загрузки композиции в стерильные фармацевтические контейнеры. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения одна ампула, содержащая описанную в настоящем описании композицию в виде суспензии, ресуспендируется перед дозированием и/или введением.

В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения фильтрация и/или процедуры заполнения выполняются приблизительно при температуре на 5°С ниже температуры гелеобразования (T_gel) описанной в настоящем описании композиции и при вязкости ниже теоретического значения 100 сП для обеспечения фильтрации в соответствующий период времени с помощью перистальтического насоса.

В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция с терапевтическим агентом включает композицию из наночастиц, в котором композиция из наночастиц подходит для стерилизации фильтрованием. В другом примере осуществления настоящего изобретения композиция из наночастиц включает наночастицы размером меньше 300 нм, меньше 200 нм или меньше 100 нм. В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция включает композицию из микросфер, в котором стерильность микросфер обеспечивается стерильной фильтрацией предшествующего органического раствора и водных растворов. В другом примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая композиция включает композицию с термообратимым гелем, в котором стерильность гель-композиции обеспечивается низкотемпературной стерильной фильтрацией. В другом примере осуществления настоящего изобретения низкотемпературное стерилизующее фильтрование происходит при температуре в интервале от 0 до 30°C, или в интервале от 0 дл 20°C, или в интервале от 0 до 10°C, или в интервале от 10 до 20°C, или в интервале от 20 до 30°C. В другом примере осуществления настоящего изобретения представлен способ приготовления auris-приемлемой композиции с термообратимым гелем, включающий: фильтрацию водного раствора, содержащего компоненты термообратимого геля, при низкой температуре через стерилизационный фильтр; лиофилизацию стерильного раствора; и восстановление композиции с термообратимым гелем стерилизованной водой перед введением.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения активные компоненты растворяются в соответствующей основе (например, буфере) и стерилизуются отдельно (например, термообработкой, фильтрацией, гамма-излучением). В некоторых случаях активные компоненты стерилизуются отдельно в сухом состоянии. В некоторых случаях активные компоненты стерилизуются в виде суспензии или в виде коллоидной суспензии. Оставшиеся наполнители (например, жидкие компоненты геля, присутствующие в ушных композициях) стерилизуются на отдельной стадии соответствующим методом (например, фильтрацией и/или облучением охлажденной смеси наполнителей); после этого два проетерилизованных отдельно раствора смешиваются асептически до получения конечной ушной композиции. В некоторых случаях окончательное асептическое смешивание выполняется непосредственно перед введением описанной в настоящем описании композиции.

В некоторых случаях традиционно используемые методы стерилизации (например, термообработка (например, в автоклаве), облучение гамма-лучами, фильтрация) приводят к необратимому разрушению полимерных компонентов (например, термоотверждающихся, желатинирующих или мукоадгезивных компонентов полимера) и/или активного агента в композиции. В некоторых случаях стерилизация ушной композиции фильтрацией через мембраны (например, 0,2 мкМ мембраны) невозможна, если композиция включает тиксотропные полимеры, которые загустевают во время процесса фильтрации.

Соответственно, в настоящем описании представлены методы стерилизации ушных композиций, которые предотвращают разрушение полимерных компонентов (например, термоотверждающихся и/или желатинирующих и/или мукоадгезивных полимерных компонентов) и/или активного агента во время процесса стерилизации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения разрушение активного агента (например, любого описанного в настоящем описании ото терапевтического агента) снижается или исключается за счет использования специальных рН пределов для буферных компонентов и специальных пропорций желатинирующих агентов в композициях. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения выбор адекватного желатинирующего агента и/или термоотверждающегося полимера предусматривает стерилизацию приведенных в описании композиций с помощью фильтрации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения использование адекватного термоотверждающегося полимера и адекватного сополимера (например, желатинирующего агента) в комбинации со специальными пределами рН для композиции предусматривает высокотемпературную стерилизацию приведенных в описании композиций в основном без разрушения терапевтического агента или полимерных наполнителей. Преимущество представленных методов стерилизации заключается в том, что в определенных случаях композиции подвергаются окончательной стерилизации в автоклаве без потери активного агента и/или наполнителей, и/или полимерных компонентов во время стерилизации и в основном не содержат микробов и/или пирогенов.

Микробы

В настоящем описании представлены композиции для лечения ушей или устройства, которые улучшают или облегчают приведенные в данном описании ушные нарушения. Кроме того, представлены способы, включающие введение упомянутых ушных композиций. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции или устройства в основном не содержат микробов. Приемлемые уровни стерильности основаны на применимых стандартах, определяющих терапевтически приемлемые композиции для лечения ушей, которые включают, но не ограничиваются. Главы Фармакопеи Соединенных Штатов <111> и далее [United States Pharmacopeia Chapters <1111> et seq]. Например, приемлемые уровни стерильности включают приблизительно 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм композиции, приблизительно 50 cfu на грамм композиции, приблизительно 100 cfu на грамм композиции, приблизительно 500 cfu на грамм композиции или приблизительно 1000 cfu на грамм композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемые уровни стерильности для композиций включают менее 10 cfu/мл, менее 50 cfu/мл, менее 500 cfu/мл или менее 1000 cfu/мл микробных агентов. Кроме того, приемлемые уровни стерильности не допускают присутствия специально указанных нежелательных микробиологических агентов. В качестве примера специально указанные нежелательные микробиологические агенты включают, но не ограничиваются этим, кишечную палочку (Е.coli), сальмонеллу сп.[Salmonella sp.], синегнойную палочку (Р.aeruginosa) и/или другие специально указанные микробные агенты.

Стерильность auris-приемлемой композиции с терапевтическим агентом подтверждается с помощью программы обеспечения стерильности в соответствии с Главами Фармакопеи Соединенных Штатов <61>, <62> и <71>. Ключевой составляющей процесса обеспечения контроля качества стерильности, обеспечения качества и аттестации является метод проверки стерильности. Проверка стерильности, только в качестве примера, выполняется двумя способами. Первый способ - прямой посев, когда проба композиции, подвергающейся проверке, добавляется в среду для выращивания и культивируется в течение периода времени вплоть до 21 дня. Замутнение среды для выращивания указывает на загрязнение. Среди недостатков этого способа - небольшой объем отбора проб из массы материалов, что снижает чувствительность, а также обнаружение роста микробов на основании визуального наблюдения. Альтернативным способом является тестирование на стерильность фильтрацией через мембрану. При таком способе объем продукта пропускается через мембранную фильтровальную бумагу небольшого формата. Затем фильтровальную бумагу помещают в питательную среду, чтобы вызвать рост микробов. Преимуществом этого способа является более высокая чувствительность, поскольку тестируется вся масса продукта. Для анализов путем тестирования на стерильность с помощью мембранной фильтрации факультативно используется коммерчески доступная система тестирования на стерильность Millipore Steritest. Для тестирования фильтрации кремов или мазей используется фильтрующая система Steritest № TLHVSL210. Для тестирования фильтрации эмульсий или вязких продуктов используется фильтрующая система Steritest №р TLAREM210 или TDAREM210. Для тестирования фильтрации предварительно заполненных шприцев используется фильтрующая система Steritest № TTHASY210. Для тестирования фильтрации материала, выпускаемого в виде аэрозоли или пены, используется фильтрующая система Steritest № TTHVA210. Для тестирования фильтрации растворимых порошков в ампулах или пробирках используется фильтрующая система Steritest № TTHADA210 или TTHADV210.

Тестирование на Е.coli и сальмонеллу включает использование лактозных бульонов, инкубируемых при 30-35°C в течение 24-72 часов, инкубацию в MacConkey и/или ЕМВ агарах в течение 18-24 часов и/или использование питательной среды Rappaport. Тестирование на обнаружение Р.aeruginosa включает использование NAC агара. В Главе <62> Фармакопеи США, кроме того, перечислены процедуры тестирования для специально указанных нежелательных микробов.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании композиция с контролируемым высвобождением содержит менее чем приблизительно 60 колониеобразующих единиц (КОЕ), менее чем приблизительно 50 колониеобразующих единиц, менее чем приблизительно 40 колониеобразующих единиц или менее чем приблизительно 30 колониеобразующих единиц микробных агентов на грамм композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения ушей разработаны как изотонические относительно эндолимфы и/или перилимфы.

Эндотоксины

В настоящем описании представлены композиции для лечения ушей, которые улучшают или облегчают приведенные в данном описании ушные нарушения. Кроме того, представлены способы, включающие введение упомянутых ушных композиций. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции или устройства в основном не содержат микробов. Дополнительная особенность процесса стерилизации - удаление побочных продуктов в результате уничтожения микробов (в дальнейшем «Продукт»). Процесс депирогенации выводит пирогены из пробы. Пирогены - это эндотоксины или экзотоксины, которые индуцируют иммунную реакцию. Пример эндотоксина - молекула липополисахарида (ЛПС), обнаруженная в клеточной оболочке грамотрицательных бактерий. В то время как процедуры стерилизации, такие как обработка в автоклаве или обработка этиленоксидом, убивают бактерии, остаток ЛПС индуцирует провоспалительную иммунную реакцию, например, септический шок. Поскольку молекулярный размер эндотоксинов может колебаться в широких пределах, наличие эндотоксинов выражается в «эндотоксиновых единицах» (ЭЕ), Одна эндотоксиновая единица эквивалентна 100 пикограммам ЛПС Е.coli. У человека может развиваться реакция уже на 5 ЭЕ/кг веса тела. Стерильность выражается в любых единицах, принятых в данной области. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения ушей имеют более низкие уровни эндотоксина (например, <4 ЭЕ/кг веса тела пациента) по сравнению с обычно принятыми уровнями эндотоксина (например, 5 ЭЕ/кг веса тела пациента). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 5 ЭЕ/кг веса тела пациента. В других примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 4 ЭЕ/кг веса тела пациента. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 3 ЭЕ/кг веса тела пациента. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 2 ЭЕ/кг веса тела пациента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция или указанное устройство с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 5 ЭЕ/кг композиции. В других примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 4 ЭЕ/кг композиции. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 3 ЭЕ/кг композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 5 ЭЕ/кг Продукта. В других примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 1 ЭЕ/кг Продукта. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 0,2 ЭЕ/кг Продукта. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 5 ЭЕ/г продукта. В других примерах осуществления настоящего приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 4 ЭЕ/г продукта. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 3 ЭЕ/г продукта. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 5 ЭЕ/мг продукта. В других примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 4 ЭЕ/мг продукта. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 3 ЭЕ/мг продукта. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения уха содержат от приблизительно 1 до приблизительно 5 ЭЕ/мл композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения уха содержат от приблизительно 2 до приблизительно 5 ЭЕ/мл композиции, от приблизительно 3 до приблизительно 5 ЭЕ/мл композиции или от приблизительно 4 до приблизительно 5 ЭЕ/мл композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции для лечения уха или устройства содержат более низкие уровни эндотоксина (например, <0,5 ЭЕ/мл композиции) по сравнению с обычно принятыми уровнями эндотоксина (например, 0,5 ЕС/мл композиции). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция или устройство с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 0,5 ЭЕ/мл композиции. В других примерах осуществления настоящего изобретения приемлемая для лечения уха композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 0,4 ЭЕ/мл композиции. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом имеет менее чем приблизительно 0,2 ЭЕ/мл композиции.

Обнаружение пирогена, только в качестве примера, выполняется несколькими способами. Соответствующие тесты на стерильность включают тесты, описанные в Фармакопее США (USP) <71> Тесты Стерильности (23-е издание, 1995 г.). Тест на кроличий пироген и амебоцитлизатный люмулюс-тест определены в Главах Фармакопеи США <85> и <151> (USP23/NF 18, Биологические Тесты, Конференция по фармакопее США, Роквилл, Мэриленд, 1995 г.). Альтернативные анализы на пироген разработаны на основе моноцитной активации цитокинного анализа. Были разработаны однородные клеточные линии, подходящие для применений контроля качества, которые продемонстрировали способность определять пирогенность в пробах, прошедших тест на кроличий пироген и амебоцитлизатный люмулюс-тест (Taktak et al, J. Phann. Pharmacol. (1990), 43:578-82). В дополнительном примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемая ушная композиция с терапевтическим агентом подвергается депирогенации. В следующем примере осуществления настоящего изобретения способ производства auris-приемлемой ушной композиции с терапевтическим агентом включает тестирование композиции на пирогенность. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения в приведенных в описании композициях в основном отсутствуют пирогены.

рН и практическая осмолярность

В соответствии с использованием в настоящем описании «практическая осмолярность/осмоляльность» или «доставляемая осмолярность/осмоляльность» означают осмолярность/осмоляльность композиции, которая определяется измерением осмолярности/осмоляльности активного агента и всех наполнителей, кроме желатинирующего и/или загущающего агента (например, полиоксиэтилен- полиоксипропилен сополимеры, карбоксиметилцеллюлоза или т.п.). Практическая осмолярность описанной в настоящем описании композиции измеряется любым подходящим методом, например, методом понижения температуры застывания, который описан в работе Viegas et. al., Int. J. Pharm., 1998, 160, 157-162. В некоторых случаях практическая осмолярность описанной в настоящем описании композиции измеряется с помощью осмометрии давления пара (например, метод понижения давления пара), который позволяет определять осмолярность композиции при высоких температурах. В некоторых случаях метод понижения давления пара позволяет определять осмолярность композиции, содержащей желатинирующий агент (например, термообратимый полимер) при высокой температуре, когда желатинирующий агент находится в форме геля. Практическая осмоляльность ушной композиции, описанной в настоящем описании, составляет от приблизительно 100 мосмоль/кг до приблизительно 1000 мосмоль/кг, от приблизительно 200 мосмоль/кг до приблизительно 800 мосмоль/кг, от приблизительно 250 мосмоль/кг до приблизительно 500 мосмоль/кг, или от приблизительно 250 мосмоль/кг до приблизительно 320 мосмоль/кг, или от приблизительно 250 мосмоль/кг до приблизительно 350 мосмоль/кг, или от приблизительно 280 мосмоль/кг до приблизительно 320 мосмоль/кг. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют практическую осмолярность от приблизительно 100 мосмоль/л до приблизительно 1000 мосмоль/л, от приблизительно 200 мосмоль/л до приблизительно 800 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 500 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 350 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 320 мосмолъ/л или приблизительно 280 мосмоль/л до приблизительно 320 мосмоль/л.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения осмолярность на целенаправленном участке действия (например, перилимфа) приблизительно такая же, как доставленная осмолярность (то есть, осмолярность материалов, которые пересекают или проникают через мембрану окна улитки) любой описанной в настоящем описании композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют доставляемую осмолярность от приблизительно 150 мосмоль/л до приблизительно 500 мосмоль/L, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 500 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 350 мосмоль/л, от приблизительно 280 мосмоль/л до приблизительно 370 мосмоль/л или приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 320 мосмоль/л.

Основной присутствующий в эндолимфе катион - калий. Кроме того, эндолимфа имеет высокую концентрацию положительно заряженных аминокислот.Основной присутствующий в перилимфе катион - натрий. В некоторых случаях ионный состав эндолимфы и перилимфы регулируют электрохимические импульсы волосковых клеток. В некоторых случаях любое изменение ионного баланса эндолимфы или перилимфы приводит к потере слуха в результате изменений проводимости электрохимических импульсов по слуховым волосковым клеткам. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция не нарушает ионный баланс перилимфы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ионный баланс предложенной в настоящем описании композиции такой же или в основном такой же, как и у перилимфы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция не нарушает ионный баланс эндолимфы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ионный баланс предложенной в настоящем описании композиции такой же или в основном такой же, как и у эндолимфы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании ушная композиция разработана для обеспечения ионного баланса, совместимого с жидкостями внутреннего уха (например, эндолимфы и/или перилимфы).

Показатель рН эндолимфы и перилимфы близкий к физиологическому показателю рН крови. У эндолимфы диапазон рН составляет приблизительно 7,2-7,9; у перилимфы диапазон рН составляет приблизительно 7,2-7,4. Показатель рН по месту [по месту] проксимальной эндолимфы составляет приблизительно 7,4, в то время как рН дистальной эндолимфы - приблизительно 7,9.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения рН описанной в настоящем описании композиции регулируется (например, при помощи буфера) до эндолимфа-совместимого диапазона рН от приблизительно 5,5 до 9,0. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения значение рН описанной в настоящем описании композиции регулируется до перилимфа-приемлемого диапазона рН приблизительно от 5,5 до приблизительно 9,0. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения значение рН описанной в настоящем описании композиции регулируется до перилимфа-приемлемого диапазона от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,0, от приблизительно 6 до приблизительно 8,0 или от приблизительно 6,6 до приблизительно 8,0. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения показатель рН описанной в настоящем описании композиции регулируется до перилимфа-приемлемого диапазона рН приблизительно 7,0-7,6.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения применимые композиции также включают один или несколько регулирующих рН агентов или буферных агентов. Пригодные регулирующие рН агенты или буферы включают, но не ограничиваются этим, ацетат, бикарбонат, аммоний хлорид, цитрат, фосфат, их фармацевтически приемлемые соли или комбинации или смеси.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения, когда в композициях в соответствии с настоящим изобретением используется один или несколько буферов, они соединяются (например, с фармацевтически приемлемой основой) и присутствуют в окончательной композиции (например, в количестве от приблизительно 0,1% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 10%). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество буфера, включенного в гель-композиции, - это количество, когда рН гель-композиции не мешает естественной буферной системе тела.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения для стабилизации соединений также используются разбавители, потому что они могут обеспечить более устойчивую среду. Растворенные в буферных растворах соли (которые также могут обеспечить контроль или поддержание рН) используются в качестве разбавителей в данной области, включающие, но не ограничивающиеся этим, фосфатно-солевой буферный раствор.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании гель-композиция имеет значение рН, которое предусматривает стерилизацию (например, фильтрацией или асептическим смешиванием или термообработкой и/или обработкой в автоклаве (например, конечная стерилизация)) гель-композиции без расщепления фармацевтического агента или полимеров, содержащих гель. Чтобы уменьшить гидролиз и/или разрушение ушного агента и/или гель-полимера во время стерилизации, значение рН буфера рассчитывается на поддержание рН композиции в диапазоне значений 7-8 во время процесса стерилизации (например, высокотемпературная обработка в автоклаве).

В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании гель-композиция имеет значение рН, которое предусматривает конечную стерилизацию (например, термообработкой и/или обработкой в автоклаве) гель-композиции без разрушения фармацевтического агента или полимеров, содержащих гель. Например, чтобы уменьшить гидролиз и/или разрушение ушного агента и/или гель-полимера во время обработки в автоклаве, значение рН буфера рассчитывается на поддержание значения рН композиции в диапазоне значений 7-8 при повышенных температурах. Используется любой адекватный буфер в зависимости от используемого в композиции ушного агента. В некоторых случаях, поскольку рК_а TRIS буфера уменьшается с увеличением температуры при приблизительно -0,03/°C, а pK_a PBS буфера [фосфатно-солевой буферный раствор] увеличивается с увеличением температуры при приблизительно 0,003/°C, обработка в автоклаве при 250°F (121°C) приводит к значительному смещению вниз рН (то есть более кислотный) в TRIS буфере, при намного меньшем смещении вверх рН в PBS буфере, и, следовательно, в TRIS гораздо ускоренный гидролиз и/или расщепление ушного агента, чем в PBS. Расщепление ушного агента уменьшается при использовании адекватной комбинации буфера и полимерных добавок (например, Р407, CMC-КМЦ) в соответствии с приведенным в настоящем описании.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения значение рН композиции в интервале от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0, в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 8,5, в интервале от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,6, в интервале от приблизительно 7 до приблизительно 7,8, в интервале от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,6, в интервале от приблизительно 7,2 и 7,6, или в интервале от приблизительно 7,2 до приблизительно 7,4 подходит для стерилизации (например, фильтрация или асептическое смешивание или термическая обработка и/или обработка в автоклаве (например, конечная стерилизацией)) ушных композиций, приведенных в описании. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения значение рН композиции приблизительно 6,0, приблизительно 6,5, приблизительно 7,0, приблизительно 7,1, приблизительно 7,2, приблизительно 7,3, приблизительно 7,4, приблизительно 7,5 или приблизительно 7,6 подходит для стерилизации (например, фильтрация или асептическое смешивание или термическая обработка и/или обработка в автоклаве (например, конечная стерилизация)) любой указанной в настоящем описании композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиции имеют значение рН в соответствии с приведенным описанием и включают загущающий агент (например, усиливающий вязкость агент), как например, в качестве неограничивающего примера, описанный в настоящем описании загущатощий агент на основе целлюлозы. В некоторых случаях добавление вторичного полимера (например, загущающего агента) и значение рН композиции в соответствии с приведенным в настоящем описании описанием предусматривает стерилизацию описанной в настоящем описании композиции без какого-либо значительного разрушения ушного агента и/или полимерных компонентов в ушной композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения отношение термообратимого полоксамера к загустителю в композиции, имеющей рН в соответствии с описанием, составляет приблизительно 40:1, приблизительно 35:1, приблизительно 30:1, приблизительно 25:1, приблизительно 20:1, приблизительно 15:1, приблизительно 10:1 или приблизительно 5:1. Например, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция с замедленным и/или пролонгированным высвобождением включает комбинацию полоксамера 407 (pluronic F127) и карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ) в отношении приблизительно 40:1, приблизительно 35:1, приблизительно 30:1, приблизительно 25:1, приблизительно 20:1, приблизительно 15:1, приблизительно 10:1 или приблизительно 5:1.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 10%, приблизительно 15%, приблизительно 20%, приблизительно 25%, приблизительно 30%, приблизительно 35% или приблизительно 40% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 10%, приблизительно 11%, приблизительно 12%, приблизительно 13%, приблизительно 14%, приблизительно 15%, приблизительно 16%, приблизительно 17%, приблизительно 18%, приблизительно 19%, приблизительно 20%, приблизительно 21%, приблизительно 22%, приблизительно 23%, приблизительно 24% или приблизительно 25% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 7,5% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 10% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 11% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 12% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 13% от общего веса композиции, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 14% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 15% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 16% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 17% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 18% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 19% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 2,0% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 21% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 23% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество термообратимого полимера (например, pluronic F127) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 25% от общего веса композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество загущающего агента (например, желатинирующего агента) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 1%, приблизительно 5%, приблизительно 10%, или приблизительно 15% от общего веса композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество загущающего агента (например, желатинирующего агента) в любой описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 0,5%, приблизительно 1%, приблизительно 1,5%, приблизительно 2%, приблизительно 2,5%, приблизительно 3%, приблизительно 3,5%, приблизительно 4%, приблизительно 4,5% или приблизительно 5% от общего веса композиции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха, приведенные в данном описании, устойчивы относительно рН в течение любого периода времени: как минимум, приблизительно 1 дня, как минимум, приблизительно 2 дней, как минимум, приблизительно 3 дней, как минимум, приблизительно 4 дней, как минимум, приблизительно 5 дней, как минимум, приблизительно 6 дней, как минимум, приблизительно 1 недели, как минимум, приблизительно 2 недель, как минимум, приблизительно 3 недель, как минимум, приблизительно 4 недель, как минимум, приблизительно 5 недель, как минимум, приблизительно 6 недель, как минимум, приблизительно 7 недель, как минимум, приблизительно 8 недель, как минимум, приблизительно 1 месяца, как минимум, приблизительно 2 месяцев, как минимум, приблизительно 3 месяцев, как минимум, приблизительно 4 месяцев, как минимум, приблизительно 5 месяцев или, как минимум, приблизительно 6 месяцев. В других примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции устойчивы относительно рН в течение, как минимум, приблизительно 1 недели. Также в настоящем описании приводится описание композиций, устойчивых относительно рН в течение как минимум, приблизительно 1 месяца.

Усиливающие тоничностъ агенты

Как правило, у эндолимфы более высокая осмоляльность, чем у перилимфы. Например, осмоляльность эндолимфы составляет приблизительно 304 мосмоль/кг Н₂О, в то время как осмоляльность перилимфы равна приблизительно 294 мосмоль/кг Н₂О. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агенты тоничности добавляют к описанным в настоящем описании композициям в количестве, обеспечивающем практическую осмоляльность ушной композиции от приблизительно 100 мосмоль/кг до приблизительно 1000 мосмоль/кг, от приблизительно 200 мосмоль/кг до приблизительно 800 мосмоль/кг, от приблизительно 250 мосмоль/кг до приблизительно 500 мосмоль/кг или от приблизительно 250 мосмоль/кг до приблизительно 350 мосмоль/кг или от приблизительно 280 мосмоль/кг до приблизительно 320 мосмоль/кг. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения практическая осмолярность приведенных в описании композиций составляет от приблизительно 100 мосмоль/л до приблизительно 1000 мосмоль/л, от приблизительно 200 мосмоль/л до приблизительно 800 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 500 мосмоль/л, от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 350 мосмоль/л, от приблизительно 280 мосмоль/л до приблизительно 320 мосмоль/л или от приблизительно 250 мосмоль/л до приблизительно 320 мосмоль/л.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения доставляемая осмолярность любой описанной в настоящем описании композиции разработана как изотоническая относительно требующей лечения ушной структуры (например, эндолимфа, перилимфа или т.п.). В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения композиции для лечения ушей, приведенные в данном описании, составлены для обеспечения доставляемой перилимфа-пригодной осмолярности на целенаправленном участке воздействия от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/л (осмоляльность от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/кг H₂O); и предпочтительно от приблизительно 270 до приблизительно 320 мосмоль/л (осмоляльность от приблизительно 270 до приблизительно 320 мосмоль/кг H₂O). В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения доставляемая осмолярность/осмоляльность композиций (то есть, осмолярность/осмоляльность композиции при отсутствии желатинирующих или загущающих агентов (например, термообратимых гель-полимеров)) регулируется, например, при помощи адекватных солевых концентраций (например, концентрация калиевых или натриевых солей) или использования агентов тоничности, что превращает композиции в эндолимфа-совместимые и/или перилимфа-совместимые (то есть, изотонические относительно эндолимфы и/или перилимфы) после доставки к участку-мишени. Осмолярность композиции, включающей термообратимый гель-полимер, является ненадежной мерой из-за соединения изменяющихся количеств воды с мономерными звеньями полимера. Практическая осмолярность композиции является надежной мерой и измеряется любым применимым методом (например, методом понижение температуры застывания, методом понижения давления пара). В некоторых случаях приведенные в данном описании композиции предусматривают доставляемую осмолярность (например, на участке-мишени (например, перилимфа)), которая вызывает минимальное нарушение среды внутреннего уха и вызывает минимальный дискомфорт (например, головокружение и/или тошноту) млекопитающему после введения.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании композиция является изотонической относительно перилимфы и/или эндолимфы. Изотонические композиции получают добавлением агента тоничности. Пригодные агенты тоничности включают, но не ограничиваются этим, любой фармацевтически приемлемый сахар, соль или любые их комбинации или смеси, например, но не только, декстроза, глицерин, маннитол, сорбит, натрий хлорид и другие электролиты.

Применимые композиции для лечения ушей включают одну или несколько солей в количестве, необходимом, чтобы довести значение осмоляльности композиции до значений в приемлемом диапазоне. Такие соли включают соли, содержащие натрий, калий или аммоний катионы и хлорид, цитрат, аскорбат, борат, фосфат, бикарбонат, сульфат, тиосульфат или бисульфит анионы; пригодные соли включают натрий хлорид, калий хлорид, натрий тиосульфат, натрий бисульфит и аммоний сульфат.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют рН и/или практическую осмолярность в соответствии с настоящим описанием и концентрацию активного фармацевтического компонента вплоть до приблизительно 1 uM и приблизительно 10 µМ, вплоть до приблизительно 1 мкМ и приблизительно 100 мМ, вплоть до приблизительно 0,1 мМ и приблизительно 100 мМ, вплоть до приблизительно 0,1 мМ и приблизительно 100 нМ. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют рН и/или практическую осмолярность в соответствии с настоящим описанием и концентрацию активного фармацевтического компонента вплоть до приблизительно до 0,01% - приблизительно 20%, вплоть до приблизительно 0,01% - приблизительно 10%., вплоть до приблизительно 0,01% - приблизительно 7,5%, вплоть до приблизительно 0,01%-6%, вплоть до приблизительно 0,01 -5%, вплоть до приблизительно 0,1 - приблизительно 10% или вплоть до приблизительно 0,1 - приблизительно 6% активного компонента по весу композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют рН и/или практическую осмолярность в соответствии с настоящим описанием и концентрацию активного фармацевтического компонента вплоть до приблизительно 0,1 и приблизительно 70 мг, вплоть до приблизительно 1 мг и приблизительно 70 мг/мл, вплоть до приблизительно 1 мг и приблизительно 50 мг/мл, вплоть до приблизительно 1 мг/мл и приблизительно 20 мг/мл, вплоть до приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл, вплоть до приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 5 мг/мл или вплоть до приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 5 мг/мл активного агента по объему композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции имеют рН и/или практическую осмолярность в соответствии с настоящим описанием и концентрацию активного фармацевтического компонента вплоть до приблизительно 1 мкг/мл и приблизительно 500 мкг/мл, вплоть до приблизительно 1 мкг/мл и приблизительно 250 мкг/мл, вплоть до приблизительно 1 мкг и приблизительно 100 мкг/мл, вплоть до приблизительно 1 мкг/мл и приблизительно 50 мкг/мл или вплоть до приблизительно 1 мкг/мл и приблизительно 20 мкг/мл активного агента по объему композиции.

Размер частиц

Для увеличения площади поверхности и/или модуляции свойств растворения композиции используется измельчение. Измельчение также используется для поддержания постоянного распределения по средней крупности частиц (PSD) (например, частицы микронного размера, частицы нанометрического размера или т.п.) для любой описанной в настоящем описании композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании композиция состоит из множества отдельных частиц (то есть, включает частицы многих размеров (например, тонкодисперсные частицы, наночастицы, несортированные частицы, коллоидные частицы)). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция включает один или несколько терапевтических агентов (например, тонкодисперсных), состоящих из множества отдельных частиц. Микронизация - это процесс уменьшения среднего диаметра частиц твердого вещества. Размер диаметра тонкодисперсных частиц от микронного до нанометрического. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения средний диаметр частиц тонкодисперсного твердого вещества составляет от приблизительно 0,5 мкм до приблизительно 500 мкм. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения средний диаметр частиц тонкодисперсного вещества составляет от приблизительно 1 мкм до приблизительно 200 мкм. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения средний диаметр частиц тонкодисперсного вещества составляет от приблизительно 2 мкм до приблизительно 100 мкм. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения средний диаметр частиц тонко дисперсного вещества составляет от приблизительно Зц,м до приблизительно 50 мкм. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения состоящее тонкодисперсное вещество включает частицы размером меньше чем приблизительно 5 микрон, меньше чем приблизительно 20 микрон и/или меньше чем приблизительно 100 микрон. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения использование твердых частиц (например, тонкодисперсные частицы) антиапоптотического агента или проапоптотического агента предусматривает пролонгированное и/или замедленное высвобождение антиапоптотического агента или проапоптотического агента из любой описанной в настоящем описании композиции по сравнению с композицией, включающей не состоящий из множества отдельных частиц (например, нетонкодисперсный) антиапоптотический агент или проапоптотический агент.В некоторых случаях композиции, содержащие состоящий из множества отдельных частиц (например, тонко дисперсный) антиапоптотический агент или проапоптотический агент, выпускается из 1-мл шприца, снабженного иглой 27G, без закупорки или засорения.

В некоторых случаях любая частица в любой описанной в настоящем описании композиции представляет собой покрытую оболочкой частицу (например, покрытая оболочкой тонкодисперсная частица, наночастица) и/или микросферу и/или липосомальную частицу. Методики измельчения включают, в качестве примера, растирание, размол (например, размол на воздушно-атриторной мельнице (размол на струйной мельнице), размол на шаровой мельнице), коацервация, комплексная коацервация, гомогенизация высокого давления, сушка распылением и/или сверхкритическая жидкостная кристаллизация. В некоторых случаях частицы сортируются механическим воздействием (например, в молотковых дробилках, шаровой мельнице и/или штифтовой дробилке). В некоторых случаях частицы сортируются по размеру с помощью гидроэнергии (например, в спиральных струйных мельницах, петлевых струйных мельницах и/или струйных мельницах с псевдоожиженным слоем). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают кристаллические частицы и/или изотропные частицы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают некристаллические частицы и/или анизотропные частицы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции включают частицы терапевтического агента, отличающиеся тем, что терапевтический агент - это нейтральная молекула, свободная кислота, свободное основание или соль, или пролекарство терапевтического средства, или любая их комбинация.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция включает один или несколько антиапоптотических агентов или проапоптотических агентов, в которой антиапоптотический агент или проапоптотический агент включают наночастицы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция включает гранулы антиапоптотического агента или проапоптотического агента (например, гранулы такролимуса), которые факультативно покрыты наполнителями с контролируемым высвобождением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент, который гранулирован и/или измельчен и покрыт оболочкой из наполнителей с контролируемым высвобождением; гранулированные частицы антиапоптотического агента или проапоптотического агента в оболочке затем факультативно тонкоизмельчаются и/или вводятся в состав любой из приведенных в описании композиций.

В некоторых случаях комбинация антиапоптотического агента или проапоптотического агента в виде нейтральной молекулы, свободной кислоты, свободного основания и соли антиапоптотического агента или проапоптотического агента используется для получения содержащих ушной агент композиций с пульсирующим высвобождением при использовании приведенных в описании процедур. В некоторых композициях комбинация тонкодисперсного антиапоптотического агента или проапоптотического агента (и/или их соль или пролекарство) и частицы в оболочке (например, наночастицы, липосомы, микросферы) используется для получения содержащих ушной агент композиций с пульсирующим высвобождением при использовании любой описанной в настоящем описании процедуры. Альтернативно, профиль пульсирующего высвобождения достигается путем растворения вплоть до 20% доставляемой дозы антиапоптотического агента или проапоптотического агента (например, тонкодисперсный антиапоптотический агент или проапоптотический агент, нейтральная молекула, свободное основание, свободная кислота или их соль или пролекарство; состоящий из множества отдельных частиц антиапоптотический агент или проапоптотический агент, нейтральная молекула, свободное основание, свободная кислота или их соль или пролекарство) при помощи циклодекстринов, поверхностно-активных веществ (например, полоксамеры (407, 338, 188), твин (80, 60, 20, 81), ПЭГ-гидрогенизированное касторовое масло, сорастворители подобные N-метил-2-пирролидону или подобные, и путем приготовления композиций с пульсирующим высвобождением при использовании любой описанной в настоящем описании процедуры.

В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании auris-совместимая композиция включает один или несколько тонкодисперсных фармацевтических агентов (например, антиапоптотический агент или проапоптотические агенты). В некоторых из этих примеров тонкодисперсный фармацевтический агент включает тонкодисперсные частицы, тонкодисперсные частицы в оболочке (например, с покрытием с пролонгированным высвобождением), или их комбинацию. В некоторых из этих примеров тонкодисперсный фармацевтический агент, включающий тонкодисперсные частицы, тонкодисперсные частицы в оболочке или их комбинацию, включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде нейтральной молекулы, свободной кислоты, свободного основания, соли, пролекарства или их любой комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании фармацевтическая композиция включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент в виде тонкодисперсного порошка.

Агент из множества отдельных частиц и/или тонкодисперсный антиапоптотический агент или проапоптотические агенты, приведенные в данном описании, доставляются в структуру уха (например, внутреннее ухо) с помощью матрицы любого типа, включая матрицы твердого вещества, жидкости или геля. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент из множества отдельных частиц и/или тонкодисперсный антиапоптотический агент или проапоптотические агенты, приведенные в данном описании, доставляются в структуру уха (например, внутреннее ухо) с помощью матрицы любого типа, включая матрицы твердого вещества, жидкости или геля, посредством внутрибарабанной инъекции.

Фармацевтические композиции для лечения уха

В настоящем описании представлены фармацевтические композиции для лечения уха или устройства, которые включают, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент и фармацевтически приемлемый разбавитель (и), наполнитель (и) или носитель (и). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха включают другие лекарственные или фармацевтические агенты, носители, адъюванты, например, консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, усилители растворения, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. В других примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха также содержат другие терапевтические вещества.

Некоторые фармацевтические наполнители, разбавители или носители потенциально ототоксичны. Например, бензалконий хлорид, общее консервирующее средство, ототоксичен и поэтому потенциально опасен при введении в вестибулярные или кохлеарные структуры. При составлении модулирующих апоптоз композиций с контролируемым высвобождением рекомендуется избегать или комбинировать адекватные наполнители, разбавители или носители, чтобы уменьшить или исключить потенциальные ототоксичные компоненты из композиции, или уменьшить количество таких наполнителей, разбавителей или носителей. Дополнительно модулирующая апоптоз композиция с контролируемым высвобождением включает отозащитные агенты, такие, например, как антиоксиданты, альфа липоевая кислота, кальций, фосфомицин или хелаторы железа, чтобы противодействовать потенциальным ототоксичным эффектам, которые могут возникнуть в результате применения конкретных терапевтических агентов или наполнителей, разбавителей или носителей.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции или устройства включают краситель для визуализации геля, если применяется. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения краситель, совместимый с описанными в настоящем описании auris-приемлемыми композициями или устройствами, включает голубой Эванс (например, 0,5% от общего веса ушной композиции), метиленовую синь (например, 1% от общего веса ушной композиции), изосульфан синий (например, 1% от общего веса ушной композиции), трипан синий (например, 0,15% от общего веса ушной композиции) и/или индоцианин зеленый (например, 25 мг/ампулу). Другие общеупотребительные красители, например, FD&C красный 40, FD&C красный 3, FD&C желтый 5, FD&C желтый 6, FD&C синий 1, FD&C синий 2, FD&C зеленый 3, флюоресцирующие красители (например, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, Alexa фторы=флуоресцирующие агенты, DyLight фторы (флуоресцирующие агенты) и/или красители, которые становятся видимыми в сочетании с непроникающими методами воспроизведения изображения, такими как ЯМР-томография [MRI], компьютерная томография [CAT сканирование], ПЭТ [PET] сканирование или подобное. Также для использования с любой описанной в настоящем описании ушной композицией рассматриваются MRI красители на основе гадолиния, красители на основе йода, красители на основе бария или подобные красители. Другие красители, совместимые с любой композицией или описанной в настоящем описании композицией, перечислены в каталоге Sigma-Aldrich в рамках красителей (то есть, включенных в данный документ путем ссылки для такого раскрытия).

Любая фармацевтическая композиция или устройство, приведенные в данном описании, вводятся посредством размещения композиции или устройства в соприкосновении с гребнем окна улитки, окном улитки, барабанной полостью, барабанной перепонкой, среднее ухо или auris externa.

В одном из приведенных в описании конкретных примеров приемлемых для лечения уха фармацевтических композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом с контролируемым высвобождением, антиапоптотический агент или проапоптотический агент предусмотрен в гель-матрице; кроме того, они упоминаются в данном описании как «приемлемые для лечения уха гель-композиции», «приемлемые для лечения внутреннего уха гель-композиции», «приемлемые для лечения наружного уха гель-композиции», «приемлемые для лечения наружного уха гель-композиции», «гель-композиции для лечения уха» или их варианты. Все компоненты гель- композиции должны быть совместимы с требующей лечения структурой уха. Кроме того, гель-композиции обеспечивают контролируемое высвобождение антиапоптотического агента или проапоптотического агента в нужный участок в пределах требующей лечения структуры уха; в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция также содержит компонент с немедленным или быстрым высвобождением для доставки антиапоптотического агента или проапоптотического агента к нужному участку-мишени. В других примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция содержит компонент с замедленным высвобождением для доставки антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция включает состоящий из множества отдельных частиц (например, тонкодисперсный) антиапоптотический агент или проапоптотический агент. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиции для лечения уха являются биоразлагаемыми. В других примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиции для лечения уха включают мукоадгезивный наполнитель для обеспечения приклеивания к наружному слизистому слою мембраны окна улитки. В других примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиции для лечения уха содержат наполнитель, способствующий всасыванию вещества; в следующих примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция для лечения уха содержит усиливающий вязкость агент, достаточный для обеспечения вязкости приблизительно в пределах 500 и 1000000 сП, приблизительно в пределах 750 и 1000000 сП; приблизительно в пределах 1000 и 1000000 сП; приблизительно в пределах 1000 и 400000 сП; приблизительно в пределах 2000 и 100000 сП; приблизительно в пределах 3000 и 50000 сП; приблизительно в пределах 4000 и 25000 сП; приблизительно в пределах 5000 и 20000 сП; или приблизительно в пределах 6000 и 15000 сП. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция для лечения уха содержит усиливающий вязкость агент, достаточный для обеспечения вязкости приблизительно в пределах 500000 и 1000000 сП.

В других примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические композиции для лечения уха для лечения внутреннего уха также, обеспечивают приемлемый для лечения уха гидрогель; а в других примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха для лечения уха обеспечивают приемлемую для лечения уха микросферу или микрочастицу; а в следующих примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха для лечения уха обеспечивают приемлемую для лечения уха липосому. В ряде примеров осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха для лечения уха обеспечивают приемлемую для лечения уха пену; в других примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха обеспечивают auris-приемлемый краситель; в следующих примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха обеспечивают auris-приемлемый формирующийся по месту пористый материал. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха обеспечивают auris-приемлемый гель, содержащий испаряющийся растворитель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха обеспечивают отверждаемый при актиничном излучении гель. Другие примеры осуществления настоящего изобретения в ушной фармацевтической композиции содержится термообратимый гель, таким образом что после получения геля при комнатной температуре или ниже, композиция представляет собой жидкость, но после введения геля в участок-мишень внутреннего уха или рядом с ним и/или наружного уха или рядом с ним, включая барабанную полость, мембрану окна улитки или гребень окна улитки, ушная фармацевтическая композиция застывает или отвердевает, превращаясь в гелеобразное вещество.

В других или альтернативных примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции можно вводить на мембрану окна улитки или рядом с ней путем внутрибарабанной инъекции. В других примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции вводятся на мембрану окна улитки или рядом с ней или на гребень окна улитки или рядом с ним путем доступа через пост-аурикулярный надрез и хирургической процедуры в зону окна улитки или рядом с ним или в зону гребня окна улитки или рядом с ним. Альтернативно, ушная гель-композиция подается с помощью шприца и иглы, когда игла вводится через барабанную перепонку и направляется в зону окна улитки или гребня окна улитки. Ушные гель-композиции затем осаждаются на окне улитки или рядом с ним или на гребне окна улитки или рядом с ним для обеспечения локализованного лечения. В других примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции подаются через микрокатетеры, имплантированные пациенту, а в следующих примерах осуществления настоящего изобретения композиции вводятся насосным устройством на мембрану окна улитки или рядом с ней. В других примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции подаются в мембрану окна улитки или рядом с ней через устройство микроинъекции. В других примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции подаются в барабанную полость. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции подаются на барабанную перепонку. В других примерах осуществления настоящего изобретения ушные гель-композиции подаются на или в слуховой канал.

В других конкретных примерах осуществления настоящего изобретения любая фармацевтическая композиция или указанное устройство, приведенные в данном описании, включает состоящий из множества отдельных частиц антиапоптотический агент или проапоптотический агент в жидкой матрице (например, жидкая композиция для внутрибарабанной инъекции или ушные капли). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения любая описанная в настоящем описании фармацевтическая композиция включает состоящий из множества отдельных частиц антиапоптотический агент или проапоптотический агент в матрице твердого вещества.

Композиции с контролируемым высвобождением

Как правило, композиции лекарственного препарата с контролируемым высвобождением задают контроль над высвобождением лекарственного препарата относительно участка высвобождения и времени высвобождения внутри тела. Согласно настоящему описанию контролируемое высвобождение относится к немедленному высвобождению, отсроченному высвобождению, задержанному высвобождению, пролонгированному высвобождению, переменному высвобождению, пульсирующему высвобождению и двухрежимному высвобождению. У контролируемого высвобождения много преимуществ. Во-первых, контролируемое высвобождение фармацевтического агента позволяет сократить частоту дозирования и, таким образом, минимизировать многократную терапию. Во-вторых, лечение с контролируемым высвобождением дает в результате более эффективный расход лекарственного препарата и меньше лекарственного соединения теряется в виде остатка. В-третьих, контролируемое высвобождение дает возможность локализованной доставки лекарства за счет размещения устройства доставки или композиции в месте заболевания. Кроме того, контролируемое высвобождение позволяет вводить и высвобождать два или больше разных препарата, каждый из которых имеет уникальный профиль высвобождения, или обеспечивает высвобождение одного лекарственного препарата с разной скоростью или в течение разных отрезков времени при помощи разового дозирующего устройства.

Соответственно, одним аспектом предложенных в настоящем описании примеров осуществления настоящего изобретения является обеспечение модулирующей апоптоз auris-приемлемой композиции с контролируемым высвобождением или. Аспект контролируемого высвобождения композиций и/или композиций и/или устройств, предложенных в настоящем описании, передается через множество агентов, включающих, но не ограничивающихся этим, наполнители, агенты или материалы, приемлемые для использования в внутреннее ухо или другой ушной структуре. Только в качестве примера, такие наполнители, агенты или материалы включают auris-приемлемый полимер, auris-приемлемый усиливающий вязкость агент, auris-приемлемый гель, auris-приемлемый краситель, auris-приемлемую пену, auris-приемлемый ксерогель, auris-приемлемую микросферу или микрочастицу, auris-приемлемый гидрогель, auris-приемлемый формирующийся по месту пористый материал, auris-приемлемый отверждаемый при актиничном излучении гель, auris-приемлемый содержащий испаряющийся растворитель гель, auris-приемлемую липосому, auris-приемлемую нанокапсулу или наносферу, приемлемый для уха термообратимый гель, или их комбинации.

Приемлемые для уха гели

Гели, иногда называемые пасты, были определены разными способами. Например, Фармакопея США определяет гели как полутвердые системы, состоящие либо из суспензий, составленных из мелких неорганических частиц или из крупных органических молекул с взаимным проникновением в жидкости. Гели включают однофазную или двухфазную систему. Однофазный гель состоит из органических макромолекул, распределенных по всей жидкости таким образом, что между диспергированными макромолекулами и жидкостью никаких видимых границ нет.Некоторые однофазные гели готовят из синтетических макромолекул (например, карбомера) или из природной камеди (например, трагаканта). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения однофазные гели обычно водные, но их можно также получить с помощью спиртов и масел. Двухфазные гели состоят из сетки малых дискретных частиц.

Гели могут также классифицироваться как гидрофобные или гидрофильные. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения основа гидрофобного геля состоит из жидкого парафина с полиэтиленовыми или жирными маслами, загущающимися под действием коллоидной окиси кремния или алюминиевого или цинкового мыла. Напротив, основа гидрофобных гелей обычно состоит из воды, глицерина или пропиленгликоля, загущающихся под действием пригодного желатинирующего агента (например, трагаканта, крахмала, производных целлюлозы, карбоксивинилполимеров и алюмосиликатов магния). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения реология предложенных в настоящем описании композиций или устройств - псевдопластичная, пластичная, тиксотропная или расширяющаяся.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения усиливающая вязкость auris-приемлемая композиция, описанная в настоящем описании, не является жидкостью при комнатной температуре. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиция с повышенной вязкостью характеризуется фазовым переходом между комнатной температурой и температурой тела (включая человека с высокой температурой, например, вплоть до 42°C). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фазовый переход происходит при температуре на 1°C ниже температуры тела, на 2°C ниже температуры тела, на 3°C ниже температуры тела, на 4°C ниже температуры тела, на 6°C ниже температуры тела, на 8°C ниже температуры тела или на 10°C ниже температуры тела. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фазовый переход происходит при температуре приблизительно на 15°C ниже температуры тела, приблизительно на 20°C ниже температуры тела или приблизительно на 25°C ниже температуры тела. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения температура гелеобразования (Tgel) описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 20°C, приблизительно 25°C или приблизительно 30°C. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения температура гелеобразования (Tgel) описанной в настоящем описании композиции составляет приблизительно 35°C или приблизительно 40°C. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения введение любой описанной в настоящем описании композиции приблизительно при температуре тела уменьшает или снимает головокружение, связанное с внутрибарабанным введением ушных композиций. В определение температуры тела входит температура тела здорового индивидуума или больного индивидуума, включая индивидуума с повышенной температурой (до -42°C)). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические композиции для лечения уха или устройства являются жидкостями при приблизительно комнатной температуре и вводятся при комнатной температуре или примерно при комнатной температуре, уменьшая или смягчая побочные эффекты, как например, головокружение.

Полимеры, состоящие из полиоксипропилена и полиоксиэтилена образуют термообратимые гели при включении их в водные растворы. Эти полимеры обладают способностью переходить из жидкого состояния в гелеобразное состояние при температурах, близких к температуре тела, поэтому делают возможным применение композиций, которые наносятся на целенаправленную(ые) структуру(ы) уха. Фазовый переход из жидкого состояния в гелеобразное состояние зависит от концентрации полимера и компонентов в растворе.

Полоксамер 407 (PF-127) является неионным поверхностно-активным веществом, состоящим из полиоксиэтилен-полиоксипропилен сополимеров. Другие полоксамеры включают 188 (марка F-68), 237 (марка F-87), 338 (марка F-108). Водные растворы полоксамеров устойчивы в присутствии кислот, щелочей и ионов металла. PF-127 - коммерчески доступный полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочный сополимер с общей формулой Е106 Р70 Е106, со средней молярной массой 13000. Полимер можно затем очистить подходящими методами, которые усилят свойства желатинизации полимера. Он содержит приблизительно 70% этиленоксида, который отвечает за его гидрофильность. Полимер является одним из серии блок-сополимеров полоксамера АВА, звенья которых входят в приведенную ниже формулу.

PF-127 представляет особый интерес, поскольку концентрированные растворы (>20% w/w - вес/вес) сополимера преобразуются из низковязких прозрачных растворов в твердые гели при нагревании до температуры тела. Этот феномен, следовательно, предполагает, что при контакте с телом гелеобразный препарат образует полутвердую структуру и депо замедленного высвобождения. Кроме того, PF-127 обладает хорошей способностью растворения, низкой токсичностью и, следовательно, считается хорошей питательной средой для систем доставки лекарства.

В альтернативном примере осуществления настоящего изобретения термогель представляет собой PEG-PLGA-PEG триблочный сополимер (Jeong et al. Nature (1997), 388:860-2; Jeong et al, J. Control. Release (2000), 63:155-63; Jeong et al, Adv. Drug Delivery Rev. (2002), 54:37-51). Полимер демонстрирует поведение золь-геля по концентрации от приблизительно 5% w/w до приблизительно 40% w/w. В зависимости от требуемых свойств мольное отношение лактид/гликолид в сополимере PLGA варьируется от приблизительно 1:1 до приблизительно 20:1. Получающиеся в результате сополимеры растворимы в воде и образуют свободнотекучую жидкость при комнатной температуре, но при температуре тела образуется гидрогель. Коммерчески доступный PEG-PLGA-PEG триблочный сополимер представляет собой RESOMER RGP t50106 производства Boehringer Ingelheim. Этот материал состоит из сополимера PGLA: 50:50 поли(DL-лактид-ко-гликолид) и 10% w/w ПЭГ, имеет молекулярный вес приблизительно 6000.

ReGel® - это торговая марка фирмы MacroMed Incorporated для класса низкомолекулярных, биоразлагаемых блок-сополимеров, обладающих свойствами термообратимой желатинизации согласно описанию в патентах США №№6004573 6117949 6201072 и 6287588. Сюда также входят биоразлагаемые полимерные носители лекарственных препаратов, предлагаемые в патентных заявках США, находящихся на рассмотрении, порядковые №№09/906041, 09/559799 и 10/919603. Биоразлагаемый носитель лекарственного препарата включает триблочные сополимеры АВА-типа или ВАВ-типа или их смеси, в котором А-блоки относительно гидрофобные и включают биоразлагаемые полиэфиры или поли(орто-эфир)ы, а В-блоки относительно гидрофильные и включают полиэтиленгликоль (ПЭГ), в упомянутых сополимерах гидрофобный объем составляет от 50,1 до 83% по весу, гидрофильный объем от 17 до 49.9% по весу, а общий молекулярный вес блок-сополимера составляет от 2000 до 8000 дальтон. У носителей лекарственного препарата водорастворимость проявляется при температурах ниже нормальных значений температуры тела млекопитающих, они подвергаются термообратимой желатинизации и затем существуют в виде геля при температурах, равных физиологическим значениям температуры тела млекопитающих. Биоразлагаемый, гидрофобный А полимерный блок включает полиэфир или поли(сложный ортоэфир), в котором полиэфир синтезируется из мономеров, отобранных из группы, состоящей из D, L-лактида, D-лактида, L-лактида, D, L-молочной кислоты, D-молочной кислоты, L-молочной кислоты, гликолида, гликолевой кислоты, ε-капролактона, ε-гидрокси капроновой кислоты, γ-бутиролактона, γ-гидроксимасляной кислоты, δ-валеролактона, δ-гидроксивалериановой кислоты, гидроксимасляных кислот, яблочной кислоты и их сополимеров, и имеющих средний молекулярный вес приблизительно от 600 до 3000 дальтон. Гидрофильный В-блок сегмент предпочтительно является полиэтиленгликолем (ПЭГ) с средним молекулярным весом от приблизительно 500 до 2200 дальтон.

Дополнительные биоразлагаемые термопластические полиэфиры включают AtriGel® (предоставляемые Atrix Laboratories, Inc) и/или предложенные, например, в патентах США №№5324519; 4938763; 5702716; 5744153; и 5990194; в которых пригодный биоразлагаемый термопластический полиэфир предлагается в виде термопластического полимера. Примеры пригодных биоразлагаемых термопластических полиэфиров включают полилактиды, полигликолиды, поликапролактоны, их сополимеры, терполимеры, а также их любые комбинации. В некоторых таких примерах осуществления настоящего изобретения пригодный биоразлагаемый термопластический полиэфир представляет собой полилактид, полигликолид, их сополимер, терполимер или комбинацию. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения биоразлагаемый термопластический полиэфир - это 50/50 поли(DL-лактид-ко-гликолид), содержащий карбоксиконцевую группу; присутствует в количестве от приблизительно 30% по весу до приблизительно 40% по весу композиции; и имеет средний молекулярный вес от приблизительно 23000 до приблизительно 45000. Альтернативно, в другом примере осуществления настоящего изобретения биоразлагаемый термопластический полиэфир - это 75/25 поли(DL-лактид-ко-гликолид) без карбоксиконцевой группы; присутствует в количестве от приблизительно 40% по весу до приблизительно 50% по весу композиции; и имеет средний молекулярный вес от приблизительно 15000 до приблизительно 24000. В других или альтернативных примерах осуществления настоящего изобретения концевые поли(DL-лактид-ко-гликолид) группы являются либо гидроксильными, карбоксильными, либо сложно эфирными в зависимости от способа полимеризации. Поликонденсация молочной или гликолевой кислоты дает полимер с концевыми гидроксильными и карбоксильными группами. При полимеризации с раскрытием кольца циклических лактидных или гликолидных мономеров с помощью воды, молочной кислоты или гликолевой кислоты получаются полимеры с одинаковыми концевыми группами. Однако, размыкание кольца циклических мономеров монофункциональным алкоголем, как например метанол, этанол или 1-додеканол, дает полимер с одной гидроксильной группой и одной сложноэфирной концевой группой. При полимеризации с раскрытием кольца циклических мономеров с помощью диола, например 1,6- гександиола или полиэтиленгликоля, получается полимер только с гидроксильными концевыми группами.

Так как полимерные системы термообратимых гелей растворяются в большей степени при пониженных температурах, способы солюбилизации включают добавление необходимого количества полимера к количеству воды, используемой при пониженных температурах. Обычно после смачивания полимера взбалтыванием сосуд со смесью закрывают пробкой и помещают в холодную камеру или в термостатическую емкость при температуре приблизительно 0-10°C для растворения полимера. Смесь перемешивают или взбалтывают, чтобы ускорить растворение термообратимого гель-полимера. Затем добавляют и растворяют антиапоптотический агент или проапоптотический агент и различные добавки, например буферы, соли и консервирующие агенты. В некоторых случаях антиапоптотический агент или проапоптотический агент и/или другой фармацевтически активный агент суспендируется, если он нерастворим в воде. Значение рН регулируется добавлением адекватных буферных агентов. Мукоадгезивные характеристики мембраны окна улитки факультативно передаются термообратимому гелю включением в композицию мукоадгезивных карбомеров мембраны окна улитки, например Carbopol® 934P, (Majithiya et al, AAPS PharmSciTech (2006), 7(3), p.El; EP 0551626, оба документа включены в данный документ путем ссылки для такого раскрытия).

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения представлены auris-приемлемые фармацевтические гель-композиции, которые не требуют использования дополнительного усиливающего вязкость агента. Такие гель-композиции включают, как минимум, один фармацевтически приемлемый буфер. В одном из аспектов это гель-композиция, включающая антиапоптотический агент или проапоптотический агент и фармацевтически приемлемый буфер. В другом примере осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель является желатинирующим агентом.

В других примерах осуществления настоящего изобретения применимые auris-приемлемые фармацевтические композиции для лечения уха с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом также включают один или несколько регулирующих рН агентов или буферных агентов для обеспечения пригодного для эндолимфы или перилимфы значения рН. Пригодные регулирующие рН агенты или буферы включают, но не ограничиваются этим, ацетат, бикарбонат, аммоний хлорид, цитрат, фосфат, их фармацевтически приемлемые соли или их комбинации или смеси. Такие регулирующие рН агенты и буферы включаются в количество, необходимое для поддержания значения рН от приблизительно 5 до приблизительно 9, В одном из примеров осуществления настоящего изобретения от приблизительно 6,5 до приблизительно 7,5, и в еще одном примере осуществления настоящего изобретения рН равно приблизительно 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9; 7,0; 7,1; 7,2; 7,3; 7,4; 7,5. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения, когда в композициях в соответствии с настоящим изобретением используется один или несколько буферов, они соединяются, например, с фармацевтически приемлемой основой и присутствуют в конечной композиции, например, в количестве от приблизительно 0,1% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 10%. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество буфера, включенного в гель-композиции, - это такое количество, когда рН гель-композиции не влияет на естественную буферную систему среднее ухо или внутреннее ухо, или не влияет на естественный показатель рН эндолимфы или перилимфы: в зависимости от того, где в улитке находится мишень композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения в гель-композиции присутствует от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 200 мМ концентрация буфера. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения присутствует от приблизительно 5 мМ до приблизительно 200 мМ концентрации буфера. В определенных примерах осуществления настоящего изобретения присутствует от приблизительно 20 мМ до приблизительно до 100 мМ концентрация буфера. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения буфер представляет собой, например, ацетат или цитрат при слабо кислотном показателе рН. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения буфер - это буфер уксуснокислого натрия с рН от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения буфер - это буфер лимоннокислого натрия с рН от приблизительно 5,0 до приблизительно 8,0 или от приблизительно 5,5 до приблизительно 7,0.

В альтернативном примере осуществления настоящего изобретения используемый буфер - трис(гидроксиметил)аминометан, бикарбонат, карбонат или фосфат при слабо основном показателе рН. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения буфер является буфером бикарбоната натрия с показателем рН от приблизительно 6,5 до приблизительно 8,5 или от приблизительно 7,0 до приблизительно 8,0. В другом примере осуществления настоящего изобретения буфер является натрий фосфат двухосновным буфером с рН от приблизительно 6,0 до приблизительно 9,0.

Кроме того, в настоящем описании представлены композиции или устройства с контролируемым высвобождением, включающие антиапоптотический агент или проапоптотический агент и усиливающий вязкость агент.Пригодные усиливающие вязкость агенты включают, только в качестве примера, желатинирутощие агенты и суспендирующие агенты. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения композиция с повышенной вязкостью не содержит буфера. В других примерах осуществления настоящего изобретения усиливающий вязкость агент включает фармацевтически приемлемый буфер.

Натрий хлорид или другие агенты тоничности факультативно используются, при необходимости, для регулирования тоничности.

Только в качестве примера, auris-приемлемый агент вязкости включает гидроксипропил метилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, поливинилпирролидон, карбоксиметил целлюлозу, поливиниловый спирт, натрий хондроитин сульфат, натрий гиалуронат.Другие усиливающие вязкость агенты, совместимые с требующей лечения структурой уха, включают, но не ограничиваются этим, камедь (аравийская камедь), агар, алюминиевомагниевый силикат, альгинат натрия, стеарат натрия, бурую водоросль, бентонит, карбомер, каррагенан, карбопол, ксантат, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу (МСС), цератонию, хитин, карбоксиметилированный хитозан, хондрус, декстрозу, фурцелларан, желатин, камедь гхатти, гуаровую смолу, гекторит, лактозу, сахарозу, мальтодекстрин, маннитол, сорбит, мед, маисовый крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, камедь стеркулия, ксантановая камедь, трагант, этилцеллюлозу, этилгидроксиэтил целлюлозу, этилметил целлюлозу, метил целлюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксиэтилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, поли(гидроксиэтил метакрилат), оксиполижелатин, пектин, полигелин, повидон, пропилен карбонат, сополимер метил винил эфира/малеинового ангидрида (PVM/MA), поли(метоксиеэтил метакрилат), поли(метоксиэтоксиэтил метакрилат), гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметил-целлюлозу (НРМС), натрий карбоксиметилцеллюлозу (CMC), кремний диоксид, поливинилпирролидон (PVP: повидон), Splenda® (декстроза, мальтодекстрин и сукралоза) или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения усиливающий вязкость наполнитель является комбинацией МСС и CMC. В другом примере осуществления настоящего изобретения усиливающий вязкость агент является комбинацией карбоксиметилированного хитозана или хитина и альгината. Комбинация хитина и альгината с антиапоптотическим агентом или проапоптотическими агентами, предложенными в настоящем описании, действует как композиция с контролируемым высвобождением, ограничивающая диффузию антиапоптотического агента или проапоптотических агентов из композиции. Кроме того, комбинация карбоксиметилированного хитозана и альгината факультативно используется для содействия увеличению проницаемости антиапоптотического агента или проапоптотических агентов через мембрану окна улитки.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения представлена композиция с повышенной вязкостью, включающая от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 100 мМ антиапоптотического агента или проапоптотического агента, фармацевтически приемлемый агент вязкости и воду для инъекции, концентрациия агента вязкости в воде достаточная для получения композиции с повышенной вязкостью с конечной вязкостью от приблизительно 100 до приблизительно 100000 сП. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вязкость геля находится в диапазоне от приблизительно 100 до приблизительно 50000 сП, от приблизительно 100 сП до приблизительно 1000 сП, от приблизительно 500 сП до приблизительно 1500 сП, от приблизительно 1000 сП до приблизительно 3000 сП, от приблизительно 2000 сП до приблизительно 8000 сП, от приблизительно 4000 сП до приблизительно 50000 сП, от приблизительно 10000 сП до приблизительно 500000 сП, от приблизительно 15000 сП до приблизительно 1000000 сП. В других примерах осуществления настоящего изобретения, когда требуется среда с еще большей вязкостью, биологически совместимый гель включает, как минимум, приблизительно 35%, как минимум, приблизительно 45%, как минимум, приблизительно 55%, как минимум, приблизительно 65%, как минимум, приблизительно 70%, как минимум, приблизительно 75% или даже, как минимум, приблизительно 80% или около этого по весу антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В высококонцентрированных пробах биологически совместимая композиция с повышенной вязкостью включает, как минимум, приблизительно 25%, как минимум, приблизительно 35%, как минимум, приблизительно 45%, как минимум, приблизительно 55%, как минимум, приблизительно 65%, как минимум, приблизительно 75%, как минимум, приблизительно 85%, как минимум, приблизительно 90% или как минимум, приблизительно 95% или больше по весу антиапоптотического агента или проапоптотического агента.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вязкость представленных в настоящем описании гель-композиций измеряется любым описанным способом. Например, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения для расчета вязкости описанной в настоящем описании гель-композиции используется LVDV-II+CP вискозиметр «конус-плита» и Cone Spindle CPE-40 [конический шпиндель]. В других примерах осуществления настоящего изобретения для расчета вязкости описанной в настоящем описании гель-композиции используется вискозиметр Брукфилда (шпиндель и чашка). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения упомянутые в настоящем описании диапазоны вязкости измеряются при комнатной температуре. В других примерах осуществления настоящего изобретения упомянутые в настоящем описании диапазоны вязкости измеряются при комнатной температуре (например, при средней температуре тела здорового человека).

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемая с повышенной вязкостью auris-приемлемая композиция включает, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент и, как минимум, один желатинирующий агент. Желатинирующие агенты, пригодные для использования при приготовлении гель-композиции включают, но не ограничиваются этим, целлюлозу, производные целлюлозы, простые эфиры целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлоза, этил целлюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, метилцеллюлоза), гуаровая камедь, ксантановая камедь, смола плодоворожкового дерева, альгинаты (например, альгиновая кислота), силикаты, крахмал, трагакант, карбоксивинил полимеры, каррагенан, парафин, вазелин и их любые комбинации или смеси. В некоторых других примерах осуществления настоящего изобретения в качестве желатинирующего агента используется гидроксипропилметилцеллюлоза (Methocel®). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании усиливающие вязкость агенты также используются в качестве желатинирующего агента для представленных в настоящем описании гель-композиций.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем описании ушные терапевтические агенты распределяются как auris-приемлемый краситель. В соответствии с использованием в настоящем описании красители (также известные как пленкообразователи) являются растворами, состоящими из растворителя, мономера или полимера, активного агента и факультативно одного или нескольких фармацевтически приемлемых наполнителей. После нанесения на ткань растворитель испаряется, оставляя тонкий слой, состоящий из мономеров или полимеров и активного агента. Слой защищает активные агенты и сохраняет их в неподвижном состоянии на участке нанесения. Это уменьшает количество активного агента, которое может быть утрачено, и соответственно увеличивает количество, доставляемое пациенту. В качестве неограничивающего примера красители включают коллодии (например, эластический коллодий, Фармакопея США) и растворы, включающие сахарид силоксан сополимеры и сшивающий агент.Коллодии представляют собой растворы простого этилового эфира/этанола, содержащие пироксилин (нитроцеллюлоза). После нанесения раствор простого этилового эфира/этанола испаряется, оставляя тонкую пленку пироксилина. В растворах, включающих сахарид силоксан сополимеры, сахарид силоксан сополимеры образуют слой после того, как испарение растворителя инициирует сшивку сахарид силоксан сополимеров. Дополнительные сведения относительно красителей см. в работе Remington: Наука и практика фармацевтики, которая тем самым включена в настоящее описание в отношении данной темы. Красители, рассматриваемые для использования в настоящем описании, эластичные, так что они не мешают распространению волн давления через ухо. Кроме того, красители могут применяться в виде жидкостей (то есть, раствора, суспензии или эмульсии), полутвердых веществ (то есть, геля, пены, пасты или пасты) или аэрозолей.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенный в настоящем описании ушной терапевтический агент выпускается в виде пены с контролируемым высвобождением. Примеры пригодных пенообразующих носителей для использования в предложенных в настоящем описании композициях включают, но не ограничиваются этим, альгинат и его производные, карбоксиметилцеллюлозу и ее производные, коллаген, полисахариды, включая, например, декстран, производные декстрана, пектин, крахмал, модифицированные крахмалы, такие как крахмалы, содержащие дополнительные карбоксильные и/или карбоксамидные группы и/или с гидрофильными боковыми цепями, целлюлозу и ее производные, агар и его производные, например агар, стабилизированный полиакриламидом, полиэтиленоксиды, гликольметакрилаты, желатин, смолы, например, ксантановая, гуаровая камедь, камедь карайя, загуститель, аравийская камедь, трагакант и смола плодоворожкового дерева или их комбинации. Также применимы соли вышеупомянутых носителей, например, натрий альгинат. Композиция факультативно, кроме того, включает пенообразующий агент, который стимулирует образование пены, включающий поверхностно-активное вещество или внешний пропеллент.Примеры пригодных пенообразующих агентов включают цетримид, лецитин, мыла, кремнийсодержащие соединения и т.п.. Коммерчески доступные поверхностно-активные вещества, такие как Tween®, также применимы.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения другие гель-композиции пригодны для применения в зависимости от конкретного используемого антиапоптотического агента или проапоптотического агента, другого фармацевтического агента или наполнителей/добавок, и как таковые считаются попадающими в объем настоящего изобретения. Например, предполагается, что другие коммерчески доступные гели на основе глицерина, полученные из глицерина соединения, конъюгированные или сшитые гели, матрицы, гидрогели и полимеры, а также желатины и их производные, альгинаты и гели на основе альгината и даже различные природные и синтетические соединения гидрогеля и полученные из гидрогеля соединения, найдут применение в приведенных в описании композициях с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемые гели включают, но не ограничиваются этим, альгинатные гидрогели SAF®-Gel (ConvaTec, Принстон, Нью-Джерси), Duoderm® гидроактивный гель (ConvaTec), Nu-gel® (Johnson & Johnson Medical, Арлингтон, Техас); Carrasyn® (V) ацеманнан гидрогель (Carrington Laboratories, Inc, Ирвинг, Техас); глицериновые гели Eita® (Swiss-American Products, Inc, Даллас, Техас) и K-Y® стерильный (Johnson & Johnson). В других примерах осуществления настоящего изобретения биоразлагаемые биосовместимые гели также представляют соединения, присутствующие в auris-приемлемых композициях, предложенных и приведенных в описании.

В некоторых композициях, разработанных для введения млекопитающему, и для композиций, составленных для введения человеку, auris-приемлемый гель составляет в основном всю массу композиции. В других примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемый гель включает приблизительно 98% или приблизительно 99% композиции по весу. Такое положение желательно, когда необходима в основном не жидкая или в основном вязкая композиция. В другом примере осуществления настоящего изобретения, когда требуются несколько менее вязкие или несколько более жидкие auris-приемлемые фармацевтические гель-композиции, биосовместимая гелевая часть композиции составляет, как минимум, приблизительно 50% по весу, как минимум, приблизительно 60% по весу, как минимум, приблизительно 70% по весу или даже, как минимум, приблизительно 80% или 90% по весу композиции. Все промежуточные целые числа в пределах этих диапазонов рассматриваются как попадающие в объем настоящего изобретения, а в некоторых альтернативных примерах осуществления настоящего изобретения определены даже более жидкие (и следовательно менее вязкие) auris-приемлемые гель-композиции, как например, композиции, в которых гелевый или матричный компонент смеси составляет не более чем приблизительно 50% по весу, не более чем приблизительно 40% по весу, не более чем приблизительно 30% по весу, или даже составляющие не более чем приблизительно 15% или приблизительно 20% по весу композиции.

Приемлемые для уха суспендирующие агенты

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения в фармацевтически приемлемую композицию с повышенной вязкостью включен, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент, в котором композиция, кроме того, содержит, как минимум, один суспендирующий агент, а суспендирующий агент способствует передаче характеристик контролируемого высвобождения композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения суспендирующие агенты также служат для увеличения вязкости приемлемых для уха модулирующих апоптоз композиций и составов.

Суспендирующие агенты включают, посредством примера только, такие соединения, как поливинилпирролидон, например, поливинилпирролидон K12, поливинилпирролидон K17, поливинилпирролидон K25 или поливинилпирролидон K30, винил пирролидон/винилацетатный сополимер (S630), натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидоксипропилметилцеллюлоза (гипромеллоза), гироксиметилцеллюлоза ацетат стеарат, полисорбат 80, гидроксиэтилцеллюлоза, натрий альгинат, камеди, как например, трагакант и аравийская-камедь, гуаровая камедь, ксантаты, включающие ксантановую камедь, сахара, целлюлозные полимеры, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, гидоксипропилметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, полисорбат -80, натрий альгинат, полиэтоксилированный сорбитанмонолаурат, полиэтоксилированный сорбитанмонолаурат, повидон т.п.. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения полезные водные суспензии также содержат один или несколько полимеров, например, суспендирующие агенты. Пригодные полимеры включают водорастворимые полимеры, как например, целлюлозные полимеры, например, гидроксипропилметилцеллюлоза, и нерастворимые в воде полимеры, как например, сшитые карбоксил-содержащие полимеры.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении представлены auris-приемлемые гель-композиции, включающие терапевтически эффективное количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента в гидроксиэтилцеллюлозном геле. Гидроксиэтилцеллюлозу (НЕС) получают в виде сухого порошка, который восстанавливается в воде или водном буфере до получения нужной вязкости (как правило, от приблизительно 200 сП до приблизительно 30000 сП, что соответствует от приблизительно 0,2 до приблизительно 10% НЕС). В одном из примеров осуществления настоящего изобретения концентрация НЕС составляет от приблизительно 1% до приблизительно 15%, от приблизительно 1% и приблизительно 2% или от приблизительно 1,5% до приблизительно 2%.

В других примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемые композиции, включающие гель-композиции и композиции с повышенной вязкостью, кроме того, включают наполнители, другие лекарственные или фармацевтические агенты, носители, адъюванты, как например, консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, усилители раствора, соли, солюбилизаторы, противопенный агент, антиоксидант, диспергирующий агент, смачивающий агент, поверхностно-активное вещество, или их комбинации.

Приемлемый для уха (утверждаемый при актиничном излучении гель

В других примерах осуществления настоящего изобретения гель представляет собой отверждаемый при актиничном излучении гель, так что после введения такого геля в ушную структуру-мишень или возле нее под воздействием актиничной радиации (или света, включая УФ-излучение, видимый свет или инфракрасный свет) формируются требуемые свойства геля. Только в качестве примера, для создания актиничного излучения используется волоконная оптика для формирования требуемых свойств геля. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения волоконная оптика и устройство введения геля составляют единое устройство. В других примерах осуществления настоящего изобретения волоконная оптика и устройство введения геля представлены отдельно.

Приемлемый для уха содержащий испаряющийся растворитель гель

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения гель представляет собой содержащий испаряющийся растворитель гель, так что требуемые свойства геля формируются после введения такого геля в требующую лечения структуру уха или возле нее; указанный гель, поскольку находящийся в инъецированной гель-композиции растворитель диффундирует из него, является гелем с требуемыми сформированными свойствами. Например, композиция, включающая изобутират ацетата сахарозы, фармацевтически приемлемый растворитель, одну или несколько добавок и антиапоптотический агент или проапоптотический агент, вводится в мембрану окна улитки или возле мембраны окна улитки: после диффузии растворителя из инъецированной композиции обеспечивается депо с требуемыми свойствами геля. Например, при использовании растворимого в воде растворителя обеспечивается депо высокой вязкости, когда растворитель быстро диффундирует из инъецированной композиции. С другой стороны, при использовании гидрофобного растворителя (например, бензилбензоата) обеспечивается менее вязкое депо. Одним примером auris-приемлемой гель-композиции с испаряющимся растворителем является система доставки SABER™ от DURECT Corporation.

Приемлемый для уха формирующийся по месту пористый материал

Кроме того, в объеме примеров осуществления настоящего изобретения рассматривается использование пористого материала, формирующегося по месту в внутреннем ухе или среднем ухе. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения пористый материал формируется из гиалуроновой кислоты или ее производных. Пористый материал пропитывается нужным антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и помещается внутри среднего уха так, чтобы в среднее ухо обеспечивалось контролируемое высвобождение антиапоптотического агента или проапоптотического агента, или в контакте с мембраной окна улитки для обеспечения контролируемого высвобождения антиапоптотического агента или проапоптотического агента во внутреннее ухо. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения пористый материал является биоразлагаемым.

Мукоадгезивы мембраны окна улитки

Кроме того, в объеме примеров осуществления настоящего изобретения рассматривается дополнение мукоадгезива мембраны окна улитки композициями с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и композициями и устройствами, предложенными в настоящем описании. Термин «мукоадгезив» используется для материалов, которые соединяются с муциновым слоем биологической мембраны, как например, наружная мембрана трехслойной мембраны окна улитки. Чтобы служить в качестве мукоадгезивных полимеров для мембраны окна улитки, полимеры обладают некоторыми общими физико-химическими характеристиками, такими как преимущественно анионная гидрофильность с многочисленными формирующими водородную связь группами, подходящим поверхностным свойством смачивания слизистых поверхностей/ поверхностей слизистой ткани или достаточной пластичностью, чтобы проникать через слизистую сетку.

Мукоадгезивные агенты мембраны окна улитки, которые используются с приемлемыми для лечения уха композициями, включают, но не ограничиваются этим, как минимум, один растворимый поливинилпирролидоновый полимер (PVP); набухающий в воде, но нерастворимый в ней, волокнистый, сшитый карбоксифункциональный полимер; сшитую поли(акриловую кислоту) (например, Carbopol® 947P); карбомер гомополимер; карбомер сополимер; гидрофильную полисахаридную камедь, мальтодекстрин, сшитый гель альгинатной камеди, диспергируемый в воде поликарбоксилатный виниловый полимер, как минимум, две дисперсные композиции из группы, состоящей из диоксида титана, кремний диоксида и глины, или их смеси. Мукоадгезивный агент мембраны окна улитки дополнительно используется в комбинации с приемлемым для лечения уха, увеличивающим вязкость наполнителем, или используется отдельно для повышения взаимодействия композиции с нацеленным на слизистый слой ото-компонентом. В одном из неограничивающих примеров мукоадгезивный агент представляет собой мальтодекстрин и/или альгинатную камедь. При использовании свойство мукоадгезива мембраны окна улитки, переданное композиции, находится на уровне, достаточном для доставки эффективного количества композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом, например, к слизистому слою мембраны окна улитки или к гребню окна улитки в объеме, покрывающем слизистую мембрану, и для последующего обеспечения доставки композиции к пораженным зонам, включая, только в качестве примера, вестибулярные и/или улитковые структуры внутреннего уха. При использовании представленных в настоящем описании композиций их мукоадгезивные характеристики определены, и с помощью этой информации (наряду с другими представленными в настоящем описании данными) определяются адекватные количества. Один из методов определения достаточной мукоадгезивности включает мониторинг изменений взаимодействия композиции со слизистым слоем, включая, но не ограничиваясь этим, измерение изменения времени удержания или времени хранения композиции при отсутствии и наличии мукоадгезивного наполнителя.

Мукоадгезивные агенты описаны, например, в патентах США №№6638521, 6562363, 6509028, 6348502, 6319513, 6306789, 5814330 и 4900552, каждый из которых настоящим включен в данный документ путем ссылки для такого раскрытия.

В другом неограничивающем примере мукоадгезиный агент представляет собой, например, как минимум, два дисперсных компонента, из группы диоксид титана, диоксид кремния и глина, в котором композиция не разбавляется затем никакой жидкостью перед введением, а уровень диоксид кремния, если присутствует, составляет от приблизительно 3% до приблизительно 15%, по весу композиции. Диоксид кремния, если присутствует, включает высокодисперсный диоксид кремния, осажденный диоксид кремния, коацерватированный диоксид кремния, гелевый диоксид кремния и их смеси. Глина, если присутствует, включает каолиновые минералы, серпентиновые минералы, глинистые минералы, иллит или их смесь. Например, глина включает лапонит, бентонит, гекторит, сапонит, монтмориллониты или их смесь.

В одном неограничивающем примере мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является мальто декстрином. Мальтодекстрин - это углевод, полученный путем гидролиза крахмала, который можно получать из кукурузы, картофеля, пшеницы или других продуктов растительного происхождения. Мальтодекстрин факультативно используется либо отдельно, либо в комбинации с другими мукоадгезивными агентами мембраны окна улитки для передачи мукоадгезивных характеристик предложенным в настоящем описании композициям. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения для повышения мукоадгезивных характеристик мембраны окна улитки композиций или устройств, предложенных в настоящем описании, используется комбинация мальтодекстрина и карбопол-полимера.

В другом примере осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом и/или сахаридным алкилэфиром. В соответствии с использованием в настоящем описании, «алкилгликозид» означает соединение, включающее любой гидрофильный сахарид (например, сахароза, мальтоза или глюкоза), связанный с гидрофобным алкилом. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором алкилгликозид включает сахар, связанный с гидрофобным алкилом (например, алкил, включающий от приблизительно 6 до приблизительно 25 атомов углерода) амидной связью, аминной связью, карбаматной связью, простой эфирной связью, простой тиоэфирной связью, сложной эфирной связью, сложной тиоэфирной связью, гликозидной связью, тиогликозидной связью и/или уреидной связью. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки - это гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил-, тетрадецил, пентадецил-, гексадецил-, гептадецил- и октадецил α - или β-D-мальтозид; гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил-, тетрадецил, пентадецил-, гексадецил-, гептадецил- и октадецил α - или β-глюкозид; гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил-, тетрадецил, пентадецил-, гексадецил-, гептадецил- и октадецил α- или β-D-сахарозид; гексил-, гептил-, октил-, додецил-, тридецил- и тетрадецил-β-D-тиомальтозид; гептил- или октил-1-тио-α-или β-D-гликопиранозид; алкил тиосахарозы; алкил мальтотриозиды; длинноцепочечные алифатические угольнокислотные амиды из сахарозы β-амино-алкил простых эфиров; производные палатинозы или изомальтамина, связанные амидной связью с алкильной цепью, и производные изомальтамина, связанные мочевиной с алкильной цепью; длинноцепочечные алифатические угольнокислотные уреиды из сахарозы β-амино-алкил простых эфиров и длинноцепочечные алифатические угольнокислотные амиды из сахарозы β-амино-алкил простых эфиров. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором алкилгликозид представляет собой мальтозу, сахарозу, глюкозу или их комбинацию, связанные гликозидной связью с алкильной цепью 9-16 атомов углерода (например, нонил-, децил-, додецил- и тетрадецил сахарозид; нонил-, децил-, додецил- и тетрадецил глюкозид; и нонил-, децил-, додецил- и тетрадецил мальтозид). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидлм, в котором алкилгликозид представляет собой додецилмальтозу, тридецилмальтозу и тетрадецилмальтозу.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором алкилгликозид представляет собой дисахарид, как минимум, с одной глюкозой. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приемлемым для лечения уха усилителем проникновения является поверхностно-активное вещество, включающее α-D-глтокопиранозил-β-гликопиранозид, n-додецил-4-O-α-D-глюкопиранозил-β-гликопиранозид и/или n-тетрадецил-4-O-α-D- глюкопиранозил-β-гликопиранозид. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором критическая концентрация мицелл (CMC) алкилгликозида составляет приблизительно менее 1 мМ в чистой воде или в водных растворах. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором атом кислорода в алкилгликозиде замещен атомом серы. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором алкилгликозид - это β аномер. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения мукоадгезивный агент мембраны окна улитки является алкилгликозидом, в котором алкилгликозид включает 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 98 99 99 1-99,5 или 99,9% β-аномера.

Приемлемые для уха частицы с контролируемым высвобождением

Антиапоптотический агент или проапоптотические агенты и/или другие фармацевтические агенты, предложенные в настоящем описании, дополнительно включены в частицы с контролируемым высвобождением, липидные комплексы, липосомы, наночастицы, микрочастицы, микросферы, коацерваты, нанокапсулы или другие агенты, которые усиливают или облегчают локализованную доставку антиапоптотического агента или проапоптотического агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения используется одна композиция с повышенной вязкостью, в которой присутствует, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент, в то время как в других примерах осуществления настоящего изобретения используется фармацевтическая композиция, включающая смесь двух или более разных композиций с повышенной вязкостью, в которой присутствует, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент.В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения для обеспечения желаемых характеристик модулирующих апоптоз композиций с контролируемым высвобождением или композиций также применяются комбинации коллоидных растворов, гелей и/или биосовместимых матриц. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения модулирующие апоптоз композиции с контролируемым высвобождением или композиции поперечно сшиты одним или несколькими агентами, с целью изменения или улучшения свойств композиции.

Примеры микросфер, относящихся к фармацевтическим композициям, предложенным в настоящем описании, включают: Luzzi, L. A., J. Pharm. Psy. 59:1367 (1970); патент США №4,530,840; Lewis, D.H., «Контролируемое высвобождение биоактивных агентов из лактидов/гликолидных полимеров» в биоразлагаемых полимерах как системы доставки лекарства, Chasin, М. и Langer, R., под ред., Marcel Decker (1990); патент США №4675189; Beck et al., «Системы доставки поли(молочная кислота) и поли(молочная кислота-со-гликолевая кислота) контрацептивов», в стероидной контрацепции длительного действия, Mishell, D. R., ed., Raven Press (1983); патент США №4758435; патент США №3773919; патент США №4474572. Примеры белковых лекарственных средств, составленных в виде микросфер, включают: патент США №6458387; патент США №6268053; Патент США №6090925; Патент США №5981719; и патент США №5578709, и включены в данный документ путем ссылки для такого раскрытия.

Микросферы обычно сферической формы, хотя возможны микрочастицы неправильной формы. Микросферы могут различаться по размеру, диаметром от субмикрона до 1000 микрон. Микросферами, пригодными для использования с предложенными в настоящем описании приемлемыми для лечения уха композициями, являются микросферы диаметром от субмикрона до 250 микрон, что позволяет выполнять инъекции иглами стандартного калибра. Приемлемые для лечения уха микросферы можно получить любым способом, который обеспечивает микросферы в диапазоне размера, приемлемого для использования в инъецируемой композиции. Инъекция дополнительно выполняется иглами стандартного калибра, применяемыми для введения жидких композиций.

Подходящие примеры материалов полимерных матриц для использования в приемлемых для лечения уха частицах с контролируемым высвобождением включают поли(гликолевую кислоту), поли-d,l-молочную кислоту, поли-l-молочную кислоту, сополимеры вышеупомянутого, поли(али4)атические карбоновые кислоты), кополиоксалаты, поликапролактон, полидиоксонен, поли(ортокарбонаты), поли(ацетали), поли(капролактон молочной кислоты), полиортоэфиры, поли(капролактон гликолевой кислоты), полидиоксонен, полиангидриды, полифосфазины и природные полимеры, включая альбумин, казеин и некоторые воски, как например, глицеролмоностеарат и глицеролдистеарат и т.п.. Различные коммерчески доступные материалы из поли(лактид-ко-гликолида)=сополимера молочной и гликолевой кислоты (PLGA) дополнительно используются в предлагаемом в настоящем изобретении методе. Например, поли (d,l-молочная-ко-гликолевая кислота) поставлется Boehringer-Ingelheim под маркой RESOMER RG 503 Н. Моль процентный состав этого продукта 50% лактида и 50% гликолида. Диапазон этих сополимеров очень широкий по молекулярному весу и соотношению молочной кислоты к гликолевой кислоте. Один пример осуществления настоящего изобретения включает использование полимерного поли(d,l-лактида-ко-гликолида). Диапазон мольного отношения лактида к гликолиду в таком сополимере от приблизительно 95:5 до приблизительно 50:50.

Молекулярный вес полимерного матричного материала имеет значение. Молекулярный вес должен быть достаточно высоким, чтобы формировались удовлетворительные полимерные покрытия, то есть, полимер должен быть хорошим пленкообразователем. Как правило, диапазон удовлетворительного молекулярного веса составляет от 5000 до 500000 дальтон. Молекулярный вес полимера также важен с той точки зрения, что молекулярный вес влияет на скорость биохимического разложения полимера. Для диффузионного механизма высвобождения лекарственного препарата полимер должен оставаться целым до полного высвобождения лекарства из микрочастиц, а затем должен произойти его распад. Лекарственный препарат также высвобождается из микрочастиц в виде полимерных биоэродирующих наполнителей. Путем соответствующего выбора полимерных материалов достигается такой состав микросфер, что получающиеся в результате микросферы демонстрируют как свойства диффузионного высвобождения, так и свойства высвобождения с биоразложением. Это удобно для обеспечения структур многофазного высвобождения.

Известно множество методов, с помощью которых такие соединения инкапсулируются в микросферы. В таких методах антиапоптотический агент или проапоптотический агент обычно диспергируется или эмульгируется при помощи мешалок, смесителей или другого оборудования динамического перемешивания в растворителе, содержащем образующий оболочку материал. Растворитель затем удаляется из микросфер и после того получается продукт в виде микросферы.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения модулирующие апоптоз композиции с контролируемым высвобождением изготовлены за счет включения антиапоптотического агента или проапоптотических агентов и/или других фармацевтических агентов в матрицы сополимера этилена и винилацетата. (См. патент США №6083534 включенный в настоящее описание для такого раскрытия). В другом примере осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотические агенты введены в макросферы из поли (молочной-гликолевой кислоты) или поли-L-молочной кислоты. Id. В еще одном примере осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотические агенты инкапсулированы в альгинатные микросферы. (См. патент США №6036978, включенный в настоящее описание для такого раскрытия). В предложенных в настоящем описании композициях и способах факультативно используются биосовместимые полимеры на основе метакрилата для инкапсуляции модулирующих апоптоз соединений или композиций. В продаже имеется широкий ассортимент полимерных систем на основе метакрилата, например, полимеры EUDRAGIT фирмы Evonik. Один полезный аспект метакрилатных полимеров состоит в том, что свойства композиции изменяются при включении разных сополимеров. Например, микрочастицы из поли(акриловая кислота-ко-метилметакрилата) демонстрируют повышенные мукоадгезивные свойства, поскольку группы карбоновой кислоты в поли(акриловой кислоте) образуют водородные связи с муцином (Park et al, Pharm. Res. (1987) 4(6): 457-464). Изменение соотношения между акриловокислотными и метилметакрилатными мономерами способствует модуляции свойств сополимера. Основанные на метакрилате микрочастицы использовались также в белковых терапевтических композициях (Naha et al. Журнал микрокапсулирования 04 февраля 2008 г.(публикация онлайн)). В одном из примеров осуществления настоящего изобретения приемлемые для лечения уха приведенные в данном описании композиции с повышенной вязкостью включают модулирующие апоптоз микросферы, в которых микросферы формируются из метакрилатного полимера или сополимера. В дополнительном примере осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция с повышенной вязкостью включает модулирующие апоптоз микросферы, отличающиеся тем, что микросферы мукоадгезивны. Другие системы с контролируемым высвобождением, включающие введение или осаждение полимерных материалов или матриц на твердые или полые сферы, содержащие антиапоптотический агент или проапоптотические средства, также недвусмысленно рассматриваются в рамках предложенных в настоящем описании примеров осуществления настоящего изобретения. Типы систем с контролируемым высвобождением, доступных без значительной потери активности антиапоптотического агента или проапоптотического агента, определены при использовании предложенных в настоящем описании идей изобретения, примеров и принципов.

Пример общепринятого процесса микрокапсулирования для фармацевтических препаратов приведен в патенте США №3737337, включенным в данное описание путем ссылки для такого раскрытия. Модулирующие апоптоз вещества, подлежащие инкапсулированию или заливке, растворяются или диспергируются в органическом растворе полимера (фаза А) при помощи обычных мешалок, включая (при подготовке дисперсии) вибраторы и высокоскоростные мешалки, и т.д. Дисперсия фазы (А), содержащей основной материал в растворе или в суспензии, выполняется в водной фазе (В), снова при помощи обычных мешалок, например высокоскоростные мешалки, вибрационных смесителей или даже распылителей, в этом случае размер частиц микросфер будет определяться не только концентрацией фазы (А), но также и размером эмульсата или микросферы. При помощи общепринятых технологий для микрокапсулирования антиапоптотического агента или проапоптотических агентов микросферы формируются, когда растворитель, содержащий активный агент и полимер, эмульгируется или диспергируется в несмешивающемся растворе перемешиванием, взбалтыванием, вибрацией или некоторыми другими способами динамического перемешивания, часто в течение относительно длительного периода времени.

Способы построения микросфер также описаны в патенте США №4389330 и патенте США №4530840, которые включены в данное описание путем ссылки для такого раскрытия. Требуемый антиапоптотический агент или проапоптотический агент растворяется или диспергируется в соответствующем растворителе. К содержащей агент среде добавляют полимерный матричный материал в количестве относительно активного компонента, которое дает продукт с нужной дозировкой активного средства. Дополнительно все компоненты модулирующего апоптоз продукта с микросферами можно смешивать в среде растворителя вместе. Применимые растворители для агента и полимерного матричного материала включают органические растворители, например ацетон, галогенированные ароматические углеводороды, такие как хлороформ, метиленхлорид и т.п., ароматические углеводородные соединения, галогенированные ароматические углеводородные соединения, циклические эфиры, спирты, этилацетат и т.п.

Смесь компонентов в растворителе эмульгируется в технологическом растворе дисперсионной фазы; технологический раствор дисперсионной фазы такой, что в нем формируется дисперсия микрокапелек, содержащих указанные компоненты. Естественно, технологический раствор дисперсионной фазы и органический растворитель должны быть несмешивающимися и включать воду, хотя дополнительно используются неводные среды, например, ксилол и толуол синтетические масла и натуральные масла. Дополнительно к технологическому раствору дисперсионной фазы добавляют поверхностно-активное вещество, чтобы не допустить агломерирование микрочастиц и контролировать размер микрокапелек растворителя в эмульсии. Предпочтительная комбинация поверхностно-активного вещества и диспергирующей среды составляет от 1 до 10% по весу поливинилового спирта в водной смеси. Дисперсия создается механическим перемешиванием смешанных материалов. Эмульсия дополнительно образуется добавлением небольших капель раствора материала, образующего оболочку активного агента, к технологическому раствору дисперсионной фазы. Температура во время образования эмульсии не особенно важна, но влияет на размер и качество микросфер и растворимость лекарственного препарата в дисперсионной среде. Желательно, чтобы агента в дисперсионной среде было как можно меньше. Кроме того, в зависимости от растворителя и технологического раствора дисперсионной среды температура не должна быть слишком низкой или, в ином случае, растворитель и технологический раствор затвердеют или технологический раствор станет слишком вязким для практических целей, или температура не должна быть слишком высокой, такой что технологический раствор испарится, или такой что жидкий технологический раствор не сохранится. Кроме того, температура среды не может быть такой высокой, что она неблагоприятно влияет на устойчивость конкретного агента, включенного в микросферы. Соответственно, дисперсионный процесс проводится при любой температуре, при которой сохраняется устойчивый режим работы, предпочтительная температура приблизительно составляет от 15°C до 60°C в зависимости от лекарственного препарата и выбранного наполнителя.

Сформировавшаяся дисперсия является устойчивой эмульсией и из этой дисперсии на первой стадии процесса удаления растворителя дополнительно частично удаляется несмешивающаяся жидкость органического растворителя. Растворитель удаляется с помощью таких технологических приемов, как нагревание, применение пониженного давления или их комбинация. Температура, которая используется для испарения растворителя из микрокапелек, не критична, но она не должна быть такой высокой, что происходит разложение антиапоптотического агента или проапоптотического агента, используемых при составлении данной микрочастицы, и она не должна быть слишком высокой, чтобы испарение растворителя происходило с такой большой скоростью, которая вызвала бы дефекты образующего оболочку материала. Как правило, на первой стадии удаления растворителя удается удалить от 5 до 75% его объема.

После первой стадии диспергированные микрочастицы в несмешивающейся жидкой среде растворителя отделяются от жидкой среды любым удобным способом разделения. Таким образом, например, жидкость сливается из микросферы или суспензия микросферы фильтруется. Хотя, при желании, могут использоваться другие различные комбинации техники разделения.

После выделения микросфер из технологического раствора дисперсионной среды остаток растворителя в микросферах удаляется путем экстракции. На этой стадии микросферы суспендируются в том же технологическом растворе дисперсионной среды, который использовали на первой стадии, с поверхностно-активным веществом или без него, или в другой жидкости. Экстракционная среда выводит растворитель из микросфер, при этом не растворяет микросферы. Во время экстракции экстракционная среда с растворенным растворителем факультативно удаляется и заменяется свежей экстракционной средой. Это лучше всего делать непрерывно. Скорость пополнения экстракционной среды в данном процессе переменная, которая определяется во время выполнения процесса и, следовательно, никаких точных пределов скорости задать нельзя. После удаления большей части растворителя из микросфер, микросферы высушивают на воздухе или другими обычными способами сушки, такими как вакуумная сушка, сушка с помощью осушающего вещества, или подобными способами. Этот процесс очень эффективен при инкапсуляции антиапоптотического агента или проапоптотического агента, поскольку достигается загрузка ядра вплоть до 80% по весу, предпочтительно до 60% по весу.

Альтернативно, микросферы с контролируемым высвобождением, содержащие антиапоптотический агент или проапоптотический агент, создаются при помощи статических мешалок. Статические или неподвижные мешалки состоят из трубопровода или трубы, куда поступает множество агентов статического смешивания. Статические мешалки обеспечивают равномерное смешивание на относительно коротком отрезке трубопровода и в относительно короткий промежуток времени. В статических мешалках жидкость двигается через мешалку, а не через какую-то часть мешалки, например, лопасть, которая движется сквозь жидкость.

Статическая мешалка используется факультативно для создания эмульсии. Если для создания эмульсии используется статическая мешалка, несколько факторов определяют размер частиц эмульсии, включая плотность и вязкость различных смешиваемых растворов или фаз, объемное соотношение фаз, поверхностное натяжение между фазами, параметры статической мешалки (диаметр трубопровода; длина смешивающего элемента; количество смешивающих элементов) и линейная скорость прохода через статическую мешалку. Температура является величиной переменной, поскольку она воздействует на плотность, вязкость и поверхностное натяжение. Управляющими величинами являются линейная скорость, скорость сдвига и перепад давления на единицу длины статической мешалки.

Для создания микросфер, содержащих антиапоптотический агент или проапоптотический агент, с помощью процесса статического перемешивания органическая фаза и водная фаза объединяются. Органическая и водная фазы в значительной степени или в основном несмешивающиеся, причем водная фаза составляет дисперсионную среду эмульсии. Органическая фаза включает антиапоптотический агент или проапоптотический агент, а также образующий оболочку полимерный или полимерный матричный материал. Органическую фазу получают путем растворения антиапоптотического агента или проапоптотического агента в органическом или другом применимом растворителе или путем формирования дисперсии или эмульсии, содержащей антиапоптотический агент или проапоптотический агент. Органическая фаза и водная фаза закачиваются насосом так, чтобы эти две фазы текли одновременно через статическую мешалку, образуя таким образом эмульсию, которая включает микросферы, содержащие антиапоптотический агент или проапоптотический агент, инкапсулированные в полимерный матричный материал. Органические и водные фазы закачиваются через статическую мешалку в большой объем охлаждающей жидкости для извлечения или удаления органического растворителя. Органический растворитель факультативно удаляется из микросфер, по мере того как они промываются или размешиваются в охлаждающей жидкости. После промывания микросфер в охлаждающей жидкости их отделяют, например через сито, и сушат.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения микросферы получены при помощи статической мешалки. Способ не ограничивается описанной выше технологией экстракции растворителя, а используется с другими технологиями инкапсуляции. Например, способ факультативно используется с технологией инкапсуляции с разделением фаз. Для выполнения такой технологии получают органическую фазу, включающую антиапоптотический агент или проапоптотический агент, суспендированный или диспергированный в растворе полимера. Нерастворяющаяся вторая фаза не содержит растворителей для полимерного и активного агента. Предпочтительная нерастворяющаяся вторая фаза - кремниевое масло. Органическая фаза и нерастворяющаяся фаза закачиваются через статическую мешалку в нерастворяющуюся охлаждающую жидкость, например гептан. Полутвердые частицы быстро охлаждаются до полного отверждения и промывки. Способ микрокапсулирования включает сушку распылением, испарение растворителя, комбинацию испарения и экстракции, а также экструзию из расплава.

В другом примере осуществления настоящего изобретения способ микрокапсулирования включает использование статической мешалки с одним растворителем. Этот способ описан подробно в заявке на патент США №08/338805, включенной в данный документ путем ссылки для такого раскрытия. Альтернативный способ предусматривает использование статической мешалки с сорастворителями. Этим способом получают биоразлагаемые микросферы, содержащие биоразлагаемое полимерное связующее и антиапоптотический агент или проапоптотический агент, который включает смесь, как минимум, двух в основном нетоксичных растворителей, не содержащих галогенированных углеводородов, для растворения как агента, так и полимера. Смесь растворителя, содержащая растворенные агент и полимер, диспергируется в водном растворе, образуя капельки. Получившуюся эмульсию затем добавляют к водной экстракционной среде, предпочтительно содержащей, как минимум, один из растворителей смеси, посредством чего контролируется скорость экстракции каждого растворителя, после чего образуются биоразлагаемые микросферы, содержащие фармацевтически активный агент.Преимуществом этого способа является то, что требуется меньше экстракционной среды, потому что растворимость одного растворителя в воде в основном не зависит от другого и выбор растворителя возрастает, особенно для растворителей, которые особенно трудноизвлекаемые.

Наночастицы также предусматриваются для использования с предложенными в настоящем описании антиапоптотическим агентом или проапоптотическими агентами. Наночастицы - это структуры материала размером приблизительно 100 нм или меньше. Одно использование наночастиц в фармацевтических композициях - формирование суспензий, поскольку взаимодействие поверхности частиц с растворителем достаточно прочное для преодоления разницы плотности. Суспензии наночастиц стерилизуются, поскольку наночастицы слишком маленькие для стерилизации фильтрованием (см., например, патент США №6139870, включенный в данный документ путем ссылки для такого раскрытия). Наночастицы включают, как минимум, один гидрофобный, нерастворимый в воде и недиспергируемый в воде полимер или сополимер, эмульгированный в растворе или водной дисперсии поверхностно-активных веществ, фосфолипида или жирных кислот. Антиапоптотический агент или проапоптотический агент факультативно вводится с полимером или сополимером в наночастицы.

Липидные нанокапсулы в качестве структур с контролируемым высвобождением, а также для проникания через мембрану окна улитки и достижения внутреннее ухо и/или среднее ухо мишеней также рассматриваются в настоящем изобретении. Липидные нанокапсулы факультативно формируются эмульгированием каприновокислотных и каприловокислотных триглицеридов (Labrafac WL 1349; avg. mw 512), соевого лецитина (LIPOID® S75-3; 69% фосфатидилхолин и другие фосфолипиды), поверхностно-активного вещества (например, Solutol HS15), смеси полиэтиленгликоля 660 гидроксистеарата и свободного полиэтиленгликоля 660; NaCl и воды. Смесь перемешивается при комнатной температуре до получения масляной эмульсии в воде. После постепенного нагрева со скоростью 4°C/мин при магнитном перемешивании короткий интервал прозрачности должен возникать около 70°C, а обращенная фаза (водные капельки в масле) получаться при 85°C. Затем применяются три цикла охлаждения и нагревания при температуре между 85°C и 60°C со скоростью 4°C/мин и быстрое разбавление холодной водой при температуре около 0°C, чтобы получить суспензию нанокапсул. Для инкапсуляции антиапоптотического агента или проапоптотических агентов, агент факультативно добавляется непосредственно перед разбавлением холодной водой.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения антиапоптотический агент или проапоптотические агенты вставляются в липидные нанокапсулы путем инкубации в течение 90 минут с водным мицеллярным раствором ушного активного агента. Суспензию после этого взбалтывают через каждые 15 минут, а затем быстро охлаждают в ванне со льдом в течение 1 минуты.

Пригодные auris-приемлемые поверхностно-активные вещества, в качестве примера, соли холевой кислоты или таурохолевой кислоты. Таурохолевая кислота, образованный из холевой кислоты и таурина конъюгат, является полностью преобразующимся в ходе обмена поверхностно-активным веществом сульфокислоты. Аналог таурохолевой кислоты тауроурсодезоксихолевая кислота (TUDCA) является природной желчной кислотой и конъюгатом таурина и урсодезоксихолевой кислоты (UDCA). Для приготовления наночастиц факультативно используются другие природные анионные (например, галактоцереброзид сульфат), нейтральные (например, лактозилцерамид) или цвиттер-ионные поверхностно-активные вещества (например, сфингомиэлин, фосфатидил холин, пальмитоил карнитин).

Auris-приемлемые фосфолипиды отбираются, в качестве примера, из природных, синтетических или полусинтетических фосфолипидов; в частности используются лецитины (фосфатидилхолин), как например, очищенные яичные или соевые лецитины (лецитин Е100, лецитин Е80 и фосфолипоны, например фосфолипон 90), фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерол, дипальмитоилфосфатидилхолин, дипальмитоилглицерофосфатидилхолин, димиристоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин и фосфатидная кислота или их смеси.

Жирные кислоты для использования с auris-приемлемыми композициями выбирают из, в качестве примера, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, стеариновой кислоты, изостеариновой кислоты, арахидиновой кислоты, бегеновой кислоты, олеиновой кислоты, тетрадеценовой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, линолевой кислоты, альфа-линолевой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, эруковой кислоты, докозагексаеновой кислоты, и т.п..

Пригодные auris-приемлемые поверхностно-активные вещества выбирают из известных органических и неорганических фармацевтических наполнителей. Такие наполнители включают различные полимеры, низкомолекулярные олигомеры, природные продукты и поверхностно-активные вещества. Предпочтительные поверхностные модификаторы включают неионные и ионные поверхностно-активные вещества. Два или больше поверхностных модификатора используются в комбинации.

Типичные примеры auris-приемлемых поверхностно-активных веществ включают цетилпиридиний хлорид, желатин, казеин, лецитин (фосфатиды), декстран, глицерин, аравийская камедь, холестерин, трагакант, стеариновая кислота, кальций стеарат, глицеролмоностеарат, цетостеариловый спирт, цетомакрогол эмульгирующий воск, сорбитан сложные эфиры, полиоксиэтиленалкил эфиры, производные полиоксиэтилен касторового масла, полиоксиэтилен сорбитан сложные эфиры жирной кислоты; додецил триметил аммоний бромид, полиоксиэтиленстеараты, коллоидный диоксид кремния, фосфаты, натрий додецилсульфат, карбоксиметилцеллюлоза кальций, гидроксипропилцеллюлоза (НРС, HPC-SL и HPC-L), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), карбоксиметилцеллюлоза натрий, метилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза фталат, некристаллическая целлюлоза, алюмосиликат магния, триэтаноламин, поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон (PVP), 4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)-фенол полимер с этиленоксидом и формальдегидом (также известный как тилоксапол, суперион и тритон), полоксамеры, полоксамины, заряженный фосфолипид, как например, димиристоил фосфатидил глицерин, диоктилсульфосукцинат (DOSS); Tetronic® 1508, диалкилэфиры натрий сульфоянтарной кислоты, Duponol P, Tritons X-200, Crodestas F-110, р-изононилфеноксиполи-(глицидол), Crodestas SL-40 (Croda, Inc); и SA90HCO, который является C₁₈H₃₇CH₂ (CON(СН₃)-СН₂ (СНОН)₄ (СН₂ ОН)₂ (Eastman Kodak Co.); деканоил-N-метилглюкамид; n-децил β-D-глюкопиранозид; n-децил β-D-мальтопиранозид; n-додецил β-D- глгокопиранозид; n-додецил β-D-мальтозид; гептаноил-N-метилглюкамид; n-гептил-β-D-глюкопиранозид; n-гептил β-D-тиоглюкозид; n-гексил β-D-глюкопиранозид; нонатоил-N-метилглюкамид; n-ноил β-D-глюкопиранозид; октаноил-N-метилглюкамид; n-октил-β-D-глюкопиранозид; октил β-D-тиоглюкопиранозид; и т.п.. Большая часть этих поверхностно-активных веществ - известные фармацевтические наполнители, которые подробно описаны в Справочнике фармацевтических наполнителей, изданный совместно Американской Фармацевтической Ассоциацией и Фармацевтическим Обществом Великобритании (The Pharmaceutical Press, 1986), специально включенный в данный документ путем ссылки для такого раскрытия.

Гидрофобный, нерастворимый в воде и недиспергируемый в воде полимер или сополимер можно выбирать из биосовместимых и биоразлагаемых полимеров, например, полимеры молочной или гликолевой кислоты и их сополимеры или сополимеры полимолочной кислоты/полиэтилен (или полипропилен) оксид сополимеры, предпочтительно с молекулярным весом от 1000 до 200 000, полимеры полигидроксимасляной кислоты, полилактоны жирных кислот, содержащие, как минимум, 12 атомов углерода, или полиангидриды.

Наночастицы можно получать коацервацией или с помощью технологии испарения растворителя из водной дисперсии или раствора фосфолипидов и соли олеиновой кислоты, куда добавляется несмешивающаяся органическая фаза, включающая активный компонент и гидрофобный, нерастворимый в воде и недиспергируемый в воде полимер или сополимер. Смесь предварительно эмульгируется, а затем подвергается гомогенизации и испарению органического растворителя для получения водной суспензии наночастиц очень маленького размера.

Для изготовления модулирующих апоптоз наночастиц, в рамках примеров осуществления настоящего изобретения, по выбору используются различные способы. К ним относятся способы испарения, как например, свободное расширение струи, лазерное испарение, электроэрозия, электровзрывное осаждение и химическое осаждение из паровой фазы; физические способы, включающие механическое истирание (например, технология «дробления гранул-pearlmilling», Elan Nanosystems), сверхкритическое CO₂ и межфазное осаждение после вытеснения растворителя. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения используется способ вытеснения растворителя. На размер наночастиц, получаемых с помощью такого способа, влияет концентрация полимера в органическом растворителе; скорость перемешивания; и применяемое в данном процессе поверхностно-активное вещество. Мешалки непрерывного потока создают необходимую турбулентность для обеспечения небольшого размера частиц. Имеется описание одного типа смесителя непрерывного потока, который используется факультативно для получения наночастиц (Hansen et al J Phys Chem 92, 2189-96, 1988). В других примерах осуществления настоящего изобретения для получения наночастиц могут использоваться сверхзвуковые устройства, проточные гомогенизаторы или устройства сверхкритического CO₂.

Если соответствующую однородность наночастиц не удается добиться прямым синтезом, то для получения в высокой степени однородных содержащих лекарство частиц, из которых удалены другие компоненты, задействованные в их изготовлении, применяется эксклюзионная хроматография размеров. Технологии эксклюзионной хроматографии размеров (SEC), как например, гель-хроматография, используются для отделения связанного с частицами антиапоптотического агента или проапоптотического агента или другого фармацевтического соединения от свободного антиапоптотического агента или проапоптотического агента или другого фармацевтического соединения или для выбора подходящего диапазона размеров апоптоз модулирующих-содержащих наночастицы. В продаже имеются различные среды для эксклюзионной хроматографии размеров, как например, Superdex 200, Superose 6, Sephacryl 1000, которые используются для фракционирования по размеру таких смесей. Кроме того, наночастицы факультативно очищаются центрифугированием, мембранной фильтрацией и при помощи других устройств с молекулярными ситами, сшитых гелей/материалов и мембран.

Приемлемые для уха циклодекстриновые и другие стабилизирующие композиции

В конкретном примере осуществления настоящего изобретения auris-приемлемые композиции альтернативно включают циклодекстрин. Циклодекстрины - это циклические олигосахариды, содержащие 6, 7 или 8 глюкопиранозных единиц, называемых α-циклодекстрин, β- циклодекстрин или γ-циклодекстрин соответственно. У циклодекстринов есть гидрофильная внешняя часть, которая повышает водорастворимость, и гидрофобную внутреннюю часть, которая образует полость. В водной среде гидрофобные участки других молекул часто проникают в гидрофобную полость циклодекстрина, образуя соединения включения. Кроме того, циклодекстрины также способны к другим типам несвязывающих взаимодействий с молекулами, которые не находятся в гидрофобной полости. Циклодекстрины имеют три свободных гидроксильных группы для каждой глюкопиранозной единицы или 18 гидроксильных групп на α-циклордекстрине, 21 гидроксильную группу на β-циклодекстрине и 24 гидроксильных группы на γ-циклодекстрине. Одна или несколько таких гидроксильных групп может вступать в реакцию с любым из множества реагентов с образованием различных производных циклодекстрина, включая гидроксипропил эфиры, сульфонаты и сульфоалкилэфиры. Ниже показана структура β-циклодекстрина и гидроксипропил-β-циклодекстрина (HPβCD).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения использование циклодекстринов в приведенных в описании фармацевтических композициях повышает растворимость лекарственного препарата. Соединения включения участвуют в многих случаях повышенной растворимости; однако другие взаимодействия между циклодекстринами и нерастворимыми композициями также повышают растворимость. Гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPβCD) коммерчески доступен в виде продукта без пирогена. Это негигроскопичный белый порошок, который легко растворяется в воде. HPβCD термоустойчив и не разлагается при нейтральном рН. Таким образом, циклодекстрины повышают растворимость терапевтического агента в композиции или композиции. Соответственно, в некоторых примерах осуществления настоящего изобретения циклодекстрины включены для увеличения растворимости auris-приемлемого антиапоптотического агента или проапоптотических агентов в приведенных в описании композициях. В других примерах осуществления настоящего изобретения циклодекстрины, кроме того, выполняют функцию наполнителей с контролируемым высвобождением в приведенных в описании композициях.

Только в качестве примера, производные циклодекстрина для использования включают α-циклодекстрин, β-циклодекстрин, γ-циклодекстрин, гидроксиэтил-β-циклодекстрин, гидроксипропил γ-циклодекстрин, сульфатированный β-циклодекстрин, сульфатированный α-циклодекстрин, сульфобутил эфирный β-циклодекстрин.

Концентрация циклодекстрина, используемого в предложенных в настоящем описании композициях и способах, изменяется в соответствии с физико-химическими свойствами, фармакокинетическими свойствами, побочным эффектом или неблагоприятными событиями, расчетами композиций или другими факторами, связанным с терапевтически активным агентом или его солью или пролекарством, или со свойствами других наполнителей в композиции. Таким образом, в определенных условиях концентрация или количество циклодекстрина, используемого в соответствии с предложенными в настоящем описании композициями и способами, будут изменяться в зависимости от потребности. При использовании количество циклодекстринов, необходимых для повышения растворимости антиапоптотического агента или проапоптотического агента, и/или функция в качестве наполнителя с контролируемым высвобождением в любой из приведенных в описании композиций выбирается с использованием принципов, примеров и идей, приведенных в описании.

Другие стабилизаторы, применимые в auris-приемлемых композициях, предложенных в настоящем описании, включают, например, жирные кислоты, спирты жирного ряда, спирты, длинноцепочечные сложные эфиры жирной кислоты, длинноцепочечные эфиры, гидрофильные производные жирных кислот, поливинилпирролидоны, поливинилэфиры, поливиниловые спирты, углеводороды, гидрофобные полимеры, влагопоглощающие полимеры или их комбинации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения также используются амидные аналоги стабилизаторов. В других примерах осуществления настоящего изобретения выбранный стабилизатор изменяет гидрофобность композиции (например, олеиновая кислота, воск) или улучшает смешивание различных компонентов в композиции (например, этанол), регулирует уровень влажности в формуле (например, PVP или поливинилпирролидон), регулирует текучесть фазы (вещества с температурой плавления выше комнатной температуры, как например, длинноцепочечные жирные кислоты, спирты, сложные эфиры, эфиры, амиды и т.д. или их смеси; воски), и/или улучшает совместимость формулы с инкапсулирующими материалами (например, олеиновая кислота или воск). В другом примере осуществления настоящего изобретения некоторые из этих стабилизаторов используются в качестве растворителей/сорастворителей (например, этанол). В других примерах осуществления настоящего изобретения стабилизаторы присутствуют в достаточном количестве, чтобы ингибировать разложение антиапоптотического агента или проапоптотического агента. Примеры таких стабилизаторов включают, но не ограничиваются этим: (а) от приблизительно 0,5% до приблизительно 2% вес/объем глицерина, (b) от приблизительно 0,1% до приблизительно 1% вес/объем метионина, (с) от приблизительно 0,1% до приблизительно 2% вес/объем монотиоглицерина, (d) от приблизительно 1 мМ до приблизительно 10 мМ EDTA, (е) от приблизительно 0,01% до приблизительно 2% вес/объем аскорбиновой кислоты, (f) от 0,003% до приблизительно 0,02% вес/объем полисорбата 80, (g) от 0,001% до приблизительно 0,05% вес/объем полисорбата 20, (h) аргинин, (i) гепарин, (j) декстран сульфат, (k) циклодекстрины, (1) пентозан полисульфат и другие гепариноиды, (m) двухвалентные катионы, как например, магний и цинк; или (n) их комбинации.

Дополнительные применимые auris-приемлемые композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом содержат одну или несколько антиагрегационных добавок для увеличения устойчивости композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом путем снижения скорости агрегации белков. Выбранная антиагрегационная добавка зависит от характера условий, которые действуют на антиапоптотический агент или проапоптотические агенты, например, антитела антиапоптотического агента или проапоптотического агента. Например, для некоторых композиций, подвергающихся напряжению при перемешивании и тепловому напряжению, требуется другая антиагрегационная добавка, чем для композиции, подвергающейся лиофилизации и реконструкции. Применимые антиагрегационные добавки включают, только в качестве примера, мочевину, гуанидиний хлорид, простые аминокислоты, как например, глицин или аргинин, сахара, полиспирты, полисорбаты, полимеры, как например, полиэтиленгликоль и декстраны, алкил сахариды, как например, алкилгликозид и поверхностно-активные вещества.

Другие применимые композиции факультативно содержат один или несколько auris-приемлемых антиоксидантов для увеличения химической стойкости, при необходимости. Пригодные антиоксиданты включают, только в качестве примера, аскорбиновую кислоту, метионин, натрий тиосульфат и натрий метабисульфит.В одном из примеров осуществления настоящего изобретения антиоксиданты отобраны из метал хелирующих агентов, содержащие тиол соединения и другие общие стабилизирующие агенты.

Другие применимые композиции включают одно или несколько auris-приемлемых поверхностно-активных веществ для увеличения физической стойкости или в других целях. Пригодные неионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются этим, полиоксиэтиленовые глицериды жирной кислоты и растительные масла, например, полиоксиэтиленовое (60) гидрированное касторовое масло; и полиоксиэтиленовые алкилэфиры и акилфенил эфиры, например, октоксинол 10, октоксинол 40.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании auris-приемлемые фармацевтические композиции для лечения уха устойчивы относительно разложения соединения в течение любого периода времени из: как минимум, приблизительно 1 дня, как минимум, приблизительно 2 дней, как минимум, приблизительно 3 дней, как минимум, приблизительно 4 дней, как минимум, приблизительно 5 дней, как минимум, приблизительно 6 дней, как минимум, приблизительно 1 недели, как минимум, приблизительно 2 недель, как минимум, приблизительно 3 недель, как минимум, приблизительно 4 недель, как минимум, приблизительно 5 недель, как минимум, приблизительно 6 недель, как минимум, приблизительно 7 недель, как минимум, приблизительно 8 недель, как минимум, приблизительно 3 месяцев, как минимум, приблизительно 4 месяцев, как минимум, приблизительно 5 месяцев или как минимум, приблизительно 6 месяцев. В других примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции устойчивы относительно разложения соединения в течение, как минимум, приблизительно 1 недели. Кроме того, в настоящем описании описаны композиции, устойчивые относительно разложения соединения в течение, как минимум, приблизительно 1 месяца.

В других примерах осуществления настоящего изобретения дополнительное поверхностно-активное вещество (вспомогательное поверхностно-активное вещество) и/или буферный агент соединяются с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми основами, описанными выше, таким образом, чтобы поверхностно-активное вещество и/или буферный агент удерживал продукт при оптимальном рН для устойчивости. Пригодные вспомогательные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются этим: а) природные и синтетические липофильные агенты, например, фосфолипиды, холестерин, холестериновые сложные эфиры жирной кислоты и их производные; b) неионные поверхностно-активные вещества, которые включают, например, полиоксиэтиленовые сложные эфиры жирного спирта, сорбитановые сложные эфиры жирной кислоты (Spans), полиоксиэтиленовые сорбитановые сложные эфиры жирной кислоты (например, полиоксиэтиленовый (20) сорбитановый моноолеат (Tween 80), полиоксиэтиленовый (20) сорбитановый моностеарат (Tween 60), полиоксиэтиленовый (20) сорбитановый монолаурат (Tween 60) и другие твины, сорбитановые сложные эфиры, глицериновые сложные эфиры, например, Myrj и глицериновый триацетат (триацетин), полиэтиленгликоли, цетиловый спирт, цетостеариловый спирт, стеариловый спирт, полисорбат 80, полоксамеры, полоксамины, производные полиоксиэтиленового касторового масла (например, Cremophor® RH40, Cremphor A25, Cremphor А20, Cremophor® EL) и другие кремофоры, сульфосукцинаты, алкил сульфаты (SLS); PEG глицериловые сложные эфиры жирной кислоты, как например, PEG-8 глицериловый каприлат/капрат (Labrasol), PEG-4 глицериловый каприлат/капрат (Labrafac Hydro WE 1219), PEG-32 глицериловый лаурат (Gelucire 444/14), PEG-6 глицериловый моноолеат ((Labrafil M 1944 CS), PEG-6 глицериловый линолеат (Labrafil M 2125 CS); пропиленгликоль сложные моноэфиры и сложные диэфиры жирной кислоты, как например, пропиленгликоль лаурат, пропиленгликоль каприлат/капрат; Brij® 700, аекорбил-6-пальмитат, стеариламин, лаурилсульфат натрия, полиоксиэтиленглицерин триирицинолеат и их любые комбинации или смеси; с) анионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются этим, кальций карбоксиметилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, натрий сульфосукцинат, диоктил, альгинат натрия, алкил полиоксиэтилен сульфаты, лаурилсульфат натрия, стеарат триэтаноламина, калий лаурат, желчные соли и их любые комбинации или смеси; и d) катионные поверхностно-активные вещества, как например, бромид цетилтриметиламмония и лаурилдиметилбензил-аммоний хлорид.

В другом примере осуществления настоящего изобретения, когда в auris-приемлемых композициях в соответствии с настоящим изобретением используется одно или несколько вспомогательных поверхностно-активных веществ, они соединяются, например, с фармацевтически приемлемой основой и присутствуют в конечной композиции, например, в количестве от приблизительно 0,1% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 10%.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения показатель HLB [гидрофильно-липофильный баланс] поверхностно-активного вещества составляет от 0 до 20. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения показатель HLB поверхностно-активного вещества составляет 0-3; 4-6; 7-9; 8-18; 13-15; 10-18.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения для стабилизации антиапоптотического агент или проапоптотического агента или других фармацевтическихе соединений также используются разбавители, потому что они обеспечивают более устойчивую среду. В качестве растворителей используются соли, растворенные в буферных растворах (которые также могут обеспечить контроль или поддержание рН), включающие, но не ограничивающиеся этим, фосфатно-солевой буферный раствор. В других примерах осуществления настоящего изобретения гель-композиция является изотонической относительно эндолимфы или перилимфы: в зависимости от того участка улитки, на который направлена композиция с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом. Изотонические композиции получают добавлением агента тоничности. Пригодные агенты тоничности включают, но не ограничиваются этим, любой фармацевтически приемлемый сахар, соль или их любые комбинации или смеси, как например, но не только, декстроза и натрий хлорид. В других примерах осуществления настоящего изобретения агенты тоничности присутствуют в количестве от приблизительно 100 мосмоль/кг до приблизительно 500 мосмоль/кг. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения агент тоничности присутствует в количестве от приблизительно 200 мосмоль/кг до приблизительно 400 мосмоль/кг, от приблизительно 280 мосмоль/кг до приблизительно 320 мосмоль/кг. Количество агентов тоничности будет зависеть от структуры-мишени фармацевтической композиции в соответствии с настоящим описанием.

Композиции с соответствующей тоничностью также включают одну или несколько солей в количестве, необходимом, чтобы довести осмоляльность композиции до значений в приемлемом диапазоне для перилимфы или эндолимфы. Такие соли включают соли, содержащие натрий, калий или аммоний катионы и хлорид, цитрат, аскорбат, борат, фосфат, бикарбонат, сульфат, тиосульфат или бисульфит анионы; пригодные соли включают натрий хлорид, калий хлорид, натрий тиосульфат, натрий бисульфит и аммоний сульфат.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения awis-приемлемые гель-композиции, предложенные в настоящем описании, альтернативно или дополнительно содержат консерванты, не допускающие микробного роста. Пригодные auris-приемлемые консерванты для использования в приведенных в описании композициях с повышенной вязкостью включают, но не ограничиваются этим, бензойную кислоту, борную кислоту, р-гидроксибензоаты, спирты, четвертичные соединения, устойчивый диоксид хлора, содержащие ртуть препараты, как например, мерфен и тиомерсал, смеси изложенного выше и т.п..

В еще одном примере осуществления настоящего изобретения консервантом является, только в качестве примера, противомикробный агент, в auris-приемлемых представленных в настоящем описании композициях. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения композиция включает такой консервант как, только в качетве примера, метилпарабен, натрий бисульфит, натрий тиосульфат, аскорбат, хлорбутанол, тимерозал, парабены, бензиловый спирт, фенилэтанол и другие. В другом примере осуществления настоящего изобретения метилпарабен находится в концентрации от приблизительно 0,05% до приблизительно 1,0%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 0,2%. В другом примере осуществления настоящего изобретения гель получают путем смешивания воды, метилпарабена, гидроксиэтилцеллюлозы и натрий цитрата. В следующем примере осуществления настоящего изобретения гель получают путем смешивания воды, метилпарабена, гидроксиэтилцеллюлозы и ацетата натрия. В другом примере осуществления настоящего изобретения смесь стерилизуют в автоклаве при 120°C в течение приблизительно 20 минут и проверяют на рН, концентрацию метилпарабена и вязкость перед смешиванием с адекватным количеством антиапоптотического агента или проапоптотического агента, предложенных в настоящем описании.

Пригодные auris-приемлемые растворимые в воде консерванты, которые используются в основе для доставки лекарства, включают натрий бисульфит, натрий тиосульфат, аскорбат, хлорбутанол, тимерозал, парабены, бензиловый спирт, бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), фенилэтанол и другие. Эти агенты присутствуют, как правило, в количестве от приблизительно 0,001% до приблизительно 5% по весу и, предпочтительно, в количестве от приблизительно 0,01 до приблизительно 2% по весу. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-совместимые приведенные в данном описании композиции не содержат консервантов.

Усилитель проникновения через мембрану окна улитки

В другом примере осуществления настоящего изобретения композиция, кроме того, включает один или несколько усилителей проникновения через мембрану окна улитки. Проникновение через мембрану окна улитки повышается в присутствии усилителей проникновения через мембрану окна улитки. Усилители проникновения через мембрану окна улитки представляют собой химические соединения, которые облегчают транспорт вводимых совместно веществ через мембрану окна улитки. Усилители проникновения через мембрану окна улитки группируются по химической структуре. Поверхностно-активные вещества, как ионные, так и неионные, например, лаурилсульфат натрия, натрий лаурат, полиоксиэтилен-20-цетил эфир, лаурет-9, натрий додецилсульфат, диоктил натрий сульфосукцинат, полиоксиэтилен-9-лаурил эфир (PLE), Tween® 80, нонилфеноксиполиэтилен (ТМР-РОЕ), полисорбаты и т.п., действуют как усилители проникновения через мембрану окна улитки. Желчные соли (такие как натрий гликохолат, натрий деоксихолат, натрий таурохолат, натрий тауродигидрофусидат, натрий гликодигидрофусидат и т.п.), жирные кислоты и производные (например, олеиновая кислота, каприловая кислота, моно- и ди-глицериды, лауриновые кислоты, ацилхолины, каприловые кислоты, ацилкарнитины, натрий капраты и т.п.), хелирующие агенты (например, EDTA, лимонная кислота, салицилаты и т.п.), сульфоксиды (например, диметил сульфоксид (DMSO), децилметил сульфоксид и т.п.), а также спирты (например, этанол, изопропанол, глицерин, пропандиол и т.п.) также действуют как усилители проникновения через мембрану окна улитки.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемый усилитель проникновения - это поверхностно-активное вещество, включающее алкил гликозид, где алкил гликозид представляет собой тетрадецил-β-D-мальтозид. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемый усилитель проникновения - это поверхностно-активное вещество, включающее алкил гликозид, где алкил гликозид представляет собой додецил-мальтозид. В некоторых случаях усилитель проникновения представляет собой гиалуронидазу. В некоторых случаях гиалуронидаза является человеческой или бычьей гиалуронидазой. В некоторых случаях гиалуронидаза является человеческой гиалуронидазой (например, гиалуронидаза, обнаруженная в человеческой сперме, РН20 (Halozyme), Hyelenex® (Baxter International, Inc)). В некоторых случаях гиалуронидаза является бычьей гиалуронидазой (например, бычья тестикулярная гиалуронидаза, Amphadase® (Amphastar Pharmaceuticals), Hydase® (PrimaPharm, Inc). В некоторых случаях гиалуронидаза является овечьей гиалуронидазой, Vitrase® (ISTA Pharmaceuticals). В некоторых случаях описанная в настоящем описании гиалуронидаза является рекомбинантной гиалуронидазой. В некоторых случаях описанная в настоящем описании гиалуронидаза является гуманизированной рекомбинантной гиалуронидазой. В некоторых случаях описанная в настоящем описании гиалуронидаза является пегилированной гиалуронидазой (например, PEGPH20 (Halozyme)). Кроме того, в качестве дополнительного примера осуществления настоящего изобретения рассматриваются пептидоподобные усилители проникновения, описанные в патентах США №№7151191, 6221367 и 5714167, включенные в данный документ путем ссылок для такого раскрытия. Эти усилители проникновения представляют собой производные аминокислоты и пептида и обеспечивают поглощение лекарственного препарата посредством пассивной трансцеллюлярной диффузии без нарушения целостности мембран или межклеточных непроницаемых перегородок.

Липосомы, проникающие через мембрану окна улитки

Для инкапсуляции композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом или композиций можно также использовать липосомы или липидные частицы. Фосфолипиды, которые мягко диспергированы в водной среде, образуют многослойные пузырьки с зонами захваченной водной среды, разделяющие липидные слои. Обработка ультразвуком или турбулентное перемешивание этих многослойных пузырьков приводит к формированию однослойных пузырьков, обычно называемых липосомами, размером приблизительно 10-1000 нм. Такие липосомы обладают многими преимуществами как антиапоптотический агент или проапоптотические агенты или другие носители фармацевтического агента. Они биологически инертные, биоразлагаемые, нетоксичные и неантигенные. Липосомы формируются разных размеров и с переменными составами и поверхностными свойствами. Кроме того, они могут захватывать большое число агентов и высвобождать агент на месте разрушения липосомы.

Пригодные фосфолипиды для использования в auris-приемлемых липосомах - это, например, фосфатидил холины, этаноламин и серины, сфингомиелины, кардиолипины, плазмалогены, фосфатидные кислоты и цереброзиды, в частности растворимые вместе с антиапоптотическим агентом или проапоптотическими агентами в соответствии с настоящим описанием в нетоксичных, фармацевтически приемлемых органических растворителях. Предпочтительными фосфолипидами являются, например, фосфатидил холин, фосфатидил этаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидил инозитол, лизофосфатидил холин, фосфатидил глицерин и т.п., и их смеси, в частности, лецитин, например, соевый лецитин. Количество фосфолипида, используемого в настоящей композиции, варьируется от приблизительно 10 до приблизительно 30%, предпочтительно от приблизительно 15 до приблизительно 25% и в частности составляет приблизительно 20%.

Для селективной модификации характеристик липосом с успехом могут использваться липофильные добавки. Примеры таких добавок включают, только в качестве примера, стеариламин, фосфатидную кислоту, токоферол, холестерин, холестерин гемисукцинат и ланолиновые экстракты. Количество используемой липофильной добавки варьируется от 0,5 до 8%, предпочтительно от 1,5 до 4% и в частности составляет приблизительно 2%, Как правило, соотношение количества липофильной добавки к количеству фосфолипида варьируется от приблизительно 1:8 до приблизительно 1:12 и в частности составляет приблизительно 1:10. Вышеупомянутые фосфолипид, липофильная добавка и антиапоптотический агент или проапоптотический агент и другие фармацевтические соединения используются в сочетании с системой нетоксичных, фармацевтически приемлемых органических растворителей, которая растворяет вышеупомянутые компоненты. Вышеупомянутая система растворителей не только должна полностью растворить антиапоптотический агент или проапоптотический агент, но она также должна обеспечить композицию устойчивых одиночных бислойных липосом. Система растворителей включает диметилизосорбид и тетрагликоль (полиэтиленгликолевый эфир тетрагидрофурфурилового спирта) в количестве от приблизительно 8 до приблизительно 30%. В вышеупомянутой системе растворителей соотношение количества диметилизосорбида к количеству тетрагликоля варьируется от приблизительно 2:1 до приблизительно 1:3, в частности от приблизительно 1:1 до приблизительно 1:2,5 и предпочтительно составляет 1:2. Количество тетрагликоля в конечной композиции варьируется от 5 до 20%, в частности от 5 до 15% и предпочтительно составляет приблизительно 10%. Количество диметилизосорбида в конечной композиции, таким образом, колеблется от 3 до 10%, в частности от 3 до 7% и предпочтительно составляет приблизительно 5%.

Термин «органический компонент» в соответствии с использованием в дальнейшем в этом документе относится к смесям, включающим вышеупомянутые фосфолипид, липофильные добавки и органические растворители. Антиапоптотический агент или проапоптотический агент можно растворять в органическом компоненте или других средствах для сохранения полной активности агента. Количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента в конечной композиции может колебаться от 0,1 до 5,0%. Кроме того, к органическому компоненту можно добавлять другие компоненты, например, антиоксиданты. Примеры включают токоферол, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, аскорбилпальмитат, аскорбилолеат и т.п.

Липосомальные композиции альтернативно получают для антиапоптотического агента или проапоптотических агентов или других фармацевтических агентов, умеренно термостойких, с помощью следующей процедуры: (а) нагреть фосфолипид и систему органических растворителей приблизительно до 60-80°C в сосуде, растворить активный компонент, затем добавить любые дополнительные рецептурные составляющие агенты и перемешать смесь до полного растворения; (b) нагреть водный раствор до 90-95°C во втором сосуде и растворить в нем консерванты, дать смеси охладиться, а затем добавить оставшиеся вспомогательные рецептурные составляющие агенты и оставшуюся воду и перемешать смесь до полного растворения; таким образом, получается водный компонент; (с) перенести органическую фазу непосредственно в водный компонент, одновременно гомогенизируя смесь с помощью высокопроизводительного смесителя, например, мешалки с большими сдвиговыми усилиями; и (d) добавить усиливающий вязкость агент в полученную смесь, и дальше обеспечивая гомогенизацию. Водный компонент факультативно помещается в соответствующий сосуд, снабженный гомогенизатором, и гомогенизация обеспечивается за счет создания турбулентности во время введения органического компонента. Использовать можно любое средство перемешивания или гомогенизатор, воздействующие на смесь большими сдвиговыми усилиями. В общем, можно использовать смеситель, который обеспечивает скорость от приблизительно 1500-20000 оборотов в минуту, в частности, от приблизительно 3000 до приблизительно 6000 оборотов в минуту. В качестве пригодных усиливающих вязкость агентов на стадии (d) можно использовать, например, ксантановую камедь, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу или их смеси. Количество усиливающего вязкость агента зависит от свойств и концентрации других компонентов и, как правило, варьируется от приблизительно 0,5 до 2,0% или приблизительно 1,5%. Чтобы предотвратить разложение используемых при приготовлении липосомальной композиции материалов, предпочтительно продуть все растворы инертным газом, например, азотом или аргоном, и выполнить все стадии в инертной атмосфере. Полученные вышеописанным способом липосомы обычно содержат большую часть активного компонента, входящего в липидный бислой, и выделять липосомы из неинкапсулированного материала не требуется.

В других примерах осуществления настоящего изобретения auris-приемлемые композиции, включающие гель-композиции и композиции с повышенной вязкостью, кроме того, включают наполнители, другие лекарственные или фармацевтические агенты, носители, адъюванты, например, консервирующие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, ускорители растворения, соли, солюбилизаторы, противопенный агент, антиоксидант, диспергирующий агент, смачивающий агент, поверхностно-активное вещество или их комбинации.

Пригодные носители для использования в описанной в настоящем описании auris-приемлемой композиции включают, но не ограничиваются этим, любой фармацевтически приемлемый растворитель, совместимый с физиологической средой ушной структуры-мишени. В других примерах осуществления настоящего изобретения основа является комбинацией фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества и растворителя.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения другие наполнители включают натрий стеарил фумарат, диэтаноламин цетил сульфат, изостеарат, полиэтоксилированное касторовое масло, ноноксил 10, октокситол 9, лаурилсульфат натрия, сорбитан сложные эфиры (сорбитанмонолаурат, сорбитан моноолеат, сорбитан монопальмитат, сорбитан моностеарат, сорбитансесквиолеат, сорбитан триолеат, сорбитан тристеарат, сорбитан лаурат, сорбитан олеат, сорбитан пальмитат, сорбитан стеарат, сорбитан диолеат, сорбитансескви-изостеарат, сорбитансесквистеарат, сорбитан три-изостеарат), их лецитиновые фармацевтически приемлемые соли или комбинации или смеси.

В других примерах осуществления настоящего изобретения в качестве носителя выступает полисорбат. Полисорбаты - это неионные поверхностно-активные вещества сорбитан сложных эфиров, Полисорбаты, применимые в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80 (Tween 80) и их любые комбинации или смеси. В других примерах осуществления настоящего изобретения в качестве фармацевтически приемлемого носителя используется полисорбат 80.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения водорастворимые, основанные на глицерине auris-приемлемые композиции с повышенной вязкостью, используемые при приготовлении фармацевтических основ для доставки лекарства, включают, как минимум, один антиапоптотический агент или проапоптотический агент, содержащий, как минимум, приблизительно 0,1% водорастворимого глицеринового соединения или больше. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения процентное содержание антиапоптотического агента или проапоптотического агента варьируется от приблизительно 1% до приблизительно 95%, от приблизительно 5% до приблизительно 80%, от приблизительно 10% до приблизительно 60% или более по весу или объему всей фармацевтической композиции. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество соединения (ий) в каждом терапевтически пригодной композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом подбирается таким образом, что в любой заданной стандартной дозе соединения будет обеспечиваться надлежащая дозировка. В настоящем описании рассматриваются такие факторы, как растворимость, биопригодность, биологическое время полураспада, путь введения, срок годности продукта, а также другие фармакологические факторы.

По желанию, дополнительно к буферным агентам auris-приемлемьте фармацевтические гели также содержат сорастворители, консерванты, сорастворители, регуляторы ионной силы и осмоляльности и другие наполнители. Пригодными auris-приемлемыми водорастворимыми буферными агентами являются карбонаты щелочных или щелочноземельных металлов, фосфаты, бикарбонаты, цитраты, бораты, ацетаты, сукцинаты и т.п., например, фосфат натрия, цитрат, борат, ацетат, бикарбонат, карбонат и трометамин (TRIS). Эти агенты присутствуют в количестве, достаточном для поддержания рН системы, равным 7,4±0,2, предпочтительно 7,4. Соответственно, буферный агент составляет порядка 5% по весу всей композиции.

Сорастворители используются для повышения растворимости антиапоптотического агента или проапоптотического агента, однако, некоторые антиапоптотические или проапоптотические агенты или другие фармацевтические соединения нерастворимы. Они часто суспендируются в полимерной основе под действием пригодных суспендирующих или усиливающих вязкость агентов.

Кроме того, некоторые фармацевтические наполнители, разбавители или носители потенциально ототоксичны. Например, бензалконий хлорид, общий консервант, ототоксичен и поэтому потенциально вреден, если вводится в вестибулярные или улиточные структуры. При составлении композиции, содержащей антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением, рекомендуется исключать или сочетать подходящие наполнители, разбавители или носители для уменьшения или устранения потенциальных ототоксичных компонентов из композиции, или уменьшать количество таких наполнителей разбавителей или носителей. Факультативно содержащая антиапоптотический агент или проапоптотический агент с контролируемым высвобождением композиция включает отопротективные агенты, такие как антиоксиданты, альфа липоевая кислота, кальций, фосфомицин или хелаторы железа, с целью противодействия потенциальным ототоксичным эффектам, которые могут появиться в результате использования специфических терапевтических агентов или наполнителей, разбавителей или носителей.

Ниже приведены примеры терапевтически приемлевых ушных композиций:

Композиция	Характеристики
Хитозан глицерофосфат (CGP)	- Регулируемое разложение матрицы in vitro
	- Регулируемое высвобождение ТАСЕ ингибитора in vitro: например, -50 % лекарства высвобождается через 24 часа
	- Биоразлагаемый
	- Совместимый с доставкой лекарства во внутреннее ухо
- Пригоден для макромолекул и гидрофобных лекарств
PEG-PLGA-PEG триблочные полимеры	- Регулируемая высокая устойчивость: например, сохраняет механическую целостность > 1 месяца in vitro
	- Регулируемое быстрое высвобождение гидрофильных лекарств: например, -50 % лекарства высвобождается через 24 часа, а остальное высвобождается в течение - 5 дней
	- Регулируемое медленное высвобождение
	- гидрофильных лекарств: например, ~ 80 % высвобождается через 8 недель
	- Биоразлагаемый
- Подкожное введение раствора: например, гель образуется в течение секунд и интактен по истечении 1 месяца
РЕО-РРО-РЕО триблочные сополимеры (например, Плуроник или Полоксамеры) (например, F127)	- Регулируемая температура золь-гель-перехода: например, снижается с увеличением концентрации F127
Хитозан глицерофосфат с несущими лекарственный препарат липосомами	- CGP композиция допускает лимосомы: например, вплоть до 15 µМ/мл липосом.
	- Липосомы регулируемо сокращают время высвобождения лекарства (например, вплоть до 2 недель in vitro).
	- Увеличение диаметра липосом факультативно уменьшает кинетику высвобождения лекарства (например, размер липосом от 100 до 300 нм)
- Параметры высвобождения контролируются изменением состава липосом

Предложенные композиции альтернативно охватывают отопротективный агент дополнительно к не менее чем одному активному агенту и/или наполнителям, включающим, но не ограничивающимися этим, такие агенты, как антиоксиданты, альфа липоевая кислота, кальций, фосфомицин или хелаторы железа, с целью противодействия потенциальным ототоксичным эффектам, которые могут появиться в результате использования специфических терапевтических агентов или наполнителей, разбавителей или носителей.

Способы лечения

Технология дозировки и графики

Препараты, доставляемые к внутреннему уху, вводятся системно пероральным, внутривенным или внутримышечным способом. Однако, системное введение для патологий, ограниченных внутренним ухом, увеличивает вероятность системной токсичности и неблагоприятных побочных эффектов и создает непродуктивное распределение лекарственного препарата, что показывают высокие уровни лекарственного препарата, обнаруженные в сыворотке крови и, соответственно, более низкие уровни во внутреннем ухе.

Внутрибарабанная инъекция терапевтических агентов - это процедура впрыскивания терапевтического агента за барабанной перепонкой в среднее и/или внутреннее ухо. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции вводятся непосредственно на мембрану окна улитки путем инъекции через барабанную перепонку. В другом примере осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании auris-приемлемые композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом вводятся на мембрану окна улитки путем доступа не через барабанную перепонку к внутреннему уху. В дополнительных примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании композиция вводится на мембрану окна улитки через хирургический доступ к мембране окна улитки, включая изменение гребня окна улитки.

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения система доставки представляет собой устройство из шприца и иглы, которое может проколоть барабанную перепонку и непосредственно достигнуть мембраны окна улитки или гребня окна улитки внутреннего уха. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения игла на шприце шире, чем игла 18 калибра. В другом примере осуществления настоящего изобретения используется игла от 18 до 31 калибра. В следующем примере осуществления настоящего изобретения используется игла от 25 до 30 калибра. В зависимости от плотности или вязкости композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическими агентами или композиций размер шприца или иглы для подкожных инъекций может соответственно изменяться. В другом примере осуществления настоящего изобретения внутренний диаметр иглы можно увеличить путем уменьшения толщины стенки иглы (обычно называются тонкостенными иглами или иглами со сверхтонкими стенками), чтобы уменьшить возможность засорения иглы с сохранением адекватного калибра иглы.

В другом примере осуществления настоящего изобретения игла представляет собой иглу для подкожных инъекций, которая используется для немедленной доставки гель-композиции. Игла для подкожных инъекций может быть одноразовой иглой или съемной инъекционной иглой. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения может использоваться шприц для доставки предложенных в настоящем описании фармацевтически приемлемых композиций, содержащих антиапоптотический агент или проапоптотический агент на основе геля, снабженный насаживаемым (с фиксатором Люэра) или навинчивающимся (винтовое соединение типа Люэр) фитингом. В одном из примеров осуществления настоящего изобретения шприц представляет собой шприц для подкожных инъекций. В другом примере осуществления настоящего изобретения шприц выполнен из пластмассы или стекла. В еще одном примере осуществления настоящего изобретения шприц для подкожных инъекций - это одноразовый шприц. В следующем примере осуществления настоящего изобретения стеклянный шприц можно подвергать стерилизации. В другом примере осуществления настоящего изобретения стерилизация выполняется в автоклаве. В другом примере осуществления настоящего изобретения шприц включает цилиндрический корпус, в котором гель-композиция хранится до использования. В других примерах осуществления настоящего изобретения шприц включает цилиндрический корпус, в котором предложенные в настоящем описании фармацевтически приемлемые гель-композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом на основе геля хранятся до использования, что обеспечивает удобное смешивание с подходящим фармацевтически приемлемым буфером. В других примерах осуществления настоящего изобретения шприц может содержать другие наполнители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, разбавители или их комбинацию для стабилизации или иного устойчивого хранения антиапоптотического агента или проапоптотического агента или других фармацевтических соединений, содержащихся в нем.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения шприц включает цилиндрический корпус, разделенный на отсеки таким образом, что в каждом отсеке может храниться, как минимум, один компонент auris-приемлемой гель-композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом. В другом примере осуществления настоящего изобретения шприц, имеющий разделенный на отсеки корпус, позволяет перемешивать компоненты перед инъекцией в среднее ухо или внутреннее ухо. В других примерах осуществления настоящего изобретения система доставки включает шприцы для многократных инъекций, каждый из шприцев для многократных инъекций содержит, как минимум, один компонент гель-композиции, так что каждый компонент предварительно перемешивается перед инъекцией или перемешивается после инъекции. В другом примере осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем описании шприцы включают, как минимум, один сосуд, и, как минимум, в одном сосуде содержится антиапоптотический агент или проапоптотический агент или фармацевтически приемлемый буфер, или увеличивающий вязкость агент, например, желатинирующий агент, или их комбинация. Коммерчески доступные устройства для инъекций факультативно используются в их самой простой форме в виде готовых к использованию пластмассовых шприцев с цилиндром шприца, иглой в сборе, куда входит игла, поршень со штоком поршня и фиксирующий фланец для выполнения внутрибарабанной инъекции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения устройство доставки представляет собой аппарат, предназначенный для введения терапевтических агентов в среднее и/или внутреннее ухо. Только в качестве примера: GYRUS Medical Gmbh предлагает микроотоскопы для визуализации доставки лекарственного препарата в нишу окна улитки; Arenberg описал медицинское устройство для доставки жидкостей к структурам внутреннего уха в патентах США №5421818; 5474529; и 5476446, каждый включен в данный документ путем ссылки для такого раскрытия. В заявке на патент США №08/874,208, которая включена в данный документ путем ссылки для такого раскрытия, описан хирургический метод имплантации трубки для переноса жидкости для доставки терапевтических агентов к внутреннему уху. В заявке на патент США №2007/0167918, которая включена в данный документ путем ссылки для такого раскрытия, также приведено описание комбинированного ушного аспиратора и медицинского дозатора для отбора внутрибарабанной жидкости и лекарственного препарата.

Приведенные в данном описании композиции и методы их введения применимы к способам прямой инстилляции или перфузии камер внутреннего уха. Таким образом, приведенные в данном описании композиции применимы в хирургических процедурах, включающих, в качестве неограничивающих примеров, кохлеостомию, лабиринтотомию, мастоидэктомию, стапедэктомию, эндолимфатическую саккулотомию или т.п.

Auris-приемлемые композиции или композиции, содержащие соединение(я) с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом, описанное(ые) в настоящем описании, вводятся с целью профилактики и/или терапевтического лечения. В терапевтических целях композиции с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом вводятся пациенту, уже страдающему описанным в настоящем описании нарушением, в количестве, достаточном, чтобы вылечить или, как минимум, частично подавить симптомы болезни, нарушения или состояния. Эффективное для такого использования количество зависит от серьезности и течения болезни, нарушения или состояния, предшествующей терапии, состояния здоровья пациента и реакции на лекарственные препараты, а также от решения лечащего врача.

В случае если состояние пациента не улучшается, на усмотрение врача соединения с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом могут вводиться постоянно, в течение длительного периода времени, даже в течение всей жизни пациента, чтобы улучшить или иным образом контролировать или ограничивать симптомы болезни или состояния пациента.

Если состояние пациента действительного улучшается, на усмотрение врача соединения с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом могут вводиться непрерывно; альтернативно, доза применяемого лекарства может быть временно уменьшена или временно отменена на определенный период времени (то есть, «лекарственные каникулы»). Продолжительность лекарственных каникул может варьироваться от 2 дней до 1 года, включая, только в качестве примера, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 10 дней, 12 дней, 15 дней, 20 дней, 28 дней, 35 дней, 50 дней, 70 дней, 100 дней, 120 дней, 150 дней, 180 дней, 200 дней, 250 дней, 280 дней, 300 дней, 320 дней, 350 дней и 365 дней. Уменьшение дозы во время лекарственных каникул может составлять от 10% до 100%, включая, только в качестве примера, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% и 100%.

Как только наступает положительная динамика в состоянии пациента, при необходимости вводится поддерживающая доза антиапоптотического агента или проапоптотического агента. Впоследствии дозировка или частота введения, или и то, и другое, факультативно уменьшаются, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором сохраняется улучшение болезни, нарушения или состояния. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения пациентам требуется периодическое лечение на долгосрочной основе при рецидиве симптомов.

Количество антиапоптотического агента или проапоптотического агента, которое будет соответствовать такому количеству, изменяется в зависимости от таких факторов, как конкретное лекарственное соединение, состояние болезни и ее серьезность, в соответствии с конкретными обстоятельствами, включая, например, специфический вводимый антиапоптотический агент или проапоптотический агент, способ введения, состояние, лечение которого проводится, целенаправленное состояние, область-мишень, лечение которой проводится, и пациент или организм-носитель, лечение которого проводится. В общем, однако, применяемые для лечения взрослого человека дозы в основном находятся в диапазоне 0,02-50 мг на одно введение, предпочтительно 1-15 мг на одно введение. Требуемая доза представлена однократной дозой или в виде разделенных общих доз, которые вводятся одновременно (или за короткий промежуток времени) или через соответствующие интервалы.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения в качестве начального введения используется конкретный антиапоптотический агент или проапоптотический агент, а в качестве последующего введения другая композиция или другой антиапоптотический агент или проапоптотический агент.

Импланты экзогенных материалов

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании фармацевтические составы, композиции и устройства используются в комбинации с (например, имплантацией, кратковременным использованием, длительным использованием или удалением) имплантацией экзогенного материала (например, медицинского устройства или множества клеток (например, стволовых клеток)). В соответствии с использованием в настоящем описании термин «экзогенный материал» включает auris-interna или auris-media медицинские устройства (например, устройства защиты органов слуха, улучшающие слух устройства, короткие электроды, микропротезы или поршневые протезы); иглы; устройства доставки лекарства и клетки (например, стволовые клетки). В некоторых случаях импланты экзогенных материалов используются в отношении больного с потерей слуха. В некоторых случаях потеря слуха наблюдается при рождении. В некоторых случаях потеря слуха связана с состояниями, которые развиваются или прогрессируют после рождения (например, болезнь Меньера), заканчивающиеся остеонеогенезисом, повреждением нерва, облитерацией улитковых структур или их комбинациями,

В некоторых случаях экзогенный материал - это множество клеток. В некоторых случаях экзогенный материал - это множество стволовых клеток.

В некоторых случаях экзогенный материал представляет собой электронное устройство, В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения электронное устройство имеет наружную часть, которая помещается за ухом, и вторую часть, которая хирургическим методом помещается под кожей, что помогает воспринимать звук человеку с глубокой глухотой или с сильной тугоухостью. Только в качестве примера, такие импланты медицинских устройств в обход поврежденных участков уха непосредственно стимулируют слуховой нерв. В некоторых случаях улитковые импланты используются при односторонней глухоте. В некоторых случаях улитковые импланты используются при глухоте на оба уха.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение описанного в настоящем описании активного агента в комбинации с имплантацией экзогенного материала (например, импланта медицинского устройства или трансплантата стволовых клеток) задерживает или предупреждает повреждение ушных структур, например, раздражение, некроз клеток, остеонеогенезис и/или дальнейшая нейронная дегенерация, вызванная установкой наружного устройства и/или множества клеток (например, стволовых клеток) в ухе. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение композиции или устройства, приведенных в описании, в комбинации с имплантом дает возможность более эффективного восстановления потери слуха по сравнению с установкой только одного импланта.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение описанного в настоящем описании активного агента уменьшает повреждение ушных структур, вызванное основным заболеванием, обеспечивая успех имплантации. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение описанного в настоящем описании антиапоптотического агента в сочетании с хирургическим вмешательством и/или с имплантацией экзогенного материала уменьшают или предупреждают негативные побочные эффекты (например, некроз клетки).

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение описанного в настоящем описании активного агента в сочетании с имплантацией экзогенного материала имеет трофический эффект (то есть, содействует нормальному росту клеток и заживлению ткани в зоне импланта или трансплантата). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения трофический эффект желательный во время хирургической операции на ухе или во время процедур внутрибарабанных инъекций. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения трофический эффект желательный после установки медицинского устройства или после клеточной трансплантации (например, стволовой клетки). В некоторых из названных примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании композиции или устройства вводятся путем прямой улиточной инъекции, с помощью кохлеостомии или путем депонирования на окне улитки.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения введение описанного в настоящем описании активного агента уменьшает воспаление и/или инфекции, ассоциированные с хирургической операцией на ухе или имплантацией экзогенного материала (например, медицинского устройства или множества клеток (например, стволовых клеток)). В некоторых случаях перфузия области хирургического вмешательства описанным в настоящем описании составом уменьшает или исключает постоперационные и/или постимплантационные осложнения (например, воспаление, повреждение волосковых клеток, нейронная дегенерация, остеонеогенез или подобное). В некоторых случаях перфузия области хирургического вмешательства описанным в настоящем описании составом сокращает послеоперационный или постимплантационный период выздоровления.

В одном из аспектов приведенные в данном описании составы и способы их введения приемлемы для способов прямой перфузии отделов внутреннего уха. Таким образом, приведенные в данном описании составы применимы в комбинации с хирургическими процедурами, включающими, только в виде неограничивающих примеров, кохлеостомию, лабиринтотомию, мастоидэктомию, стапедэктомию, стапедотомию, эндолимфатическую саккулотомию или подобное. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения отделы внутреннего уха опрыскиваются описанным в настоящем описании составом перед хирургической операцией на ухе, во время хирургической операции на ухе, после хирургической операции на ухе или при их комбинации. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании составы в основном не содержат компонентов с пролонгированным высвобождением (например, желатинизиругощие компоненты, такие как полиоксиэтилен-полиоксипропилен сополимеры). В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании составы содержат менее 5% компонентов с пролонгированным высвобождением (например, желатинизирующие компоненты, такие как полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочные сополимеры) по весу состава. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании составы содержат менее 2% компонентов с пролонгированным высвобождением (например, желатинизирующие компоненты, такие как полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочные сополимеры) по весу состава. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения приведенные в данном описании составы содержат менее 1% компонентов с пролонгированным высвобождением (например, желатинизирующие компоненты, такие как полиоксиэтилен-полиоксипропилен триблочные сополимеры) по весу состава. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения описанный в настоящем описании состав, который используется для перфузии хирургической зоны, в основном не содержит желатинизирующего компонента.

Фармакокинетика композиции или устройств с контролируемым высвобождением

В одном из примеров осуществления настоящего изобретения предложенные в настоящем описании композиция или указанное устройство дополнительно обеспечивают немедленное высвобождение активного агента из композиции или устройства, или в течение 1 минуты, или в течение 5 минут, или в течение 10 минут, или в течение 15 минут, или в течение 30 минут, или в течение 60 минут или в течение 90 минут. В других примерах осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество активного агента немедленно высвобождается из композиции или устройства, или в течение 1 минуты, или в течение 5 минут, или в течение 10 минут, или в течение 15 минут, или в течение 30 минут, или в течение 60 минут или в течение 90 минут. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство включает auris-фармацевтически приемлемую гель-композицию или указанное устройство, обеспечивающее немедленное высвобождение активного агента. Дополнительные примеры композиции или устройства могут также включать агент, который усиливает вязкость композиции или устройства.

В других или следующих примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает композицию или указанное устройство с немедленным высвобождением активного агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения диффузия активного агента из композиции или устройства происходит в течение периода времени, превышающего 5 минут, или 15 минут, или 30 минут, или 1 час, или 4 часа, или 6 часов, или 12 часов, или 18 часов, или 1 день, или 2 дня, или 3 дня, или 4 дня, или 5 дней, или 6 дней, или 7 дней, или 10 дней, или 12 дней, или 14 дней, или 18 дней, или 21 день, или 25 дней, или 30 дней, или 45 дней, или 2 месяца, или 3 месяца, или 4 месяца, или 5 месяцев, или 6 месяцев, или 9 месяцев или 1 год. В других примерах осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество активного агента высвобождается из композиции или устройства в течение периода времени, превышающего 5 минут, или 15 минут, или 30 минут, или 1 час, или 4 часа, или 6 часов, или 12 часов, или 18 часов, или 1 день, или 2 дня, или 3 дня, или 4 дня, или 5 дней, или 6 дней, или 7 дней, или 10 дней, или 12 дней, или 14 дней, или 18 дней, или 21 день, или 25 дней, или 30 дней, или 45 дней, или 2 месяца, или 3 месяца, или 4 месяца, или 5 месяцев, или 6 месяцев, или 9 месяцев или 1 год.

В других примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает композицию или указанное устройство как с немедленным высвобождением, так и с пролонгированным высвобождением активного агента. В других примерах осуществления настоящего изобретения в композиции или устройстве соотношение композиции или устройства с немедленным высвобождением и с пролонгированным высвобождением составляет 0,25:1, или 0.5:1, или 1:1, или 1:2, или 1:3, или 1:4, или 1:5, или 1:7, или 1:10, или 1:15, или 1:20. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает немедленное высвобождение первого активного агента и пролонгированное высвобождение второго активного агента или другого активного агента. В других примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает композицию или указанное устройство с немедленным высвобождением и пролонгированным высвобождением активного агента, и, как минимум, одного активного агента. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает соотношение 0,25:1, или 0,5:1, или 1:1, или 1:2, или 1:3, или 1:4, или 1:5, или 1:7, или 1:10, или 1:15, или 1:20 композиции или устройств с немедленным высвобождением или пролонгированным высвобождением первого агента и второго агента соответственно.

В конкретном примере осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает терапевтически эффективное количество активного агента в месте болезни практически без системного воздействия. В дополнительном примере осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает терапевтически эффективное количество активного агента в месте болезни практически без обнаруживаемого системного воздействия. В других примерах осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает терапевтически эффективное количество активного агента в месте болезни с небольшим обнаруживаемым системным воздействием или без обнаруживаемого системного воздействия.

Комбинация auris-совместимой композиции или устройств с немедленным высвобождением, отсроченным высвобождением и/или пролонгированным высвобождением может быть объединена с другими фармацевтическими агентами, а также наполнителями, разбавителями, стабилизаторами, агентами тоничности и другими компонентами, предложенными в настоящем описании. По существу, в зависимости от используемого активного агента, требуемой плотности или вязкости или выбранного способа доставки, альтернативные аспекты представленных в настоящем описании примеров осуществления настоящего изобретения комбинируются с примерами немедленного высвобождения, отсроченного высвобождения и/или пролонгированного высвобождения соответственно.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармакокинетика auris-совместимой композиции или устройств, приведенных в описании, определяется впрыскиванием композиции или устройства на мембрану окна улитки или возле мембраны окна улитки подопытного животного (включая, в качестве примера, морскую свинку или шиншиллу). В заданный период времени (например, 6 часов, 12 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней и 7 дней для тестирования фармакокинетики композиции или устройства в течение 1 недели), подопытное животное подвергается эвтаназии и проверяется образец жидкости перилимфы объемом 5 мл. Внутреннее ухо извлекается и проверяется на наличие активного агента. При необходимости уровень активного агента измеряется в других органах. Кроме того, измеряется системный уровень активного агента путем забора пробы крови у подопытного животного. Чтобы определить, как влияет композиция или указанное устройство на слух, факультативно проверяют слух у подопытного животного.

Альтернативно, обеспечивается внутреннее ухо (поскольку удалено у подопытного животного) и измеряется миграция активного агента. В качестве еще одной альтернативы создается модель мембраны окна улитки in vitro и измеряется миграция активного агента.

В соответствии с настоящим описанием композиция или устройства, включающие тонкодисперсные активные агенты, обеспечивают пролонгированное высвобождение за более продолжительный промежуток времени по сравнению с композицией или устройствами, содержащими нетонкодисперсные активные агенты. В некоторых случаях тонкодисперсный активный агент обеспечивает стабильную поставку (например, +/-20%) активного агента посредством медленной деградации и служит депо для активного агента; такой депо-эффект увеличивает время удержания активного агента в ухе. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения выбор адекватного размера частиц активного агента (например, тонкодисперсный активный агент) в комбинации с количеством желатинирующего агента в композиции или устройстве обеспечивает регулируемые характеристики пролонгированного высвобождения, которые предусматривают высвобождение активного агента на протяжении нескольких часов, дней, недель или месяцев.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения вязкость описанной в настоящем описании композиции или устройства предназначена для обеспечения соответствующей скорости высвобождения из ото-совместимого геля. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения концентрация загустителя (например, такие желатинизирующие компоненты, как полиоксиэтилен-полиоксипропилен сополимеры) предусматривает регулируемое среднее время растворения (MDT). MDT обратно пропорционально скорости высвобождения активного агента из описанной в настоящем описании композиции или устройства. Экспериментальным путем получено, что высвобожденный активный агент факультативно удовлетворяет уравнению Korsmeyer-Peppas

$$\frac{Q}{Q_{\alpha }}=k{t}^n+b$$

где Q - количество активного агента, высвобождаемого в течение времени t, Q_α - все высвобождаемое количество активного агента, k - постоянная высвобождения n-ого порядка, n - безразмерное число, связанное с механизмом растворения, a b - отрезок на оси, характеризующий механизм начального взрывного высвобождения, где n=1 характеризует контролируемый эрозией механизм. Среднее время растворения (MDT) представляет собой сумму разных промежутков времени, когда молекулы лекарственного препарата остаются в матрице до высвобождения, разделенное на общее число молекул, и факультативно рассчитывается следующим образом:

$$MDT=\frac{n{k}^{-1/n}}{n+1}$$

Например, линейное соотношение между средним временем растворения (MDT) композиции или устройства и концентрацией желатинирующего агента (например, полоксамера) указывает на то, что активный агент высвобождается в результате эрозии полимерного геля (например, полоксамера), а не за счет диффузии. В другом примере нелинейное соотношение указывает на высвобождение активного агента за счет комбинации диффузии и/или расщепления полимерного геля. В другом примере динамика более быстрого выведения геля из композиции или устройства (более быстрое высвобождение активного агента) указывает на меньшее среднее время растворения (MDT). Чтобы определить пригодные параметры MDT, проверяется концентрация желатинирующих компонентов и/или активного агента в композиции или устройстве. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения также проверяются объемы инъекции для определения пригодных параметров для преклинических и клинических исследований. Прочность геля и концентрация активного агента влияют на кинетику высвобождения активного агента из композиции или устройства. При низкой концентрации полоксамера скорость выведения увеличивается (MDT меньше). Увеличение концентрации активного агента в композиции или устройстве продлевает время удержания и/или MDT активного агента в ухе.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для полоксамера из описанной в настоящем описании композиции или устройства составляет, как минимум, 6 часов. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для полоксамера из описанной в настоящем описании композиции или устройства составляет, как минимум, 10 часов.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для активного агента из описанной в настоящем описании композиции или устройства составляет от приблизительно 30 часов до приблизительно 48 часов. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для описанного в настоящем описании активного агента из композиции или устройства составляет от приблизительно 30 часов до приблизительно 96 часов. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для активного агента из описанной в настоящем описании композиции или устройства составляет от приблизительно 30 часов до приблизительно 1 недели. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения MDT для активного агента из описанной в настоящем описании композиции или устройства составляет от приблизительно 1 недели до приблизительно 6 недель.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство с контролируемым высвобождением усиливает воздействие активного агента и увеличивают площадь под кривой (AUC) в ушных жидкостях (например, эндолимфе и/или перилимфе) на приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80% или приблизительно 90% по сравнению с композицией или указанное устройством, которые не являются ушной композицией или указанное устройством с контролируемым высвобождением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство с контролируемым высвобождением увеличивают время воздействия активного агента и уменьшают C_max в ушных жидкостях (например, эндолимфе и/или перилимфе) на приблизительно 40%, приблизительно 30%, приблизительно 20%, или приблизительно 10% по сравнению с композицией или указанное устройством, которые не являются ушной композицией или указанное устройством с контролируемым высвобождением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство с контролируемым высвобождением изменяют (например, уменьшают) отношение C_max к C_min по сравнению с композицией или указанное устройством, которые не являются ушной композицией или указанное устройством с контролируемым высвобождением. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство с контролируемым высвобождением усиливает воздействие активного агента и увеличивает период времени, так что концентрация активного агента выше C_min на приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80% или приблизительно 90% по сравнению с композицией или указанное устройством, которые не являются ушной композицией или указанное устройством с контролируемым высвобождением. В некоторых случаях описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство с контролируемым высвобождением задерживает время до C_max. В некоторых случаях контролируемое равномерное высвобождение лекарственного препарата продлевает время, когда концентрация лекарственного препарата остается выше C_min. В некоторых примерах осуществления настоящего описанная в настоящем описании ушная композиция или указанное устройство продлевает время удержания лекарственного агента во внутреннем ухе и обеспечивает устойчивый профиль воздействия лекарственного препарата. В некоторых случаях увеличение концентрации активного агента в композиции или устройстве насыщает процесс клиренса и позволяет достичь более быстрого и стабильного равновесного состояния.

В некоторых случаях, как только воздействие лекарственного препарата (например, концентрация в эндолимфе или перилимфе) достигает устойчивого состояния, концентрация лекарственного препарата в эндолимфе или перилимфе остается на уровне или приблизительно на уровне терапевтической дозы в течение длительного периода времени (например, один день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 1 неделя, 3 недели, 6 недель, 2 месяца). В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения равновесная концентрация активного агента, высвобождаемого из описанной в настоящем описании композиции или устройства с контролируемым высвобождением, превышает приблизительно в 20-50 раз равновесную концентрацию агента, высвобождаемого из композиции или устройства, которые не являются композицией или указанное устройством с контролируемым высвобождением,

Высвобождение активного агента из предложенной в настоящем описании композиции или устройства факультативно регулируется относительно требуемых характеристик высвобождения. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство представляет собой раствор, в основном не содержащий желатинирующих компонентов. В таких случаях композиция или указанное устройство обеспечивает практически немедленное высвобождение активного агента. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство применимы при перфузии ушных структур, например, во время хирургической операции.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство представляет собой раствор, который в основном не содержит желатинирующих компонентов и включает тонкодисперсный активный агент. В некоторых из таких примеров осуществления настоящего изобретения композиция или указанное устройство обеспечивает промежуточное высвобождение активного агента от приблизительно 2 дней до приблизительно 4 дней.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает желатинирующий агент (например, полоксамер 407) и обеспечивает высвобождение активного агента в течение периода времени от приблизительно 1 дня до приблизительно 3 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает желатинирующий агент (например, полоксамер 407) и обеспечивает высвобождение активного агента в течение периода времени от приблизительно 1 дня до приблизительно 5 дней. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает желатинирующий агент (например, полоксамер 407) и обеспечивает высвобождение активного агента в течение периода времени от приблизительно 2 дней до приблизительно 7 дней.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает желатинирующий агент (например, полоксамер 407) в комбинации с тонкодисперсным активным агентом и обеспечивает пролонгированное замедленное высвобождение. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает (а) приблизительно 14-17% желатинирующего агента (например, полоксамер 407) и (b) тонкодисперсный активный агент; и обеспечивает пролонгированное замедленное высвобождение в течение периода времени от приблизительно 1 недели до приблизительно 3 недель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает (а) приблизительно 16% желатинирующего агента (например, полоксамер 407) и (b) тонкодисперсный активный агент; и обеспечивает пролонгированное замедленное высвобождение в течение периода времени от приблизительно 3 недель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает (а) приблизительно 18-21% желатинирующего агента (например, полоксамер 407) и (b) тонкодисперсный активный агент; и обеспечивает пролонгированное замедленное высвобождение в течение периода времени от приблизительно 3 недель до приблизительно 6 недель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения предложенная в настоящем описании композиция или указанное устройство включает (а) приблизительно 20% желатинирующего агента (например, полоксамер 407) и (b) тонкодисперсный активный агент; и обеспечивает пролонгированное замедленное высвобождение в течение периода времени от приблизительно 6 недель. В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения количество желатинирующего агента в композиции или устройстве и размер частиц активного агента регулируются относительно требуемого профиля высвобождения активного агента из композиции или устройства.

В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения композиция или устройства, включающие тонкодисперсные активные агенты, обеспечивают пролонгированное высвобождение в течение более длительного периода времени по сравнению с композицией или устройствами, включающими нетонкодисперсные активные агенты. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения выбор соответствующего размера частиц активного агента (например, тонкодисперсного активного агента) в комбинации с количеством желатинирующего агента в композиции или устройстве обеспечивает регулируемые характеристики пролонгированного высвобождения, которые предусматривают высвобождение активного агента в течение нескольких часов, дней, недель или месяцев.

Наборы/готовые изделия

Изобретение также предусматривает наборы для предупрежедния, лечения или улучшения симптомов болезни или нарушения у млекопитающего, В такие наборы, как правило, будут включены одна или несколько предложенных в настоящем описании композиций или устройств с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом и инструкция по использованию набора. В изобретении также предусматривается использование одной или нескольких композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом при изготовлении медикаментов для лечения, ослабления, уменьшения или улучшения симптомов болезни, дисфункции или нарушения у млекопитающего, например, у человека, у которого имеется заболевание внутреннего уха, у которого предполагается или существует риск развития такого заболевания.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения наборы включают носитель, упаковку, или контейнер, разделенный на отсеки, куда помещается один или несколько таких контейнеров, как пузырьки, тюбики и т.п., каждый контейнер включает один из отдельных элементов, используемых в соответствии с указанным в настоящем описании способе. Пригодные контейнеры включают, например, бутылки, пузырьки, шприцы и пробирки, В других примерах осуществления настоящего изобретения контейнеры выполнены из различных материалов, например, стекла или пластмассы.

Предусмотренные в настоящем описании готовые изделия содержат упаковочные материалы. Упаковочные материалы для упаковки фармацевтических препаратов также представлены в настоящем описании. См., например, патенты США №№5323907, 5052558 и 5033252. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают, но не ограничиваются этим, блистерные упаковки, пузырьки, тюбики, ингаляторы, насосы, пакеты, ампулы, сосуды, шприцы, бутылки и любой упаковочный материал, пригодный для выбранной композиции и предполагаемого способа введения и лечения. Широкий перечень композиций с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом, предусмотренных в настоящем описании, рассматриваются как представляющие целый ряд лечебных схем для любого заболевания, расстройства или состояния, при котором поможет введение антиапоптотического агента или проапоптотического агента с контролируемым высвобождением во внутреннее ухо.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения набор включает один или несколько дополнительных контейнеров, каждый с одним или несколькими разными материалами (например, реагенты, факультативно в концентрированном виде, и/или устройства), необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения пользователя для применения предложенной в настоящем описании композиции. Неограничивающие примеры таких материалов включают, но не ограничиваются этим, буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы; носитель, пакет, контейнер, этикетки к пузырькам и/или тюбикам с перечислением их содержимого и/или инструкции по использованию и листовка-вкладыш в упаковке с инструкцией по использованию. Дополнительно прилагается комплект инструкций. В другом примере осуществления настоящего изобретения этикетка находится на контейнере или относится к контейнеру. В другом примере осуществления настоящего изобретения этикетка находится на контейнере, когда буквы, цифры или другие знаки, составляющие этикетку, прикреплены, сформованы или вытравлены на самом контейнере непосредственно; этикетка относится к контейнеру, когда она присутствует в пределах емкости или носителя, в котором также содержится контейнер, например, листовка-вкладыш в упаковке. В других примерах осуществления настоящего изобретения этикетка предназначается для указания, что содержимое должно использоваться для конкретного терапевтического применения. В еще одном примере осуществления настоящего изобретения на этикетке также указываются правила применения содержимого, такие как в приведенных в описании способах.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции для лечения уха представлены в упаковке или дозирующем устройстве, в котором находится одна или несколько одноразовых лекарственных форм, содержащих представленную в настоящем описании композицию. В другом примере осуществления настоящего изобретения упаковка, например, содержит металлическую или пластиковую пленку, такую как, к примеру, блистерная упаковка. В другом примере осуществления настоящего изобретения упаковка или дозирующее устройство снабжены инструкциями по введению, В еще одном примере осуществления настоящего изобретения упаковка или дозирующее устройство также сопровождаются относящемся к контейнеру уведомлением в форме, предписанной органом власти, регулирующим производство, использование или продажу фармацевтических препаратов, в таком уведомлении отражается одобрение данным органом формы лекарственного препарата для назначения человеку или применения в ветеринарии. В другом примере осуществления настоящего изобретения такое уведомление, например, представляет собой этикетирование, одобренное Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США для отпускаемых по рецепту лекарств, или одобренный листок-вкладыш. В другом примере осуществления настоящего изобретения композиции, содержащие предусмотренный в настоящем описании состав, разработанный в совместимом фармацевтическом носителе, также приготовлены, помещены в соответствующий контейнер и снабжены этикеткой с указанием схемы лечения указанного состояния.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Приготовление термообратимого гель-состава с XIAP

Компонент	Количество (мт/г состава)
XIAP	21,0
метилпарабен	2,1
Гипромеллоза	21,0
Полоксамер 407	378
Буфер TRIS HCl (0,1 М)	1677,9

10-г порцию гель-состава, содержащего 1,0% XIAP, получают сначала суспендированием Полоксамера 407 (BASF Corp.) в буфере TRIS HCl (0,1 М). Полоксамер 407 и TRIS смешивают путем взбалтывания в течение ночи при 4°C до полного растворения Полоксамера 407 в TRIS добавляют гипромеллозу, метилпарабен и дополнительно буфер TRIS HCl (0,1 М). Композицию размешивают до тех пор, пока не будет заметно растворение. Добавляют раствор XIAP и композицию перемешивают до получения однородного геля. До использования смесь сохраняется при температуре ниже комнатной.

Пример 2: Приготовление мукоадгезивного, термообратимого гель-состава с АМ-111

Компонент	Количество (мг/г состава)
АМ-111	25,5
метилпарабен	2,55
Гипромеллоза	25,5
Карбопол 93 4Р	5,1
Полоксамер 407	459
Буфер TRIS HCl (0,1 М)	2032,35

10-г порцию мукоадгезивного гель-состава, содержащего 1,0% AM 111, получают сначала суспендированием Полоксамера 407 (BASF Corp.) и Карбопола 934Р в буфере TRIS HCl (0,1 М). Полоксамер 407, Карбопол 934Р и TRIS смешивают путем взбалтывания в течение ночи при 4°C до полного растворения Полоксамера 407 и Карбопола 934Р в TRIS. добавляют гипромеллозу, метилпарабен и дополнительно буфер TRIS HCl (0,1 М). Композицию размешивают до визуально заметно растворения, добавляют раствор АМ-111Р и композицию перемешивают до получения гомогенного геля. До использования смесь сохраняется при температуре ниже комнатной.

Пример 3: Приготовление мукоадгезивного, термообратимого гель-состава с SB-203580

Компонент	Количество (мг/г состава)
SB-203580	25,5
метилпарабен	2,55
Гипромеллоза	25,5
Карбопол 934Р	5,1
Полоксамер 407	459
Буфер TRIS HCl (0,1 М)	2032,35

SB-203580 подается в виде твердого вещества, которое регидратируется в воде до конечной мольной концентрации 10 мМ.

10-г порцию мукоадгезивного гель-состава, содержащего 1,0% SB-203580, получают сначала суспендированием Полоксамера 407 (BASF Corp.) и Карбопола 934Р в буфере TRIS HCl (0,1 М). Полоксамер 407, Карбопол 934Р и TRTS смешивают путем взбалтывания в течение ночи при 4°C до полного растворения Полоксамера 407 и Карбопола 934Р в TRIS. Добавляют гипромеллозу, метилпарабен и дополнительно буфер TRIS HCl (0,1 М). Композицию размешивают до тех пор, пока не будет наблюдаться растворение. Добавляют раствор SB-203580 и композицию перемешивают до получения гомогенного геля. До использования смесь сохраняется при температуре ниже комнатной.

Пример 4: Приготовление состава с лейпептином на основе гидрогеля

Компонент	Количество (мг/г состава)
Лейпептин	10,0
парафиновое масло	200,0
тригидроксистеарат	10,0
цетил диметикон кополиол	30,0
вода	qs ad 1000
фосфатный буфер, рН 7,4	qs рН 7,4

Состав в виде крема сначала получают, осторожно смешивая лейпептин с водой до растворения лейпептина. Затем готовят масляную основу путем смешивания парафинового масла, тригидроксистеарата и цетил диметикон кополиола при температуре до 60°C. Масляную основу охлаждают до комнатной температуры и добавляют раствор лейпептина. Эти две фазы перемешивают, пока не образуется гомогенный, монофазный гидрогель.

Пример 5: Приготовление гель-состава с миноциклином

Компонент	Количество состава)(мг/г
Миноциклин	16
хитозан	8
Глицерофосфат динатрий	32
вода	336

5-мл раствор уксусной кислоты титруется до получения показателя рН, равного приблизительно 4,0. Добавляют хитозан до получения показателя рН, равного приблизительно 5,5. Затем в растворе хитозана растворяют миноциклин. Полученный раствор стерилизуют фильтрацией. Также готовят и стерилизуют 5-мл водный раствор глицерофосфат динатрия. Два раствора смешивают и в течение 2 часов при 37°C формируется требуемый гель.

Пример 6: Нанесение состава повышенной вязкости с SB-203580 на мембрану окна улитки

Готовят состав в соответствии с Примером 3 и загружают его в 5-мл силиконизированные стеклянные шприцы, подсоединенные к съемной инъекционной игле 15 калибра с соединением Люэра. На барабанную перепонку местно наносят SB-203580 и делают небольшой разрез, позволяющий визуально наблюдать полость среднего уха. Конец иглы вводят в участок над мембраной окна улитки и состав с SB-203580 наносят непосредственно на мембрану окна улитки.

Пример 7: Влияние рН на продукты разложения для автоклавированного 17% полоксамера 407NF/2% ушного агента в буфере PBS

Основной раствор 17% полоксамера 407/2% ушного агента готовят путем растворения 351,4 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 302,1 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 122,1 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific) и соответствующего количества ушного агента с 79,3 г стерильной фильтрованной DI [деионизированной] воды. Раствор охлаждают в водяной бане, охлажденной льдом, а затем на холодный раствор при помешивании разбрызгивают 17,05 г полоксамера 407NF (SPECTRUM CHEMICALS). После этого смесь перемешивают до полного растворения полоксамера. Измеряют показатель рН для этого раствора.

17% полоксамера 407/2% ушного агента в PBS с рН, равным 5,3. Взять аликвоту (приблизительно 30 мл) вышеупомянутого раствора и отрегулировать рН до значения 5,3, добавив 1М HCl.

17% полоксамера 407/2% ушного агента в PBS с рН, равным 8,0.

Взять аликвоту (приблизительно 30 мл) вышеупомянутого раствора и отрегулировать рН до значения 8,0, добавив 1 М NaOH.

Буфер PBS (показатель рН 7,3) готовят путем растворения 805,5 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 606 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 247 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific), затем доводят [QS] до 200 г добавлением стерильной фильтрованной DI [деионизированной] воды.

2-% раствор ушного агента в PBS с рН 7,3 готовят путем растворения соответствующего количества ушного агента в буфере PBS и доводят [QS] до 10 г добавлением PBS буфера.

Пробы объемом один мл отдельно помещают в 3-мл стеклянные пузырьки с резьбовой крышкой (с обрезинкой) и плотно закрывают. Пузырьки помещают в Market Forge-sterilmatic автоклав (параметры установочные, медленнотекущие жидкости) и стерилизуют при 250°F в течение 15 минут. После автоклава пробы оставляют для охлаждения до комнатной температуры, а затем помещают в холодильник. Пробы гомогенизируются взбалтыванием пузырьков в холодном состоянии.

Производится внешний осмотр (например, обесцвечивание и/или выпадение осадка), результат регистрируется. Выполняется анализ HPLC с помощью Agilent 1200, снабженного колонкой Luna C18(2) 3 мкМ, 1 ООА, 250×4,6 мм) с использованием 30-80 ацетонитрил градиента (1-10 мин) смеси воды и ацетонитрила, содержащей 0,05% TFA), в течение полного цикла 15 минут. Пробы разбавляют из расчета 30 мкл пробы и растворяют в 1,5 мл смеси воды и ацетонитрила в соотношении 1:1. Чистота ушного агента в обработанных в автоклаве пробах регистрируется.

Как правило, композиция не должна содержать какие-либо примеси (например, продукт разложения ушного агента) более 2% и, более, предпочтительно, более одного процента. Кроме того, композиция не должна давать осадок во время хранения или изменять цвет после изготовления и хранения.

Композиции, содержащие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный AM 111, приготовленные в соответствии с процедурой, описанной в Примере 6, тестируются с помощью вышеуказанной процедуры для определения влияния рН фактора на разложение на стадии стерилизации в автоклаве.

Пример 8: Влияние стерилизации в автоклаве на профиль высвобождения и вязкость смеси 17% полоксамера 407NF/2% ушного агента в PBS

Вычисляется аликвота пробы из Примера 6 (автоклавированная и неавтоклавированная) для профиля высвобождения и измерения вязкости, чтобы оценить воздействие тепловой стерилизации на свойства геля.

Растворение выполняется при 37°C в ячейках с зажимом (поликарбонатная мембрана диаметром 6,5 мм с размером пор 0,4 мкМ). 0,2 мл геля помещают в ячейку с зажимом и оставляют для застывания, затем 0,5 мл помещают в резервуар и взбалтывают при помощи орбитального шейкера Labline со скоростью 70 об/мин. Пробы берут каждый час (отбирается 0,1 мл и заменяется теплым буфером). Проводится анализ проб на концентрацию полоксамера с помощью ультрафиолетового излучения при 624 нм по методу кобальта тиоцианата, в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой. Короче говоря, 20 мкл пробы смешивают с 1980 мкл 15-мМ раствора кобальта тиоцианата и измеряют оптическая плотность при 625 нм с помощью спектрофотометра Evolution 160 UV/Vis (Thermo Scientific).

Высвобождаемый ушной агент удовлетворяет уравнению Korsmeyer-Peppas

$$\frac{Q}{Q_x}=k{t}^n+b$$

где Q - количество ушного агента, высвобождаемого в течение времени t, Q_α - все высвобождаемое количество ушного агента, k - постоянная высвобождения n-ого порядка, n - безразмерное число, связанное с механизмом растворения, a b - отрезок на оси, характеризующий механизм начального взрывного высвобождения, где n=1 характеризует контролируемый эрозией механизм. Среднее время растворения (MDT) представляет собой сумму разных промежутков времени, когда молекулы лекарственного препарата остаются в матрице до высвобождения, разделенное на общее число молекул, и факультативно рассчитывается следующим образом:

$$MDT=\frac{n{k}^{-1/n}}{n+1}$$

Замеры вязкости выполняются с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+P со шпинделем СРЕ-51, вращающимся со скоростью 0,08 об/мин (скорость сдвига 0,31 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 15-34°C при 1,6°C/мин). Tgel определяется как точка перегиба кривой, где увеличение вязкости происходит в результате золь-гель-перехода.

Композиции, содержащие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный АМ-1П, приготовленные в соответствии с процедурой в Примере 6, тестируются с помощью описанной выше процедуры для определения Tgel.

Пример 9: Влияние добавления второго полимера на продукты разложения и вязкость композиции, содержащей 2% ушной агент и 17% полоксамер 407NF, после тепловой стерилизации (автоклавирования)

Раствор А. Раствор с показателем рН 7,0, содержащий натрий карбоксиметилцеллюлозу (CMC) в буфере PBS, готовят путем растворения 178,35 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 300,5 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 126,6 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific), растворенного в 78,4 г стерильной фильтрованной DI воды, затем в буферный раствор впрыскивают 1 г Blanose 7M65 CMC (Hercules, вязкость 5450 сР при 2%) и нагревают для ускорения растворения, после чего раствор охлаждают.

Раствор с показателем рН 7,0, содержащий 17% полоксамера 407NF/1% СМС/2% ушного агента в буфере PBS, создают путем охлаждения 8,1 г раствора А в водяной бане, охлажденной льдом, а затем добавляют соответствующее количество ушного агента, с последующим перемешиванием, 1,74 г полоксамера 407NF (Spectrum Chemicals) впрыскивают при перемешивании в холодный раствор. Далее смесь перемешивают до полного растворения всего количества полоксамера.

Два миллилитра вышеупомянутой пробы помещают в 3-мл стеклянный пузырек с резьбовой крышкой (с обрезинкой) и плотно закрывают. Пузырек помещают в Market Forge-stenlmatic автоклав (параметры установочные, медленнотекущие жидкости) и стерилизуют при 250°F в течение 25 минут. После автоклава пробу оставляют для охлаждения до комнатной температуры, а затем помещают в холодильник. Проба гомогенизируются взбалтыванием пузырьков в холодном состоянии.

После обработки в автоклаве производится осмотр на наличие осаждения или обесцвечивания. Выполняется анализ HPLC с помощью Agilent 1200, снабженного колонкой Luna С18(2) 3 мкМ, 100А, 250×4,6 мм) с использованием 30-80 ацетонитрил градиента (1-10 мин) смеси воды и ацетонитрила, содержащей 0,05% TFA), в течение полного цикла 15 минут. Пробы разбавляют из расчета 30 µл пробы и растворяют в 1,5 мл смеси воды и ацетонитрила в соотношении 1:1. Чистота ушного агента в обработанных в автоклаве пробах регистрируется.

Замеры вязкости выполняются с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+P со шпинделем СРЕ-51, вращающимся со скоростью 0,08 об/мин (скорость сдвига 0,31 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 15-34°С при 1,6°С/мин). Tgel определяется как точка перегиба кривой, где увеличение вязкости происходит в результате золь-гель-перехода.

Растворение выполняют при 37°C для неавтоклавированной пробы в ячейках с зажимом (поликарбонатная мембрана диаметром 6,5 мм с размером пор 0,4 мкМ). 0,2 мл геля помещают в ячейку с зажимом и оставляют для застывания, затем 0,5 мл помещают в резервуар и взбалтывают при помощи орбитального шейкера Labline со скоростью 70 об/мин, Пробы берут каждый час (отбирается 0,1 мл и заменяется теплым буфером). Проводят анализ проб на концентрацию ушного агента с помощью ультрафиолетового излучения при 245 нм, в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой.

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонко дисперсный AM 111, тестируют с помощью вышеуказанной процедуры для определения влияния добавления второго полимера на продукты разложения и вязкость содержащей 2% ушной агент и 17% полоксамер 407NF композиции после тепловой стерилизации (автоклавирования).

Пример 10: Влияние типа буфера на продукты разложения для содержащих полоксамер 407NF композиций после тепловой стерилизации (автоклавирование)

Буфер TRIS получают путем растворения 377,8 мг натрий хлорида (Fisher Scientific) и 602,9 мг трометамина (Sigma Chemical Co.), затем доводят [QS] до 100 г стерильной фильтрованной DI водой, показатель рН регулируется до 7,4 с помощью 1М HCl.

Основной раствор, содержащий 25% полоксамер 407 раствор в буфере TRIS:

Взвесить 45 г буфера TRIS, охладить в водяной бане, охлажденной льдом, а затем на холодный раствор при помешивании впрыснуть 15 г полоксамера 407NF (Spectrum Chemicals). После этого смесь перемешивают до полного растворения полоксамера.

С вышеупомянутым основным раствором готовят ряд композиций. Для всех экспериментов используется соответствующее количество ушного агента (или его соли или пролекарства) и/или ушного агента в виде тонкодисперсных частиц/частиц с покрытием/липосомальных частиц (или их соли или пролекарства).

Основной раствор (рН 7,3), содержащий 25% полоксамер 407 раствор в буфере PBS:

Буфер PBS готовят путем растворения 704 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 601,2 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 242,7 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific) в 140,4 г стерильной фильтрованной DI воды. Раствор охлаждают в водяной бане, охлажденной льдом, а затем при перемешивании в холодный раствор впрыскивают 50 г полоксамера 407NF (SPECTRUM CHEMICALS), После этого смесь перемешивают до полного растворения полоксамера,

С вышеупомянутым основным раствором готовят ряд композиций. Для всех экспериментов используется соответствующее количество ушного агента (или его соли или пролекарства) и/или ушного агента в виде тонкодисперсных частиц/частиц с покрытием/липосомальных частиц (или их соли или пролекарства).

В Таблицах 2 и 3 перечислены пробы, приготовленные с применением вышеописанных процедур. Для обеспечения конечной концентрации 2% ушного агента в пробе в каждую пробу добавлено соответствующее количество ушного агента.

Таблица 2
Приготовление проб, содержащих буфер TRIS
Проба	рн	25% основной раствор (г)	Буфер TRIS (г)
20% Р407/2 ушной агент/TRIS	7,45	8,01	1,82
18% Р407/2 ушной агент/TRIS	7,45	7,22	2,61
16% Р407/2 ушной агент/TRIS	7,45	6,47	3,42
18% Р4072 ушной агент/TRIS	7,4	7,18	2,64
4% ушной агент/TRIS	7,5	-	9,7
2% ушной агент/TRIS	7,43	-	5
1% ушной агент/TRIS	7,35	-	5
2% ушной агент/TRIS (суспензия)	7,4	-	4,9

Таблица 3
Приготовление проб, содержащих буфер PBS (pH 7,3)
Проба	25% основной раствор в PBS (г)	Буфер PBS (г)
20%Р407/2 ушной агент /PBS	8.03	1,82
18%Р407/2 ушной агент /PBS	7,1	2,63
16%Р407/2 ушной агент /PBS	6,45	3,44
18%Р407/2 ушной агент /PBS	-	2,63
2% ушной агент /PBS	-	4,9

Пробы объемом один мл отдельно помещают в 3-мл стеклянные пузырьки с резьбовой крышкой (с обрезинкой) и плотно закрывают. Пузырьки помещают в Market Forge-sterilmatic автоклав (параметры установочные, медленнотекущие жидкости) и стерилизуют при 250°F в течение 25 минут. После автоклава пробы оставляют для охлаждения до комнатной температуры. Пузырьки помещают в холодильник и взбалтывают в холодном состоянии для гомогенизации проб.

Выполняется анализ HPLC с помощью Agilent 1200, снабженного колонкой Luna С 18(2) 3 мкМ, 100Å, 250×4,6 мм) с использованием 30-80 ацетонитрил градиента (1-10 мин) смеси воды и ацетонитрила, содержащей 0,05% TFA, в течение полного цикла 15 минут. Пробы разбавляют из расчета 30 мкл пробы и растворяют в 1,5 мл смеси воды и ацетонитрила в соотношении 1:1. Чистота ушного агента в обработанных в автоклаве пробах регистрируется. Сравнивают устойчивость композиций в буферах TRIS и PBS.

Замеры вязкости выполняют с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+P со шпинделем СРЕ-51, вращающимся со скоростью 0,08 об/мин (скорость сдвига 0,31 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 15-34°C при 1,6°C/мин). Tgel определяется как точка перегиба кривой, где увеличение вязкости происходит в результате золь-гель-перехода. Анализу подвергают только композиции, которые не показали никаких изменений после автоклавирования.

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657. AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный AM-111, тестируются с помощью вышеуказанной процедуры для определения влияния добавления второго полимера на продукты разложения и вязкость содержащей 2% ушной агент и 17% полоксамер 407NF композиции после тепловой стерилизации (автоклавирования). Устойчивость композиций, содержащих тонкодисперсный ушной агент, сравнивают с аналогами композиции с нетонкодисперсным ушным агентом.

Пример 11: Композиции для лечения ушей с прерывистым высвобождением

Для получения при помощи описанных выше процедур композиции с ушным агентом с прерывистым высвобождением используется диазепам. 17% полоксамер раствор готовят путем растворения 351,4 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 302,1 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 122,1 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific) и соответствующего количества ушного агента в 79,3 г стерильной фильтрованной DI воды. Раствор охлаждают в водяной бане, охлажденной льдом, а затем в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 17,05 г полоксамера 407NF (SPECTRUM CHEMICALS). Смесь после этого перемешивают до полного растворения полоксамера. Измеряется показатель РН для этого раствора. 20% доставленной дозы диазепама становятся растворимыми в 17% полоксамер растворе при помощи бета циклодекстринов. Затем к смеси добавляют оставшиеся 80% ушного агента и конечную композицию готовят при помощи любой описанной выше процедуры.

Композиции с прерывистым высвобождением, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный AM 111, приготовленные в соответствии с процедурами и Примерами, описанными выше, тестируются с помощью вышеуказанных процедур для определения профилей с прерывистым высвобождением.

Пример 12: Приготовление 17% полоксамера 407/2% ушного агента/78 Ppm голубого Эванса в PBS

Основной раствор голубого Эванса (5,9 мг/мл) в буфере PBS готовят путем растворения 5,9 мг голубого Эванса (Sigma Chemical Со) в 1 мл буфера PBS. Буфер PBS готовят путем растворения 704 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 601,2 мг натрий гидрофосфата двухосновного безводного (Fisher Scientific), 242,7 мг натрий гидрофосфата одноосновного безводного (Fisher Scientific) в 140,4 г стерильной фильтрованной DI [деионизированной] воды.

В этом исследовании используется основной раствор, содержащий 25% полоксамер 407 раствор в буфере PBS (как в Примере 9). Для подготовки композиций, содержащих 2% ушного агента, к 25% основному раствору с полоксамер 407 раствором добавляют соответствующее количество ушного агента (Таблица 4).

Таблица 4
Приготовление проб с полоксамером 407, содержащих голубой Эванс
Проба ID	25% Р407в PBS (г)	Буфер PBS (г)	Раствор с голубым Эвансом (мкл)
17%Р407/2 ушной агент/ЕВ	13,6	6	265
20%Р407/2 ушной агент/ЕВ	16,019	3,62	265
25%Р407/2 ушной агент/ЕВ	19,63	-	265

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, АМ-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонко дисперсный AM 111, готовят в соответствии с процедурами в Примере 12 и подвергают стерилизующему фильтрованию в 0,22 мкМ PVDF шприцевых фильтрах (Millipore corporation) и обработке в автоклаве.

Вышеупомянутые композиции вводят дозами морским свинкам в среднее ухо с помощью приведенных в описании процедур, способность композиций превращаться в гель при контакте и местонахождение геля идентифицируются после введения доз и через 24 часа после введения доз.

Пример 13: Окончательная стерилизация композиций с полоксамером 407 с использованием визуализации красителями и без их использования 17% полоксамер 407/2% ушной агент/в фосфатном буфере, рН 7,3:

Растворить 709 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 742 мг натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата USP (Fisher Scientific), 251,1 мг натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата USP (Fisher Scientific) и соответствующее количество ушного агента в 158,1 г стерильной фильтрованной DI воды. Раствор охлаждают в водяной бане, охлажденной льдом, и затем в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 34,13 г полоксамера 407NF (Spectrum chemicals). Смесь после этого перемешивают до полного растворения полоксамера.

17% полоксамер 407/2% ушной агент/59ppm голубой Эванс в фосфатном буфере:

Взять два миллилитра 17% полоксамера 407/2% ушного агента/в фосфатном буферном растворе и добавить 2 мл 5.9 мг/мл раствора голубого Эванса ((Sigma-Aldrich chemical Co) в буфере PBS.

25% полоксамер 407/2% ушной агент/в фосфатном буфере: Растворить 330,5 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 334,5 мг натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата USP (Fisher Scientific), 125,9 мг натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата USP (Fisher Scientific) и соответствующее количество ушного агента в 70,5 г стерильной фильтрованной DI воды.

Раствор охлаждают в водяной бане, охлажденной льдом, и затем в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 25,1 г полоксамера 407NF (химикаты Спектра). Смесь после этого перемешивают до полного растворения полоксамера.

25% полоксамер 407/2% ушной агент/59ppm голубой Эванс в фосфатном буфере:

Взять два миллилитра 25% полоксамера 407/2% ушного агента /в фосфатном буферном растворе и добавить 2 мл 5,9 мг/мл раствора голубого Эванса ((Sigma-Aldrich chemical Co) в буфере PBS.

Поместить 2 мл композиции в 2-мл стеклянный пузырек (стеклянный пузырек для сыворотки Wheaton) и закупорить 13-мм бутилкаучуком (пробки из кимбл стекла) и закатать 13-миллиметровой алюминиевой крышкой. Пузырьки помещают в Market Forge-sterilmatic автоклав (параметры настройки, медленнотекущие жидкости) и стерилизуют при 250°F в течение 25 минут. После обработки в автоклаве пробы оставляют для охлаждения до комнатной температуры, а затем помещают для дальнейшего охлаждения. Пузырьки помещают в холодильник и перемешивают в холодном состоянии до гомогенизации проб. Обесцвечивание проб или выпадение осадка после обработки в автоклаве регистрируют.

Выполняется анализ HPLC с помощью Agilent 1200, снабженного колонкой Luna С 18(2) 3 мкМ, 100Å, 250×4,6 мм) с использованием 30-95 градиента метанол:ацетат рН 4 (1-6 мин), затем изократической хроматографии в течение 11 минут, за полный цикл 22 минут. Пробы разбавляют из расчета 30 мкл пробы и растворяют в 0,97 мл воды. Зарегистрированные средние пики приведены в таблице ниже. Использование этого способа всегда дает чистоту перед автоклавированием выше 99%.

Замеры вязкости выполняются с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+P со шпинделем СРЕ-51, вращающимся со скоростью 0,08 об/мин (скорость сдвига 0,31 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 15-34°C при 1,6°C/мин). Tgel определяется как точка перегиба кривой, где увеличение вязкости происходит в результате золь-гель-перехода.

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный АМ-1 11, приготовленные в соответствии с процедурой в Примере 11, тестируются с помощью описанных выше процедур для определения устойчивости композиций.

Пример 14; Сравнение in vitro профиля высвобождения

Растворение выполняется при 37°C в ячейках с зажимом (поликарбонатная мембрана диаметром 6,5 мм с размером пор 0,4 мкМ). 0,2 мл гель-композиции, описанной в настоящем описании, помещают в ячейку с зажимом и оставляют для застывания, затем 0,5 мл буфера помещают в резервуар и взбалтывают при помощи орбитального шейкера Labline со скоростью 70 об/мин. Пробы берут каждый час (отбирается 0,1 мл и заменяется теплым буфером). Проводится анализ проб на концентрацию ушного агента с помощью ультрафиолетового излучения при 245 нм в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой. Относительный порядок по рангу среднего времени растворения (MDT) определяется как функция %Р407. Линейное соотношение между средним временем растворения (MDT) композиций и концентрацией Р407 указывает на то, что ушной агент высвобождается в результате эрозии полимерного геля (полоксамера), а не за счет диффузии. Нелинейное соотношение указывает на высвобождение ушного агента за счет комбинации диффузии и/или расщепления полимерного геля.

Альтернативно, пробы анализируются по методу, описанному в работе автора Li Xin-Yu [Acta Pharmaceutica Sinica 2008, 43(2):208-203], а порядок по рангу среднего времени растворения (MDT) определяется как функция %Р407.

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный АМ-111, приготовленные в соответствии с описанными в настоящем описании процедурами, тестируются с помощью вышеприведенных процедур для определения профиля высвобождения ушных агентов.

Пример 15: Сравнение in vitro температуры гелеобразования

Оценивается влияние полоксамера 188 и ушного агента на температуру гелеобразования и вязкость композиций с полоксамером 407, чтобы управлять температурой гелеобразования.

Используют основной раствор с 25% полоксамером 407 в буфере PBS (как в Примере 9) и раствор PBS (как в Примере 11). Используется полоксамер 188NF из BASF. Для получения 2% композиции ушного агента к приведенным в Таблице 5 растворам добавляется соответствующее количество ушного агента.

Таблица 5
Приготовление проб, содержащих полоксамер 407/полоксамер 188
Проба	25% Р407 основной раствор (г)	Полоксамер 188 (мг)	Буфер PBS (г)
16% Р407/10%Р188	3,207	501	1,3036
17% Р407/10%Р188	3,4089	500	1,1056
18% Р407/10%Р188	3,6156	502	0,9072
19% Р407/10%Р188	3,8183	500	0,7050
20% Р407/10%Р188	4,008	501	0,5032
20% Р407/5%Р188	4,01	256	0,770

Среднее время растворения, вязкость и температура гелеобразования измеряются при помощи приведенных в описании процедур.

Уравнение подобрано к полученным данным и может применяться для вычисления температуры гелеобразования смесей F127/F68 (для 17-20% F127 и 0-10% F68).

T_gel=-1,8 (%F127)+1,3 (%F68)+53

Уравнение подобрано к полученным данным и может применяться для вычисления среднего времени растворения (час) на основе температуры гелеобразования смесей F127/F68 (для 17-20% F127 и 0-10% F68), при использовании результатов, полученных в Примере 13 и 15.

MDT=-0,2 (T_gel)+8

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный AM-111, приготовленные добавлением соответствующего количества ушных агентов к приведенным в Таблице 5 растворам. Температура гелеобразования композиций определяется при помощи описанных выше процедур.

Пример 16: Определение диапазона температур для стерилизующего фильтрования

Вязкость измеряется при низких температурах, чтобы обеспечить такой диапазон температур, при котором должно происходить стерилизующее фильтрование, чтобы уменьшить вероятность закупорки.

Замеры вязкости выполняются с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+P со шпинделем СРЕ-40, вращающимся со скоростью 1, 5 и 10 об/мин (скорость сдвига 7,5; 37,5 и 75 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 10-25°C при 1,6°C/мин).

Tgel для 17% Pluronic P407 определяется как функция увеличивающейся концентрации ушного агента. Увеличение Tgel для композиции с 17% pluronic вычисляется уравнением:

ΔT_gel=0,93 [% ушного агента]

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный АМ-111, приготовленные в соответствии с описанными в настоящем описании процедурами, тестируются с помощью вышеприведенной процедуры для определения диапазона температур для стерилизующего фильтрования. Влияние добавления повышенных количеств ушного агента на Tgel и кажущаяся вязкость композиций регистрируются.

Пример 17: Определение условий изготовления

Таблица 6
Вязкость потенциальных композиций в условиях изготовлении/фильтрования
Проба	Кажущаяся вязкостьа (сП)	Температура при 100 сП
На 5°C ниже Tgel	20°C
Плацебо	52 сП при 17°С	120 сП	19°C
17% Р407/2% ушной агент	90 сП при 18°C	147 сП	18,5°C
17% Р407/6% ушной агент	142 сП при 22°C	105 сП	19,7°C
аВязкость, измеренная при скорости сдвига 37,5 с-1

Для оценки условий изготовления/фильтрования изготавливается 8-литровая порция 17% Р407 плацебо. Плацебо получают следующим образом; 6,4 литра деионизированной воды помещают в 3-галлоновый сосуд из нержавеющей стали под давлением и оставляют для охлаждения в холодильнике на ночь. На следующее утро сосуд вынули (температура воды 5°C, комнатная температура 18°C) и добавили 48 г натрий хлорида, 29,6 г натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата и 10 г натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата и растворили с помощью высокопроизводительного смесителя (IKA RW20 при 1720 об/мин). Через полчаса, как только буфер растворился (температура раствора 8°C, комнатная температура 18°C), медленно впрыснули 1,36 кг полоксамера 407 NF (spectrum chemicals) в буферный раствор за 15-минутный промежуток (температура раствора 12°C, комнатная температура 18°C), затем скорость увеличивается до 2430 об/мин. После смешивания еще в течение часа скорость смешивания снижается до 1062 об/мин (полное растворение).

Температура в помещении поддерживается ниже 25°C, чтобы температура раствора оставалась ниже 19°C. Температура раствора поддерживается ниже 19°C до 3 часов с начала изготовления, без необходимости охлаждения/захолаживания емкости.

Определены три разных фильтра Sartoscale (Sartorius Stedim) с площадью поверхности 17,3 см² при давлении 20 psi [фунтов на квадратный дюйм] и 14°C раствора

1) Sartopore 2, 0,2 мкм 5445307HS-FF (PES), скорость потока 16 мл/мин

2) Sartobran Р, 0,2 мкм 5235307HS-FF (эфир целлюлозы), скорость потока 12 мл/мин

3) Sartopore 2 XLI, 0,2 мкм 5445307IS-FF (PES), скорость потока 15 мл/мин

Используется Sartopore 2 фильтр 5441307H4-SS, фильтрация выполняется при температуре раствора с использованием 0,45,0,2 мкм Sartopore 2 150 стерильной капсулы (Sartorius Stedim) с площадью поверхности 0,015 м² при давлении 16 psi. Скорость потока при измерении составляет приблизительно 100 мл/мин при 16psi, без изменения скорости потока, пока температура поддерживается в диапазоне 6,5-14°C. Уменьшение давления и увеличение температуры раствора вызывает уменьшение скорости потока в результате увеличения вязкости раствора. Во время процесса контролируется обесцвечивание раствора.

Таблица 7
Расчетное время фильтрации для 17% полоксамер 407 плацебо в диапазоне температуры раствора 6,5-14°C при использовании фильтров Sartopore 2, 0,2 мкМ при давлении 16 psi
Фильтр	Размер (м2)	Расчетная скорость потока (мл/мин)	Время для фильтрации 8 л (расчетное)
Sartopore 2, размер 4	0,015	100 мл/мин	80 мин
Sartopore 2, размер 7	0,05	330 мл/мин	24 мин
Sartopore 2, размер 8	0,1	670 мл/мин	12 мин

Перед расчетом фильтрации проверяют вязкость, Tgel и спектры поглощения в УФ и видимой области [UV/Vis]. Поглощения в УФ и видимой области для Pluronic получают с помощью спектрометра Evolution 160 UV/Vis (Then-no Scientific). Пик в диапазоне 250-300 нм отнесен к ВНТ стабилизатору, присутствующем в исходном веществе (полоксамер). В Таблице 8 приведен перечень физико-химических свойств вышеупомянутых растворов до и после фильтрации.

Таблица 8
Физико-химические свойства раствора-плацебо с 17% полоксамером 407 до и после фильтрации
Проба	Tgel (°C)	Вязкостьа при 19°C (сП)	Оптическая плотность при 274 нм
До фильтрации	22	100	0,3181
После фильтрации	22	100	0,3081
аВязкость, измеренная при скорости сдвига 37,5 с-1

Вышеупомянутый процесс подходит для изготовления 17% Р407 композиций и включает температурный анализ температурно-влажностного режима помещения. Предпочтительно, максимальная температура 19°C снижает затраты на охлаждение емкости во время изготовления. В некоторых случаях для упрощения технологии изготовления используется емкость с кожухом для дальнейшего контроля температуры раствора.

Пример 18: Высвобождение ушного агента in vitro из автоклавированной тонкодисперсной пробы

17% полоксамер 407/1,5% ушной агент в буфере TRIS; 250,8 мг натрий хлорида (Fisher Scientific) и 302,4 мг трометамина (Sigma Chemical Co.) растворяют в 39,3 г стерильной фильтрованной DI воды, рН регулируется до 7,4 с помощью 1 М HCl. Используют 4,9 г вышеупомянутого раствора и соответствующее количество тонкодисперсного ушного агента суспендируют и тщательно диспергируют. 2 мл композиции переносят в 2-мл стеклянный пузырек (стеклянный пузырек для сыворотки Wheaton) и закупоривают 13-мм бутилкаучуком (пробки из кимбл стекла) и закатывают 13-миллиметровой алюминиевой крышкой. Пузырек помещают в Market Forge-sterilmatic автоклав (параметры настройки, медленнотекущие жидкости) и стерилизуют при 250°F в течение 25 минут. После обработки в автоклаве пробу оставляют для охлаждения до комнатной температуры. Пузырек помещают в холодильник и перемешивают в холодном состоянии до гомогенизации пробы. Обесцвечивание пробы или выпадение осадка после обработки в автоклаве регистрируют.

Растворение выполняется при 37°C в ячейках с зажимом (поликарбонатная мембрана диаметром 6,5 мм с размером пор 0,4 мкМ). 0,2 мл геля помещают в ячейку с зажимом и оставляют для застывания, затем 0,5 мл PBS буфера помещают в резервуар и взбалтывают при помощи орбитального шейкера Labline со скоростью 70 об/мин. Пробы берут каждый час [отбирается 0,1 мл и заменяется теплым буфером PBS, содержащим 2% PEG-40 гидрогенизированного касторового масла (BASF) для усиления растворимости ушного агента]. Проводится анализ проб на концентрацию ушного агента с помощью ультрафиолетового излучения при 245 нм в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой. Скорость высвобождения сравнивается с другими предложенными в настоящем описании композициями. Рассчитывается среднее время растворения [MDT] для каждой пробы.

Растворимость ушного агента в системе с 17% полоксамером вычисляется путем измерения концентрации ушного агента в супернатанте после центрифугирования проб при скорости 15000 об/мин в течение 10 минут в центрифуге Eppendorf 5424. Концентрация ушного агента в супернатанте измеряется с помощью ультрафиолетового излучения при 245 нм в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой..

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный AM-111, приготовленные в соответствии с описанными в настоящем описании процедурами, тестируются с помощью вышеприведенных процедур для определения скорости высвобождения ушного агента из каждой композиции.

Пример 19: Скорость высвобождения или MDT и вязкость композиции, содержащей натрий карбоксиметил целлюлозу

17% полоксамер 407/2% ушной агент-t/1% CMC (Hercules Blanose 7M): Раствор натрий карбоксиметил целлюлозы (CMC) (pH 7,0) в буфере PBS готовят путем растворения 205,6 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 372,1 мг натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата (Fisher Scientific), 106,2 мг натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата (Fisher Scientific) в 78,1 г стерильной фильтрованной DT воды. В буферный раствор впрыскивают 1 г Blanose 7M CMC (Hercules, вязкость 533 сП при 2%) и нагревают для ускорения растворения, после чего раствор охлаждают и в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 17,08 г полоксамера 407NF (Spectrum Chemicals). Композицию, содержащую] 7% полоксамерг 407NF/1 % СМС/2% ушной агент в буфере PBS, получают добавлением/растворением соответствующего количества ушного агента к 9,8 г вышеупомянутого раствора и перемешиванием до полного растворения ушного агента.

17% полоксамер 407/2% ушной агент/0,5% CMC (BIanose 7M65): Раствор натрий карбоксиметил целлюлозы (CMC) (рН 7,2) в буфере PBS готовят путем растворения 257 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 375 мг натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата (Fisher Scientific), 108 мг натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата (Fisher Scientific) в 78,7 г стерильной фильтрованной DI воды. В буферный раствор впрыскивают 0,502 г BIanose 7M65 CMC (Hercules, вязкость 5450 сП при 2%) и нагревают для ускорения растворения, после чего раствор охлаждают и в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 17,06 г полоксамера 407NF (Spectrum Chemicals). Раствор, включающий 17% полоксамер 407NF/1% СМС/2% ушной агент в буфере PBS, получают добавлением/растворением соответствующего количества ушного агента к 9,8 г вышеупомянутого раствора и перемешиванием до полного растворения ушного агента.

17% полоксамер 407/2% ушной агент/0,5% CMC (BIanose 7H9): Раствор натрий карбоксиметил целлюлозы (CMC) (pH 7,3) в буфере PBS готовят путем растворения 256,5 мг натрий хлорида (Fisher Scientific), 374 мг натрий гидрофосфата двухосновного дигидрата (Fisher Scientific), 107 мг натрий гидрофосфата одноосновного моногидрата (Fisher Scientific) в 78,6 г стерильной фильтрованной DI воды, затем в буферный раствор впрыскивают 0,502 г BIanose 7H9 CMC (Hercules, вязкость 5600 сП при 1%) и нагревают для ускорения растворения, после чего раствор охлаждают и в холодный раствор при перемешивании впрыскивают 17,03 г полоксамера 407NF (Spectrum Chemicals). Раствор, включающий 17% полоксамер 407NF/1% СМС/2% ушной агент в буфере PBS, получают добавлением/растворением соответствующего количества ушного агента к 9,8 г вышеупомянутого раствора и перемешиванием до полного растворения ушного агента.

Замеры вязкости выполняются с помощью вискозиметра Врукфилда RVDV-II+Р со шпинделем СРЕ-40, вращающимся со скоростью 0,08 об/мин (скорость сдвига 0,6 с^-1), оборудованного устройством контроля температуры с водяной рубашкой (температура линейно уменьшалась с 10-34°C при 1,6°C/мин). Tgel определяется как точка перегиба кривой, где увеличение вязкости происходит в результате золь-гель-перехода.

Растворение выполняется при 37°C в ячейках с зажимом [snapwells] (поликарбонатная мембрана диаметром 6,5 мм с размером пор 0,4 мкМ). 0,2 мл геля помещают в ячейку с зажимом и оставляют для застывания, затем 0,5 мл помещают в резервуар и взбалтывают при помощи орбитального шейкера Labline со скоростью 70 об/мин. Пробы берут каждый час, отбирается 0,1 мл и заменяется теплым буфером PBS. Проводится анализ проб на концентрацию ушного агента с помощью ультрафиолетового излучения при 245 нм в сравнении с внешней калибровочной типовой кривой. Рассчитывается среднее время растворения [MDT] для каждой пробы.

Композиции, включающие SB-203580, PD 169316, SB 202190, RWY 67657, AM-111, тонкодисперсный SB-203580 или тонкодисперсный АМ-111, приготовленные в соответствии с вышеописанными процедурами, тестируются с помощью вышеприведенных процедур для определения зависимости между скоростью высвобождения и/или средним временем растворения и вязкостью композиции, содержащей натрий карбоксиметил целлюлозу. Любая корреляция между средним временем растворения (MDT) и кажущейся вязкостью (измеренной при температуре на 2°C ниже температуры гелеобразования) регистрируется.

Пример 20: Нанесение композиции повышенной вязкости с антиапоптотическим агентом или проапоптотическим агентом на мембрану окна улитки

Готовят композицию в соответствии с Примером 2 и загружают в 5-мл силиконизированные стеклянные шприцы, подсоединенные к съемной инъекционной игле 15 калибра с соединением Люэра, На барабанную перепонку местно наносят лидокаин и делают небольшой разрез, позволяющий визуально наблюдать полость среднего уха. Конец иглы вводят в участок над мембраной окна улитки и композицию наносят непосредственно на мембрану окна улитки.

Пример 21: Тестирование in vivo внутрибарабанной инъекции модулирующей апоптоз композиции у морской свинки

Когорте из 21 морской свинки (Чарльз-ривер, самки весом 200-300 г) в барабанную полость инъецируют 50 мкл разных P407-DSP композиций, приведенных в описании, содержащих от 0 до 6% ушного агента. Динамика более быстрого выведения геля из композиции указывает на меньшее среднее время растворения (MDT). Таким образом, для определения оптимальных параметров для преклинических и клинических исследований тестируются объем инъекции и концентрация антиапоптотического агента или проапоптотического агента в композиции.

Пример 22: Кинетика in vivo пролонгированного высвобождения

Когорте из 21 морской свинки (Чарльз-ривер, самки весом 200-300 г) в барабанную полость инъецируют 50 мкл 17% Pluronic F-127 композиции, буфферизовааной при 280 мосмоль/кг и содержащей от 1,5 до 4,5% антиапоптотического агента или проапоптотического агента по весу композиции. Животным дают лекарство дозами в день 1. Профиль высвобождения для композиций определяют на основании анализа перилимфы.

Пример 23: Расчет верапамила для мышиной модели с акустической травмой

Индукция ототоксичности

Задействуют двенадцать Harlan Sprague-Dawley мышей весом от 20 до 24 г. Измеряют начальный слуховой стволовой потенциал (ABR) при 4-20 мГц. Мышей анестезируют и подвергают в течение 30 минут воздействию непрерывного чистого тона 6 кГц при громкости 120 децибелов.

Лечение

Контрольной группе (n=10) после акустической травмы вводят соляной раствор. Экспериментальной группе (n=10) вводят верапамил (2,0 мг/кг веса тела) после акустической травмы.

Электрофизиологическое тестирование

Вначале и через неделю после экспериментальной процедуры измеряется порог слышимости по критической слуховой стволовой реакции (ABR) на стимулы щелчка для каждого уха каждого животного. Животные помещаются в одностенную акустическую кабину (Industrial Acoustics Co, Бронкс, Нью-Йорк, США) на электрогрелке. Подкожные электроды (Astro-Med, Inc. Grass Instrument Division, Вест Уорик, Род-Айленд, США) вставили в темя (активный электрод), сосцевидный отросток (базис) и заднюю конечность (земля). Стимулы щелчка (0,1 миллисекунды) создаются компьютером и подаются в Beyer DT 48200-Ом микрофон, соответствующий ушной воронке, размещаемой во внешнем слуховом отверстии. Зарегистрированный ABR усиливается и преобразуется в цифровую форму предусилителем с питанием от батареи и подается в регистрирующую ABR систему от Tucker-Davis Technologies, которая обеспечивает компьютерный контроль стимула, запись и усреднение функций (Tucker Davis Technology, Гейнсвилл, Флорида, США). Стимулы с последовательно уменьшающейся амплитудой направляют с 5-дБ интервалами животному, а зарегистрированная заблокированная стимулом активность усредняется (n=512) и отображается. Порог определяется как уровень стимула между записью без видимой различимой реакции и четко идентифицируемой реакцией.

Пример 24; Расчет АМ-111 для мышиной модели с акустической травмой

Индукция ототоксичности

Задействованы двенадцать Harlan Sprague-Dawley мышей весом от 20 до 24 г. Измеряют начальный слуховой стволовой потенциал (ABR) при 4-20 мГц. Мышей анестезируют и подвергают в течение 30 минут воздействию непрерывного чистого тона 6 кГц при громкости 120 децибелов.

Лечение

Контрольной группе (n=10) после акустической травмы вводят соляной раствор. Экспериментальной группе (n=10) вводят АМ-111 (3,0 мг/кг массы тела) после акустической травмы.

Электрофизиологическое тестирование

Вначале и через неделю после экспериментальной процедуры измеряется порог слышимости по критической слуховой стволовой реакции (ABR) на стимулы щелчка для каждого уха каждого животного. Животные помещаются в одностенную акустическую кабину (Industrial Acoustics Co, Бронкс, Нью-Йорк, США) на электрогрелке. Подкожные электроды (Astro-Med, Inc. Grass Instrument Division, Вест Уорик, Род-Айленд, США) вставили в темя (активный электрод), сосцевидный отросток (базис) и заднюю конечность (земля). Стимулы щелчка (0,1 миллисекунды) создаются компьютером и подаются в Beyer DT 48 200-Ом микрофон, соответствующий ушной воронке, размещаемой во внешнем слуховом отверстии. Зарегистрированный ABR усиливается и преобразуется в цифровую форму предусилителем с питанием от батареи и подается в регистрирующую ABR систему от Tucker-Davis Technologies, которая обеспечивает компьютерный контроль стимула, запись и усреднение функций (Tucker Davis Technology, Гейнсвилл, Флорида, США). Стимулы с последовательно уменьшающейся амплитудой направляют с 5-дБ интервалами животному, а зарегистрированная заблокированная стимулом активность усредняется (n=512) и отображается. Порог определяется как уровень стимула между записью без видимой различимой реакции и четко идентифицируемой реакцией.

Пример 25: Нанесение состава с АМ-111 с повышенной вязкостью на мембрану окна улитки

Готовят состав в соответствии с Примером 2 и загружают в 5-мл силиконизированные стеклянные шприцы, подсоединенные к съемной инъекционной игле 15 калибра с соединением Люэра. На барабанную перепонку местно наносят АМ-111 и делают небольшой разрез, позволяющий визуально наблюдать полость среднего уха. Конец иглы вводят в участок над мембраной окна улитки и состав с АМ-111 наносят непосредственно на мембрану окна улитки.

Пример 26 - Оценка внутрибарабанного введения АМ-111 после острой акустической травмы

Объект исследования

Главной целью данного исследования является оценка безопасности и эффективности внутритимпанального лечения (IT) с помощью AM 111 при острой акустической травме.

Измерения первичных результатов

Среднее значение чистого тона (РТА) и распознавание слов как равновзвешенные критические точки; для количественной оценки разборчивости речи используется односложная система на 50 слов; улучшение РТА более чем на 20 дБ или по ВСЕМ или НЕКОТОРЫМ из частот, где дефицита больше 30 дБ, и/или улучшение WDS на 20% или более; дополнительно к абсолютным изменениям также определяется восстановление относительно контралатерального уха.

Полное восстановление - это восстановление до уровня в пределах 5% точек количественной оценки контралатеральной разборчивости речи или в пределах 5 дБ контралатерального РТА.

План исследования

Это будет многоцентровое, двойное слепое, рандомизированное, плацебо-контролируемое исследование с параллельными группами, в котором AM-111 сравнивается с плацебо при лечении острой акустической травмы. В список участников этого исследования включены 140 пациентов и рандоминизированы (1:1) в одну из двух групп лечения на основании последовательности рандомизации.

а. Пациентам в Группе I будут вводить IT AM-111 (1 инъекция 2 мг/мл AM-111 в устройстве доставки термообратимого геля; вводится один раз в неделю в течение месяца)

b. Пациентам в Группе II будут инъецировать в барабанную полость плацебо (1 инъекция устройства доставки термообратимого геля; вводится один раз в неделю в течение месяца)

Оценка слуха

Оценка слуха включает;

а. Среднее значение чистого тока (500 Гц, 1&2 кГц; 4, 6&8 кГц).

i. Затем определяют два значения РТА: низкочастотное значение (500 Гц - 2кГц) и высокочастотное значение (4-8 кГц).

b. Стапедиальный рефлекс

с. Тимпанометрия & угасание тона

d. Порог распознавания речи

До начала лечения у каждого пациента будет измерена потеря слуха (дважды перед назначением на исследование и один раз перед рандомизацией). Оценка слуха в 1, 2, 4&8 неделю, в 4&6 месяцы после начала лечения.

Основные критерии включения

- Больные мужчины или женщины в возрасте от 18 до 75 лет

- Потеря слуха, как минимум, 30 дБ, развивающаяся в течение 1 месяца

Критерии исключения

- Предварительное лечение стероидами перорально более 10 дней по любой причине в период предшествующих 30 дней

- 5 или более дней предварительного лечения стероидами перорально острой акустической травмы в период предшествующих 14 дней

- История флюктуирующего слуха.

Несмотря на то, что в настоящем описании приведены предпочтительные примеры осуществления настоящего изобретения, они представлены только в качестве примера. При практическом осуществлении настоящего изобретения выборочно используются различные варианты приведенных в настоящем описании примеров осуществления настоящего изобретения. Это предполагает, что объем изобретения определяется нижеследующей формулой изобретения, и что объем указанной формулы изобретения охватывает указанные способы и структуры, а также их эквиваленты.

1. Стерильная фармацевтическая композиция для использования при лечении заболеваний уха путем внутрибарабанного введения в мембрану окна улитки или вблизи мембраны окна улитки, содержащая приемлемый для лечения уха термообратимый водный гель, содержащий полимер полиоксипропилена и полиоксиэтилена, и антиапоптотический агент, причем замедленное высвобождение антиапоптотического агента в улитку происходит в течение, как минимум, 4 дней.

2. Композиция по п.1, в которой антиапоптотический агент ингибирует каскад передачи сигналов MAPK/JNK.

3. Композиция по п.1, в которой приемлемый для лечения уха термообратимый водный гель, содержащий полимер полиоксипропилена и полиоксиэтилена, представляет собой Полоксамер 407.

4. Композиция по п.1 для лечения акустической травмы.

5. Композиция по п.1, в которой антиапоптотический агент выбирается из группы: миноциклин; SB-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4-метилсульфинил фенил)-5-(4-пиридил)1H-имидазол); PD 169316 (4-(4-фторфенил)-2-(4-нитрофенил)-5-(4-пиридил)-1Н-имидазол); SB 202190 (4-(4-фторфенил)-2-(4-гидроксифенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол); RWJ 67657 (4-[4-(4-фторфенил)-1-(3-фенилпропил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-3-бутин-1-ол); SB 220025 (5-(2-амино-4-пиримидинил)-4-(4-фторфенил)-1-(4-пиперидинил)имидазол); SP 600125 (антра[1,9-сd]пиразол-6(2Н)-он), AS 601245 (1,3-бензотиазол-2-ил(2-[[2-(3-пиридинил)этил]амино]-4пиримидинил)ацетонитрил), JNK модулятор VI (H2N-RPKRPTTLNLF-NH2), JNK модулятор VIII (М-(4-амино-5-циано-6-этоксипиридин-2-ил)-2-(2,5-диметоксифенил)ацетамид), JNK модулятор IX (N-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидро-1-бензотиен-2-ил)-1-нафтамид), дикумарол (3,3'-метиленбис(4-гидроксикумарин)), SC-23 6 (4-[5-(4-хлорфенил)-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-ил]бензолсульфамид), СЕР-1347 (Cephalon) и СЕР-11004 (Cephalon), или их соли или комбинации.

6. Композиция по п.1, в которой антиапоптотическим агентом является AM-111.

7. Композиция по п.1, в которой антиапоптотический агент высвобождается в терапевтически эффективном количестве из композиции в течение, как минимум, 5 дней.

8. Композиция по п.1, в которой антиапоптотический агент находится в виде множества отдельных частиц.

9. Композиция по п.1, в которой антиапоптотический агент находится в основном в виде микронизированных частиц.

10. Композиция по п.1, обеспечивающая практическую осмолярность в диапазоне от приблизительно 250 до приблизительно 320 мосмоль/л.