Легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный индуктор интерферона γ

Авторы патента:

Колесникова Ольга Петровна (RU)

Панин Лев Евгеньевич (RU)

Загребельный Станислав Николаевич (RU)

Ямковая Татьяна Витальевна (RU)

Ямковой Виталий Иванович (RU)

C07H21/02 - с рибозилом в качестве сахаридного радикала

A61P37/02 - иммуномодуляторы

A61K31/7105 - Лекарственные препараты, содержащие органические активные ингредиенты

Владельцы патента RU 2496783:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению интерфероногенных противовирусных препаратов на основе дрожжевой РНК, и может быть использовано в медицине. В качестве индуктора IFN-γ используется легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК 80-90%, олеиновая кислота 10-20%. Изобретение позволяет эффективно индуцировать выработку интерферона γ (IFN-γ) с использованием доступных и недорогих компонентов. 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии, медицины и фармацевтической промышленности, в частности к интерфероногенным противовирусным препаратам на основе дрожжевой РНК.

В клинической практике для регуляции интерфероногенеза и лечения вирусных инфекций, таких как гепатит С, грипп, ВИЧ-инфекции и др., применяются препараты на основе двуспиральной РНК (дсРНК), например Ридостин [1].

Наиболее близким к предлагаемому является липосомальный индуктор интерферона, представляющий собой водно-солевой раствор дсРНК, полученной из киллерных штаммов дрожжей, одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, фосфатидилхолина, холестерина, альфа-токоферол ацетата, сахарозы и хлорида натрия [2]. Входящие в состав данного индуктора жиры образуют комплексы с РНК, что придает последней амфифильные своства, защищает от действия нуклеаз и способствует проникновению ее в организм [3]. Как следствие, липосомальный индуктор эффективно стимулирует биосинтез эндогенного интерферона.

Однако он состоит из большого числа редких и дорогостоящих соединений и поэтому малопригоден для массового производства.

Целью настоящего изобретения является создание эффективного индуктора интерферона γ (IFN-γ) с использованием доступных и недорогих компонентов.

Цель достигается тем, что в качестве индуктора IFN-γ используется легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК 80-90%, олеиновая кислота 10-20% (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2).

Пример осуществления предлагаемого способа 1

Препарат Виталанг-1 (чистая гидрофильная высокополимерная дрожжевая РНК) с теоретической весовой экстинкцией 20,0 ОЕ₂₆₀/мг выделяли по методу [4]. Препарат хорошо растворяется в воде (30 мг препарата растворяется в 1 мл воды при комнатной температуре в течение нескольких секунд).

Препарат Виталанг-2 с весовой экстинкцией 17,8 ОЕ₂₆₀/мг выделяли по методу [5]. Препарат растворяется в воде удовлетворительно (30 мг препарата растворяется в 1 мл воды при комнатной температуре только через 30-60 мин при периодическом встряхивании), водный раствор мылкий, нерастворенные крупинки скользкие.

Пример осуществления предлагаемого способа 2

Содержание олеиновой кислоты в препарате Виталанг-2 рассчитывали по весовой экстинкции следующим образом: из теоретической весовой экстинкции вычитали весовую экстинкцию препарата Виталанг-2, полученное значение делили на теоретическую весовую экстинкцию и умножали на 100%. Результат 11,0%.

Пример осуществления предлагаемого способа 3

Содержание олеиновой кислоты в препарате Виталанг-2 определяли по обесцвечиванию бромной воды следующим образом: к 4 мл водного раствора препарата Виталанг-1 с оптической плотностью 26,6 ОЕ₂₆₀/мл и к 4 мл водного раствора препарата Виталанг-2 с оптической плотностью 28,6 ОЕ₂₆₀/мл добавляли по 100 мкл бромной воды, растворы перемешивали, переливали в 1 см прямоугольные кварцевые кюветы, закрывали их парафильмом и измеряли в течение 4 ч оптическую плотность при 445 нм первого раствора против второго. Оптическая плотность увеличивалась и через 2 ч от начала реакции достигала плато - 0,1 ОЕ₄₄₅/мл. Полученное значение делили на 145 (молярный коэффициент экстинкции бромной воды при 445 нм) и умножали на 282,18 (молекулярная масса олеиновой кислоты). Получали концентрацию олеиновой кислоты в растворе препарата Виталанг-2. Концентрацию высокополимерной РНК в этом растворе рассчитывали делением его оптической плотности при 260 нм на его весовую экстинкцию. Две концентрации суммировали, концентрацию олеиновой кислоты делили на полученную сумму и умножали на 100%. Результат 10,8%.

Пример осуществления предлагаемого способа 4

Для определения способности препаратов Виталанг-1 и Виталанг-2 проникать через биологические мембраны в 3 одинаковых стеклянных флакончика на 6 мл с завинчивающимися пробками помещали по 7 продолговатых сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus и заливали их:

1-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-1 (27,3 ОЕ₂₆₀/мл),

2-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-2 (27,1 ОЕ₂₆₀/мл),

3-й - 4,8 мл дистиллированной воды.

Через 22 ч инкубации при комнатной температуре замеряли оптическую плотность растворов в 1-м и 2-м флакончиках против 3-го. Получилось: в 1-м - 26,4 ОЕ₂₆₀/мл, во 2-м - 22,9 ОЕ₂₆₀/мл.

Т.е. клетки поглотили Виталанга-2 в 4,7 раза больше, чем Виталанга-1. Далее растворы из флакончиков сливали и промывали каждый 5-ю порциями по 5 мл дистиллированной воды. Замерив оптическую плотность 5-й порции из 1-го и 2-го флакончика против 3-го, получили:

в 1-м - 0,024 ОЕ₂₆₀/мл,

во 2-м - 0,019 ОЕ₂₆о/мл.

Сочные мешочки во всех 3-х флакончиках измельчали стеклянной палочкой, из полученных суспензий отбирали по 100 мкл раствора и, разбавив его в 50 раз дистиллированной водой, замеряли оптическую плотность растворов из 1-го и 2-го флакончика против 3-го. Получилось:

в 1-м - 0,065 ОЕ₂₆₀/мл,

во 2-м-0,318 ОЕ₂₆₀/мл.

Т.е. Виталанг-2 проникает через биологические мембраны минимум в 4, раза эффективнее Виталанга-1.

Пример осуществления предлагаемого способа 5

Для определения способности препарата Виталанг-2 индуцировать биосинтез эндогенного IFN-γ использовали мышей самцов гибридов CBF1 8-10 недельного возраста, полученных из экспериментально-биологической клиники лабораторных животных СО РАМН (Новосибирск). До и в период эксперимента контрольные и опытные животные содержались в виварии в одинаковых условиях: стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой (не более 10 особей) на стандартном рационе, в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [6].

Концентрацию IFN-y в pg/ml в сыворотке крови мышей определяла согласно рекомендациям производителя соответствующего теста (Mouse IFN-y ELISA Set BD Biosciences).

Виталанг-2 растворяли в среде RPMI 1640, встряхивая 30 мин \ вводили мышам (n=5 в каждой группе) в различных дозах (1, 5 и 10 мг/кг однократно внутримышечно в объеме 0,1 мл. Забор крови на сыворотку производили через 3, 6, 9, 12, 24 и 48 ч. Ридостин (положительный контроль растворяли и вводили аналогично в дозе 0,07 мг/кг.

Результаты определения IFN-γ в pg/ml в сыворотке крови представлены в таблице в виде средних значений:

	Ридостин 0,07 мг/кг	Виталанг-2 1 мг/кг
3 ч	348,2	599,2
6 ч	273,2	67,4
9 ч	920	252
12 ч	618,2	592
24 ч	330,5	182,6
48 ч	773,2	1030,5

Как видно из таблицы, Виталанг-2 в дозе 1 мг/кг стимулирует большую продукцию IFN-γ по сравнению с Ридостином на сроке 3 и 48 ч после введения.

Изменение концентрации IFN-γ в pg/ml в сыворотке крови через 9

ч после введения Виталанга-2 в дозах 1,5 и 10 мг/кг представлено ниже:

Отрицательный контроль	Виталанг-21 мг/кг	Виталанг-25 мг/кг	Виталанг-210 мг/кг
71,2	252	1252	1430,2

Как видно из таблицы, Виталанг-2 на сроке 9 ч после введения классически дозозависимо стимулирует продукцию IFN-γ.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты. - М.: Медицина, 1998. - С.147-151.

2. Патент RU 2306936 С2, 10.08.2005.

3. Патент US 6071533 А, 06.06.2000.

4. Патент RU 2392328 С2, 10.10.2009.

5. Патент RU 2403288 С1, 10.11.2010.

6. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Страсбург, 1986.

Индуктор интерферона γ на основе высокополимерной дрожжевой РНК, отличающийся тем, что в качестве действующего начала он содержит легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК 80-90%, олеиновая кислота 10-20%.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой способ ослабления экспрессии мРНК TNFR1 у субъекта. .

Иммуногенные вещества, содержащие адъювант на основе полиинозиновой кислоты-полицитидиловой кислоты // 2462264

Рнки-ингибирование репликации вируса гриппа // 2448974

Способ получения высокополимерной рнк из отработанных пивных дрожжей // 2435862

Изобретение относится к области биохимии. .

Высокополимерная рнк из пекарских дрожжей, свободная от примесных ассоциатов рнк с белками и полисахаридами // 2430969

Изобретение относится к области биотехнологии. .

Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей // 2392329

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделению физиологически активных соединений. .

Способ получения солей 5'-трифосфатов природных и модифицированных дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов // 2348643

Изобретение относится к способу получения солей 5'-трифосфатов природных и модифицированных дезокси- и рибоолигонуклеотидов, заключающемуся в том, что исходный реагент - защищенный природный или модифицированный олигонуклеотид, дезокси- или риборяда, в виде 0,1-0,05 М раствора, монофосфорилируют в пиридине 2-3-кратным избытком хлорокиси фосфора в течение 10-15 минут, далее полученное активированное производное олигонуклеотида обрабатывают 10-15-кратным избытком раствора бис-трибутиламмонийной соли пирофосфата в ацетонитриле и 20-кратным избытком третичного амина и выдерживают реакционную смесь в течение 15-30 минут с последующим разложением промежуточного триметафосфатного производного олигонуклеотида триэтиламмонийбикарбонатным буфером, очисткой целевого продукта с помощью обращенно-фазовой хроматографии (ОФХ), удалением защитных групп с функциональных групп олигонуклеотида и повторной очисткой целевого продукта с помощью ОФХ.

Способ получения солей 5'-трифосфатов дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов // 2326888

Изобретение относится к способу получения солей 5'-трифосфатов дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов общей формулы, указанной в описании. .

Антитело, обладающее селективностью по отношению к рецептору лиганда, индуцирующему апоптоз, ассоциированный с фактором некроза опухоли, и его использование // 2298013

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению моноклональных антител, и может быть использовано в медицинских и диагностических целях. .

V-d-j олигонуклеотид т-клеточного рецептора, пара праймеров, олигонуклеотидный зонд, способ обнаружения клона mbp83-99v13.1 т-клеток, экспрессирующих мотив lgraglty т-клеточного рецептора, набор, способ лечения аутоиммунного заболевания и способ его мониторинга // 2251552

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно к последовательности Т-клеточного рецептора, обнаруженного у страдающих расширенным склерозом пациентов, и может быть использовано в диагностических и лечебных целях.

Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью // 2496510

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью. Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, характеризующийся тем, что растительную композицию, состоящую из травы пустырника обыкновенного, травы горца птичьего, цветков ноготков лекарственных, корневищ с корнями солодки голой, корневищ с корнями вздутоплодника сибирского, плодов шиповника, плодов лимонника китайского, семян льна обыкновенного, последовательно экстрагируют 60-70% этиловым спиртом дважды, 40-50% этиловым спиртом - двукратно и водой очищенной - однократно, при определенных условиях, далее водно-спиртовые извлечения концентрируют под вакуумом, водные кубовые остатки объединяют с водным извлечением, фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, высушивают в вакуум-сушильном шкафу с последующим измельчением.

Пиридин-2-ильные производные в качестве иммуномодулирующих агентов // 2494099

Изобретение относится к производным пиридина формулы (I), где A, R1, R2, R3, R4, R5, R6 и R7 приведены в описании, их получению и применению в качестве фармацевтически активных соединений, обладающих агонистической активностью в отношении SP1/EDG1 рецептора.

Способ лечения панкреонекроза // 2492527

Изобретение относится к медицине, а именно экспериментальной медицине, и может быть использовано для разработки и изучения эффективного лечения панкреонекроза. .

Способ лечения вагинальных инфекций // 2491956

Изобретение относится к области медицины и предназначено для лечения вагинальных инфекций. .

Способ получения иммунотропного средства как основы для препарата "иммунофлан" // 2491949

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения иммунотропного средства. .

Способ получения лекарственного препарата иммуномодулятора для лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний // 2491944

Изобретение относится к медицине и касается способа получения лекарственного препарата иммуномодулятора для лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний на основе пептидной фракции, выделенной из ткани или клеток селезенки млекопитающих (в частности селезенки свиней или крупного рогатого скота).

Лечение фиброзирующих нарушений // 2491934

Моноклональное антитело-антагонист против cd40 человека // 2491295

Композиция и способы, применяемые для предупреждения или лечения конъюнктивитов, ассоциированных с вирусом герпеса i семейства кошачьих // 2490020

Применение антитела для лечения аутоиммунных заболеваний у пациента с неадекватным ответом на ингибитор tnf-альфа // 2489166

Способ получения микрокапсул // 2496483

Изобретение относится к области микрокапсулирования лекарственных препаратов, витаминов, гербицидов, ароматизаторов и полисахаридов. Получение микрокапсул осуществляется физико-химическим способом осаждения нерастворителем с использованием бензола в качестве осадителя.