Способ дифференциальной диагностики синдрома сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток

Авторы патента:

Тухватуллина Зульфия Габидуллаевна (UZ)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

G01N33/483 - физический анализ биологических материалов

Владельцы патента RU 2498301:

Гарифуллина Эльмира Фанисовна (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата. При схожей гистологической картине, описываемой как отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз, резкое расширение сосудов, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата, представленном CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^- лимфоцитами, дополнительно проводят морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи, считают их количество на 1 мм длины эпидермиса, измеряют их площадь и ядерно-цитоплазматическое соотношение. При увеличении количества антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса в 2,8 и более раза, чем в норме, увеличении площади антигенпредставляющих клеток в 1,36 и более раза, чем в норме, и увеличении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 1,65 и более раза, чем в норме, диагностируют эритродермии. При уменьшении количества антигенпредставляющих клеток в 1,3 и более раза чем в норме, уменьшении площади антигенпредставляющих клеток в 1,9 и более раза, чем в норме и уменьшении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 2 и более раза, чем в норме, диагностируют синдром Сезари. Использование изобретения обеспечивает повышение точности диагностики начальных клинических проявлений синдрома Сезари, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для гистологического способа дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах.

Известен способ диагностики T-клеточных лимфом кожи (эритродермических вариантов), заключающий в проведении цитологического анализа взятого у больного мазка крови, который фиксируют, проводят рибонуклеазную обработку, окрашивают галлоцианин-хромовыми квасцами, микроденситометрируют интерфазный хроматин лимфоцитов, на основании полученных параметров (OD4 - оптическая плотность эухроматина; FORM_P - форм-фактор ядра; IOD2 - интегральная оптическая плотность гетерохроматина; AREA - площадь ядра) рассчитывают показатель: DF=-0,14379^•OD4+0,00003^•IOD2+10,4952^•FORM_P+0,0001^•AREA-11,1241 и при отрицательном значении этого показателя диагностируют T-клеточную лимфому кожи [патент RU 2104526, 1998 г. Авторы: Коган Э.М., Жукоцкий А.В., Копылов В.Ф., Лезвинская Е.М., Черныш С.А.]. Описанный способ позволяет проводить дифференциальную диагностику эритродермических вариантов при T-клеточных лимфомах кожи от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах путем выявления злокачественных форм лимфоцитов в мазках крови, но не учитывает морфологические изменения, проходящие в коже, как заявляемый способ. Тогда, как известно, что синдром Сезари - это первичная T-клеточная лимфома кожи с лейкемизацией, в морфогенезе которой эпидермису, как составной части кожи, принадлежит первичная инициирующая роль в начальных эффекторных иммунных реакциях [Казаков Д.В., Кемпф В., Самцов А.В., Бург Г. Злокачественные опухоли лимфоидной ткани с поражением кожи: современные принципы диагностики и краткая характеристика основных нозологических форм // Вестник дерматологии и венерологии. - 2003. - №1. - С.23-33.]. К тому же патологические формы лимфоцитов с интерфазным хроматином могут наблюдаться и при синдроме Сезари и при эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, для их дифференциальной диагностики нужен мультипараметрический анализ лимфоцитов [Willemzer R., Van Vloten W.A., Hermans J.,mDamstug M.J.N., MeiferecJ.L.M. Diagnostic criteria in Sezary syndrome: a multiparameter lymphosytes in 32 patients with erytrodermia. - J.Invest. Derm.1989.81, 5,392-397].

Известен способ диагностики эритродермий, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах от псевдолимфом кожи путем иммунофенотипирования клеток инфильтрата, в котором автор показал, что в пораженной коже больных псевдолимфомами и при эритродермиях, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах возможна клональная перестройка лимфоцитов со сменой иммунофенотипа [Burg G. Atlas of cancer of the skin. - New York. - 2006. - C.275-280]. Однако, следует отметить, что клетки лимфоидного инфильтрата при лимфомах кожи (эритродермических вариантах) проходят дифференцировку в эпидермисе, меняя свой фенотип [Burg G., Zwingers Т., Staegemeiz Е. Et al. Intrarater variabilities in the evolution of cutaneous lymphoma project group // Derm. http://Clin.-1994.-Vol.12-p 311-314]. Поэтому обосновывать дифференциальную диагностику эритродермий, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах от синдрома Сезари как эритродермического варианта T-клеточной лимфомы кожи только путем иммунофенотипирования клеток инфильтрата не информативно, особенно на ранних стадиях заболевания. Описанный способ иммунофенотипирования клеток инфильтрата позволяет поставить диагноз на поздних стадиях, когда выражена клиническая картина заболевания и сформировался иммунофенотип клеток инфильтрата, но не решает проблем ранней дифференциальной диагностики начальных проявлений синдрома Сезари и эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах и не позволяет обосновать выбор тактики раннего адекватного рационального лечения, в отличие от заявляемого способа. Наши контраргументы согласуются с данными других авторов [Молочков В.А., Лезвинская Е.М., Молочков А.В. Псевдолимфомы-прелимфомы-лимфомы кожи // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 2004. №5. С.4-7].

Известен способ дифференциальной диагностики заболевания кожи путем компьютерной морфометрии ядер лимфоцитов дермы в гистологическом срезе кожи (заявка на изобретение RU 2010143359 от 27.04.2012, Авторы Кунгуров Н.В., Кохан М.М. Куклин И.А., Римар О.Г.). Авторы проводят дифференциальную диагностику грибовидного микоза от хронических доброкачественных дерматозов путем планиметрических исследований: определяют удельную плотность ядер лимфоцитов на единицу площади имиджа среза, периметр и усредненный диаметр ядра, фактор формы и при удельной средней плотности ядер лимфоцитов на единицу площади более 0,0141±0,0016(ДИ 0,01301; 0,01932), средней площади ядер более 13,661±0,0802 (ДИ 12,912; 14,9934), среднего периметра ядер более 15,05±0,089 (ДИ 14, 5178; 17,2189), среднего диаметра Фере более 4,59±0,014 (ДИ 4,48790; 4, 9745), среднего значения фактора формы менее 0,8452±0,005 (ДИ 0,8311; 0,8423) авторы диагностируют грибовидный микоз, а при отсутствии у диагностируемого больного указанных векторов изменений параметров и присутствия статистически значимых различий менее 0,05 по сравнению с цифровыми значениями параметров грибовидного микоза диагностируют хронический доброкачественный дерматоз. Однако следует отметить, что лимфоциты инфильтрата дермы проходят дифференцировку в эпидермисе, меняя свой фенотип (Молочков В.А., Лезвинская Е.М., Молочков А.В. Псевдолимфомы-прелимфомы-лимфомы // Рос. журн. кож. вен. бол. -2004 - №5 - с.4-7). К тому же доказано, что в морфогенезе грибовидного микоза эпидермису принадлежит первичная инициирующая роль в начальных эффекторных иммунных реакциях (Edelson R.L. Cutaneous T-cell lymphoma: mycosis fungoides, Sezary syndrome, and other variants // J.Am. Acad. Dermotol. - 2009. - vol.2. - P.89-106). Поэтому обосновывать дифференциальную диагностику грибовидного микоза от хронических доброкачественных дерматозов только путем определения планиметрических характеристик ядер лимфоцитов вышеуказанным способом неинформативно. Данный способ не позволяет провести дифференциальную диагностику синдрома Сезари и эритродермией, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, т.к. не учитывает морфометрический профиль антиген представляющих клеток эпидермиса в отличии от заявляемого способа.

Прототипом изобретения является способ гистологической диагностики лимфом кожи, в том числе синдрома Сезари, как лейкемического варианта грибовидного микоза (T-клеточной лимфомы кожи), путем микроскопического исследования биоптатов пораженной кожи [Ламоткин И.А., Бурлаченко О.В., Тарасенко Ю.Г. Результаты гистологических исследований биоптатов кожи различных клинических типов грибовидного микоза // Рос. журн. кож. вен. болезней. - 2006. - №1. - с.4-6]. Авторы проводят гистологическую диагностику грибовидного микоза и его различных клинических типов путем световой микрокопии, основываясь на следующих основных морфологических критериях: 1) изменение структуры эпидермиса - наличие акантоза с широкими, местами сливающимися эпидермальными отростками; 2) наличие в дерме полиморфноклеточного инфильтрата, включающего атипичные лимфоциты; наличие проникновения лимфоцитов в эпидермис. Прототип изобретения позволяет провести световую микроскопию визуально, позволяет дать качественное описание морфологических изменений в коже, но не дает возможности объективизировать и количественно оценить полученные результаты, в отличие от заявляемого способа. Хотя известно, что визуальная гистологическая картина далеко не всегда отражает нозологическую специфичность процесса в виду выраженного воспалительного компонента биопсийного материала, может быть весьма вариабельной в зависимости от клинических проявлений и стадии заболевания, при этом диагностическое значение приведенных критериев не одинаково, не всегда является достоверным. Многие проблемы детализации гистологического диагноза решаются по-разному с учетом опыта, знаний, квалификации специалиста с одной стороны, неисчерпаемым разнообразием опухолевых структур и определенными границами морфологического метода с другой [Скрек С.В., Родионов А.Н., Разнатовский К.И. Современная классификация лимфом кожи. Характеристики иммунного статуса лимфоидных клеток у больных с различными видами лимфом кожи // Клиническая дерматология и венерология. - 2008. №2. с.82-88].

Задачей изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток, путем световой микроскопии, включения в обследование пациентов гистологических, иммунофенотипических, морфометрических исследований, для получения обоснования выбора тактики раннего адекватного рационального лечения.

Технический результат - повышение точности диагностики начальных клинических проявлений синдрома Сезари путем его ранней дифференциальной диагностики от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, за счет объективизации, количественной оценки, учета морфологических изменений, проходящих в коже при этих заболеваниях.

Предлагаемый способ дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток, включает проведение гистологического исследования биоптатов пораженной кожи, иммунофенотипирование клеток инфильтрата по общепринятым методикам. [Цветкова Г.М., Мордовцев В.В. Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи.- Москва. Изд-во Медицина. - 1996. - 263 с.; Кунгуров Н.В., Кохан М.М., Сазонов С.В. и др. Алгоритмы клинико-лабораторной диагностики злокачественных лимфом кожи // Клиническая дерматология и венерология. - 2002. №6. С. 16-19]. Для проведения световой микроскопии биоптаты кожи фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина (pH - 7,3)- После обезвоживания в спиртах восходящей концентрации биоптаты кожи заливают в парафиновые блоки, срезы толщиной 4 мкм, полученные с блоков, окрашивают гематоксилином и эозином, просматривают в световом микроскопе, описывают морфологические изменения. Для иммуногистохимического исследования повторные срезы с парафиновых блоков предварительно обрабатывают на водяной бане, высушивают и наносят антитела [Izban K.F., Hsi E.D., Ackan S. Immunohistochemical analysis of mycosis fungoides on paraffin - embedded tissue sections.//Mod. Pathol. - 2008. - V.11. p.978-982.]. В работе используют антитела CD1a фирмы «Novocastra», панель моноклональных антител CD2, CD3, CD4, CD5, CD43, CD45RO набора «Fast immune», фирмы «Becton Dickinson», США. Результаты иммуногистохимических реакций визуализируют с помощью системы "Enviston (Dako)" и хромогена CD1a. Полученные результаты интерпретируют согласно классификации ВОЗ/EORTC [Молочков В.А., Ковригина A.M., Овсянникова Г.В. Т-клеточные лимфомы кожи: современные подходы к клинико-морфологической диагностике (согласно классификации ВОЗ/EORTC) и лечению // Росс. журн. кож. вен. болезней. - 2009. - №3. - С.4-9]. Количество антигенпредставляющих клеток подсчитывают на 1 мм длины эпидермиса по экспрессии CD1a⁺. Учитывая особенности морфологии антигенпредставляющих клеток (отростчатая цитоплазма, сложная форма ядра) используют метод оценки площади, занимаемой окрашенным продуктом иммуногистохимической реакции, выражая результат в мкм² и метод подсчета ядерно-цитоплазматического соотношения, выражая результат в условных единицах [Автандилов Г.Г. Компьютерная морфометрия. - Москва. Изд-во Медицина. - 1999. 320 с.]. Микрофотографирование проводят с помощью камеры «Leica DFS 420» и обрабатывают с помощью пакета компьютерного анализа изображения Leica Qwin standart v3.1.0. Статистическую обработку данных проводят с помощью Statistica 7.0 с применением методов непараметрической статистики. После этого при схожей гистологической картине при синдроме Сезари и эритродермиях, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах, описываемых как отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз, резкое расширение сосудов, отек дермы диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата, представленном CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^- лимфоцитами, дополнительно проводят морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи с помощью компьютера, совмещенного со световым микроскопом «Leica» фирмы «Leitz Biomed» (Германия), используя окуляр-микрометр и окулярную сетку (на 100 точек пересечения) [Автандилов Г.Г. Компьютерная морфометрия. - Москва. Изд-во Медицина. - 1999. 320 с.]. Считают количество антигенпредставляющих клеток на 1мм длины эпидермиса, измеряют площадь и ядерно-цитоплазматическое соотношение антигенпредставляющих клеток. При увеличении количества антигенпредставляющих клеток в 2,8 и более раза, чем в норме, увеличении площади антигенпредставляющих клеток в 1,36 и более раза, чем в норме и увеличении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 1,65 и более раза, чем в норме диагностируют эритродермии, возникающие при доброкачественных воспалительных дерматозах. При уменьшении количества антигенпредставляющих клеток в 1,3 и более раза, чем в норме, уменьшении площади антигенпредставляющих клеток в 1,9 и более раза, чем в норме и уменьшении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 2 и более раза, чем в норме - диагностируют синдром Сезари (табл.1). Полученные результаты можно объяснить первичными эффекторными иммунными реакциями в коже, проявляющимися морфофункциональной активностью антигенпредставляющих клеток, с увеличением их морфометрического профиля при эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах и, напротив, наличием деструктивных изменений в антигенпредставляющих клетках, с уменьшением их морфометрического профиля при синдроме Сезари [Ярилин А.А. Иммунологические функции кожи // Вестник эстетической медицины. - 2009. - №8(2). - с.72-7.].

Авторами в научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об использовании морфометрических исследований с измерением количества, площади и ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна». Исследованиями авторов была впервые доказана возможность дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах путем морфометрических исследований антигенпредставляющих клеток с измерением их количества, площади и ядерно-цитоплазматического соотношения. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Пример № 1. Больной С.В., 1939 года рождения, поступил в клинику Республиканского кожно-венерологического диспансера (РКВД) с жалобами на мучительный зуд, покраснение и отек всего кожного покрова. Считал себя больным в течение 3-х лет, когда появились сначала краснота и шелушение, а затем мокнутие кистей и предплечий. Пациент на протяжении 38 лет трудился в сельском хозяйстве: занимался выращиванием различных культур, имелись контакты с пестицидами и химическими удобрениями. Неоднократное лечение по поводу диагностируемой хронической экземы десенсибилизирующими препаратами и местной мазевой терапией проводилось с временным эффектом. После курортного лечения в санатории "Якты-куль", где больной получал кварц и горячие минеральные ванны, патологический процесс резко прогрессировал по всему кожному покрову по типу эритродермий, в связи, с чем больной был госпитализирован с направительными диагнозами эритродермия, возникшая при длительном течении хронической экземы? Синдром Сезари? При обследовании в клиническом анализе крови - анемия, число эозинофилов в пределах нормы, в биохимическом анализе крови гиперлипид- и гиперхолестеринемия. Иммунологические исследования показали сниженную T-хелперную активность и незавершенный фагоцитоз. Рентгеноскопия и ультразвуковые исследования внутренних органов патологии не выявили. Антиоксидантная активность печени была резко снижена до 12,78 %. Кожно-патологический процесс носил распространенный характер (с головы до пят) и представлял диффузную инфильтрацию, покрытую корками и крупнопластинчатыми чешуйками. Кожа была "доскообразна" на ощупь, с трудом собиралась в складку. Отмечалось поредение, выпадение волос и мелкопластинчатое шелушение на голове, гиперкератоз ладоней и подошв. Подчелюстные, подмышечные и кубитальные лимфоузлы были увеличены до горошины, паховые - до грецкого ореха. При гистологическом исследовании были отмечены отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз. В дерме резкое расширение сосудов, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис. Иммунофенотип клеток инфильтрата CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^-. Заключение: синдром Сезари? Эритродермия неясной этиологии? Для уточнения диагноза больному были проведены морфометрические исследования: количество антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса составило 9, их площадь была ровна 51 мкм, ядерно-цитоплазматическое соотношение 0,7. Данные параметры укладывались в морфометрический профиль антигенпредставляющих клеток при эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах (табл.1). С учетом клинико-лабораторных данных, гистологических, морфометрических исследований, иммунофенотипирования клеток инфильтрата был установлен диагноз: эритродермия, возникающая при доброкачественных воспалительных дерматозах, что позволило обосновать выбор тактики детоксикационной терапии. Полный регресс заболевания наступил после 3-х курсов плазмофереза. В настоящее время больной находится на диспансерном наблюдении с диагнозом: регресс эритродермий, возникший при длительно текущей хронической экземы.

Пример № 2. Больная К., 67 лет, пенсионерка, поступила в клинику РКВД с предположительными диагнозами синдром Сезари? Синдром псевдолимфомы кожи? Эритродермия неясной этиологии? При поступлении предъявляла жалобы на сильный постоянный зуд, озноб, повышение температуры тела до 38,5°C, покраснение всего кожного покрова. Считала себя больной в течение месяца, когда после лечения в санатории «Янган тау», где получала по поводу радикулита минеральные ванны и грязелечение, после 8 процедуры появилось покраснение кожи туловища. Объективно при поступлении: процесс универсального характера, по типу эритродермий. Кожные покровы ярко-красного цвета, инфильтрированы, лихенифицированны в области кожных складок, обильно покрыты крупнопластинчатыми чешуйками. Шелушение особенно выражено на нижних конечностях, где имелись многочисленные экскориации и корочки. На ладонях и подошвах отмечался гиперкератоз. Подчелюстные, шейные, подмышечные, паховые лимфоузлы были увеличены до 3 см в диаметре, плотноэластической консистенции, подвижные, безболезненные. В общем анализе крови лейкоцитоз, ускорение СОЭ, количество эозинофилов в норме. Заключение иммунолога - напряженность клеточного и гуморального иммунитета. При биохимическом обследовании была выявлена резко сниженная антиоксидантная активность печени. Данные рентгеноскопии и ультразвуковых исследований в пределах возрастной нормы. При гистологическом исследовании было обнаружено: отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз. В дерме сосуды резко расширены, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис. Иммунофенотип клеток инфильтрата CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^-. Гистологическое заключение описательного характера, иммунофенотипирование клеток инфильтрата не позволили остановиться ни на одном из направительных диагнозов. Морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток выявили: площадь антигенпредставляющих клеток составила 54,3 мкм; ядерно-цитоплазматическое соотношение 0,79. Количество антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса было 8. Данные параметры укладывались в морфометрический профиль антигенпредставляющих клеток при эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах (табл.1). С учетом анамнестических, лабораторных данных, клинико-гистологической картины, иммунофенотипирования клеток инфильтрата, морфометрических исследований был установлен диагноз эритродермия, возникшая при синдроме псевдолимфомы, что позволило обосновать выбор тактики детоксикационной терапии. Больной была проведена детоксикационная терапия, включающая курс плазмофереза в сочетании с энтеросорбентами и антигистаминными препаратами. В результате проведенной терапии гиперемия и инфильтрация стали менее выраженными, шелушение отсутствовало, появились участки здоровой кожи, лимфатические узлы уменьшились, температура нормализовалась. После 2-х кратной инъекции дипроспана удалось добиться клинического излечения.

Пример 3. Больной К., 62 лет, обратился с жалобами на высыпания на руках, сопровождающиеся постоянным сильным зудом, нарушающим сон. Из анамнеза известно, что в течение 22 лет страдал контактным дерматитом, перешедшим в хроническую экзему с локализацией процесса на коже рук, а 4 года назад появились высыпания на лице. Все эти годы подвергался инсоляции, работая строителем (каменщиком) на открытом воздухе. В летний период пациент активно загорал. В июле 2010 года в течение месяца во время прямого воздействия солнечных лучей заметил изменения кожи лица и рук в виде уплотнения и повышенной складчатости, которые сопровождались постоянным сильным зудом. Продолжал работать каменщиком на стройке. Летом того же года клинические признаки заболевания усилились, появились покраснение и отек всего кожного покрова в связи с чем был госпитализирован в РКВД с направительными диагнозами: Эритродермия вторичная, возникшая при контактном дерматите и экземе? синдром Сезари? При поступлении кожно-патологический процесс был распространен по всему кожному покрову. Кожа была утолщена, инфильтрирована, с подчеркнутым кожным рисунком, испещрена глубокими бороздами, имела красный цвет. На этом фоне располагались папулезные элементы розово-красного цвета и множественные линейные экскориации, покрытые геморрагическими корочками. Рост волос на голове был нарушен. Периферические лимфоузлы увеличены величиной с фасоль. Пациента беспокоил постоянный сильный зуд. Со стороны внутренних органов выявлен хронический гастрит и хронический колит, по общему анализу крови выявлена анемия, повышенное количество эозинофилов. В биохимическом анализе крови были выявлены метаболические нарушения, резкое снижение антиоксидантной активности печени. При гистологическом исследовании биоптата пораженной кожи отмечены отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз и выраженный гиперкератоз. В дерме резко расширенные сосуды, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис. Иммунофенотип клеток инфильтрата CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^-. Заключение гистологического исследования: синдром Сезари? Эритродермия неясной этиологии? Для установления окончательного диагноза были проведены морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток: количество антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса составило 2, площадь их была 17,23 мкм², ядерно-цитоплазматическое соотношение - 0,22, что укладывалось в морфометрический профиль антигенпредставляющих клеток при синдроме Сезари (табл.1). На основании клинико-лабораторных данных гистологических, морфометрических исследований, иммунофенотипирования клеток инфильтрата, больному был установлен диагноз синдрома Сезари. Это позволило обосновать выбор тактики цитостатической терапии. Проведенная проспидинотерапия, совместно с кортикостероидами, детоксикационным и симптоматическим лечением способствовали регрессу заболевания после 3-х курсов лечения.

Как видно из приведенных примеров проведение гистологических исследований, иммунофенотипирование клеток дермального инфильтрата показали схожую гистологическую картину, описываемую как отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз, резкое расширение сосудов, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис, одинаковый иммунофенотип клеток инфильтрата, представленного CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^- лимфоцитами, как при синдроме Сезари, так и при эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах. Применение

морфометрических исследований антигенпредставляющих клеток позволило дифференцировать синдром Сезари и эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, что позволило, в свою очередь, обосновать выбор тактики раннего адекватного рационального лечения, приведшего к регрессу заболевания. Количественная оценка морфологических изменений в коже при синдроме Сезари и эритродермиях, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток полностью совпадали с клинической оценкой заболевания во всех случаях. Следовательно, диагностика синдрома Сезари, на наш взгляд, должна осуществляться с использованием мультиспектора диагностических методов: клинических, лабораторных, гистологических, иммунофенотипических и морфометрических.

Заявляемым способом была проведена дифференциальная диагностика у 24 больных с синдромом Сезари и у 28 с эритродермиями, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, и во всех случаях был достигнут указанный технический результат. Способ воспроизводим в условиях гистологической лаборатории стационара. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».

Таким образом, в отличие от прототипа (табл.2), заявляемый нами способ дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток позволяет:

а) объективизировать, количественно оценить, учитывать морфологические изменения, проходящие в коже при этих заболеваниях, путем проведения морфометрических исследований;

б) провести дифференциальную диагностику синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах;

в) использовать мультиспектр диагностических методов: клинических, лабораторных, гистологических, иммунофенотипических и морфометрических;

г) обосновать выбор тактики раннего адекватного рационального лечения;

д) ускорить диагностику синдрома Сезари и эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозов, более, чем в 2 раза.

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА СЕЗАРИ И ЭРИТРОДЕРМИЙ, ВОЗНИКАЮЩИХ ПРИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ДЕРМАТОЗАХ ПО МОРФОМЕТРИЧЕСКОМУ ПРОФИЛЮ

АНТИГЕНПРЕДСТАВЛЯЮЩИХ КЛЕТОК

Таблица 1
Морфометрический профиль антигенпредставляющих клеток при синдроме Сезари и эритродермиях, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах
Нозология	Количество антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса (M±m)	Площадь антигенпредставляющих клеток, (M±m) (мкм²)	Ядерно-цитоплазматическое соотношение антигенпредставляющих клеток (M±m) (ус.ед.)
Синдром Сезари (n=24)	2,21±1,38**	18,27±1,95***	0,21±0,05***
эритродермиии, возникающие при доброкачественных воспалительных дерматозах (n=28)	8,06±1,45***	48,34±2,48**	0,71±0,08**
Норма (контроль-здоровая кожа) (n=18)	2,88±1,32	35,39±2,54	0,43±0,02
Примечание: - достоверность различий показателей с контролем при р<0,01; * р<0,001.
Таблица 2
Сравнительные данные технических результатов прототипа и заявляемого пособа дифференциальной диагностики синдрома Сезари и эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток
Результат	Заявленный способ (общее количество больных - 52)	Наиболее близкий аналог (прототип) (количество больных - 54)
Объективизация, количественная оценка, учет морфологических изменений в коже, проходящих при этих заболеваниях, путем морфометрических исследований.	проводит	не проводит
Дифференциальная диагностика начальных проявлений синдрома Сезари и эритродермий, возникающих при доброкачественных хронических дерматозах по морфометрическому профилю антигенпредставляющих клеток.	ранняя диагностика	поздняя диагностика
Использование мультиспектра диагностических методов: клинических, лабораторных, гистологических, иммунофенотипических и морфометрических	использует	не использует
Обоснование выбора тактики раннего адекватного рационального лечения	позволяет	не позволяет
Сроки диагностики	первая неделя заболевания	через 1-2 месяца от начала заболевания

Способ дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах, включающий гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи у больных доброкачественными воспалительными дерматозами с использованием световой микроскопии, отличающийся тем, что дополнительно проводят иммунофенотипирование клеток инфильтрата, при схожей гистологической картине, описываемой как отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз, резкое расширение сосудов, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата, представленном CD3⁺, CD4⁺, CD43⁺, CD45RO⁺, CD2^- CD5^- лимфоцитами, дополнительно проводят морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток в гистологических срезах биоптатов кожи, считают их количество на 1 мм длины эпидермиса, измеряют площадь и ядерно-цитоплазматическое соотношение, и при увеличении количества антигенпредставляющих клеток в 2,8 и более раза, чем в норме, увеличении площади антигенпредставляющих клеток в 1,36 и более раза, чем в норме, и увеличении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 1,65 и более раза, чем в норме, диагностируют эритродермии, возникающие при доброкачественных воспалительных дерматозах, а при уменьшении количества антигенпредставляющих клеток в 1,3 и более раза, чем в норме, уменьшении площади антигенпредставляющих клеток в 1,9 и более раза, чем в норме, и уменьшении ядерно-цитоплазматического соотношения антиген представляющих клеток в 2 и более раза, чем в норме, диагностируют синдром Сезари.

Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК гибридизационного анализа.

Способ выявления гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных острым лимфобластным лейкозом при манифестации заболевания // 2497127

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ выявления наличия гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных с впервые выявленным острым лимфобластным лейкозом путем лабораторного исследования антигена фактора Виллебранда, тромбомодулина, D-димеров, где без исследования целого ряда показателей плазменного гемостаза, таких как протромбиновый индекс, концентрация фибриногена и РФМК, время ХIIа-ЗЭЛ, активность антитромбина III, протеина С, плазминогена и ф.VIII, отклонения которых характеризуют состояние гиперкоагуляции, при уровне указанных маркеров нарушения функции эндотелия, превышающих 152% (ФB:Ag) и 3,99 нг/мл (ТМ), и увеличении D-димеров до 2001-2500 нг/мл и более с высокой долей вероятности устанавливают наличие гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания.

Способ снижения предела обнаружения иммунохроматографических методов контроля содержания низкомолекулярных соединений // 2497126

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу снижения предела обнаружения иммунохроматографических методов контроля содержания низкомолекулярных соединений.

Способ прогнозирования эффективности лечения непсихотических вариантов психоорганического синдрома // 2497125

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения непсихотических вариантов психоорганического синдрома.

Способ подбора иммунотропных препаратов для лечения пациентов с ургентной хирургической патологией органов брюшной полости // 2497124

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для подбора иммунотропных препаратов у пациентов с ургентной хирургической патологией органов брюшной полости.

Способ определения хлорамфеникола с помощью пьезокварцевого иммуносенсора // 2497123

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и описывает способ высокочувствительного определения хлорамфеникола с помощью пьезокварцевого иммуносенсора, основанный на регистрации изменения частоты колебания сенсора в связи с изменением массы покрытия, включающий регенерацию рецепторного покрытия для проведения последующих определений, обеспечивая многократное использование сенсора, где на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора наносят рецепторное покрытие на основе хлорамфеникол-белкового конъюгата (соевый трипсиновый ингибитор), к пробе добавляют фиксированное количество антител к хлорамфениколу и выдерживают в течение 5-10 мин при 20°С до образования иммунокомплекса, вводят в проточно-инжекторную ячейку и регистрируют изменение частоты колебания сенсора при взаимодействии хлорамфеникол-белкового конъюгата с несвязавшимися антителами к хлорамфениколу, аналитический отклик сенсора обратно пропорционален концентрации хлорамфеникола в анализируемом растворе, концентрацию определяют по градуировочному графику, регенерацию рецепторного покрытия осуществляют пропусканием 0,04 mM раствора тиоционата калия над поверхностью электрода сенсора.

Способ прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов после холецистэктомии // 2497122

Изобретение относится к области медицины, в частности гастроэнтерологии, а именно к способу прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов, перенесших холецистэктомию.

Способ определения атерогенности крови человека // 2497116

Настоящее изобретение относится к клинической биохимии и описывает способ определения модифицированных липопротеинов низкой плотности (мЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, где обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 10% раствором ПВП-35000±5000 в 0,01 М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, при объемном соотношении сыворотка(плазма) : ПВП от (1:2) до (1:10), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 15 Е констатируют повышенный уровень атерогенных мЛПНП в крови и наличие атеросклеротического процесса у обследуемого человека.

Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови // 2495434

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови.

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости // 2495433

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости методом двухстадийного иммуноферментного анализа в сыворотке крови человека in vitro.

Способ диагностики мужских и женских форм бесплодия // 2485507

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии, и касается диагностики мужских и женских форм бесплодия путем оценки нарушений микроциркуляции. .

Способ подготовки образцов биопленок микроорганизмов для исследования в сканирующем электронном микроскопе // 2484446

Изобретение относится к способу подготовки образцов биопленок микроорганизмов для исследования в сканирующем электронном микроскопе. .

Способ прогнозирования тяжести течения бронхолегочной патологии на фоне гастроэзофагеального рефлюкса у детей, находящихся на искусственной вентиляции легких // 2480753

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии и неонатологии, касается прогнозирования тяжести течения бронхолегочной патологии у новорожденных детей, находящихся на искусственной вентиляции легких, а также диагностики гастроэзофагеального рефлюкса посредством выявления пепсина в трахеобронхиальном аспирате с определением степени его активности.

Способ диагностики инфекционно-воспалительного процесса органов дыхания у детей // 2479258

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, пульмонологии и педиатрии. .

Способ оценки течения раневого процесса и эффективности лечения кожных ран различного генеза // 2478963

Изобретение относится к области медицины. .

Способ определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале // 2477479

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способу определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидемстанций, химико-токсикологических, ветеринарных и экологических лабораторий.

Способ дифференциальной диагностики лимфопролиферативных заболеваний кожи по морфометрическому профилю базальных кератиноцитов // 2476879

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и гистологической лабораторной диагностике. .

Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде // 2474819

Изобретение относится к медицине, в частности к ранней диагностике развития различных форм клещевого энцефалита. .

Способ определения максимальной концентрации живых бактерий // 2470075

Изобретение относится к области биохимии. .

Способ быстрой оценки степени активности хронического гепатита у больных хроническим гепатитом с // 2469326

Изобретение относится к инфекционным болезням и предназначено для быстрой оценки степени активности хронического гепатита у больных хроническим гепатитом С. .

Способ определения оптических и биофизических параметров биоткани // 2510506

Изобретение относится к области медицинского приборостроения и применяется для определения оптических и биофизических параметров биоткани. Сущность способа: посылку излучения на ткань в одну или несколько точек осуществляют на длинах волн λ из диапазона 350-1600 нм, измеряют диффузное отражение P(L, λ) на длинах волн посылаемого излучения для каждой из точек освещения, определяют абсолютный R(L, λ) или нормированный r(L, λ) спектрально-пространственный профиль коэффициента диффузного отражения ткани, а оптические и биофизические параметры (X) определяют на основе аналитических выражений, представляющих собой множественные регрессии между Х и R(L, λ) или между Х и r(L, λ), которые получают путем измерения или расчета методом Монте-Карло R(L, λ), r(L, λ) для множества образцов биоткани или моделирующих ее фантомов с известными оптическими и биофизическими параметрами, накопления ансамбля реализации оптических и биофизических параметров биоткани и соответствующих им спектрально-пространственных профилей R(L, λ), r(L, λ) для возможных диапазонов вариаций оптических и биофизических параметров ткани. Использование способа позволяет расширить функциональные возможности за счет одновременного определения комплекса как оптических, так и биофизических параметров биологической ткани в режиме реального времени, обеспечивает повышение точности измерения данных параметров за счет учета их общей вариативности, а также за счет исключения калибровочных измерений и использования априорной информации. 4 з.п. ф-лы, 6 табл., 7 ил.