Раствор противовирусной композиции и способ его получения
Изобретение относится к раствору противовирусной композиции и к способу его получения. Раствор противовирусной композиции содержит комплексное серебро, глицин, комплексно связанный с серебром, глицинат натрия и воду в определенных соотношениях. Способ получения указанного раствора противовирусной композиции заключается в электролизе раствора, содержащего соединения на основе глицина и глицинат натрия, обеспечивающий электропроводность раствора, при этом электролиз раствора ведут до достижения концентрации серебра 0,1-0,45 мас.%. После электролиза проводят химическое окисление полученного раствора для увеличения его стабильности и осуществляют фильтрацию осадка. Изобретение обеспечивает получение стабильного раствора противовирусной композиции, который устойчив к свету и к длительному хранению. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 табл., 2 ил., 7 пр.
Изобретение относится к противовирусным и бактерицидным растворам серебра, получаемым электролизом, которые могут быть использованы в качестве лекарственного и дезинфицирующего средств.
Получение соединений серебра для создания лекарственных и дезинфицирующих средств против болезнетворных организмов (бактерий, вирусов и пр.) ведется давно и плодотворно. Растворы азотнокислого и других соединений серебра, полученные химическим путем из нитрата или гидроксида, в которых серебро находится в форме катиона, и их свойства хорошо изучены и многократно описаны [1]. Другим способом получения ионного серебра является электрохимический - идеальный из-за чистоты получаемого продукта и отсутствия каких-либо примесей. «Серебряная вода» и бытовые ионизаторы, её генерирующие, нашли широкое распространение в жизни людей [2].
Однако ионное серебро, связываясь с ионами хлора живого организма, образует плохо растворимые хлориды серебра и теряет свою активность. А зачастую реагирует с примесями воды и теряет активность, не доходя до организма.
В последнее десятилетие пристальное внимание изобретателей и исследователей всего мира привлекает не ионное, а коллоидное серебро, размеры частиц которого находятся в диапазоне 10-100 нм, т.е. наночастицы серебра, т.н. «AgNPs» [3].
Способы получения коллоидного серебра могут быть электрохимическими, радиационно-химическими, химическими в «обратных мицеллах» и пр.
Проблемой использования в качестве медицинских препаратов различных форм серебра является соотношение его биологической эффективности и токсичности. Проведенные в последнее десятилетие токсикологические эксперименты при различных путях введения серебряных наночастиц животным выявили их общую и органоспецифическую токсичность [4-7] . Для снижения токсичности наночастицы серебра покрывают нетоксичными оболочками. Так, например, в патенте Холадея AgNPs покрыты слоем оксида серебра [8], в других работах исследуется серебро, покрытое слоем цитратов, кофеина и др. [9]. Однако выявленное накопление наночастиц в тканях внутренних органов подопытных животных [7, 10] сдерживает их медицинское применение.
Отдельный интерес представляют собой соединения серебра с аминокислотами, т.к. присутствие аминокислоты снижает токсичность серебра уже в самом химическом соединении. Такие комплексы с различными аминокислотами синтезированы из нитрата серебра путем химических превращений с последующим выделением, очисткой от примесей и т.д. [11]. Серебро в комплексах с аминокислотами не является катионом, т.к. заряд распределяется по всему комплексу в целом, и, строго говоря, не является ионным.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому является бактерицидная композиция на основе ионизированного серебра, полученная путем электролиза с использованием двух серебряных электродов в присутствии аминокислоты, преимущественно, глицина, также азота аммиака и ионов аммония (пат. RU 2281107 от 04.08.2004, кл. А61К 33/38; A61L 2/16; C02F 1/50) [12]. Серебряные электроды подключены к источнику постоянного тока, который через каждые 5-600 секунд меняет свою полярность. Процесс ведется при рН 7,9-9,2.
Композиция разбавляется дистиллированной водой и используется в качестве наружного средства для лечения лучевых ожогов, трофических язв и т.д.
Недостатком данной бактерицидной композиции является низкая ее стабильность. Её производство, использование и хранение должно проводиться в темноте, т.к. на свету она быстро теряет свою биологическую активность из-за образования осадка серебра. Кроме того, введение в композицию аммиака, обеспечивающего электропроводность раствору во время электролиза, имеет определенный недостаток. Ион аммония сохраняется в лекарственной форме и, будучи токсичным, ограничивает сферу использования препарата только наружным применением.
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание стабильного раствора противовирусной композиции, которая не боится света и устойчива при длительном хранении. Кроме того, композиция не содержит ионов аммония, что снижает её токсичность и увеличивает безопасность использования. Предлагаемая композиция после соответствующего разведения может быть использована как наружно, так и внутренне.
Данный технический результат достигается тем, что раствор противовирусной композиции, содержащий активное вещество на основе серебра, полученное электролизом, и соединения на основе глицина, в качестве соединений на основе глицина содержит глицин, комплексно связанный с серебром, глицинат натрия и свободный глицин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| A) Комплексное серебро | 0,1-0,45 |
| Б) Глицин общий | 1,3-2,0 |
в том числе
| глицин, комплексно связанный с серебром, | 0,07-0,31 |
| глицинат натрия в пересчете на аминокислоту | 0,52-1,2 |
| B) Вода | остальное |
В предпочтительном варианте осуществления изобретения раствор противовирусной композиции содержит глицинат натрия в количестве 40-60 мол.% от общего глицина.
Данный технический эффект достигается также способом получения противовирусной композиции.
В способе получения раствора противовирусной композиции, включающем электролиз раствора, содержащего соединения на основе глицина и компонент, обеспечивающий электропроводность раствора, согласно изобретению, в качестве компонента, обеспечивающего электропроводность раствора, используют глицинат натрия, а в качестве соединений на основе глицина используют глицин и глицинат натрия в количестве 1,3-2,0 % при содержании глицината натрия 0,52-1,20 мас.% в пересчете на аминокислоту; электролиз ведут до достижения требуемой концентрации серебра, после чего с целью увеличения стабильности композиции проводят химическое окисление полученного раствора с последующей фильтрацией осадка.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения химическое окисление проводят с помощью окислителя, растворимого в воде, в количестве 5-15 мол.% по отношению к серебру.
Электролиз ведут с использованием двух серебряных электродов в растворе, содержащем аминокислоту и натриевую соль этой кислоты. Для увеличения стабильности раствора вводится стадия его дополнительного химического окисления.
Для обеспечения проводимости раствора перед электролизом аминокислоту частично переводят в её Na-форму на 40-60 мол.% от общего содержания глицина. Поскольку ион натрия в 100 раз менее токсичен, чем ион аммония, препарат может быть использован для приема внутрь и др. системного введения. Такое соотношение глицина и глицината натрия обеспечивает хорошую проводимость раствора в течение электролиза и сохраняет избыток свободного глицина для связывания серебра.
Процесс анодного растворения серебра носит обратимый характер, и при достижении определенной концентрации катионов серебра в растворе наступает равновесие, при котором количество серебра Ag+1, перешедшего в раствор с электродов, сопоставимо с количеством элементарного серебра Ag0, выходящего из раствора в виде осадка или осаждающегося на электродах. При этом концентрация катионов серебра в растворе перестает расти (рис.1).
В начальной фазе процесса, когда прямая реакция анодного растворения серебра превалирует, а обратная реакция незаметна, атомарное серебро начинает собираться в кластеры, образовывая наночастицы. Об их присутствии в растворе свидетельствуют полосы поверхностного плазменного резонанса (ППР) в видимой части спектра в области 350-440 нм, характерные для наночастиц серебра [3], см. рис.2.
При этом никакого осадка в растворе еще не наблюдается, но в течение процесса наночастицы укрупняются до суспензии, видной невооруженным глазом, а поступающие с электродов атомы серебра агломерируются в новые наночастицы.
Известно, что при рН выше 9, соединение серебра с глицином протекает по аминогруппе. Координация серебра Ag+1 с бидентатным глицином происходит через одну отрицательно заряженную и одну нейтральную донорную группу аминокислоты с образованием пятичленного внутрикомплексного соединения, т.н. «хелатного узла». В таком соединении серебро не может считаться ионом, т.к. заряд на себе несет весь комплекс. Это довольно устойчивое соединение, которое можно выделить из раствора и подтвердить его строение элементным составом и ИК-спектроскопией.
Атомарное серебро также может координировать с глицином, образуя линейный, т.е. «открытый» комплекс Ag:NH2-CH2-COOH за счет донорно-акцепторной связи. В этом комплексе глицин выступает как монодентатный лиганд. Такой комплекс неустойчив и легко распадается на атомарное серебро и глицин, что является источником нестабильности раствора.
Чтобы убрать источники нестабильности - атомарное серебро, наночастицы серебра и открытый неионный комплекс серебра, образующиеся в процессе анодного растворения серебряных электродов, вводится стадия дополнительного химического окисления раствора с помощью, например, перманганата калия.
Поскольку доля серебра в нулевой валентности невелика (примерно 5-15 % от всего серебра), то добавка окислителя составляет не более 15 мол.% по отношению ко всему серебру, находящемуся в растворе. Так перманганат калия, окисляя атомы серебра Ag0 открытого комплекса, переводят его в Ag+1, замыкая комплекс в стабильный хелатный узел.
Двуокись марганца образует рыхлые хлопья, которые сорбируют мелкие коллоидные образования серебра, укрупняют их и обеспечивают их эффективное удаление из раствора при фильтрации.
Добавление окислителя менее 5 мол.% по отношению к серебру не обеспечивает стабильность композиции; увеличение же свыше 15 мол.% не целесообразно, т.к. не приводит к увеличению стабильности раствора, но снижает общее содержание серебра в нем.
Таким образом, процесс получения стабильного водного раствора комплекса серебра проводится в 2 стадии. На первой - электрохимической - серебро с электродов переводится в раствор в различных формах. На второй стадии - химической - при помощи окислителя нестабильные формы серебра либо переводятся в устойчивое внутрикомплексное соединение, либо удаляются из раствора последующей фильтрацией.
Такой раствор устойчив при хранении в течение 2 лет и не боится света, сохраняя свои биохимические свойства. Разбавляя его в десятки и даже в сотни раз, можно получать как препараты для наружного применения, так и для приема внутрь, инъекционного введения, спрея для слизистых оболочек и т.д. Можно использовать композицию и в качестве дезинфицирующего средства.
Изобретение иллюстрируется следующими рисункам и примерами.
На рис.1 изображено накопление серебра в растворе во время электролиза. На рис.2 приведены спектры растворов на ранней стадии электролиза и после окисления и фильтрации. Условия проведения электролиза описаны в примере 1.
Пример 1.
На дистиллированной воде готовят 1 л раствора, содержащего 1,20 % глицина и 1,03 % глицината натрия (0,8 % в пересчете на глицин). Мольная доля глицината натрия в общем содержании глицина составляет 40 %. Раствор помещают в стакан электролизера, в который опущено два серебряных электрода. К клеммам серебряных электродов подключен источник постоянного тока с изменяемой через каждые 5 сек полярностью. Электролиз проводят при напряжении 0,5 В и силе тока 1 А в течение 2 часов при перемешивании магнитной мешалкой. По завершении электрохимического процесса в раствор вносят 0,09 г перманганата калия и после перемешивания оставляют на 8-10 часов, после чего фильтруют через бумажный фильтр.
Получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 0,45 % серебра и 2 % глицина в 3 формах: связанного в комплекс с серебром (0,31 %), глицината натрия (0,8 % в пересчете на аминокислоту) и свободного глицина.
Выделенный из раствора и высушенный комплекс серебра с глицином имеет следующий элементный состав. Получено: С 13,46; Н 2,47; N 7,3; Ag 59,48. Рассчитано: С 13,13; Н 2,74; N 7,66; Ag 58,97.
На ИК-спектре полоса асимметричных валентных колебаний СОО--группы (в цвиттер-ионе глицина находится на частоте 1610 см-1) смещена и в слиянии с полосой маятниковых колебаний 
Пример 2.
По примеру 1 готовят раствор, содержащий 0,52 % глицина и 1,0 % глицината натрия (0,78 % в пересчете на глицин). Мольная доля глицината натрия в общем содержании глицина составляет 60 %. Раствор помещают в стакан электролизера. Электролиз проводят по примеру 1 в течение 0,5 часа. По завершении электрохимического процесса в раствор вносят 0,007 г перманганата калия и после перемешивания оставляют на 8-10 часов, после чего фильтруют через бумажный фильтр.
Получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 0,1 % серебра и 1,3 % глицина в 3 формах: связанного в комплекс с серебром (0,07 %), глицината натрия (0,78 % в пересчете на аминокислоту) и свободного глицина.
Пример 3.
По примеру 1 готовят раствор, содержащий 0,8 % глицина и 1,03 % глицината натрия (0,8 % в пересчете на глицин). Мольная доля глицината натрия в общем содержании глицина составляет 50 %. Раствор помещают в стакан электролизера. Электролиз проводят по примеру 1 в течение 2,5 часов. По завершении электрохимического процесса в раствор вносят 0,08 г перманганата калия и после перемешивания оставляют раствор на 8-10 часов, после чего фильтруют через бумажный фильтр.
Получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 0,38 % серебра и 1,6 % глицина в 3 формах: связанного в комплекс с серебром (0,26 %), глицината натрия (0,8 % в пересчете на аминокислоту) и свободного глицина.
Пример 4.
По примеру 1 готовят раствор, содержащий 0,8 % глицина и 1,55 % глицината натрия (1,2 % в пересчете на глицин). Мольная доля глицината натрия в общем содержании глицина составляет 60 %. Раствор помещают в стакан электролизера. Электролиз проводят по примеру 1 в течение 3,5 часов. По завершении электрохимического процесса в раствор вносят 0,05 г перманганата калия и после перемешивания оставляют раствор на 8-10 часов, после чего фильтруют через бумажный фильтр.
Получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 0,35 % серебра и 2 % глицина в 3 формах: связанного в комплекс с серебром (0,24 %), глицината натрия (1,2 % в пересчете на аминокислоту) и свободного глицина.
Результаты ускоренного хранения растворов серебра по прототипу и по примеру 1 предлагаемого изобретения. Условия хранения: 40°С при дневном освещении.
| Таблица 1 | ||||||
| Образец | Концентра ция серебра, % |
Хранение образцов, сутки | ||||
| 1 | 3 | 10 | 20 | 30 | ||
| По прототипу | 0,2 | Потемнение раствора | Выпадение черного осадка | |||
| По примеру 1 | 0,45 | Раствор прозрачный, бесцветный |
Противовирусная активность заявляемой серебросодержащей композиции изучалась: In vitro - на модели клеточной культуры МДСК (клетки почки собаки), зараженной вирусом гриппа A/Pert 16/09 (H3N2); на модели Т-лимфобластной клеточной линии МТ4, зараженной ВИЧ - 1/IIIB.
In vivo - на белых беспородных мышах, инфицированных вирусом гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2).
Пример 5.
При изучении активности серебросодержащей композиции против вируса гриппа использовались клетки МДСК (клетки почки собаки) и штамм вируса гриппа A/Pert 16/09 (H3N2). Культуру клеток МДСК выращивали на среде Игла с 10% эмбриональной сывороткой крови телят с добавлением 100 Ед/мл пенициллина, стрептомицина и глютамина. В опытах использовали монослой клеток, выращенный в 24-луночных панелях. Перед определением противовирусного действия серебросодержащей композиции определяли ее цитотоксические свойства.
| Таблица 2 | ||||||||
| Цитотоксическое действие серебросодержащей композиции на культуру клеток МДСК | ||||||||
| Культура клеток | % выживших клеток, обработанных разными концентрациями серебросодержащей композиции | |||||||
| 1:100 | 1:200 | 1:500 | 1:600 | 1:800 | 1:1000 | 1:2000 | 1:3000 | |
| МДСК | 0 | 10 | 15 | 72 | 85 | 95 | 100 | 100 |
Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что ЦД50 серебросодержащей композиции для культуры клеток МДСК превышает ее разведение 1:600. Поэтому в последующем исследовании противовирусных свойств использовались нетоксические концентрации серебросодержащей композиции, соответствующие ее разведениям от 1:600 и выше.
Для исследования противовирусных свойств, серебросодержащую композицию вносили в культуру клеток МДСК за 2 часа до заражения вирусом гриппа (профилактическая схема), одновременно с ним (лечебно-профилактическая) и через 2 часа после заражения (лечебная). Титр вируса определяли в культуральной жидкости через 3 суток по наличию гемагглютининов в реакции гемагглютинации (РГА) по стандартной методике. Результат воздействия серебросодержащей композиции in vitro на способность вируса гриппа к размножению представлен в таблице 3.
| Таблица 3 | ||||
| Способность серебросодержащей композиции защищать клетки МДСК от цитопатогенного действия вируса гриппа A/Pert 16/09 (H3N2) | ||||
| Схема применения препарата | Концентрация серебросодержащей композиции | Титр вируса гриппа A/Pert 16/09 (H3N2) после применения препарата | ||
| Титр ГА Ед/мл | Инфекционный титр | |||
| lg | Δlg | |||
| За 2 часа (профилактическая схема) | 1:3000 | 1:8 | 6,0 | 0 |
| 1:2000 | 1:4 | 5,0 | 1,0 | |
| 1:1000 | 1:4 | 4,8 | 1,2 | |
| 1:800 | 1:4 | 4,5 | 1,5 | |
| 1:600 | 1:4 | 4,3 | 1,7 | |
| Одновременно (лечебно-профилактическая схема) |
1:3000 | 1:8 | 5,5 | 0,5 |
| 1:2000 | 1:4 | 4,8 | 1,2 | |
| 1:1000 | 1:4 | 4,5 | 1,5 | |
| 1:800 | 1:4 | 4,0 | 2,0 | |
| 1:600 | 1:2 | 3,5 | 2,5 | |
| Через 2 часа (лечебная схема) | 1:3000 | 1:16 | 6,0 | 0 |
| 1:2000 | 1:8 | 5,0 | 1,0 | |
| 1:1000 | 1:4 | 4,8 | 1,2 | |
| 1:800 | 1:4 | 4,7 | 1,3 | |
| 1:600 | 1:4 | 4,5 | 1,5 | |
| Контроль (вирус без препарата) | - | 1:16 | 6,0 | - |
| Δlg - разница между титром контроля вируса и титром вируса с препаратом. |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при использовании серебросодержащей композиции в разведении 1:600 - 1:800 по профилактической схеме, отмечается подавление размножения вируса на 1,5-1,7 lg; по лечебно-профилактической - на 2,0-2,5 lg. Применение серебросодержащей композиции в разведении 1:600 по лечебной схеме приводило к снижению инфекционного титра на 1,5 lg. Таким образом, заявляемая серебросодержащая композиция обладает противовирусной активностью в разведениях 1:600-1:800, подавляя in vitro размножение вируса гриппа на 1,5-2,5 lg, не обладая при этом цитотоксическим действием на клетки.
Пример 6.
При изучении активности серебросодержащей композиции против инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), использовалась Т-лимфобластная клеточная линия МТ4 и штамм ВИЧ-1/IIIB, активно репродуцирующийся в клетках МТ4. Перед определением противовирусного действия серебросодержащей композиции определяли ее цитотоксические свойства. Для этого клетки МТ4 с концентрацией 0,5∗106 клеток/мл помещали в лунки 96-луночных планшетов и культивировали в течение 3-5 дней в присутствии разных концентраций препарата.
| Таблица 4 | |||||
| Цитотоксическое действие серебросодержащей композиции на культуру клеток МТ4 | |||||
| Культура клеток | % выживших клеток, обработанных разными концентрациями серебросодержащей композиции | ||||
| 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10 -4 | 10 -5 | |
| МТ4 | 15,3 | 25,5 | 46,9 | 131,9 | 108,9 |
Данные, представленные в таблице 4, свидетельствуют о том, что отсутствие токсического действия серебросодержащей композиции для культуры клеток МТ4 наблюдается в разведении 1:10000 и выше. Поэтому в последующем исследовании противовирусных свойств использовались нетоксические концентрации серебросодержащей композиции, соответствующие ее разведениям от 1:10000 и выше.
Для исследования противовирусной активности клетки МТ4 в концентрации 0,5∗106 клеток/мл вносили в лунки 96-луночных планшетов и добавляли серебросодержащую композицию в различных концентрациях. Далее клетки заражали вирусом с множественностью инфекции 100 TCID50. После 24-часовой инкубации клеток с вирусом в присутствии исследуемого препарата не связавшийся вирус удаляли путем низкоскоростного центрифугирования, осадок клеток ресуспендировали в свежей ростовой среде с соответствующими концентрациями серебросодержащей композиции и продолжали культивировать в течение 6 дней. По истечении 6 суток культивирования из контрольных и опытных образцов были отобраны пробы среды культивирования для определения содержания антигена ВИЧ-1 - р 24. Результаты исследования содержания антигена ВИЧ-1 - р 24, определяемого по изменению оптической плотности в ИФА-тесте, представлены в таблице 5.
| Таблица 5 | |||||
| Ингибирование ВИЧ-инфекции в присутствии различных концентраций серебросодержащей композиции (оптическая плотность в ИФА) | |||||
| Исследуемые образцы | Концентрация препарата/оптическая плотность | ||||
| 10 -4 | 10 -5 | 10 -6 | 10-7 | 10-8 | |
| Серебросодержащая композиция | 0,041 | 1,061 | 1,538 | 2,536 | 2,731 |
| Контроль инфекции без препарата | 2,864 | - | - | - | - |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при использовании серебросодержащей композиции в разведении в 10-4 отмечается полное подавление инфекции, при этом отсутствует цитотоксическое действие на клетки.
Пример 7.
Исследование противовирусного действия серебросодержащей композиции при экспериментальной гриппозной инфекции in vivo проводилось на белых беспородных мышах весом 14-16 г - по 20 мышей на каждую точку. Животных инфицировали вирусом гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2) в дозе 100 LD 50, адаптированного к размножению в легких мышей. Серебросодержащую композицию вводили животным:
- интраназально, в дозах 0,1 мг/кг, 0,02 мг/кг и 0,01 мг/кг
- внутривенно, в дозах 1 мг/кг, 2,5 мг/кг, 5 мг/кг
По следующим схемам:
- профилактической (за 24 ч до заражения вирусом);
- лечебной (через 24 ч после заражения вирусом);
- лечебно-профилактической (за 24 ч до заражения и через 24 ч после заражения вирусом).
Для каждого типа введения серебросодержащей композиции была взята отдельная контрольная группа. Контрольные группы составляли мыши, зараженные вирусом гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2) и получавшие плацебо.
Противовирусный эффект оценивали:
- по средней продолжительности жизни (сутки);
- степени подавления репродукции вируса гриппа в легких мышей.
Результаты исследования противогриппозной активности серебросодержащей композиции приведены в таблице 6.
| Таблица 6 Противовирусная эффективность серебросодержащей композиции в отношении вируса гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2) при интраназальном и внутривенном введениях |
|||||
| Схема введения | Доза | Средняя продолжительность жизни (сутки) | Инфекционный титр, lg | Δlg | |
| Относительная | По сравнению с контролем | ||||
| Интраназальное введение | |||||
| Профилактическая схема введения |
0,1 мг/мл | 7,7 | +0,2 | 2,0 | 1,1 |
| 0,02 мг/мл | 7,7 | +1,8 | 2,9 | 0,2 | |
| 0,01 мг/мл | 7,5 | 0 | 2,8 | 0,3 | |
| Лечебная схема | 0,1 мг/мл | 13,4 | +5,9 | 1,7 | 1,4 |
| 0,02 мг/мл | 7,5 | +1,1 | 2,8 | 0,3 | |
| 0,01 мг/мл | 7,7 | +1,8 | 3,4 | -0,3 | |
| Лечебно-профилактическая схема | 0,1 мг/мл | 11,6 | +4,1 | 1,1 | 2,0 |
| 0,02 мг/мл | 7,5 | 0 | 2,9 | 0,2 | |
| 0,01 мг/мл | 7,7 | +0,2 | 3,0 | 0,1 | |
| Контроль вируса | 7,5 | 3,1 | |||
| Внутривенное введение | |||||
| Профилактическая схема введения | 1 мг/кг | 10,3 | +1,5 | 1,5 | 1,7 |
| 2,5 мг/кг | 8,6 | -0,2 | 2,8 | 0,4 | |
| 5 мг/кг | 8,8 | 0 | 2,9 | 0,3 | |
| Лечебная схема | 1 мг/кг | 10,8 | +2,0 | 1,7 | 1,5 |
| 2,5 мг/кг | 8,8 | 0 | 2,9 | 0,3 | |
| 5 мг/кг | 9,1 | +0,3 | 2,7 | 0,5 | |
| Лечебно-профилактическая схема | 1 мг/кг | 9,4 | +0,6 | 1,8 | 1,4 |
| 2,5 мг/кг | 14,1 | +5,3 | 1,2 | 2,0 | |
| 5 мг/кг | 19,6 | +10,8 | 0,7 | 2,5 | |
| Контроль вируса | 8,8 | 3,2 | |||
| Δlg - разница между титром контроля вируса и титром вируса с препаратом. |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при интраназальном введении белым беспородным мышам, зараженным вирусом гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2), серебросодержащей композиции в дозе 0,1 мг/кг по лечебно-профилактической схеме, отмечается подавление размножения вируса на 2,0 lg соответственно, способствуя увеличению продолжительности жизни на 4 дня.
При внутривенном введении белым беспородным мышам, зараженным вирусом гриппа A/Aichi 1/68 (H3N2), серебросодержащей композиции в дозе 2,5 и 5 мг/мл по лечебно-профилактической схеме, снижается инфекционность легких мышей на 2 и 2,5 lg соответственно, способствуя увеличению средней продолжительности жизни на 5-10 дней.
Таким образом, получен стабильный раствор противовирусной композиции широким спектром использования.
Литература
1. Щербаков А.Б. и др. Препараты серебра вчера, сегодня и завтра.
Фармацевтический журнал, №5, 2006, с.45-57.
2. Кульский П.А. Серебряная вода. К., Наука думка, 1987, 134 с.
3. Крутяков Ю.А. и др. Синтез и свойства наночастиц серебра: достижения и перспективы. Успехи химии 77 (3), 2008 , с.242-269.
4. Dhermendra К Tiwari, Takashi Jin, and J.Behari, Dose-dependent in-vivo toxicity assessment of silver nanoparticle in Wistar rats, Toxicology Mechanisms and Methods, 2011; 21(1): 13-24.
5. Tang, J., Xiong, L., Wang, S., Wang, J., Liu, L., Li, J., Yuan, F., and Xi, Т., Distribution, translocation and accumulation of silver nanoparticles in rats. J. Nanosci. Nanotechnol, 9, 4924-4932 (2009).
6. Hadrup N, Loeschner K, Mortensen A, Sharma AK, Qvortrup K, Larsen EH, Lam HR. The similar neurotoxic effects of nanoparticulate and ionic silver in vivo and in vitro. Neurotoxicology. Jun; 33 (3) 2012, p.416-23.
7. Katrin Loeschner, Niels Hadrup, Klaus Qvortrup, Agnete Larsen, Xueyun Gao, Ulla Vogel, Alicja Mortensen, Henrik Rye Lam, Erik H Larsen. Distribution of silver in rats following 28 days of repeated oral exposure to silver nanoparticles or silver acetate, Particle and Fibre Toxicology 2011, 8:18.
8. Pat. USA № 7135195 Holladay JR e.a. 14.11.2006. Treatment of Humans with Colloidal Silver Composition.
9. H. Joel Allen e.a. Effects from filtration, capping agents, and presence/absence of food on the toxicity of silver nanoparticles to Daphnia magna. Environmental Toxicology and Chemistry Volume 29, Issue 12, pages 2742-2750, December 2010.
10. Kim, W.Y., Kim, J., Park, J.D., Ryu, H.Y., and Yu, I.J., Histological study of gender differences in accumulation of silver nanoparticles in kidneys of Fischer 344 rats. J. Toxicol. Environ. Health A, 72 (21-22), 1279-1284 (2009).
11. Kenji Nomiya and Hironari Yokoyama. Syntheses, crystal structures and antimicrobial activities of polymeric silver(I) complexes with three amino-acids [aspartic acid (H2asp), glycine (Hgly) and asparagine (Hasn)] J. Chem. Soc, Dalton Trans., 2002, 2483-2490.
12. Пат. РФ № 2281107. Цыб А.Ф. и Марди Ш.И., 10.08.2006. Бактерицидная композиция и способ её получения.
1. Раствор противовирусной композиции, содержащий активное вещество на основе серебра, полученное электролизом, и соединения на основе глицина, отличающийся тем, что в качестве соединений на основе глицина он содержит глицин, комплексно связанный с серебром, глицинат натрия и свободный глицин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| A) Комплексное серебро | 0,1-0,45 |
| Б) Глицин общий | 1,3-2,0 |
в том числе
| глицин, комплексно связанный с серебром, | 0,07-0,31 |
| глицинат натрия в пересчете на аминокислоту | 0,52-1,2 |
| B) Вода | остальное |
2. Раствор противовирусной композиции по п.1, отличающийся тем, что он содержит глицинат натрия в количестве 40-60 мол.% от общего глицина.
3. Способ получения раствора противовирусной композиции по п.1, включающий электролиз раствора, содержащего соединения на основе глицина и компонент, обеспечивающий электропроводность раствора, отличающийся тем, что в качестве компонента, обеспечивающего электропроводность раствора, используют глицинат натрия, а в качестве соединения на основе глицина используют глицин и глицинат натрия в количестве 1,3-2,0% при содержании глицината натрия 0,52-1,2 мас.% в пересчете на аминокислоту; электролиз ведут до достижения требуемой концентрации серебра, после чего с целью увеличения стабильности композиции проводят химическое окисление полученного раствора с последующей фильтрацией осадка.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что химическое окисление проводят с помощью окислителя, растворимого в воде, в количестве 5-15 мол.% по отношению к серебру.
