Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета

Авторы патента:

Климашевская Светлана Владимировна (RU)

C12Q1/00 - Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы (устройства для измерения или испытания при работе с ферментами или микроорганизмами, например счетчики колоний C12M 1/34); составы для них; способы получения подобных составов

Владельцы патента RU 2508405:

Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Диагностические системы" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноферментным анализам, и представляет собой способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH. Способ включает приготовление раствора для разведения сыворотки, подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля с последующим разведением раствором для разведения, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, подготовку сыворотки доноров для положительного контроля с последующим ее разведением раствором для разведения, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета, лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля, маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым. Заявленное изобретение позволяет получить универсальные контрольные образцы для всех тест-систем для определения инфекции группы TORCH, инкорпорированные в лунках рабочего планшета, удобные в использовании и безопасные. 1 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в технологии производства тест-систем для иммуноферментного анализа.

Иммуноферментный анализ является одним из высокочувствительных методов лабораторной диагностики. Он широко используется в медицинских лабораториях для определения в сыворотке крови различных макромолекул (антигенов, гормонов), вирусов и т.д. Предприятия-производители тест-систем для иммуноферментного анализа выпускают готовые наборы для постановки ИФА, в состав которых входят все необходимые компоненты. Примерами таких тест-систем являются, например, тест-системы, описанные в приложениях 1 и 2 к Приказу №214 Министерства здравоохранения РФ О разрешении медицинского применения медицинских иммунологических препаратов от 14 июня 2000 г. или в Приложениях 1 и 2 к Приказу №118 Министерства здравоохранения РФ О разрешении медицинского применения медицинских иммунологических препаратов от 15 апреля 1998 г. В качественных системах используются позитивные и негативные контроли, которые заведомо содержат и не содержат аналиты (антитела либо антигены). В количественных системах используются калибраторы - образцы с известной концентрацией искомых макромолекул, которые позволяют определить концентрацию тех или иных антигенов или антител в анализируемой сыворотке. Контрольные образцы представляют собой жидкие окрашенные реагенты, которые используются в постановке анализа согласно процедурам, описанным в инструкциях по использованию наборов. Как правило, положительный и отрицательный контроли вносятся в определенном объеме в несколько лунок планшета, после чего инкубируются так же, как исследуемые образцы. В количественных системах используются жидкие калибраторы, которые по инструкции так же вносятся в лунки планшета в определенном объеме и затем инкубируются так же, как исследуемые образцы. По оптической плотности в лунках планшета с контролями по окончании анализа судят о правильности прохождения реакции. В количественном анализе по оптической плотности калибраторов строится калибровочная кривая, посредством которой определяются концентрации аналитов в образцах сыворотки.

Постановка контролей либо калибраторов очень важна. Любой анализ должен сопровождаться постановкой контроля. В противном случае анализ является невалидным, а полученные результаты недостоверными. При постановке большого количества образцов ставится от 3 до 8 положительных и отрицательных контролей. Для этого используются лунки планшета с иммуносорбентом. Таким образом, количество образцов крови, которое можно поставить с помощью одного набора, уменьшается. При дробном использовании набора это количество снижается еще больше, так как при постановке даже одной сыворотки необходим контроль. Если разбить один набор на 3 постановки, то количество лунок, занимаемых контролем, увеличивается втрое. Постановка с калибраторами снижает количество свободных лунок для одного анализа образцов на 10 - 12. Таким образом, недостатком известных из уровня техники способов является небольшое количество образцов, которое можно поставить с использованием одного набора.

Из уровня техники известны способы изготовления контрольных панелей для тест-систем (см. например, патент РФ 2265028 С2, опубликованный 27.11.2005, или патент РФ 2346282 С2, опубликованный 10.02.2009). Согласно данным документам изготавливают контрольные панели сывороток для контроля качества диагностики гепатита В. При этом референс-панели лиофильно высушивают.

Кроме того, из уровня техники известен патент РФ 2181893 С1, опубликованный 27.04.2002, в котором раскрыт способ получения референс-панели для контроля качества тест-систем и вакцин против гепатита В. Данный способ взят авторами настоящего изобретения за прототип.

При производстве иммуноферментных диагностических систем для определения специфических антител, например антител к возбудителям инфекционных заболеваний, аутоантител, антител к специфическим маркерам, в качестве позитивного контрольного образца традиционно используются образцы сыворотки крови человека, содержащие определяемые антитела (аналиты) от пациентов с перенесенным или текущим патологическим процессом (инфекционным заболеванием, аллергией или злокачественными новообразованиями). Образование специфических антител является ответной реакцией организма на циркулирование биологических агентов, вызвавших данное инфекционное заболевание или патологический процесс. Таким образом, еще одной проблемой известных тест-систем является проблема инфекционной опасности.

Решением проблемы инфекционной опасности использования контрольных образцов в иммуноферментных тест-системах, а также проблемы расходования иммуносорбента для постановки контрольных образцов в анализе может быть добавление в набор дополнительных лунок иммуносорбента, которые будут использоваться для постановки контролей либо калибраторов. Для удобства эти дополнительные лунки изначально содержат, либо не содержат, контрольные образцы в высушенном виде. Во время постановки требуется лишь внести в эти лунки раствор для разведения сывороток или блокирующий раствор, который используется в данном тесте.

Еще одним недостатком известных тест-систем является их неуниверсальность. Для определения различных инфекций необходимы различные тест-системы.

В основу настоящего изобретения поставлена следующая задача: создание универсальных положительных и отрицательных контрольных образцов, инкорпорированных именно в лунках рабочего планшета, используемых в иммуноферментном анализе, чувствительность, специфичность и стабильность которых не отличается от жидких аналогов.

Задача решается разработанным способом получения универсальных инкорпорированных контрольных образцов для использования при постановках всех иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, в которую входят токсоплазмоз, краснуха, цитомегаловирус и герпес.

Заявлен способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, включающий:

A) приготовление раствора для разведения сыворотки, представляющего собой фосфатно-солевой буфер с 2%-ным содержанием бычьего сывороточного альбумина с добавлением проклина 300 и 10%-ного раствора азида,

Б) подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,

B) разведение сыворотки, полученной на этапе Б), в растворе для разведения для получения жидкого отрицательного контроля,

Г) подготовку сыворотки доноров для положительного контроля, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,

Д) разведение сыворотки, полученной на этапе Г), в растворе для разведения для получения жидкого положительного контроля,

Е) внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета,

Ж) лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля,

3) маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Получение инкорпорированного в лунке рабочего планшета отрицательного контрольного образца тест-системы для определения в сыворотке антител к TORCH-инфекциям.

Получение жидкого контрольного отрицательного образца.

Приготовление раствора для разведения отрицательной сыворотки

Готовится 100 мл фосфатно-солевого буфера с 2%-ным содержанием БСА (бычий сывороточный альбумин) (Sigma Cat # A3059). К полученному раствору добавляется 0,1 мл проклина300, 1 мл 10% раствора азида. В приготовленную среду добавляется негативная сыворотка или плазма.

В качестве отрицательного контрольного образца (К-) используют сыворотки доноров, не содержащих антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, не содержащие HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, инактивированные прогреванием в течение 45 мин при 56°С. Отобранные для приготовления К- сыворотки крови осветляют 50-минутным центрифугированием при 18000 об/мин на рефрижераторной центрифуге при температуре от 4 до 8°С, после чего разводят на среде, состоящей из ФСР (консерванты - проклин и азид).

Сыворотка разводится в растворе в соотношении 1 к 100. Жидкий контроль вносится в нужные лунки планшета в объеме 100 мл, после чего лиофильно высушивается.

Лиофильная сушка проводится согласно стандартной процедуре, описанной, например, в патенте №RU 2179726 от 20.02.2002.

Приготовление инкорпорированных положительных образцов или калибраторов производится аналогично. В качестве позитивного контрольного образца используют сыворотки доноров, содержащих антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, и вносят в раствор для разведения в нужном объеме. Жидкие К+ или калибраторы вносятся в лунки планшета по 100 мл и лиофильно высушиваются (см. выше).

Для идентификации положительного и отрицательного контролей лунки, в которые были внесены и высушены образцы, маркируются красным и зеленым цветом.

В дальнейшем такие контроли и калибраторы можно использовать в необходимом количестве для конкретной постановки. Необходимо отделить нужное количество лунок от стрипа и поместить в рамку. Далее процедура проходит согласно инструкции. В лунки с контрольными образцами вносится раствор для разведения сывороток или блокирующий раствор, после чего проводятся все те же манипуляции, что с анализируемыми образцами крови.

Схематично процесс производства инкорпорированного образца представлен на рисунке 1.

Благодаря наличию консервантов в буфере для разведения контрольных образцов инкорпорированные контроли стабильны в течение всего срока годности тест-систем. Исследования показали, что стабильность и специфичность инкорпорированных контрольных образцов аналогичны этим показателям жидких контрольных образцов. Результаты приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1
Длительное хранение отрицательных контролей тест-системы
Контроль	Дата изготовления	Дата контроля	Срок хранения	Контрольные показатели
Внешний вид	ОП
Жидкий контроль	26.10.09	27.10.09	-	Прозрачная зеленого цвета жидкость	0.067
		30.04.10	6 месяцев	-- « --	0.070
		26.10.10	12 месяцев	-- « --	0.078
		27.04.11	18 месяцев	-- « --	0.071
30.07.11	21 месяц	-- « --	0.089
Инкорпориро-ванный контроль	26.10.09	27.10.09	-	Стрипы полистиролового разборного планшета с прозрачными бесцветными или зеленого цвета лунками	0.077
		30.04.10	6 месяцев	-- « --	0.074
		26.10.10	12 месяцев	-- « --	0.074
		27.04.11	18 месяцев	-- « --	0.079
30.07.11	21 месяц	-- « --	0.072

Таблица 2
Длительное хранение положительных контролей тест-системы
Контроль	Дата изготовл ения	Дата контроля	Срок хранения	Контрольные показатели
Внешний вид	ОП
Жидкий контроль	26.10.09	27.10.09	-	Слегка опалесцирующая малиново-красного цвета жидкость	3.115
		30.04.10	6 месяцев	-- « --	3.110
		26.10.10	12 месяцев	-- « --	3.107
		27.04.11	18 месяцев	-- « --	3.014
30.07.11	21 месяц	-- « --	3.003
Инкорпориро-ванный контроль	26.10.09	27.10.09	-	Стрипы полистиролового разборного планшета с прозрачными бесцветными или малиново-красного цвета лунками	2.754
		30.04.10	6 месяцев	-- « --	2.700
		26.10.10	12 месяцев	-- « --	2.513
		27.04.11	18 месяцев	-- « --	2.218
30.07.11	21 месяц	-- « --	2.156

На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что преимущества заявленного способа получения контрольных образцов заключаются в следующем.

1. Удобство использования потребителем лунок с сухим контролем. Исчезает необходимость переноса контрольных образцов, содержащих и не содержащих инфицированную сыворотку из специальных флаконов в лунки рабочего планшета. В случае с инкорпорированными контролями требуется просто добавить в лунку блокирующий раствор, в котором разводятся все остальные анализируемые сыворотки.

2. Безопасность постановок тест-системы. Необходимость переноса жидких положительных образцов в лунки планшета несет потенциальную возможность контактирования с инфицированным материалом, поскольку в качестве позитивного контрольного образца традиционно используются образцы сыворотки крови человека, содержащие определяемые антитела (аналиты) от пациентов с перенесенным или текущим патологическим процессом.

3. Экономия основных лунок планшета при постановке ИФА. Наборы иммуноферментных тест-систем комплектуются дополнительными стрипами с инкорпорированными контрольными образцами, что дает возможность не использовать в наборе жидкие контрольные образцы и использовать дробную постановку без ущерба для количества анализируемых сывороток.

4. Удобство при производстве иммуноферментных тест-систем. Универсальные положительные и отрицательные контрольные инкорпорированные образцы могут быть одинаковыми и использоваться при постановках всех иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы ToRCH.

Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, включающий:
A) приготовление раствора для разведения сыворотки, представляющего собой фосфатно-солевой буфер с 2%-ным содержанием бычьего сывороточного альбумина с добавлением проклина 300 и 10%-ного раствора азида,
Б) подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
B) разведение сыворотки, полученной на этапе Б) в растворе для разведения для получения жидкого отрицательного контроля,
Г) подготовку сыворотки доноров для положительного контроля, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
Д) разведение сыворотки, полученной на этапе Г) в растворе для разведения для получения жидкого положительного контроля,
Е) внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета,
Ж) лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля,
З) маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для индивидуального подбора препаратов, содержащих пробиотические штаммы лактобактерий, для эффективной интравагинальной терапии.

Реагент датчиков-анализаторов с целлюлозными полимерами // 2499996

Группа изобретений относится к составу реагента датчика-анализатора, адаптированного для содействия определению концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе, к способам определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе и к способу нанесения состава реагента датчика анализатора на подложку способом трафаретной печати.

Способ культивирования микроводорослей биотопливного назначения // 2497944

Изобретение относится к микробиологии. Способ культивирования микроводорослей биотопливного назначения включает две стадии альголизации.

Амперометрия со стробированием и быстрым считыванием // 2491549

Способ определения ресурсных параметров земельного участка при осуществлении поточного землепользования // 2487349

Изобретение относится к области сельского хозяйства. .

Способ диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса // 2485183

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса. .

Способ косвенной оценки вирулентности штаммов патогенных буркхольдерий по признаку цитопатогенности // 2485182

Изобретение относится к медицине, а конкретно микробиологии, и касается оценки вирулентности штаммов возбудителя мелиоидоза и сапа. .

Способы применения модифицированного вируса гриппа // 2480480

Изобретение относится к области биотехнологии. .

Новая эффективная лекарственная мишень для лечения туберкулеза // 2474621

Изобретение относится к медицине и касается способа скрининга in vitro потенциальных лекарственных средств для лечения туберкулеза путем нарушения биосинтеза арабиногалактана, где указанный способ включает стадию приведения в контакт клеточной культуры Mycobacterium tuberculosis, сверхэкспрессирующей белок, выполняющий превращение декапренил-Р-рибозы в декапренил-Р-арабинозу, и который может кодироваться геном rv3790 или его гомологами, или искусственной открытой рамкой считывания, продукт экспрессии которой идентичен белку Rv3790 или является его гомологом, с потенциальным лекарственным средством, и последующей оценки процента ингибирования, вызываемого потенциальным лекарственным средством, относительно контроля в аналитическом тесте.

Способ мультиплексного пцр-анализа и набор для его осуществления // 2470997

Изобретение относится к области медицины и биологии. .

Способ детекции белков в амилоидном состоянии и набор для детекции белков в амилоидном состоянии // 2509155

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков. Также предложен набор для детекции белков в амилоидном состоянии. Изобретение может быть использовано в медицине для диагностики амилоидозов. 2 н. и 7 з. п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.

Анти-mif антитела // 2509777

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено моноклональное антитело и его антиген-связывающие части, которые специфически связывают C-концевую или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF). Анти-MIF антитело и его антиген-связывающая часть дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF человека. Также описаны выделенная тяжелая и легкая цепь иммуноглобулинов, полученных из анти-MIF антител, и молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие иммуноглобулины. Кроме того, раскрыт способ идентификации анти-MIF антител, фармацевтические композиции, содержащие эти антитела, и способ применения этих антител и композиций для лечения заболеваний, связанных с MIF. 9 н. и 13 з.п. ф-лы, 10 ил., 16 пр.

Способ выявления o-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу // 2509807

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу. Предложенное изобретение может быть использовано для проведения протеомного и фосфопротеомного анализа. Способ включает проведение двумерного электрофореза с последующей идентификацией пятен методами спектроскопии MALDI-TOF или фосфопротеомики. Проводят обессоливание клеточных гомогенатов методом гель-хроматографии или диализа клеточных гомогенатов. Подвергают клеточные гомогенаты дегликозилированию по принципу β-элиминирования в растворе 0,05 М NaOH, который содержит 38 мг/мл NaBH4, в течение 16 часов при +45°C с последующим добавлением цианинового красителя JC-1 в концентрации 10-6 М. Инкубируют клеточные гомогенаты в течение 15 мин при комнатной температуре. Концентрируют гомогенаты осаждением 50% ацетоном, подвергают двумерному электрофорезу с образованием электрофореграмм, анализируемых на флуоресценцию при облучении на трансиллюминаторе синего цвета со светофильтром янтарного цвета, визуально проявляющуюся в виде светящихся в темноте полос. Данные полосы экстрагируют из геля и используют для проведения протеомного или фосфопротеомного анализа. Дополнительный анализ интенсивности и расположения экстрагируемых полос выполняют за счет сравнения окрашенных азотнокислым серебром электрофореграмм гомогенатов до и после процедуры дегликозилирования. Предложенное изобретение позволяет идентифицировать белки, меняющие состав или степень своего O-гликозилирования в результате какого-либо физиологического воздействия на клетку. 5 ил.

Способ проектирования первичной структуры белка с заданной вторичной структурой // 2511002

Изобретение относится к компьютерному способу, использующему биохимические базы данных при разработке новых белковых соединений. Проектирование осуществляется оператором с помощью специально написанной программы PROTCOM на основе использования базы данных пентафрагментов белков. Процесс проектирования состоит в задании и введении в программу PROTCOM начальной последовательности из пяти аминокислот (заданного начального пентафрагмента) и десятизначного числа, записанного в двоичной системе, являющегося описанием вторичной структуры заданного начального пентафрагмента. Проводится поиск этой последовательности в папке базы данных, с номером, соответствующим заданному десятизначному числу. Поиск производят до тех пор, пока заданный начальный пентафрагмент не будет найден в базе данных. После его нахождения считают этот пентафрагмент первым из возможного числа N пентафрагментов проектируемой первичной структуры белка и производят его запись вместе с десятизначным номером папки, описывающим его вторичную структуру, в рабочий файл программы. Далее задают вторичные структуры каждого последующего из (N-1) пентафрагментов путем введения того же или измененного десятизначного числа, описывающего вторичную структуру предыдущего пентафрагмента в программу и проводят поиск в базе данных пентафрагментов, содержащих четыре аминокислоты каждого из (N-1) пентафрагментов, записанных в рабочем файле и одну новую. При нахождении таких пентафрагментов производят выбор одной из новых аминокислот и присоединение ее к четырем последним аминокислотам предыдущего пентафрагмента, запись новой аминокислоты и десятичного номера папки, описывающего вторичную структуру каждого найденного пентафрагмента в рабочий файл. Спроектированной первичной структурой белка считают полученную в рабочем файле последовательность аминокислот, с соответствующим описанием ее вторичной структуры. Предложенный способ проектирования первичной структуры белка существенно упрощает и ускоряет задачу проектирования белков с заданной вторичной структурой. 5 ил., 21 табл., 2 пр.

Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (вич-1), в том числе вич-1 группы о, в сыворотке (плазме) крови человека "дс-ифа-вич-ат-срок" // 2515051

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

Фосфолипидный флуоресцентный зонд и тест-система для определения активности фосфолипазы а2 в сыворотке крови // 2517538

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к фосфолипидному флуоресцентному зонду, и может быть использовано в медицине. Указанный фосфолипидный флуоресцентный зонд, характеризующийся следующим названием 1-[13-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)тридеканоил]-2-(10-{[(2-гидроксинафтил-1)азофенил-4]азофенил-4}деканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолин, используют в составе тест-системы для определения активности фосфолипазы А2 группы IIA (секФЛА2(IIA)) в сыворотке крови, которая также содержит везикулярную фосфолипидную матрицу для включения зонда, состоящую из фосфатидилхолина, лизофосфатидилхолина и фосфатидилглицерина, буферный раствор и фосфолипазу А2 пчелиного яда в качестве стандарта. Изобретение позволяет достоверно определять активность секФЛА2(IIA)в сыворотке крови человека в клинических условиях. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 5 пр.

Флуоресцентный зонд и тест-система для определения активности фосфолипазы а2 // 2517746

Настоящее изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к созданию тест-систем на основе флуоресцентных зондов, которые могут быть использованы в качестве субстратов для фосфолипаз А1 и А2. Зонд с наименованием 1-[3-(2,4-динитрофениламино)пропаноил]-2-[8-(9-антрил)-7Е-октеноил)]-sn-глицеро-3-фосфохолин представляет собой аналог фосфатидилхолина с модифицированными жирнокислотными цепями, одна из которых несет флуоресцентную группу, а другая - группировку-тушитель флуоресценции. В качестве пары флуорофор-тушитель используют: 9-антрилвинил - 2,4-динитрофенил. Полученный зонд входит в состав тест-системы для определения активности фосфолипазы А2 группы IIA, которая также включает мицеллярную матрицу, буферный раствор, диглим и фосфолипазу А2 пчелиного яда в качестве стандарта. Изобретение позволяет определять активность фосфолипазы А2 в сыворотке крови в случае острых патологических процессов, а также в тканевых и клеточных экстрактах. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 5 пр.

Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе // 2518247

Настоящее изобретение относится к области биофизики. Предложены способы определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, в соответствии с которыми обеспечивают систему in vitro, которая содержит образец плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы, коллоидного раствора, кристаллоидного раствора или геля, и протеолитический фермент или его предшественник, добавляют флуорогенный, хромогенный или люминесцентный субстрат для упомянутого фермента, регистрируют в заданные моменты времени пространственное распределение сигнала высвобождающейся метки субстрата и получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция - диффузия - конвекция» с учетом связывания метки с компонентами среды. Также рассмотрено устройство для реализации способов по настоящему изобретению и способ диагностики нарушений гемостаза, основанный на их применении. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в исследованиях системы свертывания крови и диагностике заболеваний, связанных с нарушениями свертывания крови. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил.

Биологический сенсор и способ создания биологического сенсора // 2527699

Группа изобретений относится к области биотехнологии, а именно к исследованию биомолекулярных взаимодействий и детектированию биомолекул с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Описаны биологический сенсор, а также способ создания биологического сенсора с использованием тонких пленок на основе графена, оксида графена или однослойных или многослойных углеродных нанотрубок. Биологический сенсор состоит из подложки, металлической пленки, на поверхность которой нанесен промежуточный связующий слой, выполненный из тонкой пленки из графена, или тонкой пленки оксида графена, или тонкой пленки из углеродных нанотрубок. На поверхность промежуточного связующего слоя конформно и однородно адсорбирован биоспецифический слой. В качестве биоспецифического слоя может выступать слой молекул связывающего партнера анализируемого вещества или слой из комплекса биологических молекул, способных химически взаимодействовать с молекулами связывающего партнера и образовавших с ними комплекс. Также в качестве биоспецифического слоя может выступать слой гидрогеля, на который осаждены молекулы связывающего партнера и/или комплекс из молекул связывающего партнера и биологических молекул, которые могут образовывать химическую связь с молекулами связывающего партнера. Описанный способ получения биологического сенсора включает в себя стадии нанесения металлической пленки, промежуточного связующего слоя и биоспецифического слоя. Достигается высокая чувствительность биосенсора в сочетании с высокой биоспецифичностью; расширение спектра применения устройства; защита металлической пленки от воздействий внешней среды; возможность детектирования крупных биологических объектов. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 9 ил.

Способы получения и применения мультипотентных клеточных популяций // 2535365

Изобретение относится к области биотехнологии и клеточной технологии. Заявленное изобретение направлено на создание плюрипотентных, мультипотентных и/или самообновляющихся клеток, которые способны начать дифференцироваться в культуре в различные типы клеток и способны к дальнейшей дифференцировке in vivo. Заявленное изобретение также направлено на создание популяций требуемых дифференцирующихся клеток, которые можно пересадить пациентам, генетическую модификацию эндогенных клеток и лечение пациентов, страдающих заболеваниями, интенсивность которых можно уменьшить с помощью этих методов. Данное изобретение также предлагает способы предупреждения, лечения или замедления развития заболевания, связанного с инфекцией вирусом иммунодефицита. 4 н. и 13 з.п. ф-лы, 1 ил., 13 пр.