Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces cerevisiae
Владельцы патента RU 2510854:
Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ включает суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C. Кипятят суспензию в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляют 2,5 М NaOH. Добавляют по окончании экстракции в суспензию кипяченую воду, перемешивают, отстаивают суспензию при комнатной температуре в течение 22 ч. Разливают слитый с помощью сифона супернатант в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией. Предложенное изобретение позволяет упростить получение препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и может быть использовано для лечения кожных заболеваний вирусной этиологии и ОРВИ, в том числе гриппа.
Наиболее близким к предлагаемому является раствор высокополимерной РНК, полученный из дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре, к слитой с помощью сифона надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 M, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), осадок-шрот промывают 2-мя порциями 2-3 М раствора NaCl и 5-ю порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), из промытого шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой [1].
Данным способом может быть получен раствор биологически активной высокополимерной РНК. Однако этот способ многостадиен и трудоемок.
Предлагаемый способ получения дрожжевого экстракта, не уступающего по лечебным свойствам прототипу, прост и полностью безотходен.
Цель достигается тем, что сухие дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-100°C в течение 40-45 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре и супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, - высокополимерную РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия, используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть использован для приготовления белковых коктейлей для спортсменов.
Пример осуществления предлагаемого способа
300 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке) в течение 3 мин в 3 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°C, периодически перемешивая. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию доводили кипяченой водой до 4,5 л, перемешивали, переносили в высокий узкий стеклянный сосуд и отстаивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Отстоявшийся супернатант (~2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость, после чего добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом.
Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий высокополимерную РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и полученный по способу - прототипу [1]. Как видно из приведенной ниже таблицы его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для очищенной высокополимерной РНК. По крайней мере белка, способного вызвать аллергию, в препарате Виталанг-2и нет (см. соотношения D280/D260).
Источник информации
1. Патент РФ №2392329.
| Спектральные характеристики экстракта высокополимерной (ВП) дрожжевой РНК, полученного нами с помощью олеиновой кислоты, и очищенной по способу-прототипу [1] высокополимерной РНК | |||
| Препарат ВП РНК | Спектральные отношения | ||
| D230/D260 | D250/D260 | D280/D260 | |
| Экстракт | 0,60 | 0,91 | 0,53 |
| Очищенный препарат | 0,45 | 0,92 | 0,56 |
Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, добавление через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию 2,5 М NaOH, добавление по окончании экстракции в суспензию кипяченой воды, перемешивание, отстаивание суспензии при комнатной температуре в течение 22 ч, розлив слитого с помощью сифона супернатанта в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией.
