Способ трансплантации сплошного свободного полнослойного аутологичного кожного лоскута в эксперименте

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Формируют сплошной свободный полнослойный кожный лоскут размером 1,5 см у крысы. Иссекают фасцию, покрывающую раневую поверхность, с обнажением подлежащей мышцы на прежнем ложе. Фиксируют по противолежащим краям лоскут к краю кожи. Сшивают между собой свободные края кожи. Через 8-9 суток разъединяют и разводят в стороны сросшиеся над лоскутом края кожи. Способ обеспечивает оптимальные условия приживления кожного лоскута, позволяет достигнуть полного контакта с подлежащими тканями, улучшения развития микроциркуляторного русла, без применения медикаментозных средств, стимулирующих ангиогенез. 1 пр. 9 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной трансплантологии. Способ может быть использован в качестве модели аутотрансплантации кожного лоскута.

Принято считать, что трансплантация кожного лоскута у подопытных животных, в частности у крыс, могла бы служить удобной моделью для изучения в эксперименте ряда фундаментальных проблем трансплантологии. Выполнять эксперименты на крысах удобно, так как крысы являются выносливыми животными, хорошо переносят различные виды наркоза и манипуляций и поэтому при работе с ними результаты могут быть воспроизводимы и подвергнуты статистической обработке.

Для разработки и применения новых методов повышения эффективности приживления кожных аллотрансплантатов необходим способ, обеспечивающий в большинстве случаев надежное приживление аутотрансплантата кожи. Другими словами, оптимальная методика трансплантации кожного лоскута, разработанная на аутотрансплантатах, может быть перенесена на аллотрансплантацию кожных лоскутов. При этом исследователь сможет заниматься проблемами приживления чужеродного материала, абстрагируясь от техники трансплантации.

Из данных литературы следует, что приживление сплошных свободных полнослойных трансплантатов кожи у крыс, даже аутотрансплантатов, наступает далеко не всегда и достигает лишь 37,5-41,6% (А.А.Задорожный, С.И.Катаев, С.Ю.Штрыголь. Динамика кровотока в аутотрансплантатах кожи разных участков тела у крыс по данным лазерной допплеровской флоуметрии. Методология флоуметрии, Выпуск 5, 2001 г., стр.179-196). Невысокий процент приживления аутотрансплантатов кожи у крыс не позволяет использовать этих животных для моделирования аллотрансплантации кожи и осуществления объективной оценки эффективности приживления кожи по новым предлагаемым методам.

Определяющим условием успешного приживления полнослойных аутотрансплантатов кожи является восстановление в них адекватного питания (оксигенации и метаболизма) за счет быстрого восстановления микроциркуляции и последующего врастания новых сосудов из сосудистых сетей мышечно-фасциального ложа. Полноценность восстановления микроциркуляции в трансплантате кожи зависит, прежде всего, от надежной иммобилизации его к поверхности раневого ложа, способствующей капилляризации трансплантата (Радостина А.И., Мушенко Т., Меноте С. Состояние микроциркуляторного русла при ауто- и аллотрансплантации кожи у белых крыс. Сердечно-сосудистая система в клинике и эксперименте. Сборник научных трудов. Университет Дружбы Народов им. Патриса Лумумбы. - М., 1984, - С.93-95).

В качестве прототипа выбран способ трансплантации сплошного свободного полнослойного аутологичного кожного лоскута с размерами 2,5×2,5 см у крыс, включающий иммобилизацию трансплантата к раневой поверхности с помощью узловых швов, а также применение лейкопластыря в течение 5 дней и введение ретаболила, дополнительно индуцирующего анаболические процессы и капилляризацию трансплантата (А.А. Задорожный, С.Ю. Штрыголь, С.И. Катаев. Влияние ретаболила и аппликации лейкопластыря на приживление и объемный кровоток в аутотрансплантатах кожи разных участков тела у крыс. Методология флоуметрии, Выпуск 6, 2002 г. стр.131-142).

Метод позволяет повысить процент приживления полнослойных трансплантатов кожи с 41,6% до 66,6% при наложении узловых швов и до 87,5% при сочетанном применении швов, лейкопластыря и ретаболила.

Данный способ не обеспечивает стопроцентной приживаемости лоскута, так как не позволяет создать надежную фиксацию лоскута к раневой поверхности, восстановить адекватное питание в нем и требует дополнительного применения медикаментозных средств общего действия до и после трансплантации для стимуляции ангиогенеза.

Таким образом, на сегодняшний день надежный и воспроизводимый способ аутотрансплантации кожного лоскута крысам с максимально высоким процентом приживления (близким к 100%) без применения медикаментозных средств общего действия в экспериментальной трансплантологии отсутствует.

Задачей настоящего изобретения является создание воспроизводимого способа аутотрансплантации сплошного свободного полнослойного кожного лоскута у крыс, который может быть использован в качестве трансплантационной модели.

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в обеспечении надежного приживления кожного лоскута за счет создания условий адекватного диффузного питания тканей аутотрансплантата путем исключения пережатия его микрососудов и окружающих тканей при сохранении надежной фиксации в области ложа; а также в упрощении и удешевлении способа за счет исключения дополнительного применения медикаментозных средств общего действия, стимулирующих ангиогенез.

Нами эмпирически подобраны размеры трансплантата, а также предложена оригинальная двойная фиксация трансплантата в тканях, что позволяет, с одной стороны, обеспечить максимально полный контакт трансплантата с подлежащими тканями, а с другой стороны, улучшить диффузионное питание в нем на этапе развития микроциркуляторного русла и избежать ишемического повреждения - ведущего фактора отторжения.

Отсутствие необходимости применения фармпрепаратов не только упрощает и удешевляет способ, но и позволяет изучать истинное приживление аллотрансплантатов, влиять с помощью иммунофармакологических препаратов на толерантность организма к трансплантату.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Для трансплантации сплошного свободного полнослойного аутологичного кожного лоскута в эксперименте формируют сплошной свободный полнослойный кожный лоскут у крысы. Размещают его на прежнем ложе и фиксируют в нем. При этом формируют кожный лоскут округлой формы с наибольшим размером 1,5 см. Иссекают фасцию, покрывающую раневую поверхность, с обнажением подлежащей мышцы или мышц. Фиксацию выполняют по противолежащим краям лоскута, захватывая край лоскута и край кожи, примыкающей к нему. Затем закрывают лоскут путем сшивания между собой свободных краев кожи, примыкающей к лоскуту. Через 8-9 суток разъединяют и разводят в стороны сросшиеся над лоскутом края кожи, обнажая его.

В частном случае кожный лоскут формируют на спине в области грудной клетки.

Фиксация каждого из противолежащих краев лоскута может быть выполнена в одной точке.

Фиксация противолежащих краев лоскута может быть выполнена путем наложения швов, которые снимают через 15-20 суток.

Перед закрытием лоскута его и рану орошают раствором антибиотика, в качестве раствора антибиотика используют 0,4% раствор гентамицина сульфата в физиологическом растворе.

Способ осуществляется следующим образом.

Обездвиживают и проводят общую анестезию животному - крысе. На спине в области грудной клетки удаляют волосяной покров выщипыванием и последующим сбриванием остатков волос безопасной бритвой, обрабатывают операционное поле 70% раствором этилового спирта.

Избегая сильного сдавливания, производят захват кожи зажимом, имеющим кольцеобразную форму бранш. Вырезают кожный лоскут скальпелем или лезвием безопасной бритвы, удерживаемым хирургическим зажимом, производя разрез по контуру бранш. Лоскут должен быть округлой формы с наибольшим размером (диаметром) 1,5 см.

Вырезанный кожный лоскут кладут на стерильный ватный диск, пропитанный 0,4% раствором гентамицина на физиологическом растворе. После остановки кровотечения в ране выделяют и иссекают фасцию спины, покрывающую раневую поверхность. Лоскут накладывают на обнаженные группы мышц. Фиксацию лоскута выполняют наложением швов по противолежащим краям, захватывая край кожи лоскута и край кожи, примыкающей к лоскуту. Затем закрывают лоскут путем сшивания между собой свободных краев кожи, примыкающей к нему. Перед закрытием лоскута его и рану орошают раствором антибиотика. В качестве раствора антибиотика используют 0,4% раствор гентамицина сульфата в физиологическом растворе.

После завершения операции на рану наносят мазь левомеколь, покрывают стерильной салфеткой и накладывают круговую повязку.

Через 8-9 суток повязку снимают. Снимают швы, разъединяют и разводят в стороны сросшиеся над кожным лоскутом края кожи, обнажая его.

Швы, фиксирующие местоположение кожного лоскута в двух противолежащих точках, снимают через 15-20 суток.

Для доказательства возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.

Предлагаемый способ трансплантации сплошного свободного полнослойного аутологичного кожного лоскута был испытан на 14 крысах породы Вистар и 5 крысах породы Август. Трансплантированный кожный лоскут прижился у всех 19 животных, участвовавших в эксперименте.

Пример

Обездвижили и провели общую анестезию крысе породы Вистар весом 410 г ветеринарным препаратом золетил, который вводили подкожно в дозе 12 мг. Для подавления агрессивного поведения животное предварительно наркотизировали этиловым эфиром в эксикаторе. Продолжительность анестезии составила 1 час 20 минут.

На фотографии 1 изображено операционное поле на спине в области грудной клетки. Его готовили путем удаления волосяного покрова выщипыванием и последующим сбриванием остатков волос безопасной бритвой. Обрабатывали операционное поле 70% раствором этилового спирта.

Фотографии 2, 3, 4 и 5 демонстрируют вырезание кожного лоскута и аутотрансплантацию, которые осуществляли следующим образом.

Избегая сильного сдавливания, произвели захват кожи зажимом, имеющим кольцеобразную форму бранш. Вырезали кожный лоскут скальпелем. Получили лоскут округлой формы с наибольшим размером 1,5 см. Вырезанный кожный лоскут поместили на стерильный ватный диск, пропитанный 0,4% раствором гентамицина на физиологическом растворе. После остановки кровотечения в ране иссекли фасцию спины, покрывающую раневую поверхность. Лоскут наложили на обнаженные группы мышц. Фиксацию лоскута выполнили наложением швов по противолежащим, наиболее удаленным друг от друга краям, захватывая край кожи лоскута и край кожи, примыкающий к лоскуту. Фиксацию каждого из противолежащих краев лоскута выполнили в одной точке. Затем закрыли лоскут путем сшивания между собой свободных краев кожи, примыкающих к нему. Перед закрытием лоскута его и рану орошали раствором антибиотика. В качестве раствора антибиотика использовали 0,4% раствор гентамицина сульфата в физиологическом растворе.

После завершения операции на рану нанесли мазь левомеколь, покрыли стерильной салфеткой и наложили круговую повязку.

Фотография 6 демонстрирует снятие повязки, которое производят через 8-9 суток после трансплантации.

На фотографии 7 изображены рана и кожный лоскут в ней после снятия швов, разъединения и разведения в стороны сросшихся над кожным лоскутом краев кожи через 8-9 суток после трансплантации.

Швы, фиксирующие местоположение кожного лоскута в двух противолежащих точках, сняли через 15-20 суток.

Фотографии 8а и 8б демонстрируют приживление аутотрансплантата кожи у двух крыс на 25 сутки после трансплантации.

Таким образом, способ позволяет достигнуть 100% приживления аутотрансплантата без дополнительного применения медикаментозных препаратов общего действия, ускоряющих ангиогенез.

Уменьшение площади трансплантата в условиях двойной фиксации позволяет достигнуть максимально полного контакта с подлежащими тканями и улучшения диффузионного питания на этапе развития микроциркуляторного русла в трансплантате и избежать его ишемического повреждения.

Отсутствие необходимости применения фармпрепаратов позволяет изучить истинное приживление аллотрансплантатов и влиять с помощью иммунофарм препаратов на толерантность организма к трансплантату.

1. Способ трансплантации сплошного свободного полнослойного аутологичного кожного лоскута в эксперименте, включающий формирование сплошного свободного полнослойного кожного лоскута у крысы, размещение его на прежнем ложе и фиксацию в нем, отличающийся тем, что формируют кожный лоскут округлой формы с наибольшим размером 1,5 см, иссекают фасцию, покрывающую раневую поверхность, с обнажением подлежащей мышцы или мышц, а фиксацию выполняют по противолежащим краям лоскута, захватывая край лоскута и край кожи, примыкающей к лоскуту; затем закрывают лоскут путем сшивания между собой свободных краев кожи, примыкающей к нему; через 8-9 суток разъединяют и разводят в стороны сросшиеся над лоскутом края кожи, обнажая его.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что кожный лоскут формируют на спине в области грудной клетки.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что фиксацию каждого из противолежащих краев лоскута выполняют в одной точке.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что фиксацию противолежащих краев лоскута выполняют путем наложения швов.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что швы, фиксирующие противолежащие края, снимают через 15-20 суток.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед закрытием лоскута его и рану орошают раствором антибиотика.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве раствора антибиотика используют 0,4% раствор гентамицина сульфата в физиологическом растворе.