Внутриматочное средство для лечения послеродового эндометрита у коров и других сельскохозяйственных животных на основе соли фосфония

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных. Суппозитории включают действующее вещество трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 1%. В качестве фармацевтически приемлемых носителей суппозитории содержат «полиэтиленгликоль-6000» (30%), высшие жирные спирты C16-C21 (0,6%), кальция стеарат (0,8%) и сахароза (42,8%), вспениватели содержат кислоту лимонную (10%), натрия гидрокарбонат (14,8%). Заявленное средство обладает высокой бактерицидной, антимикотической, антиоксидантной активностью, обеспечивает высокий лечебный и профилактический эффект для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится преимущественно к ветеринарии, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для лечения послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных, вызванного экзогенными и эндогенными инфекционными факторами, приводящими к гнойным воспалениям родовых путей животных, выкидышам и мертворождению молодняка. Может быть использовано для лечения родовых путей человека.

Задачей заявленного технического решения является разработка внутриматочного средства «шипучих-самовспенивающихся» суппозиториев для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита (Endometritis puerperalis catarrhalis purulenta acuta) - воспаления родовых путей у сельскохозяйственных животных, обладающих низкими лечебными дозами (1% действующего вещества - соли четвертичного фосфония), преимущественно для ветеринарии с выраженным антибактериальным, антимикотическим и антиоксидантным действием.

При клиническом исследовании больных коров острым катарально-гнойный эндометритом выявляются следующие признаки, указывающие на развитие патологических процессов со стороны половой системы: снижение аппетита, угнетение, вялая жвачка, гипотонические сокращения рубца, повышение температуры, матовость кожного покрова, покраснение слизистой матки, наличие на ней гнойно-катарального экссудата, полосчатых кровоизлияний [Воронин В.В. Лечение коров при эндометрите. Ветеринария, 1977. - №5. - С.71-73]. При вагинальном осмотре слизистая оболочка влагалища и влагалищной части шейки матки отечна, гиперемирована, с полосчатыми кровоизлияниями. Из канала шейки матки в полость влагалища выделялся воспалительный экссудат. Из половой щели отмечены истечения гнойно-катарального характера, истечения заметны также на полу, где лежало животное. При ректальном исследовании матка располагалась в брюшной полости, размером, как и при 3-4-месячной беременности. Стенки матки дряблые, тестоватые. Сократительная способность слабо выражена. Оба рога матки увеличены. При массаже матки через прямую кишку из половых путей выделяется в большом количестве гнойно-катаральный экссудат жидкой консистенции, желто-бурого цвета, с неприятным ихорозным запахом. Яичники имеют гладкую поверхность. При отсутствии правильного лечения могут развиться хронические воспалительные процессы родовых путей животных, что может привести в дальнейшем к выкидышам и мертворождению молодняка, сепсису.

Данное заболевание, в свою очередь, приводит к необходимости длительного и очень дорогостоящего лечения [Червяков Д.К., Евдокимов П.Д., Вишкер А.С. Лекарственные средства в ветеринарии. Справочник. Изд.2, перераб. и доп. М.: Колос. - 1977. - 415 с.]: внутривенные вливания 40% раствор глюкозы, 10% раствор хлорида кальция, внутримышечные инъекции 4% раствора гентамицина, тривитамина, 2% синестрола, подкожные инъекции 40 ЕД окситоцина, 0.1% раствор карбохолина, назначали аутогемотерапию по схеме 60, 80, 100, 120, суппозитории на основе фуразолидона, проводили массаж матки и промывание полости матки 4% раствором ихтиола. Лечение продолжалось в течение месяца. Однако и такое длительное и дорогостоящее лечение не всегда давало положительные результаты, заболевание зачастую переходит в хроническую форму, что соответственно приводит к значительным экономическим потерям в животноводстве и гибели молодняка.

Разработка лекарственных средств для лечения острого гнойно-катарального эндометрита, воздействующих на различные звенья патологического процесса, сочетающих в себе одновременно антибактериальное, антимикотическое и антиоксидантное действие, является актуальной задачей как ветеринарии, так и фармации, позволяет эффективно проводить лечение животных при остром гнойно-катаральном эндометрите, вызванном воздействием патогенной микрофлоры - экзогенными и/или эндогенными инфекционными факторами, приводящими к потере молодняка и послеродовым заболеваниям коров. Данное заболевание, в свою очередь, приводит к необходимости длительного и дорогостоящего лечения животных и соответственно к значительным экономическим потерям.

Из исследованного заявителем уровня техники выявлен близкий по назначению аналог - пенные шипучие суппозитории «Йодопен» (Iodopen) - лекарственное средство (антисептик), (Йодопен хранят в упаковке производителя, с предосторожностью (список Б), в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте, при температуре от 4 до 20°C. Срок годности при указанных условиях хранения - 18 месяцев со дня изготовления. Йодопен следует хранить в местах, не доступных для детей), которое содержит 1,5 г йодповидона (1,57% активного йода) [Справочник Видаль «Лекарственные средства ветеринарного применения в России» М.: Видаль. - 2011. - 532 с.; Патент №2155046 на изобретение «Средство для профилактики и лечения эндометритов у коров». Гавриш В.Г., Семенов С.В., Жемеричкин Д.А., Егунова А.В. Заявка №99112322 от 08.06.1999. Зарегистрирован в Гос. реестре изобретений РФ 27.08.2000 г., 4 с.], активно используемые в гинекологии и акушерстве. В качестве активно действующего вещества «Иодопена» используется импортная фармацевтическая субстанция «Йодповидона 30/06», которая для изготовления суппозиториев закупается в Германии на известной фармацевтической фирме "BASF Corporation" [PVP-иод (иодоповидон). Техническая информация фирмы «BASF», 1997. - 21 с.].

Недостатками данного антисептика являются:

- изготавливается из дорогой импортной фармацевтической субстанции фирмы "BASF Corporation";

- имеет длительный срок лечения и необходимость сочетания с другими видами лечения, и, как следствие, - дороговизна лечения;

- содержит высокие лечебные дозы активного вещества (кристаллического йода);

- обладает сильным побочным токсико-аллергическим действием;

- не обладает антиоксидантными свойствами;

- часто возникает необходимость дополнительного курса лечения осложнений:

1) гипертиреоза;

2) аденомы щитовидной железы;

3) сердечной недостаточности;

4) хронической почечной недостаточности;

5) дерматита Дюринга;

- возникает необходимость дополнительного курса лечения:

1) противоаллергического;

2) антитоксического;

3) противогрибкового;

- требуется соблюдение строгих правил хранения (Список Б, в защищенном от света месте, низкой температуре и проветриваемой атмосферы).

Из исследований, проведенных заявителем по российским и зарубежным информационным базам данных и технической литературе, известны антибактериальные, противогрибковые и антимикотические свойства четвертичных солей фосфония как таковые [см. Галкина И.В., Тудрий Е.В., Бахтиярова Ю.В., Егорова С.Н., Галкин В.И. Синтез, строение и исследование биологической активности солей фосфония / в сб. Фармакология и токсикология фосфорорганических соединений и других биологически активных веществ. - Казань, 2008. С.23; Pat. JP 2002308713, publ. 23/10/2002; Pat. JP 2005060332, publ. 10.03.2005; Pat. JP 2000316701, publ. 221.11.2003], при этом из исследованного уровня техники заявителем не выявлены специфические свойства этих соединений, показывающие их известностью эффективность в отношении возможности лечения животных с послеродовыми воспалительными заболеваниями родовых путей, вызванных воздействием патогенной микрофлоры - экзогенными или эндогенными инфекционными факторами, приводящими к острому гнойно-катаральному эндометриту.

Из уровня техники заявителем не выявлено структурных аналогов предлагаемого фармацевтического средства на основе четвертичных солей фосфония для целей профилактики и лечения гнойных послеродовых эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, вызванных экзогенными и эндогенными инфекционными факторами, приводящими к гнойным воспалениям родовых путей животных, выкидышам и мертворождению молодняка.

Сущность заявленного технического решения заключается в том, что используют сложный фармацевтический состав (внутриматочное средство) в виде лекарственной формы (суппозитории весом 10 г), содержащий активно действующее вещество - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфоний бромид и пенообразующую основу (фармацевтически приемлемые носители и вспениватели), включающую полиэтиленгликоль, лимонную кислоту, бикарбонат натрия, кальций стеариновокислый, сахарозу, оксиэтилированные жирные спирты в следующем соотношении (наиболее эффективном, выявленном в результате проведенных опытов):

Полиэтиленгликоль 6000	3,0 г	30%
Соль четвертичного фосфония формулы I	0,1 г	1%
Высшие жирные спирты С16-С21	0,06 г	0,6%
Кальция стеарат	0,08 г	0,8%
Кислота лимонная	1,0 г	10%
Натрия гидрокарбонат	1,48 г	14,8%
Сахароза	4,28 г	42,8%

Полученные суппозитории при контакте с маточной жидкостью (экссудатом) «пенятся» вследствие реакции нейтрализации гидрокарбоната натрия с лимонной кислотой, заполняют полость матки, при ее максимальном послеродовом сокращении, обеспечивая тем самым контакт лекарственного вещества с воспаленными тканями. Лекарственная форма самовспенивающихся суппозиториев торпедовидной формы состоит из соли трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида, как основного действующего вещества формулы I (в концентрации 1%) и фармацевтически приемлемых носителей (полиэтиленгликоль 6000 - 30%, высшие жирные спирты С16-С21 - 0,6%, кальция стеарат - 0,8%, сахароза - 42,8%) и вспенивателя (кислота лимонная - 10%, натрия гидрокарбонат - 14,8%).

Заявленное внутриматочное средство - фармацевтические суппозитории обладают высокой бактерицидной, антимикотической и антиоксидантной активностью при низких концентрациях, которые могут найти применение в области ветеринарии и медицины.

Задачей заявленного технического решения является разработка неизвестного из уровня техники препарата нового поколения - внутриматочного средства - самовспенивающихся суппозиториев, характеризующегося тем, что суппозитории

должны обладать:

- более низкой стоимостью по сравнению с препаратом «Йодопен»;

- коротким периодом обработки и лечения животного;

- низкими лечебными дозами активного вещества;

- антиоксидантными свойствами;

- более низким классом опасности по сравнению с препаратом «Йодопен»;

должны исключать:

- возможность возникновения осложнений и заболеваний от применения препарата и, как следствие, необходимость дополнительного лечения животных;

- необходимость дополнительного противоаллергического лечения животных;

- необходимость дополнительного антитоксического лечения животных;

- необходимость дополнительного противогрибкового лечения животных.

Заявляемое внутриматочное средство - шипучие пенные суппозитории имеют выраженный лечебный эффект при лечении гнойно-катаральных эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, не уступающий, а даже превосходящий препарат «Йодопен» по эффективности излечения при одно-двухразовом их применении, при содержании лекарственного средства формулы I в суппозиториях в 15 раз меньше, чем содержание йодоповидона в «Йодопене».

Поставленная задача решается заявленным противовоспалительным фармацевтическим лекарственным внутриматочным средством для профилактики и лечения гнойно-катарального эндометрита при одно-, двукратной обработке животного (в зависимости от состояния животного) в виде шипучих суппозиториев, состоящих из соли трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида формулы I в фармацевтически приемлемом носителе:

Усовершенствованный способ получения соли фосфония формулы I состоит из двух стадий и частично воспроизводится по литературной методике, описанной в [Stames W.H., Lauff J.J. Reactions of a Quinone Methide with Tri-n-butylphosphosphine. J. Org. Chem. Vol.35, N6, 1970. - P.1978-1986], следует отметить, что в работах американских авторов вообще не изучались антибактериальные, антимикотические и антиоксидантные свойства этих соединений, а исследовались лишь в качестве сжигателей жира для похудания. Необходимо заметить, что их опыты оказались отрицательными.

Первой стадией синтеза соединения формулы I явилось бромирование 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (ионол) в четыреххлористом углероде, приводящее к количественному выходу 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилбромида в виде желтого кристаллического продукта с температурой плавления 55-56°C.

Второй стадией получения продукта формулы I была кватернизация трифенилфосфина синтезированным бензилбромидом.

Реакция кватернизации проводилась в ацетонитриле, после отгонки большей части (2/3) растворителя, продукт формулы I осаждался эфиром. Получен бесцветный мелкокристаллический порошок с высокой температурой плавления, в ³¹P ЯМР спектрах которого фиксируется лишь один сигнал ядра фосфора в районе 23,47 м.д. поля.

Исходный 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (торговые марки «ионол», «агидол-1», «алкофен») является дешевым многотоннажным широко известным препаратом, применяется в качестве антиоксиданта в производстве пищевых продуктов (пищевая добавка Е-321), смазочных масел, пластмасс (производится технический «ионол» ГОСТ 10894-76). Благодаря возможности нейтрализовать свободные радикалы и прерывать цепные реакции с участием свободных радикалов, 5%-ный линимент Дибунола широко применялся в качестве наружного противоожогового и противовоспалительного средства. Дибунол также успешно применялся для лечения некоторых видов рака, лучевых и трофических поражений кожи и слизистых оболочек [В.В. Ершов, Г.А. Никифоров, А.А. Володькин. «Пространственно-затрудненные фенолы». М.: Химия, 1972. 352 с.; Эмануэль Н.М. «Кинетика экспериментальных опухолевых процессов». М.: Наука, 1977; Машковский М.Д. Лекарственные средства. Издание 16. М.: Новая волна, 2010. С.721]. Трифенилфосфин, а также бром - относительно дешевые доступные отечественные коммерческие препараты.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами, конкретного осуществления, но не исчерпывается ими. В примере 1 приведен способ синтеза основного действующего вещества суппозиториев - соли фосфония формулы I -, в примере 2 приведен способ получения фармацевтической композиции внутриматочного средства самовспенивающихся суппозиториев, в примере 3 приведены способы и методы определения острой токсичности и раздражающего действия четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида, в примере 4 приведен способ лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров, в примере 5 проведено изучение биологической активности соли фосфония формулы I, изучено антибактериальное, антимикотическое и антиоксидантное действие.

Пример 1

Этап 1.

Синтез 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилбромида.

К раствору 2.20 г (0.01 моль) 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола в 20 мл четыреххлористого углерода прибавляют по каплям раствор 1.60 г (0.01 моль) брома в 20 мл четыреххлористого углерода с такой скоростью, чтобы он обесцвечивался по мере прибавления. После окончания реакции, смесь кипятят с обратным холодильником в течение часа, растворитель удаляли в вакууме. Выпавший маслообразный продукт кристаллизуется при замораживании. Выход 2.75 г (92%). Т.пл. 54-56°C.

Элементный анализ C₁₅H₂₃BrO. Найдено, %: C 60.54; H 8.01. Вычислено, %: C 60.21; H 7.75.

Этап 2.

Синтез трифенил-(3,5-ди-трет.-бутил-4-гидроксибензил)фосфоний бромида формулы I.

К 0.299 г (0.001 моль) 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил бромида в 5 мл ацетонитрила добавляют раствор 0.262 г (0.001 моль) трифенилфосфина в 5 мл ацетонитрила. Реакционную смесь оставляют на 10 минут. Растворитель удаляют в вакууме на 2/3, после чего продукт осаждают эфиром. Выпавший осадок продукта I отфильтровывают и промывают небольшим количеством эфира. Выход 0.533 г (95%). Т.пл. 225°C (разл.), δ_p ³¹ м.д. 23.47.

Элементный анализ C₃₃H₃₈OBrP. Найдено, %: C 70.70; H 7.00; P 5.62. Вычислено, %: C 70.58; H 6.82; P 5.52.

Пример 2

Способ получения фармацевтической композиции внутриматочного средства - самовспенивающихся суппозиториев.

Все манипуляции по приготовлению суппозиториев проводили в стерильных условиях. Взвешенное количество ПЭГ (полиэтиленгликоль) расплавляли в фарфоровой ступке, затем к нему добавляли оксиэтилированные жирные спирты. Также смешивали стеариновокислый кальций, лимонную кислоту и соль фосфония в ступке. Отдельно смешивали натрия бикарбонат с сахарозой. Затем к расплавленной смеси ПЭГ и спиртов добавляли смесь стеариновокислого кальция с лимонной кислотой и солью фосфония и смесь натрия бикарбоната с сахарозой. Затем полученную массу помещали в алюминиевую фольгу. После застывания получали суппозитории цилиндрической формы, кремового цвета и однородной структуры. Полученные суппозитории обладают высокой стабильностью при хранении и могут быть изготовлены в заводских условиях как готовая лекарственная форма. Количества ингредиентов суппозиториев приведены ниже.

Полиэтиленгликоль 6000	3,0 г	30%
Трифенил-(3,5-дитретбутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид формулы I	0,1 г	1%
Высшие жирные спирты С16-С21	0,06 г	0,6%
Кальция стеарат	0,08 г	0,8%
Кислота лимонная	1,0 г	10%
Натрия гидрокарбонат	1,48 г	14,8%
Сахароза	4,28 г	42,8%

Заключение. Разработан состав и технология изготовления внутриматочного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров и других сельскохозяйственных животных, содержащего активнодействующее вещество формулы I и пенообразующую основу, включающую полиэтиленгликоль, лимонную кислоту, бикарбонат натрия, кальций стеариновокислый, сахарозу, оксиэтилированные жирные спирты.

Пример 3

Определение острой токсичности и раздражающего действия четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида.

Заявленное техническое решение было исследовано посредством проведения экспериментов с получением результатов, соответствующих поставленным целям (задачам) по разработке нового поколения самовспенивающихся суппозиториев на основе соли четвертичного фосфония с низкими лечебными дозами.

Метод изучения токсичности.

Работа по изучению острой токсичности проводилась на базе кафедры паразитологии и радиобиологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана в сентябре 2011 года. В опыте использовались 70 белых мышей, самцов и самок, массой тела 18-21 г. Соль фосфония формулы (I) в виде водной суспензии вводили в желудок однократно с помощью зонда. Лабораторные животные, учитывая пол, возраст, массу тела, были разделены на 7 групп: 6 опытных и одну контрольную (по 10 голов в каждой). Мышам опытных групп вводили суспензию соли в возрастающих дозах 50, 100, 150, 200, 250 и 300 мг/кг массы тела, по ДВ соответственно. Мышам контрольной группы в желудок вводили дистиллированную воду. За состоянием здоровья лабораторных животных наблюдали в течение 14 дней после введения, учитывая внешний вид, подвижность, прием корма. Случаи гибели регистрировали, павших животных вскрывали. Результаты приведены в таблице 1.

Однократное пероральное введение препарата в дозе 50 мг/кг массы тела по действующему веществу не вызвало у мышей 1 группы изменений в поведении и общем состоянии животных. До конца эксперимента не было отмечено падежа животных. Эта доза была определена как максимально переносимая.

Во 2-й группе, в которой вводили 100 мг/кг массы тела, наблюдалось угнетение двигательной активности и аппетита животных, которое продолжалось до 5 дней. Три из десяти мышей пали на вторые и третьи сутки.

В группе 3, в которой вводили 150 мг/кг массы тела, также наблюдалось угнетение двигательной активности и аппетита животных. До конца эксперимента погибли 4 из 10 мышей.

В группе 4, в которой вводили 200 мг/кг массы тела, произошел падеж 7 из 10 мышей в период с первых по седьмые сутки после введения.

В группе 5, в которой вводили 250 мг/кг массы тела, наблюдалось значительное ухудшение общего состояния животных, уменьшение двигательной активности и потребления корма. 9 из 10 мышей пали в течение первых пяти суток.

В группе 6, в которой вводили препарат в дозе 300 мг/кг массы тела, наблюдался кратковременный период двигательной активности, который затем сменялся периодом глубокого угнетения и отказом от корма. Все мыши погибли в течение первых и вторых суток после введения. При вскрытии у всех животных 6 группы отмечено вздутие желудочно-кишечного тракта газами на всем протяжении, застой содержимого в желудке, венозный застой в сосудах брюшной полости.

Таблица 1
Результаты изучения острой токсичности соли - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида формулы (I) на белых мышах
№ группы	Доза препарата, мг/кг	Количество животных в группе на начало опыта	Пало животных (голов)	Выжило животных (голов)	Летальность, %
1	50	10	0	10	0
2	100	10	3	7	30
3	150	10	4	6	40
4	200	10	7	3	70
5	250	10	9	1	90
6	300	10	10	0	100

Расчет среднесмертельной дозы произведен по методу Кербера [Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.], с использованием формулы:

LD₅₀=LD₁₀₀-(∑(Z×D))/m, где

D - интервал между каждыми двумя смежными дозами;

Z - среднее арифметическое число животных, у которых наблюдалась учитываемая реакция, под влиянием каждых двух смежных доз;

M - число животных в каждой группе.

При пероральном введении LD₅₀ препарата формулы (I) составила 160 мг/кг массы тела, по ДВ.

Таким образом, установлено, что соль фосфония формулы I при пероральном введении, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 [Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. Экспериментальные методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1978. - 184 с.], по своим токсикологическим характеристикам относится к III классу опасности - веществам умеренно опасным для теплокровных животных.

Изучение раздражающего действия соли фосфония формулы (I) проводили на пяти кроликах, в возрасте 12 месяцев, одного пола, и примерно одинаковой массы тела (2,5-3 кг). Препарат в виде водной суспензии, с помощью глазной пипетки, вводили под правое веко по одной капле. Для контроля под левое веко, аналогично, вводили дистиллированную воду. За животными наблюдали в течение часа. За это время не было выявлено покраснения конъюнктивы глаз ни у одного из кроликов. Через 12 и 24 часа не было замечено видимых различий левых и правых глаз у опытных кроликов. Это позволило сделать вывод, что лекарственная субстанция суппозиториев, включающая соль формулы (I) не обладает выраженным раздражающим действием.

Пример 4

Способ лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров.

Исследования проводились в ООО АПК «Чистое Поле» т.о. а/ «Юлдуз» Чистопольского района Республики Татарстан на 10 коровах черно-пестрой породы в возрасте от 3 до 8 лет.

Содержание в хозяйстве привязное, в дневное время коровы выпускаются для прогулки на карду. Осеменение искусственное, сперму поставляют из племхозяйства «Чистопольское». По острым инфекционным заболеваниям хозяйство считается благополучным.

В исследования были взяты коровы, больные гнойно-катаральными эндометритами. Болезнь проявлялась гнойно-катаральными истечениями из родовых путей, которые наблюдались больше в утренние часы. Температура тела колебалась от субфебрильной до 39-40°C. Пульс, дыхание учащены. Начало болезни, в основном, было связано с задержанием последа, который отделяли механическим путем (вручную).

Больных животных разделили на 2 группы по 5 коров в каждой: исследуемую и контрольную. Коровам обеих групп проводили туалет родовых путей раствором марганцевокислого калия. Суппозитории вводили однократно (для укрепления достигнутых результатов возможно двукратное введение с интервалом 48 часов в зависимости от состояния животного) в полость матки рукой, одетой в полиэтиленовую перчатку разового использования. Выздоровевшими считали коров, у которых заканчивались истечения, нормализовались пульс, температура, дыхание.

Коров контрольной группы лечили однократно пенными шипучими суппозиториями «Йодопен» (Iodopen) - лекарственное средство, содержит 1,5 г йодповидона (1,57% активного йода). Спустя 5-6 дней истечения из половых путей уменьшались, превращались в более вязкую слизистую массу. Истечения продолжались до 20 дней, у 1 коровы - до 21 дня.

В исследуемой группе для лечения коров применяли однократно шипучие пенные суппозитории, содержащие 0,1 г вещества формулы I. После введения препарат не вызывал беспокойства у животных, раздражения слизистой половых путей. На 4-5 сутки истечения из родовых путей значительно уменьшились, характер их становился более прозрачным, консистенция - более жидкой по сравнению с коровами контрольной группы. Клиническое выздоровление наступило у 3 коров - на 14 день, у 2 - на 16 день.

Заключение.

Таким образом, внутриматочное средство - шипучие пенные суппозитории с действующим веществом формулы I показали явное превосходство по лечебному действию и выраженный эффект при лечении гнойно-катаральных эндометритов у коров в сравнении с «Йодопеном», при содержании лекарственного средства формулы (I) в суппозиториях в 15 раз меньше, чем содержание йодповидона в «Йодопене».

Пример 5

Исследование биологической активности: бактерицидной, фунгицидной и антиоксидантной четвертичной соли фосфония - трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромида.

Фунгицидную и бактерицидную активность соединения формулы I, исследовали на тест-культурах патогенной и условно-патогенной микрофлоры человека. В работе использовали музейные штаммы кафедры микробиологии Казанской государственной медицинской академии: Escherichia coli, Salmonella paratyphi B, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. - М.: Медицина, 1971. - 245 с.]. Для оценки активности непосредственно перед исследованием готовили 0.01% растворы исследуемого соединения формулы I в спирте. Суточные культуры музейных штаммов стандартизовали до оптической плотности 0.5 по МакФарланду (1,5×10⁸ КОЕ/мл). Чашки Петри с питательной средой Сабуро (для Candida albicans) и Мюллера-Хинтона для всех остальных микроорганизмов засевали стандартизованными взвесями тест-культур, используя тампон. Через 5 минут на поверхность агара бактериологической петлей наносили каплю исследуемого вещества. В одну чашку помещали 5 химических соединений, в центр чашки наносили растворитель (для контроля возможного антибактериального эффекта) или стандартное лекарственное вещество сравнения. Через 24-48 часов при инкубации 37°C оценивали величину зоны задержки роста микроорганизмов. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2
Антимикотическая и бактерицидная активность соли фосфония формулы I в сравнении с контрольными лекарствами (1% растворы в этаноле)
Соединение	Микроорганизмы, зона ингибирования роста (диаметр, мм)
Staphylococcus aureus	Escherichia coli	Pseudomonas aeruginosa	Salmonella р.В	Candida albicans
	43	18	16	16	46
Chlorhexidine	19	15	13	14	16.5
Penicillin	23	-	8	10	-
Griseofulvin	-	-	-	-	19

Антиоксидантную активность определяли методом кулонометрического титрования электрогенерированным бромом [Ziyatdinova O.K., Budnikov G.K., Pogorel'tzev V.I., Ganeev T.S. The application of coulometry for total antioxidant capacity determination of human blood. Talanta. 2006. V.68. No.3. P.800-805]. Электрогенерацию брома осуществляли на потенциометре П-5827М при постоянной силе тока 5,0 мА из 0,2 М KBr в H₂SO₄. Конец титрования определяли амперометрически, в ячейке с двумя поляризованными платиновыми электродами (ΔE=300 мВ). Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3
Антиоксидантная активность соли фосфония I
№	Соединение (растворы в этаноле)	АОА, кл/мл	Sr
I		286±6	1.7
Контроль 1	Аскорбиновая кислота	185±3	2.2
Контроль 2	α-токоферол	195±4	1.4

Преимуществами предлагаемого соединения - (формулы I) является то, что оно обладает высокой бактерицидной и одновременно высокой антимикотической активностью, а также значительной антиоксидантной активностью, данный эффект проявляется при низких концентрациях на фоне относительно низкой токсичности предлагаемого соединения. Кроме того, оно термически стойко (по данным метода термогравиметрии и сканирующей калориметрии) до 225°C (I) и не разрушаются под действием мыльного раствора, что делает их перспективными лекарственными и дезинфицирующими средствами в медицине и ветеринарии.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, характеризующиеся указанными признаками, приводящими к реализации заявленных технических результатов заявленного технического решения, которыми является создание внутриматочного средства - «шипучих-самовспенивающихся» суппозиториев для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита (Endometritis puerperalis catarrhalis purulenta acuta) - воспаления родовых путей у коров и других сельскохозяйственных животных, обладающих низкими лечебными дозами (1% действующего вещества - соли четвертичного фосфония), с выраженным антибактериальным, антимикотическим и антиоксидантным действием.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как не является очевидным для специалистов в данной области техники вследствие того, что заявленное техническое решение обеспечивает практическую реализацию объективно существующих в науке и технике противоречий, не разрешимых посредством обычного проектирования, а именно из исследованного уровня техники известно получение солей фосфония для создания препаратов - сжигателей жира для похудания и не изучались антибактериальные, антимикотические и антиоксидантные свойства этих соединений, а полученное соединение формулы I по заявленному техническому решению, обладающее антибактериальными, антимикотическими и антиоксидантными свойствами, отличается высокой эффективностью при лечении и профилактике гнойных послеродовых эндометритов у коров и других сельскохозяйственных животных, таким образом можно сделать вывод о том, что полученные результаты не являются очевидными для специалиста в данной области техники.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, т.к. может быть реализовано на любом отечественном специализированном предприятии с использованием стандартного оборудования, известных отечественных материалов и промышленных технологий.

1. Суппозитории для лечения и профилактики послеродового гнойно-катарального эндометрита у сельскохозяйственных животных, включающее действующее вещество и фармацевтически приемлемые носители и вспениватели, отличающееся тем, что действующим веществом является трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 1%, в качестве фармацевтически приемлемых носителей использованы «полиэтиленгликоль-6000» (30%), высшие жирные спирты C16-C21 (0,6%), кальция стеарат (0,8%) и сахароза (42,8%), вспениватели содержат кислоту лимонную (10%), натрия гидрокарбонат (14,8%).

2. Суппозитории по п.1 для коров весом 10 г с действующим веществом трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)фосфония бромид в количестве 0,1 г, в качестве фармацевтически приемлемых носителей использованы «полиэтиленгликоль-6000» (3 г), высшие жирные спирты C16-C21 (0,06 г), кальция стеарат (0,08 г) и сахароза (4,28 г.), вспениватели содержат кислоту лимонную (1,0 г), натрия гидрокарбонат (1,48 г).