Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования течения ишемической болезни сердца. Сущность способа состоит в том, что до и после лечения одновременно определяют в сыворотке крови аполипопротеин А-1 (Апо А-1), общий холестерин и модифицированные липопротеины ЛП(а) с помощью дополнительной обработки 0,5 мл сыворотки крови 0,1 мл 0,1% раствором Тритона Х-100, которую инкубируют 15 мин при 20°С, перемешивают смесь методом встряхивания 120 раз в 1 мин, инкубируют с раствором Судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40°С и затем вносят пробу в лунку в геле агарозы с площадью основания 4×20 мм для электрофореза с последующей фиксацией электрофореграмм, их высушиванием, денситометрией. При одновременном снижении уровня ЛП (а) на 30% и более, а холестерина на 18% и более и увеличением Апо А-1 на 25% и более по сравнению с исходным уровнем оценивают прогноз течения ишемической болезни сердца как благоприятный, способствующий переходу стенокардии напряжения из функционального класса III-IV в функциональный класс I-II. При снижении уровня ЛП(а) менее 30%, а общего холестерина менее 18% и увеличении Апо А-1 менее 25% по сравнению с исходным прогноз считают неблагоприятным. Использование заявленного способа позволяет повысить чувствительность и точность прогнозирования течения ишемической болезни сердца. 1 табл., 6 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии или терапии.

Известны способы разделения на фракции липопротеинов крови методом аналитического ультрацентрифугирования (А.Н.Климов, Н.Г.Никульчева. Липиды, липопротеины и атеросклероз. - Питер, пресс, с.98-102).

Известен способ разделения на фракции ЛП в полиакриламидном геле (Н.Н.Шацкая. Биохимические исследования в оценке состояния сердечнососудистой системы. В кн. "Методы исследований в профпатологии", Москва, 1988, с.95-97).

Известны также способы разделения на фракции ЛП путем электрофореза в геле агарозы (Лаб. Методы исследования / Под редакцией В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987, с.248-249), SU 1720015 А, 15.03.1992. RU 2063040 C1, 27.06.1996. RU 2115121 C1, 10.07.1998. RU 2097038 C1, 27.11.1997. RU 2060034 C1, 20.05.1996. EP 0074610 A, 23.03.1983.

Недостатком данных способов является то, что они не позволяют выявить все фракции ЛП крови, включая хиломикроны(ХМ), липопротеины высокой плотности(ЛПВП), липопротеины низкой плотности(ЛПНП), липопротеины очень низкой плотности(ЛПОНП) и ЛП(а), а служат для разделения на фракции ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП от комплекса альбумина с неэтерифицированными жирными кислотами, а также не позволяют выявить минорные фракции липопротеинов крови, а именно Lipoprotein abnormal (Lp(a) или ЛП(а)).

Известен способ определения фракций липопротеинов крови авторов Канской Н.В., Федоровой Н.А., Перовой Н.В., Гарганеевой Н.П., Кожановой А.А., Байкова А.Н., Канского А.В., Похряева Е.Н. RU 2210079 С2, G01N 33/92, 10.08.2003. Бюл. №22.

Недостатком способа-прототипа является малая точность, так как он не позволяет выявить минорные фракции ЛП. Это связано с тем, что фракция ЛП (а) является наиболее атерогенной и для ранней диагностики заболевания особенно важно выявление минорной фракции ЛП (а), наряду с максимально полным определением фракций других ЛП крови, а также не позволяет максимально точно определить уровень общего холестерина.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и чувствительности способа.

Указанная задача решается разделением на фракции липопротеинов крови у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) электрофорезом в геле агарозы, путем дополнительной обработки 0,5 мл 0,1 мл 0,1% раствора Тритона Х-100 и инкубации 15 мин при 20°С, перемешиванием смеси методом встряхивания 120 раз в 1 мин, последующей инкубацией сыворотки крови больного с раствором Судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40°С, и затем внесения пробы в лунку в геле агарозы с площадью основания 4×20 мм для электрофореза, а в оставшиеся 0,5 мл сыворотки крови проводят полную дезинтеграцию липопотеинов для определения общего холестерина и Апо А-1д и при одновременном снижении уровня ЛП(а) на 30% и более, а общего холестерина на 18% и более и росте Апо А-1 на 25% и более по сравнению с исходным уровнем прогноз течения заболевания считают благоприятным, способствующим переходу стенокардии напряжения из функционального класса III-IV в функциональный класс I-II, а при снижении уровня ЛП(а) менее 30%, общего холестерина менее 18%, и росте Апо А-1 менее 25% по сравнению с исходным прогноз считают неблагоприятным.

Новым в предлагаемом изобретении является дополнительная инкубация 0,5 мл пробы сыворотки крови пациента с 0,1 мл 0,1% раствора детергента Тритона Х-100 при 20°С в течение 15 мин, перемешиванием смеси методом встряхивания 120 раз в 1 мин, что позволяет выявлять минорные фракции ЛП крови одновременно с определением общего холестерина и Апо А-1 крови после дезинтеграции липопротеинов крови до и после лечения ишемической болезни.

Исследование ЛП разных классов при диагностике ишемической болезни сердца (ИБС) рекомендовано Всероссийским научным обществом кардиологов согласно положению рекомендаций Европейского общества по изучению атеросклероза - «Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза» (г.Москва, 2005 г.; Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008 г., с.21-32).

В настоящее время перспективными являются методы исследования липидов с детергентами /Тритон Х-100 и др./ В лабораторной практике все больше используются прямые или гомогенные методы определения липопротеинов (ЛП) и их липидов. Такие методы основаны на использовании различных детергентов, способных блокировать или солюбилизировать классы ЛП для специфического выделения ЛПВП, ЛПНП и других фракций ЛП.

При использовании таких методов изоляция других классов ЛП не требует дополнительных операций и концентрацию холестерина (ХС) в классах ЛП можно определить напрямую в сыворотке крови общепринятыми ферментными методами в той же кювете («Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008 г., с.21-32).

Увеличение концентрации ЛП abnormal или ЛП(а) в крови считают независимым фактором риска атеросклероза. При содержании в крови ЛП(а) более 300 мкг/мл при норме 0-300 мкг/мл риск возникновения коронарного атеросклероза увеличивается вдвое, а при одновременном повышении уровня ЛП(а) ХС и ХС ЛПНП - в 5 раз (J.A. M.A. - 2001. - Vol.285. - p.2486-2497, Eur. Heart. J. - 2003. - Vol.24, - p.1601-1610).

Каждый вновь введенный в формулу изобретения признак выполняет функцию повышения точности и эффективности способа: обработка 0,5 мл пробы сыворотки крови пациента 0,2 мл 0,1% раствора тритон Х-100, инкубация пробы при 20°С в течение 15 мин, перемешиванием смеси методом встряхивания 120 раз в 1 мин, и дополнительное выявление минорных фракций липопротеинов одновременно с определением общего холестерина и Апо А-1 крови до и после лечения ишемической болезни сердца.

В настоящее время особое внимание уделяется исследованию минорных фракций ЛП(а), в связи с чем разрабатываются способы лабораторной диагностики, позволяющие исследовать этот липопротеин крови. Он относится к апо-В-содержащим липопротеинам, богатым холестеролом (ХС). ЛП(а) идентичен "тонущим" пре-β-ЛП (sinking pre-β-Lp), имеющим при электрофорезе подвижность пре-β-ЛП. ЛП(а) содержат 27% белка, 8% углеводов и 65% липидов, из которых ЭХС составляют 59%, НЭХС 14% ФЛ 14%.

Белковым компонентом ЛП(а) является высокогликозилированный полипептид-апо(а), имеющий близкое структурное сродство к плазминогену - одному из факторов системы свертывания противосвертывания крови. При росте концентрации ЛП(а) в крови нарушаются процессы микроциркуляции в кровеносных артериях с возможным образованием микротромбов.

Благодаря наличию в структуре апо(а) сиаловых кислот ЛП(а) более отрицательно заряжен по сравнению с Р-ЛП в электрическом поле, лучше растворим в воде, может взаимодействовать с ионами металлов (кальция). Этот липопротеин имеет гетерогенные формы. Все это свидетельствует об особой роли ЛП(а) в атерогенезе.

ЛП(а) может взаимодействовать с ЛПНП-рецепторами, оказывая слабое влияние на активность ГМК-КоА-редуктазы, на этерификацию ХС. Период полураспада ЛП(а) длиннее, чем у ЛПНП, и составляет 3,3 суток. Содержание ЛП(а) в крови в норме не превышает 30 мг/л. При высокой концентрации в крови ЛП(а) выявляется в местах поражения сосудов в области скопления фибриногена. Повышенная концентрация ЛП(а) часто сочетается с II^a, II^б типами гиперлипопротеинемий, при которых часто выявляются и эти ЛП. Поэтому в клинической практике крайне важно определение ЛП(а) одновременно с определением белков острой фазы воспаления. Установлено, что большинство гиполипидемических препаратов не влияет на повышенный уровень ЛП(а).

Фракция ЛП(а) гетерогенна. Установлено, что при электрофорезе ЛП(а) находятся в области (3-глобулинов, но до 5% ЛП(а) при этом могут выявляться в области а-глобулинов. По причине такой выраженной гетерогенности достаточно сложно оценить при электрофорезе всю фракцию ЛП(а), а тем более ее минорные фракции, которые могут оставаться на линии старта, если размер их частиц достаточно велик. Поэтому использование общепринятого в исследованиях последнего пятидесятилетия детергента тритон Х-100 для обработки сыворотки крови, а именно липопротеинов крови, ведущее к частичной делипидизации ЛП и увеличению их подвижности при электрофорезе позволяет выявлять минорные фракции ЛП(а). В химической промышлености используются различные детергенты (при изготовлении стирального порошка, моющих средств и т.д.), но при работе с биологическим материалом используется преимущественно ТритонХ-100. Режим обработки пробы Тритоном Х-100 подбирался на основе экспериментальных исследований эмпирическим путем. Для этого использовали различные разведения Тритона Х-100, различную температуру и различную экспозицию в минутах. При использовании различных концентраций раствора Тритон Х-100 малые концентрации (ниже 0,1%) не увеличивали выделения минорных фракций ЛП, в том числе ЛП(а), а высокие концентрации (больше 0,1%) вели к полной делипидизации и разрушению структуры ЛП. Результат проведенного исследования представлен в таблице №1 (см. в конце описания).

Обработка 0,5 мл сыворотки крови для исследования липопротеинов разными концентрациями раствора Тритон Х-100 в течение различного времени инкубации пробы при разной температуре (табл.1).

Следовательно, оптимальными условиями обработки сыворотки крови раствором Тритон Х-100 являются концентрация 0,1% в объеме 0,1 мл, при температуре 20 градусов Цельсия в течение 15 минут.

Поскольку ЛП(а) наиболее атерогенен, очень важно на ранних стадиях заболевания выявлять максимальное содержание ЛП(а) в крови каждого пациента. Это позволяет диагностировать ишемическую болезнь сердца еще до стадии значительных изменений других клинико-лабораторных показателей, повышает точность диагностики заболевания. В свою очередь таким пациентам рано назначается патогенетически обоснованная терапия. Не менее важно выявление минорных фракций ЛП(а) для оценки эффективности терапии заболевания и прогнозирования течения ишемической болезни сердца.

Все сказанное свидетельствует о крайней важности разработки способов лабораторной диагностики, позволяющих наиболее полно выявлять ЛП(а).

В настоящее время в широкой клинической лабораторной практике недостаточно используют способы определения ЛП(а). В то же время популярность способа электрофоретического разделения на фракции ЛП крови в геле агарозы обусловлена его высокой чувствительностью, простотой осуществления и достаточной адекватностью получаемых результатов (Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008, с.21-32).

Существенные признаки, характеризующие изобретение, проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и не являются очевидными для специалиста.

Идентичной совокупности признаков не обнаружено при изучении патентной и научно-медицинской литературы.

Данное изобретение может быть использовано в медицинской практике для повышения точности диагностики степени атеросклероза при ишемической болезни сердца.

Таким образом, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности: «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Метод основан на электрофоретической подвижности липопротеинов и одновременном определении общего холестерина крови и АпоА-1.

Изобретение будет понятно из следующего описания приложенных рисунков.

На фиг.1 представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови: а - в группе контроля способом-прототипом; б - в группе контроля предлагаемым способом;

На фиг.2а, б представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови в группе больных ИБС до лечения;

На фиг.3 (а и б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови больных после лечения;

На фиг.4 (а, б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП крови больных ишемической болезнью сердца с гиперхолестеролемией;

На фиг.5 (а, б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови больного ишемической болезнью сердца по способу-прототипу и предлагаемому способу;

На фиг.6 (а, б, в) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови больных по предлагаемому способу у больного ишемической болезнью сердца поле лечения, а также до и после лечения у другого пациента с ишемической болезнью сердца.

Способ осуществляется следующим образом поэтапно:

1) приготовление раствора Судана Б: 400 мг Судана Б растворяют в 20 мг этиленгликоля на кипящей водяной бане в течение 50 минут, фильтруют, хранят в стеклянной посуде;

2) приготовление геля агарозы: 320 мг агарозы А фирмы "Sigma" растворяют в 20 мл воды при кипячении, затем помещают в термостат при 55°С; добавляют 20 мл раствора альбумина (1 г альбумина в 200 мл веронал-мединалового буфера, рН 8,6). 3 мл геля агарозы наносят на обезжиренное горизонтально установленное предметное стекло, помещают металлический стальной стержень-брусок с площадью основания 20×4 мм (высотой 10 мм), который после застывания геля убирают магнитом;

3) для исследования получают 1 мл сыворотки крови, который делят на 2 пробы. К 0,5 мл пробы сыворотки крови пациента добавляют 0,1 мл 0,1% раствора тритон Х-100, инкубируют 15 мин при 20°С, перемешивают смесь методом встряхивания 120 раз в 1 мин,

4) пробу используют для электрофоретического исследования. Добавляют 0,15 мл раствора Судана Б, помещают на 1 ч в темный термостат при 40°С, затем вливают 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, подогревают при 55°С и подогретым вносят в желобок геля агарозы;

5) предметное стекло помещают в камеру для электрофореза слоем агарозы вниз, электрофорез проводят в течение часа в холодильной камере при температуре 4°С при напряжении 100 В и силе тока 40-45 мА;

6) электрофореграмму фиксируют в 5% растворе уксусной кислоты в течение одного часа, затем высушивают между листами фильтровальной бумаги, непрерывно смачивая 96% этиловым спиртом;

7) денситометрию проводят на микрофотометре МФ-4;

8) проводят электрофорез липопротеинов крови.

Далее 05 мл второй порции сыворотки крови обрабатывают дезинтегратором. «Microsonic TM» для полной дезинтеграции липопротеинов крови и максимально точного определения концентрации общего холестерина крови. Дезинтеграцию липопротеинов осуществляет Ultrasonic cell Disruptor производства Heat systems, YWC, 1938, New York 11735, Model Xh 2005, serial NO, работающий с характеристикой электрического тока 50 вольт, 1 ампер, мощностью 50 ватт, частотой тока 20 кГц.

Усовершенствование способа касается механического встряхивания пробы с частотой 120 раз в 1 мин на лабораторном встряхивателе с последующей дезинтеграцией пробы. Более частое или длительное встряхивание с последующей дезинтеграцией ведет к повышению температуры пробы и появлению ремнантных форм липопротеинов крови, что препятствует дальнейшему проведению исследования и искажает результат электрофоретического анализа пробы. Менее короткий период встряхивания, равный 30 сек, с последующей дезинтеграцией порбы не позволяет улучшить результат исследования и искажает результат электрофоретического анализа пробы. Менее короткий период встряхивания, равный 30 сек, позволяет улучшить результат исследования.

Общий холестерин крови определяют стандартизированным методом в динамике. Предварительная обработка сыворотки крови раствором Тритон Х-100 не влияет на выполнение анализа.

Метод основан на измерении оптической плотности холестерола и его эфиров с реактивом Либермана-Бурхарда. Большая часть холестерола находится в сыворотке крови в этерифицированном виде, продукт реакции холестерола с указанным реактивом поглощает свет в той же области спектра и имеет несколько больший коэффициент экстинции, чем продукт реакции свободного холестерола. Для учета этого различия, а также частичного учета маричных эффектов (влияния белков и биллирубина на результаты анализа), калибровка метода проводится по калибровочной сыворотке, содержание холестерола в которой определено референтным методом Абеля-Кендала.

Приготовление реактива Либермана-Бурхарда: 600 мл уксусного ангидрида и 300 мл уксусной кислоты наливают в двухлитровую колбу, помещают в ледяную баню и перемешивают на магнитной мешалке, затем приливают 100 мл охлажденной серной кислоты. Через 30 мин колбу удаляют из ледяной бани, ставят на мешалку и добавляют 20 г сульфата натрия, перемешивают до полного растворения соли 4-5 часов. Реактив стабилен 2 недели.

Ход анализа:

1. В сухие пробирки разливают по 5 мл реактива Либермана-Бурхарда, помещают в ледяную баню.

2. В первую пробирку наливают 0,2 мл дистилированной воды (по стенке, медленно в течение 10 мин). Осторожно встряхивают и помещают в водяную баню.

3. С интервалом в 2 мин в остальные пробирку приливают по 0,2 мл исследуемой сыворотки, встряхивают, помещают в водяную баню.

4. Через 25 мин после добавления воды в первой пробирке измеряют оптическую плотность ее содержания против воды. Далее измеряют исследуемые пробы при длине волны (625±10) нм.

5. Рассчитывают концентрацию холестерина в сыворотке крови по сравнению с калибровочной.

Для растворов продуктов реакции Либермана-Бурхарда закон Бугера-Ламберта-Бера соблюдается в пределах 0-400 мг/дл холестерола.

Количественную оценку фракций при денситометрии проводят следующим образом: определяют площадь каждого пика на хроматограмме по формуле S=h·B1/2h, где S - площадь пика, h - высота пика, B1/2h - ширина пика на половине его высоты.

Расчет проводится автоматически по соответствующей программе и конечным результатом является процентное содержание каждой фракции ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП и ЛП(а), если она есть по отношению ко всей сумме фракций, принятой за 100%.

При проведении повторного исследования после лечения величина фракций ЛП(а) до лечения принимается за 100% и рассчитывается процентное значение величины снижения фракции ЛП(а) после проведенной

Аполипопротеин А-1 определяли на анализаторе Konelab (код 981662). Аполипопротеины А образуют большинство основных протеинов, обнаруживаемых в линопротеинах высокой плотности, а также встречаются в хиломикронах. Примерно 50% массы липопротеинов высокой плотности принадлежит белкам, при этом Апо А-1 и A-II составляют приблизительно 90% этой массы. Количества А-1 и A-II соотносятся примерно как 3:1. Апо А-1 и A-II образуются в кишечнике и печени. При попадании в кровь после выделения из кишечника в виде фрагментов хиломикоонов Апо А-1 и A-II, согласно полученным данным, накапливаются в ЛПВП. Исследования показали, что некоторые частицы липопротеинов содержат только аполипопротеин А-1, а другие частицы содержат как А-1, так и A-II. Аполипопротеин A-II играет роль в активации ЛХАТ (лецитинхолестеринацилтрансферазы) и выведении свободного холестерина из внепеченочных тканей. Высокое содержание Апо В и низкое содержание Апо A-II указывает на повышенный риск развития ИБС. Методика определения

Метод основан на измерении иммунопреципитации, усиленной полиэтиленгликолем (ПЭГ), при 340 нм. В образцы с буферным раствором добавляется избыток специфичной антисыворотки. Затем регистрируется увеличение поглощения света, вызванное иммунопреципитацией, когда реакция достигает своей конечной точки. Изменение светопоглощения в пропорционально количеству антигена I (аполипопротеина А-1), содержащегося в растворе.

Результаты вычисляются автоматически с использованием калибровочной кривой. Нормальное содержание Апо А-1 в сыворотке крови составляет 1,0-2,3 г/л.

В группе контроля в случае использования способа-прототипа (п=10) (фиг.1а) и предлагаемого способа (п=10) (фиг.1б) выявлены ХМ, ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП - это нормальная липидограмма. Оценен уровень общего холестерола крови, который составил у первых 10 пациентов (4,8±0,2) ммоль/л и у второй группы пациентов, п=10 (4,6±0,2) ммоль/л. Нами обследованы 2 группы больных ИБС до и после лечения по 10 пациентов для способа-прототипа - I группа и 30 пациентов - II группа для перелагаемого способа.

Диагноз пациентов: ИБС, стенокардия напряжения, ФК III-IV.

У пациентов I группы до лечения выявились ХМ, ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП (фиг.2а, б). Уровень холестерина сыворотки крови составил у них (7,9±0,7) ммоль/л. После лечения при электрофорезе ЛП фракции ЛПНП и ЛПОНП стали менее интенсивными (фиг.3а и б).

Уровень общего холестерола сыворотки крови после лечения составил (5,^±0,5) ммоль/л.

Диагноз после лечения: ИБС, стенокардия напряжения, ФК П-Ш. Заключение: прогноз течения ИБС благоприятный, но недостаточно точный.

У 23 пациентов II группы с гиперхолестеролеминей выявлены при электрофорезе ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП, ЛП(а), ХМ (фиг.4а и б).

У остальных 7 пациентов группы фракция ЛП(а) не выявлена. Уровень общего холестерола у пациентов всей второй группы составил (8,7±0,8) ммоль/л, Апо А-1 1,3±0,1 г/л.

После лечения ИБС у 8 пациентов выявлялась следовая трудно определяемая фракция ЛП(а), у 22% пациентов ЛП(а) не выявлялась.

Уровень общего холестерола сыворотки крови после лечения составил во всей группе (6,0±0,6) ммоль/л, Апо А-1 1,9±0,2 г/л. Диагноз после лечения у пациентов этой группы (29 человек): ИБС, стенокардия напряжения, ФК II. Заключение: прогноз течения ИБС благоприятный. Пациенты этой группы представлены в клинических примерах. У одного пациента второй группы при снижении общего холестерола крови после лечения уровень ЛП(а) в сыворотке крови оставался достаточно высоким. Динамики после лечения выявлено не было. Прогноз течения ИБС у этого пациента расценивался как неблагоприятный.

Ложноположительных и ложноотрицательных случаев нами не выявлено, т.к. оценивались только объективные критерии эффективности проводимой терапии ИБС: результаты велоэргометрии, частота приступов стенокардии и соответственно доза принятого глицерина, а также результаты лабораторных методов исследования, выраженные количественно.

Пример 1. Больной К., 55 лет, история болезни №187, поступил в отделение ИБС и атеросклероза НИИ кардиологии г.Томска. Жалобы при поступлении на боли в области сердца и за грудиной колющего характера с иррадиацией под лопатку. Боли возникали при физической нагрузке и снимались нитроглицерином. АД 170/90 мм рт.ст. Пульс в покое 66 уд. в мин. Велоэргометрия была прекращена при нагрузке 25 Вт по объективным причинам.

Результаты лабораторного исследования: ХС общий 7,8 ммоль/л, триацилглицериды 1,8 ммоль/л, ХС ЛПВП 1,0 ммоль/л, Апо А-1 1,4 г/л.

Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по способу-прототипу (Фиг.5а).

Результаты лабораторного исследования при выписке: ХС общий 5,1 ммоль/л, триацилглицериды 1,7 ммоль/л, ХС ЛПВП 1,5 ммоль/л, Апо А-12,0 г/л.

Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу представлены на фиг.6а.

Фракция ЛП(а) отсутствует, фракция ЛПНП слабо выражена, фракция ЛПВП стала более интенсивной.

Диагноз при выписке: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, ФКП. Заключение: лечение эффективное. Прогноз течения ИБС благоприятный.

Пример 2. Больной Ж., 5 лет, история болезни №125, поступил в отделение ИБС и атеросклероза НИИ кардиологии г.Томска с жалобами на давящие боли в области сердца и за грудиной, иррадиирующие под лопатку и в шейную область. На ЭКГ значительных изменений не выявлено. Велоэргометрия была прекращена при нагрузке 50 Вт по причине возникшей боли за грудиной. Боли купируются нитроглицерином. На ЭКГ появилась косовосходящая депрессия сегмента ST в отведениях V4-V6. АД 170/110 мм рт.ст., пульс в покое 68 уд. в мин.

Результаты лабораторного исследования: ХС общий 8,2 ммоль/л, триацилглицериды 1,8 ммоль/л, ХС ЛПВП 1,1 ммоль/л, Апо А-1 1,4 г/л.

Результаты электрофоретического исследования ЛП крови до лечения по предлагаемому способу представлены на фиг.6б. Результаты денситометрии ЛП: ЛПНП - 55%, ЛПОНП - 18%, ЛПВП - 14%, ЛП(а) - 7%.

Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, ФК III-IV.

После проведенного лечения результаты лабораторного исследования: ХС общий 6,1 ммоль/л, триацилглицериды 1,6 ммоль/л, ХС ЛПВП 1,5 ммоль/л, Апо А-1 2,1 г/л.

Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу после лечения представлены на фиг.6в.

Результаты денситометрии ЛП: ЛПНП - 43%, ЛПОНП - 26% ЛПВП - 29%, ЛП(а) - 2%.

Диагноз при выписке: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, ФКП. Снижение уровня ЛП(а) на 58%, а общего холестерина на 25% и увеличение Апо А-1 на 29% по сравнению с исходным свидетельствовало об эффективности лечения ИБС. Заключение: лечение прогноз течения ИБС благоприятный.

Итак, при применении способа-прототипа прогноз течения ИБС основывался на уровне общего холестерина сыворотки крови и клинических данных, поэтому был недостаточно точным. Способ применен у 40 пациентов и 22 пациентов группы сравнения с диагнозом нейроциркуляторная дистония. При снижении уровня ЛП(а) на 30% и более, общего холестерола сыворотки крови на 18% и более и увеличении Апо А-1 на 25% и более прогноз течения ИБС был оценен как благоприятный, о чем свидетельствовало изменение функционального класса (ФК) стенокардии напряжения, а при изменении только одного из показателей был установлен неблагоприятный прогноз течения ИБС (переход стабильного течения в нестабильную форму стенокардии).

Ложноположительных случаев прогнозирования течения ИБС при использовании предлагаемого нами способа не наблюдалось. При этом предлагаемый способ прост в исполнении и интерпретации полученных результатов.

В таблице 1 представлены результаты исследования влияния детергента Тритон Х-100 на выявление фракций липопротеидов при разном времени инкубации и разной температуре, то есть определение оптимальных условий.

Таблица 1
Детергент	Концентрация	Время инкубации	Температура, °C	Выявление фракции ЛП(а)
Тритон X-100	0,1 мл 0,01%	10 минут	15	-
Тритон X-100	0,1 мл 0,01%	15 минут	20	-
Тритон X-100	0,1 мл 0,01%	20 минут	25	-
Тритон X-100	0,1 мл 0,1%	10 минут	15	следы
Тритон X-100	0,1 мл 0,1%	15 минут	20	+
Тритон X-100	0,1 мл 0,1%	20 минут	25	следы
Тритон X-100	0,1 мл 0,15%	10 минут	15	-
Тритон X-100	0,1 мл 0,15%	15 минут	20	-
Тритон X-100	0,1 мл 0,15%	20 минут	25	-

Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что до и после лечения одновременно определяют аполипопротеин А-1 (Апо А-1), общий холестерин и модифицированные липопротеины ЛП(а), путем обработки 0,5 мл пробы сыворотки крови 0,1 мл 0,1% раствором Тритона Х-100 и инкубации 15 мин при 20°C, перемешивания смеси методом встряхивания 120 раз в 1 мин с последующей инкубацией сыворотки крови больного с раствором Судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40°C, и внесения пробы в лунку в геле агарозы с площадью основания 4×20 мм для электрофореза с последующей фиксацией электрофореграмм, их высушиванием, денситометрией и при одновременном снижении уровня общего холестерина на 18% и более и ЛП(а) на 30% и более и увеличением Апо А-1 на 25% и более по сравнению с исходным уровнем прогноз течения заболевания считают благоприятным, способствующим переходу стенокардии напряжения из функционального класса III-IV в функциональный класс I-II, а при снижении общего холестерина менее 18%, уровня ЛП(а) менее 30% и увеличением Апо А-1 менее 25% по сравнению с исходным прогноз считают неблагоприятным.