Способ синтеза производного эфира и глицирретиновой кислоты и соединение сложного эфира дезоксиглицирретиновой кислоты
Изобретение относится к соединению формулы II, способам получения соединения формулы I и формулы II, фармацевтической композиции и вариантам применения для лечения воспаления и/или поражения печени. В соединении формулы II R1 представляет собой H; R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-С18алкокси; C-18 находится в α-конфигурации. 8 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 табл., 8 пр.
Область техники
Настоящее изобретение относится к способу синтеза эфиров глицирретиновой кислоты непосредственно из глицирризиновой кислоты, а также относится к соединению сложного эфира 11-дезокси-18α-глицирретиновой кислоты и способу его получения, фармацевтической композиции, содержащей сложный эфир 11-дезокси-18α-глицирретиновой кислоты, и применению указанного соединения в области лечения поражений печени, воспаления и тому подобного.
Уровень техники
Солодка относится к Glycyrrhiza radix et rhizoma. В ней основными фармакологически активными веществами являются глицирризиновая кислота и ее агликон, глицирретиновая кислота. Недавние исследования показали, что глицирретиновая кислота обладает противовоспалительным, противоязвенным, антивирусным (гепатит, ВИЧ и т.д.), гиполипидемическим, профилактическим, противоопухолевым и другими подобными действиями.
Глицирретиновая кислота имеет структуру, аналогичную структуре гидрокортизона. Многочисленные клинические исследования подтвердили противовоспалительное действие глицирретиновой кислоты. Закиров обнаружил, что 3-амино-11-дезоксиглицирретиновая кислота проявляла значительную противовоспалительную активность в отношении неинфекционного артрита у различных животных. Тойошима с соавторами (Toyoshima et al.) получили гидромалеат 11-дезоксиглицирретиновой кислоты и его соли, которые были использованы в качестве противовоспалительных агентов, противоязвенных агентов, а также иммуномодуляторов, смотри также патент США 4448788. В некоторых материалах также сообщали, что соли глицирретиновой кислоты, такие как глицирретинат натрия, обладают противовоспалительным действием.
В 1946 году Реверс (Revers) впервые сообщил о противоязвенной активности Glycyrrhizae Radixe rhizoma. Ученые синтезировали динатриевую соль гидросукцината глицирретиновой кислоты и обнаружили, что указанное соединение обладало способностью лечить язвенную болезнь желудка (патент GB 843133). В 1972 году Деманд (Demande) из Франции обнаружил, что 3-ацетил-18β-глицирретиновая кислота и ее алюминиевые соли обладают значительным лечебным действием при лечении язвы двенадцатиперстной кишки и язвенной болезни желудка. Кроме того, как было обнаружено, амид 11-дезоксиглицирретиновой кислоты, амид 3-оксо-ацетил глицирретиновой кислоты и другие подобные соединения также обладают значительным лечебным действием в отношении язв и потому привлекли большое внимание. В 1985 году Такицава с соавт. (Takizawa et al.). из Японии обнаружили, что глицирретиновая кислота обладает ингибирующим действием в отношении пролиферации опухоли кожи у мышей (Jpn J Cancer Res. 1986, 77 (1) Р33-8).
Глицирретиновая кислота и ее производные провоцируют развитие альдостеромы (DCA), поэтому их использование в клинической практике часто сопровождается побочными эффектами, например, карбеноксолон натрия, продукт глицирретиновой кислоты, может привести к задержке жидкости и натрия, повышению артериального давления и гипокалиемии. Джон С. Верен с соавт. (John S. Baran et al.) обнаружили, что 11-дезоксиглицирретиновая кислота практически не провоцирует развитие альдостеромы и, таким образом, не вызывает указанных выше побочных эффектов (John S. Baran et al. Journal of Medicinal Chemistry, 1974, Vol.17, (2) P184-191). Для того чтобы исключить или снизить указанные побочные эффекты, а также увеличить растворимость и абсорбцию глицирретиновой кислоты и облегчить ее получение в надлежащей дозировке, отечественные и иностранные специалисты исследовали возможность модифицирования и изменения структуры глицирретиновой кислоты и синтезировали серию производных глицирретиновой кислоты (Soo-Jong Um et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry 2003, 11, P5345-5352). При синтезе производных глицирретиновой кислоты глицирретиновую кислоту получали главным образом из глицирризиновой кислоты, а затем химически модифицировали и перестраивали структуру глицирретиновой кислоты. Сообщали, что метил-глицирретинат синтезировали гидротермальным способом с применением глицирризиновой кислоты в качестве исходного вещества (Liu Wencong, Luo Yunqing, Studies on the synthesis of methyl glycyrrhetinate by hydrothermal method, Journal of Northeast Normal University: Natural Science Edition, 2007, 39 (4): 154-156). Однако настоящий способ необходимо осуществлять при высокой температуре и высоком давлении в течение продолжительного времени реакции, применение настоящего способа предъявляет высокие требования к оборудованию, а потому он не подходит для промышленного производства. Авторы настоящего изобретения разработали простой способ получения производных сложного эфира глицирретиновой кислоты непосредственно из глицирризиновой кислоты или производных ее солей всего лишь в одну стадию, при этом не требуется сначала получать глицирретиновую кислоту, а затем ее модифицировать. Настоящий способ осуществляют при низкой температуре, он не требует высокого давления, обеспечивает высокий выход продукта и низкие затраты и, таким образом, подходит для промышленного производства.
На основе настоящего простого способа синтеза авторы настоящего изобретения также получили сложные эфиры глицирретиновой кислоты, дезоксидированные по положению С-11, т.е. 11-дезокси-18α-глицирретинаты. Полученные 11-дезокси-18α-глицирретинаты обладают противовоспалительным и противоязвенным действиями, а также способностью лечить поражение (нарушение функции) печени с меньшими побочными эффектами, хорошей растворимостью в липидах и высокой скоростью абсорбции в человеческом организме.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединению формулы II, а именно, сложному эфиру 11-дезокси-18α-глицирретиновой кислоты, способу его получения и композиции, образованной смешением соединения с фармацевтическими носителями, а также применению соединения в области лечения воспаления, язв и поражения печени. Настоящее изобретение также относится к способу синтеза производных эфира глицирретиновой кислоты.
Настоящее изобретение относится к следующему соединению формулы II:
где R1 представляет собой Н, линейный или разветвленный C1-C18 алкилформил, линейный или разветвленный C1-C18 алкенилформил, или арилформил; R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C18 алкокси или арилокси; С-18 находится в α-конфигурации или β-конфигурации.
R1 предпочтительно представляет собой Н, линейный или разветвленный С1-С6 алкилформил или линейный или разветвленный С1-С6 алкенилформил, более предпочтительно Н;
R2 предпочтительно представляет собой линейный или разветвленный C1-С6 алкокси, более предпочтительно этокси;
С-18 предпочтительно находится в α-конфигурации.
Предпочтительно соединение формулы II настоящего изобретения представляет собой этил 11-дезокси-18α-глицирретинат.
В настоящем изобретении также предложен способ синтеза соединения формулы II: соединение формулы I дезоксидируют по положению С-11 с получением соответствующего соединения формулы II, в которой R1 представляет собой водород. Если необходимо, гидроксил в положении С-3 этерифицируют с получением соответствующего соединения формулы II.
В формуле I R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C18 алкокси или арилокси, С-18 находится в α-конфигурации или β-конфигурации.
Дезоксидацию можно проводить, используя любой способ восстановления, хорошо известный специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, способ восстановления по Клемменсену, способ каталитического гидрирования и другие аналогичные способы. Способ восстановления по Клемменсену предполагает использование амальгамы цинка и соляной кислоты с целью восстановления карбонила в положении С-11 до метилена, причем в качестве растворителя можно использовать тетрагидрофуран, 1,4-диоксан. Способ каталитического гидрирования предполагает возможное использование любого традиционного катализатора, такого как платина, палладий или оксид палладия, причем в качестве растворителя можно использовать, например, метанол, этанол, 1,4-диоксан, тетрагидрофуран и другие аналогичные вещества. Этерификацию гидроксила можно проводить посредством реакции с карбоновой кислотой или ангидридом карбоновой кислоты, причем реакцию можно проводить в инертном органическом растворителе, таком как 1,4-диоксан, тетрагидрофуран, а температура реакции может быть выбрана в зависимости от используемых карбоновой кислоты или ангидрида карбоновой кислоты.
Соединение формулы I является коммерчески доступным или может быть получено в соответствии со способом синтеза, предложенным в настоящем изобретении.
В настоящем изобретении предложен способ синтеза следующего соединения формулы I,
где R2 определен выше, способ включает:
в присутствии дегидратирующего вещества, такого как ацилхлорид или концентрированная серная кислота, взаимодействие одного или более соединений из ряда глицирризиновая кислота, соль глицирризиновой кислоты или производное глицирризиновой кислоты с алифатическими спиртами или ароматическими спиртами (R2H) с получением сложного эфира глицирретиновой кислоты формулы I. Соли глицирризиновой кислоты могут представлять собой, например, калиевую, натриевую, аммониевую, кальциевую или магниевую соли глицирризиновой кислоты.
Глицирризиновая кислота, соли глицирризиновой кислоты или производные глицирризиновой кислоты могут быть приобретены или экстрагированы из Glycyrrhizae с получением глицирризиновой кислоты, которую затем превращают в соли глицирризиновой кислоты или производные глицирризиновой кислоты. 18α-глицирризиновая кислота может быть получена посредством катализируемой щелочью реакции изомеризации природной глицирризиновой кислоты способом, описанным в патенте Китая N ZL 02111693.8.
Ацилхлорид может представлять собой оксалилхлорид, ацетилхлорид или сульфонилхлорид или аналогичные вещества, причем сульфонилхлорид может представлять собой метилсульфонилхлорид, бензолсульфонилхлорид или п-толуолсульфонилхлорид или другие аналогичные вещества. При этом на 1 моль глицирризиновой кислоты, соли глицирризиновой кислоты или производного глицирризиновой кислоты требуются 1-20 моль ацилхлорида, 0,5-10 моль концентрированной серной кислоты. Предпочтительно количество ацилхлорида составляет 3-5 моль, а количество концентрированной серной кислоты составляет 0,5-5 моль.
В способе синтеза эфира глицирретиновой кислоты формулы I реакцию проводят в растворителе или принимают за растворитель участвующий в реакции спирт. Растворитель в реакции представляет собой растворитель, способный растворять глицирризиновую кислоту, соли глицирризиновой кислоты и/или производные глицирризиновой кислоты, такой как N,N-диметилформамид, N-метилпирролидон, тетрагидрофуран и другие аналогичные вещества. Когда участвующий в реакции алифатический спирт представляет собой низший спирт, предпочтительно использование участвующего в реакции спирта в качестве растворителя.
В конкретном варианте реализации изобретения способ получения эфира глицирретиновой кислоты формулы I включает: добавление глицирризиновой кислоты, соли глицирризиновой кислоты или производного глицирризиновой кислоты к безводному этанолу, затем добавление концентрированной серной кислоты или ацилхлорида, кипячение с обратным холодильником с последующими охлаждением и кристаллизацией, затем фильтрованием, очисткой с помощью этанола/воды и сушкой с получением целевого соединения; или добавление глицирризиновой кислоты, соли глицирризиновой кислоты в безводный метанол, затем добавление ацетилхлорида, кипячение с обратным холодильником с последующими охлаждением и кристаллизацией, затем фильтрованием, очисткой с помощью этанола/воды и сушкой с получением целевого соединения.
Термин "линейный или разветвленный C1-C18 алкил" относится к линейным или разветвленным насыщенным алифатическим углеводородным группам, содержащим атомы углерода и атомы водорода, которые соединены с другими фрагментами молекулы посредством одинарной связи. Указанный алкил содержит 1-18 атомов углерода, предпочтительно 1-6 атомов углерода. Алкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями, выбранными из галогена и гидроксила. Примеры незамещенного алкила включают, но неограниченны ими, метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, 2-метилбутил, неопентил, н-гексил, 2-метилгексил и другие аналогичные группы.
Термин "линейный или разветвленный C1-C18 алкенил" относится к линейным или разветвленным ненасыщенным алифатическим углеводородным группам, содержащим атомы углерода и атомы водорода и содержащим по меньшей мере одну ненасыщенную связь, которые соединены с другими фрагментами молекулы посредством одинарной связи. Указанный алкенил содержит 1-18 атомов углерода, предпочтительно 1-6 атомов углерода. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидроксила или карбоксила. Примеры незамещенного алкенила включают, но неограниченны ими, винил, пропенил, пропен-2-ил, 1-бутенил, изобутенил, 1-пентенил, 2-метилбутенил, 1-гексенил, 2-метилгексенил и другие аналогичные группы.
Термин "арил" относится к группам с ароматическим кольцом, содержащим одно углеродное кольцо или несколько конденсированных ароматических колец с полностью сопряженной π-электронной системой, которые содержат 6-14 атомов углерода, предпочтительно 6-12 атомов углерода, более предпочтительно 6 атомов углерода. Арил может быть незамещенным или замещенным одним или более заместителями, выбранными из алкила, арила, арилалкила, амина, галогена и гидроксила. Примеры незамещенного арила включают, но неограниченны ими, фенильную, нафтильную и антраценовую группы.
В настоящем изобретении также предложено соединение формулы II и один или более способов применения композиции, содержащей соединение формулы II, для лечения воспаления, язв и печеночной недостаточности.
Соединение формулы II настоящего изобретения можно вводить само по себе. В целом соединения можно получать в форме фармацевтических препаратов, которые будут содержать по меньшей мере одно из соединений формулы II в качестве активного ингредиента, а также содержать один или более фармацевтически приемлемых носителей. Эти носители варьируют в соответствии со способами введения. Препараты, содержащие соединения, представленные в настоящем изобретении, можно вводить местно или систематически, в том числе орально, ректально, интраназально, сублингвально, дермально, вагинально и другими подобными способами.
Оральная композиция может быть твердой, гелеобразоной или жидкой. Примеры твердых препаратов включают помимо прочего таблетки, капсулы, гранулы и порошки. Эти препараты могут необязательно содержать связующее вещество, разбавитель, разрыхлитель, смазывающее вещество, препятствующее комкованию, подсластитель и/или ароматизатор.
В настоящем изобретении также предложена ветеринарная композиция, содержащая по меньшей мере один из указанных выше активных компонентов и по меньшей мере один из ветеринарных носителей. Ветеринарные носители могут представлять собой вещества, которые можно вводить крупному рогатому скоту, лошадям, овцам, котам, собакам, лошадям, кроликам или другим животным, и могут представлять собой твердое, жидкое или газообразное вещество, приемлемое в ветеринарной области и совместимое с активными компонентами. Ветеринарную композицию можно вводить орально, парантерально или другими подобными способами.
Авторы настоящего изобретения синтезируют сложный эфир глицирретиновой кислоты простым способом и, в частности, синтезируют сложный эфир 11-дезокси-18α-глицирретиновой кислоты. Сложный эфир 11-дезокси-18α-глицирретиновой кислоты обладает противовоспалительным, противоязвенным действиями и может быть использован для лечения печеночной недостаточности, ингибирования некроза клеток печени и защиты печени от повреждений, и, таким образом, перспективен в лечении заболеваний печени, в особенности для лечения острого поражения печени и медикаментозного поражения печени, с малыми побочными эффектами, хорошей растоворимостью в липидах, быстрой абсорбцией, высоким коэффициентом использования. По сравнению с глицирризином и глицирризинатом диаммония настоящее соединение обладает большей биологической доступностью и значительным эффектом снижения трансаминазы.
В примере 6 показано, что соединение формулы II настоящего изобретения обладает противовоспалительным действием.
В примерах 7 и 8 показано, что соединение формулы II настоящего изобретения обладает лечебным действием в отношении медикаментозного поражения печени.
В таблицах 1 и 2 показано, что соединение формулы II настоящего изобретения, в особенности предпочтительные соединения, оказывают действие на D-галактозамин (D-Caln)-индуцированное поражение печени и могут значительно ингибировать выделение сывороточной трансаминазы, и их действие лучше, чем действие глицирризина и глицирризината диаммония. В особенности оральное введение обладает лучшим дейтвием.
В таблицах 3 и 4 показано, что соединение формулы II настоящего изобретения, в особенности предпочтительные соединения, оказывают действие на ТАА-индуцированное поражение печени и могут значительно ингибировать выделение сывороточной трансаминазы, и их действие лучше, чем действие глицирризината диаммония. Эти соединения также могут ингибировать некроз клеток печени, и их действие лучше, чем действие глицирризината диаммония.
В настоящем изобретении предложен синтез сложного эфира глицирретиновой кислоты простым способом напрямую с использованием глицирризиновой кислоты или ее производных в качестве исходных веществ с высоким выходом продукта, а затем получение сложных эфиров 11-дезокси-глицирретиновой кислоты. При этом полностью используется Glycyrrhiza и уменьшается непроизводительное расходование ресурсов.
Следующие примеры представлены с целью иллюстрации настоящего изобретения, и не ограничивают объем настоящего изобретения.
Примеры
Реагенты, использованные в следующих конкретных примерах, имеют марку "чистый для анализа".
Оборудование: Для инфракрасной спектроскопии использовали ИК-Фурье спектрометр Spectrum one фирмы РЕ и таблетки из KBr. Для регистрации спектров 1Н NMR, 13C-NMR использовали ЯМР-спектрометр BRUKER AV-500 с CDCl3 в качестве растворителя и TSM в качестве внутреннего стандарта.
Пример 1. Синтез метил 18β-глицирретината
Способ 1: 10 г 18β-глицирризиновой кислоты добавляли в 100 мл безводного метанола, затем туда же добавляли 5 мл ацетилхлорида. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов, затем добавляли в нее 100 мл воды. Смесь охлаждали и подвергали кристаллизации с получением твердой фазы, после чего фильтровали. Продукт очищали с помощью этанола/воды и высушивали с получением титульного соединения с выходом 82%.
Способ 2: 20 г 18β-глицирризината моноаммония добавляли в 100 мл безводного этанола, затем туда же добавляли 10 мл ацетилхлорида. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов, затем, после того как смесь приобрела коричневый цвет, добавляли в нее 200 мл воды. Смесь охлаждали и подвергали кристаллизации с получением твердой фазы, после чего фильтровали. Продукт очищали с помощью этанола/воды и высушивали с получением титульного соединения с выходом 79%.
ИК: νac (-ОН) 3387 см-1, νac (-COOCH3) 1725 см-1, νac(=O) 1657, 1621 см-1, νac (зона А) 1387, 1361 см-1, νac (зона В) 1322, 1278, 1246 см-1.
Пример 2. Синтез этил 18α-глицирризината
Способ 1: 10 г 18α-глицирризиновой кислоты добавляли в 100 мл безводного этанола, затем туда же добавляли 5 мл ацетилхлорида. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов, затем добавляли в нее 100 мл воды. Смесь охлаждали и подвергали кристаллизации с получением твердой фазы, после чего фильтровали. Продукт очищали с помощью 80%-ного этанола и высушивали с получением титульного соединения с выходом 85%.
Способ 2: 10 г 18α-глицирризиновой кислоты добавляли в 100 мл безводного этанола, затем туда же добавляли 1 мл концентрированной серной кислоты. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 8 часов, затем добавляли в нее 100 мл воды. Смесь охлаждали и подвергали кристаллизации с получением твердой фазы, после чего фильтровали. Продукт очищали с помощью этанола/воды и высушивали с получением титульного соединения с выходом 82%.
1H-NMR (ppm): 0,72 (s, 3Н), 0,81 (s, 3Н), 1,00 (s, 3Н), 1,14 (s, 3Н), 1,20 (s, 3Н), 1,22 (s, 3Н), 1,26 (t, 3Н), 1,35 (s, 3Н), 4,14 (q, 2Н), 5,57 (s, 1H).
13C-NMR (ppm): 14,13; 15,62; 15,94; 16,47; 17,54; 18,49; 20,65; 20,75; 26,65; 27,22; 28,07; 28,40; 31,70; 33,75; 35,45; 35,97; 36,84; 37,60; 39,02; 39,09; 40,37; 42,39; 43,80; 44,89; 54,99; 60,42; 60,66; 78,70; 124,08; 165,64; 178,20; 199,74.
Пример 3. Синтез этил 11-дезокси-18α-глицирретината
11 г этил 11-дезокси-18α-глицирретината и 6 г цинкового порошка добавляли в 150 мл 1,4-диоксана, после чего туда же добавляли небольшое количество воды и барботировали газообразным хлороводородом. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов, затем фильтровали. Маточный раствор выпаривали, а к остатку добавляли 50 мл воды и 100 мл этилацетата. Перемешивали смесь и разделяли фазы. Органическую фазу промывали водой, выпаривали досуха и очищали технический продукт с помощью этанола/воды с получением 8,6 г белых кристаллов.
ИК: νac (-ОН) 3374 см-1, νac (-COOCH3) 1727 см-1, νac (зона А) 1382 см-1, νac (зона В) 1300, 1278 см-1.
1H-NMR: (ppm) 0,66 (s, 3Н), 0,79 (s, 3Н), 0,96 (s, 3Н), 0,99 (s, 3Н), 1,00 (s, 3Н), 1,15 (s, 3Н), 1,22 (s, 3Н), 1,25 (t, 3Н), 4,12 (q, 2Н), 5,18 (t, 1Н).
13C-NMR (ppm): 14,19; 15,24; 15,69; 15,83; 17,44; 18,30; 20,93; 23,17; 26,28; 27,27; 28,14; 28,73; 32,38; 34,15; 34,96; 36,07; 36,86; 38,11; 38,76; 38,86; 39,46; 39,55; 42,70; 43,67; 47,24; 55,31; 60,20; 79,02; 117,55; 142,09; 179,03.
Пример 4. Терапевтическое действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на D-галактозамин-индуцированное острое поражение печени на модели у мыши
1. Сравнение терапевтического действия от введения этил 11-дезокси-18α-глицирретината и соединения глицирризин на моделях у самцов мышей ICR.
Способы: 60 самцов мышей ICR произвольно делили на 6 групп по 10 мышей в каждой группе: контрольная группа, группа мышей, которым делали инъекцию соединения глицирризин (60 мг/кг), группа мышей, которым вводили соединение глицирризин посредством вливания в желудок (240 мг/кг), группа мышей, которым вводили высокую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (240 мг/кг), группа мышей, которым вводили среднюю дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (120 мг/кг), группа мышей, которым вводили низкую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (60 мг/кг). Вещества мышам вводили дозировками по 10 мл/кг внутрибрюшинно или посредством вливания в желудок каждый день в течение 6 дней. Мышам контрольной группы вводили эквивалентное количество 0,5% Na-КМЦ посредством вливания в желудок. Результаты представлены в следующей таблице.
| Таблица 1 | |||||||
| Терапевтическое действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на D-Galn-индуцированное острое поражение печени на модели у мыши | |||||||
| Группа | Доза, мг/кг | Способ введения | N | АЛТ | АСТ | ||
| Ед/мл | Ингибирова-ние, % | Ед/мл | Ингибирова-ние, % | ||||
| Контрольная группа | - | вливание в желудок | 10 | 2084±1619 | 1952±1644 | ||
| Инъекция соедине-ния глицирризин | 60 | Внутрибрюшинное введение | 10 | 629±422* | 70 | 523±344* | 73 |
| 240 | вливание в желудок | 10 | 896±734* | 57 | 767±638* | 61 | |
| 240 | вливание в желудок | 10 | 311±256** | 85 | 317±214** | 84 | |
| этил 11-дезокси-18α- глицирретинат | 120 | вливание в желудок | 10 | 474±345** | 77 | 414±340** | 79 |
| 60 | вливание в желудок | 10 | 833±564* | 60 | 777±533* | 60 | |
| По сравнению с контрольной группой * p<0,05, **p<0,01. |
60 самцов мышей ICR произвольно делили на 6 групп по 10 мышей в каждой группе: контрольная группа, группа мышей, которым вводили исходное соединение глицирризинат диаммония (240 мг/кг), группа мышей, которым делали инъекцию глицирризината диаммония (60 мг/кг), группа мышей, которым вводили высокую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (240 мг/кг), группа мышей, которым вводили среднюю дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (120 мг/кг), группа мышей, которым вводили низкую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (60 мг/кг). Вещества мышам вводили непрерывно в течение 7 дней. Мышам контрольной группы вводили эквивалентное количество 0,5% Na-КМЦ. Результаты представлены в следующей таблице.
| Таблица 2 | |||||||
| Терапевтическое действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на D-Galn-индуцированное острое поражение печени на модели у мыши | |||||||
| Группа | Доза, мг/кг | Способ введения | N | Ед/мл | Ингибирование, % | Ед/мл | Ингибирова-ние, % |
| Контроль-ная группа | - | вливание в желудок | 10 | 1949±1307 | 1140±799 | ||
| Глицирри-зинат диаммония | 60 | внутрибрюшинное введение | 10 | 383±393** | 80 | 308±389** | 73 |
| 240 | вливание в желудок | 10 | 993±479* | 49 | 566±291* | 50 | |
| Этил 11-дезокси-18α-глицирре-тинат | 240 | вливание в желудок | 10 | 372±440** | 81 | 266±192** | 77 |
| 120 | вливание в желудок | 10 | 452±432** | 77 | 292±215** | 74 | |
| 60 | вливание в желудок | 10 | 767±739* | 61 | 353±256** | 69 | |
| По сравнению с контрольной группой * р<0,05 ** p<0,01. |
Пример 5. Терапевтическое действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на ТАА-индуцированное острое поражение печени на модели у мыши
50 самцов мышей ICR произвольно делили на 5 групп по 10 мышей в каждой группе: контрольная группа, группа мышей, которым вводили глицирризинат диаммония (240 мг/кг), группа мышей, которым вводили высокую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (240 мг/кг), группа мышей, которым вводили среднюю дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (120 мг/кг), группа мышей, которым вводили низкую дозу этил 11-дезокси-18α-глицирретината (60 мг/кг). Мышам контрольной группы вводили эквивалентное количество 0,5% Na-КМЦ. Результаты представлены в следующей таблице.
| Таблица 3 | |||||||
| Действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на сывороточную трансаминазу при ТАА-индуцированном остром поражении печени на модели у мыши | |||||||
| АЛТ | ACT | ||||||
| Группа | Доза, мг/кг | Способ введе ния |
N | Ед/мл | Ингибиро-вание, % | Ед/мл | Ингибирование, % |
| Контрольная группа | - | Влива ние в желудок |
10 | 2279±872 | 1717±744 | ||
| Глицирризинат диаммония | 240 | Влива ние в желудок |
10 | 1568±721 | 31 | 1039±623* | 40 |
| Влива ние в желудок |
10 | 992±558** | 56 | 738±258** | 57 | ||
| Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат | 120 | Влива ние в желудок |
10 | 1117±707** | 51 | 823±530** | 52 |
| Влива ние в желудок |
10 | 1177±701** | 48 | 940±582* | 45 | ||
| По сравнению с модельной группой *p<0,05 **p<0,01 |
| Таблица 4 | |||||||||
| Действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на некроз клетокпечени при ТАА-индуцированном остром поражении печени на модели мыши | |||||||||
| Группа | Доза, мг/кг | Способ введе-ния | Коли-чест-во | Степень некроза клеток печени | Средняя степень | ||||
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | |||||
| Контрольная группа | - | Вливание в желу-док | 10 | 0 | 1 | 6 | 3 | 0 | 2.2 |
| Глицирризинат диаммония | 240 | Вливание в желудок | 10 | 0 | 7 | 3 | 0 | 0** | 1.3** |
| Вливание в желудок | 10 | 1 | 6 | 3 | 0 | 0 | 1.2** | ||
| 240 | |||||||||
| Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат | 120 | вливание в желудок | 10 | 1 | 5 | 4 | 0 | 0 | 1.3** |
| 60 | Вливание в желудок | 10 | 1 | 4 | 5 | 0 | 0 | 1.4* | |
| По сравнению с модельной группой * p<0,05 **p<0,01. |
Пример 6. Противовоспалительное действие этил 11-дезокси-18α-глицирретииата
Путем введения каррагинана вызывали отек лапы крысы и наблюдали за отеком для того, чтобы оценить противовоспалительное действие. При этом:
(1) Материалы
Животные: самцы крыс SD, 150-180 г.
Средство, провоцирующее воспаление: каррагинан.
Испытуемое лекарство: этил 11-дезокси-1α-глицирретинат растворяли в 1% Na-КМЦ для получения необходимой концентрации.
Лекарство для подтверждающего контроля: индометацин растворяли в 1% Na-КМЦ для получения необходимой концентрации.
(2) Способы
50 крыс произвольно делили на 5 групп по 10 крыс в каждой группе: контрольная группа, группа подтверждающего контроля (введение индометацина 10 мг/кг), группы с различными дозами испытуемого лекарства (30, 60, 120 мг/кг). Препараты животным в каждой группе вводили непрерывно в течение 3 дней. Перед последним введением измеряли объем левых задних лап крыс с помощью микропипетки. Затем животным вводили испытуемое лекарство или Na-КМЦ посредством вливания в желудок. По прошествии 1 часа вводили свежеприготовленный каррагинан подкожно в левые задние лапы крыс в соответствии с дозировкой 0,05 мл/лапу с помощью шприца на 0,25 мл и иглы NO.4. Объем левой задней лапы крыс измеряли указанным выше способом в моменты времени 1, 3, 4, 5 и 7 часов после введения, в каждый момент времени измерение производили дважды и вычисляли средние величины. Разница между этими величинами до и после провокации
(3) Статистический анализ
Данные представлены в форме 
(4) Результаты
Через 1 час после подкожного введения каррагинана лапа крысы значительно отекала. Таблица 5 свидетельствует о том, что у групп с различными дозировками испытуемого лекарства через 4 часа начинал снижаться отек лапы крысы, индуцированный каррагинаном.
| Таблица 5 | ||||||
| Действие соединений на индуцированный каррагинаном отек лапы крысы (Количество крыс в группе 10) | ||||||
| Группа | Доза, мг/кг | Степень отечности лап после провокации воспаления (мл) | ||||
| 1 ч | 3 ч | 4 ч | 5 ч | 7 ч | ||
| Контрольная группа | --- | 0,24±0,10 | 0,32±0,09 | 0,49±0,12 | 0,53±0,11 | 0,38±0,11 |
| Испытуемое лекарство | 30 | 0,20±0,10 | 0,27±0,10 | 0,33±0,11* | 0,39±0,11* | 0,27±0,12 |
| 60 | 0,17±0,08 | 0,29±0,15 | 0,37±0,11* | 0,37±0,07** | 0,29±0,09 | |
| 120 | 0,20±0,05 | 0,32±0,11 | 0,34±0,09** | 0,42±0,12* | 0,28±0,09 | |
| Индометацин | 10 | 0,13±0,05** | 0,17±0,07** | 0,24±0,09** | 0,22±0,06** | 0,16±0,05** |
| По сравнению с контрольной группой * р<0,05, ** p<0,01. |
(5) Выводы
Результаты свидетельствуют о том, что соединение, предложенное в настоящем изобретении, может значительно снижать индуцированный каррагинаном отек лап крысы, уменьшать воспалительный экссудат и обладать значительным противовоспалительным действием.
Пример 7. Защитное действие этил 11-дезокси-18а-глицирретината по отношению к БЦЖ+ЛПС-индуцированному поражению печени.
(1) Испытуемое лекарство, лабораторное животное и оборудование
1.1 Лекарство
Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат: предоставлен лабораторией традиционной китайской медицины, центром исследований и разработок фармацевтической компании Цзянсу Цзя Тай Тяньцзинь, ООО (Jiangsu Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd). Таблетки, содержащие бифендат: изготовлены Пекинской Объединенной Фармацевтической Фабрикой (Beijing Union Pharmaceutical factory). Суточная дозировка для человека составляет 45 мг, использовали в качестве лекарства для подтверждающего контроля. Все лекарства были приготовлены в необходимых концентрациях с использованием физиологического раствора в соответствии с требованиями эксперимента.
Бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ): продукт института биологической продукции в Шанхае. Липополисахарид (ЛПС): продукт предприятия Sigma, США. ACT, АЛТ набор: продукт института биоинженерии Цзян Чжэн (Nanjing Jiancheng) в Нанкине.
1.2 Животные
Куныминские мыши, заказанные в лабораторном центре животных Университета Китайской Медицины. Объем лекарства для вливания в желудок мыши составлял 0,25 мл/10 г.
1.3 Оборудование
Ультарафиолетовый спектрофотометр UV-2650
(3) Способ
60 самцов куныминской мыши массой 18-22 г произвольно делили на 6 групп в соответствии с массой: группа нормального контроля, группа модельного контроля, группа контроля с применением бифендата, группы с различными дозами этил 11-дезокси-18α-глицирретината (240, 120, 60 мг/кг). После адаптивного кормления мышей в течение 3 дней, каждой мыши, за исключением животных в группе нормального контроля, вводили 5×107 живых бактерий БЦЖ через хвостовую вену. На второй день животным в каждой группе вводили физиологический раствор (группа нормального контроля и группа модельного контроля) или испытуемое лекарство путем вливания в желудок в течение 7 дней. Через 1 час после последнего вливания в желудок, каждой мыши, за исключением животных в группе нормального контроля, вводили 10 мкг ЛПС через хвостовую вену. Животным в группе нормального контроля вводили эквивалентный объем физиологического раствора. После создания модели оставляли животных на ночь натощак и позволяли неограниченно пить воду в течение 12 часов, забор крови производили посредством орбитального кровотечения. Кровь центрифугировали со скоростью 2500 об/мин в течение 15 мин с целью разделения сыворотки и сывороточной аланинаминотрансферазы (АЛТ), измеряли аспартатаминотрансферазу (ACT). Определяли t-критерий Стьюдента по группам, смотри таблицу 6.
| Таблица 6 | |||
Действие этил 11-дезокси-18α-глицирретината на функцию печени у мыши с БЦЖ+ЛПС-индуцированным поражением печени 
|
|||
| Группа | мг/кг | АСТ(ед/л) | АЛТ(ед/л) |
| Нормального контроля | Эквивалентный объем физиологического раствора | 114,3±20.6 | 91,6±3,8 |
| Модельного контроля | Эквивалентный объем физиологического раствора | 232,5±39,6# | 152,2±19,4# |
| Бифендат | 5,85 | 152,3±41,6* | 110,5±11,9* |
| Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат | 240 | 169,3±38,4* | 89,4±13,2* |
| 120 | 190,1±43,3* | 108,7±20,0* | |
| 60 | 227,2±59,7 | 105,3±18,61* | |
| Примечание: по сравнению с группой нормального контроля #Р<0,05; по сравнению с группой модельного контроля *Р<0,05. |
(4) Результаты
Результаты свидетельствуют о том, что соединение формулы II настоящего изобретения, в особенности этил 11-дезокси-18α-глицирретинат, обладает высокой активностью в отношении защиты печени и редуктазной активностью и может эффективно влиять на иммунные факторы, индуцированные поражением печени.
Пример 8. Защитное действие соединения формулы II настоящего изобретения по отношению к ацетаминофен-индуцированному поражению печени у мышей
(1) Материалы:
Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат: предоставлен лабораторией традиционной китайской медицины, центром исследований и разработок фармацевтической компании Цзянсу Цзя Тай Тяньцзинь, ООО (Jiangsu Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co., Ltd.). Таблетки, содержащие бифендат: изготовлены Пекинской Объединённой Фармацевтической Фабрикой (Beijing Union Pharmaceutical factory). Суточная дозировка для человека составляет 45 мг, использовали в качестве лекарства для подтверждающего контроля. Все лекарства были приготовлены в необходимых концентрациях с использованием физиологического раствора в соответствии с требованиями эксперимента. ACT, АЛТ набор: продукт института биоинженерии Цзян Чжэн в Нанкине (Nanjing Jiancheng bioengineering research institute).
(2) Способ
60 мышей произвольно делили на 6 групп: группа нормального контроля, группа контроля с применением бифендата (группа лекарства с положительным действием), группа модельного контроля, группы с различными дозами этил 11-дезокси-18α-глицирретината (240, 120, 60 мг/кг). После адаптивного кормления мышей в течение 3 дней, каждой мыши вводили лекарства посредством вливания в желудок в течение 10 дней (один раз в день). Животным в группе нормального контроля и в модельной группе вводили физиологический раствор в количестве 0,2 мл/мышь. Через 6 часов после последнего введения животным в каждой группе, за исключением животных в группе нормального контроля, делали внутрибрюшинную инъекцию ацетаминофена в количестве 400 мг/кг. Через 12 часов производили забор крови посредством орбитального кровотечения. Измеряли активности аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT). Определяли t-критерий Стъюдента по группам, см. таблицу 7.
| Таблица 7 | |||
| Действие соединения формулы II на функционирование печени мыши с минофен-индуцированным поражением печени
|
|||
| Группа | мг/кг | АСТ (ед/л) | АЛТ (ед/л) |
| Нормального контроля | Эквивалентный объем физиологического раствора | 112,5±21,8 | 98,1±13,2 |
| Модельного контроля | Эквивалентный объем физиологического раствора | 275,1±33,4# | 180,2±21,5# |
| Бифендат | 5,85 | 162,3±31,7* | 134,6±12,9* |
| Этил 11-дезокси-18α-глицирретинат | 240 | 122,3±28,0* | 119,4±15,2* |
| 120 | 158,1±46,9* | 133,3±28,7* | |
| 60 | 203,5±55,4* | 172,0±39,8 | |
| Примечание: по сравнению с группой нормального контроля #Р<0,05; по сравнению с группой модельного контроля *Р<0,05. |
(2) Результаты
Главной причиной ацетаминофен-индуцированного поражения печени является то, что в организме под действием ферментной системы Р450 метаболизируется большое количество ацетаминофена и образуется слишком много N-ацетил-п-бензохинонимина (NAPQI), что приводит к уменьшению содержания печеночного глутатиона (GSH), и NAPQI и большие молекулы (такие как белки) клеток печени будут ковалентно связываться, тем самым вызывая некроз клеток печени. Экспериментальные результаты свидетельствуют о том, что соединение формулы II настоящего изобретения, в особенности этил 11-дезокси-18α-глицирретинат, может снижать уровень ACT, АЛТ и эффективно защищать против ацетаминофен-индуцированного поражения печени, и его можно применять для лечения медикаментозного поражения печени.
1. Соединение формулы II
где R1 представляет собой H;
R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-С18алкокси;
C-18 находится в α-конфигурации; и соединение формулы II не является метил 11-дезокси-18α-глицирретинатом.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C6 алкокси.
3. Соединение по п.1 представляет собой этил 11-дезокси-18α-глицирретинат.
4. Способ получения соединения формулы I,
где R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C18 алкокси;
C-18 находится в α-конфигурации;
при этом способ включает взаимодействие R2H в присутствии дегидратирующего вещества с одним или более соединениями, выбранными из группы, включающей глицирризиновую кислоту, соль глицирризиновой кислоты или производное глицирризиновой кислоты.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанный R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C6 алкокси, и указанное дегидратирующее вещество представляет собой ацилхлорид или концентрированную серную кислоту.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанный ацилхлорид представляет собой метилсульфонилхлорид, бензолсульфонилхлорид или п-толуолсульфонилхлорид.
7. Способ по любому из пп.4-6, отличающийся тем, что количественное соотношение количества глицирризиновой кислоты, соли глицирризиновой кислоты или производного глицирризиновой кислоты к количеству ацилхлорида составляет 1:1-20 по молям
8. Способ по любому из пп.4-6, отличающийся тем, что количественное соотношение глицирризиновой кислоты, соли глицирризиновой кислоты или производного глицирризиновой кислоты к количеству концентрированной серной кислоты составляет 1:0,5-10 по молям.
9. Способ получения соединения по п.1, включающий: дезоксидацию соединения формулы I по положению C-11, в органическом растворителе, при этом C-18 находится в α-конфигурации, и
при этом R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C18 в алкокси.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что R2 представляет собой линейный или разветвленный C1-C6 алкокси.
11. Способ по п.5, отличающийся тем, что дезоксидацию проводят способом восстановления по Клемменсону.
12. Фармацевтическая композиция для лечения воспаления и/или поражения печени, в которой соединение по любому из пп.1-3 применяют в качестве активного ингредиента, и дополнительно содержащая один или более фармацевтически приемлемый носитель.
13. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного препарата для лечения воспаления и/или поражения печени.
14. Применение соединения по любому из пп.1-3 для лечения воспаления и/или поражения печени.
15. Применение по п.14, отличающееся тем, что поражение печени представляет собой медикаментозное поражение печени.
16. Применение композиции по п.12 для получения лекарственных препаратов для лечения воспаления и/или поражения печени.
17. Применение композиции по п.12 для лечения воспаления и/или поражения печени.
18. Применение по п.17, отличающееся тем, что поражение печени представляет собой медикаментозное поражение печени.
