Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, позволяющий определять степень оксигенации гемоглобина

Изобретение касается способа выявления гистидина в эритроцитах периферической крови. Способ осуществляют путем приготовления инкубационного раствора №1, состоящего из раствора 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl, и раствора №2, состоящего из 125 мг NaNO2 в 2,5 мл дистиллированной воды. Растворы смешивают по 1 мл каждого в пробирке и вносят в смесь 200 мкл цельной крови с коагулятом. Реакция протекает в течение 10 мин при комнатной температуре, после чего из капли взвеси изготовляют монослойный мазок на предметном стекле, подсушивают и изучают с помощью компьютерной цитофотометрии. 2 ил.

 

Гистидин относится к одной из 20 протеиногенных аминокислот. Его роль в организме многогранна. Он принимает активное участие в биосинтезе гистамина [1, 3], способствует росту и восстановлению тканей и в большом количестве содержится в гемоглобине эритроцитов периферической крови, принимая участие в его оксигенации [7-11].

Присоединяя кислород, гемоглобин превращается в оксигемоглобин. Валентность железа (Fe2++) при этом не изменяется, поэтому эту реакцию называют оксигенацией, а не окислением. Связь гемоглобина с гистидином влияет на присоединение кислорода к Fe2++ гема [12]. Гистидин как сильный донатор фиксирует гем в глобине, повышая основность Fe2++, и тем самым способствует образованию связи с акцептором, которым является молекула кислорода с практически сохраненным эффектом H. Бора [2, 6].

Цель работы найти способ, позволяющий выявлять содержание гистидина в эритроцитах периферической крови и по измерению реакции на содержание гистидина прогнозировать содержание оксигемоглобина.

Прототипом выявления гистидина в клеточных элементах мы взяли реакции, предложенные в пятидесятые годы XX столетия [5]. Однако от предложенных методов наши исследования существенно отличаются.

1. Реакцию в те годы проводили только на гистологических срезах. В отличие от этого мы разработали гистохимическим методом выявлять гистидин в отдельно взятых эритроцитах периферической крови.

2. Предложенный ранее метод основан на обязательной обработке тканевых срезов 33% раствором азотной кислоты, что не приемлемо для применения к взвеси эритроцитов, поскольку это приводит к немедленному их гемолизу.

3. Обработанные слабым раствором соляной кислоты эритроциты помещались в инкубационный раствор для определения гистидина, после чего из капли прореагированной на гистидин взвеси изготовляли монослойный мазок.

4. Предложенный способ выявления гистидина в эритроцитах чувствителен и стоек, что позволяет мазки крови длительно сохранять для исследования.

5. До настоящего времени способа выявления гистидина в эритроцитах в литературе не описано, как и не предложено микрофотографий эритроцитов, содержащих продукты реакции на гистидин.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследование проводилось на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 25 здоровых беременных в возрасте 18-25 лет. Контролем служили 10 беременных с признаками анемии при обострении цитомегаловирусной инфекции.

2. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ №266 от 19.06.2003 г.

3. Верификация цитомегаловирусной инфекции выполнялась путем определения типоспецифических антител и индекса авидности методом ИФА на спектрофотометре Stat-Fax-2100 (USA) с использование наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск).

4. Гистидин в эритроцитах периферической крови определяли гистохимическим методом путем помещения в инкубационный раствор эритроцитов, взятых у здоровых лиц. Контролем служили беременные с признаками анемии.

Приготовление инкубационного раствора проводилось следующим образом.

Раствор 1: 500 мг сульфаниловой кислоты растворяют в 50 мл 1 М HCl (2,218 мл до 50 мл дистиллированной воды).

Раствор 2: 125 мг NaNO2 растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды.

В пробирку вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и добавляют равные объемы (по 1 мл) растворов 1 и 2. При комнатной температуре инкубационный раствор выдерживают 10 мин. После чего каплю инкубационного раствора наносят на предметное стекло и изготовляют с помощью центрифуги Diff Spin Slide Spinner M 700-22 (USA) монослойный мазок, который подсушивают и изучают под цифровым фотомикроскопом МТ (Япония).

5. Компьютерным цитофотометрическим методом определяют содержание гистидина, приходящегося на 1 эритроцит в условных единицах, денситометрируя 100 эритроцитов у каждого пациента. Содержание HbO2 у этих же пациентов определяли по методу Эвелина и Мэллой [4].

Проведенные исследования показали, что составление инкубационной смеси из следующих растворов: 1. - 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl и 2. - 125 мг NaNO2 в 2,5 мл дистиллированной воды после смешения каждого из них по 1 мл и введения в смесь 200 мкл цельной крови с коагулянтом позволяет выполнять реакцию на выявление гистидина в эритроцитах в течение 10 мин при комнатной температуре.

Из капли взвеси после проведения реакции изготовляется монослойный мазок и после его подсушивания изучают содержание гистидина в эритроцитах компьютерным цитофотометрическим методом. В эритроцитах четко выделяются гранулы реакции на гистидин. У здоровых беременных цитофотометрические исследования позволяют установить, что на 1 эритроцит приходится 62,17±2,5 усл. ед. гистидина (фигура 1). При обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:800, если количество гистидина на 1 эритроцит снижается до 34,3±1,85 усл. ед. (фигура 2), уменьшается оксигенация гемоглобина до 94,5±1,9%, что создает угрозу формирования гипоксии в организме.

ЛИТЕРАТУРА

1. Коржуев П.А. Гемоглобин: сравнительная физиология и биохимия. 1964. М: «Наука».

2. Коробов В.Н., Федорович И.П., Климишин Н.И. Физико-химические и функциональные свойства гемоглобина мышей, зараженных карциномой Эрлиха // Бюлл. экс. биол. и мед. 1992. т.113, №6. с.640-642.

3. Луценко М.Т. Влияние активности аргининдегидрогеназы на уровень гистамина в периферической крови беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюлл. физиол. и патол. дых. СО РАМН. 2012. Вып.44. С.62-66.

4. Покровский А.А. Биохимические методы исследования: Справочник. М.: «Медицина». 1969. 337 с.

5. Роскин Г.И. Микроскопическая техника. М.: «Советская наука», 1954. 441 с.

6. Федорова Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция. 1976. М.: «Медицина». 541 с.

7. Christian J.E., Unno М., et. al. Spectroscopic effects of polarity and hydration in the distal heme pocket of deoxymyoglobin // Biochemistry. 1997. 36 (37). P.11198-11204.

8. Ferguson R.A., Sehdev N., Bagatto B. In vitro interactions between oxygen and carbon dioxide transport in the blood of the sea lamprey // J. Exp. Biol'. 11992. №2. P.10-15.

9. Jkeda-Saito M., Hon H., Anderson L.A. Coordination structure of the ferric hemme iron in engineered distal hisdine myoglobin mutants // J. Biol. Chem. 1992. 267 (32). P.22843-22852.

10. Kopec W., Jamroz D., Wiliczkiewicz A. Antioxidation status and histidine dipeptides content in broiler blood and muscules depending on protein sources in feed // J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. (Berl). 2012. 10. 1111/j. P.1439-0396.

11. Nikinmaa M., Airaksinen S., Vikki L. Hemoglobin function in intact lamprey erythrocytes: interactions with membrane function in the regulation of gas transport and acid-base balance // J. Exp. Biol. 1995. №3. P.12-16.

12. Perutz M.F., Mazzarella L. A preliminary x-ray analysis of haemoglobin H. «Nature». 1963. V.4. P.2.

Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, включающий выполнение гистохимической реакции в инкубационном растворе, состоящем из смеси растворов по 1 мл каждого: раствор №1 - 500 мг сульфаниловой кислотой растворяют в 50 мл 1M HCl и раствор №2 - 125 мг NaNO2 растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, в который вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и после 10 мин прохождения реакции при комнатной температуре из капли взвеси изготовляется мазок, на котором изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание гистидина в эритроцитах.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы гибели эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития врожденных инфекций путем определения количества специфических антител классов Ig М и Ig G в биологическом материале, отличающееся тем, что в качестве биологического материала используют мазок со слизистой оболочки цервикального канала при первичном обследовании в сроке до 12-й недели гестации, одновременно в мазках определяют количество антител Ig М и Ig G к вирусу краснухи, цитомегаловирусу, парвовирусу B19V, токсоплазмам, вирусу простого герпеса 1 и 2 типов и величины авидности специфических Ig G к этим возбудителям, дополнительно в том же мазке определяют уровень секреторного неспецифического Ig A методом РИФ к антигенам цитомегаловируса, хламидий, микоплазм, и генетического материала этих микроорганизмов методом ПЦР и в зависимости от полученных результатов прогнозируют группы высокого, умеренного или низкого риска развития врожденных инфекций.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки эффективности лекарственных средств (ЛС) для улучшения когнитивных функций человека. В сыворотке крови пациента определяют содержание белка HLDF, титров идиотипических и антиидиотипических антител к HLDF до и после введения ЛС и на основании полученных данных вычисляют значение показателя MMSE до и после введения ЛС по формуле, после чего проводят сравнение полученных значений показателя MMSE и оценку эффективности ЛС по результатам такого сравнения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии и молекулярной биологии, и может быть использовано для оценки риска развития рака шейки матки при цервикальной интраэпителиальной неоплазии и носительстве вируса папилломы человека (ВПЧ) у женщин репродуктивного возраста.
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и касается определения степени тяжести психосоматических нарушений у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ).
Представленное изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа обнаружения микроорганизма вида Vibrio parahaemolyticus. Способ включает посев исследуемого штамма на газон культуры, нанесение капли диагностического препарата фага в центр чашки, выдерживание при температуре 37°С в течение 20-24 часов и подтверждение его принадлежности к микроорганизмам вида V.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности (НБ). Сущность способа: в супернатанте аспирационной жидкости из полости матки или менструальной крови определяют одномоментно содержание карбонильных групп белков и малонового диальдегида.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения риска развития сердечно-сосудистых осложнений у женщин с гипертонической болезнью путем забора крови у больных, определения в крови уровня интерлейкина-1α, рецепторного антагониста интерлейкина-1 иммуноферментным методом, отличающийся тем, что определяют показатель, равный отношению рецепторного антагониста интерлейкина-1 к интерлейкину-1α, фактор ингибирования лейкозных клеток в крови и количество CD34 клеток с последующим диагностированием развития сердечно-сосудистых осложнений в течение 5 лет, при этом устанавливают высокий, средний или низкий риски развития осложнений.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования общей выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции, включающий определение клинико-патологических (морфологических), гистологических и молекулярных факторов прогноза, отличающийся тем, что с помощью иммуногистохимического метода проводят исследование молекулярных характеристик микроокружения опухоли, а именно наличие и количество сосудов с гладкомышечным актином в их стенке для стромы метастаза печени в трех полях зрения микроскопа, при этом поля зрения выбирают по максимальной выраженной иммуногистохимической реакции с каждого среза биоптата печени с метастатической опухолью и при наличии в каждом из трех полей зрения сосудов с наличием гладкомышечного актина в их стенке, пациента определяют в группу благоприятного прогноза (дожитие после резекции печени три года и более), при отсутствии сосудов с наличием в стенке гладкой мускулатуры во всех трех полях зрения, пациента включают в группу неблагоприятного прогноза (с продолжительностью жизни меньше двух лет).
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может использоваться для прогнозирования риска прогрессирования глаукомной оптической нейропатии (ГОН).
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости. Cущность способа состоит в том, что определяют количественное содержание матриксной металлопротеиназы 2 (ММП 2) в ротовой жидкости пациента, за группу клинического контроля принимают уровень 1,7-2,9 нг/мл, при количестве ММП 2 14,4-24,3 нг/мл диагностируют папиллому слизистой оболочки языка пациента, при содержании в ротовой жидкости ММП 2 пациента 4,1-6,8 нг/мл диагностируют рак слизистой оболочки языка. В качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки языка в ротовой жидкости определяют тканевый ингибитор металлопротеиназы 2 (ТИМП 2), при этом за группу клинического контроля принимают уровень 6,44-11,23 нг/мл, при содержании ТИМП 2 29,25-48,75 нг/мл диагностируют папиллому слизистой оболочки языка, при содержании ТИМП 2 57,23-95,03 нг/мл диагностируют рак слизистой оболочки языка. Использование заявленного способа позволяет повысить точность дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки языка. 1 з.п. ф-лы, 6 пр.

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способу характеристики микроорганизмов. Сущность способа состоит в (a) получении тестируемого образца, о котором известно, что он содержит или может содержать микроорганизмы; (b) наслаивании тестируемого образца на плотностный буфер в контейнере, где указанный плотностный буфер обладает однородной плотностью от приблизительно 1,025 до приблизительно 1,120 г/мл; (c) добавлении идентификатора в указанный тестируемый образец и/или в указанный плотностный буфер; (d) центрифугировании указанного контейнера для разделения микроорганизмов от других компонентов указанного тестируемого образца и образовании осадка микроорганизмов; (e) спектроскопическом исследовании осадка и/или указанного одного или более чем одного идентификатора с получением измерений, которые характеризуют микроорганизмы, где указанные спектроскопические исследования проводят при нахождении указанного осадка в указанном контейнере; и (f) характеристике микроорганизмов в осадке на основании полученных измерений и/или присутствия или отсутствия указанного идентификатора или метаболизированной формы указанного идентификатора в осадке, где указанные микроорганизмы характеризуют по одной или более моделям классификации, выбранным из группы, состоящей из групп по Граму, клинических групп по Граму, терапевтических групп и функциональных групп. Использование заявленного изобретения позволяет повысить точность характеристики микроорганизмов. 14 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики нарушений агрегации тромбоцитов при муковисцидозе у детей, включающий проведение теста на агрегацию тромбоцитов с индукторами на агрегометре «Multiplate», при этом в кюветы с магнитной мешалкой и электродами добавляют 400 мкл NaCl при 37°C и затем сразу добавляют 400 мкл цельной крови из пробирки с гирудином, инкубируют в камере прибора две минуты, затем добавляют в кювету 30 мкл индуктора агрегации, выбранного из группы: растворимый рецептор тромбина - пептид-6, аденозиндифосфат, арахидоновая кислота, при этом скорость агрегации тромбоцитов изображается на экране прибора в виде кривой и автоматически рассчитывается площадь под кривой U, по значению площади U под кривой судят о состоянии агрегации трмбоцитов в сравнении с референсными значениями в группе здоровых детей и при повышении порогового значения площади U выше референсного судят о гиперагрегации тромбоцитов, а при понижении порогового значения площади U ниже референсного судят о гипоагрегации тромбоцитов. Изобретение обеспечивает своевременную диагностику нарушений в микроциркуляторном русле при муковисцидозе. 2 пр., 1 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ прогнозирования эффективности лечения пациентов с неходжкинскими злокачественными лимфомами высокой степени злокачественности. Предложенное изобретение может использоваться в медицинской генетике, онкологии и онкогематологии. Эффективность лечения пациентов с неходжкинскими злокачественными лимфомами высокой степени злокачественности определяют по вероятности достижения ремиссии, а также 5-летнему общему и безрецидивному выживанию. Способ включает исследование полиморфизма G13494A 6-го интрона гена ТР53 пациента. При выявлении у пациента гомозиготного генотипа G/G в данном локусе прогнозируют низкую эффективность лечения, а именно малую вероятность 5-летнего выживания пациента и малую вероятность отсутствия рецидива. В случае выявления у пациента генотипа А/А или G/A в данном локусе прогнозируют высокую эффективность лечения, а именно высокую вероятность наступления ремиссии и 5-летнего выживания пациента. Предложенное изобретение позволяет оценить эффективность лечения пациентов с неходжкинскими злокачественными лимфомами высокой степени злокачественности по полиморфизму G13494A 6-го интрона гена ТР53. 5 ил., 10 табл., 2 пр.

Изобретение относится к спортивной медицине, а именно к способу донозологической диагностики здоровья спортсменов. Проводят комплексное клинико-лабораторное исследование спортсмена через 12-16 часов после прекращения тяжелой физической нагрузки. Объем исследования определяют с учетом наиболее уязвимых к действию физических нагрузок органов и систем при оценке прогностически значимых критериев морфофункционального состояния организма. Исследование включает определение и анализ биохимических, гематологических, иммунологических и функциональных показателей, а также показателей витаминно-минеральной насыщенности организма. И, если указанные показатели остаются стабильно измененными, достоверно отличающимися от нормальных значений, диагностируют неспецифические изменения органов и систем спортсмена. Способ обеспечивает раннюю диагностику значимых изменений органов и систем организма в ходе тренировочно-соревновательного цикла, что позволяет в последующем принимать своевременные меры для предупреждения дальнейшего развития патологических состояний и сохранения в связи с этим профессиональной работоспособности и достижения стабильно высоких спортивных результатов.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использована для диагностирования наличия заболевания ротовой полости у субъекта. Для этого предложены устройство и способ. Устройство содержит сосуд для сбора образца из ротовой полости, детектор, способный обнаружить маркер в этом образце, индикатор, срабатывающий за счет сигнала от детектора. Указанный сосуд прикреплен к средству по уходу за полостью рта с возможностью его снятия. При этом сосуд содержит собирающий элемент для сбора образца, резервуар для хранения образца и проход, соединяющий собирающий элемент с резервуаром с возможностью подачи образца к резервуару за счет капиллярного действия. Индикатор расположен внутри резервуара. Посредством заявленного устройства осуществляют диагностирование заболевания ротовой полости путем сбора образца из ротовой полости, обнаружения наличия одного или более маркеров в этом образце и индикацию наличия одного из маркеров заболевания. Изобретения позволяют точно и быстро диагностировать патологические состояния полости рта при ежедневном уходе за полостью рта, за счет расположения детектора внутри резервуара, способного накапливать необходимое количество образца для диагностирования. 2 н. и 23 з.п. ф-лы, 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и касается диагностики недифференцированной дисплазии соединительной ткани (НДСТ) у женщин с потерей беременности в анамнезе. Способ включает определение фибринолитической активности в пробе биоптатов эндометрия. При ее значении менее 23,55 мм2 диагностируют недифференцированную дисплазию соединительной ткани. Изобретение обеспечивает диагностическую точность 92,6% и позволяет диагностировать НДСТ у женщин с потерей беременности в ранние сроки в анамнезе. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики генетического риска развития осложненного клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции у человека. Методом ПЦР определяют полиморфные варианты генов IL6 и TGFb1. При определении гомозиготного генотипа СС в позиции -174 гена IL6 у мужчин и женщин, а также гетерозиготного генотипа GC в позиции -915 гена TGFb1 у женщин, прогнозируют высокий риск развития осложненного клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции. Предлагаемое изобретение позволяет принимать обоснованные решения о выборе тактики терапии конкретного пациента, больного урогенитальным хламидиозом, чтобы предупредить развитие осложнений урогенитального хламидиоза и нарушений репродуктивной функции. 4 табл., 5 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ. Изобретение обеспечивает повышение точности выявления этиологии острой кишечной инфекции и упрощение процедуры диагностирования. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для обоснования предельно допустимых концентраций (ПДК) тяжелых металлов в крови детей, проживающих в условиях загрязненной среды обитания, по критериям риска для здоровья при хронической многосредовой экспозиции. Выбирают экологически неблагополучную территорию; с указанной территории производят репрезентативную выборку детей для исследования - основная группа, с использованием биологических, социально-бытовых и гигиенических критериев; с использованием тех же критериев производят репрезентативную выборку детей в контрольную группу из благополучной в экологическом плане территории. На указанных территориях осуществляют количественную оценку хронической экспозиции исследуемого тяжелого металла по установлению среднесуточной концентрации его в объектах внешней среды и, используя ее, рассчитывают для детей обеих групп усредненную на годовую экспозицию суммарную среднюю суточную дозу тяжелого металла, поступающего из различных источников в организм ребенка. Далее у детей один раз в три месяца в течение одного года производят отбор пробы крови для определения содержания исследуемого тяжелого металла и для определения уровня биохимических показателей плазмы и сыворотки крови, которые характеризуют ответные реакции в виде фактического или потенциального нарушения здоровья - маркеры ответа. Затем рассчитывают среднюю концентрацию исследуемого тяжелого металла в крови и сравнивают ее с референтным уровнем для этого тяжелого металла, используя при этом двухвыборочный критерий Стъюдента, устанавливая при этом адекватности выбора детей основной и контрольной групп. Далее методом математического моделирования для детей каждой группы устанавливают связь между экспозицией - суммарной средней суточной дозой исследуемого металла и маркером экспозиции - средней концентрацией металла в крови. Затем с использованием технологии «скользящего окна» осуществляют обоснование выбранных маркеров ответа. Методом, основанным на анализе отношения шансов, определяют предельно допустимую концентрацию маркера экспозиции и соответствующий ей маркер ответа. Изобретение обеспечивает возможность определения ПДК тяжелых металлов в крови детей при многосредовой экспозиции с использованием щадящих методов, исключающих вред здоровью ребенка. 4 табл., 2 ил., 1 пр.
Наверх