Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2535055:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения РАМН (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к цитомегаловирусу, оценивают нарушение оксигенации гемоглобина в эритроцитах, гистохимическим методом определяют активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и содержание метгемоглобина в эритроцитах, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы до 15,0±0,8 усл.ед. и увеличении содержания метгемоглобина в эритроцитах до 1,7±0,09% и снижении оксигемоглобина в периферической крови до 90,0±1,3% оценивают угрозу формирования гемической гипоксии. 2 ил.

Расщепление глюкозы в пентозном цикле, характерном для эритроцитов, начинается с глюкозо-6-фосфата. Путь окисления глюкозо-6-фосфата называется прямым, поскольку не происходит предварительного расщепления на 2 молекулы триозы [1, 6].

Дальнейший путь утилизации глюкозо-6-фосфата протекает в эритроцитах с участием кофактора фермента глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы - НАДФ, при этом НАДФ восстанавливается в НАДФ·Н [7]. В реакциях пентозного цикла происходит образование 2 молекул НАДФ·Н, которые в различных клетках могут участвовать в синтезе жирных кислот, холестерина и т.д.

Однако в эритроцитах важнейшая роль на долю НАДФ·Н выпадает в процессе регуляции оксигенации гемоглобина, поскольку от него зависит восстановительная функция метгемоглобина с помощью фермента метгемоглобин-редуктазы. В этом процессе НАДФ·Н выступает как переносчик электронов [2, 4].

Снижение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы подавляет выработку НАДФ·Н и опосредованный процесс восстановления метгемоглобина, снижая тем самым процесс оксигенации гемоглобина, что создает угрозу развития гемической анемии. В доступной литературе не освещается угнетающее действие цитомегаловирусной инфекции на подавление активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови, приводящей к снижению НАДФ·Н, от чего угнетается оксигенация гемоглобина.

Цель, поставленная в данной работе, - показать, что обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации резко снижает содержание в эритроцитах активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, что приводит к повышению уровня метгемоглобина и снижает его оксигенацию, создавая угрозу развития гемической анемии.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Обследовано 45 беременных на сроке гестации 20-22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) в стадии обострения (основная группа) и 15 беременных на тех же сроках гестации без патологии (контрольная группа). У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение ЦМВИ - устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности - более 65%, а также ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

2. Содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови определяли спектрофотометрическим методом по Кушаковскому М.С. [2].

3. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови беременных определялась следующим образом: гепаринизированную кровь, взятую у беременной в третьем триместре на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в количестве 0,5 мл, помещали в 0,5 мл инкубационного раствора (1М глюкозо-6-фосфат - 0,4 мл; НАДФ - 4 мг/2 мл; pH - 7,5) [3]. Смешивали и помещали на 15 минут в термостат при 37°C. Затем каплю взвеси помещали на предметное стекло, слегка покачивая, чтобы она растеклась и слегка подсохла, после чего наносили глицерин-желатину и накрывали покровным стеклом.

4. Полученный препарат изучали с помощью цифрового микроскопа МТ (Япония) и по компьютерной программе «Scion Image» выполняли подсчет интенсивность реакции на глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу приходящуюся на 1 эритроцит (как среднюю на 100 обработанных эритроцитов).

5. Содержание оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Мэллой [5].

На основании полученных данных было установлено, что при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности в эритроцитах периферической крови резко снижается до 15,0±0,8 усл.ед. активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Фиг.1), контроль - 55,0±0,75 усл.ед. (Фиг.2). Одновременно отмечено нарастание в эритроцитах периферической крови содержания метгемоглобина до 1,7±0,09% (контроль - 0,6±0,03%). На этом фоне отчетливо нарушается процесс оксигенации гемоглобина и составляет 90,0±1,3% (контроль - 96,5±1,5%), что создает угрозу формирования у беременных гипоксии.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600. Интенсивность реакции снижена до 15,0±0,8 усл.ед. Увеличение 10×90.

В эритроците в силу снижения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы подавляется восстановление НАДФ.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре, не болевшей на протяжении всего периода гестации. Интенсивность реакции глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы - 55,0±0,75 усл.ед. Увеличение 10×90.

Литература

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии // М.: Изд. «Ньюдиамед», 2007. - С.1275.

2. Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина // Лен. Отделение. - «Медицина». - 1968. - С.324.

3. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов // Лабораторные методы. М.: Изд. «Ньюдиамед», - 2007. - С.259.

4. Новицкий В.В., Сопрыкина Э.В. и др. Механизмы повреждения эритроцитов при токсическом действии метгемоглобинообразователей // Бюллетень Сибирской медицины. - 2006. - №1. - С.32-37.

5. Покровский А.А. Биохимические методы исследования // справочник М.: «Медицина», 1969. - С.337.

6. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция // М.: - «Медицина». - 1976. - С.543.

7. Энгельгардт В.А., Саков Н.Е. О механизме пастеровского эффекта // «Биохимия». - 1943. - Т.8. - С.9-12.

Способ оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, характеризующийся тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, оценивают нарушение оксигенации гемоглобина в эритроцитах, гистохимическим методом определяют активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и содержание метгемоглобина в эритроцитах, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы до 15,0±0,8 усл.ед., увеличении содержания метгемоглобина в эритроцитах до 1,7±0,09% и снижении оксигемоглобина крови до 90,0±1,3% оценивают угрозу формирования гемической гипоксии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для прогноза течения ишемического инсульта у больных сахарным диабетом.

Способ дифференциальной диагностики форм первичной плацентарной недостаточности // 2535011

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии, и позволяет проводить морфологическую дифференциальную диагностику трофобластической, эндометриальной и смешанной формы первичной плацентарной недостаточности при самопроизвольном прерывании беременности в первом триместре.

Способ диагностики опухоли мозга у пациента // 2535000

Изобретение относится к области медицины, в частности к нейрохирургии, и касается способа диагностики опухоли мозга у пациентов. Сущность способа: в забранной крови определяют процентное количество CD25-лимфоцитов.

Способ дифференцированной иммуномодулирующей терапии хронического тонзиллита и/или гипертрофии небных миндалин у детей дошкольного возраста // 2533845

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии и иммунологии, и может быть использовано для патогенетического лечения хронического тонзиллита и/или гипертрофии небных миндалин у детей дошкольного возраста с лимфопролиферативным синдромом.

Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента // 2533241

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта.

Способ выявления днк mycoplasma hominis из образцов крови // 2533238

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу выделения ДНК Mycoplasma hominis (М. hominis) для дальнейшего применения в диагностическом алгоритме.

Способ прогнозирования риска развития врожденных инфекций // 2532382

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития врожденных инфекций путем определения количества специфических антител классов Ig М и Ig G в биологическом материале, отличающееся тем, что в качестве биологического материала используют мазок со слизистой оболочки цервикального канала при первичном обследовании в сроке до 12-й недели гестации, одновременно в мазках определяют количество антител Ig М и Ig G к вирусу краснухи, цитомегаловирусу, парвовирусу B19V, токсоплазмам, вирусу простого герпеса 1 и 2 типов и величины авидности специфических Ig G к этим возбудителям, дополнительно в том же мазке определяют уровень секреторного неспецифического Ig A методом РИФ к антигенам цитомегаловируса, хламидий, микоплазм, и генетического материала этих микроорганизмов методом ПЦР и в зависимости от полученных результатов прогнозируют группы высокого, умеренного или низкого риска развития врожденных инфекций.

Способ количественного определения содержания фактора дифференцировки-прогностического биомаркера состояния сосудистой системы у человека в норме и патологии // 2532381

Изобретение относится к медицине. Способ включает последовательность этапов количественного определения содержания фактора дифференцировки клеток HLDF у пациента, страдающего заболеванием сердечно-сосудистой системы.

Способ прогнозирования рецидива рака вульвы // 2532342

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидива рака вульвы. Для этого перед началом лечения определяют содержание в крови больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) и уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей // 2532332

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Сущностью изобретения является то, что определяют наличие клеток, экспрессирующих EGFR, CD 34, bcl 6, bcl 2, и при выявлении клеток с гиперэкспрессией EGFR, CD 34, bcl 6, bcl 2 прогнозируют появление рецидива в короткие сроки, а при наличии клеток со слабой экспрессией EGFR, CD 34, bcl 6, bcl 26 прогнозируют благоприятный исход.

Способ количественного определения d-антигена полиовирусов 1-3 типов // 2535058

Изобретение относится к медицине и касается способа количественного определения D-антигена полиовирусов 1-3 типов иммуноферментным анализом (ИФА). В качестве иммуносорбента используют поливалентный (к трем типам полиовируса) аффинно очищенный иммуноглобулин класса Y (IgY), полученный из яичных желтков куриц, иммунизированных полиовирусами, а в качестве детекторных антител - аффинно очищенный препарат IgG кролика против каждого из трех полиовирусов. Изобретение обеспечивает более низкий неспецифический фон и, соответственно, более высокую достоверность результата анализа. 1 н.п. ф-лы, 3 пр., 1 табл.

Способ проведения иммунохроматографического анализа с диссоциирующей флуоресцентной меткой // 2535061

Изобретение относится к медицине и касается способа проведения иммунохроматографического анализа с диссоциирующей флуоресцентной меткой, в котором на мембранной тест-полоске формируют комплексы, в состав которых входят молекулы антигена или антигенов, специфичные к ним антитела и молекулы метки. При этом после проведения анализа метка экстрагируется из рабочей мембраны тест-полоски и флуоресцентный сигнал измеряется в объеме жидкости. Способ по изобретению обеспечивает оптимальные условия для флуоресценции метки, а так же устранение мешающего влияния мембраны, которая, будучи непрозрачной, уменьшает интенсивность как возбуждающего, так и испускаемого света. 1 ил., 1 пр.

Способ элюции патогена с иммобилизованной магнитной матрицы // 2535070

Изобретение относится к медицине, в частности к элюированию сконцентрированного на магнитной матрице патогена. Способ элюции осуществляется следующим образом: 0,1 мл 10% взвеси магнитно-иммунного сорбента (МИС) туляремийного, чумного или бруцеллезного инкубируют с микробными взвесями возбудителей туляремии, бруцеллеза или чумы в течение 30 мин, удаляют надосадок, далее МИС инкубируют с 0,5 мл элюирующего раствора в течение 10 мин, pH элюата возвращают к физиологическому значению, проводят постановку реакции непрямой гемагглютинации или реакции агглютинации латекса. Технический результат: способ позволяет качественно элюировать патоген с магнитной иммобилизованной матрицы для последующего исследования в серологических реакциях и сохранять функциональную активность антитела на магнитной матрице для повторного использования. 3 пр., 1 табл.

Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки губы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента // 2535076

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской диагностике, и описывает способ качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки губы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента. Способ включает забор ротовой жидкости у пациента, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100, повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител. В качестве независимых биомаркеров выбирают матриксную металлопротеиназу 8/matrix metalloproteinase 8 (ММП 8/ММР 8) и матриксную металлопротеиназу 9/matrix metalloproteinase 9 (ММП 9/ММР 9). Способ характеризуется высокой точностью и чувствительностью дифференциальной экспресс-диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки губы, упрощением подготовки пациента для забора и хранения диагностического материала, возможностью получения результата в день обращения пациента, высокой вероятностью выявления доброкачественных и злокачественных новообразований в организме пациента как на ранних, так и на более поздних стадиях заболевания. Изобретение может быть использовано в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.

Способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций // 2536243

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ. Изобретение обеспечивает повышение точности выявления этиологии острой кишечной инфекции и упрощение процедуры диагностирования. 2 табл.

Способ диагностики аллергических реакций // 2536291

Группа изобретений относится к способу обнаружения множественных цитокинов из отдельно взятых клеток и предназначено для создания набора иммунологических характеристик заболеваний. Для воплощения изобретения предусматривается наличие суспензии живых мононуклеарных клеток периферической крови индивида, нанесенной на пластичный планшет, который содержит по меньшей мере одну микролунку в матрице микролунок. При этом по меньшей мере одна микролунка в указанной матрице микролунок содержит одну клетку в объеме менее одного нанолитра. Матрицу микролунок приводят в контакт с субстратом, причем субстрат предварительно обрабатывают по меньшей мере двумя средствами для обнаружения и каждое средство для обнаружения связывается с секретированным цитокином указанной клетки. Измеряют уровень каждого указанного секретированного цитокина на указанном субстрате, при этом уровень соответствует количеству указанного секретированного цитокина указанной единичной клетки. Определяют скорость секреции каждого указанного секретированного цитокина из указанной клетки, определяя, таким образом, характеристики указанных секретированных цитокинов. Измеряют динамическое изменение указанных характеристик секретированных цитокинов. Использование группы изобретений обеспечивает создание иммунологических характеристик заболеваний. 2 н. и 39 з.п. ф-лы, 4 табл., 21 ил., 4 пр.

Способ оценки местного гуморального противохолерного иммунитета in vitro на модели экспериментальных животных // 2536707

Изобретение относится к медицине, в частности к вопросу изучения антиадгезивной активности противохолерных иммуноглобулинов и усиления ее для совершенствования специфической профилактики холеры. Для оценки местного гуморального противохолерного белых мышей иммунизируют 5×107 микробными клетками Vibrio cholerae 5879, через 10 дней выделяют общий пул противохолерных Ig из тонкокишечных промывных жидкостей. Дополнительно получают первичную культуру энтероцитов тонкой кишки от интактных мышей. Затем противохолерные Ig в двукратном разведении наносят в объеме 3 мл на монослой энтероцитов, сформированных в лунках культуральных панелей. В последние наносят живые холерные вибрионы штамма Vibrio cholerae 5879, 40 м.к. на 1 энтероцит и инкубируют в течение 3 часов. После панели трижды отмывают, фиксируют этанолом в течение 20 минут и окрашивают по Романовскому - Гимза. Оценку местного гуморального противохолерного иммунитета проводят под микроскопом по количеству вибрионов, окрашенных в темно-синий цвет и прикрепившихся к одному энтероциту. Способ позволяет оценить специфический местный гуморальный иммунитет и усилить антиадгезивную активность общего пула противохолерных иммуноглобулинов. 3 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

Способ оценки нарушения микровязкости мембран эритроцитов периферической крови беременных на третьем триместре гестации, при обострении цитомегаловирусной инфекции // 2537119

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации. Способ характеризуется тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, коэффициент эксимеризации в липидном бислое и в белок-липидном слое, оценивают микровязкость в мембранах эритроцитов и определяют активность аденозинтрифосфата в эритроцитах. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности аденозинтрифосфата до 0,40±0,008 мкмоль/мл, нарушении микровязкости в мембранах эритроцитов, снижении коэффициента эксимеризации в липидном бислое до 0,59±0,006 Fэ/Fм, а в белок-липидном слое до 0,70±0,004 Fэ/Fм оценивают угрозу устойчивости мембран эритроцитов.

Способ оценки ингибирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных // 2537180

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической гипоксии у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции. Для этого при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции в периферической крови измеряют титр антител IgG к цитомегаловирусу и активность продуктов гистохимической реакции на карбоангидразу в эритроцитах, и при титре IgG 1:1600 и показателях активности реакции на карбоангидразу до 0,015±0,002 усл.ед. в 65,0±2,2% эритроцитов, снижении оксигемоглобина до 95,0±1,5% определяют угрозу формирования гемической гипоксии. Способ позволяет оценить угрозу формирования гемической гипоксии на доклиническом уровне. 2 ил.

Способ прогнозирования дискоординации родовой деятельности // 2537241

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, предназначено для прогнозирования патологии в родах, в частности дискоординации родовой деятельности (дистоции шейки матки). Сущность способа: при доношенной беременности в начале I периода родов в сыворотке крови женщин иммуноферментным методом определяют содержание кортикотропин-рилизинг гормона, субстанции Р, нейрокининов А и В, интерлейкинов 6 и 8, релаксина и кортизола, и рассчитывают прогностическую вероятность П по формуле: П=(-0,0011229·CRH+(-0,15119·NA)+(-0,0071961·NB)+(-0,021071·IL6)+0,0032637·IL8+(-0,00085785·pF2α)+9,5773·REL+(-0,0098088·SP)+0,0058058·cort)·2,719. При уровне вероятности П больше 0,51 прогнозируют высокий риск развития дискоординации родовой деятельности и завершения родового процесса экстренным оперативным путем. Применение изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования дискоординации родовой деятельности, что позволит своевременно сформировать группу высокого риска, дифференцировать характер нарушения РД, тем самым выбрать адекватную тактику ведения пациентки. 2 пр.