Штамм вируса гриппа в/60/массачусетс/2012/10 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей

Авторы патента:

Александрова Галина Ибрагимовна (RU)

C12N7/00 - Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их (лекарственные препараты, содержащие вирусы A61K 35/76; получение лекарственных составов, содержащих вирусные антигены или антитела, например вакцин из вирусов A61K 39/00)

A61K39/145 - Orthomyxoviridae, например вирус гриппа

Владельцы патента RU 2546190:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" Северо-западного отделения РАМН (ФГБУ "НИИЭМ" СЗО РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса В/Массачусетс/2/2012 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом В/СССР/60/69 - донором аттенуации. Штамм В/60/Массачусетс/2012/10 депонирован в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России, под №2740, активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32°C, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью и безвредностью для лабораторных животных. Реассортант унаследовал гены, кодирующие поверхностные антигены вируса гемагглютинин (HA) и нейраминидазу (NA), от эпидемического родительского вируса и остальные шесть генов, кодирующих внутренние негликозилированные белки, от донора аттенуации. Представленное изобретение может быть использовано в практическом здравоохранении для профилактики заболеваемости гриппом среди взрослых и детей. 4 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в практическом здравоохранении для профилактики гриппа среди взрослых и детей с помощью живой гриппозной интраназальной вакцины из штамма вируса гриппа типа В, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus В, В/60/Массачусетс/2012/10.

В результате появления в циркуляции нового эпидемического штамма вируса гриппа, принадлежащего к антигенной линии Ямагата - В/Массачусетс/2/2012, известный вакцинный штамм В/60/Брисбен/08/83 антигенной линии Виктория - прототип [Ларионова Н.В., Руденко Л.Г., Александрова Г.И. Штамм вируса гриппа В/60/Брисбен/08/83 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей. Патент РФ №2422517 от 27.06.2011, опубл. БИ 2011, №18] - утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызвать защитную реакцию во время эпидемии, вызванной В/Массачусетс/2/2012-подобными штаммами вируса гриппа.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма для живой гриппозной вакцины актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012. Вакцина должна быть пригодна для взрослых и для детей, то есть соответствовать нормативным требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей (ФСП: Р N003224/01-270313) на Ультравак®, вакцину гриппозную аллантоисную живую для интраназального применения для взрослых и для детей.

Для его подготовки были использованы два родительских штамма вируса гриппа: эпидемический штамм вируса гриппа линии Ямагата - В/Массачусетс/2/2012 и безвредный для человека холодоадаптированный донор аттенуации В/СССР/60/69.

Применяемые в настоящее время штаммы для живых гриппозных вакцин получают методом генетической реассортации (рекомбинации) эпидемически актуальных вирусов с холодоадаптированными донорами аттенуации [Александрова Г.И. Применение метода генетической рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа. Вопр. вирусол. 1977. №4. С.387-395].

Донор аттенуации В/СССР/60/69 - холодоадаптированный (ca) и температурочувствительный (ts) штамм вируса гриппа, разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых и детей [Александрова Г.И. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1968. С.66-83]. Донор аттенуации В/СССР/60/69 был получен из эпидемического вируса гриппа В/СССР/69 методом холодовой адаптации [Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. СПб.: Наука. 1994. 151 с.], в результате чего он стал безвредным для человека, т.е. приобрел способность бессимптомно размножаться в верхних дыхательных путях привитых лиц, вызывая выработку полноценного противовирусного иммунитета.

Цель реассортации - получить штамм с вакцинной формулой генома 6:2. Гены, кодирующие поверхностные белки вируса гриппа гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), наследуются от антигенно актуального циркулирующего эпидемического (пандемического) штамма, а шесть генов, кодирующих внутренние и неструктурные белки (PB2, PB1, PA, NP, M, NS), - от безвредного для человека донора аттенуации.

Получение вакцинного штамма. Вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 получен методом генетической реассортации эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012 с донором аттенуации В/СССР/60/69 путем одновременного инфицирования развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ) смесью родительских вирусов в эквивалентных инфекционных дозах, с последующей трехкратной селекцией клонов с заданными свойствами при пониженной до 26°C температуре инкубации в присутствии антисыворотки к донору аттенуации. Клоны дополнительно очищены тремя последовательными клонированиями методом предельных разведении в присутствии антисыворотки к донору аттенуации при пониженной (26°C) и оптимальной (32°C) температурах инкубации. Чистый клон проверен по фенотипическим характеристикам (ts-, ca-фенотип) и по формуле генома на соответствие требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам.

Для анализа состава генома полученных реассортантов использовали:

а) Реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), позволяющую определить принадлежность поверхностного антигена - гемагглютинина (НА) - одному из родительских вирусов, то есть установить специфичность вакцинного штамма [Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа. МУК 3.3.2.1758-03].

б) Частичное секвенирование с использованием набора BigDye Terminator v3.1 и секвенатора 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Для анализа данных секвенирования использовался программный пакет Lasergene 7.1.

в) Микс-ПЦР анализ ДНК копий генов [Киселева И.В. с соавт. Анализ состава генома штаммов сезонной и пандемической живой гриппозной вакцины. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2011. №4. С.29-36], основанный на различиях в размерах соответствующих амплифицируемых фрагментов генов донора аттенуации или «дикого» вируса.

Для каждого фрагмента генома эпидемического штамма вируса гриппа В/Массачусетс/2/2012 и донора аттенуации В/СССР/60/69 были подобраны пары праймеров, специфичных соответственно только для донора аттенуации или только для вируса «дикого» типа (табл.1).

Таким образом, «да-нет» результаты, регистрируемые в электрофорезе ПЦР-продуктов, позволяют четко установить принадлежность исследуемого гена и оценить степень чистоты вакцинного препарата.

Амплифицированные фрагменты ДНК визуализировали электрофорезом в 1.7%-ном агарозном геле, содержащем 0.5 мкг/мл этидиума бромида. Это позволило четко дифференцировать принадлежность генов исследуемого реассортантного штамма к эпидемическому вирусу гриппа В В/Массачусетс/2/2012 или донору аттенуации В/СССР/60/69.

Антигенная характеристика вакцинного штамма. Гемагглютинин (НА) полученного авторами вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 в РТГА идентичен эпидемическому вирусу В/Массачусетс/2/2012, антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Микс-ПЦР методом установлено и подтверждено секвенированием, что вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 унаследовал нейраминидазу (NA) от эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012.

Формула генома. Формула генома 6:2 вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 подтверждена методом микс-ПЦР с помощью специфических праймеров [Киселева И.В. с соавт. Анализ состава генома штаммов сезонной и пандемической живой гриппозной вакцины. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2011. №4. С.29-36] и секвенированием, то есть вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 унаследовал шесть генов, кодирующих внутренние белки (PB2, PB1, PA, NP, M, NS), от донора аттенуации В/СССР/60/69, а гены, кодирующие поверхностные белки (НА, NA), - от эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012. Доказательством получения вакцинного штамма с заданной формулой генома служат результаты микс-ПЦР и секвенирования, приведенные в табл.2.

Секвенирование позволило четко установить принадлежность гена, кодирующего нейраминидазу исследуемого реассортантного вакцинного штамма, к эпидемическому вирусу гриппа B В/Массачусетс/2/2012.

Результаты анализа всех генов вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 представлены в табл.2.

Таблица 2
Состав генома реассортантного вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10, полученного на основе эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012 и донора аттенуации В/СССР/60/69
Ген	Принадлежность гена одному из родительских вирусов
Донор аттенуации	Эпидемический вирус	Вакцинный штамм
PB2	B60¹	Масс²	B60
PB1	B60	Масс	B60
РА	B60	Масс	B60
НА	B60	Масс	Масс
NP	B60	Масс	B60
NA	B60	Масс	Масс
M	B60	Масс	B60
NS	B60	Масс	B60
¹B60 - ген принадлежит донору аттенуации В/СССР/60/69;
²Масс - ген принадлежит эпидемическому вирусу В/Массачусетс/2/2012.

Оценку фенотипических свойств вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 проводили путем его параллельного титрования в РКЭ при разных температурах. Вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 обладает выраженным температурочувствительным и холодоадаптированным фенотипом, идентичным фенотипу донора аттенуации В/СССР/60/69. Установлено, что вакцинный вирус является температурочувствительным (ts фенотип) - его инфекционная активность при температуре 38°C составила 3.2 log₁₀ ЭИД₅₀/мл, и холодоадаптированным (ca фенотип) - инфекционная активность при пониженной до 26°C температуре инкубации составила 7.3 log₁₀ ЭИД₅₀/мл, что свидетельствует о его безвредности для человека, поскольку по этим показателям он идентичен донору аттенуации В/СССР/60/69.

Фенотипические свойства вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 не изменились после его пятикратного пассирования при использовании больших заражающих доз, что свидетельствует о генетической стабильности препарата (табл.3).

Таблица 3
Стабильность фенотипических свойств вакцинного штамма В/60/Висконсин/2010/125 до и после его пятикратного пассирования в развивающихся куриных эмбрионах
Вирус	Титр, log₁₀ ЭИД₅₀/мл	Фенотип
32°C	26°C	38°C
В/Массачусетс/2/2012 (эпидемический вирус)	8.9	3.7	<1.7	ts, non-ca
В/СССР/60/69 (донор аттенуации)	8.9	6.4	<1.7	ts, ca
В/60/Массачусетс/2012/10, до пассирования	10.2	7.3	3.2	ts, ca
В/60/Массачусетс/2012/10, 5-й пассаж в РКЭ	9.9	7.0	3.0	ts, ca

Оценку токсичности (безвредность для лабораторных животных) вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10 проводили в соответствии с Руководством по доклиническому изучению новых фармакологических веществ [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. (под общей редакцией Р.У. Хабриева). - М., 2005. - 832 с.], с Методическими рекомендациями по доклиническим испытаниям эффективности и безопасности новых иммунобиологических лекарственных препаратов [Методические рекомендации «Доклинические испытания эффективности и безопасности новых иммунобиологических лекарственных препаратов». - М., - 2010. - 39 с.] и с «Правилами лабораторной практики» [Правила лабораторной практики. Приказ Минздрава РФ №708н от 23.08.2010. http://www.rg.ru/2010/10/22/laboratornaya-praktika-dok.html].

Изучение острой токсичности препарата при однократном введении вирусного материала с использованием плацебо контроля (физиологический раствор). Морским свинкам подкожно вводили вирус в объеме 5 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости с титром 10.2 log₁₀ ЭИД₅₀/мл на животное и оценивали выживаемость лабораторных животных. Контрольным животным вводили эквивалентное количество препарата плацебо - физиологический раствор. Каждая экспериментальная группа состояла из 20 морских свинок.

В течение исследования каждое животное осматривалось ежедневно. Осмотр включал в себя оценку общего поведения и общего состояния животных. При введении препарата осмотр проводился через 2 часа после инъекции. Пальпации подлежали места инъекций (для оценки местного раздражающего действия препарата), а также зрительно выявляемые патологические образования.

В результате исследования показано, что однократное введение вакцинного штамма в объеме, максимально возможном для введения животным данного вида, не вызывало гибели экспериментальных животных, изменения внешнего вида, подвижности, поведенческих реакций, потребления пищи и воды (табл.4).

Изучение подострой токсичности вакцинного штамма при двукратном введении вирусного материала с использованием плацебо контроля (физиологический раствор).

Вакцинный препарат вводили интраназально, ежедневно в течение 2 дней, в объеме 0,4 мл на свинку, по 0,2 мл в каждый носовой ход. Контрольным животным вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. Каждая экспериментальная группа состояла из 20 морских свинок.

Ежедневно в течение всего исследования проводился контроль общего состояния каждого животного.

Данные физиологического исследования также показали, что двукратное введение вакцинного штамма не вызывало гибели экспериментальных животных и не приводило к изменению внешнего вида, поведения морских свинок, не отражалось на потреблении ими пищи и воды (табл.4).

Таблица 4
Результаты изучения безвредности вакцинного штамма В/60/Массачусетс/2012/10
Животные	Токсичность	Пол	Препарат	Путь введения	Выживаемость
Морские свинки	Острая токсичность	Самцы	Вакцинный штамм	Подкожно	10/10
		Самки	10/10
		Самцы	Плацебо		10/10
	Самки	10/10
	Острая токсичность	Самцы	Вакцинный штамм	Интраназально	10/10
		Самки	10/10
		Самцы	Плацебо		10/10
Самки	10/10

В результате проведенных доклинических исследований установлено, что заявляемый вакцинный штамм живой гриппозной вакцины В/60/Массачусетс/2012/10 характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью эпидемического вируса В/Массачусетс/2/2012, структурой генома 6:2, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, а также характерной для донора аттенуации температурочувствительностью и холодоадаптированностью и безвредностью для лабораторных животных, что коррелирует с аттенуацией для человека.

Морфология штамма полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Образец паспорта на вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 прилагается.

Таким образом, вакцинный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 по своим биологическим свойствам соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей (ФСП: Р N003224/01-270313) на Ультравак®, вакцину гриппозную аллантоисную живую для интраназального применения для взрослых и для детей.

Полученный штамм В/60/Массачусетс/2012/10 депонирован 04.07.2013 в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России (ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздрава России, Россия RU, 123098, город Москва, улица Гамалеи, 16) под №2740 и имеет характеристики, представленные в образце паспорте штамма.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА

Инфекционная активность штамма В/60/Массачусетс/2012/10 при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32°C в течение 72 часов - 10.2 log₁₀ ЭИД₅₀/мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:128.

Штамм проявляет генетическую стабильность фенотипических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Полезным свойством вакцинного штамма вируса гриппа В/60/Массачусетс/2012/10 является его пригодность для наработки живой гриппозной вакцины. Предлагаемый по изобретению вакцинный штамм вируса гриппа В/60/Массачусетс/2012/10 может быть использован для профилактики гриппа как у взрослых, так и у детей с трехлетнего возраста.

Штамм вируса гриппа В/60/Массачусетс/2012/10, депонированный в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России под №2740, используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается перевиваемой гибридной сублинии клеток A4C2/9к SUS SCROFA. Представленная сублиния клеток A4C2/9к обладает высокой чувствительностью к вирусу АЧС.

Штамм вируса гриппа а/17/индиана/11/72 (h3n2v) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей // 2545706

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Вакцинный штамм А/17/Индиана/2011/72 (H3N2v) - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса А/Индиана/10/2011 (H3N2v) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/13 4/17/57 (H2N2) - донором аттенуации.

Вакцинный штамм вируса гриппа в/60/висконсин/2010/125 // 2545695

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается вакцинного штамма вируса гриппа. Охарактеризованный штамм В/60/Висконсин/2010/125 - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса В/Висконсин/1/2010 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом В/СССР/60/69 - донором аттенуации.

Штамм gpa вируса осповакцины для исследования эффективности противовирусных препаратов in vivo и оценки схем купирования нежелательных поствакцинальных реакций при первичном оспопрививании // 2542400

Изобретение относится к вирусологии и касается штамма вируса осповакцины. Предложенный штамм выделен из гомогената тканей легких морских свинок, инфицированных 7-м пассажем вируса осповакцины.

Способ нейтрализации вируса гепатита с, полностью человеческое моноклональное антитело против вируса гепатита с (варианты), композиция полностью человеческих моноклональных антител против вируса гепатита с и гибридная мышь/человек клеточная линия - продуцент полностью человеческих моноклональных антител против вируса гепатита с (варианты) // 2539770

Изобретение относится к области биотехнологии. Раскрыты способы и технологии нейтрализации вируса гепатита С, а также антитела против вируса гепатита С.

Наборы олигонуклеотидов-праймеров и зондов, биологический микрочип и тест-система для идентификации и типирования вируса гриппа а и в с их использованием // 2538168

Представлены наборы олигонуклеотидных зондов и праймеров, биологический микрочип и тест-система для идентификации и типирования вируса гриппа А и В. Охарактеризованная тест-система содержит: набор реагентов для выделения РНК вируса гриппа из биологического материала человека; набор реагентов для проведения ПЦР-амплификации, совмещенной с обратной транскрипцией, с образованием флуоресцентно-меченных фрагментов генома вируса гриппа, содержащий описанные олигонуклеотиды-праймеры; набор реагентов для проведения гибридизации фрагментов ДНК, полученных после проведения амплификации на биочипе, содержащем элементы с иммобилизованными описанными олигонуклеотидными зондами; и при необходимости, отрицательный и положительный контрольные образцы.

Варианты гемагглютинина и нейраминидазы гриппа // 2535970

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан реассортантный вирус гриппа.

Штамм вируса гриппа а/17/виктория/2011/89 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей // 2532844

Изобретение относится к медицинской вирусологии и биотехнологии. Штамм А/17/Виктория/2011/89 (H3N2) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32°С.

Способ диагностики гриппа с // 2532843

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики гриппа С. Представленный способ включает выявление РНК вируса в мазках из носоглотки человека и животных путем проведения этапов обратной транскрипции и амплификации в одной пробирке методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени со специфичными зондом (5'-TGCTCCTGAAACCAGGACAG-3') и праймерами (5'-GAAATATTGATTGCTGAGACAGA-3', 5'-CCCTCCTGTTATTGCTGAAATTA-3').

Способ обнаружения микроорганизма вида vibrio parahaemolyticus // 2531236

Представленное изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа обнаружения микроорганизма вида Vibrio parahaemolyticus. Способ включает посев исследуемого штамма на газон культуры, нанесение капли диагностического препарата фага в центр чашки, выдерживание при температуре 37°С в течение 20-24 часов и подтверждение его принадлежности к микроорганизмам вида V.

Вакцинный штамм вируса гриппа в/60/висконсин/2010/125 // 2545695

Варианты гемагглютинина и нейраминидазы гриппа // 2535970

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан реассортантный вирус гриппа.

Способ получения высокоочищенных вирионных концентратов // 2535153

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для производства различных инактивированных вакцин против гриппа. Для этого проводят заражение куриных эмбрионов, сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости (ВАЖ), очистку ВАЖ методом микрофильтрации.

Способ диагностики гриппа с // 2532843

Поливалентная вакцина против гриппа на основе гибридного белка // 2531235

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и касается вакцины против гриппа, вызываемого известными штаммами вирусов гриппа А и В, а также возможными реассортантами.

Холодоадаптированный штамм вируса гриппа в-в/виктория/2/63/87, предназначенный в качестве штамма-донора аттенуации для получения реассортантов холодоадаптированных штаммов для живой гриппозной вакцины // 2529772

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве живой холодоадаптированной аттенуированной вакцины против гриппа. Холодоадаптированный штамм вируса гриппа В/Виктория/2/63/87 обладает уникальными мутациями в генах, кодирующих белки PB2, PB1, PA, NP, M1, NS1, и предназначен для получения холодоадаптированных реассортантных штаммов-кандидатов для получения живой гриппозной сезонной вакцины.

Рекомбинантная вакцина на основе инактивированного вирусного вектора // 2528750

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии, генной инженерии, биотехнологии и ветеринарии. Предложена рекомбинантная вакцина, содержащая рекомбинантный вирус и фармацевтически приемлемые носитель, адъювант или эксципиент, где рекомбинантный вирус является инактивированным и содержится в вакцине в виде вирусного вектора, имеющего введенную экзогенную нуклеотидную последовательность, которая кодирует антиген заболевания, где инактивацию вируса проводят физическими или химическими методами, и вакцина является эффективной против, по меньшей мере, указанного заболевания, связанного с указанным антигеном.

Рекомбинантная псевдоаденовирусная частица на основе генома аденовируса человека 5 серотипа, продуцирующая гемагглютинин вируса гриппа штамма a/brisbane/59/2007(h1n1) и способ ее использования // 2523599

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантных векторов, используемых для производства противогриппозных вакцин. Охарактеризованы рекомбинантная псевдоаденовирусная частица на основе генома аденовируса человека 5 серотипа и способ ее использования.

Способ профилактики гриппа путем сочетанного применения интерферона гамма и инактивированной противогриппозной вакцины // 2546540

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для профилактики гриппа. Для этого совместно однократно вводят цитокин, в качестве которого используют интерферон гамма, и инактивированную противогриппозную вакцину. Интерферон гамма вводят внутримышечно или подкожно в дозе 0,5 мл 100000 МЕ±10% в верхнюю треть плеча одной руки, а затем внутримышечно в верхнюю треть плеча другой руки вводится 0,5 мл инактивированной противогриппозной вакцины на основе вакцинных штаммов вируса гриппа (H5N1) «Орнифлю» с содержанием минимальной дозы гемагглютинина для этой вакцины 15 мкг/доза. Способ позволяет повысить иммуногенность и протективную активность вакцины при однократной вакцинации и снижении побочных эффектов за счет модуляции иммунного ответа на антиген. 9 табл., 1 пр.