Нейротропное средство, обладающее противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью
Владельцы патента RU 2547728:
Яснецов Виктор Владимирович (RU)
Скачилова София Яковлевна (RU)
Шилова Елена Владимировна (RU)
Яснецов Владимир Викторович (RU)
Мотин Владимир Георгиевич (RU)
Изобретение относится к 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноату, который может быть использован в качестве нейротропного средства с противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью. 8 табл., 7 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к созданию нейротропного средства, обладающего противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью, в частности, для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе ишемического инсульта, и других заболеваний головного мозга, сопровождающихся снижением когнитивных функций и нейродегенерацией, в том числе при старении.
Актуальная проблема современной медицины - поиск и разработка новых нейротропных средств, способных эффективно защищать мозг. Это определяется как высокой летальностью при ишемическом инсульте, так и тем, что применяемые при нем лекарственные препараты разных фармакологических групп обычно не являются средствами патогенетической терапии, малоэффективны и имеют серьезные побочные эффекты [6, 7, 14].
Ближайший аналог заявляемого средства (как по химическому строению, так и по фармакологическим свойствам) - отечественный лекарственный препарат мексидол (этилметилгидроксипиридина сукцинат: 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат), который является производным 3-гидроксипиридина и обладает нейротропной, нейропротекторной и антиоксидантной активностью, из-за чего его широко используют в неврологии при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваниях, в том числе при инсульте и его последствиях [2-6, 14, 15]. Однако в клинике препарат не всегда эффективен - положительный эффект наблюдался лишь у 63% больных, преобладая у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией атеросклеротического генеза [12]. Более того, мексидол имеет недостаточную противогипоксическую и ноотропную активность.
В связи с этим необходимо изыскание в ряду производных 3-гидроксипиридина новых веществ, имеющих широкий спектр фармакологического действия и способных более эффективно, чем мексидол, действовать, в частности, на моделях инсульта, острой гипоксии и амнезии в эксперименте.
Поэтому задачей настоящего изобретения является создание нового нейротропного средства, обладающего противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью.
Поставленная цель достигается применением в качестве нового нейротропного средства 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) в эффективных количествах, имеющего выраженное нейропротекторное действие в сочетании с противогипоксической, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью.
Изобретение иллюстрируется следующими ниже примерами. При этом примеры 3-7 иллюстрируют эффективность ГАА в качестве противогипоксического, нейропротекторного, антиамнестического и вестибулопротекторного средства, а также его способность влиять на синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамидные нейроны поля СА1 гиппокампа крыс в сравнении с ближайшим аналогом, мексидолом.
Синтез нового соединения осуществляли путем взаимодействия эквимолярных количеств 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и N-ацетил-аминоэтановой кислоты. N-ацетил-аминоэтановую кислоту получали известными методами путем взаимодействия аминоэтановой кислоты с ацетилхлоридом или ангидридом уксусной кислоты.
Пример 1. В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и холодильником, загружают 15 мл воды, затем при перемешивании постепенно добавляют 1,17 г (0,01 М) N-ацетил-аминоэтановой кислоты и 1,37 г (0,01 М) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина. Реакционную массу нагревают до 75-85°C и выдерживают при этой температуре в течение 30 минут. Раствор фильтруют, затем отгоняют воду, после охлаждения к остатку приливают 15-20 мл ацетона, перемешивают при температуре 35-40°C и кристаллизуют. Получают 2,27 г белого кристаллического порошка с Тпл 99-103°C, растворим в воде.
Найдено, %: C 56,61; H 7,18; N 11,01 C12H18N2O4
Вычислено, %: C 56,69; H 7,10; N 11,06
ИК-спектр (v, см-1): 3270 (NH); 2560 (N+); 1610 (C=C аром); 1565 (NHCO).
Пример 2. Аналогично примеру 1 загружают 20 мл изопропилового спирта, реакционную массу выдерживают в течение 40 минут. Полученный раствор фильтруют и кристаллизуют при 10-15°C. Получают 2,19 г белого кристаллического порошка с Тпл 100-102°C, растворим в воде.
Найдено, %: C 56,67; H 7,17; N 11,02 C12H18N2O4
Вычислено, %: C 56,69; H 7,10; N 11,06
ИК-спектр (v, см-1): 3270 (NH); 2560 (N+); 1610 (C=C аром); 1565 (NHCO).
При выполнении экспериментальной части работы (опыты на животных - примеры 3-7) в соответствии с Российскими национальными правилами исследований (Приказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 23 августа 2010 г. №708н «Об утверждении Правил лабораторной практики» и др.) и международными требованиями в основном были использованы модели и методы, рекомендованные для проведения подобных исследований, утвержденные Министерством здравоохранения РФ и соответствующие рекомендациям ВОЗ, касающимся правил надлежащей лабораторной практики (GLP - "Good Laboratory Practice") [11]. Животных получали из Центрального питомника лабораторных животных РАМП («Столбовая», Московская область). Содержание животных соответствовало правилам GLP и осуществлялось в соответствии с нормативным документом «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию вивариев», утвержденным Главным государственным санитарным врачом 06.04.1973 г. №1045-73, и приказом МЗ СР РФ №708н от 23.08.2010 г.
Пример 3. Противогипоксическое действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) на разных моделях острой гипоксии у мышей (табл.1-3)
Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-25 г по методикам, описанным в «Методических рекомендациях по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств» [8] и «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [11].
Острую нормобарическую гипоксическую гипоксию с гиперкапнией воспроизводили путем помещения мышей (поодиночке) в гермокамеру. Острую гемическую гипоксию воспроизводили путем подкожного (п/к) введения мышам метгемоглобинообразователя натрия нитрита в дозе 300 мг/кг. Острую гистотоксическую гипоксию моделировали путем п/к введения мышам натрия нитропруссида в дозе 20 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни животных. Исследуемое вещество и препарат сравнения мексидол вводили однократно внутрибрюшинно (в/б) за 60 минут до опыта. Животным контрольных групп вводили в/б изотонический раствор натрия хлорида (NaCl) в том же объеме.
На модели острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) ГАА в дозах 25, 50 и 100 мг/кг значимо увеличивал продолжительность жизни животных на 13% (p<0,02), 27% и 37% (p<0,01) соответственно (табл.1).
Препарат сравнения мексидол в дозах 25 и 50 мг/кг достоверно не влиял, а в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,01) увеличивал данный показатель на 29%.
По выраженности противогипоксического действия ГАА в дозах 25 и 50 мг/кг превосходил мексидол в аналогичных дозах в 1,1 и 1,2 раза (p<0,05) соответственно. Необходимо отметить, что ГАА в дозе 50 мг/кг действовал примерно так же, как мексидол в дозе 100 мг/кг.
На модели острой гемической гипоксии ГАА в дозах 25 и 50 мг/кг существенно не влиял на продолжительность жизни мышей, а в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,02) увеличивал ее на 29% (табл.2).
Препарат сравнения мексидол в дозах 25, 50 и 100 мг/кг достоверно не влиял на продолжительность жизни животных при острой гемической гипоксии.
По выраженности противогипоксического действия ГАА в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,05) превосходили мексидол в аналогичной дозе в 1,2 раза.
На модели острой гистотоксической гипоксии ГАА в дозах 25 и 50 мг/кг существенно не влиял на продолжительность жизни мышей, а в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,02) увеличивал ее на 20% (табл.3).
Препарат сравнения мексидол в дозах 25, 50 и 100 мг/кг достоверно не влиял на продолжительность жизни животных при острой гистотоксической гипоксии.
По выраженности противогипоксического действия ГАА в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,05) превосходил мексидол в аналогичной дозе в 1,2 раза.
Итак, ГАА обладает противогипоксическими свойствами на всех изученных моделях острой гипоксии. При этом по выраженности противогипоксического действия данное соединение превосходит препарат сравнения мексидол.
Пример 4. Нейропротекторное действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) (табл.4)
Исследовали нейропротекторное действие ГАА и препарата сравнения мексидола у белых нелинейных крыс-самцов (массой 220-270 г) с экспериментальной ишемией головного мозга (модель ишемического инсульта). В качестве препарата сравнения был выбран мексидол, широко используемый сегодня в неврологии при лечении ишемического инсульта [2-6, 13]. Ишемию головного мозга у крыс воспроизводили путем одномоментной перевязки (под общей анестезией диэтиловым эфиром) обеих общих сонных артерий. У ложнооперированных животных (контрольная группа №1) операция была ограничена этапом доступа к общим сонным артериям. В контрольной группе №2 крысы получали только изотонический раствор NaCl. В подопытных группах животным вводили в/б ГАА и мексидол 1 раз в сутки (сут) в течение 7 сут; в первые сутки - через 1 час (ч) после операции. Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли (слепым методом) по шкале McGraw et al. [22] (в баллах) каждый час в течение 24 ч, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов. У ложнооперированных животных неврологический дефицит отсутствовал.
Результаты исследования нейропротекторного действия веществ представлены в табл.4. Из нее видно, что у крыс контрольной группы №2 неврологический дефицит был наиболее выражен (8,9±0,1 балла) через 2 и 3 сут после двусторонней перевязки общих сонных артерий; при этом в контроле погибло 42% (13 крыс из 31) животных.
ГАА в дозе 100 мг/кг/сут значимо (p<0,05) уменьшал летальность крыс до 3%, а также неврологический дефицит в 1,8-1,9 раза в разные сроки наблюдения.
Препарат сравнения мексидол в дозе 100 мг/кг/сут значимо (p<0,05) уменьшал летальность крыс до 18%. Сходные достоверные изменения происходили под влиянием мексидола и с неврологическим дефицитом - он уменьшался в 1,6-1,7 раза (p<0,05).
ГАА значимо (p<0,05) превосходил мексидол как по влиянию на летальность (на 15%), так и по влиянию на выраженность неврологического дефицита на протяжении всего срока наблюдения (в 1,1-1,2 раза).
Таким образом, ГАА обладает выраженными нейропротекторными свойствами на модели ишемического инсульта у крыс, причем по влиянию на летальность и выраженность неврологического дефицита на протяжении всего срока наблюдения ГАА значимо превосходил мексидол.
Пример 5. Антиамнестическое действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) на различных моделях амнезии у мышей (табл.5-7)
Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г. Влияние ГАА и препарата сравнения мексидола на процессы обучения и памяти у животных исследовали, используя условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) электрокожного раздражения [1]. Выработку УРПИ у мышей производили на основе электрокожного подкрепления по методу Cumin et al. (1982) [19] с учетом рекомендаций Mondadori et al. (1990) [23]. Мышей подвергали воздействию электросудорожного шока (ЭСШ) (50 Гц, 50 мА, 0,3 с, транспиннеально) сразу после обучения УРПИ [11]. У животных контрольной группы вызывали псевдоЭСШ. Для воспроизведения модели скополаминовой амнезии м-холиноблокатор вводили мышам в/б в дозе 1 мг/кг сразу после обучения УРПИ [11]. Острую нормобарическую гипоксическую гипоксию с гиперкапнией воспроизводили путем помещения мышей (поодиночке) в гермокамеру. Исследуемое соединение и препарат сравнения мексидол вводили однократно в/б за 60 минут до обучения мышей. Животные контрольных групп получали (в/б) в том же объеме изотонический раствор NaCl. Сохранность УРПИ проверяли через 24 часа после амнезирующего воздействия.
На модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком, было обнаружено, что у мышей ГАА в дозах 25 и 50 мг/кг значимо (p<0,001) уменьшал выраженность амнезии УРПИ в 2,6 и 2,9 раза соответственно, а в 100 мг/кг полностью предупреждал ее развитие (табл.5).
Препарат сравнения мексидол в дозе 25 мг/кг существенно не влиял на выраженность амнезии УРПИ, в дозе 50 мг/кг - значимо (p<0,01) ее уменьшал в 2,3 раза, а в дозе 100 мг/кг - почти полностью предупреждал ее развитие.
По выраженности антиамнестического действия ГАА в дозе 25 мг/кг значимо (p<0,05) превосходит мексидол в аналогичной дозе в 2 раза.
На модели скополаминовой амнезии было обнаружено, что у мышей ГАА в дозах 25 и 50 мг/кг значимо (p<0,01) уменьшал выраженность амнезии УРПИ в 2,8 и 3,4 раза соответственно, а в 100 мг/кг полностью предупреждал ее развитие (табл.6).
Препарат сравнения мексидол в дозе 25 мг/кг существенно не влиял на выраженность амнезии УРПИ, в дозе 50 мг/кг - значимо (p<0,05) ее уменьшал в 2,2 раза, а в дозе 100 мг/кг - полностью предупреждал ее развитие.
На модели амнезии, вызванной острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией (в гермокамере), было обнаружено, что у мышей ГАА в дозе 25 мг/кг значимо (p<0,01) уменьшал выраженность амнезии УРПИ в 3 раза, а в дозах 50 и 100 мг/кг - полностью предупреждал ее развитие (табл.7).
Препарат сравнения мексидол в дозе 25 мг/кг существенно не влиял на выраженность амнезии УРПИ, в дозе 50 мг/кг - значимо (p<0,05) ее уменьшал в 2,7 раза, а в дозе 100 мг/кг - почти полностью предупреждал ее развитие.
По выраженности антиамнестического действия ГАА в дозе 25 мг/кг значимо (p<0,05) превосходит мексидол в аналогичной дозе в 2,8 раза.
Итак, ГАА обладает выраженными антиамнестическими свойствами на различных моделях амнезии у мышей (вызванной ЭСШ, скополомином и острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией), при этом в отличие от мексидола он эффективен на всех использованных моделях амнезии уже в дозе 25 мг/кг.
Пример 6. Вестибулопротекторное действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) (табл.8)
Исследования выполнены на белых нелинейных крысах-самцах массой 190-210 г.
Моделирование болезни движения (БД) у крыс производили в течение 90 минут на модифицированной установке НАСА США [18], позволяющей вращать животных в двух перпендикулярных плоскостях с частотой 0,33 Гц. Выраженность БД у крыс оценивали по количеству потребляемой ими пищи за 2 ч после вращения [17].
Кроме мексидола, в качестве препарата сравнения также использовали блокатор гистаминовых H1-рецепторов прометазин (дипразин, Россия; также блокирует α-адрено-, м-холино- и дофаминовые рецепторы). Это обусловлено тем, что в настоящее время его широко используют в авиакосмической и морской медицине [16, 20, 21].
ГАА в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,001) повышал потребление пищи по отношению к контролю в 2 раза (табл.8).
Препараты сравнения прометазин (50 мг/кг) и мексидол (100 мг/кг) также значимо (p<0,001) повышали потребление пищи по отношению к контролю в 1,6 и 1,8 раза соответственно.
По выраженности вестибулопротекторного действия ГАА значимо (p<0,05) превосходил прометазин и мексидол в 1,2 и 1,1 раза соответственно.
Таким образом, ГАА обладает выраженными вестибулопротекторными свойствами, превосходя при этом препараты сравнения прометазин и мексидол.
Пример 7. Электрофизиологическое исследование действия 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) на переживающих срезах гиппокампа крыс
В настоящее время в качестве объекта нейрофармакологических исследований in vitro для расшифровки механизма действия веществ, влияющих на центральную нервную систему, часто используют переживающие поперечные срезы гиппокампа [центральная структура лимбической системы, участвующая в процессах памяти и обучения и др.], сохраняющие нормально функционирующие внутренние системы связей, на которые в эксперименте можно локально воздействовать различным образом [9, 10, 24].
Для расшифровки действия ГАА в сравнении с мексидолом проводили электрофизиологические исследования на переживающих поперечных срезах гиппокампа 23 белых нелинейных крыс-самцов массой 180-200 г [9]. Суммарную электрическую активность регистрировали в пирамидном слое поля СА1 с помощью одноканальных стеклянных микроэлектродов, заполненных 0,15 М раствором NaCl. Орто- и антидромную электрическую стимуляцию осуществляли посредством платиновых биполярных электродов (прямоугольные импульсы длительностью 0,1 мс, амплитудой 3-8 В, одиночные или парные), которые помещали в области колатералей Шаффера и альвеуса соответственно. Регистрировали одиночные или парные орто- и антидромные популяционные ответы.
ГАА в концентрации 5 мМ (n=11) подавлял ортодромные популяционные ответы на 98±3% (p<0,001), несколько превосходя (в 1,1 раза, p<0,05) в этом отношении мексидол в концентрации 5 мМ (90±2%, n=11, p<0,001). После отмывания ГАА (до 1 ч) популяционные ответы полностью восстанавливались. На фоне действия специфического неконкурентного антагониста NMDA-рецепторного комплекса МК-801 (n=9) депрессирующий эффект соединения практически полностью ослаблялся на 94±3% (p<0,001), а мексидола (n=8) - на 75±4% (p<0,01). Значит, МК-801 более выражено (в 1,3 раза, p<0,05) ослабляет угнетающее действие ГАА, чем мексидола. Следовательно, ГАА угнетает синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамиды поля СА1 гиппокампа крыс, а МК-801 практически полностью ослабляет это депрессирующее действие.
Таким образом, ГАА угнетает ортодромные популяционные ответы в области СА1 гиппокампа крыс, несколько превосходя в этом отношении мексидол, причем в этот эффект ГАА вовлечен NMDA-рецепторный комплекс.
Значит, ГАА, как и мексидол, способен влиять на синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамидные нейроны поля СА1 гиппокампа крыс.
На основании данных, представленных выше в примерах 4 и 7, свидетельствующих о наличии у ГАА нейропротекторной активности и способности влиять на синаптическую передачу, можно отнести ГАА к нейротропным средствам.
Итак, ГАА обладает противогипоксическими свойствами на всех изученных моделях острой гипоксии (острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией, гемической и гистотоксической). При этом по выраженности противогипоксического действия данное соединение превосходит препарат сравнения мексидол.
ГАА также обладает выраженными нейропротекторными свойствами на модели ишемического инсульта у крыс, причем по влиянию на летальность и выраженность неврологического дефицита на протяжении всего срока наблюдения ГАА значимо превосходит мексидол.
На различных моделях амнезии у мышей (вызванной ЭСШ, скополомином и острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией) ГАА обладает выраженными антиамнестическими свойствами, при этом в отличие от мексидола он эффективен на всех использованных моделях амнезии уже в дозе 25 мг/кг.
Кроме того, ГАА обладает выраженными вестибулопротекторными свойствами, превосходя при этом препараты сравнения прометазин и мексидол.
На переживающих срезах гиппокампа крыс ГАА, как и мексидол, способен влиять на синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамидные нейроны поля СА1. При этом ГАА оказывает более выраженное действие, чем мексидол. Показано, что в этот эффект ГАА вовлечен NMDA-рецепторный комплекс.
Таким образом, на различных экспериментальных моделях ГАА превосходит ближайший аналог заявляемого средства мексидол.
Литература
1. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ. / Под. ред. Батуева А.С. - М., Высш. шк., 1991. - 399 с.
2. Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М., 2004. - 21 с.
3. Воронина Т.А. Мексидол: спектр фармакологических эффектов // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2012. - №12. - С.86-90.
4. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001. - 328 с.
5. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Механизмы повреждающего действия острой церебральной ишемии и нейропротективная терапия // Проблемы гипоксии: молекулярные, физиологические и медицинские аспекты / Ред. Л.Д. Лукьянова, И.Б. Ушаков. - М.; Воронеж: Изд-во «Истоки», 2004. - С.420-438.
6. Инсульт: диагностика, лечение, профилактика / Под редакцией З.И. Суслиной, М.А. Пирадова - М. «МЕДпресс-информ», 2008. - 288 с.
7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: «Новая Волна», 2012. - 1216 с.
8. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств / Под редакцией Л.Д. Лукьяновой. - М., 1990. - 18 с.
9. Мотин В.Г., Яснецов В.В., Ковалев С.М., Крылова И.Н. Влияние ноотропов на электрическую активность в поле СА1 гиппокампа крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2000. - Т.130, №9. - С.252-254.
10. Петров В.И., Пиотровский Л.Б., Григорьев И.А. Возбуждающие аминокислоты (нейрохимия, фармакология и терапевтический потенциал ВАКергических средств). - Волгоград, 1997. - 167 с.
11. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.
12. Суслина З.А., Смирнова И.Н., Танашян М.М. и др. Клиническая эффективность мексидола и влияние его на реологические свойства крови и гемоперфузию головного мозга при хронических формах цереброваскулярных заболеваний. - М., 2002. - 19 с.
13. Суслина З.А., Танашян М.М., Домашенко М.А. Антитромботическая терапия ишемических нарушений мозгового кровообращения с позиций доказательной медицины. 2-е изд. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. - 224 с.
14. Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система). Выпуск XIV / Под редакцией А.Г. Чучалина, В.В. Яснецова. - М.: «Эхо», 2013. - 996 с.
15. Федин А.И., Румянцева С.А., Миронова О.П., Евсеев В.П. Применение антиоксиданта мексидола у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения. Методические рекомендации. - М., 2002. - 16 с.
16. Шашков B.C., Яснецов В.В., Шашков А.В. и др. Фармакологическая профилактика вестибуло-вегетативного синдрома (болезнь движения) в модельных исследованиях // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 2000. - Т.34, №4. - С.9-13.
17. Яснецов В.В., Киселева Н.М. О вестибулопротекторной активности специфического антагониста N-метил-D-аспартата (NMDA) // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 1994. - Т.28, №5. - С.66-67.
18. Crampton G.H., Lucot J.B. A stimulator for laboratory studies of motion sickness in cats // Aviat. Space Environ. Med. - 1985. - Vol.56, №5. - P.462-465.
19. Cumin R., Bandle E.F., Gamzu E., Haefely W.E. Effect of the novel compound antiracetam (Ro 13-5057) upon impared learning and memory in rodents // Psychopharmacol. - 1982. - Vol.78. - P.104-111.
20. Estrada A., LeDuc P.A., Curry I.P. et al. Airsickness prevention in helicopter passengers // Aviat. Space Environ. Med. - 2007. - Vol.78, №4. - P.408-413.
21. Haware R.V., Chaudhari P.D., Parakh S.R., Bauer-Brandl A. Development of a melting tablet containing promethazine HCl against motion sickness // AAPS PharmSciTech. - 2008. - Vol.9, №3. - P.1006-1015.
22. McGraw C.P., Pashayan A.G., Wendel O.T. Cerebral infarction in the Mongolian gerbil exacerbated by phenoxybenzaminetreatment // Stroke. - 1976 - Vol.7, №5. - P.485-488.
23. Mondadori С., Bhatnagar A., Borkovski J., Häusler A. Involvement of a steroidal component in the mechanism of action of piracetam-like nootropics // Brain Res. - 1990. - Vol.506 - P.101-108.
24. Sobrado М., Roda J.M., Lopez M.G. et al. Galantamine and memantine produce different degrees of neuroprotection in rat hippocampal slices subjected to oxygen-glucose deprivation // Neurosci Lett. - 2004. - Vol.365, №2. - P.132-136.
| Таблица 1 | ||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на продолжительность жизни мышей в гермокамере (М±m) | ||
| Вещество (доза, мг/кг) | Число мышей | Продолжительность жизни, минуты |
| Изотонический раствор NaCl (контроль) | 14 | 24,6±0,8 |
| ГАА (25) | 14 | 27,9±1,0**# |
| ГАА (50) | 14 | 31,3±2,1***# |
| ГАА (100) | 14 | 33,8±3,1*** |
| Мексидол (25) | 12 | 25,1±0,8 |
| Мексидол (50) | 12 | 26,2±0,9 |
| Мексидол (100) | 16 | 31,7±2,0*** |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем: ** - p<0,02, *** - p<0,01; | ||
| # - p<0,05 - значимость различий ГАА с мексидолом в аналогичных дозах (критерий Стьюдента) |
| Таблица 2 | ||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на продолжительность жизни мышей при острой гемической гипоксии (М±m) | ||
| Вещество (доза, мг/кг) | Число мышей | Продолжительность жизни, минуты |
| Изотонический раствор NaCl (контроль) | 14 | 20,3±1,1 |
| ГАА (25) | 14 | 23,2±1,6 |
| ГАА (50) | 14 | 24,1±1,8 |
| ГАА (100) | 14 | 26,2±1,9**α |
| Мексидол (25) | 12 | 20,8±1,0 |
| Мексидол (50) | 12 | 21,2±1,1 |
| Мексидол (100) | 12 | 21,9±1,2 |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем: ** - p<0,02 (критерий Стьюдента); | ||
| α - p<0,05 - значимость различий ГАА в дозе 100 мг/кг с мексидолом в аналогичной дозе (критерий Уилкоксона-Манна-Уитни) |
| Таблица 3 | ||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на продолжительность жизни мышей при острой гистотоксической гипоксии (М±m) | ||
| Вещество (доза, мг/кг) | Число мышей | Продолжительность жизни, минуты |
| Изотонический раствор NaCl (контроль) | 12 | 16,5±0,7 |
| ГАА (25) | 12 | 18,6±0,9 |
| ГАА (50) | 12 | 19,3±1,2 |
| ГАА (100) | 12 | 19,8±1,1**α |
| Мексидол (25) | 12 | 16,3±0,7 |
| Мексидол (50) | 12 | 16,9±0,7 |
| Мексидол (100) | 12 | 17,1±0,8 |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем: ** - p<0,02 (критерий Стьюдента); | ||
| α - p<0,05 - значимость различий ГАА в дозе 100 мг/кг с мексидолом в аналогичной дозе (критерий Уилкоксона-Манна-Уитни) |
| Таблица 4 | ||||||||||
| Изменение неврологического дефицита (в баллах, М±m) у крыс после двусторонней перевязки общих сонных артерий под влиянием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола | ||||||||||
| Вещество (доза, мг/кг/сут) | Срок после операции (часы/ч/, сутки/сут/ | |||||||||
| 12 ч | 24 ч | 2 сут | 3 сут | 4 сут | 5 сут | 6 сут | 7 сут | 10 сут | 14 сут | |
| Изотонический раствор NaCl (контроль) /n=18, погибло 13 из 31/ | 8,5±0,1 | 8,8±0,1 | 8,9±0,1 | 8,9±0,1 | 8,8±0,1 | 8,8±0,1 | 8,7±0,1 | 8,7±0,1 | 8,6±0,1 | 8,5±0,1 |
| ГАА (100) /n=32, погибла 1 из 33/ | 4,6±0,1*§ | 4,9±0,1*§ | 5,0±0,1*§ | 4,9±0,1*§ | 4,8±0,1*§ | 4,7±0,1*§ | 4,6±0,1*§ | 4,5±0,1*§ | 4,5±0,1*§ | 4,4±0,1*§ |
| Мексидол (100) /n=27, погибло 6 из 33/ | 4,9±0,1* | 5,3±0,1* | 5,4±0,1* | 5,4±0,1* | 5,3±0,1* | 5,3±0,1* | 5,2±0,1* | 5,2±0,1* | 5,1±0,1* | 5,0±0,1* |
| Примечание. * - p<0,05 - значимость различий по сравнению с контролем; | ||||||||||
| § - p<0,05 - значимость различий ГАА по сравнению с мексидолом (критерий Стьюдента) |
| Таблица 5 | |||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на амнезию у мышей, вызванную электросудорожным шоком (ЭСШ) | |||
| Условия опытов и вещество (доза, мг/кг) | Общее число мышей | Количество мышей, обучившихся УРПИ (%) | Количество мышей с амнезией УРПИ через 24 ч после ЭСШ (%) |
| Изотонический раствор NaCl + псевдоЭСШ (контроль 1) | 36 | 33 (92) | 6 (18) |
| Изотонический раствор NaCl + ЭСШ (контроль 2) | 33 | 30 (91) | 25 (83)ooo |
| ГАА (25) + ЭСШ | 20 | 19 (95) | 6 (32)***# |
| ГАА (50) + ЭСШ | 15 | 14 (93) | 4 (29)*** |
| ГАА (100) + ЭСШ | 20 | 19 (95) | 3 (16)*** |
| Мексидол (25) + ЭСШ | 31 | 28 (90) | 18 (64)ooo |
| Мексидол (50) + ЭСШ | 12 | 11 (92) | 4 (36)** |
| Мексидол (100) + ЭСШ | 21 | 20 (95) | 4 (20)*** |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): oo или ** - p<0,01, ooo или *** - p<0,001; # - p<0,05 - значимость различий ГАА в дозе 25 мг/кг с мексидолом в аналогичной дозе |
| Таблица 6 | |||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на амнезию у мышей, вызванную скополамином | |||
| Условия опытов и вещество (доза, мг/кг) | Общее число мышей | Количество мышей, обучившихся УРПИ (%) | Количество мышей с амнезией УРПИ через 24 ч после введения скополамина (%) |
| Изотонический раствор NaCl + изотонический раствор NaCl (контроль 1) | 32 | 29 (91) | 5 (17) |
| Изотонический раствор NaCl + скополамин (контроль 2) | 40 | 36 (90) | 26 (72)ooo |
| ГАА (25) + скополамин | 20 | 19 (95) | 5 (26)** |
| ГАА (50) + скополамин | 15 | 14 (93) | 3 (21)** |
| ГАА (100) + скополамин | 15 | 14 (93) | 2 (14)*** |
| Мексидол (25) + скополамин | 13 | 12 (92) | 7 (58)o |
| Мексидол (50) + скополамин | 13 | 12 (92) | 4 (33)* |
| Мексидол (100) + скополамин | 21 | 19(90) | 3 (16)*** |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): o или * - p<0,05, oo или ** - p<0,01, ooo или *** - p<0,001 |
| Таблица 7 | |||
| Влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препарата сравнения мексидола на амнезию у мышей, вызванную острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией | |||
| Условия опытов и вещество (доза, мг/кг) | Общее число мышей | Количество мышей, обучившихся УРПИ (%) | Количество мышей с амнезией УРПИ через 24 ч после амнезирующего воздействия (%) |
| Изотонический раствор NaCl + ложная гипоксия (контроль 1) | 37 | 34 (92) | 6 (18) |
| Изотонический раствор NaCl + гипоксия (контроль 2) | 35 | 32 (91) | 20 (63)ooo |
| ГАА (25) + гипоксия | 20 | 19 (95) | 4(21)**# |
| ГАА (50) + гипоксия | 14 | 13 (93) | 2 (15)** |
| ГАА (100) + гипоксия | 15 | 14 (93) | 2 (14)** |
| Мексидол (25) + гипоксия | 21 | 19 (90) | 11 (58)oo |
| Мексидол (50) + гипоксия | 14 | 13 (93) | 3 (23)* |
| Мексидол (100) + гипоксия | 17 | 16 (94) | 3(19)** |
| Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): o или * - p<0,05, oo или ** - p<0,01, ooo или *** - p<0,001; # - p<0,05 - значимость различий ГАА в дозе 25 мг/кг с мексидолом в аналогичной дозе |
| Таблица 8 | ||
| Вестибулопротекторное действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата (ГАА) и препаратов сравнения (прометазин и мексидол), которое оценивали по потреблению пищи крысами (М±m) | ||
| Вещество (доза, мг/кг) | Число крыс | Потребление пищи (в % по отношению к фону) после вращения |
| Изотонический раствор NaCl (контроль) | 14 | 48±3 |
| ГАА (100) | 12 | 96±4***#α |
| Препараты сравнения | ||
| Прометазин (50) | 10 | 78±4*** |
| Мексидол(100) | 12 | 87±3*** |
| Примечание. Потребление пищи до вращения (фон) принято за 100%; различия статистически значимы по сравнению с контролем: *** - p<0,001; # - p<0,05 - значимость изменений по сравнению с группой животных, получавших прометазин (критерий Стьюдента); | ||
| α - p<0,05 - значимость изменений по сравнению с группой животных, получавших мексидол (критерий Уилкоксона-Манна-Уитни) |
Применение химического соединения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-аминоэтаноата в качестве нейротропного средства с противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической и вестибулопротекторной активностью.
