Способ получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени. Способ получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени, заключающийся в том, что печень неонатального поросенка гомогенизируют с водой, гомогенат центрифугируют для осаждения ядер, супернатант прогревают, вновь центрифугируют, к охлажденному супернатанту добавляют охлажденный этанол и через 15-17 ч вновь центрифугируют, из супернатанта удаляют спирт, полученный целевой продукт замораживают и хранят до использования, при определенных условиях. Вышеуказанный способ позволяет получить вещество, стимулирующее регенерацию поврежденной печени. 1 табл., 2 пр.

 

Настоящее изобретение относится к способам получения биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине для инициирования и усиления регенерации печени при тяжелых ее поражениях.

Актуальность данной работы определяется рядом факторов, в том числе увеличением смертности от гепатитов B, C - ежегодно от гепатитов умирают >1 млн человек, через 10 лет заболеваемость гепатитами увеличится в 2 раза, в России эпидемиологический порог заражения людей гепатитами B и C превышен в 5 раз [1].

Известны различные подходы к стимуляции регенерации печени при ее повреждениях или массивных резекциях. Предприняты попытки стимулировать регенерацию посредством введения аминокислот, тканевых гидролизатов, витаминов, гормонов, факторов роста [2], например, таких как фактор роста гепатоцитов (HGF), эпидермальный фактор роста (EGF), сосудисто-эндотелиальный фактор роста (VEGF), стимулирующее вещество из печени (hepatic stimulator substance, HSS) [3, 4].

Задачей изобретения является способ получения вещества, стимулирующего регенерацию печени (ВСРП).

Поставленная задача решается способом получения ВСРП, заключающимся в том, что свежевыделенную печень неонатального поросенка гомогенизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:3-5 при +3-5°C, гомогенат центрифугируют для осаждения ядер. Полученный постъядерный супернатант прогревают на водяной бане в течение 7-10 мин при температуре от 20° до 38°C, доводят до 100°C и прогревают 15-20 мин - при 100°C. Образовавшийся осадок термолабильного материала удаляют центрифугированием (5000 об/мин, 15 мин). К супернатанту, охлажденному до +4-6°C, добавляют охлажденный до -18 - -20°C этанол до концентрации 65-70% и оставляют при этой температуре на 15-17 ч при той же температуре, центрифугируют в том же режиме, который указан выше. Затем спирт удаляют на роторном испарителе. Полученный целевой продукт замораживают и хранят при -65 - 70°C до использования.

Отличительными признаками предлагаемого способа являются: гомогенизация ткани печени неонатального поросенка в дистиллированной воде, центрифугирование гомогената ткани печени, прогревание супернатанта при температуре от 20° до 38°C 7-10 мин, доведение температуры до 100° и выдерживание в течение 15-20 мин при этой температуре, центрифугирование после прогревания, обработка этанолом до концентрации 65-70%, выдерживание с этанолом 15-17 ч при - 15-20°C, центрифугирование при +4°C, 5000 об/мин, 15 мин, удаление спирта на роторном испарителе, замораживание при -65 - 70°C.

Испытания заявляемого ВСРП на регенеративную активность были проведены in vivo на модели токсического повреждения печени мышей.

Нижеследующие примеры иллюстрируют способ получения вещества и его биологическую активность.

1. Пример получения ВСРП.

Производят забор печени 2-дневного поросенка при его забое. Вес печени 39,0 г. Ткань печени измельчают, добавляют 117 мл дистиллированной воды, гомогенизируют при +3-5°C, гомогенат центрифугируют для осаждения ядер при 1000 об/мин, в течение 10 мин Полученный постъядерный супернатант прогревают на водяной бане в течение 7-10 мин при температуре от 20° до 38°C, доводят до 100° и прогревают 15-20 мин - при 100°C. Образовавшийся осадок термолабильного материала удаляют центрифугированием при +4°C, 5000 об/мин, в течение 15 мин. К супернатанту, охлажденному до +4 - +6°C, добавляют 252 мл 95% этанола, охлажденного до -18 - -20°C и оставляют при этой температуре на 15-17 ч, центрифугируют при +4°C, 5000 об/мин в течение 15 мин. Спирт из супернатанта удаляют на роторном испарителе. Полученный супернатант (30 мл), представляющий собой водный экстракт печени неонатального поросенка, замораживают и хранят до использования при - 65 - 70°C.

2. Определение активности заявленного ВСРП in vivo на модели токсического повреждения печени мышей.

Для выполнения данной работы белым лабораторным мышам весом 18-20 г моделировали повреждение печени путем внутрибрюшинного введения раствора тиоацетамида (ТАА) в дозе 250 мг/кг (15 мг/мл свежеприготовленного раствора в стерильном физиологическом растворе). Животным контрольной группы вводили только физиологический раствор. Размороженный ВСРП растворяли в 5 мл физиологического раствора.

Внутрибрюшинное введение (0,46 мл на 20 г веса) ВСРП проводили через 2 часа после введения ТАА, забор крови у мышей производили через 48 часов после введения ТАА. Эффект воздействия ВСРП оценивали по изменению активности аминотрансфераз аспарагиновой (ACT) и аланиновой (АЛТ) в сыворотке крови опытных животных по сравнению с контрольными [5]. Показатели активности цитолитических ферментов используются для оценки регенеративной активности [6-8].

Активность аминотрансфераз определяли кинетическим методом с использованием диагностических наборов фирмы «Диакон-ВНЦМДЛ», Москва. В таблице представлены данные о влиянии ВСРП на активность ACT и АЛТ.

Из данных таблицы следует, что ВСРП вызывает достоверное (р<0,01) снижение активности ACT и АЛТ на 48 и 57%, соответственно, в сыворотке крови экспериментальных мышей.

Таким образом, использование заявленного ВСРП при токсическом повреждении печени экспериментальных животных позволяет эффективно снижать активность цитолитических ферментов (ACT и АЛТ) в их крови.

Предлагаемый способ позволяет расширить ассортимент веществ, обладающих регенерирующей активностью.

Список литературы

1. Проблемы учета заболеваемости и смертности от хронического гепатита С в Российской Федерации.

http://www.zdrav.ru/articles/practice/detail.php

2. Michalopoulos G.K., DeFrance M.C. Liver regeneration. Science. 1997; 276(5309): 66-70.

3. La Breque D.R. The role of hepatotrophic factors in liver regeneration-a brief review including a preliminary report of the in vitro effects of hepatic regenerative stimulator substance (SS). Yale J. Bio.l Med. 1979; 52(1): 49-60.

4. Margeli A.P., Skaltsas S.D., Spiliopoulou C.A., Mykoniatis M.G., Theocharis S.E. Hepatic stimulator substance activity in the liver of thioacetamide-intoxicated rats. Liver. 1999; 19(6): 519-525.

5. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. Под ред. Меньшикова В.А. М.: Медицина. 1987. С.186-190.

6. Margeli A.P., Papadimitriou L., Ninos S., Manolis E., Mykoniatis M.G., Theocharis S.E. Hepatic stimulator substance administration ameliorates liver regeneration in an animal model of fulminant hepatic failure and encephalopathy. Liver Internat. 2003; 23(3): 171-178.

7. An W., Mei M.H. Protective effect of hepatic stimulator substance against experimental acute liver failure in mice. Sheng Li Xue Bao. 1991; 43(5): 415-427.

8. Theocharis S.E., Margeli A.P., Agapitos E.V., Mykoniatis M.G., Kittas C.N., Davaris P.S. Effect of hepatic stimulator substance administration on tissue regeneration due to thioacetamide-induced liver injury in rats. Scand. J. Gastroenterol. 1998; 33(6): 656-663.

Способ получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени, заключающийся в том, что печень неонатального поросенка гомогенизируют с водой в соотношении 1:3-5 при +3-5°C, гомогенат центрифугируют для осаждения ядер при 1000 об/мин в течение 10 мин, супернатант прогревают в течение 7-10 мин при температуре от 20° до 38°C, доводят до 100° и прогревают 15-20 мин при этой температуре, вновь центрифугируют при +4°C, 5000 об/мин в течение 15 мин, к охлажденному до +4-6°C супернатанту добавляют охлажденный до -15 - -20°C этанол до концентрации 65-70%, через 15-17 ч вновь центрифугируют при +4°C, 5000 об/мин в течение 15 мин, из супернатанта удаляют спирт, полученный целевой продукт замораживают и хранят при -65 - 70°C до использования.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Lactobacillus pentosus DSM 21980, продуцирующий бактериоцин.

Настоящее изобретение относится к цитрату соединения, имеющему приведенную ниже формулу (II), и фармацевтической композиции, содержащей заявленный цитрат. Экспериментальные результаты настоящего изобретения доказывают, что заявленный цитрат может подавлять активность фосфодиэстеразы 5 типа и может быть использован для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбозов, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, лечения астмы и диабетического гастропареза.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения хронического запора и функциональной анорексии. Для этого используют в качестве лечебного питания молочно-витаминную смесь следующего состава (г на 100 г продукта): Белки 24-26 Жиры 27-29 Углеводы 33-34 минералы (мг на 100 г продукта) кальций 940-970 фосфор 780-820 натрий 230-270 калий 1370-1550 хлорид 1270-1350 магний 100-125 железо 9,5-10,7 цинк 2,7-3,5 йод 145-173 медь 76-87 марганец 45-52 витамины (мкг на 100 г продукта) D3 7,6-8,2 Е 6,2-6,8 С 42-46 B1 960-990 B2 1150-1250 Ниацин 11-15 В6 1370-1440 Фолиевая кислота 125-150 Пантотеновая кислота 2250-2370 В12 1,5-1,9 Биотин 25-31 Холин 40-45 Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят. Заявлены препарат для лечения желудочно-кишечных болезней телят и способ лечения с его использованием.
Изобретение относится к способу получения энтеросорбента на основе глауконита и к энтеросорбенту, полученному указанным способом. Заявленный способ включает измельчение глауконита с содержанием породы от 20 до 95%, отбор фракции 1,0-10 мкм, приготовление 40-80% суспензии глауконита в воде.

Группа изобретений относится к области ветеринарии. Способ получения лекарственного препарата растительного происхождения для лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка животных характеризуется тем, что 150-200 г измельченной коры ильмы помещают в термостойкую колбу, вносят в нее 500 мл дистиллированной воды и в течение 3-х суток экстрагируют в условиях холодильника, затем колбу ставят на газовую или электрическую плитку, соединяют через лабораторный холодильник с источником холодной воды, вначале осуществляют перегонку жидкой, а затем возгонку твердой фракции в течение 6-8 часов до полного обугливания частиц, получаемый препарат накапливают в стерильной лабораторной колбе, после чего тщательно взбалтывают.

Изобретение относится к медицине, и предназначено для консервативного лечения пульпита. В первое посещение оценивают повреждения пульпарной камеры по визуальным признакам и применяют лечебный препарат в виде пасты для снятия воспаления.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для предупреждения или лечения желудочно-кишечных дискинетических заболеваний и к пищевой функциональной оздоровительной композиции для предупреждения или лечения желудочно-кишечных дискинетических заболеваний, включающим смесь экстрактов двух или более травянистых растения, выбранных из группы, состоящей из Bupleuri Radix, Coptidis Rhizoma и Glycyrrhizae Radix et Rhizoma.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой полипептид (варианты) и фармацевтическую композицию, включающую данный полипептид. Полипептид имеет последовательность, представленную нижеследующей формулой 1: Связи между аминокислотами, кроме X1-Val связи, являются амидными связями.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой энтеросорбент в форме таблетки, содержащей диоксид кремния коллоидный, микрокристаллическую целлюлозу, декстрозу, кроскармелозу натрия, тальк фармакопейный и стеарат магния, причем компоненты в энтеросорбенте находятся в определенном соотношении в масс.%.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения дегенерировавших органов в патологическом состоянии, в частности нейродегенеративных заболеваний.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к микрокапсулам для профилактики или терапевтического лечения заболеваний печени. Микрокапсулы для профилактики или терапевтического лечения заболевания печени, содержащие оболочку капсулы, инкапсулирующие суспензию терапевтически эффективного количества клеток печени в физическом контакте со стимулирующим клетки печени количеством эритропоэтина.
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и представляет собой иммуномодулятор для лечения хронических гепатитов, рака печени, лимфосаркомы, хронического бластозного лейкоза и улучшения функций печени и органов кроветворения, повышения иммунобиологических свойств организма, полученный путем смешивания 1000 мл водного настоя цветков бессмертника песчаного, травы мяты перечной и травы цикория с 50 мл сыворотки крупного рогатого скота, содержащей антитела к онковирусам лейкоза, 20 мл настойки болиголова, 40 г аскорбиновой, 2 г сорбиновой, 0,2 г фолиевой кислот до полного растворения всех компонентов с последующим добавлением 60 г порошка печени, 30 г порошка лимфатических узлов, 30 г порошка селезенки молодняка крупного рогатого скота, с дальнейшим отстаиванием полученного раствора при комнатной температуре в течение 24 часов и далее выдерживанием на кипящей водяной бане в течение 30 минут и охлаждением в течение 6-8 часов при комнатной температуре и фильтрованием отстоявшегося раствора, где водный настой трав готовят путем смешивания в равных соотношениях отдельно полученных водных настоев 40 г травы мяты перечной в 1000 мл воды, 30 г цветков бессмертника песчаного в 1000 мл воды и 30 г травы цикория в 1000 мл воды, а настойку болиголова получают настаиванием 60 г измельченных соцветий болиголова в 1000 мл 70% очищенного этилового спирта.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и касается лечения острого неврита зрительного нерва. Способ включает введение внутрь в течение трех недель траумеля сублингвально по 1 таблетке три раза в день, лимфомиазота по 10 капель в 50-100 мл воды три раза в день.
Изобретение относится к области биологии и клеточных технологий. .

Изобретение относится к области фармакологии и медицины и представляет собой конъюгаты уратоксидазы (уриказы) для снижения повышенных уровней мочевой кислоты в жидкости или ткани тела млекопитающего, включающие в себя очищенную уриказу и полиэтиленгликоль (ПЭГ), в которых, по меньшей мере, 90% упомянутой уриказы представляет собой тетрамер и каждая субъединица упомянутой уриказы ковалентно связана, в среднем, с, по большей мере, 12 нитями полиэтиленгликоля, имеющего молекулярный вес приблизительно от 5 кДа до приблизительно 100 кДа.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для повышения физической выносливости. .
Изобретение относится к области биологии и медицины и касается способа выделения гепатоцитов птиц вида Columba livia. .

Изобретение относится к композиции, включающей альгинат с высоким содержанием маннуроновой кислоты и поликатион, имеющий индекс полидисперсности менее 1,5. .

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и касается профилактики или лечения заболеваний печени. Для этого вводят микрокапсулы, содержащие оболочку капсулы, инкапсулирующую суспензию терапевтически эффективного количества клеток печени и эритропоэтин. Такой состав капсулы обеспечивает высокую жизнеспособность и физиологическую активность клеток печени, что, в свою очередь, способствует эффективной профилактике или лечению заболеваний печени. 12 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени. Способ получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени, заключающийся в том, что печень неонатального поросенка гомогенизируют с водой, гомогенат центрифугируют для осаждения ядер, супернатант прогревают, вновь центрифугируют, к охлажденному супернатанту добавляют охлажденный этанол и через 15-17 ч вновь центрифугируют, из супернатанта удаляют спирт, полученный целевой продукт замораживают и хранят до использования, при определенных условиях. Вышеуказанный способ позволяет получить вещество, стимулирующее регенерацию поврежденной печени. 1 табл., 2 пр.

Наверх