Способ дооперационного определения объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы

Авторы патента:

Семенов Дмитрий Юрьевич (RU)

Фарафонова Ульяна Валентиновна (RU)

Колоскова Людмила Евгеньевна (RU)

Борискова Марина Евгеньевна (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2548783:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.И. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, к хирургии, к онкологии и может быть использовано при дооперационном определении объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы. Сущность способа: в материале опухоли, взятом тонкоигольной аспирационной биопсией, определяют экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки и при экспрессии менее 1% в объем операции дополнительно включают центральную лимфодиссекцию. Экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки определяю методом проточной флуороцитометрии. Способ позволяет на основе дооперационного определения экспрессии натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки достоверно установить объем хирургического лечения высокодифференцированных раков щитовидной железы - папиллярного и фолликулярного. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Прогноз для высокодифференцированного рака щитовидной железы (ВДРЩЖ) благоприятный, однако в 7-10% случаев имеет место персистенция заболевания и рецидивирование более чем через 5 лет после операции. Выделить эту группу пациентов на дооперационном этапе в настоящее время не представляется возможным, поэтому в хирургической тактике лечения остаются спорные вопросы. Одним из основных вопросов в лечении рака щитовидной железы является объем операции, т.к. это основной метод лечения. В частности, относительно необходимости выполнения профилактической центральной лимфодиссекции не существует консенсуса как в России, так и за рубежом. Следует отметить, что выполнение центральной лимфодиссекции увеличивает риск развития как транзиторного, так и стойкого гипопаратиреоза с 3% до 14.3%, увеличивается риск повреждения возвратного нерва. Также следует отметить, что по данным зарубежных авторов частота оккультных метастазов центральной клетчатки шеи колеблется от 9-20% (не определяемые на УЗИ до операции и не выявленные интраоперационно), что может стать причиной персистенции заболевания либо его рецидива. Таким образом, прогнозирование рецидива заболевания на дооперационном этапе позволит индивидуализировать тактику хирургического лечения.

В последние годы в ряде работ зарубежных авторов появились данные о наличии возможной связи между мутацией гена BRAF и менее благоприятным прогнозом течения ВДРЩЖ. Проведенное 15-летнее ретроспективное мультицентричное исследование показало, что наличие BRAF мутации достоверно коррелировало с более высоким риском рецидива, метастазирования и снижением способности к захвату радиойода. BRAF мутация является перспективным дооперационным маркером, который отражает распространенность заболевания.

В работе проф. Никифорова и соавт. (Gina M. Howell, Marina N. Nikiforova, Sally E. Carty, Michaele J. Armstrong, Steven P. Hodak, Michael T. Stang, Kelly L. McCoy, Yuri E. Nikiforov, Linwah Yip. BRAF V600E Mutation Independently Predicts Central Compartment Lymph Node Metastasis in Patients with Papillary Thyroid Cancer. Annals of Surgical Oncology January 2013, volume 20, Issue 1, pp 47-52) продемонстрирована возможность использовать BRAF мутацию в качестве маркера высокого риска развития локорегионарных рецидивов и предложено при выявлении BRAF положительной опухоли выполнять центральную лимфодиссекцию.

Однако известный способ не позволяет определить объем хирургического вмешательства при папиллярном раке щитовидной железы в случае BRAF отрицательной опухоли, хотя при таких опухолях известны рецидивы как местные, так и отдаленные. Кроме того, способ не позволяет корректировать хирургическую тактику у пациентов с диагнозом фолликулярного рака, так как BRAF мутация встречается только при папиллярном раке.

Технический результат, достигаемый изобретением, заключается в разработке достоверного маркера дооперационного определения объема хирургического лечения высокодифференцированных раков щитовидной железы - папиллярного и фолликулярного.

Заявленный технический результат достигается в способе дооперационного определения объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы, включающем исследование материала тонкоигольной аспирационной биопсии опухоли, в котором определяют экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки и при экспрессии менее 1% в объем операции дополнительно включают центральную лимфодиссекцию.

Целесообразно экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки определять методом проточной флуороцитометрии.

При разработке способа авторы основывались на том, что восприимчивость ВДРЩЖ к лечению радиоактивным йодом I 131 зависит от количества специфического переносчика на поверхности опухолевой клетки - натрий-йодного симпортера (НИС). При его снижении или отсутствии эффективность радиойодтерапии (РИТ) снижается, что может привести к рецидиву заболевания.

В результате исследования уровня экспрессии НИС на гистологическом ретроспективном материале от 65 пациентов с ВДРЩЖ методом иммуногистохимии (ИГХ) авторами были выявлены особенности перераспределения НИС внутри опухолевой клетки. При оценке препаратов выявлено преимущественное накопление белка в цитоплазме или на ядерной мембране опухолевой клетки. Уровень экспрессии, выявленный в исследовании, не был снижен, однако нарушено встраивание НИС в клеточную мембрану, что, по всей вероятности, происходит вследствие посттрансляционных нарушений. Данное изменение ведет к значительному уменьшению функциональной активности белка ввиду невозможности выполнения транспорта йода внутрь клетки. Но необходимо отметить, что наряду с опухолевыми клетками, проявившими максимальное накопление белка во внутренних компартментах, имеются клетки с мембранной экспрессией НИС.

Таким образом, было установлено, что количественную оценку следует проводить именно по экспрессии НИС на мембране клетки.

Дополнительного был изучен характер экспрессии и распределения НИС при неопухолевых заболеваниях щитовидной железы (диффузный токсический зоб), в нормальной ткани щитовидной железы и при доброкачественных опухолях щитовидной железы. Уровень экспрессии НИС в нормальной ткани щитовидной железы составляет 30-60% всех клеток. При доброкачественных опухолях щитовидной железы - снижается до 20%. При изучении же уровня экспрессии НИС при папиллярном раке щитовидной железы он не превышает 10-15%.

Выполнено ретроспективное исследование уровня экспрессии НИС на мембране опухолевой клетки и определение мутации гена BRAF у 65 пациентов с папиллярным раком щитовидной железы, оперированных в период с 2002 по 2008 г. Пациенты были разделены на 3 группы: в первую вошли 20 пациентов с папиллярным раком щитовидной железы T1-2N0M0. Объем лечения этих пациентов ограничился только оперативным вмешательством и послеоперационной супрессивной терапией. Рецидив заболевания в срок наблюдения до 60 месяцев у пациентов группы диагностирован не был. Во вторую группу вошли 25 пациентов, которым было выполнено оперативное вмешательство, по результатам которого определены показания и выполнена РИТ. В дальнейшем проводилась супрессивная терапия. В этой группе рецидива заболевания в срок наблюдения до 60 месяцев не выявлено. Третью группу составили 20 пациентов, которые подверглись оперативному лечению, послеоперационной РИТ и супрессивной терапии, но в срок наблюдения до 60 месяцев у них был диагностирован рецидив заболевания. Критериями включения пациентов во вторую и третью группы также явились отсутствие патологического захвата радиофармпрепарата при сцинтиграфии I 131 после введения терапевтической дозы I 131 и не более 3% захвата от введенной дозы в ложе удаленной щитовидной железы.

В третьей группе у 17 пациентов рецидив носил локорегионарный характер, у 2 пациентов выявлены множественные метастазы в легкие, и у одной пациентки определялись повышенные уровни тиреоглобулина (ТГ) и антител к ТГ без отмены супрессивной терапии, однако топически верифицировать очаг не удалось.

Целью работы явился поиск корреляции между уровнем экспрессии НИС в первичной опухоли и риском рецидива ВДРЩЖ после выполнения РИТ. Снижение возможности захвата радиойода в метастатическом очаге считалось достоверным при возникновении рецидива заболевания после проведения РИТ по стандартной методике и отрицательной сцинтиграфии всего тела с I 131 после терапии. Помимо этого исследовалась корреляция между снижением уровня экспрессии НИС и наличием BRAF мутации.

Уровень экспрессии НИС оценивали иммуногистохимически с использованием моноклональных антител AbCam, BRAF мутацию выявляли коммерческими наборами Vienn Lab. Следует отметить, что уровень экспрессии НИС оценивали по количеству белка транспортера, встроенного в мембрану опухолевой клетки, т.к. именно он является биологически активным.

При изучении корреляции уровня экспрессии НИС в первичной опухоли и риском рецидива заболевания получены следующие данные: в первой группе пациентов уровень экспрессии НИС был максимальным и доходил до 16%, средний же уровень экспрессии составил 6.7%.

Во второй группе больных средний уровень экспрессии НИС первичной опухоли составил 2.8%.

Наибольший интерес представляет третья группа больных. При оценке уровня экспрессии НИС первичной опухоли выявлено значительное снижение уровня экспрессии НИС в первичной опухоли в среднем до 1% по данным ИГХ.

Таким образом, удалось доказать корреляцию между уровнем экспрессии натрий йодного симпортера и риском рецидива заболевания после радиойодтерапии.

Достоверной корреляции между наличием BRAF мутации и уровнем экспрессии НИС не получено, что возможно связано с другими генетическими механизмами, влияющими на экспрессию белка-транспортера.

Определение уровня экспрессии НИС на дооперационном этапе должно выполняться с помощью метода, позволяющего количественно определить наличие НИС на мембране опухолевой клетки. В связи с чем авторами была разработана, протестирована и запущена в работу методика определения НИС методом проточной флюороцитометрии (данный метод исследования экспрессии НИС применен впервые).

Таким образом, при снижении экспрессии НИС менее 1% в материале ТАБ опухоли щитовидной железы предлагается выполнять не только тиреоидэктомию, но и профилактическую центральную лимфодиссекцию, что позволит уменьшить риск рецидива заболевания и необходимость повторных операций.

На фигурах представлены кривые безрецидивной выживаемости: на Фиг.1 - всех пациентов, в зависимости от уровня экспрессии натрий-йодного симпортера; на Фиг.2 - пациентов, получивших радиойодтерапию, в зависимости от уровня экспрессии натрий-йодного симпортера. На фигурах обозначено: Group 1 - группа пациентов, имеющих уровень экспрессии НИС≥1%; Group 2 - группа пациентов, имеющих уровень экспрессии НИС≤1%; Time - время до рецидива, измеренное в месяцах; Cumulative proportional surviving - кумулятивная выживаемость.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

На дооперационном этапе пациенту выполняют тонкоигольную аспирационную биопсию (ТАБ) щитовидной железы и в материале ТАБ определяют экспрессию НИС методом проточной флуороцитометрии, который включает следующие этапы.

I. Подготовка проб.

1. Материал ТАБ обрабатывают неконъюгированными козьими поликлональными антителами к экстраклеточному (Р-14) домену белка НИС человека (Santa Cruz Biotechnology, Inc.).

2. Инкубация при температуре +4° 12 часов.

3. Отмывка: добавление в образцы 4 мл фосфатно-солевого буфера (Santa Cruz Biotechnology, Inc.); центрифугирование в режиме 1600 об/мин, 10 мин, при комнатной температуре; удаление надосадочной жидкости.

4. Обработка образцов антикозьими антителами осла конъюгированными FITC (Santa Cruz Biotechnology, Inc.).

5. Инкубация при температуре +4° 50 мин.

6. Отмывка: добавление в образцы 4 мл фосфатно-солевого буфера (Santa Cruz Biotechnology, Inc.); центрифугирование в режиме 1600 об/мин, 10 мин, при комнатной температуре; удаление надосадочной жидкости.

7. Обработка образцов мышиными моноклональными антителами конъюгированными РЕ к CD45 человека (10 test, Beckman Coulter).

8. Инкубация при комнатной температуре 15 мин.

II. Анализ проб.

Анализ проб проводят методом проточной флюороцитометрии на проточном цитометре EPICS XL-MCL (Beckman Coulter) с помощью программы System II.

Экспрессию НИС определяют в области CD45 негативных событий в созданной для исследования панели протоколов. Контроль экспрессии НИС осуществляют по протоколу без первичных антител.

При экспрессии НИС менее 1% в объем операции дополнительно включают центральную лимфодиссекцию.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

1. Пациентка К., 40 лет, обратилась в клинику общей хирургии в связи с впервые выявленным узлом правой доли щитовидной железы. При УЗИ узел гипоэхогенный, в нижнем полюсе правой доли 1.3 см с нечетким неровным контуром и множеством кальцификатов. Выполнена тонкоигольная аспирационная биопсия узла правой доли. При цитологическом исследовании материала ТАБ выявлены клетки папиллярного рака. До операции выполнено определение в материале ТАБ наличия мутации гена BRAF и уровня экспрессии НИС на мембране опухолевой клетки. BRAF мутации не выявлено, уровень экспрессии НИС был значительно снижен -0.3%. До операции больная обследована. Выполнены клинико-лабораторный минимум, гормональное обследование, УЗИ щитовидной железы и регионарных лимфатических узлов, УЗИ органов брюшной полости, рентгенограмма органов грудной клетки. Данных за локорегионарное и отдаленное метастазирование не получено. 13.12.2010 г. выполнена операция. На операции: в нижнем полюсе правой доли выявлен каменистой плотности узел 1.3 см, без макроскопических признаков инвазии капсулы щитовидной железы. Выполнена тиреоидэктомия. Послеоперационное клиническое стадирование сТ1 Nx МО. При плановом гистологическом исследовании выявлены признаки инвазии капсулы щитовидной железы. Гистологическое стадирование заболевания рТ3 Nx МО. Поставлены показания к выполнению радиойодтерапии. 03.2011 г. больной выполнена РИТ (за пределами РФ), после чего назначена супрессивная гормональная терапия. При плановом осмотре в 09.2011 г. выявлены увеличенные до 2.5 см гипоэхогенные округлые среднерегулярные лимфатические узлы справа. Заподозрен рецидив заболевания. Выполнена ТАБ: метастаз папиллярного рака щитовидной железы. Поставлены показания к выполнению боковой и центральной шейной лимфодиссекции справа. 10.2011 г. больная повторно оперирована. При гистологическом исследовании материала в центральной и боковой клетчатке шеи справа выявлены метастатически пораженные лимфатические узлы. Больной вновь назначена РИТ и супрессивная гормональная терапия. В срок до 36 месяцев рецидива заболевания не зарегистрировано.

Проведенное на дооперационном этапе исследование НИС, показавшее значительное снижение уровня экспрессии НИС до 0.3%, указывало на агрессивное течение ВДРЩЖ при отсутствии BRAF мутации, развитие рецидива заболевания после РИТ и необходимость включения в объем операции центральной лимфодиссекции, что было подтверждено дальнейшим клиническим течением.

2. Больная Г.С., 70 лет, поступила в клинику в плановом порядке с диагнозом фолликулярная опухоль правой доли щитовидной железы. Из анамнеза известно, что при профилактическом осмотре выявлен узел в правой доле щитовидной железы. УЗИ - в правой доле гипоэхогенное образование 2,0×3,0 см с нечетким, ровным контуром с кальцификатами. TAB - фолликулярная опухоль. Выполнена экстирпация щитовидной железы. Центральная лимфодиссекция не выполнялась. При плановом гистологическом исследовании - фолликулярный рак. Через 6 месяцев после операции диагностированы метастазы в центральную и боковую клетчатку шеи справа. Выполнена центральная и боковая шейная лимфодиссекция справа. Проведен курс радиойодаблации. Через год выявлен рецидив заболевания - метастазы в боковую клетчатку слева. Выполнена боковая шейная лимфодиссекия слева, проведено 3 курса С. Через 7 лет после первой операции диагностирован повторный рецидив - метастазы фолликулярного низкодифференцированного рака в медиастинальные лимфоузлы, однако при выполнении сцинтиграфии с йодом очагов патологической фиксации не определялось. Выполнена видеоассистированная медиастинальная лимфодиссекия. При ретроспективном анализе биопсийного материала выявлена низкая экспрессия НИС (менее 1%). Мутация BRAF не исследовалась в связи с диагнозом фолликулярного рака, так как данная мутация встречается только при папиллярном раке. Таким образом, низкая экспрессия НИС позволяет прогнозировать нечувствительность к радиойодтерапии, что диктует расширение объема операции, а именно выполнение лимфодисекции.

На проспективном этапе исследования в период с 2009 г. по 2010 г. авторами было проведено лечение 43 пациентов с высокодифференцированным раком щитовидной железы. У всех пациентов до операции были исследованы уровень экспрессии НИС и наличие мутации BRAF V600E в материале ТАБ. Уровень экспрессии НИС оценивали количественно методом проточной флуороцитометрии, а также был выполнен молекулярно-генетический анализ материала ТАБ методом ПЦР-анализа с целью определения BRAF статуса опухоли (амплификации в режиме реального времени и амплификации в режиме учета электрофоретического сигнала). Средний возраст пациентов составил 47.4±13.9 лет; соотношение мужчин и женщин - 1:7 соответственно.

Всего в исследование вошло 39 пациентов с папиллярным раком щитовидной железы (ПРЩЖ) и 4 пациента с фолликулярным раком (ФРЩЖ).

Среди пациентов с ПРЩЖ 22 были BRAF положительные и 17 BRAF отрицательные. Уровень экспрессии БИС менее 1% был у 12 пациентов, у 27 - более 1%. Среди пациентов у 6 выявлен рецидив заболевания после проведения РИТ. BRAF положительных среди них было 4 человека, и у 2 пациентов опухоль была BRAF отрицательной. Следует отметить, что у всех 6 человек уровень экспрессии НИС не превышал 1%.

Среди пациентов с ФРЩЖ все пациенты были BRAF отрицательные, но уровень экспрессии НИС был снижен менее 1%, лишь у 1 пациента, у которого был выявлен рецидив заболевания в срок 36 месяцев. У оставшихся 3 человек уровень экспрессии НИС не превышал 1%.

При построении кривых дожития Каплан-Мейера (Фиг.1 и Фиг.2) достоверно видно, что период безрицидивного выживания пациентов с уровнем экспрессии НИС менее 1% достоверно ниже.

Анализ влияния уровня экспрессии НИС на безрецидивную выживаемость (Фиг.1) показал, что в группе больных с уровнем экспрессии НИС более 1% рецидив заболевания развился лишь в 10% случаев, тогда как в группе больных с уровнем экспрессии НИС менее 1% частота рецидивов достигла 50% (=0.00392). Следует отметить, что все пациенты с рецидивами заболевания прошли терапию радиоактивным йодом. Таким образом, получается, что в каждом втором случае при уровне экспрессии менее 1% в первичной опухоли в срок до 48 месяцев мы можем ожидать рецидива/прогрессирования заболевания после выполнения РИТ.

Интересными являются результаты анализа безрецидивной выживаемости в группе пациентов, получивших в послеоперационном периоде по показаниям радиойодтерапию (Фиг.2). При составлении кривых безрицидивной выживаемости в двух группах больных - с уровнем экспрессии НИС менее и более 1% - результаты аналогичны результатам у всех пациентов (Фиг.1). Т.е. у пациентов с уровнем экспрессии НИС первичной опухоли менее 1%, срок безрецидивной выживаемости после радиойодтерапии значительно ниже, в сравнении с пациентами, также получившими РИТ, но чей уровень экспрессии НИС был более 1%.

Таким образом, рецидив в группе больных после радиойодтерапии и уровнем экспрессии НИС менее 1% связан с нечувствительностью опухоли к радиоактивному йоду и неадекватным первичным объемом операции. При выполнении адекватного первичного объема операции данных рецидивов возможно было избежать.

Использование заявленного способа позволяет на основе дооперационного определения экспрессии натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки установить объем хирургического лечения высокодифференцированных раков щитовидной железы - папиллярного и фолликулярного.

1. Способ дооперационного определения объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы, включающий исследование материала тонкоигольной аспирационной биопсии опухоли, отличающийся тем, что определяют экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки и при ее значении менее 1% в объем операции дополнительно включают центральную лимфодиссекцию.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экспрессию натрий-йодного симпортера на мембране опухолевой клетки определяют методом проточной флуороцитометрии.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей (ЧБД).

Способ прогнозирования возникновения судорожного синдрома у детей с перинатальными поражениями цнс в раннем неонатальном периоде // 2548758

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования судорожного синдрома у детей с перинатальными поражениями ЦНС в раннем неонатальном периоде.

Способ прогнозирования развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении // 2548737

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития детского церебрального паралича у недоношенных новорожденных с экстремально низкой массой тела при рождении.

Способ диагностики токсигенных штаммов clostridium difficile // 2548719

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу диагностики токсигенных штаммов Clostridium difficile. Сущность способа состоит в том, что пробу кала пациента выдерживают в абсолютном 96% спирте 30-60 мин при соотношении спирта и кала 1:1, центрифугируют 15-20 минут, далее обрабатывают пробу кала 1% раствором дезоксихолата натрия при соотношении 1:1 30-60 минут, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, затем проводят первичный посев осадка на среде с добавлением 1% лактозы и 0,5-1,0 мМ арабинозы, инкубируют в анаэростате в течение 24-48 ч, выросшие колонии наносят на стандартные диски, пропитанные хромогенным субстратом - орто-нитрофенил-β-D-галактозидазой.

Способ количественного определения бенз(а)пирена в крови методом жидкостной хроматографии // 2546530

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения бенз(а)пирена в крови, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности.

Способ диагностики у детей от 5 до 10 лет когнитивных нарушений, ассоциированных с внешнесредовым воздействием марганца техногенного происхождения // 2546528

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу диагностики когнитивных нарушений у детей при воздействии марганца техногенного происхождения. Сущность способа: по результатам клинической диагностики и нейропсихологического тестирования устанавливают у ребенка наличие когнитивных нарушений.

Способ количественного определения пентахлорфенола в крови методом газохроматографического анализа // 2546527

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения пентахлорфенола в крови.

Способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля // 2546526

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики токсического действия никеля, и описывает способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля, при этом осуществляют определение содержания никеля в пробе крови и определение лабораторных показателей: в сыворотке крови - содержание гидроперекиси липидов, а в моче - содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина, далее проводят корреляционный анализ между указанными лабораторными показателями и уровнем никеля в крови, и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка никеля более 0,083 мг/дм3 и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание гидроперекиси липидов в сыворотке крови и повышенное, по сравнению с референтным уровнем, содержание 8-гидрокси-2-деоксигуанозина в моче, диагностируют наличие окислительного стресса в организме на уровне ДНК клетки и мембраны клетки.

Способ определения новокаина в биологическом материале // 2546294

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий.

Способ определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале // 2546292

Изобретение относится к медицине и токсикологической химии, а именно к способам определения 3-метоксигидроксибензола в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий.

Способ определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ммр9-1562 с>т (rs3918242) // 2548811

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242). Способ основан на снятии кривых плавления с флуоресцентно-мечеными аллель-специфичными олигонуклеотидными пробами. В способе используют общую для всех аллелей пару праймеров, отличающиеся для каждого аллеля флуоресцентно-меченые аллель-специфичные олигонуклеотидные пробы и универсальный олигонуклеотид, меченый гасителем флуоресценции следующего нуклеотидного состава: MMP9-1562s CGAAACCAGCCTGGTCAACG; ММР9-1562а TCTGCCTCCCGGGTTCAAGC; ММР9-1562р1 GGCGCACGCCTATAA-FAM; ММР9-1562р2 GGCGCATGCCTATAA-HEX; ММР9-1562pq BHQ1-ACCAGCTACTCGGGAGGC-3'-(P), где FAM - означает флуоресцентный краситель FAM, HEX - означает флуоресцентный краситель HEX, BHQ1 - означает присоединенный к 5'-концевому нуклеотиду темновой гаситель флуоресценции. Отнесение образца к гомозиготе или гетерозиготе по данному аллелю оценивается по форме кривых плавления ДНК - по максимуму первой производной графиков флуоресценции. Изобретение позволяет повысить надежность и доступность генотипирования. 1 ил.

Способ прогноза течения саркоидоза // 2549454

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования течения саркоидоза. Сущность способа состоит в том, что исследуют биоптат средней доли правого легкого. Проводят иммуногистохимическое исследование, по меньшей мере, в 5 полях зрения при увеличении ×400 по определению среднего количества миофибробластов в межальвеолярном интерстиции. При значении этой величины более 50 прогнозируют неблагоприятное течение саркоидоза, при выявлении 15 и менее среднего количества миофибробластов прогнозируют благоприятное течение саркоидоза. Использование заявленного способа позволяет осуществить ранний прогноз и выявить группу больных, которым нет необходимости проводить большое количество дополнительных исследований. 2 пр.

Способ диагностики нутриционной недостаточности при язвенном колите // 2549464

Изобретение относится к области медицины и описывает способ диагностики нутриционной недостаточности при язвенном колите путем иммунологического исследования, при котором в сыворотке крови определяют уровень растворимых форм молекул адгезии sICAM-1, sICAM-2 и sICAM-3 и при легкой степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 1500-1800·109/л и уровень sICAM-1 13,4-24,7 нг/мл, уровень sICAM-2 8,1-17 нг/мл и уровень sICAM-3 4,4-19 нг/мл; уровень IgG 650-500 мг/л; при умеренной степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 900-1490·109/л и уровень sICAM-1 25-37,8 нг/мл, уровень sICAM-2 17,1-23,9 нг/мл и уровень sICAM-3 19,5-30,8 нг/мл, уровень IgG 950-1400 мг/л; при тяжелой степени нутриционной недостаточности уровень лимфоцитов крови составляет 890·109/л и менее, уровень sICAM-1 38-63 нг/мл, уровень sICAM-2 24-29 нг/мл и уровень sICAM-3 30,9-42,3 нг/мл; уровень IgG 1500-1800 мг/л. Изобретение обеспечивает повышение точности диагностики нутриционной недостаточности при язвенном колите. 3 пр.

Способ выявления инсулинорезистентности у пациентов с острым инфарктом миокарда в раннем госпитальном периоде // 2549479

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и эндокринологии, и может быть использовано для выявления манифестации нарушения тканевой чувствительности к инсулину у пациентов в раннем периоде острого инфаркта миокарда. Способ включает исследование в крови пациента в первые сутки острого инфаркта миокарда с элевацией сегмента ST уровня инсулинемии, гликемии, свободных жирных кислот (СЖК), ретинолсвязывающего белка, фактора некроза опухоли и уровня грелина, далее на основании полученных результатов рассчитывают линейную классификационную дискриминантную функцию (КЛДФ1-с) по формуле: КЛДФ1-с=-3,877+0,095Адп+0,246Грл-0,025ИЛ-6-0,053ФНО, где АДП - концентрация адипонектина, Грл - уровень грелина, ИЛ-6 - значения интерлейкина - 6, а ФНО - фактора некроза опухолей альфа, при этом вероятный риск развития инсулинорезистентности определяют при значениях КЛДФ1, меньших точки разделения кластеров 0,4545 и максимально приближенных к центроиду -0,561. Изобретение обеспечивает повышение достоверности диагностики развития инсулинорезистентности у пациентов с острым инфарктом миокарда с элевацией сегмента ST в раннем госпитальном периоде. 2 пр., 2 ил., 2 табл.

Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка // 2549989

Изобретение относится к микробиологии, а именно к способу микроскопического исследования нативного соскоба слизистой корня языка. Сущность способа состоит в том, что деревянным шпателем забирают 0,5 мл биоматериала из глубокого соскоба со слизистой на границе задней трети спинки и корня языка, готовят два мазка на двух предметных стеклах площадью 1,5-2,0 см2, мазки высушивают 20 минут, осуществляют фиксацию мазка жаром в пламени спиртовки непрерывно в течение 5-6 секунд, окрашивают сложным дифференциальным методом Грама, микроскопируют с иммерсией при объективе х100, просматривают не менее 10 полей зрения на каждом стекле, учитывая количественные и качественные характеристики микроорганизмов, клеток и ядер эпителия. Изобретение позволяет осуществить более точное исследование нативного соскоба c языка. 4 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом // 2550944

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом. Сущность способа состоит в том, что в лимфоцитах периферической крови больных хроническим лейкозом в развернутой стадии определяют активность двух дегидрогеназ - глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ). При сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности ЛДГ в пределах от 0,04 до 5,02 мкЕ прогнозируют возникновение терминальной стадии. Использование заявленного изобретения позволяет своевременно диагностировать прогрессирование заболевания, корректировать план и тактику лечения данной категории больных и улучшить результаты их реабилитации. 2 пр.

Способ определения гидроксибензола и его монометильных замещенных в биологическом материале // 2550953

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения гидроксибензола и его монометильных замещенных в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий смесь гидроксибензола и его монометильных замещенных, измельчают, обрабатывают двукратно по 30 минут этилацетатом, этилацетатные вытяжки объединяют, обрабатывают этанольным раствором гидроксида калия, растворитель из объединенной этилацетатной вытяжки испаряют при 16-20°C, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, содержащим хлороводородную кислоту в избытке по отношению к гидроксиду калия, находящемуся в остатке, подкисленные ацетоновые извлечения объединяют, обрабатывают водным раствором гидроксида натрия для нейтрализации остатков хлороводородной кислоты в ацетоне и создания избытка щелочной среды, ацетон испаряют из объединенного извлечения, водно-щелочной остаток разбавляют водой, образующийся раствор подкисляют до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия, экстрагируют диэтиловым эфиром, экстракт обезвоживают, упаривают, хроматографируют в колонке с силикагелем с использованием подвижной фазы гексан-диэтиловый эфир в соотношении 6:4 по объему, фракции элюата, содержащие гидроксибензол и его монометильные замещенные, объединяют, экстрагируют буферным раствором с pH 12-13, водно-щелочной экстракт подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3, насыщают сульфатом натрия, экстрагируют дихлорметаном, дихлорметановый экстракт обезвоживают, анализируемые вещества, содержащиеся в дихлорметановом экстракте, переводят в соответствующие триметилсилильные производные, для чего дихлорметановый экстракт обрабатывают в течение 20 минут N-метил-N-триметилсилил-трифторацетамидом в условиях нагревания при температуре 60°C, и проводят качественное и количественное определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия, в капиллярной колонке длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил)-метилполисилоксан, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура программируется от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 10 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя - 150°C, температура источника ионов - 230°C, температура интерфейса детектора - 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току, качественное определение анализируемого вещества осуществляют по времени удерживания, набору и интенсивности сигналов характеристических заряженных частиц в масс-спектре его триметилсилильного производного, а количество определяемого соединения вычисляют по площади хроматографического пика его триметилсилильного производного. Способ обеспечивает повышение чувствительности и сокращает продолжительность определения. 6 табл., 1 ил., 5 пр.

Способ прогнозирования частого развития острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года у доношенных новорожденных с внутриутробным гриппом а(h3n2) // 2550964

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования частого развития острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года жизни у доношенных новорожденных с внутриутробным гриппом A(H3N2). Сущность способа: при рождении у доношенных новорожденных определяют уровень противогриппозных антител в сыворотке крови из вены пуповины (А), концентрацию среднемолекулярных пептидов в плазме крови из вены пуповины (ед. опт. плот) (В), общее количество Т-лимфоцитов (CD3+) в баллах: 1 балл - CD3+ более 48%; 2 балла - CD3+ 47%-41%; 3 балла - CD3+ 40% и менее в венозной крови пуповины. Затем осуществляют прогноз частого развития острых респираторных вирусных инфекций с помощью дискриминантного уравнения: D=+0,008×А-111,694×В-1,537×С, где D - дискриминантная функция с граничным значением, равным - 34,16. При D, равном или больше граничного значения, прогнозируют отсутствие развития частых острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года жизни у доношенных новорожденных с внутриутробным гриппом A(H3N2). При D меньше граничного значения прогнозируют частое развитие острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года жизни у доношенных новорожденных. Применение изобретения обеспечивает вероятность правильного прогноза частого развития острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года жизни у доношенных новорожденных, составляющую 83,1%. 2 пр.

Способ прогнозирования развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом на фоне химиотерапии // 2550967

Изобретение относится к медицине и касается ранней диагностики инфекционных осложнений у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), получающих химиотерапию (XT). Предлагаемый способ заключается в том, что у больных ОЛЛ во время проведения XT 2-3 раза в неделю исследуют концентрацию фибриногена, время XIIa-зависимого эуглобулинового лизиса (XIIa-ЗЭЛ), уровень растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК), активность протеина C (прС). При выявлении хотя бы 2 из 4 критериев, а именно: повышении уровня фибриногена на ≥ 41%, РФМК - на ≥ 76%, удлинении времени XIIa-ЗЭЛ на ≥ 11% и снижении активности прС на ≥ 12% по сравнению с предыдущим исследованием, прогнозируют развитие инфекционных осложнений. Способ обеспечивает раннее прогнозирование развития инфекции у пациентов с ОЛЛ во время проведения XT. 7 табл., 4 пр.

Биомаркер для отбора пациентов и связанные с ним способы // 2552292

Группа изобретений относится к медицине, а именно к способу анализа еx-vivo, будет ли больной раком субъект отвечать терапевтически на способ лечения. Для этого от пациента получают биологический образец, выбранный из группы, состоящей из образца общей крови, плазмы или сыворотки. Измеряют уровень IL10 и IFNγ в указанном биологическом образце, причем эти уровни определяются при использовании антител, специфических для IL10 и INFγ, соответственно. Проводят подсчеты соотношения IL10/IFNγ и сравнивают указанное соотношение IL10/IFNγ с пороговым уровнем. Соотношение IL10/IFNγ ниже 4 свидетельствует о том, что пациент будет развивать профилактический или терапевтический ответ на иммуногенную композицию. Группа изобретений относится также к применению IL10 и INFγ в качестве биомаркеров и набору для анализа вышеуказанного способа. Использование данного способа позволяет прогнозировать чувствительность больного раком к терапевтическому лечению, а также получить алгоритм для модификации лечения для улучшения ответа пациента на лечение. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.