Способ прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза trichuris (=trichocephalus) vulpis

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для использования при экспериментальных паразитологических исследованиях в лабораторных условиях. Способ включает отбор только живых, половозрелых самок Trichuris vulpis из толстой, слепой кишок спонтанно зараженных трихоцефалами при исследовании гельминтологическими методами на вскрытии диких или/и домашних хищных в отдельные пробирки с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) и экспозицией пробирок с самками Trichuris vulpis при t=37,5°C - 39°C в течение 5 часов в условиях термостата. Заявленный способ позволяет отобрать в большом количестве оплодотворенные яйца Т. vulpis, не загрязненные частицами непереваренного корма, частицами разрушенных тканей половых органов самок Т. vulpis и секундарной бактериальной микрофлорой. 2 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а более конкретно - к паразитологии (= гельминтологии) к «Способу прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis», и предназначено для использования при паразитологических лабораторных исследованиях, прижизненных (в искусственной среде и при температуре свойственной плотоядным) сборов оплодотворенных яиц от живых, половозрелых самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, полученных в результате вскрытия по методу К.И. Скрябина [9], толстого отдела кишечника и слепой кишки спонтанно зараженных трихоцефалезом диких или/и домашних хищных.

Известно, что Trichuris (= Trihocephalus) vulpis (Froelich, 1789) является возбудителем трихоцефалеза домашних (собак), диких (волков, хорей, лисиц, бурых медведей в условиях цирков) хищных и человека и что этот возбудитель паразитарного зооноза продолжает быть причиной тяжелого заболевания не только хищных, но и человека, что иногда приводит к необходимости применять хирургические методы (апендиксотомии) при его лечении [Пасечник В.Е. 3, 4, 5, 6, 7; К.И. Скрябин, Петров A.M. - 10; Kenney, M.; Eveland, L.К. - по 3; Kenney, M; Yermakov, V. - по 3].

Гельминт: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis остается в центре внимания ВОЗ и на данном этапе времени, так как он может поражать людей (особенно детей) наряду с другим паразитом Trichuris trichiura, L., 1771 - возбудителем трихоцефалеза человека, обезьян и в ларвальной стадии диких и домашних свиней [Пасечник В.Е. - 3, 5; Sakano Т., et al. - 11; Singh S., et al. - 12].

Заболеваемость населения трихоцефалезом в 2004 году регистрировалась во всех субъектах Российской Федерации [по Романенко Н.А., Малышева Н.С. - 8, с. 30]. В период 1999-2002 гг. вся заболеваемость трихоцефалезом в г. Москве, Ненецком, Ханты-Мансийском автономных округах, Республике Саха (Якутия), Камчатской, Тамбовской областях формировалась за счет завозных случаев: в 81,3% случаев - в г. Санкт-Петербурге; в 63,3% - Ленинградской; 60% - Костромской; 52% - Волгоградской; 50% - Ивановской областях [8].

Однако если учесть и количество зараженных трихоцефалезом людей (особенно детей в возрасте до 14 лет) и другим возбудителем паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, то эпидемиологическая ситуация, отраженная Романенко Н.А., Малышевой Н.С. [8], была бы еще более печальной в несколько раз, так как по данным Всероссийского научно-исследовательского института гельминтологии имени К.И. Скрябина (ВИГИС) только в г. Москве численность собак превышает 1.000.000 миллион особей.

Из которых тысячи, особенно щенков, могут быть заражены возбудителем паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis и особенно тех пород собак, которые были завезены из более южных стран (Мексика, Египет, Греция, Словения, Украина, Испания, Румыния, Франция, Италия и др.) или регионов Российской Федерации (Ростовская, Саратовская, Астраханская области. Краснодарский край, республики Адыгея, Дагестан, Крым и др.), что может служить дополнительным источником заражения трихоцефалезом людей, особенно в крупных городах: г. Москва, г. Санкт-Петербург и др., так как владельцы собак часто игнорируют ветеринарно-санитарные правила их содержания [Пасечник В.Е. - 5].

Все большее распространение многих паразитарных болезней объясняется возрастающими масштабами туризма, торговли и завозом и разведением экзотических животных, в том числе каракалов, пум, леопардов, львов, кустарниковых собак, африканских лисиц - фенек и эндемичных для России зверей: хорьков, дальневосточного леопарда, амурского тигра, волков, красных волков, одомашнивание в Сибири лисиц, которые являются дефинитивными хозяевами различных видов Trichuris, и среди этих видов чаще всего доминирует возбудитель паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis [4, 5, 6, 7].

Известно, что для получения сборов яиц гельминтов исследователи применяли следующие способы:

флотации, комбинированные от спонтанно зараженных трихоцефалезом животных [Котельников Г.А. - 1; Пасечник В.Е., и др. - 4].

Эти способы имеют следующие недостатки:

а) неизвестен вид паразита, так как кроме Trichuris (= Trichocephalus) vulpis в сборах могут быть яйца и других видов и родов гельминтов, паразитирующих у домашних и диких плотоядных: Thominx aerophilus (Creplin, 1839);

б) они требуют больших затрат времени и труда, так как для сборов больших количеств яиц трихоцефалов необходимо соответственно и большое количество фекалий от спонтанно и в сильной степени зараженных трихоцефалезом животных;

в) сильное загрязнение сборов яиц гельминтов остатками частиц непереваренных кормов и особенно наличие жиров от хищных, что затрудняет исследования в условиях лаборатории, поэтому он более приемлемый для проведения в полевых условиях;

г) количество яиц собранных этими методами при спонтанном трихоцефалезе часто бывает очень незначительным при слабой степени инвазии.

Известен способ сбора яиц путем разрушения половых органов (вульвы, вагины, матки) самок гельминтов [Пасечник В.Е. - 2, 3].

Этот способ имеет следующие недостатки:

1) необходимо разрушать половые органы самок гельминтов;

2) сбор яиц очень сильно загрязнен остатками разрушенных тканей женских половых органов самок паразита, что в процессе опыта вызывает развитие секундарной бактериальной микрофлоры, гниение и разрушение яиц гельминтов;

3) и самое главное, что при этом способе сбора получение до 100% оплодотворенных яиц невозможно, так как основная масса оплодотворенных яиц находится в дистальной части вагины и в вульве (во влагалище) и только частично в матке (известно, что в матке паразита яйца оплодотворяются неравномерно);

4) извлечение яиц из гонад паразита указанным выше способом дополнительно загрязняет материал большим количеством неоплодотворенных яиц;

5) в процессе опытов исследователям нужны для культивирования до инвазионной стадии с целью изучения в лабораторных условиях (биологии, терапии, эпизоотологии трихурисов) сборы до 100% оплодотворенных яиц и довольно часто возникает необходимость (при экспериментальном заражении лабораторных животных обезьян, хорей, кроликов, ягнят, телят и др.) применять дозы инвазионных яиц трихурисов с 1000 и даже более десятков тысяч яиц на одно животное.

Следовательно, исследователям по этим причинам получить с помощью этих известных способов сборов яиц: флотации, комбинированными; сбора яиц путем разрушения половых (= копулятивных) органов самок возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, в максимально большом количестве до 100% оплодотворенные яйца трихурисов (= трихоцефалов) для проведения экспериментов в лабораторных условиях очень сложно и зачастую практически невозможно.

Целью изобретения является использование впервые разработанного нами «Способа прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis», для экспериментов: культивирования до инвазионной стадии в лабораторных условиях при изучении биологии, терапии, эпизоотологии, проведении морфологических исследований для изучения микроструктуры, ультраструктуры яиц, для заражения лабораторных животных, с получением культуры яиц в максимально стерильных условиях, т.е. без загрязнений кусочками тканей матки, вагины, вульвы и без занесения секундарной микрофлоры из половых органов и внешней среды, и главное получить прижизненно; максимально естественным способом (приближенным к условиям жизнедеятельности самок трихоцефалов в организме хищных) до 100% оплодотворенные яйца от живых, половозрелых самок возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis.

Поставленная цель достигается тем, что при проведении сбора яиц от трихурисов применяют разработанный нами впервые «Способ прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis», заключающийся в отборе в пробирки только живых, половозрелых самок трихурисов (= трихоцефалов) Trichuris (= Trichocephalus) vulpis из толстой и слепой кишок спонтанно зараженных трихоцефалезом, при исследовании гельминтологическими методами на вскрытии диких или/и домашних хищных [по К.И. Скрябину - 9] в официнальный стерильный изотонический раствор (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica); и экспонировании пробирок с самками Trichuris (= Trichocephalus) vulpis при t=37,5°C-39°С в течение 5 часов в условиях термостата; отличающийся от известных способов сбора яиц: флотации, комбинированного способа разрушения половых органов самок гельминтов, тем, что:

нет необходимости в большом количестве спонтанно зараженных трихоцефалезом животных, так как можно собрать на вскрытии нескольких больных животных от 200 и более самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis и, следовательно, получить по предлагаемому способу сбора свыше 2000 оплодотворенных яиц (в отличие от методов копроовоскопии, когда исследователь ограничен в возможности использования в эксперименте большого количества животных, так как спонтанно зараженных трихоцефалезом хищных может быть в единственном экземпляре или в небольшом количестве (зоопарковые, цирковые, охотничье-промысловые, редкие и исчезающие виды: американская кустарниковая собака, красные волки, белые дальневосточные хорьки, африканские лисицы - фенек или породы собак: сфинксы и др.);

половые (= копулятивные) органы самок не разрушаются (не вскрываются) для получения оплодотворенных яиц от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (=Trichocephalus) vulpis (в отличие от способа сбора яиц путем разрушения (= вскрытия) гонад самок гельминтов), происходит прижизненная, произвольная, естественная откладка (= выделение) оплодотворенных яиц живыми, половозрелыми самками Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от известного способа сбора яиц гельминтов, при котором вскрывают (= разрушают) половые органы самки трихурисов(= трихоцефалов));

не происходит загрязнения сборов большим количеством неоплодотворенных яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от способа сбора яиц путем вскрытия (= разрушения) гонад самок гельминтов);

без загрязнения сбора яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis частицами непереваренного корма и особенно жиров от хищных (в отличие от способов сбора яиц гельминтов: флотации, комбинированного);

исключается необходимость исследовать большое количество фекалий от спонтанно зараженных трихоцефалезом диких или/и домашних хищных, чтобы получить максимальное количество оплодотворенных (1000 и более) яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от способов сбора яиц гельминтов: флотации, комбинированного);

достаточно иметь в опыте от 200 и более живых, половозрелых самок, чтобы получить 2000 и более оплодотворенных яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от способов сбора яиц: флотации, комбинированных, при которых необходимо исследовать большое количество фекалий от спонтанно зараженных трихоцефалезом диких или/и домашних хищных, чтобы собрать 1000 и более оплодотворенных яиц, что практически крайне сложно, при наличии в пробах экскрементов единичных яиц трихурисов);

без загрязнения сбора частицами разрушенных половых (= копулятивных) органов самок (вульвы, вагины, матки): Trichuris (=Trichocephalus) vulpis (в отличие от способа сбора яиц: вскрытия (= разрушения) половых органов самок гельминтов);

без развития секундарной микрофлоры и тем самым предотвращения гниения и разрушения в полученном сборе яиц трихоцефалов (= трихурисов) вида: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis;

исследователь (= экспериментатор) получает чистый, прижизненный сбор из до 100% оплодотворенных яиц от живых, половозрелых самок возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis.

Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом: известными способами флотации, комбинированным, сбора яиц, когда разрушают половые органы самок гельминтов, показывает, что заявляемый способ отличается от известных тем, что проводят раздельный (индивидуальный) только что извлеченных из слепой и толстой кишок методом гельминтологических вскрытий диких или/и домашних хищных сбор живых, половозрелых самок паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis в каждую отдельную пробирку с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) и экспонируют пробирки с самками Trichuris vulpis при t=37,5°C-39°С в течение 5 часов в условиях термостата.

После этой экспозиции экспериментаторы получают до 100% чистые сборы яиц, выделившихся прижизненно, естественно, произвольно из половых органов (вульвы, вагины, матки) живых, половозрелых самок трихурисов, так как живые, половозрелые самки власоглавов вынуждены откладывать произвольно, естественным путем в официнальный изотонический раствор (0,9%) хлорида натрия и, следовательно, в пробирки до 100% оплодотворенные яйца возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis.

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна». Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа (способов сборов яиц: флотации, комбинированного; разрушения женских половых органов самок), не выявлены в других технических решениях, и поэтому они обеспечивают заявляемому техническому решению соответствие критерию «существенные отличия».

Примеры конкретного выполнения предлагаемого способа

Пример 1. В г. Сороки (Республике Молдова) от 12 собак, спонтанно зараженных трихоцефалезом, проводили сбор яиц трихурисов (= трихоцефалов) известными способами (контроль) флотации, комбинированным и предлагаемым способом прижизненного сбора оплодотворенных яиц от 200 живых, половозрелых самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (опыт) в течение 5 рабочих часов.

При проведении сборов яиц известными методами копроовоскопии (флотации по Фюллеборну; комбинированным по Дарлингу - 1) (контроль) были получены следующие результаты:

количество яиц в сборе составило всего 890 яиц, что несомненно мало для проведения заражения лабораторных животных;

в сборе было много частиц непереваренного корма и особенно жиров, что значительно затрудняло исследования и количество яиц в сборах;

зараженных собак необходимо было для взятия свежих фекалий и в большом количестве периодически фиксировать, что отнимало значительное рабочее время (более 45 минут);

собранные методами флотации и комбинированными яйца трихурисов необходимо было промывать от солевых растворов не менее трех раз, что снижало количество яиц в сборах, так как часть яиц терялась в процессе промывки;

количество фекалий от зараженных собак иногда было очень мало для постановки проб для сбора яиц трихоцефалов (= трихурисов) способами: флотации, комбинированным в течение 5 часов рабочего времени.

Одновременно ставили опыт по получению от 200 живых, половозрелых самок яиц трихурисов (= трихоцефалов) по предлагаемому «Способу прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» (опыт).

200 живых, половозрелых самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, полученных от исследованных на вскрытии (из толстого кишечника и слепой кишки) спонтанно зараженных трихоцефалезом собак, помещали в каждую отдельную пробирку с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) и экспонировали их при t=37,5-39°C в течение 5 часов в условиях термостата (опыт).

По истечении 5 часов пробирки извлекли из термостата и подвели итоги результатов опыта по предлагаемому «Способу прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» и в сравнении с результатами контроля: сбора яиц известными способами: флотации, комбинированным:

подсчитали количество отложенных оплодотворенных яиц живыми, половозрелыми самками Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, что по нашим результатам составило 4570 яиц (опыт), а в контроле по известным способам сбора флотации, комбинированным - 890 яиц, что в последнем случае несомненно мало для проведения экспериментов по заражению лабораторных животных;

нет необходимости при предлагаемом нами «Способе прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» (опыт) в большом количестве спонтанно зараженных трихоцефалезом животных, так как можно собрать на вскрытии нескольких больных животных от 200 и более самок Trichuris vulpis (в отличие от известных способов сбора яиц: флотации, комбинированных, (контроль), когда исследователь ограничен в возможности использования в эксперименте большого количества животных, так как спонтанно зараженных трихоцефалезом хищных может быть в единственном числе или в небольшом количестве (зоопарковые, цирковые, редкие и исчезающие виды). В нашем примере 12 собак, а живых, половозрелых самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis - 200);

не происходит загрязнения по предлагаемому «Способу прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» (опыт) частицами непереваренного корма и особенно жиров от хищных (в отличие от известных способов сбора яиц гельминтов: (контроль): флотации, комбинированным);

исключается необходимость исследования большого количества фекалий от спонтанно зараженных трихоцефалезом диких или/и домашних хищных, с целью получения максимального количества (опыт) оплодотворенных (2000 и более) яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от известных способов сбора яиц (контроль) гельминтов: флотации, комбинированным).

В результате выяснилось, что при сборе яиц известными способами: флотации, комбинированным (контроль) были следующие недостатки:

а) в сборах было много остатков переваренного корма, особенно жиров;

б) взятие проб фекалий индивидуально из прямой кишки отнимало очень большую часть времени, так как необходимо было фиксировать каждый раз собак;

в) пробы фекалий от каждой собаки приходилось часто брать повторно, так как не всегда количество экскрементов было достаточно для исследований;

г) количество яиц трихурисов (= трихоцефалов) в 1 г проб фекалий при проведении исследований было незначительным.

Следовательно, в полевых условиях эти известные способы сбора (флотации, комбинированные) яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis могут быть использованы, если количество яиц в сборах достаточно для проведения экспериментов, но при лабораторных исследованиях:

1) культивирования яиц до формирования инвазионной личинки;

2) заражения подопытных животных, когда необходимо заразить лабораторных животных возрастающими дозами инвазионного материала: 500, 1000 и даже десятки тысяч инвазионных яиц на одно животное, такое количество собранных яиц явно недостаточно.

Данный пример убедительно показывает преимущество предлагаемого «Способа прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (=Trichocephalus) vulpis».

Пример 2. При исследовании толстого кишечника и слепой кишки на вскрытии 9 спонтанно зараженных трихоцефалезом собак от частных владельцев, бродячих собак, пастушьих, чабанских собак, 4-х лисиц в Республике Молдова были собраны для проведения опыта по двум способам:

1) по предлагаемому способу сбора (опыт) оплодотворенных яиц, при котором собирали только живых, половозрелых самок возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis;

2) по известному способу сбора (контроль) яиц гельминтов: разрушения гонад самок Trichuris vulpis, при котором собирают для проведения сборов яиц гельминтов подряд всех обнаруженных на вскрытии паразитов и, как правило, из собранных в период гельминтологических вскрытий хищных могут быть половозрелые и неполовозрелые (= юные) самки Trichuris (= Trichocephalus) vulpis.

Поэтому во многих случаях при выращивании яиц трихурисов до инвазионной стадии в лабораторных условиях исследователи сталкивались с многими проблемами, а именно основные из них - это:

развитием гнилостного процесса, обусловленного наличием в сборах, а следовательно, и в культуре яиц остатков разрушенных тканей половых органов самок Trichuris; наличием секундарной бактериальной микрофлоры, паразитических грибков, которые всегда заносятся из внешней среды, загрязненность сбора частицами непереваренного корма, жиров; наличием большого количества неоплодотворенных яиц (результат разрушения гонад не только половозрелых, но и неполовозрелых (= юных) самок Trichuris).

Собранные 450 самок Trichuris (=Trichocephalus) vulpis были использованы для получения сборов яиц по двум способам:

1-й (опыт) по заявляемому способу, т.е. индивидуального (в отдельную пробирку) сбора яиц, только от каждой живой, половозрелой самки Trichuris (= Trichocephalus) vulpis; активные, живые, половозрелые 225 самок трихоцефалов, прижизненно, произвольно, естественным путем откладывают оплодотворенные яйца в пробирки с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) в период экспозиции пробирок с самками Trichuris (= Trichocephalus) vulpis при t=37,5°C-39°С в течение 5 часов в условиях термостата.

И 2-м (контроль) известным способом сбора яиц путем разрушения половых органов (вульвы, вагины, матки) 225 самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, собранных подряд из толстого кишечника и слепой кишки, исследованных на вскрытии диких (лисиц) и домашних (собак) хищных.

В последующем отбирали подряд по 2500 яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis, полученных:

а) предлагаемым способом прижизненного сбора оплодотворенных яиц (1-й опыт);

б) известным способом сбора яиц: путем разрушения гонад самок гельминтов (2-й контроль).

Далее сравнивали результаты полученных этими способами сбора - оплодотворенность яиц и с этой целью:

а) культивировали яйца Trichuris (= Trichocephalus) vulpis возбудителя паразитарного зооноза (= трихоцефалеза) в термостате при t=20°-25°C в течение 26 дней до стадии инвазионной личинки;

б) исследовали яйца трихурисов Trichuris vulpis под микроскопом, чтобы сравнить предлагаемый нами «Способ прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» (1-й - опыт) и известный «Способ сбора яиц, когда исследователи разрушают половые органы самок трихурисов (= трихоцефалов): матки, вагины, вульвы, возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» (2-й - контроль).

В результате выяснилось, что в сборах 2500 яиц Trichuris (= Trichocephalus) vulpis по известному способу, при котором вскрывают (= разрушают) половые органы самок гельминтов: вульвы, вагины, матки (2-й - контроль):

развилось за 26 дней наблюдения 37% (930) оплодотворенных яиц;

в сборе было 63% (1570) неоплодотворенных яиц, что значительно затрудняло исследования;

все яйца были загрязнены большим количеством частиц разрушенных тканей половых органов (вульвы, вагины, матки) самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis;

значительную часть рабочего времени в период исследований известным способом сбора путем разрушения гонад самок Trichuris vulpis отнимала выборка неоплодотворенных от оплодотворенных яиц в сборе;

в сборе развивалась бактериальная микрофлора и паразитические грибки и это приводило к загниванию яиц, что значительно затрудняло проведение эксперимента.

А при предлагаемом «Способе (1-й опыт) сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» 2500 яиц возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis:

в сборе яиц отсутствовали частицы разрушенных тканей половых органов (вульвы, вагины, матки) самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis;

в предлагаемом способе сбора отсутствовали неоплодотворенные яйца;

до 100% случаев 2500 оплодотворенные яйца Trichuris (= Trichocephalus) vulpis развивались без наличия секундарной бактериальной микрофлоры.

Таким образом, результаты культивирования яиц, собранные по разработанному нами «Способу прижизненного сбора (in vitro) оплодотворенных яиц (1-й - опыт), подтвердили данные, полученные при использовании предлагаемого «Способа прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis», которые были выявлены нами впервые.

Использование предлагаемого «Способа прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis» от диких или/и домашних хищных обеспечивает по сравнению с известными способами: (3) флотации, комбинированным; сбора яиц путем разрушения женских половых органов самок гельминтов (вульвы, вагины, матки), следующие преимущества:

известен вид возбудителя болезни: Trichuris vulpis или/и Thominx (= Capillaria) aerophilus (в отличие от известных способов сбора яиц гельминтов: флотации и комбинированных, когда неизвестен вид паразита);

сокращает время и снижает трудоемкость исследований за счет исключения:

а) необходимости проведения исследований большого количества фекалий от спонтанно зараженных трихоцефалезом диких или/и домашних хищных с целью сбора максимального количества оплодотворенных яиц Trichuris vulpis (в отличие от известных способов сбора яиц: флотации, комбинированных);

б) необходимости проведения вскрытия женских половых органов самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от известного способа сбора яиц: разрушения вульвы, вагины, матки гельминтов);

в) необходимости в приготовлении и использовании различных химических растворов для сбора яиц Trichuris vulpis (в отличие от известных способов сбора яиц гельминтов: флотации и комбинированных);

г) необходимости в центрифуге (в отличие от известных способов сбора яиц гельминтов: флотации, комбинированных);

исключает загрязненность сбора яиц обрывками частиц тканей половых органов самок Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от способа разрушения гонад самок гельминтов);

исключает загрязненность сбора яиц от Trichuris (= Trichocephalus) vulpis частицами непереваренного корма и особенно жиров от хищных (собак, лисиц и др.) (в отличие от способов сбора яиц гельминтов: флотации, комбинированных);

исключает загнивание, развитие секундарной бактериальной инфекции в культуре, полученной предлагаемым нами способом прижизненного сбора оплодотворенных яиц от живых, половозрелых самок возбудителя паразитарного зооноза вида Trichuris (= Trichocephalus) vulpis;

способ прижизненного сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (= Trichocephalus) vulpis от диких или/и домашних хищных легко осуществим в лабораторных условиях;

предлагаемый способ обеспечивает чистый сбор (без обрывков частиц тканей половых органов самок (вульвы, вагины, матки) - в отличие от известного способа сбора яиц: разрушения гонад самок; без частиц непереваренного корма и жиров - в отличие от известных способов сбора яиц гельминтов), с до 100% оплодотворенными яйцами и в достаточно большом количестве (при необходимости до нескольких тысяч яиц и от известного вида гельминта: Trichuris vulpis - в отличие от известных способов сбора яиц: флотации, комбинированных) полученных естественным путем, произвольной, прижизненной откладкой яиц живыми, половозрелыми самками возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (= Trichocephalus) vulpis (в отличие от посмертного (после гибели паразита!) способа сбора яиц гельминтов - разрушения гонад самок), и предназначен для использования при экспериментальных паразитологических исследованиях в лабораторных условиях.

Источники информации

1. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. // Справочник. - М. - Колос - 1983 - 208 с.

2. Пасечник В.Е. Перекрестное заражение трихоцефалами приотарных собак и овец в Молдавии. // Бюл. Всесоюзного института гельминтологии. - М. - 1984. - Вып. - 37. - С. 57.

3. Пасечник В.Е. Дисс. кандидата ветеринарных наук. - М. - ВИГИС. - 2000. - С. 124-125.

4. Пасечник В.Е., Успенский А.В., Микулец Ю.И., Жданова В.Ю. // Методические рекомендации по диагностике, профилактике и мерам борьбы с гельминтозами цирковых животных. - М. - Изд. Россельхозакадемии. (=РАСХН). - 2008. - 50 с.

5. Пасечник В.Е. Первые смертельные случаи от трихоцефалеза ценнейших пород собак, зарегистрированные в России. // Материалы докладов научной конференции. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М. Изд. РАСХН, 2010. Вып., 11. - С. 351-353.

6. Пасечник В.Е. Распространение и видовой состав гельминтов и кокцидий у бурых медведей в Российской Федерации. // Российский паразитологический журнал. М. Изд. Россельхозакадемии. 2010, №1. С. 15-21

7. Пасечник В.Е. Гельминтозоонозы Отряда Camivora (Хищных) в условиях Московского цирка «Шапито». // Материалы докладов научной конференции. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М. Изд. Россельхозакадемии. - 2011. - Вып. 12. - С. 377-379.

8. Романенко Н.А., Малышева Н.С. Экологические основы профилактики паразитарных болезней. - М., 2006. - 327 с.: ил.

9. Скрябин К.И. Метод полных гельминтологических вскрытий позвоночных, включая человека. // Изд. 1-го Московского государственного университета. - М. - 1928 - 36 с.

10. Скрябин К.И., Петров A.M. Трихоцефалезы плотоядных. // Основы ветеринарной нематодологии. - М. - Изд. Колос.- 1964. - С. 476-478.

11. Sakano Т.; Hamamoto К.; Kobayayashi Y.; Sakata Y.; Tsuji М.; Usui T. Visceral larva migrans causet by Trichuris vulpis. // Archves of Disease in Childhood. - 1980. - V. 55. - N 8. - P. 631-633.

12. Singh S, Samantaray J.C., Singh H., Das G.B., Verma I.C. Trichuris vulpis infection in an Indian tribal population. // Journal of Parasithology. - 1993. - 79 (3). - P. 457-458.

Способ сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя паразитарного зооноза: Trichuris (=Trichocephalus) vulpis, заключающийся в отборе только живых, половозрелых самок Trichuris vulpis из толстой, слепой кишок спонтанно зараженных трихоцефалами при исследовании гельминтологическими методами на вскрытии диких или/и домашних хищных в отдельные пробирки с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) и экспозицией пробирок с самками Trichuris vulpis при t=37,5°C - 39°C в течение 5 часов в условиях термостата.