Штамм бактерий halobacterium salinarum - продуцент бактериородопсина

Авторы патента:

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

Владельцы патента RU 2558232:

Тюрин Сергей Ананьевич (RU)
Погорелов Олег Вадимович (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Описан штамм бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 - продуцент бактериородопсина. Штамм Halobacterium salinarum ST 3 получен путем многоступенчатой селекции штамма галофильных бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-10425 без предварительной обработки химическими реагентами и депонирован в ВКПМ под номером В-11850. Штамм Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 превосходит по продуктивности (биомассы и бактериородопсина) прототип ВКПМ В-10425. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству физиологически активных соединений, и касается штамма-продуцента бактериородопсина. Штамм Halobacterium salinarum ST 3 получен путем многоступенчатой селекции штамма галофильных бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-10425 без предварительной обработки химическими реагентами и депонирован в ВКПМ под регистрационным номером В-11850. Штамм Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 превосходит по продуктивности (биомассы и бактериородопсина) прототип ВКПМ В-10425.

Известен штамм бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-10425 - продуцент бактериородопсина, выбранный нами в качестве прототипа, значительно превосходящий по продуктивности (биомассы и бактериородопсина) штаммы бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-9451 и Halobacterium salinarum ВКПМ В-9025 [1].

Задача заявляемого изобретения - получить штамм Halobacterium salinarum с повышенным уровнем синтеза биомассы и бактериородопсина.

Задача решена путем получения штамма бактерий Halobacterium salinarum ST 3, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) как Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 и способного синтезировать бактериородопсин на 30% более, чем ВКПМ В-10425 при различных условиях культивирования. Заявляемый штамм получен путем многоступенчатой селекции штамма галофильных бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-10425, без предварительной обработки химическими реагентами.

Штамм ВКПМ В-11850 имеет следующие характеристики:

Культурально-морфологические признаки

Величина клеток трехсуточной культуры 2-5×0,5-0,9 мкм, одиночные палочки, иногда объединены по 2-3 палочки.

Подвижен, максимум подвижности на 4 сутки роста. Спор не образует, газовых вакуолей не содержит.

Колонии полупрозрачные, гладкие с гладким краем, темно-красного цвета, в среду не врастают, легко снимаются петлей. Культура является экстремальным галлофилом, требует присутствия в среде 25% NaCl. При содержании хлористого натрия ниже 20% клетки теряют свою окраску, а при попадании в среду с содержанием NaCl менее 15% клетки очень быстро лизируются.

Хорошо растет при 36-40°C, в солевой жидкой среде, имеющей состав (мас.%): пептон - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, NaCl - 25, MgSO₄ - 2, KCl - 0,2, цитрат натрия - 0,3, глицерин - 0,1, CaCl₂ - 0,02, вода - остальное, pH среды - 7,2 - 7,4, а также солевой агаризованной среде, имеющей состав (мас.%): пептон - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, NaCl - 25, MgSO₄ - 2, KCl - 0,2, цитрат натрия - 0,3, CaCl₂ - 0,02, агар - 1,5, вода - остальное, pH среды - 7,2-7,4.

Отношение к температуре: хорошо растет при 36-40°C, оптимальная температура 38°C.

Отношение к pH среды: хорошо растет при 7,2-7,4, оптимум pH - 7,3.

Физиолого-биохимические признаки

Факультативный аэроб, прототроф, сахарозу, мальтозу, лактозу, фруктозу не подкисляет, не растет на картофеле. Желатину не разжижает. Антагонистических свойств не обнаружено.

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16 S рРНК, штамм наиболее близок к видам Halobacterium salinarum (99,9%).

Как и все представители рода Halobacterium заявляемый штамм непатогенен и может быть отнесен к группе безопасности №1 (на основании заключения Коллекции АТСС). Работа с ним не требует специальных мер предосторожности.

Не является генетически модифицированным штаммом.

Хранение штамма: Хорошо хранится на агаризованной среде в бакпечатках и на косяках в условиях холодильника в течение года. Для длительного хранения штамма используется лиофилизация свежей биомассы.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1. Продуктивность штамма Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 при выращивании в колбах.

Заявляемый штамм ВКПМ В-11850, а также используемый в качестве контроля штамм ВКПМ В-10425 (прототип) выращивали в колбах емкостью 750 мл в объеме среды выращивания 300 мл при освещении люминесцентными лампами дневного света (L 18 W/530, «Osram», Germany) до стационарной стадии роста (6 суток) на круговой качалке при 37°C и встряхивании 100 об/мин. Для выращивания использовали среду следующего состава (мас.%): пептон - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, NaCl - 25, MgSO₄ - 2, KCl - 0,2, цитрат натрия - 0,3, глицерин - 0,1, CaCl₂ - 0,02, вода - остальное, pH среды - 7,2-7,4.

Осадок отделяли центрифугированием при 7000 g 10 мин и взвешивали полученную биомассу.

Затем к осадку приливали дистиллированную воду в количестве, равном объему среды выращивания, и инкубировали при встряхивании в условиях комнатной температуры в течение 3 часов.

Осадок отделяли центрифугированием, супернатант использовали для определения количества бактериородопсина при длине волны 570 нм. Концентрацию бактериородопсина определяли по следующей формуле:

C=D·M_r·V_р-ра·V_кюв.·/E_бр·V_пробы,

где

D - оптическая плотность раствора при длине волны 570 нм;

M_r - молекулярная масса бактериородопсина (26700);

V_p-pa - общий объем раствора бактериородопсина;

V_кюв. - объем раствора бактериородопсина в спектрофотометрической кювете;

E_бр - коэффициент молярного поглощения бактериородопсина (63000 М^-1 см^-1);

V_пробы - объем пробы бактериородопсина в спектрофотометрической кювете.

Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1
Исследуемые штаммы	Вес биомассы (г)	Количество бактериородопсина (мг)
ВКПМ В-10425	6	20
ВКПМ В-11850	8	27

Из приведенных в таблице 1 результатов видно, что заявляемый штамм В-11850 превосходит прототип ВКПМ В-10425 как по количеству биомассы, так и по концентрации бактериородопсина после выращивания в колбах.

ПРИМЕР 2. Продуктивность штамма Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 при выращивании в ферментере.

Заявляемый штамм ВКПМ В-11850, а также используемый в качестве контроля штамм ВКПМ В-10425 (прототип) выращивали в ферментере BioFlo 110 (New Brunswick Scientific, USA), в объеме среды культивирования 10000 мл. В качестве среды культивирования использовали среду, как в примере 1. В ферментере поддерживали постоянную температуру 37°C, перемешивание: первые 24 часа 400 об/мин, на вторые сутки 600 об/мин, на 3 сутки 800 об/мин на 7 сутки 1000 об/мин. Аэрация во время ферментации - 0,5 л/мин. Исследуемые штаммы выращивали до стационарной стадии роста. Далее определяли вес биомассы и содержание бактериородопсина в среде выращивания, как в примере 1. Полученные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2
Исследуемые штаммы	Вес биомассы (г)	Количество бактериородопсина (мг)
ВКПМ В-10425	45	144
ВКПМ В-11850	57	170

Как следует из результатов, приведенных в таблицах 1 и 2, заявляемый штамм ВКПМ В-11850 превосходит прототип ВКПМ В-10425 по количеству синтезируемых при различных условиях культивирования биомассы и бактериородопсина.

Источники информации

1. Патент РФ № 2416634.

Штамм бактерий Halobacterium salinarum ВКПМ В-11850 - продуцент бактериородопсина.

Получен штамм бактерий Halobacterium salinarum D96N ВКПМ В-11953 - продуцент бактериородопсина, значительно превосходящий по продуктивности (биомассы и бактериородопсина) как ближайший аналог, так и другие, выбранные в качестве контролей штаммы в различных условиях культивирования.

Ферментационная среда и способ получения рекомбинантных белков // 2556120

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к ферментационной среде и способу получения рекомбинатных белков с использованием данной среды. Ферментационная среда для получения рекомбинантных белков, выбранных из группы, включающей Г-КСФ, стрептокиназу и липазу, с использованием микроорганизмов, выбранных из группы, включающей: E.

Композиция и способ для контроля численности моллюсков // 2549697

Изобретения относятся к области биотехнологии. Предложены композиция и способ для контроля численности моллюсков классов Gastropoda и Bivalvia.

Соединение а-87774 или его соль, способ получения соединения и его соли и агрохимикат, содержащий соединение или его соль в качестве активного ингредиента // 2545403

Группа изобретений относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложены соединения A-87774, представленные соединениями A-87774-1, A-87774-2, A-87774-3 или их солью, способ получения соединений A-87774, штамм Streptomyces sp.

Выделенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, вовлеченный в биосинтез пирипиропена а, вектор и клетка-хозяин содержащие такой полинуклеотид и способ получения предшественника пирипиропена а (варианты) // 2540017

Представленные изобретения касаются выделенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, вовлеченный в биосинтез пирипиропена А, вектора и клетки-хозяина, включающих такой полипептид, и способов получения предшественников пирипиропена А, включающих культивирование клетки-хозяина.

Способ получения бруцеллезного l-антигена // 2533811

Изобретение касается способа получения бруцеллезного L-антигена. Представленный способ включает стадии.

Штамм bacillus lentus - продуцент бактериоциноподобной субстанции антимикробного действия и способ получения бактериоциноподобной субстанции // 2530552

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм Bacillus lentus «ГКПМ - Оболенск» B-7150 - продуцент бактериоциноподобной субстанции широкого спектра антимикробного действия, имеющей молекулярную массу по данным SDS-PAGE около 4 кДа.

Изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным // 2528859

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штамм Enterococcus faecium 8G-1 (NRRL В-50173), штамм Enterococcus faecium 8G-73 (NRRL B-50172) и штамм Bacillus pumilus 8G-134 (NRRL B-50174), обеспечивающие улучшение состояния здоровья жвачных животных.

Слитый белок тиоредоксина и домена 4 инфестина, способ его получения, экспрессионная плазмидная днк, кодирующая слитый белок, и бактерия рода escherichia coli, трансформированная такой плазмидной днк // 2528251

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются слитого белка для специфического ингибирования свертывания крови, экспрессионной плазмидной ДНК, кодирующей такой слитый белок, бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной такой ДНК, и способу получения слитого белка.

Способ получения ферментированного натурального продукта // 2528017

Изобретение относится к способу получения ферментированного натурального продукта. Способ предусматривает получение первого ферментного экстракта в главном ферментере путем ферментирования сырья, выбранного из фруктов, овощей, бобовых, грибов, орехов, пшеницы, риса, трав, корней, листьев, цветов, по отдельности или в комбинации в присутствии микроорганизмов в количестве от 106 до 1012 клеток/мл, предпочтительно от 108 до 1010 клеток/мл.

Штамм бактерий halobacterium salinarum - продуцент бактериородопсина // 2558230

Способ получения нанодисперсной добавки для бетона // 2557412

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения нанодисперсной добавки для бетона.

Питательная среда для культивирования консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов // 2557395

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нановермикулит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Питательная среда для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов // 2557393

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нанобентонит и дистиллированную воду.

Питательная среда для культивирования консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов // 2557392

Изобретение относится биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наносапропель и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов // 2557391

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наноцеолит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Штамм bifidobacterium longum, пригодный для применения в иммуномодуляции, индукции продукции цитокинов, лечении аутоиммунного заболевания, контроле отношения il - 10:il - 12, и его использование // 2557310

Группа изобретений относится к штамму Bifidobacterium longum NCIMB 41675, составу, его содержащему, и продукту питанию, содержащему указанные штамм или состав. Предложенный штамм обладает способностью к индукции продукции цитокинов и контролю отношения IL-10:IL-12 и пригоден для применения в иммуномодуляции, лечении аутоиммунного заболевания.

Способ получения пробиотического препарата для кормлении крупного рогатого скота мясных пород // 2557302

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения пробиотического препарата иммобилизованных бифидобактерий для кормления крупного рогатого скота мясных пород.

Способ получения аргинина с использованием corynebacterium glutamicum атсс 21831 или corynebacterium glutamicum атсс 21493 в ферментационной среде, содержащей в качестве источника углерода жом маниока или семена джекфрута // 2557294

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены варианты способа получения аргинина посредством ферментации агропромышленных отходов, в том числе крахмалосодержащих, с получением ферментированной жидкости, содержащей аргинин, и выделения аргинина из ферментированной жидкости.

Живые аттенуированные вакцины // 2556813

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются cпособа предотвращения или лечения заболевания у субъекта, вызванного патогенным организмом, путем введения вакцинной композиции, вакцинной композиции и ее применения.

Полифункциональное средство для растениеводства // 2558291

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм споровых бактерий Bacillus megaterium 501 GR, обладающий ростостимулирующим эффектом, депонирован в ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии под регистрационным номером RCAM00875 и может быть использован в качестве полифункционального средства для растениеводства, улучшая фосфорное питание растений, а также способствуя биоремедиации загрязненных пестицидами почв. Изобретение позволяет повысить продуктивность растений, а также защитить растения от фитопатогенных грибов и микроорганизмов, вызывающих заболевания корней растений. 13 табл.