Способы получения косметической композиции из среды, получаемой после выклева икры salmonidae, и ее применения для улучшения косметического состояния кожи

Изобретение относится к области косметологии и представляет собой способ улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин, мимических морщинок, гиперпигментации, вялости, сухости кожи, шелушения и/или потери влаги испарением через кожу млекопитающего, который включает введение млекопитающему косметической композиции, где композиция получена способом, который включает по меньшей мере следующие этапы: суспендирование икры Salmonidae, предпочтительно икры лосося, в минимальном объеме воды, инициирование синхронизированного быстрого выклева икры, предпочтительно так, чтобы в течение менее 2 часов завершался выклев более 95% эмбрионов, фильтрование икорной массы после выклева с целью получения среды, получаемой после выклева, и фильтрование среды, получаемой после выклева, с получением композиции, где этап фильтрования среды, получаемой после выклева, включает по меньшей мере следующие этапы: фильтрование среды, получаемой после выклева, с помощью фильтра, размер пор которого составляет по меньшей мере 5 мкм, и сбор фильтрата, фильтрование фильтрата, полученного на этапе (i) с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,30 до 0,60 мкм, и сбор фильтрата, замену воды в фильтрате, полученном при проведении этапа (ii), фармацевтически приемлемым буфером путем осуществления диафильтрации с применением фильтра с эксклюзионным размером, составляющим менее 15 кДа, фильтрование раствора, полученного при проведении этапа (iii), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,15 до 0,30 мкм, и сбор фильтрата и получение косметической композиции из фильтрата, полученного при проведении этапа (iv). Изобретение обеспечивает более эффективное улучшение косметического состояния кожи. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 пр., 1 табл., 7 ил.

 

Настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей полипептиды или части полипептидов, которые могут быть получены из среды, получаемой после выклева Salmonidae (лососевых) (т.е. массы, получаемой после выклева личинок рыб семейства лососевых), для оказания различного воздействия на кожу. В частности, композиция пригодна для изменения, предпочтительно улучшения, косметического состояния состарившейся кожи.

Кожа является одним из наиболее уязвимых органов тела. Кожа, непосредственно или опосредованно, постоянно находится в постоянном взаимодействии с внешними раздражителями и часто подвергается воздействию и влиянию факторов окружающей среды. Действительно, кожа может рассматриваться как первый рубеж, контактирующий с внешним миром. Такое постоянное воздействие может приводить к неприятным и/или нежелательным физическим и видимым изменениям кожи, в частности, изменениям косметического состояния кожи. Несмотря на то, что такие изменения могут и не угрожать здоровью индивидуума, они могут вызывать физический дискомфорт или приводить к образованию видимых дефектов. Действительно, поскольку кожа часто находятся на виду, изменение их внешнего вида может вызывать психологический стресс. Таким образом, существует постоянная необходимость и спрос на эффективные средства ухода, предназначенные для поддержания, восстановления или улучшения состояния кожи и, в частности, для восстановления молодого внешнего вида кожи.

Кожа представляет собой самый крупный орган тела, составляя приблизительно 12-16 процентов его массы. Она имеет ряд жизненно необходимых функций, одновременно являясь барьером и регулятором баланса между воздействиями внешней среды и контролируемым состоянием среды внутри организма.

Кожа состоит из 3 слоев: эпидермиса, дермы и подкожного слоя (субкутиса). Эпидермис является самым верхним, эпителиальным слоем кожи. Он действует как физический барьер, предотвращающий потерю организмом воды, а также предотвращающий поступление веществ и организмов внутрь тела. Его толщина различна на разных участках тела.

Эпидермис состоит из многослойного плоского эпителия, т.е. он состоит из слоев уплощенных клеток. Кожа, волосы и ногти подвергаются кератинизации (ороговению), что означает, что они имеют омертвевшую, затвердевшую гидрофобную поверхность, образуемую белком, называемым кератином. Благодаря содержанию внеклеточных липидов, связанных с кератиноцитами, в особенности, в среднем слое эпидермиса (stratum lucidum, т.е. блестящем слое) эпидермис непроницаем. Слизистые оболочки (например, пищевода, ротовой и глоточной полостей, репродуктивных органов и другие) в основном не подвергаются кератинизации и остаются влажными. Эпидермис включает три основных типа клеток: кератиноциты (клетки кожи), меланоциты (клетки, вырабатывающие пигмент) и клетки Лангерганса (иммунные клетки). Четвертым, менее преобладающим типом клеток эпидермиса являются клетки Меркеля.

По мере продвижения к внешнему слою, кератиноциты становятся зрелыми и накапливают кератин. В конечном итоге они отваливаются или отшелушиваются. Они образуют четыре или пять отчетливо различимых слоев, среди которых, начиная от самого внешнего и заканчивая самым глубоким, можно выделить следующие слои: (i) Stratum corneum (роговой слой), содержащий отмершие высохшие отвердевшие клетки, не имеющие ядер, (ii) Stratum granulosum (зернистый слой), включающий клетки, содержащие базофильные гранулы (зерна) и отделенный снаружи от Stratum corneum тонким слоем Stratum lucidum, (iii) Stratum spinulosum (шиповатый слой или слой шиповатых клеток), в котором клетки постепенно уплощаются по мере их продвижения вверх, и (iv) Stratum basale (базальный слой), содержащий цилиндрические (призматические, столбчатые) регенеративный клетки.

Непосредственно под эпидермисом находится базальная мембрана, т.е. специальная структура, расположенная между эпидермисом и дермой.

Дерма представляет собой волокнистую соединительную ткань или поддерживающий слой кожи. Основными волокнами являются переплетающиеся между собой коллагеновые волокна и эластин.

Подкожный слой представляет собой слой жира, расположенный непосредственно под дермой и эпидермисом. Он также называется подкожной тканью, гиподермой или поверхностным слоем ткани. Подкожный слой в основном состоит из жировых клеток (адипоцитов), нервов и кровеносных сосудов.

Новые эпителиальные клетки кожи образуются в более глубоко лежащем слое кожи, Stratum granulosum. С течением времени клетки перемещаются к поверхности кожи, и их кислотность повышается. В течение 30-суточного периода своего перемещения они отмирают и насыщаются кератином. Кератин и связанные с ним липиды являются важными веществами, поскольку они защищают кожу от внешних воздействий.

На косметическое состояние кожи может отрицательно влиять множество факторов, которые включают заболевания, повреждения, влияние окружающей среды, возраст, уровни гормонов, прием медикаментов, наносимые наружно или принимаемые вовнутрь материалы, генетические факторы или комбинация этих и других факторов. Универсальным фактором является возрастное ухудшение косметического состояния кожи, в частности, фотостарение (старение кожи от воздействия ультрафиолетовых лучей), т.е. дерматогелиоз. Это ухудшение может проявляться в неровностях или аномалиях кожи, которые могут представлять собой, например, сухость кожи, морщины, мимические морщинки, повышенную вялость (отвисание) или измененную пигментацию.

Фотостарение представляет собой термин, принятый для обозначения характерных изменений, вызываемых хроническим воздействием УФА (ультрафиолетовых лучей спектра А) и УФВ (ультрафиолетовых лучей спектра В). Ухудшение биологического функционирования и способности справляться с метаболическим стрессом является одним из основных результатов процесса старения. Старение представляет собой сложный, постепенный процесс, который также приводит к функциональным и эстетическим изменениям кожи.

Фотостарение представляет собой процесс старения кожи в результате долговременного непрерывного воздействия на кожу ультрафиолетового (УФ) излучения с длиной волны приблизительно 245-290 нм, которое может представлять собой как естественный, так и искусственный свет. Фотостарение также известно как старение кожи, в частности, кожи лица, ушей, шеи и рук под действием УФА и УФВ излучения.

Наиболее часто встречающимися признаками старения кожи является сухость и/или шелушение кожи. Несмотря на то, что некоторые индивидуумы больше предрасположены к сухости и/или шелушению кожи, сухая и/или шелушащаяся кожа может появляться у любого индивидуума независимо от его возраста, пола или типа кожи.

Кожа становится сухой, когда в наружном слое кожи (роговой и блестящий слои вместе) имеется недостаток воды, вызываемый потерями влаги испарением через кожу (трансэпидермальной потерей влаги, англ. transepidermal water loss, сокращенно TEWL). Если этот слой хорошо увлажнен, то это уменьшает потери влаги через кожу и позволяет противостоять воздействию раздражителей, аллергенов и микробов. Однако, при высыхании рогового слоя, его защитная способность понижается. Это приводит к еще большим потерям влаги, что делает кожу уязвимой к воздействиям окружающей среды.

В идеале содержание воды в роговом слое составляет от 10% до 30%. Содержащаяся вода придает коже мягкую, гладкую и гибкую структуру, т.е. характеристики, ассоциирующиеся с молодым внешним видом кожи. Вода поступает из атмосферы, нижележащих слоев кожи и пота. Сало, вырабатываемое кожными железами, и жирные вещества, вырабатываемые клетками кожи, действуют как натуральные увлажняющие средства, что позволяет роговому слою удерживать воду.

Организм непрерывно теряет воду за счет испарения с поверхности кожи (TEWL). В обычных условиях скорость испарения невелика, и происходит адекватное восполнение воды. Характерные признаки и симптомы сухости кожи возникают, когда скорость потери влаги превышает скорость восполнение воды, и содержание воды в роговом слое становится менее 10%.

Чрезвычайно желательно создать увлажняющие средства, улучшающие или устраняющие сухость и/или шелушение кожи, то есть улучшающие косметическое состояние кожи. Несмотря на то, что в данной области техники известно множество увлажняющих средств, все еще имеется необходимость использования натуральных продуктов, обладающих эффективным, но мягким действием.

Клетки эпидермиса, имеющие нежелательную или избыточную пигментацию, т.е. гиперпигментацию, например, печеночные пятна, являются другим обычным признаком старения кожи. Традиционно для удаления клеток эпидермиса, ухудшающих косметическое состояние кожи, может быть применено принудительное отшелушивание.

При отшелушивании удаляют наружный слой эпидермиса, обнажая более молодые клетки кожи, находящиеся под ним. Отшелушивание может быть выполнено физическими средствами (т.е. шлифовкой кожи) или химическими средствами. Химические эксфолианты (отшелушивающие средства) включают скрабы, содержащие салициловую кислоту, гликолевую кислоту, фруктовые ферменты, лимонную кислоту или яблочную кислоту, и могут быть использованы в высоких концентрациях дерматологом или в более низких концентрациях в изделиях, поступающих в розничную торговлю. Химическое отшелушивание может включать применение средств, содержащих альфа-гидроксикислоты (от англ. alpha hydroxy acid, сокращенно AHA) или бета-гидроксикислоты (от англ. beta hydroxy acid, сокращенно ВНА) или ферменты, разжижающие клееподобные вещества, удерживающие клетки на месте в местах соединения клеток, что позволяет отделять такие клетки. Такой тип отшелушивания рекомендован людям, проходящим лечение от угревой сыпи (акне).

Самым серьезным недостатком отшелушивания является высокая стоимость некоторых средств и способов, применяемых для проведения отшелушивания. Отшелушивание может вызывать начальное покраснение кожи. Ближе к окончанию химического пилинга кожа становится "перламутровой", и цвет поверхности кожи варьируется от очень белого до серого.

Таким образом, желательно создание эффективных способов уменьшения гиперпигментации кожи, но более мягких, чем отшелушивание.

Таким образом, имеется необходимость создания способов терапии, подходящих для улучшения эстетического внешнего вида кожи. Другими словами, желательно создание способов улучшения косметического состояния кожи. В частности, имеется необходимость создания способов восстановления молодого вида состарившейся кожи и/или способов борьбы с признаками старения кожи.

Неожиданно обнаружили, что композиция, содержащая молекулы, а именно, полипептиды или части полипептидов, находящиеся в среде, получаемой после выклева Salmonidae, оказывают заметное воздействие, проявляющееся в улучшении косметического состояния кожи, и, в частности, уменьшение физических признаков или симптомов, связанных со старением кожи.

Выклев эмбрионов рыб происходит под действием различных ферментов, известных как ферменты выклева, которые могут разлагать белковые оболочки икринок. Ооциты всех позвоночных имеют характерные внеклеточные оболочки, называемые желточными оболочками, яйцевыми оболочками или ворсинчатыми оболочками (хорион), которые образованы различными полипептидами, формирующими поперечные связи. Протеазы с различной специфической активностью воздействуют на хорион, разрушая оболочку икринки и способствуя высвобождению эмбриона рыбы. Таким образом, текучая среда, в которой происходит выклев эмбриона, содержит множество полипептидов и частей полипептидов, т.е. продуктов разложения полипептидов.

Неожиданно обнаружили, что композиции, содержащие белки и части полипептидов, извлекаемые из среды, получаемой после выклева Salmonidae, оказывают выраженное воздействие на косметическое состояние кожи. Не прибегая к какой-либо теории, можно отметить, что в приведенных Примерах показано, что композиции, содержащие полипептиды и части полипептидов, встречающиеся в среде, получаемой после выклева Salmonidae, могут восстанавливать внешнюю молодость кожи. Полагают, что комбинация полипептидов и частей полипептидов, содержащихся в рассматриваемых композициях (которые, как полагают, содержат по меньшей мере 50 различных полипептидов или частей полипептидов), может взаимодействовать с белками различных типов, которые присутствуют в дерме и эпидермисе кожи. Также полагают, что комбинация полипептидов и частей полипептидов может обладать синергетическим эффектом, и что воздействие композиции на косметический/эстетический внешний вид кожи может по меньшей мере частично объясняться упомянутыми воздействиями.

Соответственно, в наиболее широком понимании изобретение может рассматриваться как относящееся к композиции, содержащей полипептиды и части полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, с целью их применения или в способах улучшения эстетического внешнего вида кожи. Другими словами, композицию, содержащую полипептиды и части полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, как указано в настоящем описании, применяют для или в способах улучшения косметического состояния кожи. В одном из особенно предпочтительных аспектов изобретение может рассматриваться как относящееся к композиции, содержащей полипептиды и части полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, как указано в настоящем описании, с целью применения или в способах восстановления молодого вида состарившейся кожи и/или борьбы с признаками старения кожи. В настоящем описании вышеупомянутую композицию также называют "экстрактом среды, получаемой после выклева Salmonidae". Кроме полипептидов и частей полипептидов такой экстракт может содержать природный небелковый материал.

Из приведенного ниже описания следует, что композиция, содержащая полипептиды и части полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, как рассмотрено в настоящем описании, может быть предоставлена в виде косметической композиции, которая содержит одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или разбавителей.

Таким образом, один из аспектов настоящего изобретения относится к способу получения косметической композиции, рассматриваемой в настоящем описании, из среды, получаемой после выклева Salmonidae (например, среды, получаемой после выклева лосося), включающему по меньшей мере следующие этапы:

a) суспендирование икры Salmonidae в минимальном объеме воды (например, эквивалентном объему икры или менее);

b) инициирование синхронизированного, быстрого выклева икры (предпочтительно так, чтобы в течение менее 2 часов завершался выклев более 95% эмбрионов);

c) необязательно фильтрование икорной массы после выклева с целью получения среды, получаемой после выклева; и

а) фильтрование среды, получаемой после выклева, с целью получения полипептида и/или композиции, причем этап фильтрования среды, получаемой после выклева, включает по меньшей мере следующие этапы:

(i) фильтрование среды, получаемой после выклева, с помощью фильтра, размер пор которого составляет по меньшей мере 5 мкм, предпочтительно от 5 до 15 мкм, и более предпочтительно размер пор которого составляет 7 мкм, и сбор фильтрата;

(ii) фильтрование фильтрата, полученного в этапе (i), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,30 до 0,60 мкм, предпочтительно с размером пор от 0,35 до 0,55 мкм, более предпочтительно от 0,40 до 0,50 мкм, наиболее предпочтительно 0,45 мкм, и сбор фильтрата;

(iii) замену воды в фильтрате, полученном при проведении этапа (ii), фармацевтически приемлемым буфером;

(iv) фильтрование раствора, полученного при проведении этапа (iii), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,15 до 0,30 мкм, предпочтительно с размером пор, составляющим 0,22 мкм, и сбор фильтрата; и

(v) получение косметической композиции из фильтрата, полученного при проведении этапа (iv).

Этап замены воды в фильтрате может быть выполнен любым подходящим способом, известным в данной области техники, например, диафильтрацией или диализом. В особенно предпочтительном примере осуществления этот этап выполняют диафильтрацией через фильтр, имеющий эксклюзионный размер, составляющий менее 15 кДа, предпочтительно 10 кДа или менее, например, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 кДа или менее.

В диафильтрации применяют ультрафильтрационные мембраны для удаления из раствора, например, солей или других ненужных или нежелательных растворенных микропримесей или, в случае обмена растворителя, например, буфера раствора. Небольшие молекулы отделяют от раствора, оставляя более крупные молекулы в ретентате (материале, который не проходит через фильтр). Растворенные микропримеси и растворители, например, вода, обычно легко вымываются через мембрану. Обычно промывка приблизительно 3 объемами растворителя диафильтрации удаляет 95% растворенных микропримесей. Таким образом, вышеописанный фильтрат, полученный при проведении этапа (ii), сначала подвергают диафильтрации, что приводит к концентрированию ретентата в результате прохождения части раствора (который содержит растворимые загрязнения/ нежелательную фракцию среды, получаемой после выклева) через мембрану. Затем ретентат разбавляют фармацевтически приемлемым буфером, например, раствором, содержащим 0,5 мМ фосфата натрия и 1 мМ хлорида натрия, солевым раствором, содержащим фосфатный буфер, и т.д. При необходимости разбавленный ретентат может быть многократно подвергнут диафильтрации. Обычно, перед проведением этапа (iv) ретентат разбавляют таким образом, чтобы фильтрат, получаемый при проведении этапа (iv), обладал ферментативной активностью, составляющей от 3000 до 5000 мЕ/л (микроединиц на литр), предпочтительно от 3000 до 4000 мЕ/л, и наиболее предпочтительно приблизительно 3400 мЕ/л. Ферментативная активность фильтрата может быть определена как способность фильтрата расщеплять хромогенный субстрат Фактора Ха (СН₃ОСО-D-CHA-Gly-Arg-pNA-АсОН, Sigma Aldrich, номер продукта: F3301-25MG). Перед проведением этапа диафильтрации ферментативная активность среды, получаемой после выклева, может составлять от 10 до 150000 мЕ/л.

Хромогенный субстрат Фактора Ха (Sigma-Aldrich) расщепляется ферментом, присутствующим в среде, получаемой после выклева, с образованием желтого продукта, концентрация которого может быть предпочтительно определена с помощью спектрофотометрического определения при длине волны 405 нм. Типичное определение включает добавление 100 мкл раствора среды, получаем после выклева, который образуется при проведении этапа (iii) описанного выше способа, к 600 мкл раствора субстрата, содержащего 10 мкл хромогенного субстрата Фактора Ха (10 мг/мл), 70 мкл 0,2 М Tris-HCl при pH 8.5 и 520 мкл деионизованной H₂O. Предпочтительно изменение поглощающей способности может быть измерено в течение 5-20 минут, обычно 10 минут. Для нахождения ферментативной активности на 1 мл образца результат умножают на соответствующий множитель, например, 10 (для определения в течение 10 минут). Для определения активности среды, получаемой после выклева, могут быть использованы другие соответствующие и эквивалентные субстраты.

Синхронизация выклева может быть осуществлена любым подходящим способом, известным в данной области техники. Например, развитие икры может быть синхронизовано с помощью манипуляций с освещением, например, переносом икры со света (который замедляет выклев) в условия, где отсутствует освещение. Для синхронизации выклева также могут быть использованы манипуляции с температурой раствора, деоксигенация (Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, стр. 417-430) и стимуляция электричеством. Как было отмечено выше, минимальный объем воды может быть равен объему икры или менее; например, на каждый 1 мл икры может быть взято ≤1, 0,75, 0,5, 0,25 мл суспендирующей жидкости, например, от 0,5 до 1 мл.

Описанный выше способ получения косметической композиции позволяет получать обогащенный препарат, предпочтительно по существу не содержащий каких-либо загрязняющих компонентов, поступающих из материала источника или материала, используемого для проведения процедур выделения, например, компонентов, отличных от полипептидов или частей полипептидов, содержащихся в неочищенной среде, получаемой после выклева. В одном из предпочтительных примеров осуществления композиция может быть обогащена до достижения степени чистоты, превышающей 30, 40, 50 или 60%, например, превышающей 70, 80 или 90% чистоты, определяемой в массовых процентах (масса сухого вещества) полипептидов и частей полипептидов в сравнении с исходной средой, получаемой после выклева; таким образом, 90% чистота означает потерю 90% исходного материала (загрязняющих компонентов) в процессе получения. Однако, могут быть использованы композиции, имеющие более низкую чистоту, например, содержат более 40, 50, 60, 70, 80 или 90% исходного материала.

Несмотря на то, что сам по себе фильтрат может представлять собой косметическую композицию, перед использованием в способах и для целей изобретения продукт (фильтрат, получаемый в этапе (iv)), полученный или получаемый описанным выше способом необязательно может быть разбавлен (или сконцентрирован) до соответствующей концентрации. Таким образом, способ может включать дополнительный этап разбавления (или концентрирования) композиции. Предпочтительно коэффициент разбавления (или концентрирования) фильтрата может составлять по меньшей мере 1, 5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 или 10000. В особенно предпочтительном примере осуществления раствор, полученный при проведении этапа (iii) описанного выше способа, разбавляют или концентрируют до получения раствора, ферментативная активность которого, измеренная описанным выше способом, составляет от 1000 до 10000 мЕ/л. Предпочтительно раствор и, таким образом, фильтрат, полученный при проведении этапа (iv), имеет активность, составляющую от 2000 до 10000, от 3000 до 9000, от 3000 до 7000, от 3000 до 6000, от 3000 до 5000 или от 3000 до 4000 мЕ/л. Наиболее предпочтительно раствор имеет активность, составляющую приблизительно 3400 мЕ/л.

К продукту, полученному или получаемому описанным выше способом, необязательно могут быть добавлены один или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или разбавителей. Таким образом, способ может включать дополнительный этап добавления к композиции одного или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или разбавителей или смешивания композиции с одним или более фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами и/или разбавителями. Альтернативные или дополнительные этапы способа получения включают изменение или модификацию растворителя, например, изменение pH, ионных концентраций и т.д.

К продукту, полученному или получаемому описанным выше способом, могут быть добавлены другие фармацевтически приемлемые компоненты или ингредиенты. Один или более из других компонентов могут представлять собой активные компоненты, т.е. компоненты, воздействующие на кожу, которые также предпочтительно улучшают эстетичность внешнего вида кожи или улучшают косметическое состояние кожи, например, согласно косметическим указаниям, рассматриваемым в настоящем описании. Таким образом, в альтернативном варианте или дополнительно способ может включать дополнительный этап добавления к композиции одного или более фармацевтически приемлемых активных компонентов или смешивание композиции с одним или более фармацевтически приемлемыми активными компонентами. Фармацевтически приемлемые активные компоненты могут включать минералы, витамины, ферменты, белки, пептиды, аминокислоты, липиды, антиоксиданты, полисахариды, вещества, подходящие в качестве фильтров солнечного излучения, химические эксфолианты, экстракты и их смеси, более подробно описанные ниже.

Косметическая композиция, полученная или получаемая описанными выше способами, подходит для использования в способах согласно изобретению, рассмотренных в настоящем описании. В частности, косметическую композицию применяют в целях улучшения косметического состояния кожи млекопитающего.

Изобретение также относится к способу улучшения косметического состояния кожи млекопитающего, согласно которому в организм млекопитающего вводят косметическую композицию, рассмотренную выше.

Дополнительный аспект изобретения относится к применению рассмотренной выше косметической композиции для получения медикамента, улучшающего косметическое состояние кожи млекопитающего.

Согласно настоящему изобретению, термином "полипептиды" названы молекулы, содержащие предпочтительно более 50, 100, 150, 200 или 250 остатков и/или менее 500, 400, 300, 200 или 100 остатков, или количество остатков, выбранное из приведенных выше диапазонов. Согласно настоящему изобретению, термин "часть" предпочтительно включает по меньшей мере 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120,130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 или более аминокислот последовательности, из которой получена эта часть. Такая часть может быть получена из центральной или N-терминальной или C-терминальной частей последовательности.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены из икры любого вида Salmonidae, которые могут рассматриваться как натуральные биологические варианты исходного материала. Особенно предпочтительна икра Salmonidae из подсемейств Salrno и Oncorhynchus. Особенно предпочтительным исходным материалом для осуществления описанного выше способа является икра лосося атлантического (Saimo salar) и лосося тихоокеанского (Oncorhynchus masou).

Рассматриваемые в настоящем описании косметические композиции предназначены для применения in vivo, рассмотренного в настоящем описании.

Термин "фармацевтически приемлемый" или "физиологически приемлемый" означает, что ингредиент должен быть подходящим для применения в косметических целях и в косметических композициях. Ингредиенты также должны быть совместимы с другими ингредиентами композиции, а также быть физиологически приемлемыми для реципиента.

Активный ингредиент, т.е. композиция, получаемая описанным выше способом и предназначенная для нанесения/введения, может быть соответствующим образом модифицирована для ее использования в косметической композиции. Например, композиция, применяемая согласно изобретению, может быть стабилизирована с целью недопущения разложения, например, посредством применения соответствующих добавок, таких как соли или неэлектролиты, ацетат, додецилсульфат натрия (SDS, англ. sodium dodecyl sulphate), EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота, ЭТДУ; англ. ethylenediaminotetraacetic acid), цитратный или ацетатный буфер, маннит, глицин, HSA (гексансульфоновая кислота; от англ. hexane sulfonic acid) или полисорбат.

Композиции, получаемые способами, рассматриваемыми в настоящем описании, могут присутствовать в композициях, применяемых для косметических целей, в качестве единственного активного ингредиента, или они могут быть смешаны с другими ингредиентами, в частности, с другими активными ингредиентами, например, для усиления косметического эффекта (обсужденного выше) или для придания композиции свойств, делающие ее более привлекательной для потребителя.

Как было отмечено выше, композиции, рассматриваемые в настоящем описании, обладают свойствами, оказывающими улучшающее действие на косметическое состояние кожи, в частности, на состарившуюся кожу, например, на кожу, состарившуюся в результате фотостарения.

Композиция, рассматриваемая в настоящем описании, также может содержать загрязнения, например, после получения композиции из одного из описанных выше природных источников. Содержание различных полипептидов или частей полипептидов (в комбинации), которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, в композициях, рассматриваемых в настоящем описании, может составлять от 0,0001 до 50% масс. от массы косметической композиции, полученной описанным выше способом. Предпочтительно содержание целевых полипептидов или частей полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, составляет (в комбинации) от 0,0001 до 10% масс. от массы косметической композиции (или до 10-40%), например, от 0,0001 до 5%, от 0,0001 до 3%, от 0,0001 до 2%, от 0,0001 до 1%, от 0,0001 до 0,5%, от 0,0001 до 0,1% масс. от массы косметической композиции, полученной описанным выше способом, или как описано ниже в настоящем описании, например, после разбавления. Соответственно, содержание индивидуальных полипептидов или частей полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, может составлять от 1×10^-6 до 10% масс. от массы косметической композиции. В некоторых примерах осуществления содержание индивидуальных полипептидов или частей полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, может составлять от 1×10^-6 до 5% масс. от массы косметической композиции, например, от 1×10^-6 до 4%, от 1×10^-6 до 3%, от 1×10^-6 до 2%, от 1×10^-6 до 1%, от 1×10^-6 до 0,5%, от 1×10^-6 до 0,1% или от 1×10^-6 до 0,01% масс. от массы косметической композиции.

Доля полипептидов или частей полипептидов, которые могут быть извлечены из среды, получаемой после выклева Salmonidae, в косметической композиции может быть определена относительно других растворенных в композиции веществ, т.е. за вычетом растворителей, например, воды. Таким образом, содержание полипептидов или частей полипептидов в комбинации может составлять от 1 до 100% масс. от массы сухого вещества композиции. В некоторых примерах осуществления содержание полипептидов или частей полипептидов в комбинации может составлять от 1 до 90% масс. от массы сухого вещества композиции, например, от 5 до 80%, от 10 до 70%, от 20 до 60%, от 30 до 50% масс. от массы сухого вещества композиции. В других примерах осуществления содержание полипептидов или частей полипептидов в комбинации может составлять от 1 до 40%, от 2 до 39%, от 3 до 38%, от 4 до 37% масс. и т.д. от массы сухого вещества композиции. Таким образом, содержание индивидуальных полипептидов или частей полипептидов может составлять от 0,0001 до 50% масс. от массы сухого вещества композиции, например, от 0,0001 до 40%, от 0,001 до 30%, от 0,01 до 25% масс. от массы сухого вещества композиции. Как описано ниже в настоящем описании, для применения согласно изобретению композиция может быть разбавлена.

Несмотря на то, что изобретение относится к способам улучшения косметического состояния кожи, оно также может относиться к лечению нарушения, аномалии или состояния, но в любом случае, лечение предполагает косметическую терапию.

Согласно настоящему изобретению, термин "косметический" относится к терапии, которая не излечивает, не лечит или не предотвращает заболевание или нарушение, но применяется в качестве продукта для ухода за кожей или для изменения или улучшения внешнего вида кожи, например, цвета, структуры или содержания влаги в коже.

В основе терапии, рассматриваемой в настоящем описании, лежит антивозрастное воздействие на кожу косметической композиции согласно изобретению. Это воздействие описано в приведенных ниже Примерах.

Таким образом, изобретение относится к терапии, основанной антивозрастном воздействии на кожу косметической композиции.

Таким образом, изобретение относится к косметическому способу улучшения внешнего вида кожи млекопитающего, в котором в организм млекопитающего вводят косметическую композицию, рассмотренную выше в настоящем описании.

В особенно предпочтительном примере осуществления кожа представляет собой состарившуюся кожу.

Под "состарившей кожей" понимают кожу, имеющую один или более признаков или симптомов старения, т.е. имеющую морщины, мимические морщинки, гиперпигментацию, вялость (отвисание), сухость, шелушение, или образующуюся в результате потери влаги испарением через кожу (TEWL). В частности, "состарившую кожу" определяют в сравнении с нормальной обычной кожей, т.е. здоровой, содержащей достаточное количество воды, нормально пигментированной и не состарившейся кожей. В этом отношении старение кожи не обязательно связано с возрастом субъекта, поскольку старение может быть преждевременным, например, в результате хронического воздействия солнечного света (фотоповреждения). Таким образом, относительные параметры "нормальной обычной кожи" могут быть определены как средние показатели перечисленных выше признаков старения у множества субъектов возраста, совпадающего или близкого возрасту рассматриваемого субъекта, например, субъектов, которые не подвергались хроническому воздействию солнечного света. В альтернативном варианте относительные параметры "нормальной обычной кожи" могут представлять собой показатели субъектов, более молодых, чем рассматриваемый субъект. Другими словами, композиция, рассматриваемая в настоящем описании, может быть использована для восстановления молодого внешнего вида кожи, сравнимой с кожей субъекта, отличающегося от рассматриваемого субъекта более молодым возрастом.

Таким образом, изобретение относится к косметическому способу терапии дерматогелиоза у млекопитающего, в котором в организм млекопитающего вводят косметическую композицию, рассмотренную выше в настоящем описании, и предпочтительно композицию наносят местно.

В альтернативном варианте изобретение относится к косметической композиции, рассмотренной выше в настоящем описании, которую применяют в терапии дерматогелиоза у млекопитающего, предпочтительно терапии, включающей нанесение композиции на кожу млекопитающего. В конкретном примере осуществления композиция предназначена для местного применения.

В особенно предпочтительном примере осуществления улучшение косметического состояния кожи (например, состарившейся или фотоповрежденной кожи) включает улучшение косметического состояния посредством уменьшения или предотвращения появления или распространения морщин, мимических морщинок, гиперпигментации, вялости, сухости кожи, шелушения и/или потери влаги испарением через кожу. Может быть улучшен один или более из указанных параметров. Предпочтительно снижают интенсивность проявления мимических морщинок и/или морщин.

Улучшение косметического состояния посредством уменьшения или предотвращения появления или распространения признаков или симптомов, например, старения кожи или дерматогелиоза, может означать, что наблюдается снижение количества и/или интенсивности признака или симптома. Например, может быть снижено количество мимических морщинок и морщин и/или их размер, например, может быть снижена или уменьшена глубина морщин или мимических морщинок. Кроме того, уменьшение или предотвращение может включать остановку или снижение скорости появления новых признаков или симптомов.

Согласно настоящему изобретению, термин "сухость кожи (сухая кожа)" относится к эпидермису, в котором имеется недостаток влаги или кожного сала, что часто характеризуется появлением множества мимических морщинок, шелушением и ощущением зуда и/или жжения. Сухость кожи может проявляться как состояние самой кожи (например, в результате возрастных изменений) или может быть симптомом нарушения или повреждения кожи, например, в результате обгорания на солнце.

В этом отношении снижение сухости кожи, уменьшение шелушения, мимических морщинок или потери влаги испарением через кожу может быть обусловлено увлажняющим действием композиции, описанной выше.

Таким образом, изобретение также относится к косметическому способу увлажнения кожи млекопитающего, в котором в организм млекопитающего вводят косметическую композицию согласно настоящему изобретению.

В альтернативном варианте настоящее изобретение относится к рассматриваемой в настоящем описании косметической композиции, применяемой для увлажнения кожи млекопитающего. (В альтернативном варианте композиция может быть использована для получения косметического лекарственного средства, предназначенного для этой цели.)

Согласно настоящему изобретению, термин "увлажнение" относится к увлажняющим средствам, которые предотвращают удаление из кожи воды (например, посредством TEWL), а также к увлажняющим средствам (влагоудерживающим средствам), которые при нанесении на кожу притягивают и удерживают воду, и к смягчающим средствам (которые снимают дефектное отшелушивание).

Как было отмечено выше, подобные увлажняющие свойства полезны для улучшения косметического состояния кожи. В особенно предпочтительном примере осуществления кожа представляет собой кожу лица, ушей, шеи, рук или скальпа.

"Морщины" представляют собой складки, выступы или борозды в коже. Морщины обычно появляются на коже как результат протекания процессов старения. В этом отношении дерма содержит множество структурных элементов кожи, которые включают коллаген, придающий коже прочность, гликозаминогликаны, придающие коже тургор, и волокна эластина, придающие коже эластичность или упругость.

По мере старения кожи слой дермы истончается, и кожа вырабатывает меньшее количество коллагена. Кроме того, изнашиваются эластичные волокна, обеспечивающие эластичность. Эти изменения в структурах, поддерживающих кожу, вызывают сморщивание и провисание кожи. Эпидермальные выросты в местах соединения дермы и эпидермиса уплощаются, что делает кожу более хрупкой и податливой для смещений. В результате этого процесса из-за уменьшения площади контакта с дермой также снижается количество питательных веществ, поступающих в эпидермис, что также замедляет нормальный процесс восстановления кожи.

С возрастом жировые клетки подкожного слоя уменьшаются. Это приводит к образованию более заметных морщин и отвисания (вялости), поскольку жировые клетки не могут "заполнить" повреждения в других слоях.

Воздействие УФА и УФВ излучения, т.е. солнечного света, приводит к более ускоренному разрушению коллагена по сравнению с возрастным старением. Солнечный свет повреждает волокна коллагена и вызывает накопление аномального эластина. Накопление такого образующегося под действием солнечного света эластина приводит к образованию больших количеств матриксных металлопротеиназ (ММР). В нормальном состоянии металлопротеиназы реконструируют поврежденную солнцем кожу за счет генерации и повторного образования коллагена. Однако, этот процесс не всегда проходит гладко, и некоторые металлопротеиназы, напротив, разрушают коллаген. Это приводит к образованию участков из неупорядоченных волокон коллагена, называемых солнечными рубцами. Многократное протекание такого неполного процесса повторного образования/регенерации вызывает появление морщин и вялости кожи.

В дополнительном предпочтительном аспекте подвергаемое косметической терапии или предотвращаемое состояние кожи представляет собой пигментацию, ее нарушение или аномалию.

Нарушения пигментации или аномальная пигментация кожи, т.е. гиперпигментация, могут появляться из-за возраста или в результате преждевременного старения, например, в результате воздействия солнечных лучей. Измененная пигментация может быть результатом локального избытка меланоцитов или повышения их активности или под воздействием обоих этих факторов. Нарушения пигментации включают печеночные пятна, солнечные или возрастные пятна (солнечное лентиго) и другие дефекты поверхности, например, веснушки.

Согласно настоящему изобретению, "улучшение" косметического состояния кожи определяют по сравнению с нормальной обычной кожей, т.е. здоровой, содержащей достаточное количество воды, нормально пигментированной и не состарившейся кожей. Таким образом, в отношении состарившейся кожи, один или более признаков или симптомов старения могут быть оценены, как описано в Примерах, и произведено сравнение с теми же признаками кожи у хронологически или физиологически более молодых индивидуумов, и предпочтительно улучшение состоит в уменьшении одного или более признаков или симптомов старения.

В предпочтительном аспекте косметический эффект получают при местном нанесении на кожу.

Используемый в настоящем описании термин "терапия" означает снижение, улучшение или устранение, предпочтительно до достижения нормального состояния, одного или более косметических симптомов или эффектов косметического состояния или нарушения, например, наличия или величины области сухой кожи, наличия или величины области пигментации и т.д., в сравнении с симптомами или эффектами, имеющимися на других частях тела рассматриваемого индивидуума, на которых кожа не имеет названных состояний или нарушений и не подвергается упомянутой терапии, или в сравнении с кожей нормального индивидуума, не подвергающегося названной терапии.

"Предотвращение" или "уменьшение" означает абсолютное предотвращение или уменьшение или снижение степени или отсутствие наступления (например, отсрочку момента наступления) симптома или эффекта. Например, состояние, характеризующееся наличием сухой, аномально пигментированной, морщинистой или зарубцевавшейся кожей, может быть предотвращено при регулярном применении композиций, рассматриваемых в настоящем описании, до наступления подобного состояния.

Косметические способы терапевтического воздействия или профилактики согласно изобретению могут быть успешно объединены с воздействием одного или более активных ингредиентов, которые способствуют лечению или профилактике нарушений или состояний и/или способствуют, например, увлажнению. Таким образом, рассматриваемые в настоящем описании косметические композиции могут дополнительно содержать один или более таких активных ингредиентов.

Согласно дополнительному аспекту изобретения, предложены рассмотренные в настоящем описании композиции и необязательно один или более дополнительных активных ингредиентов, полученные в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного использования в терапии человека или млекопитающего, проводимой согласно настоящему изобретению.

Композиции согласно изобретению могут быть приготовлены традиционными способами с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и/или разбавителей, в соответствии с методиками, хорошо известными в данной области техники, с использованием легко доступных ингредиентов.

Таким образом, активный ингредиент может быть включен, необязательно вместе с другими активными веществами, в комбинированный препарат, содержащий один или более традиционных носителей, разбавителей и/или вспомогательных веществ, в традиционные галеновы препараты, например, порошки, саше, капсулы, эликсиры, суспензии (в виде инфузионных сред), эмульсии, растворы, сиропы, аэрозоли (в виде твердого вещества или в жидкой среде), мази, стерильные упакованные порошки и подобные им продукты. Композиции могут быть стабилизированы лиофилизацией, суперохлаждением или с помощью пермазайм (Permazyme).

Подходящие вспомогательные вещества, носители или разбавители включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, карбонат кальция, кальций-лактозу, кукурузный крахмал, альгинаты, трагакантовую камедь, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, водный сироп, воду, воду/этанол, воду/гликоль, воду/полиэтилен, гликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоаты, пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния, минеральное масло или жировые вещества, например, твердый жир или подходящие смеси перечисленных веществ. Также могут быть использованы агенты для получения композиций с замедленным высвобождением, например, карбоксиполиметилен, карбоксиметилцеллюлоза, ацетатфталаты целлюлозы или поливинилацетат.

Композиции могут дополнительно включать скользящие агенты, смачивающие агенты, эмульгаторы, агенты, повышающие вязкость, гранулирующие агенты, вещества для улучшения распадаемости лекарственной формы, связующие агенты, осмотически активные агенты, суспендирующие агенты, консерванты, подсластители, вкусовые добавки, усилители адсорбции (например, поверхностно-проникающие агенты, например, желчные соли, лецитины, поверхностно-активные вещества, жирные кислоты, хелатирующие агенты), окрашивающие в коричневый цвет агенты, органический растворитель, антиоксидант, стабилизирующие агенты, смягчающие средства, кремнийорганический полимер (силикон), альфа-гидроксикислоту, средство, уменьшающее раздражение, антивспениватель, увлажняющий агент, витамин, отдушку, ионные или неионные загустители, поверхностно-активные вещества, наполнители, отшелушивающее вещество, полимер, газ-вытеснитель, подщелачивающий или подкисляющий агент, агент, сообщающий непрозрачность, окрашивающие вещества, жирные соединения и подобные соединения. Некоторые из этих компонентов более подробно описаны ниже.

Другие активные ингредиенты или компоненты косметической композиции могут быть выбраны из любого одного или более следующих веществ:

минералов, витаминов, ферментов, белков, пептидов, аминокислот, липидов, полисахаридов, веществ, подходящих в качестве фильтров солнечного излучения, химических эксфолиантов, экстрактов, кондиционеров для кожи, антиоксидантов и смесей таких веществ.

Примеры белков, которые могут быть смешаны с композицией согласно изобретению, включают коллаген и/или его производное (например, его части, рассмотренные выше), белок или пептид, улучшающий рост клеток, гликопротеин 1, гликопротеин 2 и ламинин.

Композиции согласно изобретению могут быть смешаны с ферментами, неограничивающие примеры которых включают один или более фруктовых ферментов (например, бромелайн), супероксиддисмутазу (пероксиддисмутазу), пероксидазу, гиалуронидазу и мукополисахаридазу.

Неограничивающие примеры пептидов включают одно или более из следующих веществ: D,L-карнозин, D-карнозин, L-карнозин, ансерин и Матриксил (пентапептидное производное).

Неограничивающие примеры аминокислот могут включать одно или более из следующих веществ: L-аланин, L-аргинин, L-аспарагин, L-аспарагиновую кислоту, L-цистеин, L-цистин, глицин, L-глютамин, L-глютаминовую кислоту, L-гистидин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизин, L-метионин, L-фенилаланин, L-пролин, L-серин, L-треонин, L-триптофан, L-тирозин и L-валин и их производные, включающие не встречающиеся в природе аминокислоты, указанные в Таблице 1. Особенно предпочтительно используемые в качестве антиоксидантов аминокислоты могут быть выбраны из одного или более следующих веществ:

глицина, лизина, аргинина, цистеина, цистина, гистидина, тирозина и триптофана.

Косметическая композиция может содержать один или более липидов, которые включают жиры, масла, воски и подобные им вещества. Подходящие полярные масла представляют собой, например, масла, выбранные из группы, включающей лецитины и триглицериды жирных кислот, а именно: сложные эфиры триглицерола и насыщенных и/или ненасыщенных, разветвленных и/или неразветвленных алканкарбоновых кислот с длиной цепи от 8 до 24, в частности, от 12 до 18 атомов углерода. Триглицериды жирных кислот могут быть, например, предпочтительно выбраны из группы, включающей синтетические, полусинтетические и натуральные масла, например, оливковое масло, подсолнечное масло, соевое масло, арахисовое масло, рапсовое масло, миндальное масло, пальмовое масло, кокосовое масло, касторовое масло, масло зародышей пшеницы, масло из виноградных косточек, репейное масло, масло энотеры, масло австралийского ореха и подобные масла.

В альтернативном варианте или дополнительно масло может быть выбрано из летучих масел, нелетучих масел или их смесей. Нелетучие масла включают масла, отвечающие по меньшей мере одному из следующих требований: (а) давление паров масла составляет не более 0,2 мм рт.ст. (что приблизительно составляет 26,7 Па) при 25°C и давлении, равном одной атмосфере (приблизительно 1,013·10⁵ Па); (b) температура кипения масла при давлении, равном одной атмосфере, составляет по меньшей мере 300°C. Летучие масла включают материалы, не относящиеся к "нелетучим" согласно приведенному выше определению.

Нелетучие масла могут быть выбраны из нелетучих кремнийорганических масел, нелетучих углеводородных масел и их смесей. Подходящие нелетучие кремнийорганические масла включают линейные полиметилсилоксаны, и, предпочтительно, нелетучие кремнийорганические масла представляет собой высокомолекулярные диметиконы. Примеры коммерчески доступных линейных полиметилсилоксанов включают DC 200 Fluid 20Cst, DC 200 Fluid 100Cst, DC 200 Fluid 350Cst, поставляемые Dow Corning Corporation.

Подходящие нелетучие углеводородные масла включают разветвленные сложные эфиры диглицерина или триглицерина или сложные эфиры 1,2,3,4-бутантриола или эритрита, диэритрита или триэритрита. Предпочтительно, нелетучие углеводородные масла содержат эритритилтриэтилгексаноат (поставляемый Nisshin Oilio под наименованием Salacos E-38) и Полиглицерил-2-триизостеарат (поставляемый Nisshin Oilio под наименованием Cosmol 43V), диэтилгексилкарбонат (поставляемый Degussa под наименованием Tegosoft DEC), простой дикаприловый эфир (поставляемый Cognis AG под наименованием Cetiol ОЕ), дикаприлкарбонат (поставляемый Cognis AG под наименованием Cetiol CC), изононилизононаноат (поставляемый Seppic под наименованием Lanoi 99), тридецилнеопентаноат (поставляемый International Speciality Products под наименованием Ceraphyl 55) или смесь перечисленных веществ.

Летучие масла могут быть выбраны из летучих кремнийорганических масел, как функционализированных, так и нефункционализированных, летучих углеводородных масел и их смесей. Летучие масла, подходящие для использования согласно настоящему изобретению, могут быть насыщенными или ненасыщенными, иметь неразветвленную или разветвленную цепочку или циклическую структуру, или иметь комбинацию из одного или более указанных признаков.

Примеры летучих углеводородных масел включают полидеканы, например, изододекан и изодекан (например, Permethyl-99A, поставляемый Presperse Inc.) и С7-С15 изопарафины (например, серии Isopar, поставляемые Exxon Chemicals).

Летучие кремнийорганические масла могут быть выбраны из циклопентасилоксана, циклогексасилоксана или их смеси. Примеры коммерчески доступных летучих циклических кремнийорганических масел включают DC 244, DC 245, DC 344 и DC 345, поставляемые Dow Corning Corp.; SF-1204 и SF-1202 Silicone Fluids, поставляемые Momentive Performance Materials; GE 7207 и 7158, поставляемые General Electric Co.); и SWS-03314, поставляемые SWS Silicones Corp.

Линейное летучее кремнийорганическое масло может представлять собой линейный полиметилсилоксан. Примеры коммерчески доступных линейных полиметилсилоксанов включают DC 200 Fluid, 5Cst, поставляемый Dow Corning Corp.

Косметическая композиция согласно изобретению может дополнительно содержать один или более полисахаридов, неограничивающие примеры которых включают одно или более из следующих веществ: анионные полисахариды (например, альгиновую кислоту, пектин, ксантановую камедь, гилауроновую кислоту, хондроитинсульфат, аравийскую камедь, камедь карайи, трагакантовую камедь, карбоксиметилхитин, камедь целлюлозы, гликозаминогликаны), катионные полисахариды (например, хитозан, ацетилированный хитозан, катионную гуаровую камедь, катионную гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ)), неионные полисахариды (например, крахмал, декстрины, гуаровую камедь, простые эфиры целлюлозы, например, гидроксиэтилцеллюлозу, метилцеллюлозу и нитроцеллюлозу), амфотерные полисахариды (например, карбоксиметилхитозан, N-гидрокси-дикарбоксиэтилхитозан, модифицированный картофельный крахмал) и гидрофобные полисахариды (например, цетилгидроксиэтилцеллюлозу, поликватерниум 24 (англ. polyquaternium 24)).

Косметическая композиция может дополнительно содержать вещество, подходящее для применения в качестве фильтра солнечного излучения, например, органический солнцезащитный фильтр, например, производное коричной кислоты. Активные органические солнцезащитные фильтры могут быть выбраны из гидрофильных органических солнцезащитных фильтров, гидрофобных органических солнцезащитных фильтров или их смесей. Подходящие примеры солнцезащитных фильтров содержатся в публикации CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7-е издание, том 2, стр. 1672, под ред. Wenning, Me Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997).

Органический солнцезащитный фильтр может быть выбран из производных алкил-(3,3-дифенилакрилатов, производных α-циано-β,β-дифенилакрилата, производных антранилата, производных бензофенона, производных камфары, производных дибензоилметана, производных пара-аминобензойной кислоты, производных салициловой кислоты, производных триазина или их смесей. Например, гидрофобный органический солнцезащитный фильтр может быть выбран из 4-(1,1-диметилэтил)-4′-метоксидибензоилметана, 4-изопропилдибензоилметана, 4-(1,1-диметилэтил)-4′-метоксидибензоилметана, 2-этилгексил-2-циано-3,3-дифенилакрилата или их смеси.

Примером коммерчески доступного 4-(1,1-диметилэтил)-4′-метоксидибензоилметана, также называемого бутилметоксидибензоилметаном или Avobenzone, является Parsol TM 1789, поставляемый Givaudan Roure S.А., и Eusolex TM 9020, поставляемый Merck & Co., Inc. Примером коммерчески доступного 4-изопропилдибензоилметана, также называемого изопропилдибензоилметаном, является Eusolex TM 8020, поставляемый Merck & Co., Inc. Примеры коммерчески доступного 2-этилгексил-2-циано-3,3-дифенилакрилата, также называемого Octocrylene, включают Uvinul N539 SG, поставляемый BASF; и Eusolex OCR, поставляемый Rona/Merck.

В некоторых примерах осуществления гидрофильный органический солнцезащитный фильтр может представлять собой 2-фенилбензимидазол-6-сульфоновую кислоту. Примером коммерчески доступной 2-фенилбензимидазол-5-сульфоновой кислоты, также называемой PBSA (англ. 2-phenylbenzilimazole-5-sulfonic acid), является Eusolex 232, поставляемый Rona/Merck.

Подходящие примеры солнцезащитных фильтров на основе производных коричной кислоты содержатся в публикации CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7-е издание, том 2, стр.1672, под ред. Wenning, Me Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997). Производное коричной кислоты может быть выбрано из 2-этилгексил-пара-метоксициннамата, диэтаноламинметоксициннамата, 2-этоксиэтил-пара-метоксициннамата или их смеси. Например, производным коричной кислоты может являться 2-этилгексил-пара-метоксициннамат.

Косметическая композиция может быть смешана с химическим эксфолиантом, неограничивающие примеры которого включают одну или более из альфа-гидроксикислот (AHA), бета-гидроксикислот (ВНА) или полигидроксикислот, например, салициловую кислоту, гликолевую кислоту, лимонную кислоту и яблочную кислоту.

Неограничивающие примеры экстрактов, которые могут быть включены в косметическую композицию, включают растительные экстракты, которые могут содержать фенольные соединения, например, флавоноиды (например, гл и коз ил рутин, феруловую кислоту, кофеиновую кислоту), фурфурилиденглицитол, бутилированный гидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол, нордигидрогуайаретовую полимерную кислоту, нордигидрогуайаретовую кислоту, тригидроксибутирофенон и производные перечисленных веществ. Специальные растительные экстракты, подходящие для включения в композицию согласно изобретению, включают экстракт алоэ вера, экстракт женьшеня и экстракт хвоща.

Экстракт женьшеня получают экстракцией корня Panax ginseng гидрофильным растворителем (в частности, водой, этанолом, гликолем или любой их смесью). Полученный экстракт содержит сапонины, стероидные спирты, углеводы, пектин, витамины, минералы и липиды.

Экстракт хвоща получают экстракцией всех частей травы Equisetum arvense гидрофильным растворителем (например, водой, этанолом, гликолем или любой их смесью). Полученный экстракт содержит силикаты, флавиноиды, сапонозиды, кофеиновую кислоту и феруловую кислоту.

Косметическая композиция может дополнительно содержать кондиционер для кожи. Кондиционер для кожи может быть выбран из влагоудерживающих средств, эксфолиантов, смягчающих средств или их смесей. Влагоудерживающие средства включают многоосновные спирты, например, глицерин, пропиленгликоль, дипропиленгликоль, полипропиленгликоль, полиэтиленгликоль, сорбит, гидроксипропилсорбит, гексиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, 1,2,6-гексантриол, этоксилированный глицерин, пропоксилированный глицерин или их смеси.

Неограничивающие примеры антиоксидантов, которые могут быть смешаны с композицией согласно изобретению, включают аминокислоты, витамины, минералы, каротиноиды, пептиды, тиолы, сульфоксиминные соединения, хелатирущие соединения, ненасыщенные жирные кислоты, фенольные соединения, растительные экстракты, стильбены, мочевую кислоту, маннозу, хлорогеновую кислоту, имидазолы (например, урокановую (3-1Н-имидазол-4-ил-2-пропеновую) кислоту), фурфурилиденсорбит, убихинон (кофермент Q окисленный), убихинол (кофермент Q восстановленный), пластохинон, фитостерины и производные перечисленных веществ (например, соли, сложные эфиры, простые эфиры, сахара, нуклеотиды, нуклеозиды, пептиды и/или липидные производные), часть которых описана выше.

Неограничивающие примеры витаминов могут включать одно или более из следующих веществ: витамин А и его производные (например, ретиноид или ретинол или их производные, например, ретинилпальмитат или ретинилпропионат), биотин, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, никотинамид, пиридоксина гидрохлорид, пиридоксаля гидрохлорид, рибовлавин, тиамина гидрохлорид, тимидин, витамин В12, витамин В3 (например, ниацинамид), витамин В5 (например, пантенол), витамин С и его производные (например, аскорбилпальмитат, Mg-аскорбилфосфат, аскорбилацетат), токоферол и его производные (например, ацетат витамина Е).

Неограничивающие примеры минералов могут включать одну или более солей молибдата (например, (NH₄)OMo₇O₂₄) алюминия (например, AlCl₃), кальция (например, CaCl₂), кобальта (например, CoCl₂), хрома (например, CrK(SO₄)), меди (например, CuSO₄), железа (например, Fe(NO₃)₃, FeSO₄), калия (например, KCl), магния (например, MgCl₂), марганца (например, MnCl₂, MnSO₄), фосфата (например, Na₂HPO₄, NaH₂PO₄), карбоната (например, NaHCO₃), силиката (например, Na₂SiO₃), натрия (например, NaCl), ванадата (например, NH₄VO₃), никеля (например, NiCl₂), олова (например, SnCl₂), цинка (например, ZnO, ZnSO₄), селена (например, селенометионин, ebselen (2-фенил-1,2-бензизоселеназол-3(2Н)-он), H₂SeO₃, Na₂SeO₃), сульфата и нитрата.

Неограничивающие примеры каротиноидов могут включать одно или более из следующих веществ: каротины, например, α-каротин, β-каротин, ψ-ликопен, фитоен и т.д., и производные перечисленных веществ.

Неограничивающие примеры тиолов могут включать одно или более из следующих веществ: ауротиоглюкозу, пропилтиоурацил, тиоредоксин, липоевую кислоту, глютатион, цистеин, цистин, цистамин и их сложные эфиры и соли, содержащие следующие радикалы: гликозил, N-ацетил, метил, этил, пропил, амил, бутил, лаурил, пальмитоил, олеил, γ-линолеил, холестерил и глицерил; дилаурилтиодипропионат, дистеарилтиодипропионат, тиопропионовую кислоту и производные перечисленных веществ.

Неограничивающие примеры сульфоксиминных соединений могут включать одно или более из следующих веществ: гомоцистеинсульфоксимин, бутионинсульфоны, пента-, гекса-, гептатионинсульфоксимины, которые могут быть включены в композицию таким образом, чтобы их дозировки были очень низкими (например, от пикомоль до мкмоль/кг).

Неограничивающие примеры хелатирущих соединений могут включать одно или более из следующих веществ: апоферритин, десферал, лактоферрин, жирные α-гидроксикислоты, пальмитиновую кислоту, фитиновую кислоту, α-гидроксикислоты (например, лимонную кислоту, молочную кислоту, яблочную кислоту), гуминовую кислоту, желчную кислоту, желчные экстракты, билирубин, биливердин, ЭТДУ (этилендиаминтетрауксусную кислоту), ЭГТК (этиленгликольтетрауксусную кислоту) и производные перечисленных веществ.

Неограничивающие примеры ненасыщенных жирных кислот могут включать одно или более из следующих веществ: γ-линоленовую кислоту, линолевую кислоту, олеиновую кислоту и их производные.

Стильбены и их производные включают, например, стильбеноксид и транс-стильбеноксид.

В косметические композиции согласно настоящему изобретению может быть включено множество дополнительных необязательных активных ингредиентов. Неограничивающие примеры дополнительных ингредиентов включают дополнительные активные средства для ухода за кожей, например, фарнезол, бисаболол, фитантриол, мочевину, гуанидин (например, аминогуанидин); соединения гексаминидина, соли или производные перечисленных веществ; сахароамины; средства для искусственного загара (например, дегидроксиацетон); структурирующие агенты; гидрофильные гелеобразующие агенты; лекарственные средства от угревой сыпи (резорцин, салициловая кислота и подобные им средства); средства для смягчения и заживления кожи, например, аллантоин и подобные ему средства; и агенты, подходящие для эстетических целей, например, эфирные масла, отдушки, агенты, улучшающие чувствительность кожи, агенты, сообщающие непрозрачность, ароматические соединения (например, гвоздичное масло, ментол, камфара, эвкалиптовое масло и эвгенол). Рассматриваемые в настоящем описании композиции могут быть приготовлены образом, который обеспечивает быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после нанесения на тело/введения в организм, с помощью методик, хорошо известных в данной области техники.

Композиции могут быть сформованы в виде любой соответствующей лекарственной формы, которая обеспечивает доставку в конкретные клетки или ткани или нацеливание на конкретные клетки или ткани, например, в виде эмульсии или в виде липосом, ниосом, микросфер, наночастиц или подобных образований, которые могут абсорбировать, адсорбировать, включать в себя или связывать активный ингредиент. Это может эффективно переводить продукт в нерастворимую форму. Получаемые порошковые формы могут придавать композиции стабильность (например, устойчивость к разложению) и устранять проблемы доставки.

Предпочтительно использование растворов, суспензий, гелей и эмульсий; например, активный ингредиент может переноситься в воде, газе, жидкости на водной основе, в масле, геле, эмульсии, эмульсии типа "масло в воде" или "вода в масле", дисперсии или их смеси.

Эмульгатор может быть выбран из неионных эмульгаторов, анионных эмульгаторов, катионных эмульгаторов, цвиттер-ионных эмульгаторов, амфотерных эмульгаторов или их смесей. Эмульгаторы известны в данной области техники. См., например, публикацию McCutcheon, Detergents and Emulsifiers, North American Edition (1986), опубликованную Allured Publishing Corporation.

Если косметически приемлемый носитель представляет собой эмульсию типа "вода в кремнийорганическом масле", то эмульгаторы предпочтительно выбирают из полиоксиалкиленовых сополимеров, полиглицериловых сополимеров или их смесей. Полиоксиалкиленовые сополимеры, также называемые кремнийорганическими простыми полиэфирами, подробно описаны в патентной публикации US 4268499. Пример коммерчески доступных полиоксиалкиленовых сополимеров включает DC5225C или DC2-5185C (ПЭГ/ППГ-18/18 диметикон, доступный в виде смеси с циклопентасилоксаном), поставляемый Dow Corning Corp.; и KF6017 или KF6028 (ПЭГ-9 диметикон), поставляемый Shin-Etsu Inc. Примеры коммерчески доступных полиглицериловых эмульгаторов включают KF6100 и KF6104, поставляемые Shin-Etsu Inc.

Композиции предпочтительно предназначены для местного (т.е. накожного) применения.

Композиции для местного применения включают гели, кремы, мази, спреи, лосьоны, бальзамы, стикеры, мыла, порошки, пленки, аэрозоли, капли, пены, растворы, эмульсии, суспензии, дисперсии, например, неионные пузырьковые дисперсии, молочко и любые другие традиционные косметические формы, известные в данной области техники.

Мази, гели и кремы могут быть, например, получены на водной или масляной основе с добавлением подходящих загустителей и/или гелеобразующих агентов. Лосьоны могут быть получены на водной или масляной основе, и в общем случае они также содержат одно или более эмульгирующих, диспергирующих, суспендирующих, загущающих или окрашивающих веществ. Порошки могут быть получены с использованием любой подходящей порошковой основы. Капли и растворы могут быть получены на водной или неводной основе и также содержать один или более диспергирующих, солюбилизирующих или суспендирующих агентов. Аэрозольные спреи предпочтительно дозируют из упаковок, находящихся под давлением, с применением подходящего газа-вытеснителя.

В некоторых примерах осуществления косметические композиции, рассматриваемые в настоящем описании, могут быть нанесены на кожу местно с помощью изделия (продукта), устройства или материала, на который композиция была нанесена, введена пропитыванием или связана химическими связями. Для этого рассматриваемая в настоящем описании композиция может быть нанесена в виде покрытия, введена пропитыванием или связана химическими связями с перевязочными материалами, пластырями (например, накладками из клейкого пластыря), марлей, медицинской клейкой лентой, хлопковыми тампонами или другими абсорбирующими материалами, например, пуховым материалом, ворсистым полотном или губкой, или поддерживающими матрицами. Например, множество композиций может быть нанесено на кожу с помощью накожных пластырей, хорошо известных в данной области техники и описанных, например, в патентных публикациях US 2008/0038300, US 2009/0043236, WO 2005/067499 и WO 2009/085302, содержания которых включены в настоящее описание посредством ссылки. В некоторых примерах осуществления материал, содержащий рассматриваемую композицию, может находиться в форме устройства, которое может, например, носить субъект, подвергаемый терапии. Например, рассматриваемая в настоящем описании композиция может быть нанесена, введена пропитыванием или связана химическими связями с материалом или поддерживающей матрицей, которая образует целое изделие, представляющее собой подгузник, перчатку, носок и т.д., или составляет часть такого изделия.

Косметические композиции могут быть заключены в контейнер, упаковку или дозирующее устройство вместе с инструкциями по применению.

Таким образом, дополнительный аспект изобретения относится к продукту, материалу или устройству, на которое нанесена, введена пропитыванием или связана химическими связями композиция, рассматриваемая в настоящем описании. Изобретение также включает использование таких продуктов, материалов или устройств как указано в настоящем описании. Предпочтительно продукт представляет собой перевязочный материал, пластырь (например, накладку из клейкого пластыря), марлю, медицинскую клейкую ленту или хлопковый тампон, или устройство представляет собой подгузник, перчатку или носок.

Концентрация активных ингредиентов в композициях согласно изобретению может зависеть от типа источника композиции (т.е. исходного материала, используемого в описанном выше способе), типа нанесения/введения, терапевтического курса, возраста и массы пациента, косметических показаний, особенностей тела или области тела, подвергаемой терапии, и эта концентрация может быть изменена или уточнена выбранным образом. Однако, в целом, в композиции, рассматриваемой в настоящем описании, концентрации составляют 0,001, 0,005, 0,01 или от 0,1 до 50%, например, от 0,005 до 40%, например, от 0,1 до 25%, например, от 0,1 или 0,5 до 5, например, от 1 до 5% (массовых или объемных процентов от массы или объема готового препарата для нанесения/введения, в частности для местного применения), например, применяют 1%-ный раствор упомянутой выше композиции, полученный в соответствии со способом согласно изобретению.

Если в композицию, полученную описанным выше способом, добавляют дополнительные компоненты, например, дополнительные увлажняющие агенты, рассматриваемые в настоящем описании, количество дополнительного компонента может составлять 0,0001, 0,0005, 0,001 или от 0,01 до 50%, например, от 0,0005 до 40%, например, от 0,01 до 25%, например, от 0,1 или 0,5 до 5, например, от 1 до 5% (массовых процентов от массы готового препарата для нанесения/введения, в частности для местного применения). В зависимости от типа млекопитающего, подвергаемого терапии, эффективные однократные дозы композиции при однократном местном нанесении могут составлять от 0,0001 до 100 мг/см²/сутки (общее содержание белка в композиции), например, от 0,1 до 100 мг/см²/сутки, предпочтительно от 0,0001 до 10 мг/см²/сутки, например, от 0,1 до 10 мг/см²/сутки.

Предпочтительно для местного нанесения применяют жидкие растворы, кремы или суспензии.

Тип животных, которым могут быть нанесены или введены композиции, ограничен млекопитающими. Предпочтительно млекопитающими являются приматы, домашние животные, домашний скот и лабораторные животные. Таким образом, предпочтительные млекопитающие включают мышей, крыс, кроликов, морских свинок, кошек, собак, обезьян, свиней, коров, коз, овец и лошадей. Особенно предпочтительно нанесение или введение композиций людям.

Приведенные ниже Примеры служат для иллюстрации и сопровождаются графическими материалами, в которых:

На Фиг. 1 представлены фотографии участницы испытания, которой наносили композицию, содержащую полипептид согласно изобретению, до начала терапии (начальное состояние), после 2 недель и после 12 недель терапии. Уменьшение различных признаков старения кожи очевидны как после 2, так и после 12 недель терапии. Приведенные величины показывают среднее для величин изменений у 35 участниц.

На Фиг. 2 крупным планом представлена фотография участницы испытания, изображенной на Фиг. 1, для лучшего рассмотрения уменьшения мимических морщинок и морщин, которое заметно как после 2, так и после 12 недель терапии с использованием композиции, содержащей полипептид согласно изобретению.

На Фиг. 3 крупным планом представлена фотография участницы испытания, которой наносили композицию, содержащую полипептид согласно изобретению, до начала терапии (начальное состояние) и после 12 недель терапии. На обведенном участке ясно видно уменьшение морщин после 12 недель терапии.

На Фиг. 4 представлена гистограмма, на которой показана процентная доля участниц испытания, у которых по оценкам в соответствии с клинической шкалой тактильной/визуальной оценки обеих сторон лица, наблюдалось уменьшение различных признаков старения.

На Фиг. 5 представлены полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа микроизображения (увеличение ×400, ×5000 и ×15000) реконструированного человеческого эпидермиса, который в течение 12 часов воздействовали водой, 5% гликолевой кислотой, 1 мЕ/мл бромелайна или композицией, содержащей 1% среды, получаемой после выклева.

На Фиг. 6 представлены полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа микроизображения (увеличение ×400, ×5000 и ×15000) реконструированного человеческого эпидермиса, на который в течение 48 часов воздействовали водой, 5% гликолевой кислотой, 1 мЕ/мл бромелайна или композицией, содержащей 1% среды, получаемой после выклева.

На Фиг. 7 представлены сделанные с помощью оптического микроскопа микрофотографии срезов реконструированного человеческого эпидермиса, не подвергавшегося терапии, или эпидермиса, на который в течение 12 или 24 часов воздействовали 5% гликолевой кислотой, 1 мЕ/мл бромелайна или композицией, содержащей 1% среды, получаемой после выклева. Стрелкой (А) показаны пролиферация и дифференциация клеток, а стрелка (В) указывает на более плотный зернистый слой (stratum granulosum) и более высокую концентрацию пластинчатых гранул (кератиносом).

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Пример 1

Получение композиции

Композицию извлекали из среды, получаемой после выклева лосося. Для повышения концентрации белка в среде, получаемой после выклева, икру лосося перед выклевом помещают в минимальные объемы воды. Высоко синхронизованный выклев может быть вызван повышенными (комнатными) температурами или деоксигенацией (Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, стр. 417-430), в результате чего получают небольшой объем высококонцентрированного препарата неочищенных полипептидов и частей полипептидов. Выклев должен быть завершен в течение 2 часов для более 95% эмбрионов.

Среду, получаемую после выклева, фильтруют через стандартный фильтр с размером пор 7 мкм для удаления материала, который с большой долей вероятности будет закупоривать фильтры в последующих этапах фильтрования. Полученный фильтрат, т.е. обработанная среда, получаемая после выклева, может быть заморожена и может храниться в замороженном состоянии в течение нескольких лет без значительного разложения, после чего она может быть разморожена и использована для последующего выделения белка. Это очень упрощает получение исходного материала для выделения из него композиции на основе среды, получаемой после выклева.

Обработанную среду, получаемую после выклева, фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм, и собирают фильтрат. Затем для замены воды в среде, получаемой после выклева, буфером фильтрат подвергают диафильтрации на фильтре, имеющем эксклюзионный размер, составляющий 8 кДа. В данном случае буфер содержал 0,5 мМ фосфата и 1 мМ NaCl; тем не менее, подходящими являются другие буферы. Например, для целей изобретения подходит фосфатный буферный солевой раствор или буферы, содержащие миллимолярные количества Tris (например, 10 мМ) при приблизительно нейтральном или слегка щелочном pH (pH 7.5-8.5), содержащие 5 мМ NaCl. Ретентат, получаемый в этапе диафильтрации, собирали и разбавляли буфером таким образом, чтобы ферментативная активность полученного фильтрата составляла 3400 мЕ/литр.

Наконец, фильтрат фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм, и полученный новый фильтрат собирали. Этот фильтрат представлял собой препарат, обогащенный полипептидами и частями полипептидов, которые содержались в неочищенной среде, получаемой после выклева.

Пример 2

Воздействие композиции на основе среды, получаемой после выклева, на состарившуюся кожу in vivo

Композиция, на основе среды, получаемой после выклева, была получена, как описано в Примере 1. Композиция была приготовлена в виде лосьонов для нанесения на кожу, имеющих концентрации 1% и 3% (об.) (общий объем композиции на единицу объема лосьона), которые в этом испытании представляли собой два активных лосьона для кожи; их действие сравнивали с действием контрольного лосьона для кожи, не содержащего активного компонента, т.е. композиции на основе среды, получаемой после выклева. Лосьон для кожи представлял собой эмульсию типа "масло в воде" (англ. обозначение O/W, т.е. oil-in-water). Масляная фаза составляла 9% от общего количества композиции; эмульгатор представлял собой гидрированный лецитин.

Для оценки эффективности и переносимости местной терапии кожи было проведено двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое исследование кожи субъектов женского пола (участниц испытания), имевших фотоповреждения кожи от небольших до умеренных, т.е. имевших состарившуюся кожу лица. Продолжительность этого испытания составляла 12 недель; проводили осмотры участниц до начала терапии, на 2 неделе, на 6 неделе и на 12 неделе. Эффективность оценивали визуально, с помощью оборудования, цифровых фотографий VISIA CR и анкет самостоятельной оценки своего состояния участницами.

Количество участниц

Все этапы исследования были пройдены сто одной (101) участницей испытания (N>30 для трех видов терапии, т.е. одной, включающей плацебо, и двух с использованием композиций, содержащих в разных концентрациях среду, получаемую после выклева).

Выбор участниц и их идентификация

Участницами были здоровые женщины в возрасте от 40 до 65, каждой из которых присваивали трехзначный номер, который при использовании в комбинации с номером клинического исследования образовывал уникальный идентификационный номер каждой участницы исследования. Этот номер закрепляли за участницей в течение всего исследования для сохранения анонимности эксперимента.

Критерии пригодности Критерии включения

1. Индивидуумы женского пола в возрасте от 40 до 65 включительно, имеющие общее хорошее состояние здоровья, определяемое при заполнении анкет по состоянию здоровья и пригодности.

2. Изъявление согласия на сотрудничество и участие с выполнением всех требований исследования в течение всей продолжительности исследования с условием немедленного уведомления о любых неблагоприятных симптомах.

3. Клинически установленное фотоповреждение кожи лица от небольшого до умеренного (мимические морщинки, морщины, гиперпигментация, вялость и шероховатость), соответствующее оценке от 3 до 7 по модифицированной шкале Гриффита.

4. Отсутствие заболеваний или физических повреждений кожи лица (например, атопического дерматита, экземы, псориаза, себорейного дерматита), которые могут повлиять на оценку состояния испытуемых участков или создавать риск здоровью индивидуума при участии в исследовании.

5. Изъявление согласия на то, что участница не будет находиться на солнечном свету в течение продолжительных периодов времени и полностью исключит визиты в солярий в течение всей продолжительности исследования. Особое внимание следует уделить ношению защитной одежды, а также солнечных очков, и избегать воздействия солнечного света с 10 часов утра до 4 часов вечера.

6. Изъявление согласия на то, что участница будет продолжать использование всех привычных наименований декоративной косметики, очищающих средств, тонизирующего средства (если их применяет) и средства для удаления макияжа в течение всей продолжительности исследования. Индивидуумы должны воздержаться от использования каких-либо средств против старения или для осветления кожи за исключением назначенного испытуемого материала.

7. Изъявление согласия на то, что по меньшей мере за 20 минут перед каждым запланированным визитом в клинику участница полностью удаляет макияж. До завершения диагностического визита участница не должна наносить на лицо или область вокруг глаз никаких других местных средств. Если участница приходит с макияжем, удаленным не полностью, то такая участница должна удалить оставшийся макияж в клинике и не приступать к процедурам в течение еще по меньшей мере 20 минут.

8. Индивидуумы, принимающие гормонозаместительную терапию или противозачаточные гормоны, должны находиться в стадии стабильного режима в течение по меньшей мере одного месяца до начала исследования, и они должны изъявить согласие продолжать принимать предписанные медикаменты в течение всей продолжительности исследования. Индивидуумы, не принимающие гормонозаместительную терапию или гормоны до начала исследования, должны изъявить согласие не начинать подобную терапию в течение всей продолжительности исследования.

9. Изъявление согласия на сотрудничество и участие с выполнением всех требований исследования в течение всей продолжительности исследования с условием немедленного уведомления о любых неблагоприятных симптомах.

Критерии исключения

1. Индивидуумы, анамнез которых содержит упоминание о непереносимости или аллергии на какое-либо средство личной гигиены.

2. Индивидуумы, которые использовали прописанные или безрецептурные средства для осветления кожи в течение менее чем 30 суток до начала исследования.

3. Индивидуумы, имеющие состояние и/или заболевание кожи, которые проверяющий Исследователь считает неприемлемыми для участия.

4. Кормящие, беременные или планирующие наступление беременности во время исследования.

5. Индивидуумы, которые постоянно использовали средства против старения, против образования морщин, антиоксиданты для местного применения в течение менее чем 30 суток перед началом исследования.

6. Индивидуумы, которые использовали ферментативную терапию кожи лица в течение 6 месяцев до начала исследования.

7. Использование Retin-A®, Retin-A Micro®, Renova®, Avita®, Tazorac®, Avage® или Differin® или других ретиноидов для местного применения в течение 3 месяцев до начала исследования или прием Accutane или ретиноида для перорального введения в течение последних 6 месяцев.

8. Регулярное нанесение на кожу лица средств, содержащих альфа-, бета- или поли-гидроксикислоты (включая салициловую кислоту и Lachydrin), ретинол или производные ретинола, или других средств, ′предотвращающих старение′, в течение 30 суток до начала исследования.

9. Индивидуумы, прошедшие процедуры абразивной шлифовки дермы лица или химического пилинга в течение 3 месяцев до терапии или во время исследования.

10. Индивидуумы, получавшие радиочастотную лифтинг-терапию (RF-light терапию) или других устройств на участках, подвергаемых испытанию, в течение 6 месяцев до начала терапии или во время исследования.

11. Индивидуумы, которым вводили инъекции Ботокса (англ. Botox), коллагена, жиров или подвергали другим способам наполнения тканей с помощью инъекционного или имплантированного материала на участках, подвергаемых испытанию, в течение 9 месяцев до начала терапии или во время исследования.

12. Индивидуумы, подвергавшиеся процедуре омоложения, подтяжки лица или хирургическим операциям в области глаз или глазных век в течение 12 месяцев до начала настоящего испытания.

13. Индивидуумы, у которых ранее наблюдали и/или которые имеют латентные дерматологические состояния лица (например, витилиго, атопический дерматит, псориаз, красные угри, экзема, себорейный дерматит, серьезные ссадины и т.д.) или медицинские состояния/заболевания, которые, по мнению Исследователя, могут влиять на результаты исследования.

14. Индивидуумы, в анамнезе которых имеются иммунодепрессивные /иммунодефицитные нарушения (включая БИЧ инфекцию или СПИД), или которые принимают иммунодепрессанты.

15. Индивидуумы, которые участвовали в других клинических исследованиях (аппликационные пробы допускаются).

16. Индивидуумы, имеющие неконтролируемые заболевания, например, диабет, гипертонию, гипертиреоз или гипотиреоз. Некоторые индивидуумы, имеющие множественные нарушения здоровья, исключались из участия, даже если их состояния могли контролироваться диетой, применением медикаментов и т.д.

17. Индивидуумы, которые участвовали в любых клинических исследованиях в течение 28 суток до начала участия в настоящем исследовании.

Индивидуумы были допущены к исследованию на усмотрение Исследователя или его заключения, сделанного на основании медицинского анамнеза и результатов предварительного собеседования и обследования.

План исследования

Для оценки эффективности местной терапии кожи у участниц исследования, имеющих фотоповреждение от небольшого до умеренного, т.е. состарившуюся кожу лица, было проведено двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое испытание. Продолжительность этого испытания составляла 12 недель; осмотры проводили до начала терапии, на 2 неделе, на 6 неделе и на 12 неделе. Эффективность оценивали визуально, с помощью оборудования, цифровых фотографий VISIA CR и анкет самостоятельной оценки своего состояния участницами.

Полностью прошли исследование три группы с N>30 человек в группе. Участницам в течение двенадцати недель обрабатывали лицо активным средством, воздействующим на кожу, а именно описанной выше композицией на основе среды, получаемой после выклева, или контролем в виде носителя (вода). Разделение участниц на 3 группы производили согласно предварительно заданному способу рандомизации.

Оценка эффективности и переносимости

Перечисленные ниже параметры правой и левой сторон лица определялись экспертом по клинической оценке. Использовали модифицированную шкалу Гриффита со следующими градациями: 0 = нет, 1-3 = небольшое, 4-6 = умеренное и 7-9 = сильное. При необходимости, для лучшего описания состояния кожи, использовали половинные значения баллов.

- Мимические

- морщинки

- Морщины

- Гиперпигментация

- Вялость

- Отсутствие блеска/матирование (яркость)

- Шероховатость на ощупь

Перечисленные ниже параметры правой и левой сторон лица определялись экспертом по клинической оценке. Использовали четырехбалльную шкалу со следующими градациями: 0 = нет, 2 = небольшое, 3 = умеренное и 4 = сильное. При необходимости, для лучшего описания состояния кожи, использовали половинные значения баллов.

- Покраснение

- Сухость/шелушение

- Ощущение жжения/острого жжения

- Зуд

- Тянущее ощущение/сухость

Получение цифровых VISIA CR фотографий

Получали VISIA-CR изображения правой и левой сторон лица. Участниц фотографировали с убранными назад с лица волосами, без украшений, с закрытыми глазами, при расположении участницы в центре кадра и так, чтобы выражение лица участницы было нейтральным.

Потери влаги испарением через кожу (TEWL)

Перед проведением измерений с помощью оборудования организм участницы уравновешивали до условий окружающей среды в клинике в течение по меньшей мере 20 минут. Во время диагностических визитов состояние окружающей среды записывали каждый час. В это время состояние участниц оценивали в соответствии со шкалами, участницы заполняли анкеты и/или их фотографировали с использованием VISIA CR.

Во время всех визитов для определения потерь влаги испарением через кожу (TEWL) использовали датчик для определения потерь влаги (Tewameter). Измерения выполняли на правой и левой щеках на пересечении линии, проходящей вниз от угла глаза, и линии, проходящей горизонтально через основание носа.

Для определения TEWL в датчике потерь влаги используют систему с открытой камерой. Ручной зонд, помещаемый на поверхность кожи, определяет относительную влажность в двух точках над поверхностью, что позволяет вычислить скорость потери влаги на основании измеренного градиента влажности.

Кутометр МРА 580

Во время всех визитов всем участницам проводили измерения с помощью Кутометра. Кутометр применяли для оценки вязкоэластичных свойств (т.е. растяжимости и эластичности) кожи. Устройство создает вакуум на небольшом участке кожи и измеряет упругую ответную реакцию кожи (по перемещению кожи внутрь и наружу из отверстия) оптическим способом.

Для этого исследования применяли 2-мм зонд, вакуум, составляющий 300 мбар (10² Па), и два цикла втягивания и высвобождения. Продолжительность воздействий в цикле была следующей: 5 секунд - включено, и 10 секунд - выключено.

Измерения выполняли на правой и левой щеках на пересечении линии, проходящей вниз от угла глаза, и линии, проходящей горизонтально через основание носа, или на другом участке вблизи челюсти.

Оценка состояния кожи и анкеты самостоятельной оценки своего состояния

Участницы заполняли анкеты самостоятельной оценки состояния своей кожи, содержащие вопросы о том, как участница ощущает состояние и оценивает внешний вид кожи лица на правой и левой сторонах лица.

Результаты Мимические морщинки

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали уменьшение мимических морщинок (например, процентное изменение, составляющее 5,59% (1% раствор) и 5,65% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (4,58%). Уменьшение мимических морщинок продолжалось в течение недели 6 (например, 14,34% (1% раствор), 14,86% (3% раствор) и 8,98% (плацебо)) и недели 12 (например, 23,43% (1% раствор), 25,99% (3% раствор) и 14,68% (плацебо)). На Фиг. 1 и 2 представлена участница, для которой уменьшение мимических морщинок составило 28%.

Морщины

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали уменьшение морщин (например, процентное изменение, составляющее 2,15% (1% раствор) и 1,75% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (0,70%). Уменьшение морщин продолжалось в течение недели 6 (например, 6,13% (1% раствор), 7,32% (3% раствор) и 3,70% (плацебо)) и недели 12 (например, 14,72% (1% раствор), 15,15% (3% раствор) и 9,57% (плацебо)). На Фиг.1 представлена участница, для которой уменьшение морщин составило 12,5%. На Фиг.3 представлена участница, для которой уменьшение морщин составило 26,32%.

Гиперпигментация

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали снижение гиперпигментации (например, процентное изменение, составляющее 2,11% (1% раствор) и 2,68% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (0,40%). Снижение гиперпигментации продолжалось в течение недели 6 (например, 5,61% (1% раствор), 7,91% (3% раствор) и 3,16% (плацебо)) и недели 12 (например, 10,53% (1% раствор), 15,35% (3% раствор) и 5,73% (плацебо)). На Фиг.1 представлена участница, для которой снижение пигментации возрастного пятна спустя 12 недель составило 15%.

Вялость

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали снижение вялости (например, процентное изменение, составляющее 2,64% (1% раствор) и 1,62% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (0,87%). Снижение вялости продолжалось в течение недели 6 (например, 6,33% (1% раствор) и 6,61% (3% раствор), 2,51% (плацебо)) и недели 12 (например, 10,55% (1% раствор) и 11,33% (3% раствор), 5,18% (плацебо)). На Фиг.1 представлена участница, для которой снижению вялости (отвисания) спустя 12 недель составило 7,69%.

Отсутствие блеска/матирование (яркость)

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали улучшение яркости кожи (например, процентное изменение, составляющее 12,95% (1% раствор) и 16,00% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (10,67%). Улучшение продолжалось в течение недели 6 (например, 29,26% (1% раствор), 28,50% (3% раствор) и 19,07% (плацебо)) и недели 12 (например, 37,17% (1% раствор), 39,18% (3% раствор) и 26,72% (плацебо)). На Фиг. 1 представлена участница, для которой снижение тусклости кожи составило 33,33%.

Шероховатость на ощупь

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали уменьшение ощущаемой шероховатости кожи (например, процентное изменение, составляющее 16,51% (1% раствор) и 20,24% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (13,38%). Улучшение продолжалось в течение недели 6 (например, 24,77% (1% раствор), 26,65% (3% раствор) и 16,79% (плацебо)), но в течение недели 12 не наблюдали дополнительного снижения (например, 26,61% (1% раствор), 29,19% (3% раствор), и 15,79% (плацебо)). На Фиг. 1 представлена участница, для которой снижение ощущаемой шероховатости составило 12,5%.

Сухость/шелушение

Ко 2й неделе у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали уменьшение в сухости/шелушения кожи (например, процентное изменение, составляющее 72,09% (1% раствор) и 100,00% (3% раствор)) по сравнению с применением плацебо (64,71%). Однако, в течение недели 6 (например, 86,05% (1% раствор), 84,62% (3% раствор) и 100,00% (плацебо)) и недели 12 дополнительного снижения по сравнению с плацебо (например, 90,70% (1% раствор), 100,00% (3% раствор) и 89,47% (плацебо)) не наблюдали.

TEWL

Несмотря на то, что у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали снижение TEWL в течение 2й недели, это снижение не слишком отличалось от действия плацебо (например, процентное изменение составляло 15,35% (1% раствор) и 14,53% (3% раствор) по сравнению с применением плацебо (17,26%)). Однако, к неделе 6 было заметно дополнительное снижение, превышающее снижение под действием плацебо (например, 29,46% (1% раствор), 26,66% (3% раствор) и 22,96% (плацебо)), и к неделе 12 наблюдали снижение, превышающее снижение, получаемое при действии плацебо (например, 37,46% (1% раствор), 40,04% (3% раствор) и 34,21% (плацебо)).

Растяжимость

Несмотря на то, что у участниц, которым наносили лосьон для кожи, содержащий одну из активных композиций, наблюдали улучшение растяжимости кожи в течение недели 2, его величина лишь слегка отличалась от улучшения под действием плацебо (например, процентное изменение составляло 16,18% (1% раствор) и 17,21% (3% раствор) по сравнению с применением плацебо (10,82%)). К неделе 6 явного различия между результатами трех терапий не наблюдали (например, 18,04% (1% раствор), 17,18% (3% раствор) и 19,90% (плацебо)), но к неделе 12 наблюдали дополнительное улучшение при обработке кожи композициями, содержащими активный компонент, которое было более выраженным, чем эффект плацебо (например, 31,84% (1% раствор), 33,57% (3% раствор) и 16,48% (плацебо)).

Сравнение тактильных оценок/оценок по визуальной клинической шкале обеих сторон лица, выполненное в начале исследования (начальное состояние) и спустя 12 недель терапии, показывает, что у всех участниц наблюдали снижение тусклости и шероховатости кожи после обработки композицией согласно изобретению на основе среды, получаемой после выклева, и у большинства участниц наблюдали уменьшение мимических морщинок (97% участниц), морщин (91% участниц), гиперпигментации (87% участниц) и отвисания (80% участниц) (Фиг. 4).

Содержание анкет показывает, что после шести недель терапии в количестве утверждений, касающихся общего внешнего вида, ощущений в целом, гладкости, мягкости, яркости и эластичности кожи, полученных в результате применения плацебо и в результате применения косметической композиции согласно изобретению на основе среды, получаемой после выклева, имеются статистически значимые различия.

Таким образом, приведенные выше результаты показывают, что композиция, содержащая экстракт среды, получаемой после выклева, более эффективна в отношении каждого аспекта состарившейся кожи, чем плацебо.

Пример 3

Сравнение действия композиции на основе среды, получаемой после выклева, и известных косметических средств на реконструированный эпидермис человека in vitro

Реконструированный in vitro человеческий эпидермис состоит из нормальных кератиноцитов человека, культивируемых на инертном фильтре из поликарбоната на границе раздела воздух жидкость в определенной химической среде. Такая модель in vitro гистологически аналогична человеческому эпидермису in vivo.

На роговой слой реконструированного эпидермиса человека (SkinEthic) в течение 12 часов, 24 часов или 48 часов воздействовали 200 мкл одного из следующих растворов:

1% Композиция на основе среды, получаемой после выклева;

5% Гликолевая кислота (AHA);

1 мЕ/мл бромелайна (фруктовый фермент); или

dH₂O (контроль).

По завершении воздействия культуры фиксировали в 4% (масс./об.) растворе параформальдегида в фосфатно-солевом буфере (англ. phosphate buffer saline, сокращенно PBS) при 4°C и анализировали с помощью сканирующего электронного или оптического микроскопа.

Оценка полученных с помощью сканирующего электронного микроскопа микроизображений реконструированного человеческого эпидермиса после воздействия в течение 12 часов (Фиг. 5) показывает, что воздействие 5% раствора гликолевой кислоты приводит к повреждению рогового слоя и разъеданию кожи. Воздействие бромелайна приводит к отшелушиванию за счет ферментации клеточной оболочки. Напротив, воздействие композиции согласно изобретению на основе среды, получаемой после выклева, приводит к отшелушиванию за счет отрыва неповрежденных корнеоцитов, поскольку происходит разрушение лишь на участках сцепления клеток. Таким образом, раствор среды, получаемой после выклева, обеспечивает мягкое микроотшелушивание кожи.

Полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа микроизображения реконструированного человеческого эпидермиса после воздействия в течение 48 часов (Фиг. 6) показывают, что воздействие гликолевой кислоты приводит к серьезному повреждению кожи, при котором разрушается клеточная оболочка, так что явно виден клеточный цитосклет. Несмотря на то, что воздействие бромелайна приводит к получению достаточно гладкой поверхности кожи, на изображении все же имеются неровные участки. Однако, воздействие композиции согласно изобретению на основе среды, получаемой после выклева, приводит к чрезвычайно гладкой поверхности кожи, состояние которой лучше, чем состояние кожи контрольного образца (т.е. без обработки). Таким образом, можно отметить, что воздействие композиции на основе среды, получаемой после выклева, дает эффект разглаживания кожи.

Оптическая микроскопия участков реконструированного человеческого эпидермиса (Фиг. 7) показывает, что воздействие гликолевой кислоты в течение 24 часов приводит к разрушению живых клеток, включая стволовые клетки эпидермиса, находящиеся в базальном слое (stratum basale). Все, что остается после воздействия гликолевой кислоты - несколько пикнотических ядер (на участках необратимой конденсации хроматина) и безъядерные клетки. Воздействие бромелайна в течение 24 часов приводит к минимальным изменениям в stratum basale и шиповатом слое (stratum spinosum). Напротив, как видно на изображении, воздействие на реконструированную кожу в течение 24 часов композиции на основе среды, получаемой после выклева, согласно изобретению приводит к пролиферации и дифференциации клеток (см. стрелку А на Фиг. 7). После 48-часового воздействия композиции на основе среды, получаемой после выклева, в коже наблюдается уплотнение stratum granulosum и повышение концентрации пластинчатых гранул (см. стрелку В на Фиг. 7). Таким образом, композиция согласно изобретению на основе среды, получаемой после выклева, обладает омолаживающим действием на кожу, и ее применение приводит к улучшению барьерной функции кожи.

1. Способ улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин, мимических морщинок, гиперпигментации, вялости, сухости кожи, шелушения и/или потери влаги испарением через кожу млекопитающего, который включает введение млекопитающему косметической композиции, где композиция получена или может быть получена способом, который включает по меньшей мере следующие этапы:
a) суспендирование икры Salmonidae, предпочтительно икры лосося, в минимальном объеме воды;
b) инициирование синхронизированного быстрого выклева икры, предпочтительно так, чтобы в течение менее 2 часов завершался выклев более 95% эмбрионов;
c) фильтрование икорной массы после выклева с целью получения среды, получаемой после выклева; и
d) фильтрование среды, получаемой после выклева, с получением композиции, где этап фильтрования среды, получаемой после выклева, включает по меньшей мере следующие этапы:
(i) фильтрование среды, получаемой после выклева, с помощью фильтра, размер пор которого составляет по меньшей мере 5 мкм, и сбор фильтрата;
(ii) фильтрование фильтрата, полученного на этапе (i), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,30 до 0,60 мкм, и сбор фильтрата;
(iii) замену воды в фильтрате, полученном при проведении этапа (ii), фармацевтически приемлемым буфером путем осуществления диафильтрации с применением фильтра с эксклюзионным размером, составляющим менее 15 кДа;
(iv) фильтрование раствора, полученного при проведении этапа (iii), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,15 до 0,30 мкм, и сбор фильтрата; и
(v) получение косметической композиции из фильтрата, полученного при проведении этапа (iv).

2. Способ по п. 1, в котором:
а) размер пор фильтра, применяемого на этапе (i), составляет от 5 до 15 мкм, предпочтительно размер пор составляет 7 мкм;
b) размер пор фильтра, применяемого на этапе (ii), составляет от 0,35 до 0,55 мкм, и предпочтительно размер пор составляет 0,45 мкм; и/или
c) размер пор фильтра, применяемого на этапе (v), составляет 0,22 мкм.

3. Способ по п. 1, в котором икра Salmonidae представляет собой икру лосося атлантического или лосося тихоокеанского.

4. Способ по п. 1, в котором кожа представляет собой состарившуюся кожу.

5. Способ по п. 1, в котором кожа млекопитающего подвергается увлажнению.

6. Способ по п. 1, в котором косметическая композиция предназначена для местного нанесения на кожу.

7. Способ по п. 1, где косметическую композицию наносят, вводят пропитыванием или связывают химическими связями с продуктом, материалом или устройством.

8. Способ по п. 1, где указанный способ предназначен для улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин и/или вялости кожи.

9. Косметическая композиция, как определено в п. 1, для применения в целях улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин, мимических морщинок, гиперпигментации, вялости, сухости кожи, шелушения и/или потери влаги испарением через кожу млекопитающего, где кожа предпочтительно представляет собой кожу, как определено в п. 4, косметическое состояние кожи представляет собой состояние, как определено в п. 5, и/или введение представляет собой нанесение, как определено в п. 6.

10. Композиция по п. 9, где указанная косметическая композиция нанесена, введена пропитыванием или связана химическими связями с продуктом, материалом или устройством.

11. Композиция по п. 9, где композиция предназначена для улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин и/или вялости кожи.

12. Применение косметической композиции, как определено в п. 1, при получении лекарственного препарата для улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин, мимических морщинок, гиперпигментации, вялости, сухости кожи, шелушения и/или потери влаги испарением через кожу млекопитающего, причем предпочтительно кожа представляет собой кожу, как определено в п. 4, косметическое состояние кожи представляет собой состояние, как определено в п. 5, и/или введение в организм представляет собой нанесение, как определено в п. 6.

13. Применение по п. 12, где косметическую композицию наносят, вводят пропитыванием или связывают химическими связями с продуктом, материалом или устройством.

14. Применение по п. 12, где лекарственный препарат предназначен для улучшения или профилактики косметического состояния или уменьшения или профилактики распространения морщин и/или вялости кожи.

15. Способ получения косметической композиции, включающий по меньшей мере следующие этапы:
a) суспендирование икры Salmonidae, предпочтительно икры лосося, в минимальном объеме воды;
b) инициирование синхронизированного быстрого выклева икры, предпочтительно так, чтобы в течение менее 2 часов завершался выклев более 95% эмбрионов;
c) фильтрование икорной массы после выклева с целью получения среды, получаемой после выклева; и
d) фильтрование среды, получаемой после выклева, с получением композиции, где этап фильтрования среды, получаемой после выклева, включает по меньшей мере следующие этапы:
(i) фильтрование среды, получаемой после выклева, с помощью фильтра, размер пор которого составляет по меньшей мере 5 мкм, и сбор фильтрата;
(ii) фильтрование фильтрата, полученного на этапе (i), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,30 до 0,60 мкм, и сбор фильтрата;
(iii) замену воды в фильтрате, полученном при проведении этапа (ii), фармацевтически приемлемым буфером путем осуществления диафильтрации с применением фильтра с эксклюзионным размером, составляющим менее 15 кДа;
(iv) фильтрование раствора, полученного при проведении этапа (iii), с помощью фильтра, размер пор которого составляет от 0,15 до 0,30 мкм, и сбор фильтрата; и
(v) получение косметической композиции из фильтрата, полученного при проведении этапа (iv).