Способ сохранения in vitro растений земляники (fragaria l.)

Авторы патента:

Высоцкая Ольга Николаевна (RU)

A01H4/00 - Разведение растений из тканевых культур

Владельцы патента RU 2564565:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук (ФГБУН ИФР РАН) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и растениеводства. Изобретение представляет собой способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.), заключающийся в том, что растения помещают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, модифицированную 6% сахарозы, 10-12 г/л агар-агара, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-0,5 мг/л паклобутразола, 6 мМ глюконата кальция, а на ее поверхность выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра, закрывают пробирки и переносят их в условия при температуре от 1 до 10°С, 6-часовом световом дне и освещенности 0,5-0,8 клк. Заявленное изобретение обеспечивает долговременное сохранение in vitro коллекций растений земляники в состоянии ингибированного роста без смены питательной среды в течение двух и более и позволяет увеличить продолжительность хранения в жизнеспособном состоянии 65-69% растений земляники, а также 100% клонов этой культуры до двух и более лет и использовать его для научных и промышленных целей. 3 ил., 4 табл., 2 пр.

Область техники

Изобретение относится к биотехнологии и растениеводству и может быть использовано в садоводстве для сохранения растений in vitro.

Сохранение коллекций ценных клонов растений часто становится необходимым для обеспечения непрерывности производственного процесса в научно-исследовательских и промышленных лабораториях, которые используют технологию культивирования растительного материала in vitro для размножения растений вегетативным способом.

Уровень техники

Существуют разработанные ранее разнообразные биотехнологические приемы увеличения продолжительности сохранения растений in vitro без смены питательной среды: хранение растений земляники в стеклянных пробирках при комнатной температуре (Самсонова О.К., Трушечкин В.Г. Способ сохранения in vitro жизнеспособности растений: АС №1630708 // Бюл. изобр. 1991. - №8. - С. 16) и при низкой положительной температуре (Высоцкая О.Н. Длительное сохранение in vitro коллекции растений земляники // Физиология растений. 1994. Т. 41. №6. С. 935-941);

хранение растений земляники в пакетах из газопроницаемого пластика (Reed В.M. Application of gas-permeable bags for in vitro cold storage of strawberry germplasm // Plant Cell Rep. 1991. 10. №9. P. 431-434);

хранение растений земляники в стеклянных пробирках, газопроницаемых пластиковых пакетах и пластиковых коробках (Reed В.M. Cold storage of strawberries in vitro: A comparison of three storage systems // Fruit Varieties Journal. 1992. 46. P. 98-102);

хранение растений земляники в режиме 12-часового освещения при температуре 4°С {Reed В.M. Photoperiod improves long-term survival of in vitro-stored strawberry plantlets // Hort. Science. 2002. 37. P. 811-814);

хранение растений земляники в темноте при 4°С в стеклянных банках закрытых пластиковыми крышками на среде, дополненной глюкозой или маннитом (Lisek A., Orlikowska Т. Factors influencing long-term storage of strawberry shoots in vitro // Acta Horticulturae. 2001. 560. P. 189-192).

Однако все эти методы не могут обеспечивать сохранение живых растений земляники достаточно долго, например, более двух лет.

Известно, что если сосуды с растительным материалом герметично изолированы от окружающей среды пробками из разнообразных материалов: вата, пластик, фольга, пара-филм или полиэтиленовая пленка, то газовый состав внутри сосудов культивирования будет отличаться от состава атмосферы вне культивационных сосудов. Существуют опубликованные данные о том, что внутри культивационных сосудов накапливается этилен (Perl A., Aviv D., Galun E. Ethylene and in vitro culture of potato: Suppression of ethylene generation vastly improves protoplast yield, plating efficiency and transient expression of an alien gene // Plant Cell Rep. 1988. V. 7. P. 403-406). Избыток этилена в сосудах культивирования стимулирует рост растяжением растений земляники (Qin Y., Zhang. S., Zhang L., Zhu D., Syed A. Response of in vitro strawberry to silver nitrate AgNO₃//Hort Science. 2005. 40. №3. P. 749-751). Избыток этилена ускоряет старение листьев у растений культивируемых in vitro (Podwyszynska M., Goszcynska D.M. Effect of inhibitors of ethylene biosynthesis and action, as well as calcium and magnesium on rose shoot rooting, shoot-tip necrosis and leaf senescence in vitro // Acta Physiologiae Plantarum. 1998. V. 20. №1. P. 91-98).

Следовательно, полная изоляция сосудов культивирования, которую используют для предотвращения подсушивания питательной среды и дегидратации растительного материала (Самсонова О.Н., Трушечкин В.Г. Способ сохранения in vitro жизнеспособности растений: АС №1630708 // Бюл. изобр. 1991. - №8. - С. 16; Reed В.М. Application of gas-permeable bags for in vitro cold storage of strawberry germplasm//Plant Cell Rep. 1991. 10. №9. P. 431-434), может быть причиной снижения жизнеспособности растений in vitro. В данной ситуации, логично предположить, что ингибирование накопления этилена внутри культивационных сосудов должно увеличивать сроки хранения в них растений без применения пересадок, проветривания или обновления питательной среды. Применение ингибиторов синтеза этилена существенно улучшало физиологическое состояние растений картофеля (Curtis R.W. Antiethylene properties of silver thiosulphate in mung bean are lost in the dark // Plant Science Letters. 1984. V. 37. №1-2. P. 53-55). Растения картофеля сохранялись в закрытых пленкой сосудах (Sarkar D., Sub K.С, Chakrabarti S.K., Naik P.S. Growing of potato micro-plants in the presence of alginate-silver-thiosulfate capsules reduces ethylene-induced culture abnormalities during minimal growth conservation in vitro // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2002. 68. P. 79-89). Это стимулировало образование адвентивных побегов на листовых дисках земляники (Qin Y, Zhang. S., Zhang L, Zhu D., Syed A. Response of in vitro strawberry to silver nitrate AgNO₃//HortScience. 2005. 40. №3. P. 749-751).

Наиболее близким техническим решением является способ сохранения in vitro жизнеспособности растений, основанный на использовании модифицированной питательной среды для сохранения in vitro растений земляники в условиях комнатной температуры (Самсонова О.Н., Трушечкин В.Г. Способ сохранения in vitro жизнеспособности растений: АС №1630708 // Бюл. изобр. 1991. - №8. С. 16).

Недостатком этого способа является то, что он позволяет сохранять живыми всего 50% растений земляники в течение 8 месяцев или 40% растений земляники в течение 12 месяцев. Тем не менее, использование одной из модификаций данного метода позволило сохранять живыми, в среднем, 60% растений земляники при пониженной положительной температуре (2-4°С) в течение 24 месяцев (Высоцкая О.Н. Длительное сохранение in vitro коллекции растений земляники // Физиология растений. 1994. Т.41. №6. С. 935-941).

Известно, что введение в состав питательной среды нитрата серебра - ингибитора этилена инициирует in vitro формирование усов у растений земляники, минуя стадию цветения (Zatykó JM, Kiss G, Radics ZS, Simon I. Initiation of strawberry runner formation in vitro // Acta Horticulturae. 1989. V. 265. P. 349-352), а также стимулирует образование адвентивных побегов на листовых дисках (Qin Y, Zhang. S., Zhang L, Zhu D., Syed A. Response of in vitro strawberry to silver nitrate AgNO₃ // Hort Science. 2005. 40. №3. P. 749-751). Однако наши попытки использовать данный технологический прием для долговременного сохранения коллекции растений земляники in vitro не принесли успеха. Растения, сохраняемые в таких условиях длительное время, часто страдали разнообразными морфологическими нарушениями: хлороз, витрификация и, как правило, погибали в течение 12-16 месяцев.

Тем не менее, существуют опубликованные данные об использовании ионов серебра для ингибирования синтеза этилена у сохраняемых in vitro микро-растений картофеля (Sarkar D., Sub K.С., Chakrabarti S.K., Naik P.S. Growing of potato micro-plants in the presence of alginate-silver-thiosulfate capsules reduces ethylene-induced culture abnormalities during minimal growth conservation in vitro // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2002. 68. P. 79-89). Для этого в пробирки с растениями помещали тиосульфат серебра, заключенный в оболочку из альгината кальция. Затем, пробирки, закрытые пластиковыми крышками и пленкой парафилм, помещали в холодильную камеру (температура 6°С при 16-часовом освещении интенсивностью в 20 µmol/m^-2·s^-1). Данный прием обеспечивал нормализацию морфологии микрорастений картофеля, которые сохраняли в пробирках в течение 16 месяцев в условиях ингибирующих рост на питательной среде Мурасиге и Скуга (МС), дополненной 20 г/л маннита и 40 г/л сахарозы (Murashige Т., Skoog F. A Revised Medium for Rapid Growth and Bioassays with Tobacco Tissue Cultures // Physiol. Plant., 1962, V. 15, №4, P. 473-497).

Метод, описанный выше, не может быть в полной мере применен для долговременного сохранения растений земляники, поскольку питательная среда, модифицированная для растительного материала картофеля, не подходит для культивирования земляники in vitro.

Сущность изобретения

Задача изобретения

Задачей, на решение которой направлено данное изобретение, является создание нового способа, использование которого обеспечит долговременное сохранение in vitro коллекций растений земляники в состоянии ингибированного роста без смены питательной среды в течение двух и более лет.

Решение задачи

Поставленная задача решается тем, что создан новый способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.), заключающийся в том, что растения помещают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, модифицированную 6% сахарозы, 10-12 г/л агар-агара, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-0,5 мг/л паклобутразола, 6 мМ глюконата кальция, а на поверхность агаризованной среды выкладывают гранулы тиосульфата серебра, заключенные в оболочку из альгината кальция, закрывают пробирки и переносят их в условия при температуре от 1 до 10°С, 6-часовом световом дне и освещенности 0,5-0,8 клк.

Перечень фигур, чертежей и иных материалов

Таблица 1 - изменение жизнеспособности растений земляники, сохранявшихся in vitro по заявленному способу.

Таблица 2 - состав питательных сред для культивирования растений земляники.

Таблица 3 - данные визуального учета состояния 50 клонов земляники (Fragaria L.), сохраняемых in vitro по заявляемому способу (среда ДЕП-1).

Таблица 4 - данные визуального учета состояния 50 клонов земляники (Fragaria L.), сохраняемых in vitro по заявляемому способу (среда ДЕП 2).

Фиг. 1 - растения земляники садовой (Fragaria × ananassa Duch.) сортов Гренада и Marmolada, которые сохраняли по заявляемому способу на среде ДЕП 1 (пример №1) с 2010 по 2012 г.

Фиг.2 - растения земляники садовой (Fragaria × ananassa Duch.) сорта Senga Sengana, которое сохраняли более 4 лет в условиях ингибирования роста по заявляемому способу (пример №1) с 02.11.2005 г. по 25.12.2009 г.

Фиг. 3. - растения земляники садовой (Fragaria × ananassa Duch.) сортов Гренада и Marmolada, которые сохраняли на среде ДЕП-2 по заявляемому способу (пример №2) с 2012 по 2014 г.

Сущностью настоящего технического решения является то, что заявляемый способ, в основном, представляющий собой совокупность модифицированных нами методов сохранения растений in vitro, известных ранее, эффективно обеспечивает сохранение 100% клонов культуры земляники в течение двух и более лет.

Новизна изобретения

Новизной способа является вся заявленная совокупность признаков и заключается в том, что для долговременного хранения живых растений земляники используют модифицированную питательную среду, дополненную органической солью кальция (глюконат кальция) вместо его неорганических солей, что позволяет снизить концентрации ионов хлора (Cl^-) и нитрат-ионов (ΝΟ₃ ^2-). Гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра впервые применяют для ингибирования синтеза этилена у растений земляники с целью продления срока хранения растительного материала в закрытых пробирках.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Растения 50 сортов земляники (табл. 1) из экспериментальной коллекции группы криосохранения растений ИФР РАН (Высоцкая О.Н. 25 лет сохранения in vitro коллекции земляники (Fragaria L.) // Плодоводство и ягодоводство России. 2014. Т. XXXVIII. Ч. 1. С. 74-81) после размножения in vitro на среде МС-Р (табл. 2) помещают в пробирки на модифицированную питательную среду ДЕП-1 (табл. 2), дополненную 6 мМ (2700 мг/л) глюконата кальция, 6% сахарозы, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1 мг/л паклобутразола и 12 г/л агар-агара. В пробирки с растениями земляники, на поверхность агаризованной питательной среды выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра. Затем, пробирки с растениями закрывают стеклянным колпачком, который закрепляют на пробирке несколькими слоями тонкой пищевой полиэтиленовой пленки и сохраняют в течение трех лет с 2010 по 2013 г. в условиях пониженной температуры (4-10°С), 6-часовом дне и освещенности 0,5-0,8 клк. После 24 месяцев хранения 69% растений земляники 50 сортов оставались в жизнеспособном состоянии (табл. 1, 3; фиг. 1). Еще через 6 месяцев количество живых растений снизилось до 53%. Оставшиеся живыми растения извлекают из пробирок и изолируют из них меристематические верхушки, которые на агаризованной питательной среде МС-В (табл. 2) восстанавливают свой рост. Некоторые из растений, сохраняемые предложенным способом, остаются живыми и после 4 лет хранения (фиг. 2). Таким образом, показано, что заявляемый способ, можно использовать для долговременного сохранения коллекций живых растений земляники.

Пример 2.

Растения земляники 50 сортов (табл.1) из экспериментальной коллекции группы криосохранения растений ИФР РАН (Высоцкая О.Н. 25 лет сохранения in vitro коллекции земляники (Fragaria L.) // Плодоводство и ягодоводство России. 2014. Т. XXXVIII. Ч. 1. С. 74-81) после размножения in vitro на среде МС-Р (табл. 2) помещают в пробирки на питательную среду ДЕП-2(табл. 2), модифицированную 6 мМ (2700 мг/л) глюконата кальция, 6% сахарозы, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,5 мг/л паклобутразола и 10 г/л агар-агара. В пробирки с растениями земляники, на агаризованную питательную среду выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра. Затем, пробирки закрывают стеклянным колпачком и закрепляют его на пробирке несколькими слоями тонкой пищевой полиэтиленовой пленки и сохраняют в течение трех лет с 2012 по 2014 г. в условиях пониженной температуры (4-10°С), 6-часовом дне и освещенности 0,5-0,8 клк. После 24 месяцев хранения 65% растений земляники 50 сортов оставались в жизнеспособном состоянии (табл. 4, фиг. 3). Следует отметить, что при использовании среды ДЕП 2 (табл. 2) для долговременного хранения у растений многих сортов земляники (фиг. 3) черенки листьев не вытягиваются, а признаки этиолирования, как правило, отсутствуют. После хранения, живые растения извлекают из пробирок и изолируют из них меристематические верхушки, которые на агаризованной питательной среде МС-В (табл. 2) восстанавливают свой рост. Таким образом, показано, что заявляемый способ можно использовать для долговременного сохранения коллекций живых растений земляники.

Результаты изобретения

Заявляемый способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.) обеспечивает долговременное сохранение in vitro коллекций растений земляники в состоянии ингибированного роста без смены питательной среды в течение двух и более лет. Заявляемый способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.) позволяет увеличить продолжительность хранения в жизнеспособном состоянии 65-69% растений земляники, а также 100% клонов этой культуры до двух и более лет и использовать его для научных и промышленных целей.

Способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.), заключающийся в том, что растения помещают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, модифицированную 6% сахарозы, 10-12 г/л агар-агара, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-0,5 мг/л паклобутразола, 6 мМ глюконата кальция, а на поверхность агаризованной среды выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра, закрывают пробирки и переносят их в условия при температуре от 1 до 10°С, 6-часовом световом дне и освещенности 0,5-0,8 клк.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения пеперомии in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, где при микроразмножении экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 10 г/л глюкозы и 0,1 мг/л Рибав-Экстра и культивируют в течение 4 недель, затем сформировавшиеся растения-регенераты с корнями замачивают в растворе 3 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси торфа и песка 1:1.

Способ клонального микроразмножения хризантемы // 2560592

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения хризантемы, включающий микрочеренкование растительных побегов, стерилизацию растительных эксплантов с последующей их высадкой на безгормональную питательную среду Мурасига и Скуга, размножение микроклонов, укоренение вновь образованных in vitro побегов и адаптацию растений-регенерантов к почвенным условиям, где на этапе стерилизации растительных эксплантов используют обработку микрочеренков водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03% в течение 10 мин, без последующего промывания стерильной дистиллированной водой, на этапе микроразмножения проводят обработку микрочеренков раствором католита в течение 3 мин, на этапе адаптации почвенный субстрат обрабатывают водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03%, а микрорастения обрабатывают раствором католита в течение 10 мин.

Способ получения дигаплоидных растений ячменя из культивируемых микроспор in vitro // 2557389

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения дигаплоидных растений ячменя из культивируемых микроспор in vitro, включающий: - выращивание растений-доноров при пониженной температуре воздуха 15-20°C, световом режиме: 16 ч день/8 ч ночь, влажности воздуха 60-70%, интенсивности освещения 10000-15000 люкс, с проведением фитосанитарной обработки, при этом выращивание растений-доноров осуществляют до стадии от открытия влагалища флагового листа, когда соцветие находится внутри флагового листа, - стрессовую обработку колосьев при 4°C, в пробирках с бедной средой, содержащей KCl - 1,5 г/л, MgSO4×7H2O - 0,25 г/л, CaCl2×2Н2О - 0,1 г/л, маннитол - 60 г/л, калий-фосфатный буфер - 1 мл/л, pH 7,0, в течение 7 дней для переключения из гаметофитного пути развития микроспоры на спорофитный путь, - выделение микроспор из колосков в стерильных условиях, - культивирование выделенных микроспор на модифицированной среде для индукции эмбриогенеза, включающей 6% мальтозу, 10 завязей на 1,5 мл культуры и регуляторы роста растений в количестве 1 мг/л 2,4-Д, 0,2 мг/л зеатина, причем добавление вышеуказанных компонентов осуществляется перед добавлением микроспор, - регенерацию растений из эмбриоидов путем культивирования на твердой питательной среде Мурашига и Скуга без добавления регуляторов роста растений, - обработку гаплоидных растений ячменя антимитотическим препаратом N-диацетил-N-(β,γ-эпоксипропил) аминоколхицином для удвоения хромосом и получения дигаплоидых растений.

Способ клонального микроразмножения и оздоровления подвоев яблони in vitro с использованием антибиотика гризеофульвин // 2557387

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения подвоев яблони ММ 106, СК 2, СК 3, СК 4, СК 7, где на этапах введения в культуру в среду Мурасиге-Скуга добавляется в качестве санирующего агента антибиотик гризеофульвин 500 мг/л.

Способ размножения гвоздики in vitro // 2553545

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений гвоздики in vitro. Изобретение представляет собой способ размножения гвоздики in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, отличающийся тем, что при микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%.

Способ размножения копеечника чайного (hedysarum theinum krasnob.) // 2547593

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS, затем образовавшиеся конгломераты микропобегов делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л.

Способ клонального микроразмножения винограда in vitro с деконтаминацией от микоплазменной инфекции // 2541769

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro с деконтаминацией от микоплазменной инфекции, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга без ростовых веществ и с уменьшенным количеством макроэлементов.

Способ клонального микроразмножения винограда in vitro // 2538859

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на питательную среду в присутствии ростовых веществ и культивирование, где высадку и культивирование осуществляют на твердой питательной среде Мурасиге и Скуга, содержащей в качестве росторегулирующего вещества препарат Мелафен в концентрации 10-7-10-11%.

Способ размножения гречихи in vitro // 2538167

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения гречихи in vitro, включающий размножение гречихи из асептических проростков семян.

Способ повышения коэффициента размножения капусты белокочанной в условиях in vitro // 2538163

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к селекции. Изобретение представляет собой способ повышения коэффициента размножения капусты белокочанной в условиях in vitro, включающий выращивание эксплантов, культирование их на питательной среде Мурасиге-Скуга, внесение в нее регуляторов роста тидиазурон в концентрации 1 мг/л в сочетании с индолил-3-уксусной кислотой - 0,5 мг/л, при использовании цветолож размером 0,2-0,3 мм, изолированных из бутонов длиной 0,5-0,7 мм, где цветоложе используют за 1-2 дня до распускания цветков и после выращивания их на питательных средах культивируют до образования почек в течение 14-21 суток.

Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины // 2565803

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйству. Изобретение представляет собой способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины, заключающийся в изоляции пазушных почек, предварительном их обезвоживании в средах, содержащих осмолитики, переносе почек в криопробирки, криоконсервации криопробирок с почками в жидком азоте, оттаивании почек и посткриогенной регенерации из них растений, отличающийся тем, что на этапе обезвоживания перед быстрым замораживанием сначала почки помещают в раствор I, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM с добавлением к сахарозе (0,2-0,5М) глицерола (1,7-2,5М)), затем почки переносят в раствор II, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM, сахароза (0,2-0,5М), глицерол (2,5-3,5М), этиленгликоль (1-1,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)), с последующим переносом в жидкость для замораживания (WPM, содержащая сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (3,5-4М), этиленгликоль (1,5-2,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)). Изобретение позволяет проводить прямую регенерацию из почек, обеспечивая генетическую сохранность in vitro культур ценных селекционных генотипов и генетически модифицированных клонов осины и выживаемость до 80% после криохранения в течение года. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Способ подготовки микропобегов in vitro ясеня, осины, ивы для последующего укоренения в условиях ex vitro // 2565806

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйстве. Изобретение представляет собой способ подготовки микропобегов in vitro ясеня, осины, ивы для последующего укоренения в условиях ex vitro, включающий перенос растений после стадии мультипликации на питательную среду WPM для элонгации, с добавлением сахарозы 30 г/л, агар-агара 9 г/л, инозитола 100 мг/л, пиридоксина 0,1 мг/л, тиамина 0,1 мг/л и никотиновой кислоты 0,5 мг/л, где в среду для элонгации добавляют глутамин в концентрации 0,5 или 1,0 ммоль/л, при этом культивирование растений осуществляется при повышенной освещенности - от 5 до 8 тыс. люкс. Изобретение позволяет получать физиологически и морфологически выровненные побеги осины, ясеня и ивы, что обеспечивает значительное повышение эффективности их укоренения ex vitro. 4 табл.

Способ выращивания мини-клубней оздоровленного картофеля в защищенном грунте // 2569239

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности картофелеводства. В способе выращивают мини-клубни оздоровленного картофеля в защищенном грунте, полученные от пробирочных растений. При этом после проверки исходных растений на вирусную инфекцию проводят черенкование здоровых растений, в конце мая - начале июня подготовленные растения высаживают в марлево-пленочный изолятор с повышенной густотой посадки. Растения высаживают непосредственно в пластиковые ящики с торфогрунтом, выстланные изнутри агриловой пленкой. Перед посадкой растения в торфогрунт вносят удобрения. Способ позволяет получать безвирусные мини-клубни картофеля. 1 ил., 1 табл.

Способ получения лекарственного растительного сырья лапчатки белой (potentilla alba l.) в условиях гидропоники // 2570623

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba L.) в условиях гидропоники, включающий использование черенков материнских растений, размножение и выращивание, где в качестве эксплантов используются черенки материнских растений, которые высаживают на питательную среду по прописи Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают для микроразмножения на питательную среду Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП+0,25 мкМ ИМК+0,05 мкМ ГК, укореняют побеги на агаризированной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мкМ НУК, затем растения-регенеранты вынимают из культуральных сосудов, отмывают корни в дистиллированной воде от агара, закрепляют в кассетах и помещают в гидропонную установку на 90 суток для адаптации и выращивания растительного лекарственного сырья на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей 1/4 состава макросолей, 1/4 состава микросолей, полный набор витаминов, хелата железа и кальция хлористого, при температуре 24-26°C, режим освещения: 16 часов день, 8 часов ночь. Изобретение позволяет увеличить выход лекарственного растительного сырья лапчатки белой по сырой массе за 1 год в условиях круглогодичных теплиц с содержанием экстрактивных веществ, идентичных в растительном сырье лапчатки белой, выращенной в полевых условиях. 3 ил., 1 табл.

Система контроля фотосинтетического и дыхательного со2-газообмена растений, изолированных органов и тканей in vitro // 2572349

Изобретение относится к области биохимии. Предложена система контроля фотосинтетического и дыхательного СО2-газообмена в культуре in vitro. Система герметичным образом через типовой уплотнитель сопрягается с прозрачным технологическим объемом in vitro с культивируемыми полноценными растениями на различных этапах онтогенеза, регенерантами, изолированными органами и тканями. Система образует вместе с подключенным технологическим объемом общий замкнутый герметичный воздушный контур. Контур состоит из последовательно соединенных между собой указанного технологического объема и воздушного насоса, ротаметра, воздушного осушителя и CO2-газоанализатора. Контур между CO2-газоанализатором и технологическим объемом in vitro дополнительно оборудован двухпозиционным газовым переключателем. Изобретение обеспечивает многократную воспроизводимость процедуры измерения. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Способ получения моноклональной линии растительных клеток // 2573927

Изобретение относится к биотехнологии. Представлен способ получения моноклональной линии растительных клеток от гетерологичной популяции растительных клеток, включающий следующие стадии. Способ включает получение гетерологичной популяции растительных клеток и получение протопластов от указанной гетерологичной популяции растительных клеток. Затем осуществляют разделение единичных протопластов путем подвергания получения протопластов проточно-цитометрическому сортингу. После этого осуществляют регенерацию отделенного единичного протопласта до образования микроколонии посредством совместного культивирования в присутствии материала фидерных клеток. Полученные микроколонии выделяют из материала фидерных клеток и культивируют до образования моноклональной линии растительных клеток. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Способ культивирования лимона in vitro // 2580033

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ культивирования лимона in vitro, заключающийся в том, что стерильные пазушные почки предварительно культивируют до появления микропобегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, затем вычленяют из них меристемы размером 0,4-0,6 мм с 2-3 примордиями и прививают их на подвой, выращенный in vitro на среде WPM, дополненной БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%, микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л. Изобретение позволяет сохранять в коллекции in vitro ценные генотипы цитрусовых культур с высокой степенью генетической стабильности и однородности растительного материала. 3 табл.

Способ размножения растений фритиллярий методом культуры in vitro // 2584581

Изобретение относится к области декоративного садоводства. Изобретение представляет собой способ размножения растений фритиллярий методом in vitro, включающий стерилизацию эксплантов, разделение их на части, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию, отличающийся тем, что после разделения эксплантов их помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара с добавлением - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, после культивирования на данной среде микролуковицы размножают на безгормональной среде Данстена и Шорта в течение 4 недель при освещении 3 клк 16 ч свет/ 8 ч темнота при температуре 24°C, укореняют и адаптируют в контейнерах со сфагновым мхом, в темноте, при температуре 7°C, в течение 2 месяцев. Изобретение позволяет получить высокий выход посадочного материала представителей рода фритиллярия при минимальных затратах регуляторов роста. 2 табл.

Способ сохранения качественных характеристик культуры in vitro некоторых древесных видов растений (лимонник китайский, рододендрон, сирень, береза повислая) // 2590703

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ сохранения качественных характеристик культуры in vitro некоторых древесных видов растений (лимонник китайский, рододендрон, сирень, береза повислая), включающий размножение микропобегов на искусственных питательных средах, где через 7-10 дней после культивирования в стандартных условиях побеги помещают в условия с температурой 4-8°С и уровнем освещенности 500-1000 люкс на срок до 8 (лимонник китайский, береза повислая) или до 12 месяцев (рододендрон, сирень). Изобретение позволяет повысить сохранность качественных характеристик культуры in vitro Лимонника китайского и Березы повислой. 3 табл.

Способ стимуляции роста меристемных растений картофеля in vitro // 2599556

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Меристемные растения опрыскивают 0,1% раствором ПАБК, куда вводят 0,1% биопрепарата Фитолавина при температуре 20-25°С, а при повторном опрыскивании в фазе 3-4 листьев в раствор дополнительно добавляют 0,2-0,3% гумата калия. Изобретение позволяет ускорить процесс размножения меристемных растений и увеличить количество миниклубней. 1 табл., 1 пр.