Кристаллическая форма 2-хлоро-4-метокси-n-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида, активный компонент, фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Изобретение относится к кристаллической форме 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1. Также изобретение относится к фармацевтической композиции и лекарственному средству на основе соединения формулы 1, которые могут быть применимы для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, связанного с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh). Технический результат: получена кристаллическая форма соединения 1, отличающаяся высокой скоростью растворения и повышенной стабильностью при хранении. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к новому физиологически активному веществу, новому ингибитору запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh)-имидазо[1,2-a]пиридин-2-ил-фенил бензамиду, его новой кристаллической форме, активному компоненту для фармацевтических композиций, к фармацевтическим композициям и лекарственным средствам, содержащим ингибитор запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh), способу лечения пролиферативных заболеваний, таких как рак поджелудочной железы или рак простаты.

Рак поджелудочной железы является одним из самых смертоносных злокачественных новообразований. Среднее значение продолжительности жизни после постановки диагноза составляет 2-8 месяцев, и только 1-4% всех пациентов с аденокарциномой поджелудочной железы срок увеличивается до 5 лет после установления диагноза [Bardeesy N, et al. Nat. Rev. Cancer 2002, 2, 897-909 и Singh AP, et al. Cancer Res. 2004, 64, 622-30]. Необратимый исход от рака поджелудочной железы связано с поздней диагностикой и отсутствием эффективной терапии для лечения. В большинстве случаев болезнь диагностируют на этапе, когда он местнораспространен или уже появляются метастазы в другие органы. Современные методы терапии, которые основываются на сочетании химиотерапии или операции и излучения, по-прежнему оказываются недостаточными для многих пациентов. Расположенная в верхней части живота в забрюшинной области поджелудочная железа тесно связана со многими крупными структурами, включая воротную вену, желудок, двенадцатиперстную кишку, желчный проток и верхнюю брыжеечную артерию.

Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) - это несколько основных сигнальных путей (например, Hedgehog, Notch, Wnt), которые встречаются в большинстве процессов, необходимых для нормального развития эмбриона. Сигнальный путь Hedgehog был найден у мухи-дрозофилы и является основным регулятором процесса дифференцирования клеток, формирования тканей и клеточного размножения. Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) играет решающую роль в онкогенезе, когда происходит его возобновление в тканях взрослого организма посредством любых мутаций или других механизмов. Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) является важным формирователем онкогенеза по меньшей мере в одной трети всех типов рака.

Онкогенные мутации в сигнальном каскаде Hedgehog (Hh) были обнаружены в базальных клетках карциномы и медулобластомы, а повышенная активность Hh сигнальной системы приводит к раку поджелудочной железы, толстого кишечника, желудка, печени и раку простаты. Предположительное количество заболеваний раком с лиганд-зависимой активацией Hh сигнального каскада в США превышает 200000 случаев ежегодно и приблизительно в 10 раз больше по всему миру.

Человеческий белок Sonic Hedgehog (SHh) синтезируется в виде 45 КДа белка-предшественника, который подвергается внутримолекулярному расщеплению для получения 20 КДа фрагмента, который является ответственным за нормальные сигнальные активности Hedgehog (Hh) протеинов. На поверхности клетки сигнал Hedgehog (Hh), как полагают, непосредственно связывается с 12-кратно пронизывающим мембрану протеином Patched (Ptc) и 7-кратно пронизывающим мембрану протеином Smoothened (Smo). В нормальных зрелых клетках Ptc является негативным регулятором активности белка Smo. Связывание SHh с Ptc подавляет блокирующий эффект Ptc относительно Smo, позволяя Smo преобразовать SHh сигнал через плазматическую мембрану. Сигнальный каскад, инициированный Smo, выражается в активации транскрипционных факторов Gli, которые мигрируют в клеточное ядро, где они регулируют целевой фактор транскрипции, осуществляющий рост клеток и дифференциацию в эмбриональных клетках, и в этом случае неконтролируемая активация клеток взрослого организма связана со злокачественными новообразованиями.

Эффект цитотоксической активности в отношении клеток рака поджелудочной железы человека (PANC1) или рака простаты (DU145) за счет ингибирования клеточного сигнального пути Hedgehog был продемонстрирован в значительном количестве публикаций, в частности [Y. Rifai, et al. J. Nat. Prod. 2010, 73, 995-997 или Y. Rifai, et al. Bioorg. and Med. Chem. Letters, 2011, 21, 718-722].

Вследствие указанных факторов поиск новых инновационных лекарственных средств для борьбы с раком поджелудочной железы является актуальным, а поиск эффективных ингибиторов запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh), а именно имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил-фенил бензамидов, представляется исключительно важной, актуальной и многообещающей задачей.

Авторами данного изобретения были выполнены синтез и широкие исследования активности различных имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил-фенил бензамидов, среди которых наиболее предпочтительным и перспективным является 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамид формулы 1.

В публикации международной заявки [WO 2011118812, National Univ. Corp. Hokkaido University (JP)] описываются биоактивные вещества для лечения нейродегенеративных заболеваний, среди которых упоминается соединение формулы А, которые позволяют провести более фундаментальную терапию нейродегенеративных заболеваний, подавляя окислительную стресс-индуцированную гибель нервных клеток, и применяется для лечения болезни Паркинсона.

Из уровня техники известно, что наиболее релевантными источниками соединений, близких по структуре соединению формулы 1, является патент США [US 8486936, АЛЛА ХЕМ, ЛЛС (US)], который описывает соединения формулы I:

Из уровня техники также известно, что соединение формулы 1 приводится в п.19 формулы изобретения публикации [WO 2010129620, LLC INNOVATIVE PHARMA (RU0] международной заявки и в п.19 формулы изобретения евразийской заявки [EА 201101579, ООО "ИФАРМА" (RU)].

Также известно, что соединение 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамид зарегистрировано в CAS Registry под номером 1254584-50-3 и предлагается к продаже фирмой ChemDiv, Inc (US).

Однако в отношении соединения CAS 1254584-50-3 до настоящего времени имеется только сообщение о том, что это соединение получено комбинаторным способом посредством очистки из изопропанола, но его кристаллическая форма неизвестна и не охарактеризована.

Необходимо выяснить, способно ли данное соединение кристаллизоваться и иметь кристаллические формы. Затем, если кристаллические формы существуют, необходимо найти воспроизводимые способы получения химически стабильных кристаллических форм и выявить новые кристаллические формы данного соединения.

Стабильность в твердом состоянии и срок хранения активных компонентов являются очень важными факторами. Лекарственное соединение и композиции, включающие его, должны обладать способностью эффективно храниться в течение значительных периодов времени, не проявляя значительного изменения физико-химических свойств активного компонента (например, его химического состава, плотности, гигроскопичности и растворимости). Кроме того, также является важным представить лекарственный препарат в форме, которая является как можно более чистой. В этом отношении аморфные соединения могут представлять значительные проблемы. Например, с такими соединениями труднее обращаться и включать их в лекарственные формы по сравнению с кристаллическим соединением, за счет сомнительной растворимости, и часто оказывается, что они нестабильны и химически загрязнены. Специалисту в данной области будет понятно, что, если лекарственный препарат можно легко получать в стабильной кристаллической форме, то можно решить вышеуказанные проблемы. Обычно невозможно предсказать только на основе молекулярной структуры, каким будет поведение соединения при кристаллизации, и обычно это можно установить только эмпирически.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в нахождении новых стабильных кристаллических форм 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида.

Технический результат настоящего изобретения заключается в улучшенных свойствах данного соединения при его использовании, в частности более высокая скорость растворения и повышенная стабильность при хранении.

Поставленная задача и технический результат достигаются получением новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, или фармацевтически приемлемой соли с дифракционными пиками на порошковой рентгеновской дифрактограмме, которые характеризуют следующие показатели: углы дифракции (2θ, °), интенсивность (I, %).

Предметом настоящего изобретения является новая кристаллическая форма 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, имеющая на порошковой рентгеновской дифрактограмме характеристические пики при следующих углах дифракции 2θ (±0,10°): 8,9; 12,4; 15,0; 17,5; 19,9; 21,7

Предметом настоящего изобретения является активный компонент, обладающий свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, представляющий собой новую кристаллическую форму 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1.

Предметом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, содержащая в эффективном количестве активный компонент, обладающий свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, по настоящему изобретению.

Фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемыми эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с активным компонентом по настоящему изобретению может включать и другие активные ингредиенты, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов, например аллергических реакций. При необходимости использования фармацевтических композиций по настоящему изобретению в клинической практике они могут смешиваться для изготовления различных форм, при этом они могут включать в свой состав традиционные фармацевтические носители; например пероральные формы (такие как, таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, растворы или суспензии); формы для инъекций (такие как, растворы или суспензии для инъекций, или сухой порошок для инъекций, который требует лишь добавления воды для инъекций перед использованием); местные формы (такие как, мази или растворы).

Носители, используемые в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в том числе в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтеграторы, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, бесцветные агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.

Более предпочтительной фармацевтической композицией для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения пролиферативного заболевания, выбранного из рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, рака простаты или гепатоцеллюлярной карциномы.

Более предпочтительной фармацевтической композицией для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения рака поджелудочной железы.

Фармацевтическая композиции по настоящему изобретению может быть получена смешением активного компонента, представляющего собой новую кристаллическую форму 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, с инертным наполнителем, растворителем и/или другими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Предметом настоящего изобретения является лекарственное средство для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, в виде таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее в эффективном количестве активный компонент или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

Предметом настоящего изобретения является способ профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, согласно которому нуждающемуся субъекту вводят эффективное количество активного компонента, обладающего свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, или фармацевтической композиции, или лекарственного средства по настоящему изобретению.

Более предпочтительным способом профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, выбранного из рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, рака простаты или гепатоцеллюлярной карциномы.

Более предпочтительным способом профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является способ профилактики или лечения рака поджелудочной железы.

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно, местно или ректально). Клиническая дозировка активного компонента (субстанции), фармацевтической композиции или лекарственного комбинированного средства, включающих фармацевтически эффективное количество активного компонента, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10~500 мг, предпочтительно 50~300 мг. Поэтому во время приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10~500 мг, предпочтительно 50~300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно от одного до шести раз).

Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.

«Агонисты» означают соединения, которые, связываясь с рецепторами определенного типа, активно способствуют передаче этими рецепторами свойственного им специфического сигнала и тем самым вызывают биологический ответ клетки.

«Активный компонент» (лекарственное вещество, лекарственная субстанция, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).

«Антагонисты» означают лиганды, которые связываются с рецепторами определенного типа и не вызывают активного клеточного ответа. Антагонисты препятствуют связыванию агонистов с рецепторами и тем самым блокируют передачу специфического рецепторного сигнала.

«Ингибиторы» (лат. inhibere - задерживать) означает вещество, замедляющее или предотвращающее течение какой-либо химической реакции; ферментативный ингибитор - вещество, замедляющее или блокирующее обратимо или необратимо протекание ферментативной реакции. Изучение ингибирования ферментов играет важную роль в создании лекарств, в изучении механизма действия и структуры ферментов.

«Лекарственное средство (препарат)» - комбинация нескольких лекарственных веществ для одновременного использования в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей, ректальных суспензий и гелей и др. готовых форм, предназначенная для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего. Лекарственные вещества в одном комплекте могут быть представлены в виде различных готовых форм, предназначенных для введения в организм животного или человека различными способами, например перорально и ректально.

«Лиганды» (от латинского ligo - связывать) представляют собой химические вещества (малая молекула, неорганический ион, пептид, белок и прочее), способные взаимодействовать с рецепторами, которые трансформируют это взаимодействие в специфический сигнал.

«Рецепторы» (от латинского recipere - получать, узнавать) представляют собой биологические макромолекулы, расположенные на цитоплазматической мембране клетки или внутриклеточно, способные специфически взаимодействовать с ограниченным набором физиологически активных веществ (лигандов) и трансформировать сигнал об этом взаимодействии в определенный клеточный ответ.

«Сигнальный каскад» (сигнальная система, каскад передачи сигнала) означает совокупность взаимосвязанных последовательных и параллельных молекулярных процессов регуляции клеточного метаболизма внешними (первичными) сигналами, несущими в клетку информацию, что принципиально отличает их от других поступающих в клетку химических соединений, служащих для нее источником материи и энергии. Молекулярные механизмы передачи (трансдукции) внешних сигналов в клетку подразумевают не только передачу сигналов как таковую, но и весь комплекс событий, с ней сопряженных, в том числе усиление, ослабление и подавление (или выключение) сигналов.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение общей формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как, консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназалъные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения. Фармацевтические композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем. Для изготовления суппозиториев помимо активных компонентов используют также масло какао, сплавы его с парафином и гидрогенизированными жирами, растительные и животные гидрогенизированные жиры, твердый жир, ланоль, сплавы гидрогенизированных жиров с воском, твердым парафином и другие основы, разрешенные для медицинского применения.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные. (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.

«Фармацевтически приемлемые эксципиенты» под фармацевтически приемлимыми эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители.

Также изобретение поясняется чертежами.

Фиг. 1. Порошковая рентгеновская дифрактограмма новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, полученной согласно настоящему изобретению. Зависимость интенсивность от угла 2θ, °.

Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают изобретение.

Пример 1. Метод синтеза соединения формулы 1. Синтез осуществляют в соответствии со Схемой 1.

Смесь аминопиридина 2 (0,04 моль) и нитробромацетофенона 3 (0,04 моль) в этаноле (80 мл) кипятят в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают и сушат на открытом воздухе. Чистый желтый кристаллический продукт 4 был получен с выходом 66-75%.

Смесь соединения 4 (0,05 моль), SnCl2 (0,18 моль), воды (60 мл) и соляной кислоты (80 мл) перемешивают при 60°C в течение 1 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и выливают в воду (500 мл). Полученную смесь подщелачивают 10%-ным раствором соды до pH 9-10. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат на открытом воздухе и перекристаллизовывают из этанола, что дает чистое соединение 5 в виде белых кристаллов с выходом 75-88%.

Карбоновую кислоту 6 (1,1 ммоль) добавляют к раствору 1, 1′-карбонилдиимидазола (1,2 мМоль) в абсолютном ДМФ (5 мл). Реакционную смесь перемешивают при 80°C в течение 1 ч без доступа воздуха. Затем добавляют амин 5 (1 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивают при 100°C дополнительно 3-4 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. После этого реакционную смесь вливают в 10-кратный объем воды, осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат на открытом воздухе. Соединение формулы 1 получают с выходом 75%, LC MS m/z 392 (M+1).

Пример 2. Получение кристаллической формы метилового эфира 3-(7-((N-n-толилацетамидо)метил)-2,3)4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-4-карбоксамидо)тиофен-2-карбоновой кислоты формулы 1.

10 мг 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 растворяют в 10 мл метанола, нагревая смесь до 40°C. К раствору, полученному в результате этого, по каплям добавляют 10 мл воды при той же температуре в течение 20 мин и полученную смесь охлаждают до 5°C в течение суток, после чего отфильтровывают и собирают кристаллическое вещество. Кристаллы сушат при 50°C при пониженном давлении до тех пор, пока масса кристаллов не перестает уменьшаться при дальнейшем высушивании, в результате чего было произведено 9,75 мг белого твердого вещества.

Порошковый рентгеноструктурный анализ полученной кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 проводят при помощи дифрактометра Rigaku с детектором Saturn 944 HG и медного излучения CuKα. На спектре порошковой рентгеновской дифрактограммы кристаллического вещества (Фиг. 1) наблюдают характеристические пики при углах дифракции 2θ (±0,10°): 8,9; 12,4; 15,0; 17,5; 19,9; 21,7.

Пример 3. Биологические испытания и определение ингибирующей активности (IC50) соединения формулы 1.

Для идентификации ингибиторов SHh-сигнального каскада белка используют клетки С3Н10Т1/2. SHh-белок активирует клетки C3Н10Т1/2, что приводит к их остеогенной дифференцировке [Kinto N., Iwamoto M., Enomoto-Iwamoto М., Noji S., Ohuchi X., Yoshioka X., Kataoka H., Wada Y., Yuhao Г., Takahashi H.E., Yoshiki C., Yamaguchi A. Fibroblasts expressing Sonic hedgehog induce osteoblast differentiation and ectopic bone formation. FEBS Lett. 1997; 404 (2-3): 319-23 и Spinella-Jaegle S., Rawadi G. Kawai S., Gallea S., Faucheu C., Mollat P., Courtois В., Bergaud В., Ramez V., Blanchet A.M., Adelmant G., Baron R., Roman-Roman S. Sonic hedgehog increases the commitment of pluripotent mesenchymal cells into the osteoblastic lineage and abolishes adipocytic differentiation. J. Cell. 2001; 114 (Pt 11): 2085-94] и, в частности, выраженному повышению фермента щелочной фосфатазы.

Клетки культивируют в среде DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой в инкубаторе при температуре 37°C, 100% влажности и 5% содержанием CO2. Клетки помещают в 384-луночные пластины и оставляют на ночь. На следующий день исследуемые соединения в концентрации 10 мкМ добавляют к клеткам, инкубируют в течение 30 мин, затем рекомбинантный (R&D, США) SHh белок в концентрации 0,3 мкг/мл добавляют и инкубируют в течении 3 дней. Клетки с ДМСО и клетки без SHh белка используют в качестве тест контроля. Для определения активности клеточной щелочной фосфатазы клетки лизируют в буфере, содержащем 0,2% Тритон-X100, лизаты инкубируют вместе с пролюминисцентной подложкой CSPD (Applied Biosystems, США) и измеряют люминесценцию с использованием анализатора VICTOR2 V (PerkinElmer, США).

Для устранения неспецифического ингибирования соединениями щелочной фосфатазы клетки в первую очередь инкубируют с белком SHh в течение 3 дней, лизируют и добавляют до определения активности щелочной фосфатазы исследуемых соединений. Для устранения цитотоксичных соединений клетки инкубируют вместе с исследуемыми соединениями и SHh белками в течение 3 дней и количество живых клеток в соответствующих лунках определяют с использованием реагента CellTiter-Blue (Promega, США).

Ингибирующая активность соединений определяют концентрацией соединений, вызывающей половину максимального ингибирования стимуляции клеточной щелочной фосфатазы SHh (IC50). Ингибирующая концентрация IC50 новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 составляет 390 нМ.

Пример 4. Определение кинетики растворения кристаллической формы.

Кинетику растворения новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, полученной в примере 2, сравнивают с кинетикой растворения аморфного соединения CAS 1254584-50-3. Прибор для определения скорости растворения представляет собой трехгорлый сосуд емкостью 1 л. В один из тубусов вводят термометр, в другой - стеклянную трубку для взятия проб и их комплексирования, а в третий - основную деталь прибора - цилиндрическую корзинку высотой 3,6 см и диаметром 2,5 см, сделанную из нержавеющей стали в виде сетки с отверстиями диаметром 40 меш (около 0,351 мм). Корзинка насажена на ось мотора.

В сосуд наливают растворяющую среду (1000 мл), в данном эксперименте ДМСО, поскольку он является важным биполярным апротонным растворителем и благодаря своей сильной растворяющей способности, ДМСО часто используется как растворитель в химических реакциях и система биологического скрининга. Исследуемый образец помещают в цилиндрическую корзинку, которую устанавливают на расстоянии 2 см от дна сосуда.

Для сравнительного образца 1 используют 200 мг новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, а для сравнительного образца - 2-200 мг аморфного соединения СAS 1254584-50-3 с получением после полного растворения раствора, содержащего 200 м.д. соединения CAS 1254584-50-3.

Температуру растворяющей среды во время опыта поддерживают постоянной (37±0,5°C). Скорость вращения корзинки в среде регулируют с точностью ±5%, она составляет 200 об/мин. Через установленные интервалы времени отбирают для анализа пробы по 1-2 мл для определения содержания лекарственного вещества. Взятый объем растворителя тотчас же восполняют новым.

Полученные результаты приведены в таблице 1 (где величины представляют собой количество (м.д.) образцов 1 или 2 в растворе:

Результаты демонстрируют, что скорость растворения новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 в ДМСО выше, чем скорость растворения аморфного соединения CAS 1254584-50-3. В частности, время, в течение которого происходит 50% растворение новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, в несколько раза меньше, чем для сравнительного образца аморфного соединения CAS 1254584-50-3.

Пример 5. Исследование хранения кристаллической формы.

Все образцы хранились в стеклянных виалах, укупоренных резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками, в холодильной камере при температуре ~4,7°C и в морозильной камере при температура около -23°C. Количество примесей определялось методом внутренней нормализации, детектирование проводилось УФ-детектором при длине волны 220 нм.

В таблице 2 представлены результаты испытаний новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, свидетельствующие об улучшении ее стабильности при пониженной температуре по сравнению с аморфным соединением CAS 1254584-50-3.

Результаты однозначно свидетельствуют о перспективности заявляемой новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-H-[4-(8-метил-имидазо[1,2-a]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1.

Настоящее изобретение может быть использовано в медицине, ветеринарии, биохимии.

1. Кристаллическая форма 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-a]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, имеющая на порошковой рентгеновской дифрактограмме характеристические пики при следующих углах 2θ (±0,10°): 8,9; 12,4; 15,0; 17,5; 19,9; 21,7
.

2. Активный компонент, обладающий свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, представляющий собой соединение формулы 1 по п.1.

3. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, связанного с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, содержащая в эффективном количестве активный компонент по п.2.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, где пролиферативное заболевание выбрано из рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, рака простаты или гепатоцеллюлярной карциномы.

5. Фармацевтическая композиция по п.3, где пролиферативное заболевание представляет собой рак поджелудочной железы.

6. Лекарственное средство для профилактики и лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, в виде таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее в эффективном количестве активный компонент по п.2 или фармацевтическую композицию по п.3.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому пиразолопиридиновому производному формулы (I), а также к его таутомеру, геометрическому изомеру, оптически активным формам, таким как энантиомеры, диастереомеры и рацематы, и к его фармацевтически приемлемой соли, где G1 выбирают из -С(О)-R1; R1 выбирают из C1-С6-алкокси-C1-С6-алкила; C1-С6-алкила; замещенного С6-арил-C1-С6-алкила; замещенного пиперидина; G2 выбирают из необязательно замещенного С6-арила; G3 выбирают из C1-С6-алкила; G4 выбирают из пиридин-C1-С6-алкила; G5 выбирают из Н; где термин «замещенный» обозначает группы, замещенные 1 заместителем, выбираемым из группы, которая включает «C1-С6-алкил», «C1-С6-алкокси», «C1-С6-алкоксикарбонил» и «галоген».

Изобретение относится к пиридо[3,4-d]пиримидиновым соединениям формулы (III), обладающим свойствами ингибитора киназы Pan-erbB. Соединения могут быть использованы при лечении рака, опосредованного активностью указанной киназы.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым гетероциклическим соединениям общей формулы (IIIа) или к его терапевтически приемлемой соли, где А1 представляет собой С(А2); А2 представляет собой Н; В1 представляет собой OR1 или NHR1, где R1 представляет собой C1-алкил замещенный R10; D1 и Е1 представляют собой Н; и Y1 представляет собой NO2; G1 представляет собой C1-алкил, замещенный OP(O)(ОН)(ОН); R10 представляет собой С6-циклоалкил, каждый из которых имеет один СН2 фрагмент, незамененный или замененный с помощью независимо выбранного О; где фрагмент, представляющий собой R10, является незамещенным или замещенным одним, или двумя, или тремя, или четырьмя, или пятью заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из R50, OR50, F, Cl, Br, и I; и R50 представляет собой C1-алкил.

Изобретение относится к соединению формулы (I), в котором X и Х1 независимо представляют собой CR4 или N; Y и Y1 независимо представляют собой C или N; Z и Z1 независимо представляют собой CR6, NR7, N, О или S; R1 и R2 независимо выбраны из C1-C7-алкила, C3-C8-циклоалкила, или R1 и R2, совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют спиробициклическую насыщенную кольцевую систему, включающую от 5 до 12 кольцевых атомов, включающую гетероатомы, выбранные из N, О, или 4-, 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О, S, который может содержать от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из галогена; R3 представляет собой C1-C7-алкил; R4 представляет собой водород, C1-C7-алкил, C1-C7-галогеналкил или галоген; R5 представляет собой фенил или гетероарил, при этом обе группы возможно содержат в качестве заместителя C1-C7-алкил, галоген, C1-C7-алкоксигруппу; R6 представляет собой водород, C1-C7-алкил или R5 и R6, совместно с Y1 и атомом Z, к которому они присоединены, образуют фенильное кольцо, возможно замещенное C1-C7-алкилом, галогеном; R7 представляет собой C1-C7-алкил, C3-C8-циклоалкил, C1-C7-галогеналкил, C1-C7-алкоксиалкил, фенил, гетероарил или C1-C7-алкил, возможно замещенный фенилом или C3-C8-циклоалкилом, или R5 и R7, совместно с Y1 и атомом Z, к которому они присоединены, образуют гетероарил, возможно замещенный C1-C7-алкилом, C1-C7-галогеналкилом; W выбирают из этилена, возможно замещенного C1-C7-алкилом, и к его физиологически приемлемым солям.

Изобретение относится к новым азабициклическим соединениям, представленным приведенной ниже общей формулой (I), или к их фармацевтически приемлемым солям. Данные соединения демонстрируют ингибирующую активность в отношении HSP90 и ингибирующее клеточную пролиферацию действие.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) где: R1 представляет собой СН3, СН2СН3, Cl, Br, CHF2 или CF3; R2 представляет собой Н, ОН или F; X представляет собой СН2 или О при условии, что когда R1 представляет собой СН3 и R2 представляет собой Н, тогда X представляет собой О; и к применению таких соединений в качестве ингибиторов репликации ВИЧ.6 н.

Изобретение относится к способу получения производных 7-(гетеро)арил-4,5,6,7-гетрагидро[1,2,3]триазоло[1,5-a]пиридина общей формулы II, где Ar означает фенил, возможно содержащий алкильные или алкокси-заместители, или пиридил, заместители R1 и R2 одинаковы и означают C(O)OR, где R - алкил, заключающемуся в том, что 1-азидо-1-[(гетеро)арил]пропан общей формулы I, где Ar, R1 и R2 имеют указанные выше значения, подвергают взаимодействию с пропаргилбромидом в среде толуола и сухого ДМФА в объемном соотношении 1:1 при комнатной температуре и в присутствии суспензии NaH в минеральном масле, предварительно приготовленной при 0°C.

Изобретение относится к новым сульфонамидным соединениям указанной ниже струтуры или к его фармацевтически приемлемой соли, где : бициклический ароматический гетероцикл, состоящий из пиридина, конденсированного с бензолом; один из Y и Z является CR2d, а другой - химической связью; кольцо В является (а) моно- или бициклическим ароматическим углеводородом, имеющим 6-11 атомов углерода в качестве кольцевых атомов; (b) 5-11-членным моно- или бициклическим ароматическим гетероциклом, содержащим атомы углерода и 1-4 гетероатома, выбранных из атомов кислорода, серы и азота; или (с) 4-12-членным моно- или бициклическим неароматическим гетероциклом, содержащим атомы углерода и 1-4 гетероатома, выбранных из атомов кислорода, серы и азота; кольцо С: бензол, R1: (а) Н; (b) C1-С6алкил, который необязательно может быть замещен 1-3 группами, выбранными из галогена, оксо и гидрокси; (с) С3-С7циклоалкил; (d) C1-С6алкокси-группу; или (е) галоген, каждый из R2a, R2b, R2c и R2d независимо представляет собой (а) Н; (b) C1-С6 алкил, который необязательно может быть замещен 1-3 группами, выбранными из C1-С6алкокси-группы, галогена и гидрокси; (с) С3-С7циклоалкил; (d) C1-С6алкокси-группу; (е) фенил; (f) 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, содержащую атомы углерода и 1-4 гетероатома, выбранных из атомов кислорода, серы и азота; (g) 5-членную моноциклическую неароматическую гетероциклическую группу, содержащую атомы углерода и 1-4 гетероатома, выбранных из атомов кислорода, серы и азота; или (h) галоген, каждый из R3a, R3b, R3c и R3d независимо означает (а) Н; (b) C1-С6алкил, который необязательно может быть замещен 1-7 группами, выбранными из С3-С7циклоалкила (в котором циклоалкил необязательно может быть замещен 1 группой, выбранной из C1-С6алкила и C1-С6галогеноалкила), C1-С6алкокси-группы, C1-С6галогеноалкокси, галогена и гидрокси; (с) С3-С7циклоалкил; (d) C1-С6алкокси-группу, которая необязательно может быть замещена 1-3 группами, выбранными из С3-С7циклоалкила, C1-С6алкокси-группы и галогена; (е) С3-С7циклоалкокси-группу; (f) фенил, который необязательно может быть замещен 1 группой, выбранной из галогена; (g) 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, содержащую атомы углерода и 1-4 гетероатома, выбранных из атомов кислорода, серы и азота; (h) фенокси-группу; (j) галоген; или (k) гидрокси, каждый из R5 и R6: Н, n означает 0 или 1, X является (а) карбокси-группой; (b) C1-С6алкоксикарбонилом; (с) гидрокси-C1-С6-алкилом, (d) аминокарбонилом, где атом азота необязательно может быть замещен одной группой, выбранной из C1-С6алкила, C1-С6алкокси-группы и нитрила; или (е) С2-С7алканоила.

Изобретение относится к новым соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, которые являются ингибиторами cFMS и полезны при лечении костных заболеваний, рака, аутоиммунных нарушений, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и обезболивании.

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где DB представляет собой ДНК-связывающую группу и представляет собой группу DB1, R1 представляет собой галоген; R2, R2′, R3, R3′, R4, R4′, R12 и R19 представляют собой Н, X2 представляет собой C(R14)(R14′) и где R14′ и R7′ отсутствуют, что дает двойную связь между атомами, несущими R7′ и R14′; R5, R6 и R7 независимо выбраны из Н и Re, где Re выбран из C1-3алкила; R5′+R6′ отсутствуют, что дает двойную связь между атомами, несущими R5′ и R6′; X1 представляет собой О; X3 выбран из N и NR15; X4 представляет собой CR16; X5 представляет собой О; X6 выбран из CR11, CR11(R11′) и N; X7 выбран из CR8, CR8(R8′), NR8 и N; X8 выбран из CR9, CR9(R9′), NR9 и N; X9 выбран из CR10, CR10(R10′) и N; X11 представляет собой С; X12 выбран из С и N; X34 представляет собой С; подразумевает, что указанная связь может быть необязательно делокализованной, двойной связью; R8 представляет собой Н и N(Rh)С(О)Ri; R8′, R9, R9′, R10, R10′, R11, R11′, R15, R16′ представляют собой Н, Rh представляет собой Н; Ri выбран из С6-С9арила и индола, замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из ОН, NH2, О(СН2СН2О)2-4Н и O(СН2СН2О)2-4СН3; а и b независимо выбраны из 0 и 1; при условии, что кольцо В в DB1 представляет собой гетероцикл.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому пиразолопиридиновому производному формулы (I), а также к его таутомеру, геометрическому изомеру, оптически активным формам, таким как энантиомеры, диастереомеры и рацематы, и к его фармацевтически приемлемой соли, где G1 выбирают из -С(О)-R1; R1 выбирают из C1-С6-алкокси-C1-С6-алкила; C1-С6-алкила; замещенного С6-арил-C1-С6-алкила; замещенного пиперидина; G2 выбирают из необязательно замещенного С6-арила; G3 выбирают из C1-С6-алкила; G4 выбирают из пиридин-C1-С6-алкила; G5 выбирают из Н; где термин «замещенный» обозначает группы, замещенные 1 заместителем, выбираемым из группы, которая включает «C1-С6-алкил», «C1-С6-алкокси», «C1-С6-алкоксикарбонил» и «галоген».

Изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, обладающему свойствами ингибитора Syk, способу его синтеза, фармацевтической композиции на его основе и ее применению для лечения и профилактики пролиферации клеток.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителам против ангиопоэтина-2 человека, кодирующим их нуклеиновым кислотам и клеткам-хозяевам. Антитело отличается тем, что не связывается с ангиопоэтином-1 человека.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для применения метаарсенита натрия для производства терапевтического агента для лечения устойчивых к таксану и цисплатину форм рака.

Изобретение относится к пиридо[3,4-d]пиримидиновым соединениям формулы (III), обладающим свойствами ингибитора киназы Pan-erbB. Соединения могут быть использованы при лечении рака, опосредованного активностью указанной киназы.

Изобретение относится к новым соединениям, выбранным из группы, указанной ниже. Соединения содержат как минимум 5 колец, включая фрагмент с мостиковой структурой, при углеродной стороне центральной группы С(O)-NH-SO2, пиперидинил, или пиперазинил, или фенил; фенил, присоединенный к каждому атому углерода и серы группы С(O)-NH-SO2, где фенил со стороны атома серы замещен нитрогруппой и NH-CH2(тетрагидро-2Н-пиран-4-ильной или циклогексильной) группой.
Изобретение относится к области фармакологии, а именно к биологически активным соединениям хлоринового ряда и к способу их получения, и может быть использовано для получения трисмеглуминовой соли хлорина e6 в лиофильно высушенной форме, которая может быть использована в качестве высокоэффективного фотосенсибилизатора (ФС) для фотодинамической терапии (ФДТ) рака и других новообразований различного генезиса, а также для флюоресцентной диагностики раковых клеток.

Изобретение относится к клинической медицине и предназначено для выявления предрасположенности к раку и его первичной профилактики. Сущность изобретения состоит в том, что способ выявления предрасположенности к раку включает проведение исследования клеточного иммунитета по основным субпопуляциям лимфоцитов по CD-маркерам: a) CD3+; б) CD4+; в) CD8+; г) CD16+; д) CD56+, а способ первичной профилактики рака включает применение комплексных растительных препаратов «Капли Плетнева», которые восстанавливают метаболизм и энергообеспечение тканей и органов, содержащих β-каротин, витамины Р, С, РР, урсоловую кислоту, хлорофилл.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для химиопрофилактики канцерогенеза печени и пищевода у экспериментальных животных. Способ включает введение диэтилнитрозамина с питьем в дозе 100 мг/л в течение 4 месяцев.

Группа изобретений относится к медицине и касается иммунобиологического средства для лечения рака мочевого пузыря на основе аденовирусного вектора, содержащего ген интерферона бета под контролем промотора, где в качестве аденовирусного вектора используют аденовирус человека, а средство дополнительно включает фермент, который обеспечивает расщепление секрета слизистой оболочки мочевого пузыря.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому пиразолопиридиновому производному формулы (I), а также к его таутомеру, геометрическому изомеру, оптически активным формам, таким как энантиомеры, диастереомеры и рацематы, и к его фармацевтически приемлемой соли, где G1 выбирают из -С(О)-R1; R1 выбирают из C1-С6-алкокси-C1-С6-алкила; C1-С6-алкила; замещенного С6-арил-C1-С6-алкила; замещенного пиперидина; G2 выбирают из необязательно замещенного С6-арила; G3 выбирают из C1-С6-алкила; G4 выбирают из пиридин-C1-С6-алкила; G5 выбирают из Н; где термин «замещенный» обозначает группы, замещенные 1 заместителем, выбираемым из группы, которая включает «C1-С6-алкил», «C1-С6-алкокси», «C1-С6-алкоксикарбонил» и «галоген».
Наверх