Способ диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани

Изобретение относится к медицине и может быть эффективно использовано в лабораторной диагностике в способе выявления местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ). Способ осуществляют путем комплексных исследований для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности назально-ассоциированной лимфоидной ткани по ряду количественных и качественных иммуно-цитологических показателей общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов и определением в возрастных группах диагностических критериев, соответствующих значениям больше (>) или меньше (<) граничных величин доверительных интервалов каждого исследуемого иммуно-цитологического показателя и с последующим установлением трех степеней иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. При этом I-ю степень диагностируют при снижении 6-8 показателей или 25,0-33,3% от общего числа показателей; II-ю степень - 9-18 показателей или 37,5-75,0%, III-ю степень - 19-24 показателей или 79,2-100,0%. Используются доверительные интервалы с 95%-ной точностью. 3 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лабораторной диагностике иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ).

В настоящее время известно, что высокий уровень заболеваемости верхних дыхательных путей и, особенно, патологии ЛОР-органов как у детей и подростков, так и у взрослых лиц неразрывно связан с состоянием местной клеточной защиты (МКЗ), роль которой выполняет назально-ассоциированная лимфоидная ткань (НАЛТ). Среди многочисленных структур МКЗ первостепенное значение придается системе лимфоцитов носоглоточного кольца Вальдейра-Пирогова.

Известно изобретение, которое относится к медицине, в частности оториноларингологии, и может быть использовано для оценки состояния лимфоидной ткани глотки и небных миндалин у детей. Сущность способа: берут мазки-отпечатки для риноцитограммы и цитограмм из левой небной миндалины и левой щеки. Исследуют клеточный состав полученных мазков на бинокулярном микроскопе, определяют содержание сегментоядерных нейтрофилов в цитограмме и общем составе клеток. На основании полученных данных дифференцируют наличие хронического процесса в области носоглоточной миндалины, или наличие хронического процесса в области небных миндалин, или наличие хронического процесса в области лимфоидной ткани носоглотки в сочетании с гипертрофией небных миндалин без признаков воспаления, или наличия хронического процесса лимфоидной ткани носоглотки и небных миндалин. Использовании способа позволяет повысить точность диагностики состояния лимфоидной ткани носоглотки и небных миндалин у детей при отсутствии травматичности.

В настоящее время известно, что первой линией защиты организма от чужеродных антигенов (патогенных вирусов и бактерий) является мукозальная иммунная система или MALT-система (от англ. Mucosa associated lymphoid tissue). Мукозальный иммунитет является частью общей системы защиты организма. Мукозальная иммунная система состоит из многих отделов, имеющих разный клеточный состав и разные функции. Лимфо-аденоидное кольцо Вальдейера-Пирогова, окружающее глотку человека, состоит из миндалин и аденоидов, которые получили название назально-ассоциированной лимфоидной ткани (или nasal associated lymphoid tissue - NALT). Лимфоаденоидное кольцо представлено шестью крупными скоплениями лимфоидной ткани, которые называются миндалинами: двумя парными небными, третьей непарной - носоглоточной, четвертой непарной - язычной и двумя парными (пятой и шестой) - трубными. Между миндалинами в стенке глотки имеются небольшие скопления лимфоцитов. Миндалины относятся к числу периферических органов иммунитета и служат источником эффекторных клеток иммунной системы. Поверхность миндалин покрыта многослойным плоским эпителием и имеет множественные лакуны (или крипты), углубляющиеся в лимфоидную ткань. Составляющие лимфоаденоидного кольца миндалины считают вторичными периферическими органами иммунной системы. Однако миндалины не являются регионарными лимфатическими узлами и не выполняют дренирующей функции. Эпителиальный покров небных и язычной миндалин (многослойный плоский эпителий) образует крипты, увеличивая площадь поверхности эпителия. Глоточная и трубные миндалины покрыты однослойным многорядным мерцательным эпителием респираторного типа с мерцательными и бокаловидными клетками, выделяющими слизь. Формирование НАЛТ-системы в онтогенезе у детей имеет ряд особенностей. У новорожденных в миндалинах хорошо выявляются лимфоидные фолликулы. Нарастание массы лимфоидной ткани в миндалинах достигает максимума к 10 годам жизни. После наступления половой зрелости (с 14 лет) происходит возрастная инволюция миндалин - уменьшается объем и число фолликулов, вплоть до их исчезновения, лимфоидная ткань подвергается атрофии и замещается соединительной тканью (Плужников М.С., Лавренова Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: Клинические и иммунологические аспекты. - Глава из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: диалог, 2004. - С. 3-59).

В последние годы внесен существенный вклад в науку по исследованию НАЛТ-системы. С этой целью используют мазки-отпечатки с поверхности слизистых оболочек с последующим определением состава клеточных элементов, проводят бактериологическое исследование материала, полученного с объектов стерильными тампонами, серологические исследования сыворотки крови с определением титров антител, делают смывы для оценки иммунологических факторов (иммуноглобулины, цитокины, лизоцим и др.), выполняют гистологические исследования биопсийного материала, проводится визуальный и специальный осмотр специалистами (Плужников М.С., Лавренова Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: Клинические и иммунологические аспекты. - Глава из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: диалог, 2004. - С. 3-59); (Маккаев Х.М. Тактика сочетанного консервативного лечения хронических воспалительных заболеваний лимфоидных органов носоглотки (хронического тонзиллита и аденоидита) у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 202. - №5. - С. 39-43.).

Однако наиболее близкое по существу техническое решение имеет ряд недостатков. Представленные методики относятся к числу инвазивных, трудоемких и дорогостоящих. Этот способ не решает главной задачи, а именно не содержит практических рекомендаций по его использованию, а представляет собой теоретическую основу для решения данной проблемы. В то же время наибольший интерес представляет способ диагностики тех или иных нарушений НАЛТ-системы, предшествующих развитию заболеваний аденоидно-глоточного кольца. Именно на доклиническом этапе выявление изменений НАЛТ-системы имеет наибольшую ценность. В прототипе не представлены конкретные показатели, рекомендуемые для диагностики иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. Более того, не показаны возрастные особенности каких-либо иммунологических показателей НАЛТ-системы, а также не разработаны конкретные критерии диагностики ее недостаточности.

Технический результат выражается в повышении информативной ценности показателей структурно-функциональной оценки состояния НАЛТ-системы. Решается главная поставленная задача изобретения по диагностике иммуно-цитологической недостаточности, ранжированной по степеням (I-й, II-й, III-й). Это позволяет предложенный способ считать более совершенным. Способ реализуется путем выполнения поэтапных иммуно-ццитологических исследований НАЛТ-системы.

Локусом для оценки состояния локальной иммунной системы служила назально-ассоциированная лимфоидная ткань (НАЛТ), представленная небными, трубными, язычной и носоглоточной миндалинами.

Материалом для исследования служило отделяемое с поверхности небных миндалин. Содержимое миндалин получали методом мазков-отпечатков с помощью ватного тупфера, слегка увлажненного 0,9%-ным раствором хлорида натрия. Цитологические препараты готовили путем равномерного нанесения и распределения полученного содержимого НАЛТ на поверхности предметного стекла. Нативные препараты высушивали на воздухе, фиксировали в смеси Никифорова (этиловый спирт и эфир в соотношении 1:1) в течение 10 минут и вновь высушивали на воздухе. Окраску препаратов осуществляли по методу Романовского-Гимзе в течение 30 минут. После окраски препараты ополаскивали дистиллированной водой и высушивали на воздухе. Цитологическое исследование окрашенных препаратов проводили с помощью световой микроскопии (окуляр × 10, объектив × 90) под иммерсией.

Цитологический анализ полученных данных проводился в соответствии с алгоритмом выполнения ряда технологических операций в определенной последовательности, включающих определение общего содержания клеток (ОСК) и их жизнеспособности (ЖСК), общей и парциальной цитограммы лимфоцитов.

Общее содержание клеток подсчитывают полуколичественным способом по методике, предложенной А.Я. Осиным (1994) (Осин А.Я. Цитологические методы диагностики в пульмонологии детского возраста // II-й Международный симпозиум фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточной Азии: тез. докл. - Россия. - Владивосток, 1994. - С. 182-183). При этом ОСК в исследуемой биосреде определяли путем подсчета количества клеточных элементов в полях зрения (п/з) и выражения их числа в условных единицах (усл. ед.). Содержание клеток определяют в зависимости от интенсивности клеточной реакции и их количества в 1 п/з. При этом 1 усл. ед. обозначают низкое или малое содержание клеток (единичные клетки, 1-25 клеток в п/з), 2 усл. ед. - умеренное или среднее содержание клеток (25-50 клеток в п/з) и 3 усл. ед. - высокое содержание клеток (многочисленные клетки, 50-100 клеток в п/з). При отсутствии исследуемых клеток в п/з их не регистрируют и обозначают 0 усл. ед. При исследовании оценивают обычно 50-100 п/з и по преобладающему числу соответствующих оценок (0, 1, 2, 3 усл. ед.) или по средней их величине судят об ОСК в исследуемой биосреде (0-3 усл. ед.).

Жизнеспосбность клеток (ЖСК) оценивают по методике с использованием трипанового синего (голубого). Для этого смешивают 0,1 мл 1%-го раствора трипанового синего (голубого) и 0,1 мл 1,0%-ного раствора эозина. Смесь заливают в счетную камеру Горяева и определяют количество жизнеспособных (красного/розового цвета) клеток при подсчете на 100 клеточных элементов. Результат выражают в относительных величинах (%) (Стефании Д.В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста // Руководство для врачей. - М.: Медицина, 1996. - 384 с.).

Дифференцированный состав клеточных элементов или общую цитограмму изучаемой биосреды определяют при сплошном исследовании 100-200 клеток.

Структурно-функциональное состояние НАЛТ-системы характеризуется общим содержанием клеток (ОСК) и жизнеспособностью клеток (ЖСК), общей цитограммой и парциальной цитограммой лимфоцитов (Лф).

Общая цитограмма НАЛТ-системы характеризуется наличием эпителиоцитов (Эц), лейкоцитов (эозинофилов, нейтрофилов, лимфоцитов - Э, Н, Лф), плазмоцитов (Пц), макрофагов (Мф) в относительных величинах (%) и эпителиально-лейкоцитарного соотношения в виде индекса (Эц/Лц). Индекс эпителиально-лейкоцитарного соотношения рассчитывают по формуле: Эц/Лц=Эц : (Э, Н, ЛФ). Высокие индексы указывают на усиление миграции лейкоцитов на поверхность эпителиального покрова, а низкие их величины - на восстановление Эц и усиление регенераторных их свойств.

Парциальная цитограмма Лф различается по размерам, степеням зрелости и числу основных их генераций (бластные клетки, большие, средние и малые лимфоциты - Бл. Кл., БЛф, СЛф, МЛф, индекс генерации лимфоцитов - ИГЛф), по взаимодействию. Лф и Эц и локализации относительно эпителия (внутри-, или интраэпителиальные - ИЭЛф и вне- или эстраэпителиальные - ЭЭЛф и их соотношение - ИЭлф/ЭЭЛф, по метаболическим свойствам (популяции Т-, В-, О-лимфоциты), по митотической активности или пролиферации (индекс митозов Лф-ИМЛф) и по степени повреждения или альтерации структуры Лф (индекс деструкции и средний показатель деструкции Лф-ИДЛф и СПДЛф).

Индекс генерации лимфоцитов рассчитывают по формуле:

ИГЛф=(Бл. Кл.+БЛф):(СЛф+МЛф);

индекс соотношения интра- и экстраэпителиальных лимфоцитов - по формуле: ИЭЛф/ЭЭЛф=ИЭЛф:ЭЭЛф;

индекс соотношения Т- и В-лимфоцитов - по формуле: Т-Лф/В-Лф=Т-Лф:В-Лф;

индекс митозов лимфоцитов - по формуле: ИМЛф=Лфм:(Лфм+Лфо), где ЛМф - количество Лф с фигурами митозов и Лфо - число Лф без признаков митозов;

индекс деструкции лимфоцитов - ИДЛф=(N1+N2+N3+N4):(N0+N1+N2+N3+N4), где N0, N1, N2, N3, N4 - количество клеток 0-го, 1-го, 2-го, 3-го, 4-го класса деструкции;

средний показатель деструкции лимфоцитов - СПДЛф=[(1×N1)+(2×N2)+(3×N3)+(4×N4)]:100, где 1, 2, 3, 4 - номера класса деструкции клеток, 100 - общее количество подсчитанных клеток.

Дифференцированный подсчет генерации Лф разной степени зрелости осуществляется на 100 Лф и рассчитывается индекс генерации Лф (ИГЛф). В лимфоцитограмме по степени зрелости клеточных элементов выделяют бластные клетки (Бл. Кл.), большие, средние и малые Лф (БЛф, СЛф, МЛф). В этом случае Бл. Кл. и БЛф отождествляют с макрогенерациями Лф, СЛф - с мезогенерациями и МЛф - с микрогенерациями Лф. При этом Бл. Кл. соответствуют полибластам с полипотентной ориентацией дифференцировки, БЛф - лифобластам, СЛф - пролимфоцитам и МЛф - зрелым Лф. Для расчета ИГЛф используют следующую формулу: (Бл. Кл.+БЛф):(СЛф+МЛф), в которой числитель представлен суммой малодифференцированных клеточных элементов (Бл. Кл.+БЛф), а знаменатель - суммой зрелых форм (СЛф+МЛф). Величины ИГЛф в норме могут колебаться от 0,05 до 0,15 (в среднем составляет 0,10). Увеличение ИГЛф свидетельствует о сдвиге в сторону созревающих (малодифференцированных) клеток (Бл. Кл.+БЛф), а снижение ИГЛф указывает на преобладание зрелых форм Лф (СЛф+МЛф). Следовательно, значение ИГЛф находится в обратной зависимости от степени зрелости Лф: чем выше величины ИГЛф - тем меньше степень зрелости Лф, а чем ниже величины ИГЛф - тем больше степень зрелости Лф. ИГЛф позволяет судить о характере и интенсивности процессов генерации клеточных элементов.

Для оценки взаимодействия эпителиальных М-клеток или микроворсинчатых эпителиальных клеток, выполняющих транспортную функцию, и Лф осуществляют подсчет количества эпителиальных М-клеток, соответствующего числа интра- и эстраэпителиальных Лф (ИЭЛф и ЭЭЛф) в %, вычисляют соотношения ИЭЛф/ЭЭЛф и дают его оценку. Эпителиальные М-клетки транспортируют антиген с поверхности слизистой оболочки в подлежащую лимфоидную ткань. М-клетки не обрабатывают антиген и не представляют его. М-клетки захватывают Лф путем эндоцитоза (эндоцитобиоза), изолируют их от экзо- и эндогенных влияний в различных слоях слизистой оболочки. Именно М-клетки служат локусом взаимодействия антигенного материала и Лф. Они заключают в себе Лф, которые инфильтруют эпителиальный покров (интраэпителиальные Лф-ИЭЛф). В конечном итоге эпителиальные М-клетки и ИЭЛф составляют структурно-функциональную основу местной защитно-транспортной системы клеток в лимфоидной ткани. Собственная часть технологии цитологического анализа включает определение числа ИЭЛф и ЭЭЛф и расчет индекса соотношения ИЭЛф/ЭЭЛф, средняя величина ИЭЛф/ЭЭЛф в норме чаще составляет 0,15-0,30. Величины содержания ИЭЛф (12,8-22,5%) и значения ИЭЛф/ЭЭЛф находятся в прямой зависимости от степени активности процессов кооперации клеточных элементов (Эц-Лф).

Идентификация популяций Лф (Т-, В-, О-Лф) в биосистеме НАЛТ осуществляют с помощью цитохимического метода, раннее предложенного Л.А. Ивановой, Е.В. Васильевой, В.В. Соколовым (1979) для исследования популяции Лф в периферической крови путем выявления активности кислой фосфатазы (КФ). По характеру распределения химического продукта в клетках косвенно судят об их принадлежности к той или иной популяции. Цитохимическую реакцию на определение активности КФ в Лф проводят методом азосочетания по Р.П. Нарциссову (1970) с использованием нафтол-AS-Bi-фосфата в качестве субстрата и азотированного парарозанилина в качестве красителя (Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Дис. … докт. мед. наук. - М., - 1970. - 360 с.). При оценке цитологических препаратов на КФ выделяю 3 типа реакции в Лф:

- единичные (1-4, реже больше) яркие, четко очерченные; крупные или средних размеров гранулы (Т-Лф);

- множественные мелкие, нечетко очерченные гранулы, часто на фоне диффузного окрашивания (О-Лф);

- отсутствие продукта реакции на КФ, ферментоотрицательные клетки (В-Лф).

Содержание КФ определяют в 100 клеточных элементах и подсчитывают дифференцированное число Лф с разным характером цитохимической реакции: Т-Лф, В-Лф, О-Лф и соотношение Т-Лф/В-Лф. Соотношения популяций могут быть нормальными или отражать состояние их дисбаланса.

Оценка репродуктивной функции клеток проводится путем цитогенетических и цитологических исследований. Для этого определяют число клеток с фигурами митозов в относительных (%) величинах (Сапин М.Р., Этингер Л.Е. Иммунная система человека. - М.: Медицина, - 1996. - 304 с. Цитопродукция Лф в биосистеме НАЛТ определяется путем подсчета числа клеток, содержащих фигуры митозов в %, вычисления индекса митозов (ИМЛф) и их оценки. Репродуктивная функция клеток исследуется по митотической их активности. Митоз, как наиболее распространенный способ репродукции клеток, обеспечивает возможность образования генетически равноценных клеток и сохраняет преемственность хромосом в ряду клеточных генераций. Это достигается сочетанием процессов идентичной редупликации хромосом и их равномерным распределением между дочерними клетками. При цитологическом исследовании определяют процесс митозов в клетках на разных его стадиях. Чаще всего выделяют 4 стадии собственного процесса митоза:

1-ю профазу - стадию формирования хромосом и расхождения центриолей;

2-ю метафазу - стадию перемещения хромосом к экваториальной плоскости делящейся клетки и формирование «материнской звезды»;

3-ю анафазу - стадию расхождения хромосом к полюсам, формирования и образования фигуры «дочерних звезд»;

4-ю телефазу - заключительную стадию митоза или стадию реконструкции (формирование) дочерних ядер из групп хромосом и разделения тела клетки на 2 части.

В период интерфазы (между процессами митозов) определяются процессы дифференцировки, роста и функционирования клеток и стадии митозов не определяются.

Количественная оценка цитопродукции осуществляется по степени митотической активности клеток. Для этого используется индекс митозов Лф (ИМЛф), который вычисляют по следующей формуле: ИМЛф=Nмитоз:Nмитоз+No, где Nмитоз - число Лф с фигурами митоза и No - количество Лф, не содержащих фигур митоза. Теоретически величины ИМЛф могут колебаться в пределах 0-100. В норме величины ИМЛф чаще составляют 0,01-0,05. Причем величины ИМЛф находятся в прямой зависимости от митотической активности Лф. Высокие значения ИМЛф указывают на повышение митотической активности Лф и активацию процессов пролиферации НАЛТ.

Процессы повреждения клеток оценивают по соответствующим индексам деструкции Лф (ИДЛф) и средним показателям деструкции Лф (СПДЛф). Для расчета этих показателей проводится ранжирование клеток (Лф) в зависимости от степени их повреждения по 5 классам. Классы повреждения Лф определяют при подсчете 100 клеток. Полученное число клеток (в %), относится к 0, 1, 2, 3, 4-му классу, условно обозначают соответственно N0, N1, N2, N3, N4. ИДЛф рассчитывают по следующей формуле: ИДЛф=(N1+N2+N3+N4):(N0+N1+N2+N3+N4), где числитель представлен суммой клеток с признаками повреждения 1, 2, 3, 4-го класса, а знаменатель - общим числом подсчитанных клеток с признаками и без признаков повреждения (чаще 100 клеток). Величины ИДЛф могут колебаться в пределах 0-1,00 и находятся в прямой зависимости от степени повреждения Лф.

Средний показатель деструкции Лф (СПДЛф) определяется по формуле: СПЛЛф=[(1×N1)+(2×N2)+(3×N3)+(4×N4)]:100, в которой числитель представлен суммой произведений номера и класса повреждения (N1, N2, N3, N4), а знаменатель - общим количеством подсчитанных клеток с признаками повреждения. Возможные колебания СПДЛф составляют 0-4,00. Значения СПДЛф находятся в прямой зависимости от интенсивности процессов повреждения. Показатели повреждения Лф (ИДПЛФ и СПДЛф) характеризуют степень (ИДЛф) и интенсивность (СПДЛф) процессов повреждения, а также отражают состояние альтерации Лф в биосреде НАЛТ.

Структурно-функциональное состояния НАЛТ - системы было изучено у 200 здоровых детей и подростков в возрасте от 1 года до 18 лет (154) и взрослых лиц от 19 до 25 лет (46). При этом установлена различная направленность изменения показателей НАЛТ - системы от возраста обследованных (таблица 1).

На поверхности слизистой оболочки определялось умеренное количество клеточных элементов. ОСК в возрастных группах увеличивалось в 1,37 раза (p1-4<0,001). ЖСК была высокой, увеличивалась с возрастом в 1,19 раза (p1-4<0,001).

В общей цитограмме количественно было установлено, что преобладали Эц и Лф, а Э, Н, Пц, Мф встречались значительно реже. Количество Эц было доминирующим в структуре цитограммы и повышалось с возрастом в 1,28 раза (p1-4<0,01). Количество Лф снижалось с возрастом в 1,96 раза (p1-4<0,001). Число Э закономерно возрастало в возрастных группах в 1,88 раза (p1-4<0,01), число Нф - в 3,00 раза (p1-4<0,001), число Пц - в 2,54 раза (p1-4<0,01) и число Мф - в 1,95 раза (p1-4<0,001). Средние величины соотношений Эц/Лф были в прямой зависимости от возраста и возрастали в 2,20 раза (р<0,001), что было обусловлено приростом числа Эц и умеренной убылью Лф.

В структуре парциальной цитограммы Лф по величине и степени дифференцировки клеток наибольший удельный вес падал на малые и средние Лф (МЛФ и СЛф) и небольшую часть составляли бластные клетки (Бл. Кл.) и большие Лф (БЛф). Количество Бл. Кл. падало в 6,66 раза (p1-4<0,001) и Блф - в 1,59 раза (p1-4<0,001). Число СЛф с тенденцией к снижению по возрасту уменьшалось в 1,30 раза (p1-4<0,001), а число МЛф возрастало в возрастных группах в 1,41 раза (p1-4<0,001). Большие популяции (Бл. Кл. и БЛФ) относились к малым популяциям (СЛф и МЛф) в виде ИГЛф, который снижался в 1,80 раза (p1-4<0,01). Изучение числа Лф в зависимости от их локализации по отношению Эц. В соответствии с этим были выделены внутри- или интраэпителиальные Лф (ИЭЛф) и вне- или эстраэпителиальные Лф (ЭЭЛф). Результаты исследования показали, что преобладали ЭЭЛф над ИЭЛф. Возрастная динамика ИЭЛф отличалась обратной направленностью и уменьшалась в 1,76 раза (p1-4<0,001), а ЭЭЛф - прямой направленностью и возрастала в 1,10 раза (p1-4<0,02). В связи с разнонаправленной возрастной динамикой этих популяций величины ИЭЛф/ЭЭЛф постепенно снижалась в 1,92 раза (p1-4<0,001). Количество Т-Лф и В-Лф в возрастных группах было почти равным. Содержание Т-Лф возрастало в 1,26 раза (p1-4<0,02) и В-Лф - в 1,16 раза (p1-4<0,05). Их соотношения (Т-Лф/В-Лф) колебались в пределах 0,98-1,05 без достоверных различий (p1-4>0,2). Содержание О-Лф характеризовалось обратной возрастной зависимостью, и относительные их показатели снижались в 6,02 раза (p1-4<0,001). Лф в НАЛТ-системе характеризовались низкой митотической активностью, и относительные их показатели снижались с возрастом в 1,19 раза (р2-3<0,05) и в 1,23 раза (р3-4<0,05). Процессы деструкции Лф по числу поврежденных клеток (ИДЛф) были слабо выражены и колебались без достоверных различий (p1-4>0,2). Интенсивность повреждения Лф (СПДЛф) снижалась с возрастом в 1,27 раза (p1-4<0,001).

Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы были выполнены у 200 здоровых лиц 1-й группы здоровья. Из них детей в возрасте 1-3 лет было 44, дошкольников 3-7 лет - 55, школьников (детей и подростков) 7-18 лет - 55 и взрослых лиц 19-25 лет - 46.

Для оценки полученных результатов исследования были рассчитаны доверительные интервалы (ДИ) показателей по формуле: X±2·mx (95% - ДИ). Кроме того, установлена направленность изменений структурно-функциональных показателей НАЛТ-системы с повышением их (↑) или снижением (↓) (таблица 2).

Для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы были разработаны соответствующие критерии в возрастных группах. Для этого были предложены критерии, соответствующие значениям больше или меньше (> или <) граничных величин доверительных интервалов каждого параметра НАЛТ-системы (таблица 3).

Причем в каждой возрастной группе содержалось 13 показателей со значение больше (>) и по 11 показателей со значением меньше (<). При этом показатели со значением меньше отражали наличие иммуно-цитологической недостаточности, а показатели со значением больше - наличие иммуно-цитологической компенсации. По количеству сниженных показателей устанавливалась степень местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы. При этом I-ю степень местной иммуно-цитологической недостаточности диагностируют при снижении 6-8 показателей (или 25,0-33,3%) от общего их количества, II-ю степень - при снижении 9-18 исследуемых показателей (или 37,5-75,0%)) от общего их количества и III-ю степень - при снижении 19-24 исследуемых показателей (или 79,2-100,0%)). При этом деление по степеням осуществлялось на основе принципа простого ранжирования.

Для иллюстрации приводятся конкретные примеры по диагностике местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани.

Пример 1. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у ребенка К., 2 лет 6 месяцев, страдающего частыми острыми респираторными заболеваниями верхних дыхательных путей. Получены следующие иммуно-цитологические показатели НАЛТ-системы: ОСК - 2,20 усл. ед., ЖСК - 69,5%; общая цитограмма: Эц - 38,5%, Э - 1,5%, Н - 2,0%, Лф - 50,0%, Пц - 2,5%, Мф - 5,5%, Эц/Лц - 0,77; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 3,1%, БЛф - 3,9%, СЛф - 47,0%, МЛф - 46,0%, ИГЛф - 0,07, ИЭЛф - 24,5%, ЭЭЛф - 75,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,32. Т-Лф - 36,5%, В-Лф - 51,0%, О-Лф - 12,5%, Т-Лф/В-Лф - 0,71, ИМЛф - 0,12, ИДЛф - 0,22 усл. ед., СПДЛф - 133,0 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы определяются за пределами граничных величин 95% - ДИ, что свидетельствует о наличии местной иммуно-цитологической недостаточности I-й степени, т.к. сниженные значения у 6 показателей (или в 25,0% случаев) и повышенные значения 18 показателей (или в 75,0% случаев).

Пример 2. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у ребенка В., 5 лет 6 месяцев, страдающего риносинуситом в периоде обострения. Результаты исследования показали следующие результаты: ОСК - 2,60 усл. ед. и ЖСК - 62,6%; общая цитограмма: Эц - 38,5%, Э - 1,5%, Н - 10,0%, Лф - 36,0%, Пц - 5,5%, Мф - 8,5%, Эц/Лц - 1,07; парциальная цитограмма лимфоцитов: Бл. Кл. - 0,75%, БЛф - 3,25%, СЛф - 45,0%, МЛф - 50,0%, ИГЛф - 0,04, ИЭЛф - 20,0%, ЭЭЛф - 80,0%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,25, Т-Лф - 32,4%, В-Лф - 53,6%, О-Лф - 14,0%, Т-Лф/В-Лф - 0,60, ИМЛф - 0,10, ИДЛф - 0,28 усл. ед., СПДЛф - 185,5 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы определяются за пределами граничных величин 95% - ДИ и указывают на наличие местной иммуно-цитологической недостаточности II-й степени, т.к. сниженные значения у 9 показателей (или в 37,5% случаев) и повышенные значения 15 показателей (или в 62,5% случаев).

Пример 3. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) проведены у подростка С., 15 лет, страдающего хроническим субкомпенсированным тонзиллитом в стадии ремиссии. Полученные данные характеризовались следующими величинами: ОСК - 2,10 усл. ед., ЖСК - 62,5%; общая цитограмма: Эц - 45,0%, Э - 2,0%, Н - 8,0%, Лф - 35,0%, Пц - 2,25%, Мф - 7,75%, Эц/Лц - 1,28; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 0,55%, БЛф - 4,45%, СЛф - 45,5%, МЛф - 42,5%, ИГЛф - 0,05, ИЭЛф - 23,5%, ЭЭЛф - 76,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,31, Т-Лф - 33,3%, В-Лф - 58,0%, О-Лф - 8,7%, Т-Лф/В-Лф - 0,57, ИМЛф - 0,08, ИДЛф - 0,22 усл. ед., СПДЛф - 126,6 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ - системы находятся за пределами граничных величин 95% - ДИ и подтверждают наличие местной иммуно-цитологической недостаточности II-й степени, т.к. сниженные значения у 9 показателей (или в 37,5% случаев) и повышенные значения 15 показателей (или в 62,5% случаев).

Пример 4. Иммуно-цитологические исследования НАЛТ-системы (небные миндалины) выполнены у студента Т., 22 лет, страдающего спорадически возникающими ангинами (период реконвалесценции). Результаты проведенных исследований показали следующий спектр данных: ОСК - 1,95 усл. ед., ЖСК - 63,5%; общая цитограмма: Эц - 69,0%, Э - 0,8%, Н - 2,2%, Лф - 22,0%, Пц - 0,5%, Мф - 5,5%, Эц/Лц - 2,76; цитограмма Лф: Бл. Кл. - 0,25%, БЛФ - 4,75%, СЛф - 40,0%, МЛф - 55,0%, ИГЛф - 0,05, ИЭЛф - 10,5%, ЭЭЛф - 89,5%, ИЭЛф/ЭЭЛф - 0,12, Т-Лф - 44,5%, В-Лф - 40,5%, О-Лф - 15,0%, Т-Лф/В-Лф - 1,10, ИМЛф - 0,08, ИДЛф - 0,12 усл. ед., СПДЛф - 89,5 усл. ед.

Заключение: цитоморфологические показатели НАЛТ-системы определяются в пределах доверительных интервалов (95%-ДИ) и свидетельствуют об отсутствии местной иммуно-цитологической недостаточности и восстановлении местной клеточной защиты.

На основании результатов решения технической задачи были сделаны следующие выводы:

- предлагаются многогранные исследования по оценке структурно-функционального состояния НАЛТ-системы, включающие определение общего содержания и жизнеспособности клеток (ОСК и ЖСК), общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов (Лф);

- общие цитограммы отражают дифференцированный состав клеточных элементов и соотношение основных их популяций;

- парциальные цитограммы Лф характеризуются:

- по размерам, степени зрелости и числу генераций,

- по локализации Лф относительно эпителия,

- по метаболическим свойствам и идентификации популяции Лф,

- по митотической активности или степени пролиферации Лф,

- по степени повреждения или альтерации структуры Лф;

- установлена возможная направленность в сторону повышения или снижения исследуемых цитоморфологических показателей;

- разработаны доверительные интервалы с 95%-й точностью и определены граничные их значения;

- показаны возрастные особенности иммуно-цитологических показателей НАЛТ-системы у детей и подростков 1-3, 3-7, и 7-18 лет и у взрослых лиц в возрасте 19-25 лет;

- представлены иммуно-цитологические критерии диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы по граничным величинам доверительных интервалов;

- решена задача по диагностике иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы с установлением 3-х степеней (I-й, II-й, III-й); при снижении 6-8 показателей (25,0-33,3%) диагностируют I-ю степень; 9-18 показателей (37,5-75,0%) - II-й степень и 19-24 показателей (79,2-100,0%) - III-ю степень.

Литература

1. Плужников М.С., Лавренева Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: клинические и иммунологические аспекты. - Главы из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: Диалог, 2004. - С. 3-59.

2. Плужников М.С., Лавренева Г.В., Левин М.Я., Назаров П.Г., Никитин К.А. Тонзиллит: клинические и иммунологические аспекты. - Главы из книги: Иммунология хронического тонзиллита. - СПб.: Диалог, 2004. - С. 3-59.

3. Маккаев Х.М. Тактика сочетанного консервативного лечения хронических воспалительных заболеваний лимфоидных органов носоглотки (хронического тонзиллита и аденоидита) у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2002. - №5. - С. 39-43.

4. Осин А.Я. Цитологические методы диагностики в пульмонологии детского возраста // II-й Международный симпозиум фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточной Азии: тезисы докладов. - Россия - Владивосток, 1994. - С. 182-183.

5. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е., Клиническая иммунология детского возраста // Руководство для врачей. - М.: Медицина, 1996. - 384 с.

6. Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Дисс. … докт. мед. наук. - М., 1970. - 360 с.

7. Сапин М.Р., Этингер Л.Е. Иммунная система человека. - М.: Медицина, 1996. - 304 с.

Способ диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности в системе назально-ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ), включающий исследование локальной иммунной системы лимфоидной ткани в цитологических мазках-отпечатках, и отличающийся тем, что способ диагностики осуществляют путем комплексных исследований для диагностики местной иммуно-цитологической недостаточности назально-ассоциированной лимфоидной ткани по ряду количественных и качественных иммуно-цитологических показателей общей цитограммы и парциальной цитограммы лимфоцитов и определением в возрастных группах диагностических критериев, соответствующих значениям больше (>) или меньше (<) граничных величин доверительных интервалов каждого исследуемого иммуно-цитологического показателя и с последующим установлением трех степеней иммуно-цитологической недостаточности НАЛТ-системы, при этом I-ю степень диагностируют при снижении 6-8 показателей или 25,0-33,3% от общего числа показателей; II-ю степень - 9-18 показателей или 37,5-75,0%, III-ю степень - 19-24 показателей или 79,2-100,0%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета второго типа у больных метаболическим синдромом.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни у индивидуумов, имеющих наследственную отягощенность.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и представляет собой способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы III-IV стадий, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья РФ, анализ полиморфизмов генов -308G/A TNFα,+250A/G Ltα,+36A/G TNFR1, при этом делают прогноз повышенного риска развития первичной открытоугольной глаукомы III-IV стадий в случае выявления следующих генетических вариантов: аллеля -308G TNFα либо генотипа -308GG TNFα, либо аллеля +250А Ltα либо генотипа +250АА Ltα, либо комбинации аллеля -308G TNFα с генотипом +250AA Ltα, либо комбинации генотипа -308GG TNFα с аллелем +36A TNFR1; а низкий риск формирования первичной открытоугольной глаукомы III-IV стадий прогнозируют при выявлении комбинации аллеля -308A TNFα с аллелем +36A TNFR1 и аллелем +250G Ltα либо комбинации аллеля -308A TNFα c аллелем +36A TNFR1.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования уровня внутриглазного давления (ВГД) у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, больных первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ).

Изобретение относится к медицине, в частности к фибробронхоскопии, и описывает способ прогнозирования развития тяжелого гнойного трахеобронхита при термоингаляционном поражении дыхательных путей методом хемилюминесценции.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована при проведении анализа тонких слоев, в частности монослоев клеток. Устройство для получения слоев, содержащих монослой из клеток, для анализа имеет двумерную матрицу из аналитических камер (45) и разветвленную конфигурацию входных каналов (25), соединенных с каждой из аналитических камер в матрице, для возможности заполнения аналитических камер в параллельном режиме.
Изобретение относится к способам геоэкологической оценки территории при проектировании строительства объектов в криолитозоне. Технический результат заключается в обеспечении профилактики наступления чрезвычайных ситуаций технического и биологического характера, при которых может произойти разрушение объектов, а также болезни или гибель людей.

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для подготовки биологического образца к исследованию при помощи сканирующей электронной микроскопии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, и может быть использовано при лечении мигрени. Способ выбора тактики лечения мигрени включает анализ сыворотки крови на наличие IgG- и IgA-антиглиадиновых антител и IgA-антител к тканевой трансглютаминазе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и может быть использовано для оценки риска прогрессирования облитерирующего атеросклероза сосудов нижних конечностей в ближайшие 6 месяцев.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования риска возникновения гематогенного метастазирования при двухсторонней метахронной инвазивной карциноме неспецифического типа молочных желез. Сущность способа: проводят гистологическое исследование на светооптическом уровне препаратов ткани всех регионарных лимфатических узлов, полученных после оперативного вмешательства, и определение количества лимфоузлов с наличием метастазов, после чего рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле: Y=(-7,1+2,8 Х1), где (-7,1) - значение коэффициента регрессии свободного члена; X1 - выраженность лимфогенного метастазирования («1» - отсутствует метастатическое поражение лимфатических узлов, «2» - определяется до 3-х лимфоузлов с метастазами, «3» - определяются 4 и более лимфоузлов с метастатическим поражением), (2,8) - значение коэффициента регрессии этого признака, далее, значение вероятности развития гематогенных метастазов Р определяют по формуле: Р=eY/(1+eY), где е - математическая константа, равная 2,72. При вероятности Р≥50% определяют высокий, а при Р<50% - низкий риск развития гематогенных метастазов. Изобретение обеспечивает получение достоверных числовых показателей, характеризующих степень риска возникновения гематогенной диссеминации у конкретной больной, отражающих прогноз течения онкологического заболевания. Степень достоверности способа: χ2=173,9; р=0,0000, чувствительность 100%, специфичность 78%. 2 пр., 2 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, может быть использовано при подготовке детей раннего возраста к АВО-несовместимой трансплантации печени. Снижение титров группоспецифических антител проводят путем ежедневной трансфузии свежезамороженной плазмы группы AB(IV) в объеме 60-300 мл. Контролируют титры группоспецифических антител, способных вступать в реакцию агглютинации с групповыми антигенами донора и трансплантацию проводят при достижении допустимого для выполнения трансплантации уровня контролируемых антител. Допустимым для выполнения трансплантации уровнем антител считают титр естественных группоспецифических антител не более 1:8, титр иммунных полных группоспецифических антител не более 1:4 и титра иммунных неполных группоспецифических антител не более 1:4. Технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемого способа, заключается в профилактике осложнений, обусловленных проведением плазмафереза, при сохранении надежного снижения повышенного титра группоспецифических антител перед трансплантацией, удешевлении способа, его доступности. 2 з.п. ф-лы, 3 пр.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения больных риносинуситом с рецидивирующим течением заболевания. Для этого проводят общепринятую терапию риносинусита. Причем до начала лечения в сыворотке крови больного определяют уровень субстанции P. При значении уровня субстанции P 100 пг/мл и менее в курс лечения с первого дня в течение 3-5 дней включают препарат Ликопид, который вводят больному перорально в дозе 10 мг 1 раз в день. Изобретение позволяет сократить сроки лечения больного на 4-6 дней. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, судебной психиатрии и сексологии, и может быть использовано для диагностики расстройств сексуального предпочтения. Изобретение осуществляют следующим образом. Обследуют пациента и проводят тест специфической визуальной стимуляции (СВС). Перед проведением теста СВС осуществляют сбор суточной мочи пациента, в которой определяют суточную экскрецию адреналина - СЭА1 флуориметрическим методом, в мкг/сут. После этого на следующий день утром пациенту проводят тест СВС. Сразу же после проведения теста СВС повторно осуществляют сбор суточной мочи пациента, в которой в той же лаборатории тем же методом определяют суточную экскрецию адреналина - СЭА2, выражая ее в тех же самых единицах, что и значение СЭА1. Далее вычисляют диагностический коэффициент К по формуле К=СЭА2/СЭА1. При выполнении условия К>3 диагностируют расстройство сексуального предпочтения. Способ позволяет сократить возможность экспертных ошибок и тем самым повысить точность и доказательность экспертной работы. 1 табл.

Группа изобретений относится к сельскому хозяйству и может быть использована для сбора информации для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний биологических объектов - животных и птиц. Для этого на каждом биологическом объекте устанавливают RFID -метку, содержащую информацию о биологическом объекте. Берут образец от каждого биологического объекта. Размещают на его упаковке RFID-метку, содержащую информацию об образце и биологическом объекте. Наносят каждый образец на соответствующий иммунострип, меченный RFID-меткой. Считывают информацию с RFID-меток, находящихся на каждом биологическом объекте, соответствующем образце и иммунострипе. Вносят в память ридера результаты анализа, полученные для каждого образца с помощью иммунострипа. Передают информацию с ридера путем беспроводной или проводной связи в блок обработки данных, с помощью которого регистрируют полученную информацию и формируют единую базу данных. Также предложена система сбора информации для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний животных и птиц. Группа изобретений позволяет осуществлять диагностический контроль на инфекционные заболевания животных и птиц. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики заболеваний тканей пародонта на разных стадиях. Для осуществления способа исследуют слюну, в качестве показателя воспалительного процесса определяют концентрацию свободного оксипролина спектрофотометрическим методом. При значениях <0,80 мг/л диагностируют отсутствие патологии тканей полости рта; при значениях 0,80 - 1,00 мг/л диагностируют острый катаральный гингивит; при значениях 1,01 - 1,50 мг/л диагностируют хронический гингивит; при значениях >1,50 мг/л диагностируют пародонтит. Использование способа позволяет более точно, в короткие сроки на доступном для всех клинических лабораторий оборудовании диагностировать заболевания тканей пародонта. 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития ретинопатии недоношенных. Проводят непрямую офтальмоскопию глазного дна в условиях медикаментозного мидриаза. Офтальмоскопию проводят у детей, рожденных до 35 недели гестационного возраста с весом до 2000 г, 1 раз в 14 дней, начиная с 30 недели гестационного возраста. Проводят забор капиллярной крови для газового анализа на содержание углекислого газа и кислорода накануне обследования. При выявлении признаков артериоспазма сетчатки и уровнях парциального давления кислорода ниже 45 мм рт.ст. и углекислого газа - выше 42 мм рт.ст. прогнозируют развитие ретинопатии недоношенных. Способ позволяет провести прогнозирование развития ретинопатии недоношенных, своевременно выявить группу риска и провести профилактические и лечебные мероприятия, а также сократить количество неблагоприятных исходов за счет выявления наиболее прогностически значимых факторов развития ретинопатии недоношенных после 30 недели гестационного возраста. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к выполнению анализа при помощи мобильного устройства. Тестовое устройство для выполнения тестового анализа содержит емкость с реагентом; портативное устройство, включающее процессор и устройство для ввода изображения. При этом реагент активен в отношении используемого тестового образца и изменяет цвет или рисунок тестового образца, а конфигурация процессора позволяет проводить обработку данных, полученных с устройства для ввода изображения, и выводить тестовый результат в отношении используемого тестового образца. Также устройство характеризуется тем, что настройки процессора позволяют корректировать изображение на предмет любого отклонения изображения от правильного расположения или на предмет его перекоса, или конфигурация тестового устройства не позволяет ввод изображения в случае, если степень ошибки, связанной с любым отклонением изображения от правильного расположения или его перекосом, оказывается больше установленной нормы. Изобретение позволяет получать не только качественные, но и количественные результаты анализа. 12 з.п. ф-лы, 10 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно прогнозированию риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) с сахарным диабетом 2 типа (СД 2 типа), перенесших стентирование коронарных артерий. Изобретение может быть использовано в кардиологии, ангиологии, кардиохирургии, реабилитологии. Для этого непосредственно перед стентированием определяют содержание в сыворотке крови одного из маркеров воспаления - липопротеин-ассоциированной фосфолипазы А2 (Лп-ФЛА2) методом иммуноферментного анализа. При выявлении у пациентов ИБС с СД 2 типа, перенесших стентирование коронарных артерий, уровня Лп-ФЛА2 983 нг/мл и более прогнозируют риск развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий. Изобретение позволяет выделить приоритетную группу больных ИБС с СД 2 типа, перенесших стентирование коронарных артерий, для диспансерного наблюдения с организацией эффективных целевых мероприятий, направленных на профилактику развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий и предотвращение у этих пациентов высокой преждевременной смертности. 3 табл., 2 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицинской аллергологии, иммунологии, медицинской лабораторной диагностике. Сущность способа состоит в том, что в периферической крови обследуемых лиц определяют концентрацию IgE и абсолютное содержание лимфоцитов СD23+. При содержании СD23+ более 0,6×109 кл./л выявляют риск формирования гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ). Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность формирования гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ). 3 пр.
Наверх