Способ получения жидкой стабильной сыворотки

Авторы патента:

Петровский Станислав Викторович (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2584595:

Аваков Анатолий Эдуардович (RU)
Петровский Станислав Викторович (RU)
Трухин Виктор Павлович (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемаггютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотки крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Изобретение представляет собой способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической шигеллезной, имеющей способность сохранять функциональную активность антител при их длительном нахождении в водных растворах, с использованием полиглюкина и красгемодеза, сыворотку диагностическую шигеллезную, полученную таким способом, и набор для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови, включающий такую сыворотку. Изобретение позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает процесс получения сыворотки. 5 н.п. ф-лы, 1 табл.

Шигеллы (лат. Shigella) - род грамотрицательных палочковидных бактерий, не образующих спор. Для человека и приматов являются возбудителями болезней из группы шигеллезов. Шигеллы хорошо растут на обычных питательных средах; при разрушении микробных клеток выделяется эндотоксин, который играет большую роль в патогенезе такой болезни, как дизентерия, и обусловливает клинические проявления. Кроме того, шигеллы продуцируют несколько видов экзотоксина: цитотоксин, повреждающий мембраны эпителиальных клеток; энтеротоксины, усиливающие секрецию жидкости и солей в просвет кишки; нейротоксин, обнаруживаемый в основном у бактерий Григорьева-Шига (Sh. dysenteriae серовара 1). В современных условиях наибольшее распространение имеют шигеллы Флекснера и Зонне.

Лабораторное подтверждение дизентерии проводится бактериологическим и серологическим методами. Бактериологический метод (высев шигелл из испражнений) при 3-кратном исследовании обеспечивает подтверждение диагноза у 40-60% больных.

Ускоренная диагностика острых кишечных диарейных инфекций может осуществляться без выделения чистых культур по обнаружению антигенов возбудителей и их токсинов в биосубстратах - слюне, моче, копро-фильтратах, крови. С этой целью используют иммунологические методы, обладающие высокой чувствительностью и специфичностью: иммуно-ферментный анализ (ИФА), реакция агглютинации латекса (РАЛ), реакции коагтлютинации (РКА), иммунофлуоресценции (РИФ), полимеразной цепной реакции (ПНР). В патентной литературе описаны способы диагностики дизентерии (см., например, SU 833211, SU 971269, SU 1651139).

Для выявления антител к шигеллам в лабораторной практике используется реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) (Каральник Б.В. Эритроциртарные диагностикумы, М.: Медицина, 1976).

Агглютинация подразделяется на прямую (активную) и непрямую (пассивную). Феномен прямой (активной) агглютинации реализуется при специфическом взаимодействии узнающих антител с собственными структурными антигенами мембран эритроцитов или бактериальных клеток.

В последние годы широкое распространение получили эритроцитарные диагностикумы из шигелл Зонне и Флекснера, с помощью которых в реакции пассивной или непрямой гемагглютинации (РПГА) определяют наличие антител у больных и переболевших. В настоящее время выпускается для РПГА несколько видов эритроцитарных диагностикумов (из шигелл Зонне, Флекснера, Флекснера-6, дизентерии-1, дизентерии-2 и т.д.). Реакцию ставят с парными сыворотками в соответствии с рекомендациями к указанным диагностическим препаратам. Диагностически достоверным показателем, подтверждающим заболевание, является увеличение титра антител не менее чем в 8 раз.

В настоящее время для постановки реакции РПГА, так же как и для постановки реакции агглютинации (РА), сухая лиофильно высушенная шигеллезная сыворотка требует разведения, например, раствором хлорида натрия. Однако полученный разведенный раствор имеет маленький срок хранения. В лабораториях обычно используется лишь малая часть сыворотки из вскрытой ампулы. Большую часть приходится утилизировать, поскольку в разведенном состоянии сыворотка быстро теряет свою специфическую активность. Таким образом, на настоящий момент существует задача сохранения функциональной активности антител сывороток, т.е. способности к специфическому взаимодействию с соответствующим антигеном при длительном их нахождении в водных растворах.

Ранее были предприняты попытки по увеличению срока годности сывороток. Так, в автореферате Михайловой В.А. «Разработка технологии получения кроличьей холерной агглютинизирующей О-сыворотки», Иркутск, 1998, был изложен способ стабилизации кроличьей холерной О-сыворотки с целью повышения срока ее годности. При поиске стабилизатора диагностических сывороток были исследованы вещества, известные своим стабилизирующим действием на молекулы иммуноглобулинов, прежде всего многоатомные спирты (сорбит), углеводы (сахароза) и аминокислоты (цистеин, глутамин). В качестве стабилизатора испытаны также тиосульфат натрия и глутатион - исходя из предположения, что эти вещества как антиоксиданты могут предотвратить свободнорадикальное окисление.

В результате сравнительных исследований установлено, что наилучший стабилизирующий эффект оказывает смесь сахарозы (в концентрации от 2.2 до 3.0%) и тиосульфата натрия (от 0.75 до 1.0%). Оба компонента стабилизатора растворяют в 0.9% растворе хлористого натрия и вносят в сыворотку в соотношении, зависящем от специфической активности сыворотки. Сыворотку с титром антител 1:3200 и выше разводят 3:1 стабилизатором, содержащим 9% сахарозы и 3% тиосульфата натрия, с титром антител не ниже 1:1600-12:1 раствором, содержащим 30% сахарозы и 10% тиосульфата натрия. Конечное содержание стабилизирующих веществ в сыворотке в обоих случаях было одинаково: 3% - сахарозы и 1% - тиосульфата натрия. В результате стабильность экспериментальной сыворотки была выше, чем у контрольной, в 5 и более раз. Кроме того, сахароза и тиосульфат натрия значительно улучшали растворимость препарата. На специфическую активность и растворимость оказывала влияние остаточная влажность препарата: наиболее стабильными были холерные агглютинирующие О-сыворотки с остаточной влажностью не более 2.0-2.2%.

Авторами же настоящего изобретения было обнаружено, что можно получить жидкую сыворотку с длительным сроком хранения вплоть до 3 лет с сохранением ее функциональной активности. Таким образом, получение такой сыворотки позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает и удешевляет процесс получения сыворотки.

Это также приводит к упрощению проведения реакции агглютинации, поскольку жидкие сыворотки не требуют стадии разведения сухой сыворотки раствором для разведения.

Таким образом, технический результат заключается в сохранении функциональной активности антител сыворотки при длительном нахождении в водном растворе, что приводит также и к упрощению способа получения сыворотки, а также к упрощению проведения реакции агглютинации.

Технический результат достигается тем, что в качестве основного разводящего и стабилизирующего раствора исходной жидкой адсорбированной сыворотки использовали растворы, содержащие

1) полиглюкин (ПГ) - международное непатентованное название - декстран (ср. мол. масса 50000-70000) (крупномолекулярный стабилизатор антител) - 60 г; натрия хлорид - 9 г, вода для инъекций - до 1 л; прозрачная бесцветная или слегка желтоватая жидкость, и азид натрия в конечной концентрации 0.2%.

2) красгемодез 8000 (ГД) - поливинилпирролидон низкомолекулярный 8000±2000) 60,00 г, натрия хлорид 5,5 г, калия хлорид 0,42 г; кальция хлорид гексагидрат - 0,5 г, магния хлорид гексагидрат - 0,005 г, натрия гидрокарбонат - 0,23 г, вода для инъекций - до 1 л, прозрачная жидкость светло-желтого или желтого цвета, азид натрия в конечной концентрации 0.2% и сорбит в конечной концентрации 0.2%.

Известно, что полиглюкин и красгемодез используют в качестве криопротектров при лиофильном высушивании препаратов, поскольку они оказывают защитное действие на белковые молекулы (см., например, RU 2326655, 20.06.2008, RU 2214836, 27.10.2003, RU 2236866, 27.09.2004).

При этом в уровне техники не описана возможность использования полиглюкина и красгемодеза 8000 для придания сохранения свойств входящих в состав сывороток антител при нахождении их в водном растворе.

Таким образом, изобретение представляет собой:

1. Набор для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови, включающий:

- диагностикум эритроцитарный шигеллезный, представляющий собой взвесь формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из шигелл в буферном растворе,

- стабильную жидкую сыворотку диагностическую шигеллезную, полученную путем разведения жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации или красгемодезом 8000, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0.2% сорбита в конечной концентрации,

- взвесь формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана,

- планшет для иммунологических реакций.

2. Способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической шигеллезной, включающий разведение жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации или красгемодезом 8000, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0.2% сорбита в конечной концентрации.

3. Стабильную жидкую сыворотку диагностическую шигеллезную, полученную способом, включающим разведение жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации или красгемодезом 8000, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0.2% сорбита в конечной концентрации.

4. Применение стабильной жидкой сыворотки по п. 3 в реакции агглютинации (РА).

5. Применение стабильной жидкой сыворотки по п. 3 в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Изобретение осуществляется следующим способом.

Были приготовлены разводящие растворы для сыворотки.

В 6%-ный полиглюкин был внесен азид натрия в конечной концентрации 0.2%.

В красгемодез 8000 был внесен сорбит в конечной концентрации 0.2% и азид натрия в конечной концентрации 0.2%.

Исходную жидкую адсорбированную шигеллезную сыворотку разбавляют раствором, полученным внесением в полиглюкин 0.2% азида натрия, или раствором, полученным внесением в красгемодез 8000 0.2% сорбита и 0.2% азида натрия.

В качестве дополнительных стабилизаторов были использованы - лс-18 - 0,2%, сорбит 2% (для полиглюкина), глицин 0,2%, глютатион 0,2%, тиосульфат натрия 0,2 и 0,4% (в дальнейшем от использования тиосульфата натрия отказались в связи с резким снижением активности сывороток).

Степень разведения сывороток зависит от того, какая сыворотка используется в качестве исходной и для какой реакции (РА или РПГА). Однако вне зависимости от степени разведения сыворотки использование в качестве стабилизирующего и разводящего раствора полиглюкина с 0.2%-ным азидом натрия или раствора красгемодеза 8000 с 0.2%-ным сорбитом и 0.2%-ным азидом натрия позволяет получить жидкую стабильную в течение трех лет диагностическую сыворотку.

Полученные сыворотки были проверены по показателю специфическая активность в реакции РПГА с использованием шигеллезных диагностикумов, производимых ООО «Био-Диагностика» - Зонне; Флекснер 1-5, Флекснер 6 в разведении 1/10 и 1/100 ив реакции РА без разведения с использованием тест штаммов - Shigella Sonnei №5063, Sh.Flexneri 1в №1818, Sh.Flexneri 2а №1605, Sh.Flexneri 3а №2167, Sh.Flexneri 4а №1359, Sh.Flexneri 5 №207, Sh.Flexneri 6 №281.

Были исследованы сыворотки в различных вариантах, а именно:

1. ПГ без добавок	6. ГД без добавок
2. ПГ+лс-18 0,2%	7. ГД+лс-18 0,2%
3. ПГ+ сорбит 2%	8. ГД+ сорбит 2%
4. ПГ+ глютатион 0,2%	9. ГД+ глицин 0,2%

5. ПГ+ глицин 0,2%

В процессе хранения все сыворотки проверялись в реакциях РПГА и РА. В РПГА все сыворотки использовались в разведении 1/10. В РА сыворотки использовали без разведения.

Реакция РА.

Когда бактериальная культура смешивается с антисывороткой, специфичной строго к компонентам поверхности клеток бактерий, клетки скрепляются вместе благодаря взаимодействию антиген-антитело и формируют агрегаты (происходит агглютинация). Обычно данную реакцию можно наблюдать невооруженным глазом в виде хлопьев в суспензии. Благодаря смешиванию специфичной антисыворотки с культурой микроорганизмов происходит идентификация определяемых антигенов (например, О и Н). На основе наблюдаемой агглютинации образца серотип определяется по схеме Кауффманна-Уайта.

Реакция протекает следующим образом.

1. Готовят клетки микроорганизмов для постановки реакции. Суспензию обезвреженных клеток микроорганизмов разводят физиологическим раствором (0.9% NaCl, рН=6.5-7.2) до концентрации 20-40 МЕ/мл (используя стандарт мутности МакФарланда). Либо исследуемую культуру берут бактериологической петлей, добавляют в лунку планшета к раствору для разведения и растирают ее до получения однородной суспензии бежево-белого цвета мутностью от 20 до 40 МЕ/мл.

2. Используют сыворотку для реакции, учитывая титр антител (если известен). Исходная сыворотка разводится таким образом, чтобы минимальный титр составлял не менее 1/80. То есть при использовании исходной сыворотки с титром 1/320 развести необходимо будет в 4 раза:

k=t/80, где k - коэффициент разведения, t - титр исходной сыворотки.

Исходную жидкую адсорбированную шигеллезную сыворотку разводят раствором, полученным внесением в полиглюкин 0.2% азида натрия, или раствором, полученным внесением в красгемодез 8000 0.2% сорбита и 0.2% азида натрия.

3. В центр лунки 8-луночного планшета для реакции агглютинации вносится 50 мкл исследуемой культуры и рядом 50 мкл разведенной сыворотки. Капли соединяют, наклоняя планшет. Реакцию определяют визуально в течение 2-6 минут. При развитии реакции агглютинации происходит выпадение агрегатов клеток с антителами, при этом раствор становится более прозрачным.

Учет реакции проводится по четырехкрестной системе:

(4+) - отчетливый агглютинат при полном просветлении жидкости

(3+) - отчетливый агглютинат на фоне мутноватой жидкости

(2+) - незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости

(1+) - незначительное количество агглютината на фоне мутной жидкости

(-) - признаков агглютинации нет. Однородная мутная жидкость.

Положительной считается реакция агглютинации интенсивностью не менее чем на (3+).

Реакция РПГА.

Принцип РПГА заключается в том, что при специфическом взаимодействии антител к различным видам шигелл исследуемой сыворотки крови с антигенами, фиксированными на поверхности индикаторных эритроцитов, наблюдается их характерная агглютинация.

Реакция РПГА проводится в соответствии с рекомендациями используемого диагностикума. В состав набора для диагностики входят:

- диагностикум эритроцитарный шигеллезный, представляющий собой взвесь формалинзированных эритроцитов барана, сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из шигелл в буферном растворе,

- стабильная сыворотка диагностическая шигеллезная, полученная путем разведения жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации или красгемодезом 8000, содержащим 0.2% сорбита в конечной концентрации и 0.2% азида натрия в конечной концентрации,

- взвесь формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана,

- планшет для иммунологических реакций.

Учет РПГА проводится по четырехкрестной системе:

(4+) - все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно лунки в виде "зонтика"

(3+) - агглютинированы почти все эритроциты, на фоне их имеется малозаметное кольцо из осевших неагглютинированньгх эритроцитов

(2+) - наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок в виде маленького "колечка" или "пуговки"

(1+) - большинство эритроцитов не агглютинировано и осело в виде маленького "колечка" в центре дна лунки

(-) - признаков агглютинации нет. Эритроциты осели в виде "пуговки" или "колечка"

Результаты исследований представлены в таблице 1.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что все шигеллезные сыворотки рекомендовано разбавлять полиглюкином без добавок, т.е только с натрия азидом 0,2% или гемодезом с сорбитом 0.2% и азидом натрия 0.2%. Это позволяет сделать сыворотку в жидком виде стабильной в течение длительного времени (до трех лет).

Добавка глютатиона приводит к наибольшему снижению титра в РПГА и замедлению реакции РА. Присутствие сорбита в ПГ также приводит к замедлению РА. Использование ГД с сорбитом незначительно влияет на стабильность сыворотки и, учитывая то, что ГД имеет сложный солевой состав, для разведения сыворотки был выбран вариант ПГ без добавок.

Таким образом, в результате осуществления изобретения было подтверждено, что можно получить жидкую сыворотку с длительным сроком хранения вплоть до 3 лет с сохранением ее функциональной активности.

1. Набор для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови, включающий:
- диагностикум эритроцитарный шигеллезный, представляющий собой взвесь формалинзированных эритроцитов барана, сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из шигелл в буферном растворе,
- стабильную жидкую сыворотку диагностическую шигеллезную, полученную путем разведения жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации, или красгемодезом 8000, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбита в конечной концентрации,
- взвесь формалинзированных несенсибилизированных эритроцитов барана,
- планшет для иммунологических реакций.

2. Способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической шигеллезной, включающий разведение жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации, или красгемодезом 8000, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбита в конечной концентрации.

3. Стабильная жидкая сыворотка диагностическая шигеллезная, полученная способом, включающим разведение жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации, или красгемодезом 8000, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбита в конечной концентрации.

4. Применение стабильной жидкой сыворотки по п. 3 в реакции агглютинации (РА).

5. Применение стабильной жидкой сыворотки по п. 3 в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Изобретение относится к области молекулярной генетики и микологии и предназначено для диагностики онихомикоза. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала ногтей, проведение ПЦР и детекцию полученных результатов с помощью электрофореза в агарозном геле.

Способ диагностики нарушений анаэробного метаболизма глюкозы у работников химической и нефтехимической промышленности // 2583946

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы.

Способ мультиплексной пцр-детекции atopobium vaginae, leptotrichia amnionii, sneathia sanguinegens и eggerthella spp. в клиническом материале // 2583924

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале.

Способ исследования операционного материала при карциноме ампулярной области // 2583887

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано для исследования резецированного органокомплекса по поводу ампулярной карциномы.

Способ определения полисорбата // 2583132

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения полисорбата в пробе, содержащей белок. Способ по настоящему изобретению включает предварительную обработку пробы посредством щелочного гидролиза с последующим колориметрическим определением на основе металлокомплекса, определяемого при анализе вещества с тиоцианатным реагентом, при этом указанный комплекс экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем.

Способ прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания цисплатином // 2582968

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA).

Способ выявления мутации p.q368x в гене миоцилина (myoc), вызывающей развитие первичной открытоугольной глаукомы // 2582956

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ выявления мутации p.Q368X (с.1102С>Т) в гене MYOC, сопровождающейся развитием наследственной формы первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ).

Срочная флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика метастатического поражения лимфатических узлов // 2582275

Изобретение относится к флуоресцентной иммуноцитохимической диагностике метастатического поражения лимфатических узлов. Сущность способа состоит в том, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из растворов: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки с питательной средой, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флуоресцентную микроскопию.

Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом пцр в реальном времени // 2581952

Изобретение относится к биохимии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом ПЦР в реальном времени.

Набор синтетических олигодезоксирибонуклеотидов для амплификации и детекции эндогенного внутреннего контроля при исследованиях биологического материала крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции в режиме "реального времени" // 2581026

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики и молекулярной биологии. Предложен набор, содержащий два олигодезоксирибонуклеотидных праймера и флуоресцентно-меченый ДНК-зонд.

Способ получения жидкой стабильной сыворотки // 2584596

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Изобретение представляет собой способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической сальмонеллезной, имеющей способность сохранять функциональную активность антител при их длительном нахождении в водных растворах, с использованием полиглюкина и сорбита, сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную таким способом, и набор для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови, включающий такую сыворотку. Изобретение позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает процесс получения сыворотки. 5 н.п. ф-лы, 1 табл.

Способ прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей // 2585100

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, и предназначено для прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей. Осуществляют выделение ДНК, проводят анализ полиморфизмов гена TGFβ1 и гена EGFR. При выявлении генотипа -25Pro/Pro гена TGFβ1 и генотипа -2073Т/Т гена EGFR прогнозируют вероятность развития нарушения консолидации перелома. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования течения рассеянного склероза // 2585120

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования, что способствует выбору соответствующей стратегии лечения. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности // 2585382

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы (ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ. Сущность способа состоит в том, что осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизмов генов -308G/А TNFα, +250А/G Ltα, +1663А/G TNFR2 и их сочетаний. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов с наследственной отягощенностью при наличии аллеля +1663G TNFR2 или сочетания аллеля +1663G TNFR2 с аллелем -308G TNFα. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности при наличии аллеля -308А TNFα или сочетания аллеля +250G Ltα с аллелем +1663 G TNFR2 или сочетания аллеля -308 А TNFα с аллелем +250 G Ltα. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью спрогнозировать риск формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности. 4 пр., 2 ил.

Способ оценки степени фиброза печени у детей раннего возраста с помощью индекса apri // 2585387

Изобретение относится к медицине, к актуальной проблеме современного здравоохранения, разделу педиатрии и может быть использовано для оценки тяжести поражения гепато-билиарной системы у младенцев и детей раннего возраста и степени выраженности фиброза печени. Сущность способа оценки выраженности фиброза состоит в том, что у обследуемого ребенка утром натощак из периферической вены берут кровь с целью определения уровня фермента АсАТ и количества тромбоцитов. Далее вычисляют индекс APRI по формуле (1), при этом уже известен показатель верхнего нормального значения АсАТ у детей раннего возраста, который составляет 43,88 ед/л. В клинических исследованиях методом дискриминантного анализа было установлено, что показатель индекса APRI достоверно коррелирует с высокой степенью фиброза (F3) у детей первого года жизни, которым была проведена гепатобиопсия под наркозом, которая расценивается как диагностическое оперативное вмешательство. Установлено, что показатель индекса APRI у младенцев с циррозом печени (F4) принимал достоверно высокие значения более 2,45. У детей же без цирроза печени индекс APRI имел значения менее 1,5. Изобретение позволяет вычислять индекс APRI у детей раннего возраста, с помощью которого можно неинвазивным способом без проведения биопсии печени максимально точно, доступно и недорого мониторировать прогрессирование фиброза, прогнозировать исходы, своевременно назначать лечение и контролировать результаты терапии. 3 табл., 3 пр., 2 ил.

Способ иммунологического прогнозирования малых повреждений миокарда // 2585391

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего иммунологического прогнозирования возникновения «малых повреждений миокарда» (МПМ) в послеоперационный период после проведения чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ) и стентирования коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС). Для этого путем биохимического тестирования сыворотки крови на тропонин Т, креатинфосфокиназу-МВ, миоглобин: на 1-е сутки после выполнения чрескожных коронарных вмешательств и стентирования коронарных артерий у пациентов со стабильной ИБС определяют клинико-биохимические изменения показателей в сыворотке крови. При уровне содержания тропонина Т 0-0,030 нг/мл, КФК-МВ 0,10-4,94 нг/мл, миоглобина 25,0-72,0 нг/мл прогнозируют благоприятное клиническое течение послеоперационного периода без развития малых повреждений миокарда. При уровне содержания тропонина Т 0,031-0,090 нг/мл, КФК-МВ 4,95-14,82 нг/мл, миоглобина 72,1-216,0 нг/мл прогнозируют неблагоприятное течение послеоперационного периода с развитием малых повреждений миокарда. Использование данного способа позволяет проводить прогнозирование возникновения «малых повреждений миокарда» в 1-е сутки после ЧКВ и стентирование коронарных артерий, что позволяет проводить своевременные лечебные мероприятия. 4 пр., 1 табл.

Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи // 2585960

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи. Сущность способа состоит в том, что из венозной крови осуществляют выделение генетического материала. Проводят полимеразную цепную реакцию синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина. При проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-AC3'. Детекцию нуклеотидной последовательности осуществляют с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями. При выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. При выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия. 2 ил., 1 табл., 2пр.

Способ получения продукта, содержащего иммуноглобулины g,a,m // 2586255

Изобретение относится к медицине и касается способа получения продукта, содержащего иммуноглобулины G, A, M, при котором в качестве исходного сырья используют осадки фракции Кона, которые гомогенизируют с получением суспензии, которую обрабатывают хлороформом, перемешивают, выдерживают, центрифугируют, формируют осадок с последующим удалением балластных фракций дополнительным центрифугированием, выделяют целевой продукт с последующим розливом, замораживанием и высушиванием. Формирование осадка и удаление балластных фракций осуществляют введением ионов меди Cu2+ в концентрации 1,5-15 мкмоль при величине рН 4,5-5,5 и температуре 0-5°C. Изобретение обеспечивает повышение специфической активности выделяемых иммуноглобулинов и расширение сырьевой базы. 9 пр.

Способ диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации // 2586304

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к ЦМВ, содержание в периферической крови глутаматтрансферазы, активность белка теплового шока Hsp в гомогенате плаценты, а на гистологических срезах гистохимически определяют активность глутаматдегидрогеназы. При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении содержания в периферической крови глутаматтрансферазы до 28,3±0,98 Ед/л, снижении активности в гомогенате плаценты белка теплового шока Hsp-70 до 30,5±1,7 нг/мл, снижении глутаматдегидрогеназы на гистологических срезах до 39,7±1,9 усл. ед. нарушается трансаминирование глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты, что создает угрозу нарушения белкового обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. 2 ил.

Способ оценки риска возникновения патологии беременности // 2586412

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки риска развития патологии беременности. Сущность способа состоит в том, что в качестве биомаркеров оценки риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент, регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Вычисляют концентрации. При концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии, а при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0,9 - о риске развития преждевременных родов. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки риска развития патологии беременности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.