Способ выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка при ее атрофических изменениях

Изобретение относится к медицине. Способ характеризуется тем, что в сыворотке крови пациента определяют концентрации пепсиногенов I и II, вычисляют отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II. При величине данного отношения, равной или ниже нижней границы нормы, определяют концентрацию интерферона-γ (IFNγ) в супернатанте пробы крови данного пациента после ее инкубации с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без него, вычисляют индекс влияния (ИВ) РЭА на продукцию IFNγ (ИВ РЭА IFNγ) клетками крови по формуле: ИВ РЭА IFNγ=А/Б, где А - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови после ее инкубации с РЭА, Б - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови без ее инкубации с РЭА, и при величине ИВ РЭА IFNγ, равной или ниже 1,2, делают вывод о наличии у пациента дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени, а при величине ИВ РЭА IFNγ, превышающей 1,2, делают вывод об отсутствии дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка у данного пациента или о наличии у него дисплазии 1-й степени. При использовании для иммуноферментного анализа наборов реагентов «Пепсиноген 1 - ИФА - БЕСТ» и «Пепсиноген 2 - ИФА - БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-Бест» нижнюю границы нормы отношения концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II принимают равной трем. Способ позволяет выявить дисплазию (клеточный атипизм) эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени у пациентов, у которых еще не была обнаружена атрофия слизистой оболочки желудка, т.е. предлагаемый способ дает возможность формировать группы риска пациентов по развитию у них опухолевой патологии желудка и проводить ее профилактику. Способ высокочувствителен, высокоспецифичен, низкоинвазивен. 1 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка.

Дисплазия - нарушение структуры ткани, характеризующееся патологической пролиферацией и атипией эпителия. В слизистой оболочке желудка дисплазия может быть трех степеней: легкая - 1-я степень, умеренная - 2-я степень и тяжелая - 3-я степень

(http://guzood.ru/index.php?what=page&id=10).

Известны способы выявления дисплазии (атипических клеток) эпителия слизистой оболочки желудка при атрофическом гастрите и аденомах, которые относят к предраковым состояниям.

1. Проведение эндоскоцической биопсии, при которой у пациента берут ткань слизистой оболочки желудка, затем биоптат окрашивают и под микроскопом определяют наличие или отсутствие атипичных клеток. Недостатком этого способа является инвазивность, вероятность получения материала из участков без дисплазии, что может привести к ложноотрицательным результатам [Lee SB, Kang HY, Kim KI, Arm DH. The diagnostic accuracy of endoscopic biopsy for gastric dysplasia // J Gastric Cancer. 2010. Vol. 10, №4. - P. 175-181].

2. Определение экспрессии Toll-like рецепторов, являющихся маркерами дисплазии в биоптатах слизистой оболочки желудка. Метод инвазивен и при его осуществлении также имеется вероятность получения материала из участков, не имеющих дисплазии, что может привести к ложноотрицательным результатам [Pimentel-Nunes P1, Afonso L, Lopes Р, Roncon-Albuquerque R Jr, Goncalves N, Henrique R, Moreira-Dias L, Leite-Moreira AF, Dinis-Ribeiro M. Increased expression of toll-like receptors (TLR) 2, 4 and 5 in gastric dysplasia // Pathol Oncol Res. 2011. - Vol. 17, №3. - P. 677-683].

3. Определение провоспалительных цитокинов IL-6, VEGF и C-реактивного белка в сыворотке крови пациентов, по уровню которых можно судить об остроте воспалительного процесса (прототип). Однако этот способ не является специфичным, поскольку многие патологические процессы, в частности воспаления различной локализации, могут приводить к повышению уровней этих цитокинов в сыворотке крови, и многие клетки организма могут быть их источниками: моноциты-макрофаги, лимфоциты, гранулоциты, гепатоциты, кератиноциты, жировые клетки и т.п. [Jang JS, Choi SR, Han SY, Roh MH, Lee JH, Lee SW, Jeung JS, Kim MC, Son YK, Baek YH. Predictive significance of serum IL-6, VEGF, and CRP in gastric adenoma and mucosal carcinoma before endoscopic submucosal dissection // Korean J Gastroenterol. 2009. - Vol. 54, №2. - P. 99-107].

Известно, что информативными маркерами атрофических изменений в теле желудка могут служить уровни пепсиногена I (PG1) и пепсиногена II (PG2) в сыворотке крови и величина отношения уровня пепсиногена I к уровню пепсиногена II [Успенская М.Н., Калиновский В.П., Ткаченко Е.И. Биохимические и иммунологические критерии оценки состояния слизистой оболочки желудка при ее опухолевой и неопухолевой патологии // Вопросы онкологии. - 2007. - Т. 53, №3. - С. 304 - 310; Song H.J., Jang S.J., Yun S.C:, et al. Low Levels of Pepsinogen I and Pepsinogen I/II Ratio are Valuable Serologic Markers for Predicting Extensive Gastric Corpus Atrophy in Patients Undergoing Endoscopic Mucosectomy. // Gut Liver. - 2010. - Vol. 4. - №4. - Р. 475-480].

Пепсиногены I и II - функционально неактивные белки-предшественники фермента пепсина, который образуется из них в присутствии соляной кислоты желудочного сока. У здоровых людей количество секретируемого PG1 в три и более раз выше, чем PG2. Хронический атрофический гастрит обнаруживается у 90% больных раком желудка. Поэтому в настоящее время считают, что своевременная диагностика атрофии слизистой оболочки желудка должна стать первым этапом определения риска развития рака желудка. Чувствительность и специфичность количественного анализа пепсиногенов для диагностики атрофического гастрита (в том числе его ранней бессимптомной формы) составляет более 90%, а достоверность получаемых результатов заметно выше, чем при использовании эндоскопии и гистологии (Молчанова А.Р., Сорокина Н.Н., Рукавишников М.Ю. Диагностическая значимость комплексного лабораторного исследования пепсиногенов // Новости «Вектор-Бест», 2010, №2 (56). http://www.vector-best.ru/publ/nvb/n56.pdf).

Раскрытие изобретения

Предлагаемый способ выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка характеризуется тем, что определяют концентрации пепсиногена I и пепсиногена II в сыворотке крови пациента, вычисляют отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II. При величине данного отношения, равной нижней границе нормы или меньше ее, определяют концентрацию интерферона-γ (IFNγ) в супернатанте пробы крови данного пациента после ее инкубации с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без него, вычисляют индекс влияния (ИВ) РЭА на продукцию IFNγ (ИВ РЭА IFNγ) клетками крови по формуле: ИВ РЭА IFNγ=А/Б, где А - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови после ее инкубации с РЭА, Б - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови без ее инкубации с РЭА, и при величине ИВ РЭА IFNγ, равной 1,2 или ниже 1,2, делают вывод о наличии у пациента дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени, а при величине ИВ РЭА IFNγ, превышающей 1,2, делают вывод об отсутствии дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка у данного пациента или о наличии у него дисплазии 1 степени.

Величина нижней границы нормы отношения концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II может меняться в зависимости от наборов реагентов, используемых при определении концентраций пепсиногена I и пепсиногена II в сыворотке крови. При использовании для иммуноферментного анализа наборов реагентов «Пепсиноген 1 - ИФА - БЕСТ» и «Пепсиноген 2 - ИФА - БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-Бест» нижнюю границы нормы отношения концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II принимают равной трем.

Технические результаты:

1) высокая чувствительность способа выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка: дисплазия 2-й и 3-й степени была выявлена с помощью предлагаемого способа у всех 5 пациентов, у которых после гистологического исследования биоптата была также выявлена дисплазия слизистой оболочки желудка 2-й и 3-й степени - т.е. в 100% случаев;

2) высокая специфичность предлагаемого способа: отсутствие дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка или выявление дисплазии 1-й степени было установлено на основе предлагаемого способа у всех 4-х пациентов, у которых после гистологического исследования биоптата также было установлено либо отсутствие дисплазии, либо дисплазия 1 степени - т.е. в 100% случаев;

3) выявление дисплазии (клеточного атипизма) эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени у пациентов, у которых еще не была обнаружена атрофия эпителия слизистой оболочки желудка, т.е. предлагаемый способ дает возможность формировать группы риска среди пациентов по развитию у них предрака и/или рака желудка и проводить у них профилактику опухолевой патологии желудка;

4) низкая инвазивность способа, обусловленная взятием крови из пальца или вены пациента (а не биоптата из желудка);

5) отличное качество модели (диагностического способа), определенное с помощью ROC-анализа с расчетом показателя AUC (Area Under Curve) при помощи метода трапеций.

Осуществление способа

Концентрации пепсиногенов I и II в сыворотке крови определяют методом иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов «Пепсиноген 1 - ИФА - БЕСТ» и «Пепсиноген 2 - ИФА - БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-Бест» согласно методике, приложенной к указанным наборам, и выражают в мкг/л. Затем вычисляют отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II. У пациентов, у которых данное отношение равно 3-м или ниже 3-х, проводят вычисление ИВ РЭА на продукцию клетками крови IFNγ согласно приведенной ниже методике.

Цельную кровь, взятую из вены пациента в количестве 1 мл, помещают в стерильный флакон с 4 мл среды (стерильная питательная среда ДМЕМ), содержащей гепарин 2,5 МЕ/мл и гентамицин 100 мкг/мл. Аккуратно перемешивают содержимое, флакона, затем из него в стерильных условиях забирают две пробы. Одну пробу объемом 0,98 мл помещают в стерильный флакон, содержащий 0,02 мл РЭА (Canceroembryonic Antigen Human Colon Adenocarcinoma Cell Line) производства Calbiochem, Германия, концентрация РЭА составляет 2 мкг/мл.

Другую пробу объемом 0,98 мл помещают также в стерильный флакон, содержащий 0,02 мл питательной среды ДМЕМ (внутренний контроль без РЭА - определение спонтанной продукции IFNγ). Концентрация клеток в пробах и объемы проб в обоих стерильных флаконах одинаковы.

Содержимое флаконов аккуратно перемешивают и помещают в термостат при 37°C на 24 часа. В течение первого часа инкубации содержимое флаконов аккуратно перемешивают 1 раз. После инкубации осаждают клетки крови путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 10 минут и отбирают пробы из супернатанта крови, инкубированной с РЭА (продукция IFNγ под влиянием РЭА) и из супернатанта крови, инкубированной без РЭА (спонтанная продукция IFNy). С помощью стандартной тест-системы для определения IFNγ твердофазным иммуноферментным анализом производства ЗАО «Вектор-Бэст» определяют согласно приложенной инструкции концентрацию IFNγ в обеих пробах. ИВ РЭА IFNγ клетками крови вычисляют по формуле: ИВ РЭА=А/Б, где А - концентрация IFNγ в пробе супернатанта крови, после ее инкубации с РЭА, Б - концентрация IFNγ в пробе супернатанта крови без ее инкубации с РЭА.

Обоснование способа

Было обследовано 24 пациента. Пациенты были взяты в исследование на основании жалоб и в связи с подозрением на развитие у них гастропатологии. Всем пациентам была проведена фиброгастроскопия и гистологическое исследование биоптата, на основании чего был выставлен диагноз, который сравнивался с результатами исследования, полученными с помощью предлагаемого способа.

У 15 пациентов отношение PG1/PG2 было больше 3-х. У этих пациентов при эндоскопии не было обнаружено атрофии слизистой оболочки желудка.

У остальных 9 (из 24) пациентов отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II оказалось ниже 3-х или равным 3-м. В данной группе пациентов ИВ РЭА IFNγ от 0 до 1,20 был обнаружен у 5-ти человек, т.е. у них согласно предлагаемому способу была выявлена дисплазия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени. У этих 5-ти пациентов при эндоскопическом исследовании желудка и гистологическом исследовании биоптатов также была выявлена дисплазия эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени, т.е. выявленная по предлагаемому способу дисплазия 2-й или 3-й степени в 100% случаев подтверждалась патогистологическим исследованием.

У остальных 4-х из 9 пациентов ИВ РЭА IFNγ был выше 1,20. У этих 4-х пациентов, т.е. в 100% случаев, в эпителии слизистой оболочки желудка дисплазии не было выявлено либо была выявлена дисплазия 1 степени. Наличие/отсутствие дисцлазии эпителия слизистой оболочки желудка контролировали путем патогистологического исследования биоптатов.

Оценка статистической значимости различий проводилась с использованием точного метода Фишера, р=0,008.

Для получения численного значения клинической значимости предлагаемого способа выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка использовали ROC-анализ с определением показателя AUC (Area Under Curve), который рассчитывали при помощи метода трапеций. О качестве теста судят по экспертной шкале для значений AUC: 0,9-1,0 - отличное качество модели, 0,8-0,9 - очень хорошее качество модели, 0,7-0,8 - хорошее качество модели, 0,6-0,7 - среднее качество модели, 0,5-0,6 - неудовлетворительное качество модели.

Предлагаемый способ выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка показал отличное качество модели.

Клинические примеры

1. Больная Д., 72 года, у пациентки были признаки патологии желудочно-кишечного тракта.

На основании эндоскопического и гистологического исследований ей был выставлен диагноз - хронический атрофический гастрит. Заключение патоморфолога: дисплазия 0 баллов (нет), согласно действующей классификации ВОЗ-отсутствие интраэпителиальной неоплазии/дисплазии.

При обследовании пациентки в соответствии с предлагаемым способом было обнаружено, что отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II у нее равно 1,4, а ИВ РЭА IFNγ равно 5, что дает возможность сделать вывод об отсутствии у данной пациентки дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка или о наличии у нее дисплазии 1 степени.

2. Б-ная М., 61 год, признаки патологии желудочно-кишечного тракта. На основании эндоскопического и гистологического исследований ей был выставлен диагноз - хронический атрофический гастрит, аденома желудка. Заключение патоморфолога: дисплазия 2-й степени, согласно действующей классификаций ВОЗ-интраэпителиальная неоплазия высокой степени/дисплазия.

При обследовании пациентки в соответствии с предлагаемым способом было обнаружено, что отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II у нее равно 1,7, а ИВ РЭА IFNγ равно 1, что приводит к выводу о наличии у пациентки дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени.

1. Способ выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка, характеризующийся тем, что определяют концентрации пепсиногена I и пепсиногена II в сыворотке крови пациента, вычисляют отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II; при величине данного отношения, равной нижней границе нормы или меньше ее, определяют концентрацию интерферона-γ (IFNγ) в супернатанте пробы крови данного пациента после ее инкубации с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без него, вычисляют индекс влияния (ИВ) РЭА на продукцию IFNγ (ИВ РЭА IFNγ) клетками крови по формуле: ИВ РЭА IFNγ=А/Б, где А - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови после ее инкубации с РЭА, Б - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови без ее инкубации с РЭА, и при величине ИВ РЭА IFNγ, равной или ниже 1,2, делают вывод о наличии у пациента дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени, а при величине ИВ РЭА IFNγ, превышающей 1,2, делают вывод об отсутствии дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка у данного пациента или о наличии у него дисплазии 1-й степени.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрации пепсиногена I и пепсиногена II определяют методом иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов «Пепсиноген 1 - ИФА - БЕСТ» и «Пепсиноген 2 - ИФА - БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-Бест», а нижнюю границу нормы для отношения концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II принимают равной 3-м.



 

Похожие патенты:
Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС).
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования формирования окклюзионной постгеморрагической гидроцефалии у недоношенных детей с экстремально низкой массой тела при рождении.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака у больных с узловыми формами заболеваний щитовидной железы.
Изобретение относится к области биотехнологии и экологии, в частности к тест-системам для определения содержания микополисахаридов и их производных, имеющих в своем составе участки, аналогичные синтетическому линейному нона-β-(1→3)-D-глюкозиду в окружающей среде, в том числе в пыли помещений, и может быть использовано для оценки пирогенности объектов окружающей среды при проведении экологического мониторинга жилых и производственных помещений с целью количественного определения пирогенной нагрузки пыли окружающей среды при помощи ингибиторного иммуноферментного анализа на твердой фазе.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для дооперационного прогноза осложненного течения раннего посттрансплантационного периода.

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных, включающий определение наличия антител к антигенам семи серогрупп L.hebdomadis, L.pomona, L.tarassovi, L.grippotyphosa, L.canicola, L.sejroe и L.icterohaemorrhagiae в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве антигена применяют смешанные в равных количествах антигенные белки из лептоспир трех серогрупп - L.tarassovi, L.grippotyphosa и L.hebdomadis.
Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и может быть использовано для прогнозирования тяжести течения послеоперационного периода у больных калькулезным холециститом.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для серологической диагностики вирусных желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа, преимущественно рота-, коронавирусного энтеритов, вирусной диареи крупного рогатого скота.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и аллергологии, и может быть использовано для прогнозирования развития атопических заболеваний у новорожденных.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики первичного и вторичного иммунного ответа на вирус краснухи. Разделение типов иммунного ответа на первичный и вторичный осуществляют на основании рассчитанных с помощью ROC-анализа пороговых критериев для IgG1 и IgG3 субклассов по результатам определения количества специфических антител. Определяют субклассы IgG1 и IgG3 с помощью ИФА-анализа. При получении пороговых значений для IgG1<62,76% и для IgG3>18,63% от общего количества противокраснушных IgG-антител диагностируют первичный иммунный ответ. При получении пороговых значений для IgG1>62,76%, и для IgG3<18,63% от общего количества противокраснушных IgG-антител диагностируют вторичный иммунный ответ. Использование данного способа позволяет провести дифференциальную диагностику первичного и вторичного иммунного ответа на вирусы краснухи, позволяющего независимо от способа получения этого иммунитета (вакцинация или инфекция) четко различать первый или повторный контакт организма с вирусом краснухи, что способствует выявлению среди лиц с неизвестным прививочным анамнезом группу первичных больных краснухой. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, преимущественно к фтизиатрии, и может быть использовано при оценке активности туберкулезной инфекции у детей и подростков. Для этого в пробы цельной крови пациента вносят специфические антигены: ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6, гибридного белка CFP10-ESAT-6. Определяют уровень ИФН-γ в пробах через 72 часа после внесения в кровь специфических антигенов. При увеличении уровня ИФН-γ - положительной реакции на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и отрицательной - отсутствие изменения уровня ИФН-γ - на гибрид CFP10-ESAT-6 диагностируют латентную туберкулезную инфекцию. При положительной на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и гибрид CFP10-ESAT-6 - активную туберкулезную инфекцию. При положительной на ППД-Л и отрицательной одновременно на Rv2660c, ESAT-6, гибрид CFP10-ESAT-6 - поствакцинальную аллергию. Использование данного способа позволяет проводить дифференциальную диагностику латентной и активной туберкулезной инфекции у детей, что способствует ранней постановке диагноза и назначению специфического лечения. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской иммунологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики первичного и вторичного иммунного ответа на вирус эпидемического паротита. Проводят разделение типов иммунного ответа на первичный и вторичный на основании рассчитанных с помощью ROC-анализа пороговых критериев для IgG1 и IgG3 субклассов по результатам определения количества специфических противопаротитных антител, принадлежащих к субклассам IgG1 и IgG3 с помощью ИФА-анализа. При получении пороговых значений для IgG1<55% и для IgG3>37,3% от общего количества противопаротитных IgG-антител диагностируют первичный иммунный ответ. При получении пороговых значений для IgG1>55% и для IgG3<37,3% от общего количества противопаротитных IgG-антител диагностируют вторичный иммунный ответ. Использование данного способа позволяет проводить дифференциальную диагностику первичного и вторичного иммунного ответа на вирус эпидемического паротита, что в свою очередь позволит выявить группу первичных больных эпидемическим паротитом с угрозой осложнения орхитом. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к профессиональной патологии и пульмонологии, и может быть использовано для диагностики профессиональной хронической обструктивной болезни легких, сформировавшейся в условиях действия токсических промаэрозолей. Для этого в сыворотке крови больного ХОБЛ, экспонированного к токсическим промаэрозолям с превышением ПДК токсических веществ в воздухе рабочей зоны в 1,5 раза и более, со стажем работы в условиях действия токсических промаэрозолей 17 лет и более, методом твердофазного иммуноферментного анализа сэндвич-типа (ELISA) определяют концентрацию интерлейкина 1β, трансформирущего фактора роста β, фактора роста эндотелия сосудов. Затем вычисляют значение регрессионной функции по математической формуле 0,027⋅IL1β+0,00009⋅TGFβ-0,0003⋅VEGF, где IL1β - концентрация интерлейкина 1β сыворотки, пг/мл, TGFβ - концентрация трансформирующего фактора роста β сыворотки, пг/мл, VEGF - концентрация фактора роста эндотелия сосудов сыворотки, пг/мл, и при результате, равном или превышающем 0,2, делают вывод о том, что в данном случае ХОБЛ сформировалась при действии токсических промаэрозолей. Изобретение позволяет диагностировать случаи профессиональной ХОБЛ, сформировавшейся при действии токсического газа, что улучшит качество лечения этой группы больных за счет индивидуализации терапевтической стратегии с учетом характеристик фенотипа, а также повышает объективность экспертизы связи заболевания с профессией. 1 ил., 2 табл., 5 пр.
Наверх