Штамм клубеньковых бактерий sinorhizobium fredii для изготовления бактериального удобрения под сою

Авторы патента:

C12R1/01 - Схема кодирования для подклассов C12C-C12Q или C12S, относящаяся к микроорганизмам

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

C05F11/08 - органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и т.п.

Владельцы патента RU 2586490:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сои" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения. Штамм клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii ББ-55, обладающий устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры, депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ В-2630D. Изобретение позволяет повысить урожай семян сои. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения для сои.

Наиболее близким к изобретению является штамм Sinorhizobium fredii КБ-11 ВКМ B-2457D, используемый для приготовления соевого нитрагина (Патент РФ на изобретение №2413707 от 10.03.11. Прототип).

Недостатком этого штамма является то, что он не устойчив к высоким дозам аммиачной селитры, что ограничивает его применение в производственных условиях.

Задачей изобретения является получение штамма, обладающего устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры.

Задача решается новым штаммом клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii ББ-55, который выделен в 1995 году из клубеньков дикорастущей сои, произрастающей на луговой черноземовидной почве города Благовещенска Амурской области.

Полученный штамм депонирован и хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К. Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером ВКМ B-2630D и коллекции ФГБНУ Всероссийского научно-исследовательского института сои под номером ББ-55.

Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки

В молодом возрасте бактерии штамма Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D подвижные, представляют собой удлиненные палочки размером (2,3…2,5)×0,4 мк. Грамотрицательные. Быстрорастущая культура. В чашках Петри на маннитно-соевой твердой питательной среде указанные бактерии вырастают на 2-е сутки после посева, образуя выпуклые, прозрачные, слизистые колонии диаметром 1,0…2,1 мм. Бактерии Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D хорошо растут и на других питательных средах:

Мясо-пептонный агар, г/л: агар сухой питательный - 20,0; агар-агар - 10,0.

Среда Норриса, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; MgSO₄ - 0,8; NaCl - 0,2; FeCl₃ - 0,01; дрожжевой экстракт - 2,0; маннит - 10,0.

Соевая среда с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с глюкозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; глюкоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с сахарозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; сахароза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с мальтозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄- 0,1; соль молибдена - следы; мальтоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с лактозой, г/л: K₂НРO₄ - 0,5; KН₂РO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; лактоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Навеску соевой муки получают путем размола пророщенных соевых семян, заливают 1 литром воды и кипятят в течение 30 минут. В фильтрат, доведенный до 1 литра, вносят соли.

При выращивании штамма Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D в пробирках на всех вышеперечисленных средах (при температуре 28°С в течение 72 часов) отмечен обильный рост штриха гелеобразной прозрачной консистенции. При длительном хранении чистой культуры в холодильнике при температуре 4°С консистенция штриха штамма Sinorhizobium fredii В KMВ-2630D не изменяется.

Физиолого-биохимические признаки

Аэроб.

Температурный диапазон роста 27-39°С. Оптимальная температура роста 27-28°С.

Оптимум pH 7,0; диапазон рН 6,0-8,0.

Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает и растет на сахарозе глюкозе, мальтозе, лактозе, манните с образованием продуктов кислотного характера.

Осмоустойчив, дает хороший рост на средах с концентрацией NaCl 0,4µ. Признаки штамма устойчивые. Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 месяцев. Хранится в пробирках на маннитно-соевом агаре при температуре 4-5°С.

Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D отличается от штамма-прототипа (штамм Sinorhizobium fredii КБ-11 ВКМ B-2457D) устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры (дает умеренный рост на маннитно-соевой твердой питательной среде с содержанием NH₄NO₃ 40 г/л).

Изобретение поясняется следующим конкретным примером использования штамма Sinorhizobium fredii ВКМ B-2630D.

Пример

Посевной материал получают выращиванием штамма в пробирках с агаризованной питательной соевой средой с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

После посева пробирки с бактериальной культурой выставляют в термостаты с температурой 27-28°C на 5 суток. За это время в пробирках на косяке плотной питательной среды отмечается обильное нарастание бактериальной массы испытываемого штамма.

Для инокуляции семян в день посева сои готовят бактериально-молибденовую смесь. Для этого в пробирки со штрихом испытываемого штамма клубеньковых бактерий сои вносят по 2,5 мл заранее приготовленного 1,25% раствора молибдена (25 г/л молибдата аммония). Штрих с косяка питательной среды смывают раствором молибдена. Путем встряхивания пробирки получают однородную бактериально-молибденовую смесь, которой сразу же обрабатывают семена сои. Полученный объем суспензии (2,5 мл) используют для предпосевной обработки 250 г семян сои. После нанесения суспензии семена сои тщательно перемешивают, подсушивают в тени и высевают в подготовленную почву.

В таблице приводятся данные об эффективности штамма ВКМ В-2630D в зависимости от условий года, полученные в результате проведения полевых экспериментов. Опыты проводили на луговых черноземовидных почвах, с сортом сои Гармония. Бактеризованные семена высевают в день обработки. Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ В-2630D по сравнению с контролем (фон-естественная инокуляция) стабильно повышал урожайность семян сои в течение четырех лет испытаний, в среднем на 3,0 ц/га.

Эффективность штамма Sinorhizobium fredii ВКМ В-2630D

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Sinorhizobium fredii ВКМ В-2630D для изготовления бактериального удобрения под сою.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Rhodococcus wratislaviensis Ch625, обладающий способностью эффективно разлагать комплекс хлорорганических соединений: полихлорированные бифенилы, гексахлорбензол, γ-гексахлорциклогексан (линдан), дихлордифенилтрихлорэтан, депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им.

Планктонный штамм chlorella kessleri для предотвращения "цветения" водоёмов синезелеными водорослями // 2585523

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм одноклеточной зеленой водоросли Chlorella kessleri ARW депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Al-11 и может быть использован для предотвращения «цветения» водоемов синезелеными водорослями.

Способ и технологическая линия производства низина // 2585521

Группа изобретений относится к области производства низина. Предложен способ и технологическая линия микробиологического производства низина.

Способ получения компактина // 2585234

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения компактина, в котором осуществляют культивирование штамма Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 на питательной среде.

Промышленный способ получения компактина // 2585233

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен промышленный способ получения компактина.

Пробиотическая композиция для здоровья полости рта // 2584610

Предложены штамм Lactobacillus plantarum СЕСТ 7481 и штамм Lactobacillus brevis СЕСТ 7480. Указанные штаммы имеют способность к выживанию в стрессовых условиях в полости рта, способность к адгезии к тканям полости рта, способность к формированию агрегатов и способность к ингибированию патогенов в полости рта.

Штамм гриба laetiporus sulphureus - продуцент биологически активных веществ // 2584602

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штаммам грибам-продуцентам биологически активных веществ. Штамм Laetiporus sulphureus 3Х, обладающий широким спектром различных биологически активных веществ, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F-1188 и может быть использован при производстве биологически активных добавок.

Способ выделения протеолитического фермента террилитина // 2584601

Изобретение относится к биотехнологии и медицинской промышленности. Предложен способ получения террилитина.

Штамм l.bulgaricus, способный ингибировать адгезию штаммов н.pylori к эпителиальным клеткам // 2584600

Предложен штамм Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L.

Рекомбинантная плазмидная днк pet22b(+)/slurp-2, кодирующая белок slurp-2, и штамм бактерий escherichia coli bl21(de3) pet22b(+)/slurp-2- продуцент белка slurp-2 человека // 2583307

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения белка SLURP-2 человека.

Штамм rhodococcus wratislaviensis - деструктор устойчивых токсичных хлорорганических соединений // 2585537

Пробиотическая композиция для здоровья полости рта // 2584610

Штамм l.bulgaricus, способный ингибировать адгезию штаммов н.pylori к эпителиальным клеткам // 2584600

Предложен штамм Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L.

Способ с применением анаммокс-бактерий на носителях биопленки для удаления аммония из потока сточных вод // 2584574

Группа изобретений относится к области обработки сточных вод. Предложен способ биологической обработки сточных вод (варианты) и способ с интегрированной фиксированной пленкой активного ила для удаления аммония из сточных вод.

Штамм риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки вида rickettsia heilongjiangensis, используемый для идентификации риккетсий и получения диагностических препаратов // 2583286

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма риккетсий "Приморье - 25/81". Охарактеризованный штамм является представителем вида Rickettsia heilongjiangensis.

Способ получения сополимеров микробного происхождения, образованных мономерами 3-гидроксимасляной и 4-гидроксимасляной кислот // 2582255

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для получения биоразрушаемых сополимеров 3-гидроксимасляной и 4-гидроксимасляной кислот [П(3ГБ/4ГБ)], обладающих свойствами эластомеров, перспективных для различных сфер применения: в медицине, в фармакологии.

Способ усиления адгезии бактерий к вагинальным эпителиоцитам // 2580247

Изобретение относится к микробиологии. Предлагается способ усиления бактериальной адгезии к вагинальным эпителиоцитам.

Противовирусное средство на основе нуклеазы бактерий рода serratia // 2580242

Изобретение касается средства, обладающего противовирусной активностью относительно вирусов гриппа, осповакцины (ВОВ), вируса оспы мышей (ВОМ) и вируса герпеса 2-го типа (ВПГ-2) Представлено средство на основе нуклеазы бактерий рода Serratia.

Питательная среда для выделения legionella pneumophila // 2580227

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Питательная среда для выделения Legionella pneumophila содержит автолизат селезенки КРС, агар микробиологический, уголь активированный, калия фосфат однозамещенный, калия фосфат двузамещенный, мезоинозит, L-цистеин, соль Мора, полимиксин, ванкомицин, амфотерицин и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Штамм lactobacillus helveticus вкпм в-11176, полученный на доступных питательных средах // 2580052

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus М-16, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11176 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.

Способ получения композиции для выращивания растений // 2576197

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ получения композиции для выращивания растений включает раздельную активизацию штаммов биомассабактерий Lactobacillus casei, Lactococcus lactis, Rhodopseudomonas palustris и Saccharomices cerevisiae, глубинное культивирование в ферментере консорциума штаммов биомассабактерий Lactobacillus casei, Lactococcus lactis, Rhodopseudomonas palustris и Saccharomices cerevisiae в культуральной жидкости, в которую вводится патока сахарной свеклы в качестве питательной среды размножения бактерий в массовой доле преимущественно 1,5% от объема культуральной жидкости с наличием посторонней микрофлоры не более 5%, культуры вносятся в культуральную жидкость в соотношении 1:100 и культивируются 3-5 дней при температуре 30 градусов до достижения значений рН 5,5-8,5, затем в подготовленный микробиологический препарат добавляют взятый в виде размолотого порошка в массовой доле около 10% - цеолиты кристаллические NaA, NaX, где Na - преобладающий в данном цеолите металл, а А и X - тип кристаллической решетки, полученная смесь далее ферментируется в течение 5 суток в ферментере при температуре 32-35 градусов Цельсия и постоянном перемешивании не менее чем 60 дисками диаметром 5 см, изготовленными из керамики, обработанной и выдержанной в микробиологическом растворе в течение 2-3 лет с последующим обжигом, собранными на металлические стрежни по 10 штук на каждом, которые прикреплены в виде колонн к крышке ферментера.