Способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и описывает способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока. Способ характеризуется тем, что при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°C, для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы, в полученной суспензии определяют CD маркеры. Способ обеспечивает высокую чувствительность и специфичность определения популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы. Объективность интерпретирования результатов позволяет использовать заявленный способ для разработки более эффективных методов профилактики и лечения патологии органа зрения, в которых активно участвуют соединительно-тканные структуры глаза. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов для определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Как показали углубленные клинические исследования последних лет, соединительно-тканные структуры глазного яблока играют ведущую роль в патогенезе практически при всех патологических процессов органа зрения - аномалии развития, дистрофии, новообразования, повреждения и воспаления.

Для прижизненного исследования фиброзной оболочки глазного яблока А. Arciniegas с соавт. (1986), G.R. Bell (1993) и Е.Н. Иомдина (1992) предлагают использовать механико-математическую модель на основе анализа кривых зависимости напряжение-деформация, полученных для образцов изолированной и миопической склеры.

Известен способ оценки биомеханических свойств склеры определения отношения скорости распространения в склере акустических поверхностных волн в середине верхнего века в горизонтальном и вертикальном направлении. При его отрицательном значении прогнозируют прогрессирование течения близорукости (патент RU 2068654 опубл. 10.11.1996).

Недостатком известного способа является низкая информативность, не позволяющая прижизненно оценить морфофункциональные характеристики соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Известен инструментальный метод, в котором в качестве прогностического критерия используется величина акустической плотности экваториальных отделов склеры, определяемого с помощью ультразвукового В-сканирования плотности экваториальных отделов склеры в стандартизированных условиях (патент RU 2055522, опубл. 10.03.1996).

Данная методика также не обладает достаточными возможностями для доклинической диагностики дистрофических изменений соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Наиболее близким к заявляемому является способ использования в качестве объекта для прижизненного изучения патогенеза прогрессирующей миопии тенонову капсулу глаза - соединительно-тканную оболочку, прилежащую к склере, образцы которой получают во время различных хирургических вмешательств (Иомдина Е.Н., Тарутта Е.П., Игнатьева Н.Ю., Костанян И.А., Минкевич Н.И., Какуев Д.Л., Радченко В.В., Шехтер А.Б., Данилов Н.А., Кварацхелия Н.Г., Чернышева С.Г. Фундаментальные исследования биохимических и ультраструктурных механизмов патогенеза прогрессирующей миопии // Российский офтальмологический журнал. - 2008. - Том 1, №3. - С. 7-12). Изучались образцы теноновой оболочки, взятые во время склероукрепляющих вмешательств с последующим применением комплекса фундаментальных методов - дифференциальной сканирующей калометрии (ДСК), трансмиссонной электронной микроскопии, электрофореза в агарозном геле, вестерн-блот анализа, иммуногистохимии, биохимии.

Недостатком этого метода является трудоемкость, длительность его проведения, односторонность и вследствие этого низкая информативность и точность оценки клеточного состава теноновой капсулы (анализ только фибробластов), что не обеспечивает учета полноты анализа популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и их активационно-пролиферативного потенциала.

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в разработке способа прижизненного цитометрического определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока, повышающего точность и объективность результатов исследования, универсальность применения и стандартность проводимой оценки.

Указанный результат достигается тем, что в качестве способа прижизненной оценки морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока предлагается метод проточной цитометрии теноновой капсулы. А предлагаемый способ включает в себя использование проточного цитофлюориметра и многоцветного цитометрического анализа, которые дают возможность индентификации популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и определения их активационно-пролиферативных характеристик.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Забор теноновой капсулы производится во время оперативного вмешательства при проведении склероукрепляющих операций. Затем теноновую капсулу помещают в криопробирки 2 мл (Costar) с раствором для замораживания (эмбриональная телячья сыворотка 90% + диметилсульфоксида 10% + криопротектор (90% Fetal Bovine Serum + 10% DMSO)). Замораживание производят в парах жидкого азота до -180°C со скоростью заморозки 1°C в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания). Охлажденные криопробирки с материалом помещают в жидкий азот (t-180°C) в сосуды Дюара (СДС-35М ОАО «НПО ГЕЛИЙМАШ» г. Москва). Для проведения проточной цитометрии замороженный материал подвергают медленной разморозке в парах жидкого азота со скоростью +1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания) для сохранения высокой жизнеспособности клеток. Размороженный материал переносят в стерильную стеклянную центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%. Затем измельчают клеточные элементы в Medimashine (Becton Dichinson, Cod 79300, maximal volume 1 ml, нож BD medicors) до получения гомогенной клеточной суспензии. Осаждают строму в центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут. Надосадок, содержащий клетки теноновой капсулы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки. Супернатант удаляют, а к осадку, содержащему клетки теноновой капсулы, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и рессуспендируют. В полученной суспензии определяют фенотип клеток с использованием моноклональных антител (CD) согласно международному протоколу.

Предлагаемый способ апробирован при заборе теноновой капсулы у 5 пациентов с эмметропической рефракцией. В таблице приведены усредненные результаты содержания популяций и субпопуляций клеток полученных при исследовании фрагментов теноновой капсулы.

Выбор панели анализируемых CD-маркеров основывался на результатах проведенного аналитического обзора и анализа современной научно-технической, нормативной, методической литературы, затрагивающей раздел структурной организации клеток соединительной ткани организма человека, в частности теноновой капсулы глазного яблока.

Установлено, что тенонова капсула содержит следующие популяции и субпопуляции клеток:

1. кератиноциты с фенотипами CD49f+ и CD49f+HLADR+;

2. фибробласты (фиброциты) с фенотипами CD45-CD14-CD44+ и CD45-CD14-CD44+CD80+;

3. клетки Лангенгарса с фенотипами CD207+; CD207+CD80-HLADR+; CD207+CD80+HLADR- и CD207+CD80+HLADR+;

4. эндотелиальные клетки с фенотипами CD146+; CD146+CD54-HLADR+; CD 146+CD54+HLADR-; CD 146+CD54+HLADR+ и CD146+CD34+;

5. тучные клетки с фенотипами CD249+и CD249+CD63+;

6. моноциты (макрофаги) с фенотипами CD45+CD14+ и CD45+CD14+HLADR+.

Таким образом, современный метод проточной цитометрии и многоцветный цитометрический анализ позволил одновременно проанализировать коллосальное количество различных клеток теноновой капсулы, локализовать отдельные их группы, классы, популяции, субклассы, субпопуляции и оценить их функциональное состояние с использованием моноклональных антител (CD-маркеров). В конечном итоге объективность интерпретации полученных результатов анализа содержания популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы позволяет использовать заявленный способ для выявления значимых патогенетических механизмов возникновения патологии органа зрения, в которых активно участвуют соединительно-тканные структуры глаза, а значит разработать более эффективные методы профилактики данных заболеваний и добиться более высоких результатов в их лечении.

Заявителю неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, обеспечивающие в совокупности достижение заданного результата, поэтому авторы считают, что заявляемый способ соответствует критериям: новизны, изобретательского уровня и промышленной применимости.

Заявляемое способ может найти широкое применение в медицине, офтальмологии, аллергологии и иммунологии, общей и клинической фармакологии.

Способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока, заключающийся в исследовании теноновой капсулы пациента, отличающийся тем, что при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°C, для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы, в полученной суспензии определяют CD маркеры.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ повышения антагонистической активности моноклонального антитела, содержащего константную область IgG1 человека и направленного против специфической молекулы-мишени, включающий модификацию аминокислотной последовательности шарнирной области.
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской диагностике, и описывает способ прогнозирования выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы и устройства для определения количества процессированного полипептида нейротоксина в растворе путем вычитания количества частично процессированного и непроцессированного нейротоксина из количества общего нейротоксина.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и может быть использовано в качестве дифференциальной дооперационной диагностики типов быстрого роста лейомиомы матки.

Изобретение относится к иммунологическим методам анализа и может быть использовано для массового скрининга врожденных заболеваний у новорожденных. Для этого в лунке микропланшета иммобилизуют первые иммуноспецифические компоненты к тиротропину, иммунореактивному трипсину, тироксину и 17α-ОН-прогестерону в виде дискретных микрообластей, размещают в лунке бумажный диск образца сухой крови, экстрагируют детектируемые маркеры из сухого пятна крови путем добавления в лунку буфера, содержащего даназол и 8-анилинонафталин-1-сульфоновую кислоту и антитела к 17α-ОН-прогестерону, которые связывают с экстрагируемым 17α-ОН-прогестероном для одновременного образования иммунного комплекса с антивидовыми антителами в соответствующей микрообласти, затем добавляют в лунку микропланшета реакционный раствор вторых иммуноспецифических компонентов, содержащий смесь биотинилированных антител к тиротропину, иммунореактивному трипсину и тироксину и конъюгат 17α-ОН-прогестерон-белок-биотин для получения иммунных меченных биотином комплексов в дискретных микрообластях, удаляют бумажный диск сухого образца крови, добавляют конъюгат стрептавидина с Pt-копропорфирином для образования фосфоресцирующих биотин-стрептавидиновых комплексов в микрообластях на дне лунки микропланшета и детектируют эмиссию фосфоресценции метки, последовательно сканируя дискретные микрообласти сфокусированным лазерным пучком.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской неврологии. Способ включает выявление клинических признаков заболевания, определение в периферической крови ребенка уровня эритроцитов с микроядрами.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований костей верхней и нижней челюстей по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе.

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и может быть использовано при диагностике вируса герпеса 6 типа. Способ определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа заключается в том, что сыворотку вносят в лунки двух стрипов иммобилизованного антигеном вируса герпеса 6 типа планшета, одновременно инкубируют в течение 60 минут, после чего ячейки первого стрипа обрабатывают водным раствором 4 М мочевины, затем оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат моноклональных антител к IgG антителам человека, стрипы инкубируют в течение 40 минут, после промывания окрашивают 0,05% водным раствором тетраметилбензидина и выдерживают 20-25 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, после чего определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и на основании полученных данных проводят расчет индекса авидности. Использование способа дает возможность эффективно определять индекс авидности IgG антител к вирусу герпеса 6 типа, что позволяет устанавливать длительность и стадию инфекционного процесса. 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к онкологии, иммунологии и предназначено для диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты. Способ диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты включает определение содержания лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+ и цитокина IL-1β в периферической венозной крови, определение соотношения концентрации IL-1β к сумме абсолютного содержания активированных лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+, расчет диагностического индекса (ДИ): ДИ=1L-1β/Σ (CD25+CD10+CD71+HLADR+) и при величине ДИ, равной 20,04 и более, диагностируется риск формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено гуманизированное антитело и его антиген-связывающий фрагмент, специфически связывающиеся с рецептором фолиевой кислоты 1 (FOLR1) человека и охарактеризованные аминокислотными последовательностями участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR). Также предложен способ получения гуманизированного антитела по изобретению; иммуноконъюгаты с цитотоксическим средством; фармацевтические композиции; диагностическая композиция; наборы; способы ингибирования роста опухоли и способ лечения рака. Рассмотрены выделенные полинуклеотиды, кодирующие вариабельные домены антитела по изобретению; содержащие их векторы и клетки-хозяева. Антитело по изобретению является гуманизированной формой мышиного антитела Mov19 и может найти дальнейшее применение в терапии заболеваний, характеризующихся повышенной экспрессией FOLR1. 20 н. и 49 з.п. ф-лы, 19 ил., 4 табл., 19 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования аллергических реакций при использования дентальных имплантатов на основе сплавов оксида титана в реконструктивной хирургии. Предлагаемый способ персонифицированного подбора пациенту дентального имплантата на основе сплавов оксида титана осуществляют в условиях in vitro с помощью тест-системы активации базофилов для оценки аллергической реакции на исследуемый материал методом подсчета разрушенных базофилов в крови пациента. Предварительно выделяют наночастицы с поверхности дентального имплантата путем инкубирования в воде при температуре 37,2°C в течение 5 дней, после чего на полученный супернатант воздействуют ультразвуком 35 кГц в течение 10-20 минут, затем добавляют венозную кровь пациента и моноклональные антитела к молекулам CD203 и CD294, повторно инкубируют в течение 15 минут и с помощью тест-системы методом проточной цитофлуориметрии фиксируют активацию базофилов либо ее отсутствие. Исходя из полученных результатов рассчитывают индекс активации базофилов, и в случае получения отношения количества позитивных базофилов исследуемого образца к количеству негативных базофилов контрольного образца меньше 1 или равного 1 рекомендуют данный имплантат к использованию. Использование способа позволяет прогнозировать и исключить возможные аллергические реакции со стороны иммунной системы пациента в послеоперационном периоде и, соответственно, осуществить индивидуальный подбор различных сплавов металлов и профилактику воспалительных осложнений в отсроченном периоде. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ отбора клетки, экспрессирующей биспецифическое антитела, который включает следующие этапы: создание популяции эукариотических клеток путем трансдукции популяцией лентивирусных частиц, где каждая лентивирусная частица содержит бицистронную экспрессионную кассету, кодирующую секретируемое биспецифическое антитело, которая содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен первой тяжелой цепи в локусе «замок» или «ключ» до EV71-IRES, и нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен второй тяжелой цепи в соответствующем другом локусе после EV71-IRES, где вариабельный домен первой тяжелой цепи связывается с первым антигеном, а второй вариабельный домен связывается со вторым антигеном, где первый антиген и второй антиген могут быть одинаковыми или разными, где эукариотическая клетка экспрессирует общую легкую цепь, и отбор из популяции эукариотических клеток клетки, где клетка выбрана по способности антитела, представленного на ее поверхности, специфически связываться с указанными первым и вторым антигенами. 10 з.п. ф-лы, 18 ил., 1 табл., 13 пр.

Группа изобретений относится к медицине и иммунологии и может быть использована для выделения, обогащения или истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток. Способы по изобретению касаются идентификации, выделения, обогащения, истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток, а также мониторинга in vitro эффекта терапии. Фармацевтические композиции по изобретению содержат клетки, экспрессирующие маркеры CD4,CD25,CD127 и CD62L. Набор по изобретению включает средства для определения экспрессии маркеров CD4,CD25,CD127 и CD62L на поверхности клеток. Использование изобретения позволяет идентифицировать отдыхающие Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25-CD127lo/-CD62Llo/-, а активированные Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25+CD127lo/-CD62Llo/-. 14 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 ил., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной клинической диагностике и фтизиатрии. Способ прогнозирования увеличения объема поражения легочной ткани при инфильтративном туберкулезе включает определение количества CD3+CD25+, CD8+- и CD3+-клеток, отношения CD4+/CD8+, а также числа моноцитов, продуцирующих супероксид-анион (О2-) в крови больных инфильтративным туберкулезом легких. На основании полученных данных рассчитывают значение Y=-0,58+6,65X1+0,99X2+0,11X3-0,04X4-0,013X5, где, X1 - CD3+CD25+ (109/л), Х2 - CD4+/CD8+ (относительных единиц), Х3 - CD8+ (%), Х4 - CD3+ (%), Х5 - количество моноцитов, продуцирующих супероксид-анион (%) и при значении Y<1 прогнозируют инфильтративный туберкулез распространенностью не более трех сегментов легкого, а при значении Y≥1 прогнозируют распространение инфильтративного туберкулеза на четыре и более сегмента. Заявляемое изобретение позволяет повысить точность способа для конкретной нозологической единицы, предотвратить искажение результата. 4 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) <3,5 мМ (нормолипидемией). Способ включает анализ образца для определения популяции CD4+Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что проводят фенотипирование лимфоцитов с использованием меченных флуоресцентными метками моноклональных антител к CD4, при этом содержание CD4+клеток, выраженное в процентном (%) отношении от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза. Использование данного способа позволяет выявить пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза, что дает возможность своевременной коррекции терапии у данной категории пациентов. 2 пр., 1 табл., 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Для этого в крови беременных женщин с генитальным эндометриозом в сроке 11-13 недель гестации определяют содержание фактора роста плаценты (ФРП), фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), лимфоцитов с фенотипом CD95+ (Л CD95+) с последующим анализом данных. Дополнительно в указанном сроке беременности производят определение концентрации углеводного антигена СА125, альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ), ассоциированного с беременностью протеина-А плазмы (РАРР-А) и плацентарного альфа-1-микроглобулина (ПАМГ). При значении этих показателей: концентрация ФРП (пкг/мл) - 93±14; концентрация ФНОα (пкг/мл) - 42,8±5,1; содержание Л CD95+ (%) - 38,4±4,7; концентрация СА125 (ЕД/мл) - 62,3±3,6; концентрация АМГФ (нг/мл) - 527±43; концентрация РАРР-А (мг/л) - 6,8±1,9; концентрация ПАМГ (нг/мл) - 16,5±2,8 прогнозируют осложненное течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Использование данного изобретения позволяет неинвазивно прогнозировать патологическое течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложены способ диагностики рака предстательной железы и способ мониторинга реакции на терапию рака предстательной железы, включающие контактирование раковых клеток эпителиального происхождения с анти-STEAP-l антителом, которое специфически связывается с простата-специфическим маркером STEAP-1 с KD≤1000 нМ, где анти-STEAP-1 антитело представляет собой антитело 15А5, продуцированное клеткой гибридомы, имеющей номер депонирования микроорганизмов РТА-12259. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные способы диагностики и мониторинга рака предстательной железы. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил., 8 пр.
Наверх