Способ серологической диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого yersinia ruckeri, методом иммуноферментного анализа и диагностический набор для осуществления способа

Авторы патента:

G01N33/569 - микроорганизмов, например протозоа, бактерий, вирусов

Владельцы патента RU 2595883:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко (ФГБНУ ВИЭВ) (RU)

Группа изобретений относится к области ветеринарной биотехнологии, микробиологии и может быть использована для выявления антигена возбудителя йерсиниоза лососевых - Yersinia ruckeri в биологическом материале как для диагностики болезней рыб в ветеринарии, так и для научных исследований методом иммуноферментного анализа. Сущность группы изобретений состоит в использовании диагностического набора, включающего все необходимые компоненты для проведения иммуноферментного анализа, позволяющего выявлять антиген Yersinia ruckeri в образцах биологического материала от рыб на ранней стадии развития болезни с высокой специфичностью и чувствительностью. Группа изобретений относится также к способу серологической диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого Yersinia ruckeri, подразумевающему применение специфичных анти-ERM-антител, необходимых для детектирования антигена ERM, а после инкубации и последующее отмывание, при котором используют специфичный иммуноферментный конъюгат, представляющий собой анти-ERM-антитела, меченные пероксидазой хрена. Группа изобретений обеспечивает чувствительную и эффективную серодиагностику йерсиниоза рыб, вызываемого Yersinia ruckeri на ранних этапах развития болезни. 2 н.п. ф-лы, 2 пр.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, микробиологии и может быть использовано для выявления антигена возбудителя йерсиниоза лососевых - Yersinia ruckeri в биологическом материале как для диагностики болезней рыб в ветеринарии, так и для научных исследований методом иммуноферментного анализа.

Рыбоводство, как основное направление современной аквакультуры России - важнейшая отрасль сельского хозяйства. Рыбы при интенсивном выращивании постоянно контактируют с огромным количеством микроорганизмов как непатогенных, так и патогенных, представляющих опасность в развитии эпизоотий. Одна из таких - Yersinia ruckeri, бактерия семейства Enterobacteriaceae, которая вызывает кишечную болезнь йерсиниоз - Enteric Red Month (ERM), известную также под названием «красный рот», хроническую системную инфекцию радужной форели, выращиваемой в пресной воде. За рубежом, в регионах, активно занимающихся форелеводством, йерсиниоз считается опасной инфекцией. Болезнь наносит существенный урон рыбоводческим хозяйствам, приводит к высокому уровню гибели рыбы и к порче ее товарного вида.

В первую очередь заболеванию подвержены разные виды лососевых и сиговых рыб, также известны случаи выявления возбудителя у других пресноводных гидробионтов, что служит вектором передачи бактерий в окружающей среде культивируемой рыбе. Y. ruckeri передается горизонтально, через воду и экскременты зараженной рыбы. У заболевших особей отмечают геморрагии различных тканей и органов, особенно около рта, в мускулатуре, жабрах, брюшной стенке, полостном жире, а также в переднем и заднем отделах кишечника. Наиболее остро болезнь проявляется у мальков, у более крупных рыб протекает хронически.

На территории Российской Федерации йерсиниоз выявлен в 2010 году, количество случаев с каждым годом увеличивается, однако в список карантинных это заболевание не включено, что в виду массовой, но часто бесконтрольной перевозки рыбопосадочного материала способствует его распространению. Следовательно, с развитием контактов между странами, ростом и увеличением интенсивности аквакультуры внутри регионов данное заболевание имеет тенденцию повсеместного распространения в мире, поэтому возникает необходимость своевременной диагностики, а также точной идентификации возбудителя.

Сейчас диагностика йерсиниоза в лаборатории основана на выявлении бактерий в посевах на питательных средах с последующим изучением их культурально-биохимических свойств. Этот метод долгий, а результат анализа часто зависит от таких факторов, как опыт и компетенция специалиста, проводящего работу, качества используемой питательной среды и т.п., поэтому использование современных методов будет, несомненно, востребовано при диагностике [1].

В связи с вышеизложенным проблема диагностики и борьбы с йерсиниозом очень актуальна. Эффективно решить проблему своевременной и точной диагностики заболевания позволит высокочувствительный и строгоспецифичный метод иммуноферментного анализа, широко распространенный для выявления болезней человека и животных, но недостаточно используемый в ихтиопатологии.

Единственным известным набором для проведения серологической диагностики болезней рыб является ТФ ИФА для выявления противогерпетических антител в сыворотке осетровых рыб, разработанный во ВНИИВВиМ в 2012 году, который предлагается использовать в научно-исследовательских и ветеринарных лабораториях для ретроспективной диагностики герпесвирусной болезни сибирского осетра (SbSHV) у различных видов осетровых. Однако ретроспективная диагностика актуальна только для вирусных болезней, т.к. позволяет проводить мониторинговые исследования при подозрении на герпесвирусную инфекцию осетровых рыб в межэпизоотический период, и не пригодна для диагностики бактериальных болезней за счет длительного времени образования антител в живом организме [2] (прототип).

При диагностике бактериальных инфекций важна оперативная информация, на ранних этапах развития заболевания и для быстрого подтверждения диагноза во время эпизоотии, поэтому необходимо анализировать наличие в организме рыб антигена.

Высокая контагиозность и смертность рыб при йерсиниозе обуславливают необходимость разработки экспресс-методов диагностики с целью быстрого и своевременного принятия карантинных мер и профилактических мероприятий. Одним из таких методов является иммуноферментный анализ (ИФА), главными достоинствами которого являются высокая чувствительность и специфичность, коррелирующие с результатами, полученными при использовании других серологических методов, а также широкое распространение специального оборудования, позволяющего почти полностью автоматизировать процесс выявления антигенов.

Задача настоящего изобретения - разработка чувствительного и эффективного способа серодиагностики йерсиниоза рыб, вызываемого Yersinia ruckeri, на ранних этапах развития болезни и создание на его основе диагностического набора. Сведения по использованию ИФА-теста и существованию аналогичных диагностических наборов для выявления йерсиниоза рыб в современной литературе отсутствуют.

Сущность изобретения состоит в использовании диагностического набора, включающего все необходимые компоненты для проведения иммуноферментного анализа, позволяющего выявлять антиген Yersinia ruckeri в образцах биологического материала от рыб на ранней стадии развития болезни с высокой специфичностью и чувствительностью. Принцип способа заключается в следующем: специфические иммуноглобулины, иммобилизованные на поверхности лунок полистиролового микропланшета, связываются с гомологичными антигенами, присутствующими в исследуемом материале, образуя комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется путем взаимодействия с иммуноферментным конъюгатом, фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. Интенсивность окраски в лунке микропланшета пропорциональна содержанию специфического антигена в испытуемом образце, результаты учитывают по общепринятой формуле.

Диагностический набор для выявления возбудителя йерсиниоза содержит: планшет полистироловый 96-луночный, сенсибилизированный иммуноглобулинами к ERM; положительный контрольный образец, инактивированный (K⁺); отрицательный контрольный образец, инактивированный (K^-); конъюгат, представляющий собой анти-ERM антитела, меченные пероксидазой хрена; раствор для разведения конъюгата (РК); промыватель - концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином-80 (ФСБ-Т×25); субстрат - раствор тетраметилбензидина (ТМБ); стоп-реагент; ванночка для реагентов. Компоненты набора расфасованы в пластиковые флаконы разного объема с завинчивающимися крышками и упакованы в коробки.

ПРИМЕР 1

1. Подготовка исследуемого материала

Для обнаружения антигена Yersinia ruckeri в качестве испытуемого используют биопсийный материал внутренних органов (почка, печень, селезенка), экссудат и бактериальные культуры в концентрации не более 10^5.0-10^6.0 м.т. Для получения 10%-ной суспензии биоматериал гомогенизируют до получения однородной массы на ФСБ (pH 7,2-7,4). Полученную суспензию сливают в стерильную посуду и используют для исследования.

2. Подготовка компонентов для постановки реакции

Для промывания планшетов, при постановке реакции, готовят содержащий твин-80 фосфатно-солевой буфер: размешивают содержимое флакона с ФСБ-Т*25, при выпадении в концентрате осадка прогревают его до полного растворения солей, и разводят дистиллированной водой до 700 мл. Хранят при 4°C до 5 суток.

Раствор конъюгата в рабочем разведении готовят непосредственно перед использованием, к 0,05 мл концентрированного раствора добавляют 15 мл раствора для разведения конъюгата (РК), тщательно перемешивают.

Раствор ТМБ готов к применению, непосредственно перед использованием отбирают в пластиковую ванночку 12 мл. Остатки раствора ТМБ из ванночки нельзя сливать во флакон с исходным раствором ТМБ. Хранят при 4°C в течение всего срока годности набора.

3. Постановка реакции

Перед началом анализа лунки планшета промывают один раз промывочным раствором. В каждую лунку вносят по 300 мкл раствора, через пять минут после заполнения лунок раствор аккуратно удаляют. Остатки влаги из лунок тщательно удаляют, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

В первую лунку первого ряда планшета вносят 100 мкл специфического положительного антигена (K⁺). Во вторую лунку первого ряда вносят 100 мкл отрицательного антигена. Во все остальные лунки по 100 мкл исследуемых образцов (желательно делать 2-3 повторности). Внесение материала в плашку сопровождают тщательным перемешиванием пипетированием в течение 5-7 секунд. Планшет инкубируют при комнатной температуре (21-25°C) 60 минут.

Раствор конъюгата в рабочем разведении готовят за пять-десять минут до окончания инкубации.

По окончании инкубации планшет отмывают четыре раза ФСБ-Т от несвязавшихся антигенов, после чего удаляют влагу, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет инкубируют при комнатной температуре (21-25°C) 60 минут. По окончании инкубации планшет отмывают четыре раза ФСБ-Т, после чего удаляют влагу постукиванием.

Во все лунки вносят по 100 мкл раствора ТМБ. Для внесения раствора ТМБ используют пластиковую ванночку, входящую в состав набора. Планшет инкубируют при комнатной температуре, в защищенном от света месте, 25-30 минут.

Реакцию заканчивают добавлением во все лунки 100 мкл стоп-реагента.

4. Учет результатов

Результаты реакции учитывают через 2-3 минуты после добавления стоп-реагента, проводя измерение оптической плотности (ОП) в каждой лунке на спектрофотометре с вертикальным лучом света при длине волны 450 нм или визуально. Результаты исследований учитывают только при соблюдении следующих условий:

- значение ОП в лунке с отрицательным контролем не более 0,30 о.е.

- значение ОП в лунке с положительным контролем не менее 0,62 о.е.

Реакцию оценивают по формуле и выражают в виде процента реактивности:

процент реактивности (%)=(ОП-ОПК^-)/(ОПК⁺-ОПК^-)Х100%,

где ОП - оптическая плотность образца, ОПК⁺ - оптическая плотность положительного контроля, ОПК^- - оптическая плотность отрицательного контроля.

Границы пороговых значений: при величине %>22% реакция считается положительной, значение %<10% - реакция отрицательная, а диапазон % от 10% до 22% - сомнительные результаты реакции.

ПРИМЕР 2

Подготовку исследуемого материала, подготовку компонентов для постановки реакции, постановку реакции осуществляют аналогично описанному в примере 1, но инкубацию планшета после внесения положительных, отрицательных и исследуемых образцов проводят в течение 4-6 часов при температуре 4°C (в холодильнике), после чего работу и учет результатов продолжают по стандартной схеме. Получают результаты, аналогичные таковым в примере 1.

Предложенный способ и набор не имеют отечественных и зарубежных аналогов. Позволяет в течение трех часов с достоверностью 98% определять в образцах биологического материала наличие Y. ruckeri, возбудителя йерсиниоза лососевых рыб. Использование «холодной инкубации» (в течение 4-6 часов при температуре 4°C, в холодильнике) позволяет получать достоверные, аналогичные результаты в течение одного дня, с перерывом для оператора в ходе работы, что по разным причинам также может быть удобно.

Диагностикум разработан и апробирован с положительным результатом в лаборатории ихтиопатологии ФГБНУ ВИЭВ имени Я.Р. Коваленко в период октябрь 2013 - декабрь 2014 года.

Предложенный способ найдет применение в системе мониторинга, проводимого органами ветеринарной службы страны, что позволит контролировать заболеваемость йерсиниозом и сохранять здоровье культивируемых рыб, а также в научных исследованиях для получения информации о закономерностях циркуляции йерсиний вида Yersinia ruckeri в аквакультуре. Высокая чувствительность, специфичность, простота постановки реакции и возможность автоматизации процессов, за счет использования приборов, таких как промыватель, планшет и спектрофотометр с вертикальным лучом (ИФА-ридер), позволят в короткие сроки проводить массовые обследования в рыбоводческих хозяйствах с целью определения распространения заболевания. Оперативность анализа при данной инфекции имеет принципиальное значение, так как ускоренная диагностика позволяет максимально быстро приступить к лечению, тем самым оздоравливая и сохраняя поголовье.

Источники информации

1. Временные методические указания по диагностике йерсиниоза лососевых рыб // Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб (часть 2). Москва, отдел маркетинга АМБ-агро, 1999, с. 66-68.

2. Further virus characterization, diagnostics and prevention of Siberian sturgeon herpesvirus disease / Igor Shchelkunov, Andor Doszpoly, Tatiana Shchelkunova, Inna Prokaeva, Fatima Kalabekova, Ismail Kalabekov, Dmitry Kurenkov // USA-Russia Bilateral Workshop On Aquaculture and FishHealth USGS Western Fisheries Research Center, Seattle, WA, USA October, 2012, pp. 1-5 (прототип).

1. Способ серологической диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого Yersinia ruckeri, включающий взаимодействие специфических иммуноглобулинов с гомологичными антигенами и антителами, меченными ферментом, добавление субстратной смеси и учет результатов реакции по интенсивности окраски образовавшегося комплекса, отличающийся тем, что в реакции используют анти-ERM антитела, предварительно сорбированные на планшет, после внесения исследуемых проб по 0,10-0,11 мл инкубируют 60-65 минут при 21-25°C, отмывают, далее вносят конъюгат, состоящий из анти-ERM антител, меченых пероксидазой хрена, по 0,10-0,11 мл, инкубируют 60-65 минут при 21-25°C, отмывают, вносят 3,3′,5,5′-тетраметилбензидин, выдерживают 25-30 минут и проводят учет результатов реакции.

2. Диагностический набор для осуществления способа диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого Yersinia ruckeri, отличающийся тем, что содержит все необходимые для анализа компоненты: планшет, сенсибилизированный иммуноглобулинами к ERM; положительный контрольный образец, инактивированный (К⁺); отрицательный контрольный образец, инактивированный (К^-); конъюгат (анти-ERM антитела, меченные пероксидазой хрена); раствор для разведения конъюгата; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином-80 (ФСБ-Тх25) для промывания планшета; субстрат - раствор 3,3′,5,5′-тетраметилбензидина (ТМБ); стоп-реагент; ванночку для реагентов.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к лигандам для аффинной хроматографии на основе различных доменов белка A (SpA) Staphylococcus. Лиганд содержит либо несколько доменов C, либо несколько доменов B, либо несколько доменов Z белка SpA.

Антитело против липоарабиноманнана и иммунологический анализ инфекции, вызываемой кислотоустойчивыми бактериями, с использованием антитела // 2588480

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Способ определения чувствительности helicobacter pylori к антибиотикам // 2588469

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в гастроэнтерологии. Предложен способ определения чувствительности Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам.

Бактериофаг, обладающий активностью против pseudomonas aeruginosa, белки бактериофага и способы их применения // 2580248

Настоящее изобретение относится к области бактериофаговой терапии для лечения и регулирования бактериальных инфекций. Представленная группа изобретений касается выделенного бактериофага, обладающего активностью против Pseudomonas aeruginosa, белков, кодируемых геномом такого бактериофага, фармацевтической композиции, содержащей такие белки, применяющейся для изготовления лекарственного средства для лечения инфекции, обусловленной Pseudomonas aeruginosa, способа диагностики бактериальной инфекции, вызванной Pseudomonas aeruginosa, и способа уменьшения или ингибирования колонизации или роста Pseudomonas aeruginosa на твердой поверхности.

Способ связывания mycobacteria // 2573921

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ связывания Mycobacteria и/или фрагментов Mycobacteria, присутствующих в водной жидкости, с твердой поверхностью.

Способ определения антител к бактериальным антигенам // 2563885

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к определению наличия антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови животных. Для этого антиген смешивают с тестируемой сывороткой крови в различных разведениях в лунках микропланшета с V-образным дном с последующей визуализацией результатов реакции агглютинации с использованием источника ультрафиолетового излучения, преимущественно трансиллюминатора.

Способ диагностики туберкулезной инфекции // 2560679

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики туберкулезной инфекции. Осуществляют взятие периферической венозной крови, определение в гепаринизированной крови уровня стимулированного ИФН-γ иммуноферментным методом.

Антитела или их фрагменты, направленные против эпитопа стафилококка золотистого (staphylococcus aureus) // 2560415

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Диагностические и терапевтические способы // 2559584

Группа изобретений относится к медицине и касается способа лечения или профилактики RHD, связанного с инфекцией GAS, включающего введение пациенту по меньшей мере одного антигена GAS, выбранного из группы, включающей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 или их функциональные эквиваленты.

Диагностика паразитарного заболевания, такого как лейшманиоз, с использованием экстракта рибосомальных белков (rpe) // 2558233

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Применяют экстракт рибосомального белка (RPE) вида Leishmania для диагностики лейшманиоза у индивидуума, причем RPE содержит, по меньшей мере, два рибосомальных белка.

Способ предсказания течения вич-заболевания // 2601379

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для in vitro прогнозирования прогрессирования ВИЧ-1 (вирус иммунодефицита человека типа 1) заболевания у пациента, инфицированного вирусом ВИЧ-1. Для этого проводят следующие этапы: а) измерение уровня антител к 3S-пептиду, имеющему последовательность SEQ ID №2, в образце, взятом у указанного пациента, б) сравнение уровня анти-3S антител, измеренного на этапе а), с контрольным значением уровня анти-3S антител, которое является показателем прогрессирования ВИЧ-1 заболевания, где (I) уровень, измеренный на этапе а), который находится выше указанного контрольного значения, указывает на «благоприятный» прогноз прогрессирования заболевания ВИЧ, или (II) уровень, измеренный на этапе а), который находится ниже указанного контрольного значения, указывает на «неблагоприятный» прогноз прогрессирования заболевания ВИЧ. Также предложен способ мониторинга эффективности терапевтического лечения ВИЧ-1. Группа изобретений позволяет прогнозировать прогрессирование заболевания, вызванного ВИЧ-1, в общей популяции ВИЧ-инфицированных пациентов. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл., 1 пр.

Дифференциально-диагностическая питательная среда для определения порин-зависимых механизмов устойчивости бактерий pseudomonas aeruginosa к бета-лактамным антибиотикам // 2603085

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Дифференциально-диагностическая питательная среда содержит аланин, натрия хлорид и дистиллированную воду в заданных соотношениях компонентов. Изобретение позволяет определить порин-зависимые механизмы устойчивости к бета-лактамным антибиотикам у бактерий Pseudomonas aeruginosa. 1 табл., 1 пр.

Способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов с помощью клеточных тест-систем // 2604804

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека. Способ включает три этапа: подготовку исследуемого объекта, подготовку тест-системы и определение безопасности объекта для тест-системы. Токсичность и токсигенность пробиотических микроорганизмов оценивают на основании определения жизнеспособности культуры клеток с использованием камеры Горяева. Изобретение обеспечивает повышение точности и достоверности результатов определения безопасности пробиотических микроорганизмов для человека. 4 табл., 1 пр.

Штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота dermatitis nodularis bovum, рода capripoxvirus для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики нодулярного дерматита крупного рогатого скота // 2606254

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота (ВНД КРС). Описанный штамм выделен от коров, больных нодулярным дерматитом, и депонирован в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером - ВНД КРС/Дагестан/2015 (диагностический). Штамм репродуцируется в культурах клеток ЯДК-04 и ТЯ в течение 2÷3 суток и накапливается в титре от 4,5 до 5,5 lg ТЦД50/см3, сохраняет исходные характеристики при пассировании в культурах клеток ЯДК-04 и ТЯ в течение 5 пассажей. Полученный на его основе антигенный материал может быть использован для изготовления средств диагностики и специфической профилактики нодулярного дерматита КРС. 5 ил., 6 табл., 7 пр.

Способ идентификации генов клинически значимых семейств β-лактамаз у грамотрицательных микроорганизмов // 2608651

Изобретение относится к биохимии, в частности к способу идентификации генов клинически значимых семейств β-лактамаз у грамотрицательных микроорганизмов, например, у различных штаммов Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Burkholderia spp., Enterobacter spp., Stenotrophomonas maltophilia, Elizabethkingia meningoseptica, Serratia marcescens. Способ осуществляют путём амплификации фрагментов генов с помощью полимеразной цепной реакции с набором специфических олигонуклеотидных праймеров и последующим разделением продуктов реакции путём электрофореза в агарозном геле. С помощью указанного способа идентифицируют гены следующих семейств β-лактамаз SHV, СТХ-М, VIM, IMP, NDM, ОХА, KPC, GES, GIM и SPM. Настоящее изобретение позволяет увеличить арсенал средств для идентификации генов семейств β-лактамаз SHV, СТХ-М, VIM, IMP, NDM, ОХА, KPC, GES, GIM и SPM. 4 табл., 2 пр.

Молекулярные маркеры для инфекций мочевыводящих путей // 2611371

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу диагностики бактериальной инфекции мочевыводящих путей in vitro. Способ диагностики бактериальной инфекции мочевыводящих путей in vitro у пациента, имеющего по меньшей мере один симптом, выбранный из группы, состоящей из повышенной температуры или гипотермии, лейкоцитоза/лейкопении, боли в пояснице и/или дизурии, признаков синдрома системной воспалительной реакции, лихорадки неизвестной природы, рецидивирующей инфекции мочевыводящих путей, включающий стадии определения концентрации прокальцитонина в пробах мочи и плазмы указанного пациента, и где величина соотношения между концентрацией прокальцитонина в моче и прокальцитонина в плазме крови более 1 является предиктором в отношении наличия инфекции мочевыводящих путей. Применение набора для диагностики бактериальных инфекций мочевыводящих путей in vitro. Вышеописанный способ позволяет эффективно диагностировать бактериальные инфекции мочевыводящих путей in vitro. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Биомаркеры инфекций дыхательных путей // 2611385

Группа изобретений относится к определению уровней активности бактерий в легких пациентов. Группа изобретений раскрывает способ предсказания усиления уровня бактериальной активности Pseudomonas aeruginosa в легких пациента, а также способ определения эффективности лечения антибиотиком бактериальной инфекции легких, вызванной Pseudomonas aeruginosa, в которых осуществляется измерение уровней маркеров процесса захвата железа бактериями (например, сидерофоров) и уровней секретированных бактериальных белков с течением времени. Способы по настоящему изобретению характеризуются надежностью и высокой чувствительностью. Настоящая группа изобретений особенно подходит для определения уровней активности P. aeruginosa в легких пациентов с муковисцидозом. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 13 ил., 2 табл.

Устройство для отбора пробы текучей среды и способ отбора пробы // 2613323

Группа изобретений относится к устройствам для отбора пробы мочи. Устройство для отбора пробы мочи содержит прозрачный лист, содержащий два слоя: слой для отбора пробы мочи, выполненный с возможностью приема и удерживания жидкости, и опорный слой. Устройство выполнено с возможностью размещения на обращенной к телу стороне гигиенического поглощающего изделия. При этом слой для отбора пробы мочи содержит гидрогель или материал, удерживающий жидкость, а опорный слой оснащен прозрачным средством крепления. Также раскрывается конструкция и система для отбора пробы мочи, гигиеническое поглощающее изделие и способ отбора пробы мочи. Группа изобретений обеспечивает съемное прикрепление устройства для сбора мочи к гигиеническому впитывающему изделию, что позволяет проводить непосредственный и более точный анализ. 5 н. и 14 з.п., 3 пр., 20 ил.

Способ оценки эффективности вакцинации против коклюша, дифтерии и столбняка // 2626679

Изобретение относится к медицине, а именно иммунологии, и может быть использовано для оценки эффективности вакцинации против коклюша, дифтерии и столбняка. Способ заключается в полуколичественном определении напряженности поствакцинального иммунитета к антигенам возбудителей коклюша, дифтерии и столбняка. Для этого твердую фазу, представляющую собой тест-полоски из нитроцеллюлозной мембраны с диаметром пор 0,45 мкм и размером 0,5×2 см, сенсибилизируют путем нанесения дифтерийного 3,5 мкл с концентрацией 0,1 мг/мл и столбнячного 3,5 мкл с концентрацией 0,05 мг/мл анатоксинов, цельноклеточного коклюшного антигена 3,5 мкл, 20 МОЕ, а также 3,5 мкл раствора IgG мыши с концентрацией 0,1 мг/мл в качестве положительного контроля. После подсушивания тест-полосок, инкубации их с блокирующим раствором ЗФРТ в лунках планшета, размещенного на шейкере в термостате при температуре +37°С в течение 60 мин, после чего твердую фазу трехкратно по 5 минут отмывают ЗФРТ, инкубируют с тестируемыми образцами сыворотки крови и контрольными образцами сывороток в течение 30 минут при температуре 37°С. Вновь отмывают и «проявляют» антитела, связавшиеся с твердой фазой, при помощи диагностикума, представляющего собой конъюгат углеродных наночастиц с G белком стрептококка в разведении 1/45 в течение 60 минут. Оценивают результат при помощи программы для анализа сканированных изображений после сканирования тест-полосок в обычном планшетном сканере. При содержании противостолбнячных и противодифтерийных антител менее 0,1 МЕ/мл оценивают недостаточную защиту, при которой требуется иммунизация. При 0,1-1,0 МЕ/мл - достаточный уровень защиты, при которой необходима бустерная доза вакцины, а при значениях более 1,0 МЕ/мл - как высокий уровень защиты, и иммунизация необходима через 5 лет и более. Наличие протективного титра противококлюшных антител оценивают, рассчитывая пороговое значение: Х=0,128(А-В)+В, где X - пороговое значение оптической плотности, А - оптическая плотность сильно положительного образца, В - оптическая плотность слабоположительного образца, и если полученное значение оптической плотности образца выше порогового значения, то он содержит защитный уровень противококлюшных антител. Использование данного способа позволяет с помощью тест-системы полуколичественно оценивать наличие защитного поствакцинального иммунитета одновременно к трем инфекциям: коклюшу, дифтерии и столбняку. 2 табл., 2 пр.

Новый вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (вррсс) корейского типа // 2630306

Предложены композиция вакцины для предотвращения репродуктивно-респираторного синдрома свиней корейского типа, содержащая вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) корейского типа (номер доступа в КСТС 12096 ВР) в количестве от 2×105 до 2×107 БОЕ/мл в качестве эффективного ингредиента, способ предотвращения РРСС корейского типа, использующий такую вакцину, набор для диагностики вируса РРСС корейского типа и способ обнаружения вируса РРСС корейского типа. Вирус РРСС корейского типа JW-BPPCC (КСТС 12096 ВР) выделен в Корее и отличается от североамериканских и европейских штаммов. Изобретения позволяют предотвращать РРСС корейского типа, а также обеспечивают специфичную диагностику инфицирования вирусом РРСС корейского типа. 4 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 19 табл., 8 пр.