Способ определения авидности иммуноглобулинов класса g к вирусу герпеса 6 типа

Авторы патента:

Осипова Зинаида Алексеевна (RU)

Мурина Елена Александровна (RU)

Голева Ольга Владимировна (RU)

G01N33/577 - с использованием моноклональных антител

Владельцы патента RU 2596794:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт детских инфекций" Федерального медико-биологического агентства (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и может быть использовано при диагностике вируса герпеса 6 типа. Способ определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа заключается в том, что сыворотку вносят в лунки двух стрипов иммобилизованного антигеном вируса герпеса 6 типа планшета, одновременно инкубируют в течение 60 минут, после чего ячейки первого стрипа обрабатывают водным раствором 4 М мочевины, затем оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат моноклональных антител к IgG антителам человека, стрипы инкубируют в течение 40 минут, после промывания окрашивают 0,05% водным раствором тетраметилбензидина и выдерживают 20-25 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, после чего определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и на основании полученных данных проводят расчет индекса авидности. Использование способа дает возможность эффективно определять индекс авидности IgG антител к вирусу герпеса 6 типа, что позволяет устанавливать длительность и стадию инфекционного процесса. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и может быть использовано для определения фазы инфекционного процесса при диагностике вируса герпеса 6 типа (HHV-6).

Вирус герпеса 6 типа (HHV-6) - это ДНК вирус подсемейства Betaherpesvirinae рода Roseolovirus. Штаммы HHV-6A являются нейровирулентными. HHV-6B чаще выделяются у пациентов с лимфопролиферативными и иммуносупрессивными заболеваниями. Антитела к HHV-6 выявляют у людей от 75 до 90%. При рождении большинство детей серопозитивны за счет материнских антител, титр которых снижается к 5 мес. Однако к одному году соотношение серопозитивных детей к серонегативным такое же, как у старших детей и взрослых. Материнские антитела защищают от инфекции HHV-6 в первые месяцы жизни, но после снижения их титра инфицирование может проявиться различными заболеваниями. Выделяют два подтипа вируса: подтип В вызывает розеолу, лихорадку без сыпи, фебрильные судороги и менингит у детей; подтип А связывают с синдромом хронической усталости, рассеянным склерозом и прогрессированием ВИЧ-инфекции. Инфекция, вызванная вирусом герпеса человека типа 6, является актуальной проблемой современной педиатрии.

Определение фазы инфекционного процесса для диагностики HHV 6-инфекции представляется наиболее актуальным, так как в настоящее время диагностика основана лишь на сравнительном анализе данных вирусологических (выделение вируса на чувствительных культурах клеток, обнаружение вирусных белков), молекулярно-генетических (обнаружение фрагментов генома вируса) и серологических (выявление вирус-специфических антител) исследований.

Известно диагностирование первичной инфекция у иммунокомпетентных лиц на основании корреляции наличия и нарастания титров вирус-специфических антител IgM- и IgG-классов с динамикой развития клинических симптомов. (Герпесвирусная инфекция: эпидемиология, клиника, диагностика, профилактика, лечение: метод, рекомендации для студентов, врачей-интернов, кл. ординаторов и практ. врачей / ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН; Сост.: Н.В. Каражас, Н.А. Малышев, Т.Н. Рыбалкина и др.; Под ред. Н.А. Малышева. - Москва, 2007. - 120 с.) Если вирус-специфические антитела класса М синтезируются через 2 недели после острой первичной инфекции и достаточно быстро сменяются на антитела класса IgG, то первичная ВГЧ-6-инфекция, а также реактивация латентной инфекции могут быть диагностированы по уровню IgG-антител. А в связи с тем, что практически у всех взрослых имеются IgG-антитела к HHV-6 типа, однократное определение антител в крови незначимо, необходимо исследовать как минимум 2 образца в динамике, что вызывает трудности в наборе материала при диагностике.

Изобретение RU №2269134 направлено на разработку способа прогнозирования исходов острого гепатита С путем определения антител к нескольким антигенным участкам двух поверхностных белков (Е1 и Е2) с использованием в качестве антигенов 5 синтетических пептидов. Антитела к поверхностным белкам определяются методом иммуноферментного анализа. Образовавшийся комплекс антиген-антитело выявляется с помощью конъюгата на основе моноклональных антител против IgG человека после добавления субстратного раствора. Однако использование этого метода не дает представления о фазе процесса в разный период развития инфекции и не предназначен для определения степени зрелости выявляемых антител, а следовательно, не применим для определения авидности иммуноглобулинов.

Известен «Способ диагностики острого вирусного гепатита А у детей» (RU №2479847). В данном способе сыворотку больных, разведенную в 100 раз, вносят в два ряда параллельных лунок. Один ряд обрабатывают раствором 6 М мочевины в течение 5 минут, определяют авидность комплекса антиген-антитело класса IgG к вирусу гепатита А. При уровне индекса авидности ≤50% диагностируют острый вирусный гепатит А. Однако данный способ не применим для определения авидности антител к HHV-6 типа, так как в данной модификации не используются специфические белки HHV-6 на поверхности лунок для внесения исследуемого материала.

Изобретение ES №2102966 (А1) - 1997-08-01 направлено на лабораторную диагностику антител IgG с низким уровнем авидности антигенов в случае первичного заражения вирусом краснухи (RUBELLA), цитомигаловирусом, вирусом простого герпеса, вирусом герпеса человека 6, вирусом Эпштейна-Барр и вирусом токсоплазмоза Toxoplasma gondii. Данное изобретение не предполагает использование иммуноферментного определения авидности IgG антител к HHV-6, а выявление вируса HHV-6 иммунофлюоресцентным методом, как указано в источнике, не обеспечивает точности диагностики, по причине использования высококонцентрированного детергента (8М мочевина) и труднодоступного на современном рынке.

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита С» [RU 22626694, 2004]. Способ заключается в том, что после расщепления специфического иммунного комплекса 6-молярной мочевиной в иммуноферментном тесте определяют антитела к неструктурному белку NS4 и по увеличению уровня антител ≥12% дифференцируют репликативную форму вирусного гепатита С, а по уменьшению уровня антител в пределах 50-90% - интегративную форму. Проведение данного метода предполагает обследование образцов сывороток крови больных гепатитом С, вносимых в объеме 100 мкл в лунки иммуноферментного теста с насаженным неструктурным белком р-456. После 40-минутного контакта и отмывки параллельно 6-молярной мочевиной и буферным раствором вносят человеческий антиглобулин, меченный пероксидазой хрена в объеме 100 мкл с последующей инкубацией при 37°С в течение 20 минут. На стадии учета реакции используется ортофенилендиамин в 5% растворе перекиси водорода.

Однако он не применим для определения авидности IgG антител к вирусу герпеса 6 типа ввиду отсутствия необходимых специфических адсорбированных белков вируса HHV-6 на поверхности лунок для внесения исследуемого материала. Использование высококонцентрированной 6-молярной мочевины приводит к дополнительному разрушению поверхностного слоя специфических адсорбированных белков в лунках планшета. Двукратная инкубация в течение 20 и 40 минут при температуре 37°С микропланшета с адсорбированным неструктурным белком NS4 и применение ортофенилендиамина также делает данный способ невозможным для определения фазы инфекционного процесса, вызванного HHV-6. Кроме того, использование данного способа на современном этапе является невыполнимым (приказ №322 МЗ РФ от 21.10.2002 о запрете к применению диагностических препаратов, содержащих в качестве хромогена (субстрата) ортофенилендиамин (ОФД), который является высокоактивным канцерогеном, опасным для здоровья людей и требующим специальной технологии утилизации (приказ МЗ и Соц. развития №706Н от 23.08.10 о специальных условиях хранения сильнодействующих лекарственных препаратах).

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа. Технический результат данного изобретения заключается в усовершенствовании лабораторной диагностики, а следовательно, повышении точности определения фазы инфекционного процесса при диагностике заболеваний, вызванных вирусом герпеса 6 типа, за счет расщепления слабоавидных антител при обработке детергентом.

Результат достигается тем, что в известном способе путем определения антител в иммуноферментном тесте авторы сыворотку больного вносят в лунки двух стрипов иммобилизованного антигеном вируса герпеса 6 типа планшета, одновременно инкубируют в течение 60 минут, после чего ячейки первого стрипа обрабатывают водным раствором 4 М мочевины, затем оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат моноклональных антител к IgG антителам человека, стрипы инкубируют в течение 40 минут, промывают, окрашивают раствором хромогена, выдерживают 20-25 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, после чего определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и проводят расчет индекса авидности по формуле:

При просмотре научно-технической литературы способов определения авидности IgG антител к вирусу HHV-6 не обнаружено.

В результате проведения многочисленных серологических исследований авторами обнаружено, что увеличение времени инкубации на стадии образования иммунных комплексов антител со специфическими белками вируса HHV-6 до 60 минут и до 40 минут на стадии обработки коньюгатом моноклональных антител к IgG человека, в отличие от прототипа, обеспечивает особые условия для образования прочного комплекса, не подвергающегося трансформации при последующих мероприятиях в ходе проведении исследования.

Авторы впервые использовали 4 М раствор мочевины в качестве детергента, обнаружив, что именно при такой концентрации уже происходит диссоциация связи специфических белков вируса HHV-6 с антителами, находящимися в структуре иммунного комплекса. Использование менее концентрированного раствора не позволяло достигнуть поставленных целей, а повышение концентрации мочевины приводило к полному разрыву комплекса между антителами и белком, находящимся на поверхности полистероловой лунки. В таком случае выявление антител, вышедших из специфического иммунного комплекса и характеризующих его наличие и концентрацию, невозможно, так как отмываются суммарные антитела как из комплекса, так и находящиеся в крови в свободном состоянии. Таким образом, меньшая концентрация мочевины не позволяла добиться поставленных эффектов, большая концентрация - не эффективна, исходя из экономических соображений.

Необходимым условием для проведения данного исследования, в отличие от прототипа, является использование в качестве раствора хромогена - 0,05% тетраметилбензидина вместо ортофенилендиамина, являющегося высокоактивным канцерогеном, опасным для здоровья людей и требующим специальной технологии утилизации. Время выдержки с раствором хромогена в течение 20-25 при комнатной температуре получено экспериментальным путем и является достаточным и необходимым как наиболее оптимальное для получения конечного результата. Авторы обнаружили, что использование в качестве стоп-реагента именно 0,5 М раствора серной кислоты обеспечивает наилучший результат при получении цветового показателя для спектрофотометрического учета. В формуле расчета индекса авидности авторами использовались показатели оптической плотности образцов после обработки исследуемых проб сыворотки 4 М раствором мочевины.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:

Для обеспечения проведения исследований по установлению значений авидности IgG антител к HHV-6 используют стандартное оборудование для вирусологических лабораторий и лабораторий, проводящих иммуноферментный анализ (ИФА).

Авидность антител класса IgG к HHV-6 определялась с использованием наборов реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса IgG, основанного на твердофазном непрямом иммуноферментном анализе с использованием очищенного рекомбинантного белка р-100.

Принцип определения авидности антител заключался в обнаружении антител, способных разрушать связь с антигеном (р-100) при обработке образовавшегося комплекса детергентом - 4 М раствором мочевины. При сравнении показателя оптической плотности раствора, подвергшегося воздействию детергента, и с таковым без воздействия детергента рассчитывалось значение снижения экстинции как показателя степени авидности антител.

ИФА проводился по следующей схеме:

1. Связывание антител. Первые лунки двух стрипов оставлялись незаполненными и рассматривались как контроль субстрата, во все остальные вносилось по 90 мкл раствора для разведения сыворотки (РРС) и по 10 мкл исследуемой сыворотки, предварительно разведенной раствором для предварительного разведения (РПРС) с целью получения конечного разведения 1:100. Одни и те же исследуемые сыворотки вносились в следующие за контрольными лунки параллельно в два ряда. Планшет инкубировался при температуре 37°С в течение 60 мин во влажной камере. После инкубации раствор удалялся и один ряд (стрип) промывался 3 раза раствором детергента 4 М раствором мочевины и 2 раза раствором фосфатно-солевым буферным с твином (ФСБ-Т), а второй ряд (стрип) - 5 раз ФСБ-Т.

3. Внесение конъюгата. Во все лунки, кроме лунки для контроля субстрата, добавлялось по 100 мкл рабочего раствора конъюгата - моноклональных антител к IgG человека с пероксидазой хрена. Планшет инкубировался при температуре 37°С в течение 40 минут. После инкубации раствор из лунок удалялся и промывался 5-ти кратно раствором ФСБ-Т.

4. Проведение реакции взаимодействия с субстратом. Во все лунки вносилось по 100 мкл 0,05% водного раствора ТМБ. Планшет выдерживался в темноте при комнатной температуре в течение 20-25 минут. Спустя указанное время реакция останавливалась внесением 100 мкл 0,5М раствора серной кислоты.

5. Учет результатов ИФА и расчет индекса авидности (ИА) антител. Измерение оптической плотности (ОП) проводился с помощью спектрофотометра в режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - 620 нм, не позднее, чем через 10 минут после остановки реакции.

Расчет ИА антител проводился по формуле:

Пример 1

Индекс авидности антител класса IgG к вирусу HHV-6 определялся у 37 детей в возрасте от 1 года до 12 лет, госпитализированных в клинику ФГБУ НИИДИ ФМБА России. В сыворотках крови детей определялись антитела IgG к вирусу HHV-6 класса стандартным методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем, которые выполнялись согласно инструкциям производителя.

Авидность определялась предлагаемым авторами методом.

Дети были разделены на 2 группы:

1 группа - 18 человек, у которых антитела Ig G к HHV-6 были определены дважды с интервалом от 1 года и более и их титр превышал ОП_крит на 25%.

2 группа - 19 человек, у которых антитела Ig G к HHV-6 были определены дважды с интервалом от 1 месяца до 25 дней и их титр превышал ОП_крит на 25%.

Значение для низкоавидных антител устанавливалось на уровне ИА ≤50%, значение ИА ≥60% указывало на наличие высокоавидных антител, а ИА в интервале 50-60% расценивался как пограничный результат.

Получение результатов в обеих группах не менее 85% антител с высоким или низким индексом авидности говорило о правомочности применения данного способа для определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа.

В таблице 1 приведены контрольные результаты обследования сывороток крови детей 1 группы при применении предложенного авторами метода.

В 88,9% в обследуемой группе были обнаружены специфические IgG высокоавидные антитела, которые определяются только на поздних стадиях герпетической инфекции, что подтверждается и временем, прошедшим от начала заболевания до исследования 2-й сыворотки.

В таблице 2 приведены результаты контрольного обследования сывороток крови детей 2 группы по предложенному авторами методу.

В 89,5% в обследуемой группе были обнаружены специфические IgG антитела с низкой авидностью, которые подтверждают раннюю фазу герпетической инфекции, что соответствует времени от начала заболевания до исследования 2-й сыворотки.

Проведенные контрольные исследования подтверждают правомочность применения предлагаемого способа для определения фазы инфекционного процесса, вызванного HHV-6.

Пример 2

В клинике НИИДИ на отделении нейроинфекций находилась больная Н.Х., 15 лет с диагнозом рассеянный склероз № и/б 2639. При вирусологическом обследовании биологического материала больной были получены следующие результаты:

Лабораторный диагноз: смешанная вирусная инфекция (реактивация вируса герпеса 1 типа + ранняя фаза инфекционного процесса, вызванного вирусом герпеса 6 типа).

Пример 3

В клинике НИИДИ на отделении нейроинфекций находился больной Ф.Ю., 5 лет с диагнозом вирусная инфекция неясной этиологии № и/б 3979. При вирусологическом обследовании биологического материала больного были получены следующие результаты:

Лабораторный диагноз: значение ИА=72%, что указывает на наличие высокоавидных антител, которые характеризуют хроническое течение инфекции, вызванной вирусом герпеса 6 типа.

Авторами предложен эффективный лабораторный способ определения авидности, вызванной вирусом герпеса 6 типа у детей. Определение индекса авидности вируса герпеса 6 типа дает возможность устанавливать фазу инфекционного процесса, вызванного вирусом HHV-6, длительность заболевания, что оказывается решающим фактором при установлении этиологии заболевания и выборе терапевтической тактики.

Способ определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа путем определения антител в иммуноферментном тесте, отличающийся тем, что сыворотку вносят в лунки двух стрипов иммобилизованного антигеном вируса герпеса 6 типа планшета, одновременно инкубируют в течение 60 минут, после чего ячейки первого стрипа обрабатывают водным раствором 4 M мочевины, затем оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат моноклональных антител к IgG антителам человека, стрипы инкубируют в течение 40 минут, после промывания окрашивают 0,05% водным раствором тетраметилбензидина и выдерживают 20-25 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5M серной кислоты, после чего определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и проводят расчет индекса авидности по формуле:

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и описывает способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Антитело против липоарабиноманнана и иммунологический анализ инфекции, вызываемой кислотоустойчивыми бактериями, с использованием антитела // 2588480

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Способ модулирования антагонистической активности моноклонального антитела // 2575600

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ повышения антагонистической активности моноклонального антитела, содержащего константную область IgG1 человека и направленного против специфической молекулы-мишени, включающий модификацию аминокислотной последовательности шарнирной области.

Способ прогнозирования общей выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции // 2568592

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской диагностике, и описывает способ прогнозирования выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции.

Средства и способы определения количества полипептида нейротоксина и его каталитической и протеолитической активностей // 2545783

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы и устройства для определения количества процессированного полипептида нейротоксина в растворе путем вычитания количества частично процессированного и непроцессированного нейротоксина из количества общего нейротоксина.

Способ дифференциальной диагностики типов роста лейомиомы матки // 2542468

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и может быть использовано в качестве дифференциальной дооперационной диагностики типов быстрого роста лейомиомы матки.

Способ одновременного детектирования нескольких маркеров врожденных заболеваний в сухих пятнах крови // 2541164

Изобретение относится к иммунологическим методам анализа и может быть использовано для массового скрининга врожденных заболеваний у новорожденных. Для этого в лунке микропланшета иммобилизуют первые иммуноспецифические компоненты к тиротропину, иммунореактивному трипсину, тироксину и 17α-ОН-прогестерону в виде дискретных микрообластей, размещают в лунке бумажный диск образца сухой крови, экстрагируют детектируемые маркеры из сухого пятна крови путем добавления в лунку буфера, содержащего даназол и 8-анилинонафталин-1-сульфоновую кислоту и антитела к 17α-ОН-прогестерону, которые связывают с экстрагируемым 17α-ОН-прогестероном для одновременного образования иммунного комплекса с антивидовыми антителами в соответствующей микрообласти, затем добавляют в лунку микропланшета реакционный раствор вторых иммуноспецифических компонентов, содержащий смесь биотинилированных антител к тиротропину, иммунореактивному трипсину и тироксину и конъюгат 17α-ОН-прогестерон-белок-биотин для получения иммунных меченных биотином комплексов в дискретных микрообластях, удаляют бумажный диск сухого образца крови, добавляют конъюгат стрептавидина с Pt-копропорфирином для образования фосфоресцирующих биотин-стрептавидиновых комплексов в микрообластях на дне лунки микропланшета и детектируют эмиссию фосфоресценции метки, последовательно сканируя дискретные микрообласти сфокусированным лазерным пучком.

Способ определения степени тяжести заболевания у детей с детским церебральным параличом // 2537167

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской неврологии. Способ включает выявление клинических признаков заболевания, определение в периферической крови ребенка уровня эритроцитов с микроядрами.

Способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций // 2536243

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ.

Способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новобразований костей верхней и нижней челюстей по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента // 2521196

Изобретение относится к области медицины и предназначено для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований костей верхней и нижней челюстей по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента.

Способ диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты // 2605310

Изобретение относится к онкологии, иммунологии и предназначено для диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты. Способ диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты включает определение содержания лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+ и цитокина IL-1β в периферической венозной крови, определение соотношения концентрации IL-1β к сумме абсолютного содержания активированных лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+, расчет диагностического индекса (ДИ): ДИ=1L-1β/Σ (CD25+CD10+CD71+HLADR+) и при величине ДИ, равной 20,04 и более, диагностируется риск формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты. 3 пр.

Антитела против рецептора фолиевой кислоты 1, их иммуноконъюгаты и использование // 2610663

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено гуманизированное антитело и его антиген-связывающий фрагмент, специфически связывающиеся с рецептором фолиевой кислоты 1 (FOLR1) человека и охарактеризованные аминокислотными последовательностями участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR). Также предложен способ получения гуманизированного антитела по изобретению; иммуноконъюгаты с цитотоксическим средством; фармацевтические композиции; диагностическая композиция; наборы; способы ингибирования роста опухоли и способ лечения рака. Рассмотрены выделенные полинуклеотиды, кодирующие вариабельные домены антитела по изобретению; содержащие их векторы и клетки-хозяева. Антитело по изобретению является гуманизированной формой мышиного антитела Mov19 и может найти дальнейшее применение в терапии заболеваний, характеризующихся повышенной экспрессией FOLR1. 20 н. и 49 з.п. ф-лы, 19 ил., 4 табл., 19 пр.

Способ персонифицированного подбора дентального имплантата на основе сплавов оксида титана // 2611013

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования аллергических реакций при использования дентальных имплантатов на основе сплавов оксида титана в реконструктивной хирургии. Предлагаемый способ персонифицированного подбора пациенту дентального имплантата на основе сплавов оксида титана осуществляют в условиях in vitro с помощью тест-системы активации базофилов для оценки аллергической реакции на исследуемый материал методом подсчета разрушенных базофилов в крови пациента. Предварительно выделяют наночастицы с поверхности дентального имплантата путем инкубирования в воде при температуре 37,2°C в течение 5 дней, после чего на полученный супернатант воздействуют ультразвуком 35 кГц в течение 10-20 минут, затем добавляют венозную кровь пациента и моноклональные антитела к молекулам CD203 и CD294, повторно инкубируют в течение 15 минут и с помощью тест-системы методом проточной цитофлуориметрии фиксируют активацию базофилов либо ее отсутствие. Исходя из полученных результатов рассчитывают индекс активации базофилов, и в случае получения отношения количества позитивных базофилов исследуемого образца к количеству негативных базофилов контрольного образца меньше 1 или равного 1 рекомендуют данный имплантат к использованию. Использование способа позволяет прогнозировать и исключить возможные аллергические реакции со стороны иммунной системы пациента в послеоперационном периоде и, соответственно, осуществить индивидуальный подбор различных сплавов металлов и профилактику воспалительных осложнений в отсроченном периоде. 1 табл., 2 пр.

Система индикации на основе полноразмерного антитела для эукариотических клеток и ее применение // 2625033

Изобретение относится к биохимии. Описан способ отбора клетки, экспрессирующей биспецифическое антитела, который включает следующие этапы: создание популяции эукариотических клеток путем трансдукции популяцией лентивирусных частиц, где каждая лентивирусная частица содержит бицистронную экспрессионную кассету, кодирующую секретируемое биспецифическое антитело, которая содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен первой тяжелой цепи в локусе «замок» или «ключ» до EV71-IRES, и нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен второй тяжелой цепи в соответствующем другом локусе после EV71-IRES, где вариабельный домен первой тяжелой цепи связывается с первым антигеном, а второй вариабельный домен связывается со вторым антигеном, где первый антиген и второй антиген могут быть одинаковыми или разными, где эукариотическая клетка экспрессирует общую легкую цепь, и отбор из популяции эукариотических клеток клетки, где клетка выбрана по способности антитела, представленного на ее поверхности, специфически связываться с указанными первым и вторым антигенами. 10 з.п. ф-лы, 18 ил., 1 табл., 13 пр.

Способы идентификации, выделения, истощения и обогащения популяций tr1 клеток, популяции tr1 клеток, фармацевтические композиции, способ мониторинга эффекта терапии // 2627445

Группа изобретений относится к медицине и иммунологии и может быть использована для выделения, обогащения или истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток. Способы по изобретению касаются идентификации, выделения, обогащения, истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток, а также мониторинга in vitro эффекта терапии. Фармацевтические композиции по изобретению содержат клетки, экспрессирующие маркеры CD4,CD25,CD127 и CD62L. Набор по изобретению включает средства для определения экспрессии маркеров CD4,CD25,CD127 и CD62L на поверхности клеток. Использование изобретения позволяет идентифицировать отдыхающие Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25-CD127lo/-CD62Llo/-, а активированные Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25+CD127lo/-CD62Llo/-. 14 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 ил., 4 пр.

Способ прогнозирования увеличения объема поражения легочной ткани при инфильтративном туберкулезе // 2633077

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной клинической диагностике и фтизиатрии. Способ прогнозирования увеличения объема поражения легочной ткани при инфильтративном туберкулезе включает определение количества CD3+CD25+, CD8+- и CD3+-клеток, отношения CD4+/CD8+, а также числа моноцитов, продуцирующих супероксид-анион (О2-) в крови больных инфильтративным туберкулезом легких. На основании полученных данных рассчитывают значение Y=-0,58+6,65X1+0,99X2+0,11X3-0,04X4-0,013X5, где, X1 - CD3+CD25+ (109/л), Х2 - CD4+/CD8+ (относительных единиц), Х3 - CD8+ (%), Х4 - CD3+ (%), Х5 - количество моноцитов, продуцирующих супероксид-анион (%) и при значении Y<1 прогнозируют инфильтративный туберкулез распространенностью не более трех сегментов легкого, а при значении Y≥1 прогнозируют распространение инфильтративного туберкулеза на четыре и более сегмента. Заявляемое изобретение позволяет повысить точность способа для конкретной нозологической единицы, предотвратить искажение результата. 4 пр.

Способ диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у лиц с нормолипидемией по содержанию cd4+ т-лимфоцитов в периферической крови // 2636238

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) <3,5 мМ (нормолипидемией). Способ включает анализ образца для определения популяции CD4+Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что проводят фенотипирование лимфоцитов с использованием меченных флуоресцентными метками моноклональных антител к CD4, при этом содержание CD4+клеток, выраженное в процентном (%) отношении от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза. Использование данного способа позволяет выявить пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза, что дает возможность своевременной коррекции терапии у данной категории пациентов. 2 пр., 1 табл., 1 ил.

Способ прогнозирования осложненного течения беременности у женщин с генитальным эндометриозом // 2640022

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Для этого в крови беременных женщин с генитальным эндометриозом в сроке 11-13 недель гестации определяют содержание фактора роста плаценты (ФРП), фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), лимфоцитов с фенотипом CD95+ (Л CD95+) с последующим анализом данных. Дополнительно в указанном сроке беременности производят определение концентрации углеводного антигена СА125, альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ), ассоциированного с беременностью протеина-А плазмы (РАРР-А) и плацентарного альфа-1-микроглобулина (ПАМГ). При значении этих показателей: концентрация ФРП (пкг/мл) - 93±14; концентрация ФНОα (пкг/мл) - 42,8±5,1; содержание Л CD95+ (%) - 38,4±4,7; концентрация СА125 (ЕД/мл) - 62,3±3,6; концентрация АМГФ (нг/мл) - 527±43; концентрация РАРР-А (мг/л) - 6,8±1,9; концентрация ПАМГ (нг/мл) - 16,5±2,8 прогнозируют осложненное течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Использование данного изобретения позволяет неинвазивно прогнозировать патологическое течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом.

Композиции и способы анализа рака предстательной железы // 2641968

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложены способ диагностики рака предстательной железы и способ мониторинга реакции на терапию рака предстательной железы, включающие контактирование раковых клеток эпителиального происхождения с анти-STEAP-l антителом, которое специфически связывается с простата-специфическим маркером STEAP-1 с KD≤1000 нМ, где анти-STEAP-1 антитело представляет собой антитело 15А5, продуцированное клеткой гибридомы, имеющей номер депонирования микроорганизмов РТА-12259. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные способы диагностики и мониторинга рака предстательной железы. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил., 8 пр.

Иммунохроматографическая тест-система для выявления патогенных штаммов helicobacter pylori // 2642588

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики H. pylori. Иммунохроматографическая тест-система для выявления патогенных штаммов H. pylori по белку cagA представляет собой мультимембранный композит, состоящий из нитроцеллюлозной мембраны, на поверхность которой наклеена мембрана, пропитанная конъюгатом моноклональных антител, клон НР-387 в концентрации 20 мкг⋅см-3 с наночастицами колоидного золота со средним диаметром 30 нм, мембрана для образца и адсорбирующая мембрана. На аналитическую мембрану в тестовой зоне нанесены моноклональные антитела, клон НР-1811 в концентрации 12 мкг⋅см-3, а в контрольной зоне - антивидовые антитела козы против Ig мыши в концентрации 10 мкг⋅см-3. Изобретение обеспечивает определение белка cagA H. pylori в различных биологических материалах. 1 ил., 1 табл., 3 пр.