Способ оценки активности α-кетоглутаратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы нарушения энергетического обмена в фетоплацентарном барьере ворсинок плаценты. Способ включает определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на α-кетоглутаратдегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности α-кетоглутаратдегидрогеназы до 34,6±2,78 усл.ед. оценивают угрозу нарушения развития плода. 2 ил.

 

1. Цель изобретения - разработать способ оценки активности α-кетоглутуратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, отражающий характер активности энергетических процессов в фетоплацентарном барьере при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке гистохимического способа определения активности α-кетоглутаратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности.

3. Раскрытие изобретения

Альфа-кетоглутарат образуется при дезаминировании аминокислот и поступает в цикл Кребса, тем самым связывая углеводный и белковый обмен. В цикле Кребса α-кетоглутарат посредством α-кетоглутаратдегидрогеназного комплекса подвергается окислительному декарбоксилированию [7]. Альфа-кетоглутаратдегидрогеназа генерирует восстановительные эквиваленты - НАДН+, поставляющие электроны в дыхательную цепь. Кроме этого, в результате реакции образуется сукцинил-КоА, содержащий в своем составе высокоэнергетическую связь, соединяющую ацильные остатки с КоА [3]. Снижение активности α-кетоглутаратдегидрогеназы свидетельствует об угнетении поставки НАДН+ в электронтранспортную цепь митохондрий и, следовательно, о нарушении процессов энергообмена в синцитиотрофобласте, от которого зависит нормальное развитие плода.

4. Новая техническая задача

Определить уровень активности α-кетоглутаратдегидрогеназы при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременных на третьем триместре гестации с целью оценить характер состояния энергетического обмена в фетоплацентарном барьере в период гестации.

5. В доступной литературе известен цитобиохимический способ выявления митохондриальных функций и дисфункций [2, 4] по активности α-кетоглутаратдегидрогеназы на лимфоцитах в мазке крови, отличающийся сложностью выполнения и расчетов. Кроме этого, активность α-кетоглутаратдегидрогеназы в головном мозге при нейродегенеративных заболеваниях, в основном, при болезни Альцгеймера [6, 8], изучается иммуногистохимическим методом, недостатком которого является необходимость дорогостоящих реактивов, оборудования и длительного времени исполнения. Существует также биохимический метод выявления α-кетоглутаратдегидрогеназы в сердце, не дающий представления о месте локализации фермента [5].

В отличие от вышеперечисленных прототипов в данной работе имеются существенные отличия: 1. Объектом исследования является плацента. 2. Изменения активности α-кетоглутаратдегидрогеназы происходят под влиянием обострения цитомегаловирусной инфекции во время беременности. 3. Использование данного метода позволяет судить о состоянии энергетического обмена в фетоплацентарном барьере, влияющего на развитие плода. Метод прост в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов, обладает хорошей разрешающей способностью и может быть рекомендован в проведении научно-исследовательских работ и для лабораторной диагностики.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 36 беременных женщин 18-25 лет с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во время гестации, контрольную группу составили 22 беременных с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливался по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), JgM или увеличение титра антител JgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляли методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляли методами ПНР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Активность α-кетоглутаратдегидрогеназы гистохимически определяли на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани плаценты следующим методом. Метод основан на восстановлении соли тетразолия в формазан электронами, акцептируемыми от субстрата через кофермент НАД [1]. Субстратом служил 0,1 М раствор натриевой соли α-кетоглутаровой кислоты фирмы «Sigma» (США). Инкубационный раствор готовился на основе 0,1М фосфатного буфера рН 7,2-7,4 с добавлением нитросинего тетразолия фирмы «ICN Biomedicals)) (США) в конечной концентрации 5 мМоль, НАД+ фирмы «Applichem» (Германия) - 1 мМоль.

Состав инкубационной среды:

- 0,1 М фосфатный буфер рН 7,2-7,4 - 1 мл;

- нитросиний тетразолий - 1 мг;

- НАД+ - 1 мг;

- натриевая соль α-кетоглутаровой кислоты - 16,8 мг.

6.4. В 1 мл инкубационного раствора помещают свежеприготовленные срезы ткани плаценты человека. Инкубацию проводят при 37°C в течение 30 минут. По окончании инкубации срезы промывают дистиллированной водой, фиксируют в 10%-ном нейтральном формалине, вновь промывают дистиллированной водой, подсушивают и заключают в глицерин-желатин. Контрольные срезы инкубируют в среде, содержащей вместо раствора α-кетоглутарата натрия адекватное количество фосфатного буфера. Полученные гистологические препараты изучают цитофотометрическим компьютерным методом с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).

6.5. Статистический анализ и обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений M±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий использовался непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимались во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений, непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

7. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие результаты. Гистохимическая реакция выявления активности α-кетоглутаратдегидрогеназы является достаточно специфичной. На гистохимических препаратах плацент женщин, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции с регистрацией роста титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 в третьем триместре гестации, отмечается снижение активности α-кетоглутаратдегидрогеназы до 34,6±2,78 усл. ед. (контроль - 51,4±1,59 усл. ед.) (фигура 1, 2).

Таким образом, снижение активности α-кетоглутаратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте плаценты при нарастании титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 указывает на снижение энергетического обмена в плаценте, что создает угрозу нарушению развития плода.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на α-кетоглутаратдегидрогеназу в плаценте женщины, перенесшей на третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции с титром антител класса G 1:1600. Отмечается снижение активности гистохимической реакции до 34,6±2,78 усл. ед. Увеличение - 10×100.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на α-кетоглутаратдегидрогеназу в плаценте женщины контрольной группы (не болевшей на всем протяжении гестации). Интенсивность гистохимической реакции - 51,4±1,59 усл. ед. Увеличение - 10×100.

Литература

1. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. - М.: Мир, 1982. 272 с.

2. Хундерякова Н.В., Захарченко М.В., Захарченко А.В., Романова О.И., Кондрашова М.Н. Новый микроскопический высокочувствительный метод выявления митохондриальных функций и дисфункций в организме животных и человека по исследованию митохондрий лимфоцитов в мазке крови // Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии животных: материалы III Международной интернет-конференции. Казань, 3-6 апреля 2012. Казань: "Казанский университет". 2012. С.135-148.

3. Gibson G.E., Blass J.P., Beal M.F., Bunik V. The alpha-ketoglutaratedehydrogenase complex: a mediator between mitochondria and oxidative stress in neurodegeneration // Mol. Neurobiol. 2005. Vol. 31, №1-3. P. 43-63.

4. Kondrashova M.N., Zakharchenko M.V., Khunderyakova N.V. Preservation of the in vivo state of mitochondrial network for ex vivo physiological study of mitochondria // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2009. Vol. 41. P. 2036-2051.

5. Markiewicz J., Strumiło S.A. Some regulatory properties of the 2-oxoglutarate dehydrogenase complex from European bison heart // Acta Biochim. Pol. 1995. Vol. 42, №3. P. 339-346.

6. Mizuno Y., Matuda S., Yoshino H., Mori H., Hattori N., Ikebe S. An immunohistochemical study on alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex in Parkinson′s disease // Ann. Neurol. 1994. Vol. 35, №2. P. 204-210.

7. Sheu K.F., Blass J.P. The alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1999. Vol. 893. P. 61-78.

8. Sheu K.F., Calingasan N.Y., Lindsay J.G., Gibson G.E. Immunochemical characterization of the deficiency of the alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex in thiamine-deflcient rat brain // J. Neurochem. 1998. Vol. 70, №3. P. 1143-1150.

Способ оценки угрозы нарушения развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на α-кетоглутаратдегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности α-кетоглутаратдегидрогеназы до 34,6±2,78 усл.ед. оценивают угрозу нарушения развития плода.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и касается способа, тест-системы диагностики диабетической нефропатии. Сущность способа заключается в том, что в образце от субъекта определяют биомаркер, который представляет собой подобный антигену CD5.

Изобретение относится к области медицины, к клинико-биохимической лабораторной диагностике, а именно к методам определения модифицированных белков и предназначается для селективного количественного определения степени окисления фибриногена в клинических образцах плазмы крови по содержанию карбонильных групп в фибриновом сгустке.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к лигандам для аффинной хроматографии на основе различных доменов белка A (SpA) Staphylococcus. Лиганд содержит либо несколько доменов C, либо несколько доменов B, либо несколько доменов Z белка SpA.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу отбора партий компонентов культивации, подлежащих применению при культивации клетки млекопитающего, экспрессирующей интересующий белок, когда при культивировании используют по меньшей мере два разных компонента, включающему следующие стадии: а) берут спектры разных партий первого компонента, полученные первым спектроскопическим способом, спектры второго компонента, полученные вторым отличным спектроскопическим способом, и выход интересующего белка из культивационного супернатанта, полученный при культивировании с использованием комбинаций данных разных партий первого и второго компонентов, б) идентифицируют связь слитых спектров этих двух различных спектроскопических методов после расчета счетов РСА спектров с выходом культивирования, в) берут спектр дополнительной партии первого компонента, полученный первым спектроскопическим способом, и спектр дополнительной партии второго компонента, полученный вторым спектроскопическим способом, г) выбирают комбинацию взятого первого компонента и взятого второго компонента, если предсказанный выход из культивационного супернатанта, основанный на связи слитых спектров после расчета счетов РСА спектров, идентифицированной в б), находится в пределах +/-10% среднего выхода, приведенного в а).

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, конкретно к новым аллергенам собаки, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают аллерген Can f 4.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированному тамавидину, и может быть использовано для детекции связанной с биотином субстанции. Получают модифицированный биотин-связывающий белок на основе тамавидина с последовательностью SEQ ID NO: 2, который содержит до 7 мутаций и при этом остаток аспарагина в 115 положении заменен на цистеин.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогноза риска дыхательной недостаточности у септического пациента. Сущность способа состоит в том, что проводят стадию измерения концентрации эндокана в образце крови, полученной от упомянутого септического пациента, и стадию сравнения концентрации эндокана с заданными пороговыми значениями, представляющими концентрации, измеренные в среднем у пациентов, у которых не развилась дыхательная недостаточность.
Изобретение относится к гепатологии и предназначено для прогнозирования ответа на противовирусную терапию при хроническом гепатите С у взрослых и детей. До начала лечения определяют уровень интерферона в плазмоцитоидных дендритных клетках крови и при его значении 136,7 пг/мл и более прогнозируют эффективность противовирусной терапии.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой пептид, который имеет аминокислотную последовательность, состоящую из смежных аминокислот, полученных из белка WT1, и индуцирует WT1-специфические хелперные Т-клетки связыванием с молекулой МНС класса II.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и клинической фармакологии, и предназначено для оценки функциональной активности гликопротеина-Р (Pgp) в эксперименте и клинике для осуществления эффективной и безопасной фармакотерапии субстратами данного белка-транспортера.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к применению пептида, состоящего из по меньшей мере 8 последовательных аминокислотных остатков последовательности, представленной в SEQ ID NO:3, для диагностики рассеянного склероза, что может быть использовано в медицине. Диагностируют рассеянный склероз или предрасположенность к рассеянному склерозу у пациента по присутствию антитела против KIR4.1 в образце пациента. Изобретение позволяет получить альтернативные средства и способы диагностики и/или лечения рассеянного склероза. 5 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности трансфузиологии, и результаты его будут востребованы в практической медицине. Способ касается отбора доноров для получения плазмы крови с целью лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов, путем исследования иммунологических показателей крови. Исследуют содержание бактерицидного белка, увеличивающего проницаемость клеточных мембран, и забор крови осуществляют у лиц, в плазме крови которых его концентрация составляет более 1,5 нг/мл у мужчин и более 1,0 нг/мл у женщин. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики генетической предрасположенности к риску развития ишемического инсульта у больных с фибрилляцией предсердий (ФП). Сущность способа заключается в том, что осуществляют анализ генов системы гемостаза: полиморфизма -455G>A гена FBG, полиморфизма 10976G>A гена FVII, полиморфизма -5Т>С гена GPIβα, полиморфизма 807С>Т гена GPIα. При этом присваивают 0%, при обнаружении GG полиморфизма -455G>A гена FBG, АА полиморфизма 10976G>А гена FVII, ТТ полиморфизма -5Т>С гена GPIβα, СС полиморфизма 807С>Т гена GPIα. Присваивают 50% при обнаружении GA полиморфизма -455G>A гена FBG, GA полиморфизма 10976G>A гена FVII, ТС полиморфизма -5Т>С гена GPIβα, СТ полиморфизма 807С>Т гена GPIα. Присваивают 100% при обнаружении АА полиморфизма -455G>A гена FBG, GG полиморфизма 10976G>А гена FVII, СС полиморфизма -5Т>С гена GPIβα, ТТ полиморфизма 807С>Т гена GPIα. Генетический риск развития ишемического инсульта при ФП рассчитывают по формуле: (a+b+c+d)/n, где: а - количество процентов, соответствующее генотипу полиморфизма -455G>A гена FBG, b - количество процентов, соответствующее генотипу полиморфизма 10976G>А гена FVII, с - количество процентов, соответствующее генотипу полиморфизма -5Т>С гена GPIβα, d - количество процентов, соответствующее генотипу полиморфизма 807С>Т гена GPIα, n - количество исследованных генотипов; риск оценивают как низкий при значении от 0 до 30%, средний - от 30 до 60%, высокий - от 60% и более. Предлагаемый способ позволяет выделить генетический риск развития ишемического инсульта при наличии у пациента ФП и повысить качество персонифицированной профилактики развития ишемического инсульта у данной группы больных. 5 ил., 5 табл. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, и касается способа прогнозирования эффективности монотерапии пероральным сахароснижающим препаратом метформином у больных сахарным диабетом 2 типа. Сущность способа заключается в том, что у больных сахарным диабетом 2 типа выделяют ДНК из периферической венозной крови с последующим проведением полимеразной цепной реакции (ПЦР) и проведением анализа на выявление полиморфизма А>С rs 622342 гена ОСТ1. При выявлении генотипа АА в участке rs 622342 гена ОСТ1 прогнозируют эффективность монотерапии метформином в качестве сахароснижающего препарата у больных сахарным диабетом 2 типа, а при выявления генотипа АС или СС в участке rs 622342 гена ОСТ1 прогнозируют неэффективность монотерапии метформином в качестве сахароснижающего препарата у данной категории больных. Испоотзование способа позволяет повысить точность и специфичность прогнозирования эффективности монотерапии пероральным сахароснижающим препаратом метформином у больных сахарным диабетом 2 типа. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии и гемостазиологии, и может быть использовано для оценки степени тяжести воспалительных заболеваний органов малого таза. Сущность способа: производят взятие венозной крови и подготовку образцов проб плазмы крови. Определяют количественные значения уровней фибриногена ФГ (г/л), растворимых фибрин-мономерных комплексов РФМК (мг/ 100 мл) и D-димеров (нг/мл). Анализируют полученные данные, рассчитывая с их учетом коэффициент K по формуле . При значении 4≤K≤6 - судят о легкой степени тяжести, при значении 6<K≤8 - средней степени тяжести, при значении K>8 - тяжелой степени тяжести. Изобретение позволяет повысить объективность клинико-лабораторной оценки степени тяжести воспалительных заболеваний органов малого таза во время выполнения скрининга пациенток, обеспечивает возможность выбора на основании полученных результатов места проведения дальнейшего лечения в условиях смотрового кабинета поликлиники, женской консультации или гинекологического стационара. 4 пр.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа определения таких характеристик, как типирование, потенциальная устойчивость по меньшей мере к одному антимикробному средству и фактора вирулентности, по меньшей мере, одного микроорганизма из образца. Представленный способ включает идентификацию указанного микроорганизма и определение характеристик. Определение характеристик осуществляют масс-спектрометрией типа MS/MS в режиме MRM, одновременно, в одном устройстве для масс-спектрометрии, с использованием белков, пептидов и/или метаболитов указанного микроорганизма в качестве маркеров характеристик. Изобретение позволяет быстро и с небольшими затратами определять характеристики микроорганизмов и может быть использовано в повседневной клинической практике. 1 н. и 26 з.п. ф-лы, 23 табл., 12 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа получения связывающего агента или смеси связывающих агентов, способных связываться с эпитопом, содержащимся в аминокислотной последовательности, соответствующей С-концевой части препро-вазопрессина, состоящей из аминокислот 146-163, но не содержащей аминокислоту 164, где указанный способ включает стадии получения связывающего агента с использованием формирующего агента; определения способности связывающего агента связываться с аминокислотной последовательностью длиной по меньшей мере 12 аминокислот, содержащейся в аминокислотной последовательности, соответствующей С-концевой части, но не содержащей аминокислоту 164 препро-вазопрессина; отбора связывающего агента из множества связывающих агентов. Группа изобретений также касается формирующего агента для получения связывающего агента или смеси связывающих агентов; применения связывающего агента для качественного или количественного детектирования препро-вазопрессина или его фрагментов в биологическом образце. Группа изобретений обеспечивает качественное или количественное детектирование препро-вазопрессина или его фрагментов в биологическом образце. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 1 пр., 5 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым аллергенам лошади, и может быть использовано в медицине для профилактического или терапевтического лечения или диагностики аллергии типа I на лошадей. Получают лошадиный аллерген, который представляет собой секретоглобин, имеющий молекулярную массу 15 кДа в невосстанавливающих условиях и содержащий первую пептидную цепь с молекулярной массой примерно 5 кДа и вторую пептидную цепь с молекулярной массой примерно 10 кДа, связанные друг с другом. Также получают рекомбинантную форму указанного аллергена. Изобретение позволяет получить рекомбинантным путем аллерген лошади с полностью установленной аминокислотной последовательностью. 12 н. и 1 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов мониторинга эффективности противоопухолевого лечения немелкоклеточного рака легкого. Способ включает определение уровней экспрессии микроРНК-маркеров в периферической крови больного после хирургического лечения, причем определяют уровни микроРНК-19б, микроРНК-125б и сочетания микроРНК-125б/микроРНК-19б через 2 недели, 3 и 6 месяцев, 1 и 2 года после проведенного лечения. При получении линейной модели динамики изменения уровней экспрессии микроРНК, характеризующейся постепенным увеличением микроРНК-19б, снижением микроРНК-125б и сочетания микроРНК-125б/микроРНК-19б относительно исходных значений, определяют прогрессирование заболевания, а при получении квадратичной модели динамики изменения уровней экспрессии микроРНК, характеризующейся чередованием увеличения или снижения уровней экспрессии исследуемых микроРНК на снижение либо увеличение аналогичных показателей относительно исходных значений, определяют ремиссию заболевания. Изобретение обеспечивает повышение точности ранней диагностики прогрессирования немелкоклеточного рака легкого за счет проведения регулярного сравнительного анализа целевых профилей экспрессии микроРНК на этапах динамического наблюдения. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной фармакологии, и может быть использовано для получения меченых катионных дендримерных пептидов для внутриклеточной доставки нуклеиновых кислот (НК). Меченые катионные дендримерные пептиды представлены формулой: X-AC(Y)-NH2, где X является дендримерным катионным пептидом с аминокислотным составом, выбранным из группы, состоящей из (K)4(K)2K, (R)8(K)4(K)2K, (RRRKK)2KKK и (K8)(K4)(K2)K, где K представляет собой лизин; R представляет собой аргинин, А представляет собой аланин, С представляет собой цистеин, Y представляет собой присоединенный по меркаптогруппе цистеина флуоресцентный цианиновый краситель Су5. Использование данной конструкции меченых дендримерных пептидов, имеющих связывающий модуль для взаимодействия с НК, и сигнальный модуль, содержащий флуоресцентную метку - цианиновый краситель Су5, позволяет визуализировать распределения препарата по органам и тканям, обеспечивая трансфекционную активность, близкую к трансфекционной активности комплексов нуклеиновой кислоты с немеченым дендримерным пептидом. 6 ил., 1 табл., 3 пр.
Наверх