Средство, обладающее эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой средство, обладающее эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения, характеризующееся тем, что оно включает гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинин гидрохлорид, при этом мольное соотношение гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и указанного L-аргинина гидрохлорида составляет 1:1. Изобретение обеспечивает получение малотоксичного средства, а также расширение арсенала средств, обладающих высоким эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения. 2 табл.

 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и касается производных гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), обладающих эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения.

Гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) играет важную роль в регуляции системы кровообращения, в том числе мозгового и коронарного, у млекопитающих. Поэтому поиск новых средств для лечения сосудистых заболеваний, протекающих на фоне эндотелиальной дисфункции среди производных ГАМК, является перспективным направлением медицинской химии.

Известно, что на основе производных ГАМК созданы лекарственные препараты аминалон, фенибут, баклофен и др. Они широко используются в практической медицине, главным образом, для лечения заболеваний центральной нервной системы [1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: «Новая волна». 2012; 2. Раевский, К.С. Нейрофармакологические и нейрохимические аспекты / К.С. Раевский, В.П. Георгиев // Медиаторные аминокислоты 1986. М.: «Медицина». - 165 с.; 3. Ковалев Г.В. Ноотропные средства. Волгоград. Нижне-Волжское книжное издательство. 1990. 368 с.].

Известно также, что L-аргинин, как субстрат синтеза оксида азота, улучшает эндотелиальную функцию кровеносных сосудов при стенокардии, сердечно-сосудистой недостаточности, сахарном диабете и гиперхолестеринемии [1. Львова О.А. и др. К вопросу о роли оксида азота в норме и при патологии нервной системы // Electronic scientific magazine "System integration in public health services". - 2011. - C. 20.; 2. Andrew P.J., Mayer B. Enzymatic function of nitric oxide synthases // Cardiovascular research. - 1999. - T. 43. - №.3. - С. 521-531]. L-аргинин входит в состав композиций, обладающих эндотелиопротекторным, вазодилатирующим и ангиопротекторным эффектом (RU 2464019). Применение L-аргинина разрешено в виде биологически активных добавок (Вазотон) в терапии инсулинонезависимого сахарного диабета, физических и умственных перегрузках, хронической ишемической болезни сердца, атеросклерозе и др. [http://www.rlsnet.ru/baa_tn_id_31639.htm].

Наиболее близким по структуре к заявляемому гидрохлориду метил-4-амино3-фенилбутаноату является лекарственный препарат фенибут (гидрохлорид 4-амино-3-фенилбутановой кислоты). Он используется в медицине в качестве средства, действующего на центральную нервную систему (ЦНС) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: «Новая волна». 2012]. Известны его антистрессорное, антиоксидантное действия и антигипоксические свойства [1. Меерсон Ф.З. Динамика и физиологическое значение активизации ГАМК-системы в головном мозге и сердечной мышце при эмоционально-болевом стрессе / Ф.З. Меерсон, P.M. Лифшиц, В.И. Павлова // Вопросы медицинской химии. - 1981. - Т. 27, №1. - С. 35-39; 2. Ковалев Г.В. Некоторые итоги и перспективы фармакологического изучения нейроактивных аминокислот и их аналогов / Г.В. Ковалев // Фармакология и клиническое применение нейроактивных аминокислот и их аналогов / под. ред. Г.В. Ковалева. - Волгоград, 1985. - С. 11-21]. Он уменьшает вазовегетативные симптомы при неврогенных поражениях сердца и желудка и нормализует процессы пероксидации липидов. Однако фенибут не используется в качестве средства, действующего на сердечно-сосудистую систему.

Современные социально-экономические условия характеризуются неуклонным ростом сердечно-сосудистых заболеваний, приводящих к инвалидизации и преждевременной смертности населения трудоспособного возраста.

Известно, что одним из универсальных механизмов патогенеза многих заболеваний, в том числе и таких распространенных, как атеросклероз, гипертоническая болезнь, нарушения мозгового кровообращения, сахарный диабет и связанных с ним макро- и микроангиопатий, является дисфункция эндотелиальной системы, в основе развития которой лежит снижение синтеза оксида азота (NO) в эндотелиоцитах [1. Шумахер Г.И. Роль дисфункции эндотелия в запуске иммунопатологических реакций при хронической ишемии головного мозга // Бюллетень Сибирской медицины - 2008. - №5. - 214-219; 2. Maltais S. The bone marrow-cardiac axis: role of endothelial progenitor cells in heart failure // Eur J Cardiothorac Surg. - 2011. - №39. - 368-374; 3. Задионченко B.C., Адашева Т.В. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности // Российский медицинский журнал. - 2001. - 1 (145). - 11-15].

Известно, что в комплексной терапии сердечно-сосудистых и эндокринных заболеваний, протекающих на фоне эндотелиальной дисфункции, применяются препараты, обладающие плейотропными эффектами.

Однако, несмотря на широкий спектр лекарственных средств плейотропного действия, эффективность их как эндотелиопротекторов остается низкой и, как правило, они обладают серьезными побочными эффектами, которые особенно при комбинированной терапии могут суммироваться. Кроме этого в последние годы эндотелий сосудов рассматривается как самостоятельная мишень терапевтического воздействия для профилактики и лечения различных сердечно-сосудистых заболеваний [Тюренков И.Н. и др. Эндотелиопротекторы - новый класс фармакологических препаратов // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2012. - №.7 - С. 50-57].

Поэтому поиск и разработка новых высокоэффективных и безопасных средств с широким спектром эндотелиопротекторной активности, позволяющих улучшить вазодилатирующую и антитромботическую функцию эндотелия и вследствие этого снижать риск развития сердечно-сосудистых осложнений, является одной из актуальных задач современной фармакологии.

Задача изобретения - получить высокоэффективное и малотоксичное производное ГАМК, обладающее эндотелиопротекторным действием, а также расширить ассортимент подобных средств.

Поставленная задача реализуется предлагаемым комбинированным средством, включающим гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинин гидрохлорид (МЭФА). Причем соотношение гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат : L-аргинин гидрохлорид = 1:1. При этом получают средство, обладающее эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушении мозгового кровообращения.

Лекарственное средство содержит эффективную дозу композиции гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинина гидрохлорида, фармакологически приемлемые носители и целевые добавки.

Технический результат предлагаемого изобретения заключается в том, что предлагаемое средство малотоксично и способно комплексно оказывать эндотелиопротекторное действие в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример

Получение композиции гидрохлорида метил 4-амино-3-фенилбутаноата и гидрохлорида L-аргинина состоит из двух стадий и заключается в получении гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата (МАФ) путем взаимодействия 4-амино-3-фенилбутановой кислоты с метиловым спиртом в присутствии тионилхлорида и последующем добавлении к МАФ гидрохлорида L-аргинина.

Гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат. Раствор 35 г (0,16 мол) гидрохлорида 4-амино-3-фенилбутановой кислоты в 224 мл метанола охлаждают до 5°C-10°C и при перемешивании порциями добавляют 11,9 мл (0,16 мол) тионилхлорида, поддерживая ту же температуру. Затем реакционную массу нагревают в течение двух часов на водяной бане, температура бани при этом 60°C-70°C, после чего смесь охлаждают до температуры 18°C-20°C. Кристаллический продукт отфильтровывают и выделяют гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноата. Фильтрат упаривают на 2/3 первоначального объема и отделяют дополнительное количество гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата. Выход 34,6 г (93,5%). Т. пл. 175-176°C (метанол). Найдено %: С 57.79, 57.77; Н 7.18, 7.17; N 6.08, 6.10. C₁₁H₁₆NO₂Cl. Вычислено %: С 57.52; Н 6.97; N 6.10. ИК спектр (ν, см^-1 KBr): 3030-2785 (NH₃ ⁺); 1725 (С=O). ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆, δ, м.д.): 7.21-7.27 (5Н, С₆Н₅), 2.46-3.06 (5Н, 2 СН₂, СН), 3.43 (3Н, ОСН₃), 8.17 (3Н, NH₃ ⁺). Композиция гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинина гидрохлорида. В шаровую мельницу загружают 22.95 г (0.1 моль) гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и 21.05 (0.1 моль) L-аргинина гидрохлорида. Смесь тщательно перемешивают в течение 0,5-1 часа, затем выгружают полученный продукт. Выход количественный.

Полученное таким образом комбинированное средство было изучено в опытах на животных.

Далее приводятся примеры, иллюстрирующие специфическую активность композиции гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинина гидрохлорида (МЭФА).

Для изучения эндотелиопротекторного действия использованы стандартные методы доклинических исследований лекарственных средств [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. Под ред. А.Н. Миронова. М.: Гриф и К, 2012. 944 с.].

Обработка полученных данных проводилась с использованием статистических методов обработки результатов исследования, которые позволяют оценить степень фармакологической активности вещества.

В работе использованы белые беспородные половозрелые крысы-самцы и самки, рандомизированные по массе (220-240 г), содержавшиеся в условиях лабораторного вивария, в течение не менее двух недель до начала эксперимента, на стандартном пищевом рационе, при свободном доступе к воде, при естественном световом режиме. Содержание животных проводилось с учетом правил, принятых Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Освещение вивария было естественным, температурный режим соответствовал +20-+24°C при влажности воздуха до 65%. Еженедельно в помещении вивария проводилась 20 мин бактерицидная обработка. Эксперименты проводились в одно и то же время суток. Приводимые в таблицах значения показателей представляют собой среднестатистическую оценку результатов измерения параметров с учетом принятых уровней достоверности (р<0,05).

Острая токсичность композиции МЭФА оценивалась по выживаемости крысах-самцах и самках через 24 часа после парентерального (внутрибрюшинного) и энтерального (внутрижелудочного) введения вещества. Усредненные значения показателей ЛД₅₀ на крысах-самцах - при парентеральном введении 365.6-489.7 мг/кг, при энтеральном - 2862.4-2947.6 мг/кг; на крысах-самках - при парентеральном введении 334.3-392.9 мг/кг, при энтеральном - 1862.4-1947.7 мг/кг.

Для изучения эндотелиопротекторного действия композиции МЭФА использовали модель эндотелиальной дисфункции, вызванной экспериментальным сахарным диабетом (ЭСД) и острым нарушением мозгового кровотока (ОНМК), вызванного одномоментной билатеральной окклюзией общих сонных артерий.

В модели эндотелиальной дисфункции, вызванной экспериментальным ЭСД, в качестве препарата сравнения использован метформин, широко применяющийся для лечения сахарного диабета второго типа (СД2) и обладающий свойством улучшать функцию эндотелия [1. Деркач К.В. и др. Влияние длительной обработки метформином на активность аденилатциклазной системы и NO-синтаз в мозге и миокарде крыс с ожирением // Цитология. - 2015. - Т. 57. - №.5. - 360-369. 2. Agarwal N. et al. Metformin reduces arterial stiffness and improves endothelial function in young women with polycystic ovary syndrome: a randomized, placebo-controlled, crossover trial // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. - 2010. - T. 95. - №.2. - 722-730.].

В модели эндотелиальной дисфункции, вызванной острым нарушением мозгового кровообращения в качестве препаратов сравнения использованы ноотропный препарат фенибут [1. Тюренков И.Н. и др. Гравидопротекторное действие фенибута при экспериментальной преэклампсии // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2014. - Т. 77. - №.11. - 6-10; 2. Волотова Е.В. и др. Сравнительный анализ влияния β-фенильных производных глутаминовой и γ-аминомасляной кислот на мозговой кровоток и функциональное состояние эндотелия сосудов головного мозга животных после необратимой окклюзии общих сонных артерий // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2013. - Т. 76. - №.6. - С. 11-13]; препарат, стимулирующий мозговое кровообращение кавинтон [Ваизова О.Е., Венгеровский А.И., Алифирова В.М. Влияние винпоцетина (кавинтона) на функцию эндотелия у больных хронической ишемией головного мозга // Журн неврол и психиат. - 2006. - Т. 16. - С. 44-50], а также препарат метформин.

Эндотелиопротекторный эффект композиции МЭФА изучался в дозе 10 мг/кг (внутрижелудочно), препараты сравнения: метформин - в дозе 400 мг/кг, фенибут - в клинически эффективной дозе 25 мг/кг, кавинтон - 5 мг/кг.

Эндотелиопротективное действие МЭФА сопоставлялось также с таковым для каждого компонента отдельно - гидрохлоридов метил-4-амино-3-фенилбутаноата (МАФ) и L-аргинина (АГХ) в дозах эквивалентых соотношению их в составе МЭФА: гидрохлорид МАФ - 5.2 мг/кг и L-аргинин - 4.8 мг/кг.

Влияние МЭФА на функцию эндотелия крыс с ЭСД (таблица 1)

Экспериментальный сахарный диабет у животных вызывали однократным внутрибрюшинным введением 0.9% нормального солевого раствора аллоксана в дозе 150 мг/кг. В результате активации перекисного окисления липидов, гипергликемии, глюкозотоксичности и нарушений липидного обмена у животных развивается эндотелиальная дисфункция. Предварительно, за 18 часов до введения аллоксана животных не кормили.

Для выполнения исследования были сформированы следующие группы животных по 6 крыс в каждой: контрольная группа 1 - группа позитивного контроля (интактные животные, которые перорально получали физиологический раствор); контрольная группа 2 - группа негативного контроля (животные, которым вводили аллоксан и соответственно массе получали перорально физиологический раствор); опытная группа 3 - животные с ЭСД, получавшие композицию МЭФА в дозе 10 мг/кг; опытная группа 4 - животные с ЭСД, получавшие гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат (МАФ) в дозе 5.2 мг/кг; опытная группа 5 - крысы с ЭСД, получавшие L-аргинин гидрохлорид (АГХ) в дозе 4.8 мг/кг; опытная группа 6 - крысы с ЭСД, получавшие метформин в дозе 400 мг/кг.

Изучено влияние МЭФА на вазодилатирующую функцию эндотелия сосудов в условиях ЭСД. Исследование вазодилатирующей функции эндотелия у животных осуществляли в проекции среднемозговой артерии в теменной области мозга крыс при внутривенном введении ацетилхолина (АЦХ, производитель Sigma-Aldrich) в дозе 0.01 мг/кг (для анализа стимулируемой выработки оксида азота) и блокатора синтеза оксида азота - нитро-L-аргинина (производитель Sigma-Aldrich) в дозе 10 мг/кг (для анализа базальной выработки оксида азота). Для оценки эндотелий-независимой вазодилатации вводили нитроглицерин (0.007 мг/кг, МТХ, Москва). Тестирование эндотелиальной дисфункции осуществлялось на 14-й день после ежедневного введения композиции МЭФА, ее компонентов, взятых по отдельности и препарата сравнения [ультразвуковой допплерограф, ООО «СП-Минимакс», г. Санкт-Петербург]. Эндотелий-зависимую вазодилатацию под влиянием МЭФА оценивали по изменению мозгового кровотока (МК) у экспериментальных животных после введения модификаторов синтеза оксида азота [Тюренков И.Н., Воронков А.В. Методический подход к оценке эндотелиальной дисфункции в эксперименте // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2008. - Т. 71. - №. 1. - С. 49-51]. Уровень изменения мозгового кровотока после введения ацетилхолина, нитро-L-аргинина, нитроглицерина представлен в процентах относительно исходного уровня, принятого 100% (табл. 1, 2).

Степень развития эндотелиальной дисфункции оценивали по величине индекса эндотелиальной дисфункции (ИЭД) - соотношение между эндотелий-зависимой (ЭЗВД) и эндотелий-независимой (ЭНЗВД) вазодилатацией. При этом, чем ближе значения ИЭД к 1, тем выше степень развития эндотелиальной дисфункции. ИЭД рассчитывали по формуле: ИЭД=[1-(ЭЗВД/ЭНЗВД)].

Результаты эксперимента показали, что у интактных животных контрольной группы 1 при введении АЦХ наблюдался прирост мозгового кровотока (МК) на 38.4±3.6% от исходного (табл. 1). У животных контрольной группы 2 введение АЦХ вызывало в 3.7 раза меньшее (на 10.4±0.4%) увеличение мозгового кровотока, что является показателем выраженного уменьшения вазодилатирующей функции эндотелия. У животных опытных групп 3, 4, 5 и 6 при введении АЦХ наблюдалось увеличение МК на 25.2%, 13.5, 16.2 и 26.6% соответственно по сравнению с исходными показателями, что значительно выше, чем у животных контрольной группы 2 (табл. 1). Таким образом, композиция МЭФА (опытная группа 3) по влиянию на стимулируемую выработку оксида азота оказывала сопоставимый эффект с препаратом сравнения метформином (опытная группа 6).

При введении нитро-L-аргинина (блокатора синтеза NO) у крыс контрольной группы 1 наблюдалось значительное снижение на (41.8±3.1%) скорости МК от исходного уровня, у контрольной группы 2 - лишь на 12.6±0.9%, по сравнению с исходными данными (табл. 1). У животных опытных групп 3 и 6 после введения нитро-L-аргинина наблюдалось уменьшение МК на 28.5±1.8% и 31.5±1.2% соответственно, а в опытных группах 4 и 5 этот показатель снижался в меньшей степени - на 13.3±2.4% и 16.6±2% соответственно (табл. 1).

Эндотелий-независимая вазодилатация (ЭНЗВД), вызванная введением нитроглицерина, как донатора NO, во всех группах животных была сопоставимой: скорость кровотока в проекции среднемозговой артерии увеличивалась на 48.3±3.9% (группа 1), 47.3±5.2% (группа 2), 45.5±3.8% (группа 3), 46.4±5.8% (группа 4), 41.5±2.7% (группа 5) и 48.8±4.5% (группа 6), что свидетельствует о сохранении ЭНЗВД у животных с ЭСД (табл. 1).

Сравнительная оценка индекса эндотелиальной дисфункции показала, что наивысшее значение ИЭД наблюдалось у животных контрольной группы 2, а у крыс опытных групп 3 и 6 - наиболее выраженное его снижение.

Таким образом, композиция МЭФА улучшает нарушенную вазодилатирующую функцию эндотелия у экспериментальных животных.

Параметры прироста и падения скорости МК при активации и блокаде синтеза NO у животных опытной группы 3, а также значения индекса эндотелиальной дисфункции свидетельствуют, что заявляемое средство МЭФА обладает эндотелиопротекторным действием. Оно способно увеличивать стимулируемый и базальный синтез оксида азота в значительно большей степени, чем ее компоненты гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат и L -аргинин гидрохлорид (АГХ) и сопоставимо по действию с метморфином.

Влияние МЭФА на функцию эндотелия крыс в условиях острого нарушения мозгового кровотока (таблица 2)

Острое нарушение мозгового кровотока (ОНМК) моделировалось следующим образом: наркотизированным хлоралгидратом (400 мг/кг внутрибрюшинно) животных осуществлялась одномоментная двусторонняя перевязка общих сонных артерий (ОСА). За 24 часа до операции животных не кормили и сохраняли свободный доступ к воде.

Исследование вазодилатирующей функции эндотелия у животных осуществляли в проекции среднемозговой артерии в теменной области мозга крыс при внутривенном введении ацетилхолина (АЦХ) в дозе 0.01 мг/кг (для анализа стимулируемой выработки оксида азота), и нитроглицерина в дозе 0.007 мг/кг (для оценки эндотелий-независимой вазодилатации). Изменение церебрального кровотока регистрировали через 72 часа после окклюзии с помощью ультразвукового допплерографа (ООО «СП-Минимакс», г. Санкт-Петербург), с использованием датчика с рабочей частотой в 25 Гц. Введение модуляторов синтеза оксида азота производилось в верхнюю хвостовую вену животного.

Для проведения эксперимента были сформированы следующие группы животных по 6 крыс в каждой: контрольная группа 1 - группа позитивного контроля (ложнооперированные животные, которым после подведения лигатуры под сосуды общие сонные артерии не затягивались); контрольная группа 2 - группа негативного контроля (животные с одномоментной окклюзией сонных артерий, получавшие дистиллированную воду); опытная группа 3 - животные с ишемией, получавшие композицию МЭФА; опытная группа 4 - животные с ишемией, получавшие гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат (МАФ); опытная группа 5 - крысы с ишемией, получавшие L-аргинин гидрохлорид (АГХ); опытная группа 6 - крысы с ишемией, получавшие фенибут, опытная группа 7 - крысы с ишемией, получавшие кавинтон; опытная группа 8 - крысы с ишемией, получавшие метформин.

Композицию МЭФА, ее компоненты (гидрохлорид метил 4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинин гидрохлорид) и препараты сравнения фенибут и кавинтон вводили внутрижелудочно через 2 часа после окклюзии и далее один раз в сутки в течение трех дней. Активность МЭФА и препаратов сравнения оценивали по изменению мозгового кровотока в проекции средней мозговой артерии и значению индекса эндотелиальной дисфункции [соотношение между эндотелий-зависимой (ЭЗВД) и эндотелий-независимой (ЭНЗВД) вазодилатацией].

Результаты исследования показали, что уровень локального мозгового кровотока (МК) после ОСА у животных контрольной группы 2 (2.52 у.е.) был достоверно ниже, чем контрольной группы 1 (4.67 у.е.) (табл. 2). При введении композиции МЭФА у животных опытной группы 3 уровень МК был значительно выше (3.54±0.18 у.е.) по сравнению с таковым контрольной группы 2. При введении АЦХ у животных контрольной группы 1 наблюдался прирост мозгового кровотока на 36.9% от исходного. У крыс контрольной группы 2 почти в два раза меньше - 17.1%. У животных опытных групп 3, 4, 5, 6, 7 и 8 при введении АЦХ наблюдалось увеличение МК на 31.4, 22.3, 23.1, 23.9, 24.7 и 26.2%) соответственно по сравнению с исходными показателями, что выше, чем у крыс контрольной группы 2 (табл. 2).

При введении нитро-L-аргинина (блокатора синтеза NO) у крыс контрольной группы 1 наблюдалось значительное снижение на (38.2±1%) скорости МК от исходного уровня, у контрольной группы 2 - на 9.6±0.9%, по сравнению с исходными данными (табл. 2). В группе животных опытной группы 3 после введения нитро-L-аргинина наблюдалось уменьшение МК на 30.9±1.7%, а у крыс опытных групп 4, 5, 6, 7, 8 этот показатель снижался в меньшей степени - от 13.3 до 23.3% (табл. 2).

Таким образом, введение композиции МЭФА повышало степень эндотелий-зависимой вазодилатации у животных опытной группы 3 по сравнению с группой крыс негативного контроля 2 (табл. 2). Сохранность адекватного уровня мозгового кровотока и близкая к нормальной реакция эндотелия мозговых сосудов на введение ацетилхолина, в опытной группе 3 свидетельствует о церебровазодилатирующей активности МЭФА и способности улучшать вазодилатирующую функцию эндотелия.

Для оценки эндотелий-независимой вазодилатации животным вводился нитроглицерин (табл. 2). При введении нитроглицерина увеличение МК было статистически сопоставимым во всех экспериментальных группах животных (табл. 2). При этом процентное соотношение прироста МК на введение индукторов эндотелий-зависимой и эндотелий-независимой вазодилатации показало, что выраженность эндотелиальной дисфункции значительно меньше у животных опытной группы 3.

Сравнительная оценка индекса эндотелиальной дисфункции показала, что у животных контрольной группы 2 значение ИЭД в 3.5 раза выше (0.56) чем в группе животных контрольной группы 1 (0.16), в то время как у крыс опытных групп 4 и 5 оно снижалось до 0.42 и 0.39, соответственно (табл. 2). Наибольшее снижение ИЭД, по сравнению с контрольной группой 2, наблюдалось у животных опытной группы 3 (0.25) (табл. 2), что свидетельствует о значительном снижении выраженности эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных.

Результаты проведенного эксперимента показали, что композиция МЭФА при введении модификаторов синтеза эндогенного оксида азота (NO) животным в условиях сахарного диабета и недостаточности мозгового кровообращения, не изменяя эндотелий-независимую, увеличивает эндотелий-зависимую вазодилатацию церебральных сосудов, снижая индекс эндотелиальной дисфункции. Эти результаты свидетельствуют, что заявляемое комбинированное средство усиливает NO-синтезирующую функцию и обладает эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения, при этом по влиянию на ЭЗВД превосходит ее компоненты - гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноат и L-аргинин гидрохлорид и препараты сравнения - фенибут, кавинтон, метформин.

Лекарственное средство, содержащее в качестве действующего вещества, композицию гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинина гидрохлорида, в зависимости от выбранных носителей и целевых добавок, может быть изготовлено в любой твердой или жидкой лекарственной форме.

Таким образом, предлагаемое средство обладает выраженными эндотелиопротекторными свойствами при эндотелиальной дисфункции различного генеза, вызванной сахарным диабетом и недостаточностью мозгового кровообращения, имеет низкую токсичность, что предполагает возможность его длительного применения у больных с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также для профилактики и лечения сосудистых осложнений сахарного диабета и др.

Средство, обладающее эндотелиопротекторным действием в условиях экспериментального сахарного диабета и нарушения мозгового кровообращения, характеризующееся тем, что оно включает гидрохлорид метил-4-амино-3-фенилбутаноата и L-аргинин гидрохлорид, при этом мольное соотношение гидрохлорида метил-4-амино-3-фенилбутаноата и указанного L-аргинина гидрохлорида составляет 1:1.