Способ дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных инфекций

Изобретение относится к области медицины, а именно к отоларингологии, и может быть использовано для дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых. Для этого проводят забор периферической крови и определяют относительное содержание субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов, одновременно экспрессирующих CD16, CD11b на поверхностной мембране. Принимают за норму наличие субпопуляции CD16^brightCD11b^dimНГ% от 80 и до 99,9% с высокой плотностью экспрессии CD16 и низкой плотностью экспрессии CD11b. При условии выявления субпопуляции CD16^brightCD11b^brightНГ или CD16^dimCD11b^brightНГ в количестве от 40% и более определяют соответственно острую вирусную инфекцию или острую бактериальную инфекцию. Использование данного способа позволяет обеспечить точность дифференциальной диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых. 3 пр., 1 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано при проведении дифференциальной диагностики острых вирусных и бактериальных инфекций.

Клиническая картина многих инфекционных заболеваний вирусной или бактериальной этиологии в ранние сроки болезни может протекать по сходному сценарию. При верификации диагноза вирусного или бактериального процесса часто возникают определенные сложности, мешающие правильному выбору этиотропной терапии. Имеющиеся современные способы исследования, выявляющие этиологический фактор, требуют определенных временных затрат, что зачастую непозволительно при выборе своевременной адекватной терапии. В этой связи разработка новых дифференциально-диагностических методов, направленных на четкое и быстрое выявление вирусной или бактериальной этиологии острого инфекционного процесса крайне актуально.

Диагностика вирусных и бактериальных инфекций не зависит от их локализации. Так как одним из наиболее распространенных заболеваний во всех возрастных группах является острый тонзиллит (ОТ), дифференцировка указанных инфекций рассмотрена на примере данного заболевания. Вопреки традиционным взглядам сейчас твердо установлено, что причиной острого тонзиллита (ОТ) в большинстве случаев является вирусная (от 70 до 90% случаев), а не бактериальная инфекция. Среди вирусных возбудителей ОТ представлены аденовирус, вирус Эпштейна-Барр и энтеровирус и другие респираторные вирусы (Hsieh Т.Н., Chen P.Y., Huang F.L., Wang J.D., Wang L.C., Lin H.K., Lin H.C., Hsieh H.Y., Yu M.K., Chang C.F., Chuang T.Y., Lee C.Y. Are empiric antibiotics for acute exudative tonsillitis needed in children? // J Microbiol Immunol Infect. 2011 Oct. Vol. 44 (5). P. 328-332). Доля острого бактериального тонзиллита (ОБТ) невелика - 25-30%, однако системную антибактериальную терапию назначают в 95% случаев и, таким образом, в большинстве случаев она оказывается необоснованной.

Как было продемонстрировано в ряде крупных исследований, ни клиническая картина, ни уровень маркеров воспаления не обладают достаточной чувствительностью и специфичностью для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных тонзиллитов, а, значит, не могут быть достаточным основанием для назначения антибактериальной терапии. «Золотым стандартом» диагностики ОБТ остается культуральное исследование материала с небных миндалин. Однако недостаточная доступность этого метода и отсроченность получения результата ограничивают его применение в рутинной практике. Накопленные данные свидетельствуют о высокой чувствительности и специфичности современных систем экспресс-диагностики β-гемолитического стрептококка группы А (БГСА) - инфекции. Однако у взрослых не всегда БГСА является частым этиологическим фактором ОБТ (15-30%), что ограничивает диагностическую значимость данного теста.

Отличить вирусные и бактериальные инфекции помогают маркеры воспаления: лейкоцитоз, С-реактивный белок (СРБ), прокальцитонин (ПКТ). Однако, в литературных источниках приводятся данные, не позволяющие однозначно интерпретировать всякое повышение уровня этих маркеров как признак бактериального воспаления. Уровни трех маркеров воспаления (лейкоциты, СРБ, ПКТ) при разных формах ОТ близки. Уровни лейкоцитов 10-15×10⁹/л и СРБ 30-60 мг/л встречаются одинаково часто при всех формах ОТ, что лишает их диагностической ценности. Лейкоцитоз выше 15×10⁹/л наблюдается и при ОБТ и при остром вирусном тонзиллите, в частности ВЭБ-этиологии, с появлением чаще лимфоцитоза и атипичных мононуклеаров. Атипичные мононуклеары часто даже при ярко выраженных симптомах заболевания появляются в периферической крови лишь через 2-3 недели. Кроме того, при исследовании обычных мазков крови атипичные мононуклеары выявляются в 86% случаев. Также в небольшом количестве атипичные мононуклеары могут наблюдаться при различных других инфекциях (ЦМВ, ВГЧ VI типа, острых респираторных вирусных инфекциях, ветряной оспе, кори, инфекционных гепатитах, токсоплазмозе и др.). Известно, что при ОБТ в крови обнаруживается лейкоцитоз нейтрофильного характера со сдвигом влево, тогда как при острой ВЭБ-инфекции (ОВЭБИ) - лейкоцитоз лимфомоноцитарного характера. В то же время, у иммунокомпрометированных пациентов и при ОБТ может наблюдаться нейтропения. Известен факт наличия нейтропении при различных вирусных инфекциях, в том числе с локализацией процесса в лимфоглоточном кольце. С одной стороны, это может быть связано с реализацией эффективного антивирусного иммунитета (АЗКЦ) и уменьшением популяции НГ, а с другой стороны вирус, например ВЭБ, способен инфицировать НГ через Toll-2-рецепторы и Fc-рецепторы иммуноглобулинов (Muhsin, М.A. Epstein Barr Virus in Chronic Tonsillitis in Karbala City / Role, F.M. // Medical Journal of Babylon. - 2011. - Vol. 8. No. 4 - P. 602-607), что приводит к поддержанию репликации ВЭБ и препятствует его клиренсу. Уровень СРБ выше 60 мг/л для ОБТ имеет чувствительность 53%, а специфичность по отношению к небактериальным тонзиллитам - 79%, что также не дает возможности надежно их дифференцировать.

Для подтверждения вирусной этиологии ОТ используют определение антител классов IgM и IgG (ИФА, РНИФ) и ПЦР - диагностика. В частности, для диагностики ВЭБ-инфекции определяют антитела к капсидному антигену (VCA) классов IgM и IgG, появляющиеся в ранние сроки в 87-100% случаев, а также оценивают ПЦР в крови и слюне с заданной низкой чувствительностью (активная инфекция). Титры IgM и IgG к капсидному антигену (VCA) появляются в крови больных в первые недели заболевания и достигают пика на 3-4-й неделе. IgM циркулируют в течение 1-3 мес.и далее не определяются. Их присутствие выявляется у 87-100% больных и является маркером острой ВЭБ-инфекции. IgM и IgG к ранним антигенам (ЕА) выявляются в остром периоде ВЭБ-инфекции у 70-90% больных и циркулируют обычно в течение 2-3 мес. Иногда антитела к ЕА обнаруживаются у вирусоносителей при первичном инфицировании, и увеличение титров IgM и IgG к VCA и ЕА является индикатором реактивации ВЭБ. Антитела класса G (IgG) к нуклеарному антигену (NA) определяются в крови только через 1-3 мес. от начала ВЭБ-инфекции. Для верификации вирусного генеза ОТ часто необходима одновременная лабораторная диагностика различных вирусных агентов (аденовирусы, ВЭБ, ВГЧ 6 типа, ЦМВ, энтеровирусы), что во многом усложняет диагностический поиск. Для больных со слабым специфическим гуморальным иммунным ответом на вирусы серодиагностика не всегда является 100% маркером вирусного ОТ.

Высокая чувствительность ПЦР-метода позволяет обнаружить минимальные следовые количества ДНК вируса, и в ряде случаев сложно отличить вирусоносительство от инфекционного процесса с активным размножением вируса (острая инфекция или реактивация хронической инфекции). Так как ДНК доступна только в момент репликации вируса, то существенным недостатком метода является большой процент ложноотрицательных результатов (27%).

Нейтрофильные гранулоциты (НГ) являются «рекрутами» иммунной системы, и в случае адекватного включения в иммунный ответ молниеносно реагируют на любую агрессию (вирусную, бактериальную) вне зависимости от локализации инфекционного процесса, осуществляя противоинфекционную защиту.

НГ - лабильная клеточная популяция, оснащенная богатым репертуаром рецепторов, иллюстрирует высокую степень пластичности и функциональную гетерогенность в зависимости от течения физиологических и патологических сценариев иммунного ответа (Fridlender Z. G., Jing S., Samuel K. et al. Polarization of tumor-associated neutrophil phenotype by TGF-b: "N1" versus "N2" TAN. Cancer Cell. - 2009. - N. 16. - P. 183-194). Определение количества и плотности экспрессируемых рецепторов НГ (CD11b/CD18, CD10, CD15, CD16, CD32, CD64, CD35 и т.д.), являющихся чувствительными индикаторами происходящих клеточных реакций, позволяет оценить взаимосвязь НГ с экстрацеллюлярным окружением, их фагоцитарный и микробицидный потенциал, в т.ч. вирусоцидную активность (Elghetany М.Т. Surface Antigen Changes during Normal Neutrophilic Development: A Critical Review. Blood Cells, Molecules, and Diseases. - 2002. - V. 28, N. 2. - P. 260-274).

Известно, что различные фенотипические профили и уровень оснащенности поверхностными рецепторами связаны с морфологическими особенностями и определяют функциональный потенциал НГ -цитокинопродукцию, трансэндотелиальную миграцию, внутриклеточный и внеклеточный киллинг, образование NET (Beyrau М., Bodkin J.V., NoursharghS. Neutrophil heterogeneity in health and disease: a revitalized avenue in inflammation and immunity. Open Biol. - 2012. - V. 2, N. 11. - P. 120 - 134; Pillay J., Tak Т., Kamp V. M., Koenderman L. Immune suppression by neutrophils and granulocytic myeloid-derived suppressor cells: similarities and differences. Cell. Mol. Life Sci. - 2013. V. 70. - P. 3813-3827).

Аналог. Авторы (Irmeli Nupponen; Sture Andersson; Anna-Liisa Järvenpää; Hannu Kautiainen; Heikki Repo, Neutrophil CD11b expression and circulating Interleukin-8 as diagnostic markers for early-onset neonatal sepsis PEDIATRICS Vol. 108 No. 1 July 2001, 1-6) установили, что исследование уровня экспрессии CD11b на НГ может быть одним из значимых критериев при оценке остроты протекающего воспаления (вместе с ИЛ8, СРБ) и его рост позиционируется как маркер тяжести протекания инфекционно-воспалительного процесса, в частности при неонатальном сепсисе. Вирусную и бактериальную этиологию процесса устанавливают на основании определения СРБ и/или повышения уровня циркулирующего ИЛ-8 и традиционных методов (бактериологические посевы, серодиагностика, ПЦР).

Недостатками способа является: невозможность верификации вирусной и бактериальной природы инфекции без сочетания с общепринятыми маркерами воспалительного процесса.

Ближайшим аналогом решения проблем дифференциальной диагностики этиологии тонзиллитов является способ определения этиологии ангины у детей (патент RU 2494398), включающий забор биоматериала в период разгара заболевания, для чего осуществляют соскоб с поверхности небных миндалин, биоматериал помещают в одноразовую пластиковую пробирку с крышкой на 1,5 мл и добавляют 1,0 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия, затем биоматериал центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин, отбирают надосадочную жидкость и ресуспендируют остаток в буфере, охлажденном до +4°C, до конечной концентрации клеток 5×10⁶-10×10⁶ кл/мл, в цитометрическую пробирку на ледяной бане помещают 100 мкл клеточной взвеси, добавляют 10 мкл Аннексина V-FITC и 20 мкл 7AAD, после 15-минутной инкубации добавляют 400 мкл буфера, охлажденного до +4°C, и перемешивают на вортексе, подсчет относительного количества клеток, окрашенных Аннексином V и не окрашенных 7AAD, производят на проточном цитометре. В том случае, если в соскобе с небных миндалин содержание мононуклеаров, вступающих в апоптоз, составляет 16-40%, определяют бактериальный генез ангины, а при 41% и более - определяют вирусное поражение миндалин, обусловленное инфекционным мононуклеозом. Способ является неинвазивным, что особенно важно для детского возраста, имеет теоретическое научное обоснование, осуществляется с использованием современных приборов и оборудования (проточная цитометрия, реагенты, реактивы).

Недостатками этого способа являются: невозможность стандартизации и контроля глубины соскоба с поверхности миндалин, объема захваченного материала; трудоемкий методологический процесс пробоподготовки полученного биоматериала со строго регламентированным температурным и временным режимом окраски соскобов с миндалин связанным с возможным увеличением процента апоптических мононуклеаров нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в процессе манипуляций на преаналитическом этапе. Кроме того, не учитывают НГ, которые присутствуют как при вирусных, так и при бактериальных инфекционно-воспалительных поражениях миндалин, и тоже могут находиться в стадии апоптоза (раннего и позднего). Недостатком также являются близкие показатели содержания лимфоцитов и моноцитов, вступающих в апоптоз в соскобе с небных миндалин у детей при инфекционном мононуклеозе в стадии реконвалесценции (количество апоптотических клеток 33,5±3,3%) и при лакунарной ангине (количество апоптотических клеток 36,3±12,5), что не позволяет своевременно дифференцировать вирусный процесс от бактериального.

Обоснованием исследования фенотипа НГ является то, что НГ конституитивно оснащены как CD11b (Мас-1 или рецептор к компоненту комплемента CR3A), так и CD16 (FcγRIII, связывающий IgG с низким сродством) в покоящемся состоянии в норме демонстрируют низкий уровень мембранной экспрессии данных рецепторов. В процессе включения клетки в иммунный ответ может происходить дополнительный выброс внутриклеточных резервных пулов CD16 и CD11b на мембрану НГ (Elghetany М.Т. (2002) Surface antigen during normal neutrophilic development: a critical review Blood Cells Mol. Dis. 28, 260-274). НГ с низким уровнем мембранных CD16 связывают с выходом в кровь незрелых форм НГ, что подтверждается морфологическими исследованиями (Pillay J, Ramakers BP, Kamp VM, et all Functional heterogeneity and differential priming of circulating neutrophils in human experimental endotoxemia. J Leukoc Biol. 2010, 88(1):211-20) При патологических состояниях происходит трансформация фенотипа НГ и регистрируются изменения как качественных, так и количественных характеристик субпопуляций НГ. CD16 и CD11b рецепторы НГ запускают каскад активационных и регуляторных процессов, отвечающих за биоцидную состоятельность НГ.

Задачи: Ранняя дифференциальная диагностика острых вирусных и бактериальных тонзиллитов.

Сущность изобретения: в пробе периферической крови определяют относительное содержание субпопуляций НГ, одновременно экспрессирующих CD16, CD11b на поверхностной мембране, принимая за норму наличие субпопуляции CD16^brightCD11b^dimНГ% от 80 и до 99,9% с высокой плотностью экспрессии CD16 и низкой плотностью экспрессии CD11b и при условии выявления субпопуляции CD16^brightCD11b^brightНГ или CD16^dimCD11b^brightНГ в количестве от 40% и более определяют соответственно острую вирусную инфекцию или острую бактериальную инфекцию.

Технический результат. Способ экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных инфекций различной локализации путем определения относительного содержания субпопуляций CD16⁺CD11b⁺НГ с различной степенью оснащенности поверхностными мембранными рецепторами CD16, CD11b в периферической крови пациентов позволяет обеспечить точность дифференциальной диагностики острой вирусной инфекции или острой бактериальной инфекции.

Объектом исследования явились НГ периферической крови взрослых пациентов от 18 до 28 лет с ОВЭБИ (n=30), больных с ОБТ (n=25) и практически здоровых субъектов (n=20). ОТ взят в качестве примера наиболее часто встречающегося инфекционного процесса, имеющего одинаковую локализацию (миндалины), сходную клиническую картину на начальных этапах развития заболевания, но различную этиологию -вирусную (ОВЭБИ) или бактериальную (ОБТ).

Для подтверждения этиологии ВЭБ в возникновении ОТ и для дифференциальной диагностики ОВЭБИ с ОБТ в исследуемых группах были использованы серологический и бактериологический метод, ПЦР - метод исследования, определение фенотипа НГ методом проточной цитометрии.

Проведено количественное определение продукции специфических антител к капсидным (IgMVCA), нуклеарным (IgGNA) и ранним (IgGEA) антигенам ВЭБ в сыворотке пациентов методом ИФА. При обследовании пациентов в 100% случаев в сыворотке крови присутствовали AT IgM к VCA (капсидному антигену) и IgG к EA (раннему антигену). У 21,4% пациентов также выявлены IgGNA (ядерному антигену).

Характеристика профилей специфического гуморального иммунного ответа при ОВЭБИ представлена следующим образом: IgMVCA+IgGEA - у 78,6% больных (ранняя первичная инфекция), IgMVCA+IgGEA+IgGNA - у 21,4% больных (поздняя первичная инфекция) Параллельно с определением серологических маркеров острого инфекционного процесса проводилась ПЦР - диагностика для подтверждения диагноза ОВЭБИ. При детекции ВЭБ методом ПЦР в 87,7% случаев обнаружена репликация ВЭБ в крови, а также в 14,3%) случаев ДНК ВЭБ обнаруживалась в слюне и моче. Диагноз ОБТ был подтвержден посевом на флору и исключением острой ВЭБ инфекции методом ИФА, ПЦР.

Способ осуществляют следующим образом. Производят забор биоматериала - кровь из периферической венозной сети. Исследуют маркеры поверхностной цитоплазматической мембраны НГ. Тестируют одномоментную экспрессию на мембране НГ молекул CD16, CD11b методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител: CD16 -ECD, CD11b-РС5 и соответствующих изотипических контролей. Оценивают процент CD16⁺CD11b⁺НГ. На гистограмме выделяют гейты по различной плотности оснащения по CD16 и CD11b рецепторами - с высокой плотностью экспрессии (bright) и низкой плотностью экспрессии (dim), используя показатели средней интенсивности флюоресценции, и определяют относительное содержание субпопуляций НГ: CD16^brightCD11b^dim;. CD16^brightCD11^bright; CD16^dimCD11b^bright.

Сопоставительный анализ данных в изучаемых группах позволил выявить особенности соотношения субпопуляций CD16⁺CD11b⁺НГ (CD16^brightCD11b^bright, CD16^brightCD11b^dim, CD16^dimCD11b^bright), обусловленные различной динамикой экспрессии мембранных CD16 и CD11b рецепторов при вирусной и бактериальной инфекции в сравнении с контролем (табл. 1).

Показано, что среди НГ доминирует, в норме у здоровых лиц субпопуляция CD16^brightCD11b^dim-НГ (91,02±5,23%), в группе с ОВЭБИ - субпопуляция CD16^brightCD11b^bright-НГ (75,82±4,48%), в группе с ОБТ - CD16^dimCD11b^bright-НГ (88,6±5,95). Выявление минорной субпопуляций НГ при ОБТ - CD16^brightCD11b^bright (12,35±1,96) указывает на наличие в анамнезе перенесенной ОВЭБИ или других вирусных инфекций. Наличие при ОВЭБИ субпопуляции НГ - CD16^dimCD11b^bright (8,87±3,65) указывает на вероятность присоединения бактериальной инфекции (табл. 1).

Таким образом, принимая за норму наличие у здоровых субъектов субпопуляции НГ - CD16^brightCD11b^dim от 80 и до 99,9% (с высокой плотностью экспрессии CD16 и низкой плотностью экспрессии CD11b) и при условии выявления субпопуляции НГ - CD16^brightCD11b^bright (с высокой плотностью экспрессии CD16 и CD11b) в количестве от 40% и более определяют острую вирусную инфекцию, а при выявлении субпопуляции НГ - CD16^dimCD11b^bright(c низкой плотностью экспрессии CD16 и CD11b) от 40% и более определяют острую бактериальную инфекцию.

Обнаруженный феномен различной динамики презентации мембранных рецепторов популяции CD16⁺CD11b⁺НГ в норме и при патологии отражают возможность и полноценцость участия НГ в реакциях фагоцитоза и/или АЗКЦ (антителозависимая клеточная цитотоксичность) при инфекционных процессах разной природы. Выявленная усиленная экспрессия CD16 на НГ при вирусной инфекции может быть обусловлена большей функциональной значимостью цитотоксических НГ, экспрессирующих FcγRIII (CD16), для реализации АЗКЦ (Kushner В.Н., Cheung N.K. Absolute requirement of CD11/CD18 adhesion molecules, FcRII and the phosphatidylinositollinked FcRIII for monoclonal antibody-mediated neutrophil antihuman tumor cytotoxicity // Blood. - 1992. - V. 79, N 6. - P. 1484-1490), ассоциированной с CD11b-зависимым повышением адгезии и дегрануляции (Metelitsa L.S., Gillies S.D., Super М., Shimada H., Reynolds C.P. et al. Antidisialogangliosid/granulocyte macrophage-colony-stimulating factor fusion protein facilitates neutrophil antibody-dependent cellularcytotoxicity and depends on Fc-gammaRII (CD32) and Mac-1 (CD11b/CD18) for enhanced effector cell adhesion and azurophil granule exocytosis. // Blood. - 2002. - V. 99 - P. 4166-4173).

Пример №1

Пациент К, 18 лет, женщина, поступила в ГБУЗ СКИБ 29.11.13 г. с диагнозом острый тонзиллит, дата заболевания 22.11.13 г. (на 7 день болезни) с жалобами на подъем температуры до 38,5°С - 39,5°С, боли в горле, затруднение носового дыхания, слабость, увеличение подчелюстных лимфоузлов. При объективном осмотре: общее состояние средней тяжести, фебрильная температура тела 38,7°С, затрудненное носовое дыхание, гиперемия зева, отечность миндалин, в лакунах миндалин белые наложения, увеличение подчелюстных лимфоузлов до 3 см в диаметре, подвижные, эластичные, безболезненные, увеличение печени.

Общий анализ крови: L - 10,8·10⁹/л, П - 11%, С - 34%, Л - 47%, М - 7%, Э - 1%, СОЭ - 16 мм/ч. Серологическое исследование сыворотки крови IgMVCA 6,71, IgGEA 2,369, IgGNA 0,074. ПЦР ДНК ВЭБ в крови - не обнаружен. Биохимический анализ крови АЛТ 113 Ед/л, ACT 59 Ед/л, общий билирубин - 10 мкмоль/л, прямой билирубин- 3 мкмоль/л, глюкоза - 5,1 ммоль/л, амилаза 43 Ед/л, ЛДГ 529 Ед/л. Бактериологический посев из зева - роста не дал. Посев из зева, носа на дифтерию - отрицателен.

Определение фенотипа НГ: CD16^brightCD11b^brightНГ - 89,77%; CD16^dimCD11b^brightНГ - 9,79%), что свидетельствует об острой вирусной инфекции.

На основании клинико-лабораторных данных был поставлен диагноз: Инфекционный мононуклеоз, ВЭБ этиологии, средней тяжести.

Пример №2

Пациент С, 19 лет, мужчина, поступил в ГБУЗ СКИБ 02.12.14 г. с диагнозом острый тонзиллит. Болен в течение 3 дней, поступил с жалобами на подъем температуры до 40°С, боли в горле, слабость, увеличение подчелюстных лимфоузлов. При объективном осмотре: общее состояние средней тяжести, фебрильная температура тела 39°С, гиперемия зева, отечность миндалин, в лакунах миндалин белые наложения, увеличение подчелюстных лимфоузлов до 2 см в диаметре, шейных лимфоузлов до 0,8-1 см в диаметре, подвижные, эластичные, безболезненные.

Общий анализ крови: L - 4,9·10⁹/л, П - 2%, С - 44%, Л - 40%, М - 9%, Э - 5%, СОЭ - 20 мм/ч. Серологическое исследование сыворотки крови IgMVCA - отр, IgGEA 0,105, IgGNA 23,55. ПЦР ДНК ВЭБ в крови - не обнаружен. Авидность IgG к ВЭБ - 91%. Биохимический анализ крови АЛТ 49 Ед/л, ACT 34 Ед/л, общий билирубин - 21 мкмоль/л, прямой билирубин - 8 мкмоль/л, глюкоза - 4,6 ммоль/л, амилаза 25 Ед/л, ЛДГ 116 Ед/л. Бактериологический посев из зева - Str. haemolyticus группы А. Посев из зева, носа на дифтерию -отрицателен.

Определение фенотипа НГ: CD16^dimCD11b^brightНГ - 79,3%, CD16^brightCD11b^brightНГ - 18,9%; что свидетельствует об острой бактериальной инфекции.

На основании клинико-лабораторных данных был поставлен диагноз: Лакунарная ангина. Хроническая ВЭБ инфекция, персистирующая.

Пример №3

Пациент Т, 21 год, мужчина, поступил в ГБУЗ СКИБ 12.11.13 г. с диагнозом острый тонзиллит. Болен 09.11.13 г. (в течение с 4 дней), поступил с жалобами на подъем температуры до 40,5°С, боли в горле, слабость, увеличение подчелюстных лимфоузлов. При объективном осмотре: общее состояние тяжелое за счет выраженности интоксикационного синдрома, фебрильная температура тела 40,5°С, гиперемия зева, отечность миндалин, в лакунах миндалин белые наложения, увеличение подчелюстных лимфоузлов до 4 см в диаметре, подвижные, эластичные, умеренно болезненные; шейные 1 см в диаметре, подвижные, эластичные, безболезненные.

Общий анализ крови: L - 18,4·10⁹/л, П - 9%, С - 46%, Л - 44%, М - 1%, СОЭ - 20 мм/ч. Серологическое исследование сыворотки крови IgMVCA - 13,57, IgGEA 3,344, IgGNA 0,379. ПЦР ДНК ВЭБ в крови - обнаружен. Биохимический анализ крови АЛТ 24 Ед/л, ACT 91 Ед/л, общий билирубин - 17 мкмоль/л, прямой билирубин - 5,1 мкмоль/л, глюкоза - 4,9 ммоль/л, амилаза 62 Ед/л, ЛДГ 529 Ед/л. Бактериологический посев из зева - Str. anginosus. Посев из зева, носа на дифтерию - отрицателен.

Определение фенотипа НГ: CD16^brightCD11b^brightНГ - 71,3%; CD16^dimCD11b^brightНГ - 13,26%), что свидетельствует об острой вирусной инфекции.

На основании клинико-лабораторных данных был поставлен диагноз: Инфекционный мононуклеоз, ВЭБ этиологии, тяжелое течение.

Способ дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых, включающий забор биоматериала, определение фенотипа нейтрофильных гранулоцитов методом проточной цитометрии, отличающийся тем, что в пробе периферической крови определяют относительное содержание субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов, одновременно экспрессирующих CD16, CD11b на поверхностной мембране, принимая за норму наличие субпопуляции CD16^brightCD11b^dimНГ% от 80 и до 99,9% с высокой плотностью экспрессии CD16 и низкой плотностью экспрессии CD11b и при условии выявления субпопуляции CD16^brightCD11b^brightНГ или CD16^dimCD11b^brightНГ в количестве от 40% и более определяют соответственно острую вирусную инфекцию или острую бактериальную инфекцию.