Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/гонконг/2014/8296 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей

Авторы патента:

Федорова Екатерина Алексеевна (RU)

Матюшенко Виктория Аркадьевна (RU)

Баженова Екатерина Андреевна (RU)

Руденко Лариса Георгиевна (RU)

Киселева Ирина Васильевна (RU)

C12N7/00 - Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их (лекарственные препараты, содержащие вирусы A61K 35/76; получение лекарственных составов, содержащих вирусные антигены или антитела, например вакцин из вирусов A61K 39/00)

A61K39/145 - Orthomyxoviridae, например вирус гриппа

Владельцы патента RU 2606019:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") (RU)

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Предложен вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для людей. Представленный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32°С, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью и безвредностью для лабораторных животных. Штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского под №2818. Изобретение может быть использовано в практическом здравоохранении для профилактики заболеваемости гриппом среди взрослых и детей с помощью живой гриппозной интраназальной вакцины. 1 ил., 5 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики заболеваемости гриппом среди взрослых и детей с помощью живой гриппозной интраназальной вакцины из штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) вируса гриппа А, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus А.

В результате появления в циркуляции нового эпидемического штамма вируса гриппа А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) известный вакцинный штамм А/17/Техас/2012/30 (H3N2) - прототип [Патент РФ №2563352 от 20.09.15. - Опубл. БИ 2015. - №26] - утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызвать защитную реакцию во время эпидемии, вызванной А/Гонконг/4801/2014-подобными штаммами вируса гриппа.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение антигенно актуального вакцинного штамма для взрослых и для детей на основе холодоадаптированного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и нового вируса А/Гонконг/4801/2014 (H3N2).

Применяемые в настоящее время штаммы для живых гриппозных вакцин получают методом генетической реассортации эпидемически актуальных вирусов с холодоадаптированными штаммами - донорами аттенуации [Александрова Г.И. Применение метода генетической рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа // Вопр. Вирусол. - 1977. - №4 - С. 387-395.].

Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - холодоадаптированный (са) и температурочувствительный (ts) штамм вируса гриппа - разрешен для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых и детей [Александрова Г.И. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1968. - С. 66-83].

Цель реассортации - получить штамм с вакцинной формулой генома 6:2. Гены, кодирующие поверхностные белки вируса гриппа гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), наследуются от антигенно актуального циркулирующего эпидемического штамма, а шесть генов, кодирующих внутренние и неструктурные белки (РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS), от безвредного донора аттенуации.

Получение вакцинного штамма. Вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) путем одновременного инфицирования развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ) смесью родительских вирусов в эквивалентных инфекционных дозах, с последующей селекцией клонов с заданными свойствами при пониженной до 26°С температуре инкубации в присутствии кроличьей антисыворотки к донору аттенуации. Клоны дополнительно очищены тремя последовательными клонированием методом предельных разведений в присутствии антисыворотки к донору при пониженной (26°С) и оптимальной (32°С) температурах инкубации. Чистый клон проверен по фенотипическим характеристикам (ts- и са-фенотип) и по формуле генома на соответствие вакцинному штамму.

Антигенная характеристика вакцинного штамма.

Изучение антигенных свойств вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) показало, что:

- ответственный за антигенную специфичность поверхностный белок вакцинного штамма - гемагглютинин (НА) - в РТГА с гомологичной сывороткой антигенно идентичен эпидемическому вирусу А/Гонконг/4801/2014 (H3N2), поскольку показатели взаимодействия реассортанта А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) и родительского штамма А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) с крысиной антисывороткой, полученной к вирусу А/Гонконг/4801/2014 (H3N2), полностью совпадали (табл. 1).

- второй ответственный за антигенную специфичность поверхностный белок вакцинного штамма - нейраминидаза (NA) - проверен методом частичного секвенирования, а также полногеномным секвенированием и идентичен вирусу А/Гонконг/4801/2014 (H3N2).

Для анализа состава генома полученных реассортантов использовали частичное секвенирование ДНК копий генов [Isakova-Sivak I. et. al. Development and pre-clinical evaluation of two LAIV strains against potentially pandemic H2N2 influenza virus. PLoS One. 2014. Vol. 9. №7. P. e102339].

Формула генома 6:2 соответствует требованиям, предъявляемым к штаммам живой

гриппозной вакцины: гены, кодирующие поверхностные белки гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), принадлежат эпидемическому родительскому вирусу А/Гонконг/4801/2014 (H3N2), гены, кодирующие внутренние белки (РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS), принадлежат донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Результаты анализа всех генов вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) представлены в табл. 2.

Данные, полученные при первичном отборе вакцинного кандидата, были подтверждены полным секвенированием его генома и показали, что вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) унаследовал все 6 генов, кодирующих внутренние и неструктурные белки, от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) (табл. 2).

Все кодирующие нуклеотидные замены, охарактеризованные для донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) как ответственные за его аттенуацию (табл. 3), присутствуют во внутренних генах реассортантного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2). Таким образом, полное секвенирование генома вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) показало генетическую стабильность аттенуирующих мутаций.

Генетическую стабильность кодирующих мутаций вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) изучали сравнением сохранности кодирующих мутаций до и после пятикратного пассирования вакцинного штамма, подготовленного на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57, в куриных эмбрионах с использованием метода пиросеквенирования. Для данного анализа были разработаны специфические праймеры, позволяющие оценивать наличие данных мутаций с использованием пиросеквенатора PyroMark Q24. Праймеры разработаны с использованием компьютерной программы PSQ Assay Design.

Пиросеквенирование показало, что нуклеотидная последовательность вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) до и после его пятикратного пассирования осталась неизменной, в том числе, в генах полимеразного комплекса (РВ2, РВ1, РА), ответственных за аттенуирующий фенотип, доказательством чего служат результаты пиросеквенирования, приведенные в таблице 3 и на фиг. 1.

На фиг. 1 в качестве примера представлены данные, подтверждающие наличие аттенуирующей мутации в позиции 1459 гена РВ2 вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) методом пиросеквенирования. Замена G на Т в позиции 1459 приводит к замене Val на Leu в позиции 478. 1-я последовательность соответствует вирусу А/Ленинград/134/57, у которого нет аттенуирующей мутации в данной позиции, 2-я последовательность соответствует донору А/Ленинград/134/17/57, у которого в данной позиции присутствует аттенуирующая мутация, и 3-я последовательность принадлежит пятому пассажу вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2), у которого в данной позиции сохраняется аттенуирующая мутация, что свидетельствует о генетической стабильности вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) в позиции 1459 гена РВ2.

Фенотипические характеристики пассажного варианта также не претерпели никаких изменений (табл. 4), что подтверждает высокую генетическую стабильность вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2).

Оценку фенотипических свойств вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) проводили путем его параллельного титрования в РКЭ при разных температурах. Вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) в развивающихся куриных эмбрионах обладает выраженным температурочувствительным и холодоадаптированным фенотипом, идентичным фенотипу донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Установлено, что вакцинный вирус является температурочувствительным (ts фенотип) - его инфекционная активность при температуре 40°С составила ≤0.7 log₁₀ ЭИД₅₀/мл и холодоадаптированным (са фенотип) - инфекционная активность при пониженной до 26°С температуре инкубации достигала 6.2 log₁₀ ЭИД₅₀/мл, что свидетельствует о его безвредности для человека, поскольку по этим показателям он идентичен донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Результаты фенотипического анализа представлены в таблице 4.

Безвредность для морских свинок. Доклинические исследования острой токсичности вакцинного штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) проводили на морских свинках обоего пола в соответствии с Методическими рекомендациями по доклиническим испытаниям новых иммунобиологических препаратов [Методические рекомендации «Доклинические испытания эффективности и безопасности новых иммунобиологических лекарственных препаратов». М.: 2010. 39 с.] и с «Правилами лабораторной практики» [Правила лабораторной практики. Приказ Минздрава РФ №708н от 23.08.20010. http://www.rg.ru/2010/10/22/laboratornaya-praktika-dok.html]. Морским свинкам вводили однократно 5 мл вакцинного вируса подкожно в дозе 7.0 lg ЭИД₅₀/0.2 мл. Животным контрольной группы вводили подкожно физиологический раствор. Ежедневно в течение всего исследования (7 дней) проводился контроль общего состояния каждого животного.

Показана безвредность вакцинного штамма для лабораторных животных при его подкожном введении (табл. 5).

Данные физиологического исследования показали, что подкожное введение вакцинного штамма не вызывало гибели экспериментальных животных и не приводило к изменению их внешнего вида, поведения, не отражалось на потреблении ими пищи и воды, что свидетельствует о безвредности вакцинного препарата.

Заключение

В результате проведенных доклинических исследований установлено, что заявляемый вакцинный штамм живой гриппозной вакцины А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью эпидемического вируса А/Гонконг/4801/2014 (H3N2), структурой генома 6:2, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, а также характерной для донора аттенуации температурочувствительностью и холодоадаптированностью и безвредностью для лабораторных животных, что коррелирует с аттенуацией для человека.

Образец паспорта на вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) прилагается.

Таким образом, вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) по основным биологическим свойствам, изученным в доклинических экспериментах in vitro и in vivo, соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей (ФСП: Р N003224/01-270313) на Ультравак^®, вакцину гриппозную аллантоисную живую для интраназального применения для взрослых и для детей.

Полученный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) депонирован 14.12.2015 года в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского (Россия RU, 123098, город Москва, улица Гамалеи, 16) под №2818 и имеет характеристики, представленные в образце паспорта штамма.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА

Инфекционная активность штамма А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32°С в течение 48 часов - 8.7 log₁₀ ЭИД₅₀/мл. Гемагглютинирующая активность - 1:256

Штамм проявляет генетическую стабильность фенотипических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Полезным свойством вакцинного штамма вируса гриппа А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) является его пригодность для наработки живой гриппозной вакцины. Предлагаемый по изобретению вакцинный штамм вируса гриппа А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) может быть использован для профилактики гриппа как у взрослых, так и у детей с трехлетнего возраста.

Штамм вируса гриппа А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2), депонированный в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского под №2818, используемый для получения живой гриппозной интраназальной гриппозной вакцины для взрослых и для детей.

Изобретение относится к вирусологии. Предложен вакцинный штамм В/60/Пхукет/2013/26 - реассортант, полученный методом генетической реассортации эпидемического вируса В/Пхукет/3073/2013 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом В/СССР/60/69 - донором аттенуации, безвредным для людей.

Адаптированные пандемические штаммы вируса гриппа a/tomsk/273/2010-ma1(h1n1pdm09), a/tomsk/273/2010-ma2(h1n1pdm09) и a/tomsk/273/2010-ma3(h1n1pdm09) для оценки действия противовирусных препаратов (варианты) // 2605317

Изобретение относится к разделу общей и медицинской вирусологии и касается вируса гриппа А. Получены новые адаптированные варианты пандемического вируса гриппа A(H1N1)pdm09 к организмам различных лабораторных животных, представленные три адаптированных варианта пандемического вируса гриппа получены из штамма дикого типа A/Tomsk/273/2010(HlNlpdm09) путем многократного пассирования через легкие экспериментальных мышей.

Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/боливия/2013/6585 (h1n1) pdm09 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей // 2605314

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Охарактеризованный вакцинный штамм А/17/Боливия/2013/6585 (H1N1)pdm09 - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса А/Боливия/559/2013 (H1N1)pdm09 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для людей.

Штамм а n2166/краснодарский/2013 вируса ящура aphtae epizooticae типа а для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа а // 2604200

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм вируса ящура А №2166/Краснодарский/2013 (производственный, контрольный КРС).

Способ получения бактериофага // 2603730

Изобретение касается способа получения бактериофага. Представленный способ включает засев суспензии бактериальных клеток в титре 108-1012 КОЕ/мл на плотную питательную среду с толщиной слоя от 3 мм до 25 мм и культивирование при отсутствии посторонней микрофлоры, при толщине слоя воздуха над поверхностью плотной питательной среды от 5 мм до 50 мм и при оптимальной температуре для роста культуры штамма-хозяина.

Штамм а n2155/забайкальский/2013 вируса ящура aphtae epizooticae типа а для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа а // 2603255

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм вируса ящура А №2155/Забайкальский/2013 (производственный).

Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1 // 2603003

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит активное вещество и целевые добавки.

Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 // 2593718

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины, содержащей активное вещество и целевые добавки. В качестве активного вещества вакцина содержит смесь из авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов вируса ящура А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, А №2187/Кути/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011, полученных в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющих собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.

Набор олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры f гена вирусов болезни ньюкасла класса i // 2590718

Изобретение относится к биотехнологии и касается набора олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры F гена вирусов болезни Ньюкасла класса I. Представленный набор состоит из трех пар олигонуклеотидов, имеющих следующую структуру (5′→3′): Представленные олигонуклеотиды не дают перекрестных реакций с родственными видами, позволяют ограничивать манипуляции одноступенчатой процедурой проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Рекомбинантный штамм л-ивп 1421abjcn вируса осповакцины с нарушенными генами вирулентности a56r, b8r, j2r, c3l, n1l для получения живой культуральной аттенуированной вакцины против натуральной оспы и других ортопоксвирусов, патогенных для человека // 2588388

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан рекомбинантный аттенуированный штамм вируса осповакцины с нарушенными генами вирулентности ΔA56RΔB8RΔJ2RΔC3LΔN1L (1421ABJCN) на основе клонированного вируса осповакцины штамм ЛИВП.

Живая вакцина для профилактики гриппа и способ ее получения // 2604414

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и направлена на получение гриппозной вакцины в жидком виде. Живая вакцина в жидком виде для профилактики гриппа включает штаммы вирусов гриппа типа H1N1 H3N2, В и стабилизатор.

Улучшенная вакцинация против гриппа // 2599496

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для индукции перекрестной защиты от по меньшей мере одного гетеросубтипического штамма гриппа.

Усовершенствованные композиции вакцин // 2592210

Изобретение относится к медицине, а именно к вакцинопрофилактике. Предложена композиция вакцины, содержащая один или более антигенов, и адъювант, содержащий олеиновую кислоту и моноолеин для применения в интраназальной вакцинации пациента.

Способ защиты от заболеваний, вызываемых вторичными патогенами // 2586294

Группа изобретений относится к ветеринарии и может быть использована для защиты собаки от заболевания, вызванного вторичным патогеном, представляющим собой Streptococcus equi.

Вакцина гриппозная инактивированная расщепленная и способ ее получения // 2584594

Группа изобретений относится к медицине и касается способа получения средства, предназначенного для лечения гриппа, включающего заражение куриных эмбрионов вирусом гриппа, инкубацию эмбрионов, охлаждение эмбрионов, сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости (ВАЖ), обработку ВАЖ с целью дезагрегации и последующей инактивации, микрофильтрацию ВАЖ, ультрафильтрацию ВАЖ и очистку вирусного концентрата.

Противогриппозная вакцина // 2583297

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены вакцинная композиция для вакцинации против инфекции гриппа и набор для вакцинации против инфекции гриппа, содержащий вакцинную композицию.

Противогриппозная вакцина широкого спектра действия против птичьего гриппа а на основе эктодомена белка м2 // 2571944

Изобретение относится к области медицины и касается противогриппозной вакцины широкого спектра действия против птичьего гриппа А человека. Охарактеризованная вакцина содержит эктодомен белка М2, молекулярный адъювант и буферный раствор, взятые в эффективных количествах.

Вакцинная композиция против гриппа // 2571267

Изобретение раскрывает применение вакцинной композиции, содержащей по меньшей мере один профилактически активный агент против гриппа и по меньшей мере один адъювант, являющийся соединением PBS-96 следующей формулы (III) или соединением PBS-14 следующей формулы (IV) для изготовления лекарственного средства, предназначенного для предотвращения или лечения гриппа.

Реассортантный штамм вируса гриппа а/17/серебристая чайка/сарма/06/887 (h6n1) для производства живой гриппозной вакцины // 2606026

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма вируса гриппа. Предложен реассортантный вакцинный штамм А/17/серебристая чайка/Сарма/06/887 (H6N1). Штамм получен путем скрещивания вируса А/Серебристая чайка/Сарма/51с/2006 (H6N1) со штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и детей. Штамм А/17/серебристая чайка/Сарма/06/887 (H6N1) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 33°С, характеризуется температурочувствительностью, холодоадаптированностью и аттенуацией и иммуногенностью для лабораторных животных. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов ФГБУ Федерального научно-исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Η.Ф. Гамалеи Минздрава РФ под № 2807. Изобретение может быть использовано для получения живой гриппозной вакцины. 1 ил., 2 табл., 2 пр.