Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов

Авторы патента:

Березовский Станислав Владимирович (RU)

G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2612018:

Общество с ограниченной ответственностью "Медика Продакт" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может использоваться для автоматического подсчета количества ретикулоцитов на анализаторах мазков крови. Сущность изобретения: после первоначального суправитального окрашивания ретикулоцитов бриллиантовым крезиловым синим, мазки дополнительно фиксируют и окрашивают краской - фиксатором Май-Грюнвальда в течение 1 минуты, промывают проточной водой, высушивают и выполняют подсчет ретикулоцитов на автоматическом анализаторе мазков крови. Технический результат: повышение точности и ускорение подсчета ретикулоцитов. 2 ил., 3 пр.

Количество и качественный состав ретикулоцитов являются одними из важных показателей, характеризующих эффективность кроветворения, а их подсчет широко используется при проведении массовых профилактических осмотров и регламентируется рядом приказов. Использование автоматических анализаторов мазков крови позволяет автоматизировать оценку клеточного состава мазка крови, окрашенного по Романовскому-Гимза. Однако подсчет ретикулоцитов в таких мазках невозможен, из-за того, что при окраске по Романовскому-Гимза ретикуло-филаментарная субстанция не выявляется.

Известен метод подсчета количества ретикулоцитов после суправитального окрашивания в специально подготовленном мазке крови [Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков В.В., Делкторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.; Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987, - 368 с.: ил., стр. 118-119]. Для этого кровь, забранную с антикоагулянтом (этилендиамидтетраацетатом, гепарином или цитратом натрия), смешивают с раствором красителя бриллиантового крезилового синего (бриллиант-крезил блау), смесь инкубируют в течение 30 минут и готовят тонкий мазок. Однако при использовании автоматических анализаторов мазков крови данный способ окраски ретикулоцитов дает неточные результаты подсчета ретикулоцитов. Это связано с тем, что при этом способе окраски эритроциты окрашиваются бледно, в различные оттенки желто-синего цветов, что затрудняет автоматическое распознавание клеток и идентификацию ретикулофиламентарной субстанции, которая также окрашивается в сине-зеленый цвет (фиг. 1).

Технический результат: повышение точности и ускорение подсчета ретикулоцитов.

Указанный результат достигается путем изменения в протоколе окраски и использования автоматических анализаторов мазков крови.

Способ пояснен на фотографиях, где на первой фотографии (фиг. 1) показан результат традиционной окраски ретикулоцитов (прототип); эритроциты окрашены в различные оттенки зеленовато-синего цветов, в двух заметна синяя ретикуло-филиментарная субстанция ретикулоцитов. На другой фотографии продемонстрирован результат использования заявляемого способа подготовки мазка крови: эритроциты окрашены в ярко-красный цвет на фоне которого, ретикуло-филаментарная субстанция ретикулоцитов окрашена в ярко синий цвет (фиг. 2).

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого забирают кровь с антикоагулянтом, например калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты. Выполняют суправитальную окраску ретикулоцитов с помощью бриллиантового крезилового синего (бриллиант-крезил блау). К 0,1 мл цельной крови добавляют 0,4 мл раствора красителя и инкубируют 30 минут. Затем из полученной смеси готовят тонкий мазок. После высыхания мазка, его дополнительно фиксируют и докрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвальда. Для этого высушенный мазок помещают на 1 минуту в контейнер с краской-фиксатором, затем извлекают из контейнера и промывают проточной водой. После высушивания препарат исследуют на анализаторах мазков крови, например, Vision Hema^® (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия). Эритроциты окрашиваются в красный цвет, на фоне которого в ретикулоцитах четко видна синяя ретикуло-филаментарная субстанция (фиг. 2). Собирают и анализируют эритроциты, не менее 1000 штук. Подсчитывают количество эритроцитов, содержащих ретикуло-филаментарную субстанцию по отношению ко всем собранным эритроцитам. Результат выражают в процентах.

Для окраски мазков крови используют следующие растворы:

1) раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте. Для приготовления абсолютного спирта необходимо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного сульфата меди (до прекращения окрашивания порошка безводного сульфата меди в синий цвет). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски (Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под редакцией проф. А.И. Карпищенко. - Санкт-Петербург; Интермедика, 2002. - 408 с. С.284).

2) краска-фиксатор Май-Грюнвальда - 1 г сухой краски нужно растворить в 1 л метилового спирта. (Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под редакцией проф. А.И. Карпищенко. - Санкт-Петербург; Интермедика, 2002. - 408 с. С. 277).

Примеры конкретного выполнения:

Пример 1. Пациент И., 48 лет. Проходил периодический осмотр, как работник нефтеперерабатывающего предприятия. У пациента была забрана кровь с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали по предложенному способу. Для этого 0,1 мл крови смешивали с раствором бриллиантового крезилового синего и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema^® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).

Количество ретикулоцитов, подсчитанных на анализаторе мазков крови при традиционной окраске составило 1,5%, что превысило референсный диапазон нормы, а в мазке, окрашенном предложенным способом, составило - 0,9%, что соответствует нормальным значениям для взрослого человека. При ручном подсчете ретикулоцитов их количество в этих же мазках составило 0,8% и 0,9%, соответственно. Это указывает на повышение точности подсчета на анализаторах мазков крови при использовании предложенного способа подготовки мазков. При этом скорость исследования ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 48 и 54 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 270 и 238 секунд.

Таким образом, данный пример демонстрирует, что предложенная окраска ретикулоцитов при использовании анализаторов мазков крови ведет к увеличению точности результатов и ускорению подсчета ретикулоцитов.

Пример 2. Пациентка З. Госпитализирована в гематологическое отделение КМСЧ 1 г. Перми с диагнозом апластическая анемия. В рамках протокола обследования выполнен подсчет ретикулоцитов. У пациентки был выполнен забор крови с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали по предложенному способу. Для этого 0,1 мл крови смешивали с раствором бриллиантового крезилового синего и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema^® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).

Количество ретикулоцитов, подсчитанное на анализаторе мазков крови в мазке, окрашенном традиционно, составило 0,3%, в мазке, окрашенном модифицированным способом - 0,2%. При ручном подсчете результат 0,2% и 0,2%. При этом скорость подсчета ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 58 и 52 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 302 и 338 секунд.

В данном случае из-за низкого содержания ретикулоцитов существенных различий в результатах не обнаружено, однако, обращает внимание несколько завышенный результат, полученный на анализаторе мазков крови при исследовании мазка окрашенного обычным способом. Так же, как в предшествующем примере, продемонстрировано значительное (почти в 5 раза ускорение подсчета ретикулоцитов).

Пример 3. Пациент К. Госпитализирована в отделение патологии новорожденных ДГКБ №13 г. Перми с диагнозом гемолитическая болезнь новорожденных. В рамках протокола обследования выполнен подсчет OAK с подсчетом ретикулоцитов. У пациента была выполнен забор крови с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали предложенным способом. Для этого 0,1 мл крови, смешивали с раствором бриллиантовым крезиловым синим и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema^® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).

Количество ретикулоцитов, подсчитанное на анализаторе мазков крови в мазке, окрашенном традиционно, составило 30,3%, в мазке, окрашенном модифицированным способом, - 21,2%. При ручном подсчете результат 20,6% и 22,4%. При этом скорость подсчета ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 52 и 51 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 298 и 304 секунд.

На данном примере продемонстрировано снижение точности подсчета ретикулоцитов на анализаторах мазков крови в стеклопрепаратах, окрашенных традиционным методом, особенно при высоком содержании ретикулоцитов. Использование нового способа окраски мазков привело к практически полному совпадению результатов подсчета ретикулоцитов на автоматическом анализаторе и ручным способом, при этом скорость подсчета ретикулоцитов увеличилась более чем в 5 раз.

Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов путем суправитального окрашивания ретикулоцитов бриллиантовым крезиловым синим, отличающийся тем, что после окрашивания бриллиантовым крезиловым синим мазки дополнительно фиксируют и окрашивают краской - фиксатором Май-Грюнвальда в течение 1 минуты, промывают проточной водой, высушивают и выполняют подсчет ретикулоцитов на автоматическом анализаторе мазков крови.

Изобретение относится к области медицины, в частности к области онкологии и урологии, и касается способа выбора отделов предстательной железы для пункции при диагностике рака предстательной железы.

Узел для разделения жидкости на фазы с разными плотностями (варианты) // 2610591

Группа изобретений относится к устройствам (вариантам) для разделения фракций с более низкой и более высокой плотностями пробы текучей среды. Узел содержит контейнер для пробы, запорный элемент, разделитель.

Способ определения содержания гомоаргинина в плазме крови и других биологических жидкостях человека // 2609873

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения гомоаргинина (гАрг) в плазме крови и других биологических жидкостях человека.

Способ прогнозирования развития гнойных осложнений панкреонекроза на ранних сроках заболевания // 2605851

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу прогнозирования развития гнойных осложнений панкреонекроза. Способ прогнозирования развития гнойных осложнений панкреонекроза заключается в том, что у пациента со стерильным панкреонекрозом, начиная с пятых суток от начала заболевания, определяют активность альфа-амилазы в крови, содержание в крови общего белка, лимфоцитов, моноцитов, отношение альбуминов и глобулинов в сыворотке крови, тяжесть состояния пациента по следующим шкалам SAPS, SOFA, SIRS, наличие парапанкреатического инфильтрата, пареза желудочно-кишечного тракта, острого скопления жидкости в сальниковой сумке или забрюшинной клетчатке и вычисляют индекс инфицирования панкреонекроза (ИИПН) по формуле.

Коррекция способом смещения по времени от пика для тест-полоски, используемой для измерения содержания аналита // 2605292

Группа изобретений относится к определению концентрации аналита в биологической жидкости на основании полученных зависимостей величины тока от времени. Способ определения концентрации аналита в физиологической жидкости включает размещение реактива для взаимодействия с аналитом в физиологической жидкости между первым электродом и вторым электродом, нанесение физиологической жидкости на реактив, трансформацию аналита в физиологической жидкости и возбуждение нестационарного тока от каждого из первого и второго электродов, определение пика нестационарного тока для каждого из первого и второго электродов, измерение значения нестационарного тока при заданном временном смещении от пика каждого нестационарного тока от каждого из первого и второго электродов, при этом временное смещение для первого электрода содержит первое смещение по времени от пика нестационарного тока первого электрода, а временное смещение от пика нестационарного тока второго электрода содержит второе смещение по времени, отличное от первого смещения по времени, и вычисление концентрации аналита на основе измеренных значений тока первого и второго электродов на этапе измерения.

Способ определения болевого синдрома при полинейропатии у больных вибрационной болезнью // 2604415

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ определения болевого синдрома при полинейропатии у больных вибрационной болезнью, включающий забор венозной крови, получение сыворотки крови и определение в ней количественного содержания серотонина.

Способ выбора длительности курса терапии церуллоплазмином у пациентов с бронхиальной астмой // 2603468

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и касается способа выбора длительности терапии Церулоплазмином у пациентов с бронхиальной астмой. Сущность способа заключается в том, что у пациентов с бронхиальной астмой определяют в крови супкроксиддисмутазу (СОД) и малоновый альдегид (МА) и их соотношения МДА/СОД после лечения Церулоплазмином в дозе 100 мг внутривенно 1 раз в сутки в течение 7 дней.

Способ тестирования физиологического состояния осетровых рыб // 2602662

Изобретение относится к ихтиологии и рыбоводству и представляет собой способ тестирования физиологического состояния осетровых рыб, включающий исследование сыворотки крови рыб, отличающийся тем, что сыворотку крови исследуют методом краевой дегидратаци в аналитических ячейках и производят морфологический анализ образовавшихся структур в режиме обычной микроскопии при различных увеличениях, при этом дендритные и переходные формы являются показателями нормы гомеостаза, а наличие пластинчатых структур указывает на изменения, происходящие в организме рыб.

Способ подбора режима иммуносупрессии после трансплантации печени детям раннего возраста // 2602302

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике. Через 3-4 недели после трансплантации печени в плазме крови у детей измеряют концентрацию трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF-β1) в нг/мл.

Способ диагностики степени тяжести атаки у пациентов с болезнью крона // 2602300

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики степени тяжести атаки у пациентов с болезнью Крона. Сущность способа заключается в том, что определяют скорость оседания эритроцитов (СОЭ), концентрацию С-реактивного белка (СРБ), уровень васкулоэндотелиального фактора (ВЭФ) в сыворотке, рассчитывают количество десквамированных эндотелиоцитов (ДЭЦ) в плазме крови, оценивают концентрацию микроальбумина (МАУ) в моче.

Клапан газоплотный для пробоотборной ёмкости // 2611538

Изобретение относится к запорной арматуре, применяющейся для газообразных сред, и может быть использовано, в частности, в пробоотборных емкостях. Клапан газоплотный содержит основание 1, корпус 2, по меньшей мере четыре уплотнительных кольца 5, 6, 7 и 8 из полимерного упругого материала и шпиндель 3 с золотником 3а.

Способ прокачки различных сред по трубопроводу и устройство для его осуществления // 2610117

Группа изобретений относится к технологии прокачки различных сред по трубопроводу и технике отбора проб жидкости из трубопровода и может найти применение в нефтехимической промышленности, где требуется точность определения параметров потока в трубопроводе.

Узел и устройство для разделения текучей среды на фазы с разными плотностями (варианты) // 2609805

Группа изобретений относится к устройствам для разделения фракций с более низкой и более высокой плотностями пробы текучей среды, а именно к вариантам механического разделителя и к вариантам узла разделения для обеспечения разделения пробы текучей среды на первую и вторую фазы, включающего такой механический разделитель.

Способ отбора пробы полимерных растворов, используемых в подземных пластах месторождений // 2609804

Группа изобретений относится к области техники, связанной с использованием раствора(ов) на основе полимеров в подземных пластах месторождений, в частности в методах повышения нефтеотдачи пласта.

Зонд растворения для растворения поляризованного материала образца // 2609497

Изобретение относится к оборудованию для растворения поляризованного материала образца, а именно динамической поляризации ядер. Зонд растворения содержит удлиненный трубчатый внешний кожух, первый и второй удлиненные трубопроводы и сужающий элемент.

Способ определения коэффициента неоднородности смеси сыпучих материалов // 2607400

Изобретение относится к области лабораторных исследований процессов смешения различных сыпучих материалов в химической промышленности, в промышленном производстве строительных материалов и в других отраслях промышленности.

Способ замера уноса примесей с газовым потоком и устройство для его осуществления // 2606099

Группа изобретений относится к способам измерения объемной или массовой доли жидкости и примесей в газовом потоке, а также к отбору пробы для определения гранулометрического состава механических примесей.

Способ для отбора пленок нефти и нефтепродуктов с поверхности воды и устройство для его осуществления // 2604843

Изобретение относится к области аналитических исследований пленок из нефти и нефтепродуктов и может применяться для определения состава нефти и нефтепродуктов в природных водоемах.

Экспресс-способ выбора наплавочных материалов и режимов наплавки роликов установки непрерывной разливки стали // 2604744

Изобретение относится к способу определения трещиностойкости наплавки роликов установки непрерывной разливки стали (УНРС) и может найти применение при изготовлении и восстановлении дуговой наплавкой роликов системы вторичного охлаждения УНРС.

Измерительный кристалл, микрофлюидное устройство и способ // 2604622

Группа изобретений относится к измерительному кристаллу для использования с микрофлюидной резистивной схемой для проведения анализа. Измерительный кристалл (100) для использования с отдельной микрофлюидной резистивной схемой (20) содержит канал (104) пробы, канал (114) отходов, размеры которых являются одинаковыми.

Вискозиметр // 2612049

Изобретение относится к области измерительной техники, а именно в химической и нефтехимической отраслях промышленности на любых предприятиях и заводах, где вязкость изготовляемых ими продуктов является основным показателем качества. Вискозиметр состоит из стеклянного вискозиметра типа ВПЖ-4 с отсеченными по диагонали коленом и отводной трубкой, герметично соединенного с ним двухходового крана, который герметично соединен со стеклянным шприцем. При этом двухходовой кран выполнен с возможностью переключения системы на стеклянный шприц либо на атмосферу. Техническим результатом является сокращение времени определения кинематической вязкости с одновременным упрощением процедуры измерения. 2 ил.