Внк-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства



Владельцы патента RU 2614074:

федеральное казенное предприятие " Щелковский биокомбинат" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, сфера суспензионного культивирования перевиваемых культур клеток ВНК-21. ВНК-21/13-02 - адаптированная линия к суспензионному способу выращивания с использованием питательной среды для суспензионного выращивания на основе гидролизатов: мышечного и лактальбумина. Культура клеток ВНК-21/13-02 предназначена для репродукции в промышленных условиях вируса ящура типа А, О, С, Азия, вируса бешенства шт."Щелково-51" используемых для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства. Клетки ВНК-21/13-02 чувствительны к вирусу ящура, который накапливается в количестве 7,01 g ТЦД50/мл, при содержании иммуногенного компонента до 1 млг/мл, а также чувствительны к вирусу бешенства, обеспечивая титр инфекционности 6,5 ЛД50/мл.

 

3.2.4.1. Область техники, к которой относится изобретение

Область биотехнологии, сфера суспензионного культивирования перевиваемых культур клеток ВНК-21.

3.2.4.2. Уровень техники

Характеристика аналогов изобретения

Перевиваемая линия клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21 клон 13, полученная в 1961 году в Англии Максферсоном и Стокером /Macpherson J, Stoker M. - Syrian hamster fibrolast cell line BHK-21 snd its derivatives. - Nature, 1964, 203, 1355-1357/, распространилась по всему Миру.

Из литературных данных /С.Г. Юрков, В.В. Зуев и др. "Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ" - Покров. -2000 г. – стр. 59-63/ в нашей стране имеются клетки ВНК-21, поступившие из Англии, Франции, Мексики, США, Швеции и подученные в отечественных профильных учреждениях.

Известны следующие аналоги клеток почки хомячка:

1. ВНК-21/13 - сублиния перевиваемых клеток почки новорожденного сирийского хомячка, полученная в Институте полиомиелита;

2. ВНК21/13 - сублиния перевиваемых клеток почки новорожденного сирийского хомячка, полученная в НИИС;

3. ВНК-21/2-17а - перевиваемый монослойно-суспензионный клон клеток, получен во ВНИЯИ (прототип).

ХАРАКТЕРИСТИКА АНАЛОГОВ

1. ВНК-21/13 - сублиния перевиваемых клеток почки новорожденного сирийского хомячка, поддерживалась в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР /С.Г. Юрков, В.В. Зуев и др. "Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ" - Покров. - 2000 г. – стр. 60/.

Среда культивирования. Адаптирована к выращиванию в пристеночных культурах. Клетки отделяют от стекла с помощью 0,25% раствора трипсина, подогретого до 37°С.

Ростовые свойства. При пересеве с коэффициентом 1:2-1:3 монослой формируется на 2-3 сутки после эксплантации. При условии коррекции рН среды до 7,5-7,6 сформированный монослой сохраняется до 5-6 дней. В литровом матрасе РУ накапливается 40-45 млн клеток.

Морфология. Клетки фибробластоподобные.

Кариология. Культура резко гетероплоидная с вариабельностью хромосомных наборов от 32 до 78. Стволовую линию (модальный класс) составляют клетки с 40 хромосомами (32-34%), 4-6% клеток в популяции сохраняют диплоидный набор хромосом.

Среда замораживания. Среда культивирования (90%), диметил-сульфоксид (10%).

Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность в пределах 85-95%. Культуры восстанавливают исходные ростовые свойства на 2-3 пассаже.

2. ВНК21/13 - сублиния перевиваемых клеток почки новорожденного сирийского хомячка, получена в НИИС /С.Г. Юрков, В.В. Зуев и др. "Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ" - Покров. - 2000 г. – стр. 61/.

Среда культивирования. Для суспензионного выращивания применяют среду Игла-MEM, обогащенную 120 мг/л серина и 610 мг/л глутамина, с добавлением 0,25% ГЛА и 10% сыворотки крови КРС. При пристеночном культивировании употребляют среду Игла MEM (90%) и сыворотку КРС (10%) рН 7,5-7,6.

Способ поддержания. Поддерживается в суспензионных условиях в реакторах различной емкости. Сохранила способность расти в пристеночных культурах. В этом случае при очередном пассировании клеточный пласт диспергируют 0,25% раствором трипсина, подогретого до 37°С.

Ростовые свойства. В суспензионной культуре при посеве в концентрации 500 тыс клеток на мл обеспечивает 3-4-кратный прирост популяции на 3-4 сутки роста. При коэффициенте пересева 1:3 монослой формируется в пристеночных культурах на 2-3 сутки после посева и переживает не более 3-х дней.

Морфология. Клетки эпителиоподобные.

Кариология. Популяция гетероплоидная с разбросом числа хромосом в клетках от 20 до 78. Модальный класс составляют клетки с диплоидным набором хромосом (16-24%).

Среда замораживания. Ростовая среда (90%), диметилсульфоксид (10%).

Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность на уровне 88-96%. Культуры восстанавливаются на 1-2 пассаже.

Характеристика прототипа, выбранного заявителем:

3. ВНК-21/2-17а - перевиваемый монослойно-суспензионный клон клеток /С.Г. Юрков, В.В. Зуев и др. "Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ" - Покров. - 2000 г. – стр. 62/ получен во ВНИЯИ и хранится в жидком азоте на уровне 13 пассажа.

Среда культивирования. 0,25% мышечный гидролизат на растворе Эрла (для монослойных культур) и раствор Хенкса для суспензионного культивирования с добавлением 5 аминокислот (аргинин, глутамин, метеонин, цистин, серин), согласно прописи модифицированной среды Игла и 8 витаминов группы В, сыворотка КРС (5%), рН среды 6,8-7,2.

Способ поддержания. Суспензионную культуру выращивают объемно-доливным методом. Монослойную культуру в пристеночных сосудах любой емкости. При очередном пересеве применяют смесь 0,25% трипсина и 0,02% раствора версена в соотношении 1:1.

Ростовые свойства. Через 48 часов культивирования в суспензии культура дает 6-7 кратный прирост, достигая конечной концентрации 2,3-2,8 млн/мл. При выращивании в монослое при посевной концентрации 50-100 тыс клеток на мл среды монослой образуется на 2-3 сутки роста.

Морфология. В суспензии культура представлена одиночными блестящими, округлыми клетками. В монослое популяция состоит из фибробластоподобных клеток с прозрачной гомогенной цитоплазмой.

Кариология. Культура гетероплоидная. Модальный класс представлен клетками с 42 хромосомами, составляющими в популяции 28-40%.

Среда замораживания. Ростовая среда (90%), диметилсульфоксид (10%).

Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность 85-90%, клетки восстанавливают морфологию и ростовые свойства на 2-3 пассаже.

Чувствительность к вирусам. Культура клеток чувствительна к вирусу ящура типа А, О, С, Азия.

3.2.4.3. Раскрытие изобретения

(1) Сведения, раскрывающие сущность изобретения.

1.2. Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение.

Культура клеток ВНК-21/13-02 предназначена для репродукции в промышленных условиях вируса ящура типа А, О, С, Азия, вируса бешенства шт. "Щелково-51", используемых для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства.

Клетки ВНК-21/13-02 характеризуются высокой чувствительностью к вирусу ящура, который накапливается в количестве 7,01 g ТЦД50/мл, при содержании иммуногенного компонента до 1 млг/мл, а также чувствительностью к вирусу бешенства, обеспечивая титр инфекционности 6,5 ЛД50/мл.

Сущность изобретения

"ВНК-21/13-02 - перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка", адаптированная к суспензионному способу выращивания с использованием питательной среды для суспензионного выращивания на основе солевого раствора Хенкса, содержащая 5-7% сыворотки, 0,125% гидролизата мышечных белков и 0,125% гидролизата лактальбумина с добавлением пяти аминокислот: 1-аргинина 0,042 гр/л; 1-глутамина 0,584 гр/л; 1-тирозина 0,02 гр/л; 1-триптофана 0,015 гр/л; 1-цистина 0,032 гр/л и семи витаминов группы В: холин-хлорид 0,0034, пантотенат кальция (B5) 0,0034, пиридоксаль НСl 0,0034, тиамин (B1) 0,0034, мезо-инозит 0,0068, никотинамид (РР) 0,0034, рибофлавин (B2) 0,00034, фолиевая кислота (B9) 0,0034.

ВНК-21/13-02 депонирована в Российской коллекции клеточных культур (РКК) (СЖК РАСХН) при Всероссийском научно-исследовательcком институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Происхождение.

Перевиваемая линия клеток ВНК-21 клон 13 поступила на Щелковский биокомбинат из Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности (ВНИиТИБП), который получил эту линию из лаборатории цитологии Московского научно-исследовательского института вирусных препаратов в 1972 г.

Морфология.

В суспензии культура представлена одиночными округлыми клетками с небольшим количеством конгламератов, содержащих от 3 до 5 клеток. В монослое популяция состоит из фибробластоподобных клеток с прозрачной гомогенной цитоплазмой, иногда образуется единый цитоплазматический пласт без границ между клетками, с наличием большого количества ядер. Отмечается присутствие 2-3-4 и более ядерных симпластов, лежащих изолировано или в структуре клеточного пласта. Также отмечается отпочковывание ядер от общей ядерной массы и формирование микроядер в результате разрушения ядра. Часть клеток отделяется от стекла и растет в суспензии.

Способ культивирования

Монослой клеток ВНК-21/13-02 выращивают в матрацах любой емкости. Для диспергирования клеточного пласта при пересевах используют смесь 0,25%-ного раствора трипсина и 0,02%-ного версена в соотношении 1:9 при температуре 37°С. Клетки снимают бесцентрифужным методом и ресуспендируют в ростовой среде до посевной концентрации.

В суспензии культуру клеток выращивают отъемно-доливным способом в течение 48 часов до 10-50 последовательных пассажей.

Условия культивирования

Суспензионное культивирование проводят в реакторах емкостью 4-40-100-600 литров с рабочим объемом 3-30-60-450 литров соответственно при следующих параметрах:

- посевная концентрация 0,4-0,5⋅106 кл/мл;

- скорость перемешивания 25-40 об/мин;

- температура культивирования 36,0-36,5°С;

- рН среды в пределах 6,6-7,1;

- аэрация путем барботирования воздухом 0,5-1,5 л/л среды;

Индекс пролиферации при суспензионном культивировании равняется 6-8, достигая концентрации к 48 часам 4⋅106 кл./мл при жизнеспособности 95-99%.

Пассаж: 32 пассажа в роллерном монослое, 13 пассажей в суспензии. Клеточная суспензия расфасована в ампулы по 2 см3 с концентрацией 7⋅106 кл/мл.

Кариологическая характеристика: кариотип суспензионной культуры клеток ВНК-21/13-02 соответствует кариотипу сирийского хомячка, размах варьирования числа хромосом на клетку от 31 до 80, модальный класс (36%) составляют клетки, содержащие 42 хромосомы. В монослойной культуре количество хромосом на одну клетку варьирует от 31 до 98, модальный класс (22%) составляют клетки с числом хромосом, совпадающим с диплоидным (n=44).

Видовая идентичность.

Культура идентифицирована как ткань почки сирийского хомячка.

Криоконсервация, жизнеспособность после консервации.

Для длительного хранения (-196°С) используют ампулы, при хранении (-70°С) - флаконы. Консервирование клеток проводят в питательной среде (73%), сыворотке (20%), криопротектор диметилсульфоксид (7%). Замораживание суспензии клеток по 2-х ступенчатому режиму понижения температуры от 0 до минус 30°С со скоростью 1°С в минуту, от минус 30°С до минус 70°С со скоростью 4-6°С в минуту. Охлажденные до минус 70°С ампулы с суспензией клеток помещают на хранение в сосуды Дьара с жидким азотом -196°С, предварительно подержав ампулы в парах азота. Жизнеспособность клеток после консервации 85-97%.

3.2.4.5. Осуществление изобретения

Описание способа получения линии клеток.

В качестве исходного материала использовали перевиваемую линию клеток ВНК-21 клон 13, поступившую на Щелковский биокомбинат из Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности (ВНИиТИБП), который получил эту линию из лаборатории цитологии Московского научно-исследовательского института вирусных препаратов в 1972 г.

Адаптацию клеток к суспензионным условиям культивирования проводили в биоферментере MD-300 фирмы "MARUBISHI" (Япония) с автоматическим поддержанием концентрации водородных ионов (рН 6,9-7,0), температуры (37°С), ручным регулированием подачи воздуха и скорости перемешивания (до 100 об/мин). Культивирование проводили используя питательную среду на основе раствора Хенкса, содержащей 0.25% суммы гидролизатов лактальбумина и мышечных белков, 7% сыворотки кр.рог. скота, пяти аминокислот и витаминов группы В.

В первых трех пассажах отмечали некоторое уменьшение численности популяции к концу культивирования, что требовало увеличить засевную концентрацию клеток до 500 тыс/мл. Последующие пять пассажей клетки росли с образованием довольно значительных клеточных конгламератов, появлением зернистости в цитоплазме. При дальнейшем пассажировании, с 9-го по 13 пассаж, число конгламератов уменьшалось, цитоплазма становилась прозрачной и гомогенной. Посадочную концентрацию снизили до 200 тыс/мл, популяция клеток в суспензии увеличивалась в 6-7 раз, время генерации составило 48 часов.

После проведения 13 пассажей в суспензии были получены клетки, отличающиеся однообразием морфологии и размера, с небольшим количеством конгламератов и высокой пролиферативной активностью (индекс пролиферации составил 5-7). Консервирование клеток осуществили в криосреде (ростовая среда - 73%, сыворотка - 20%, диметилсульфоксид - 7%), в ампулах по 2 мл с концентрацией 7 млн.кл./мл. Замораживание проводили по двухступенчатому режиму понижения температуры от 0 до -30°С со скоростью 1°С/мин и от -30 до -70°С со скоростью 4°С/мин. Охлажденные до -70°С ампулы с суспензией клеток поместили на хранение в сосуд Дъюара с жидким азотом (-196°С), предварительно выдержав их в парах азота. Жизнеспособность клеток после консервации составила 98%.

Культура клеток прошла контроль на стерильность согласно ГОСТ 28085-89 "Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности".

Данные кариологического анализа, проведенного методом Moorhead P.S. et al. 1960 г., адаптированной суспензионной культуры клеток ВНК-21/13-02 соответствуют кариотипу сирийского хомячка, размах варьирования числа хромосом на клетку от 31 до 80, модальный класс (36%) составляют клетки, содержащие 42 хромосомы.

В монослойной культуре количество хромосом на одну клетку варьирует от 31 до 98, модальный класс (22%) составляют клетки с числом хромосом, совпадающим с диплоидным (n=44).

Полученный трофовариант клеток ВНК-21/13-02 отличается высокой пролиферативной активностью. Концентрация клеток, выращенных в среде, содержащей 0,25% гидролизата и 7% сыворотки, составила 1,5-3,0 млн.кл./мл. в биореакторах промышленных объемов.

ВНК-21/13-02 депонирована в Российской коллекции клеточных культур (РКК) в специализированной коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (СХЖ РАСХН).

Адрес коллекции: 109428, г. Москва, Рязанский проспект 24, корпус 1.

Линии клеток присвоен коллекционный номер: №61.

Дата депонирования: 20 мая 2004 г.

ВНК-21/13-02 - перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, депонированная в Российской коллекции клеточных культур (РКК), в специализированной коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (СХЖ РАСХН) под № 61, предназначенная для репродукции вируса ящура типа А, О, С, Азия и вируса бешенства штамм "Щелково-51" используемых для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена система культивирования клеток, система для оценки эффекторных агентов кишечника, содержащая систему культивирования клеток, также предложены способы культивирования клеток, получения кишечного органоида и оценки лечения эффекторных агентов кишечника.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к противоопухолевым вакцинам на основе эпитопных пептидов MPHOSPH1, и может быть использовано в медицине. Получают пептид состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложена мышь для продукции цепи иммуноглобулина.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам лечения амиотрофического бокового склероза, что может быть использовано в медицине. Пациенту вводят клетки, полученные из ткани пуповины, способные к самообновлению и размножению, обладающие потенциалом к дифференцированию в клетку нейронного фенотипа.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине для получения лекарственного средства для лечения рака.

Изобретение относится к клеточной технологии. Описан способ получения адгезионных клеток в соответствии с которым: a.

Изобретение относится к области клеточной биотехнологии и биофармакологии, конкретно к получению препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных.
Изобретение относится к биохимии. Описан способ получения фракций стволовых клеток, имеющих происхождение из липидной ткани, включающий стадии: (a) сбора или получения образца липидной ткани, содержащей стволовые клетки; (b) промывания образца со стадии (а) подходящим водным буфером; (c) инкубирования образца со стадии (b) с ферментом, способным перерабатывать липидную ткань и извлекать из нее стволовые клетки; (d) инактивирования фермента, использованного на стадии (с), и извлечения водной фазы из продукта со стадии (с); (e) очистки водной фазы, полученной на стадии (d); (f) титрования водной фазы, полученной на стадии (е), и, если необходимо, ее разбавления, чтобы получить конечную фракцию стволовых клеток с желаемой концентрацией и объемом, в котором материал, содержащий стволовые клетки, обрабатывают в шприце на всем протяжении по меньшей мере стадий: (а), (b) и (с), указанный шприц, выполняет функции собирающего устройства, фазового разделителя и технологического реактора.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к применению мезенхимальных стволовых клеток в способе лечения иммуноопосредованных воспалительных заболеваний, а также для производства лекарственного средства для лечения симптомов указанных заболеваний.

Изобретение относится к биохимии. Описана популяция панкреатических эндокринных клеток, которые соэкспрессируют NKX6.1 и инсулин, и где менее 10% клеток в популяции экспрессируют глюкагон, где популяцию панкреатических эндокринных клеток получают дифференцировкой плюрипотентных стволовых клеток человека, полученных из устойчивых линий эмбриональных стволовых клеток человека, где указанная дифференцировка включает первую стадию культивирования плюрипотентных стволовых клеток в среде, содержащей агонист рецептора TGF-β, выбранный из группы, состоящей из активина А, активина В, TGFβ-I, TGFβ-II, GDF-8 и GDF-11, в концентрации от около 2 нг/мл до 100 нг/мл, и дополнительную стадию культивирования клеток панкреатической эндодермы в среде, содержащей от 20 нМ до 500 нМ (2S,5S)-(Е,Е)-8-(5-(4-(трифторметил)фенил)-2,4-пентадиеноиламино)бензолактам.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена двухслойная, плоская, прозрачная подложка гидрогеля для длительного культивирования клеток и способ ее получения. Подложка в гидратированном состоянии имеет толщину в диапазоне 25-500 мкм и радиус кривизны менисков 10-150 мкм. Подложка гидрогеля включает структурообразующий слой, состоящий из трехмерного коллагенового гидрогеля, и верхний слой белков. Трехмерный коллагеновый гидрогель содержит коллаген I типа, коллаген III типа и белки, способствующие адгезии и миграции клеток. Верхний слой белков содержит коллаген IV типа, ламинин и фибронектин. Способ получения подложки включает смешивание растворов коллагена I типа, коллагена III типа и белков, способствующих адгезии и миграции клеток, дальнейшее желирование и витрификацию, после чего иммобилизацию белков на поверхности. Изобретения обеспечивают сохранение фенотипа эндотелиальными клетками и эпителиальными клетками при их длительном культивировании. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для введения сферического диэлектрического микроконтейнера, несущего определенный генетический материал, такой как ДНК или РНК, в клетки млекопитающих. Создают оптическую ловушку для микроконтейнера с использованием сфокусированного лазерного излучения с длиной волны 830 нм. Осуществляют приведение микроконтейнера в соприкосновение с клеточной мембраной путем облучении его цугами импульсов лазерного излучения с длиной волны 780 нм с последующим разрезанием клеточной мембраны сфокусированными лазерными импульсами и контролируемым вводом с использованием оптической ловушки микроконтейнера в клетку. Изобретение позволяет доставить микроконтейнер, несущий генетический материал, в заданную координату клетки млекопитающего с высокой точностью. 3 з.п. ф-лы.

Группа изобретений относится к области биохимии, включает устройство и систему для культивирования клеток, а также способ культивирования клеток с использованием вышеуказанного устройства и системы (варианты). Устройство включает сферический трехмерный корпус с множеством двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса. Система содержит контейнер и группу сферических трехмерных корпусов, помещенных в контейнер. При этом трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер в диапазоне от 1 мм до 50 мм или отношение площади поверхности к объему между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3. Способ включает выбор группы эукариотических клеток и введение эукариотических клеток в контакт с трехмерным корпусом. Изобретения обеспечивают двухмерный рост эукариотических клеток. 4 н. и 32 з.п. ф-лы, 24 ил., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан 3D in vitro двухфазный костно-хрящевой «органоид», содержащий слой искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток и слой искусственной костной ткани, где искусственная костная ткань содержит придающий структуру каркас и структуру костного мозга; где структура костного мозга в искусственной костной ткани получена путем посева мезенхимальных стволовых клеток на придающий структуру каркас и где слой искусственной хрящевой ткани/агрегатов хондрогенных клеток контактирует по меньшей мере с одной поверхностью слоя искусственной костной ткани, и способы его получения и применения. Изобретение расширяет арсенал средств для медицинской диагностики. 7 н. и 7 з.п. ф-лы, 13 ил., 5 табл., 2 пр.

Изобретения касаются способа снижения гетерогенности заряда целевого антитела, способа выработки целевого антитела со сниженной гетерогенностью заряда и способов приготовления лекарственного препарата для лечения злокачественных новообразований, содержащего антитело против глипикана 3 или антитело против IL-31RA. Представленный способ снижения гетерогенности заряда целевого антитела включает культивирование клетки СНО, которая вырабатывает антитело, при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем снижение температуры культивирования до 32-35°С однократно, и затем продолжение культивирования при сниженной температуре культивирования в течение приблизительно от 1 до 50 дней. Изобретения позволяют получать антитела со сниженной зарядовой гетерогенностью, которые могут быть использованы для изготовления лекарственных препаратов. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым пептидам, содержащим эпитопы, распознаваемые CD4+ естественными киллерными T(NKT)-клетками, и может быть использовано в медицине. Получают иммуногенный слитый пептид, связывающий CD1d и содержащий мотивы [FWHY]-xx-[ILMV]-xx-[FWHY] и [CST]-xx-C или C-xx-[CST]. Изобретение позволяет увеличить активности T(NKT)-клеток для применения при инфекционных заболеваниях, аутоиммунных заболеваниях, иммунной реакции на введение аллогенных факторов, аллергических заболеваний, для терапии опухолей, для предупреждения отторжения трансплантата и для предупреждения иммунизации против вирусных белков. 14 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен биорезорбируемый микроноситель для доставки клеток в область повреждения ткани кожи для заживления и регенерации ран. Микроноситель представляет собой частицы диаметром 50-300 мкм с отрицательным зарядом при значениях рН 6,0-7,5. При этом частицы получены измельчением трехмерных пористых матриксов на основе фиброина шелка Bombyx mori. Изобретение обеспечивает иммобилизацию на носителе большего количества клеток, возможность выполнения функции каркаса для функционирующих клеток в условиях in vitro, in vivo и регулирование скорости биодеградации микроносителя. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 3 пр.

Изобретения касаются способа приготовления экспрессионного вектора, кодирующего адаптированную рекомбиназу, которая способна к рекомбинации асимметричных последовательностей-мишеней в пределах длинного концевого повтора (LTR) провирусной ДНК множества штаммов ВИЧ-1, встроенных в геном клетки-хозяина, а также к полученному экспрессионному вектору, клетке, трансфецированной этим вектором, экспрессированной рекомбиназе и фармацевтической композиции, включающей экспрессионный вектор, клетку и/или рекомбиназу. Представленные изобретения могут быть использованы при лечении или профилактике инфекции ВИЧ-1 у субъекта. 6 н и 22 з.п.ф-лы, 5 ил., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ дифференциации плюрипотентных стволовых клеток (PSC) в клетки сосудистого русла. Берут плюрипотентные стволовые клетки и получают монослой плюрипотентных стволовых клеток в среде для плюрипотентности. Инкубируют указанные клетки в течение 2-4 суток в примирующей среде с добавлением низкомолекулярного соединения, которое активирует путь бета-катенина, и/или сигнальный путь Wnt, и/или сигнальный путь hedgehog (НН), выбранного из группы низкомолекулярных ингибиторов киназы 3 гликогенсинтазы (Gsk3a-b), низкомолекулярных ингибиторов CDC-подобной киназы 1 (Clk1-2-4), низкомолекулярных ингибиторов митогенактивируемой протеинкиназы 15 (Mapk15), низкомолекулярных ингибиторов киназы двойной специфичности, регулируемой фосфорилированием тирозина (Y) (Dyrk1a-b 4), низкомолекулярных ингибиторов циклин-зависимой киназы 16 (Pctk1-3 4), активаторов и модуляторов Smoothened (SMO) взаимодействия между β-катенином (или γ-катенином) и коактивирующими белками СВР (белок, связывающий CREB) и р300 (белок p300, связывающий Е1А). Индуцируют дифференциацию посредством инкубирования указанных примированных клеток в индуцирующей среде. Изобретение расширяет арсенал способов дифференциации клеток в клетки сосудистого русла. 17 з.п. ф-лы, 20 ил., 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано для получения противоопухолевых ЦТЛ. Способ предусматривает антигенную активацию полученных зрелых ДК с использованием ДНК-конструкции, кодирующей эпитопы KIFGSLAFL и RLLQETELV опухоль-ассоциированного белка HER2, совместное культивирование с аутологичными зрелыми антиген-активированными ДК из прилипающей фракции всех клеток неприлипающей фракции МНК, с последующим выделением из совместной культуры ДК и МНК специфичных к указанным эпитопам ЦТЛ методом магнитной сепарации с использованием антигенспецифических реагентов, обеспечивающих обратимое окрашивание выделяемых клеток. После выделения HER2-специфических ЦТЛ стимулируют их пролиферацию путем культивирования в присутствии внесенных одновременно цитокинов рчИЛ-2, рчИЛ-7 и рчИЛ-15 c конечной концентрацией каждого из них 50 нг/мл в течение 14-20 суток. Изобретение обеспечивает индукцию эффективного антигенспецифического противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа против опухолевых клеток с гиперэкспрессией антигена HER2, характеризующегося увеличением процента гибели HER2-экспрессирующих опухолевых клеток. 1 з.п. ф-лы, 2 ил.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2005-05-31 2017-03-28T23:16:37
Наверх