Способ получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2614960:

Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих путем иммобилизации неосмектина с гетерологичными антигенами, дающими перекрестные реакции с иммуноглобулинами, где к сорбенту вносят водорастворимый антиген, проводят экспозицию, отмывают от несвязавшегося антигена, доводят рН и проводят одномоментную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител с контролем иммунологических показателей готовых препаратов в РИФ. Изобретение обеспечивает эффективную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител. 2 пр., 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве иммуноглобулинов флуоресцирующих для индикации возбудителей инфекционных болезней в реакции иммунофлуоресценции (РИФ).

Для получения высокоактивных, специфичных иммуноглобулинов флуоресцирующих, применяемых в РИФ, необходимо провести качественную очистку препаратов от несвязавшегося красителя - флуоресцеинизотиоцианата (ФИТЦ) и сорбцию гетерологичных антител.

Известен способ получения иммуноглобулинов флуоресцирующих, включающий получение сыворотки, иммуноглобулинов, конъюгацию с ФИТЦ, очистку от несвязавшегося флуорохрома [1].

Недостатком способа является отсутствие 100% специфичности иммуноглобулинов флуоресцирующих диагностических в связи с применением хроматографической очистки препарата только от несвязавшегося ФИТЦ без освобождения от гетерологичных антител.

Известен способ получения иммуноглобулинов флуоресцирующих, включающий получение антител, конъюгацию с ФИТЦ, очистку от несвязавшегося флуорохрома диализом. При использовании данной методики, при получении флуоресцирующих препаратов на основе поликлональных антител, отмечена неспецифическая реакция при взаимодействии с клетками V. cholerae O22. В процессе адсорбции сыворотки клетками V. cholerae O22 не удалось полностью избавиться от гетерологичных антител [2].

Недостатком способа является отсутствие 100% специфичности диагностических иммуноглобулинов флуоресцирующих в связи с применением диализа для очистки препарата от несвязавшегося ФИТЦ без качественного освобождения от гетерологичных антител.

Известен способ получения флуоресцирующего сальмонеллезного препарата, включающий инактивацию сальмонелл формалином, очистку хлороформом, центрифугирование и конъюгирование с ФИТЦ, отмывку от непрореагировавшего красителя путем многократного центрифугирования [3].

Недостатком способа является длительность очистки препарата от несвязавшегося ФИТЦ путем многократного центрифугирования.

Известен способ сорбции иммунной сыворотки крови, включающий иммуносорбцию неспецифических антител водорастворимыми гетерологичными антигенами, иммобилизованными на твердофазном носителе, в качестве которого используют модифицированный алюмосиликат с магнитными свойствами [4].

Недостатком способа является применение сорбента, выполняющего одну функцию - сорбцию гетерологичных антител без очистки от несвязавшегося ФИТЦ.

Цель изобретения - создание бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител.

Известны различные методы очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося флуорохрома (чаще всего используют метод гельфильтрации с сефадексом G-50 [5] и от гетерологичных антител (применяют корпускулярные антигены или сорбенты с иммобилизованными водорастворимыми гетерологичными антигенами)). Но их применение имеет ряд недостатков. Сефадкс G-50 - дорогостоящий реактив импортного производства. Сорбция корпускулярными антигенами существенно понижает специфические титры антител. Используемые полиакриламидные сорбенты с иммобилизованными водорастворимыми антигенами из гетерологичных штаммов включают в своем составе высокотоксичные дорогостоящие импортные реактивы.

Технический результат изобретения достигается тем, что в качестве бифункционального аффинного сорбента для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих используется модифицированный неосмектин (смектит диоктаэдрический) с иммобилизованными гетерологичными антигенами. Аффинный сорбент обладает бифункциональными свойствами, позволяя провести качественную очистку препаратов от несвязавшегося низкомолекулярного вещества - ФИТЦ и сорбцию гетерологичных антител с сохранением активности иммуноглобулинов флуоресцирующих.

Неосмектин - тонкий, мелкодисперсный порошок для приготовления суспензии (Производитель: ЗАО «Фармпроект», г. Санкт-Петербург). Мощный адсорбент нового поколения, обладающий улучшенными сорбционными свойствами. Эффективно адсорбирует бактерии, вирусы. Состав его представлен соединениями, основными из которых является окись алюминия, окись магния и двуокись кремния, имеет дискоидно-кристаллическую структуру, поэтому обладает выраженным селективным адсорбирующим действием, характеризуется незначительным эффектом набухания.

Первоначально апробацию сорбента проводили на растворе ФИТЦ без иммуноглобулинов, используя неосмектин, а для сравнения - сефадекс G-50 (традиционно применяемый при хроматографической очистке). Сефадекс имеет ряд достоинств, но низкая степень пористости не позволяет использовать его при аффинной хроматографии. Сефадекс можно использовать для очистки от низкомолекулярного красителя, но нельзя применять для иммобилизации белковых лигандов, т.е. получения аффинных сорбентов.

Процент сорбции свободного ФИТЦ на сорбентах определяли следующим образом: сорбенты отмывали фосфатно-солевым буфером (ФСБ), рН 9,5 до отсутствия спектра поглощения при длине волны 495 нм (максимальный спектр поглощения для ФИТЦ), и к 0,4 г сорбентов добавляли по 0,5 мг/мл раствора ФИТЦ. Через 1 ч процент сорбции ФИТЦ на сефадексе и неосмектине составил (80±1)%.

Для придания сорбенту - неосмектину биоспецифических свойств (получение аффинного сорбента) на его поверхность иммобилизовали водорастворимые антигены, полученные из биомасс гетерологичных штаммов микроорганизмов. Для этого сорбенты отмывали ФСБ, рН 7,2 до отсутствия спектра поглощения при длине волны 280 нм (максимальный спектр поглощения для белка). К 0,4 г сорбента вносили 2,5 мл комплексного водорастворимого бруцеллезного антигена с концентрацией белка 0,5; 1,5; 2,5 и 3,5 мг/мл, полученного из биомасс штаммов В. abortus 544, В. abortus 19 - ВА, В. abortus 345, дающих перекрестную реакцию с иммуноглобулинами туляремийными. Иммобилизацию антигена с матрицей вели при температуре (22±4)°C в течение 1; 2; 4; 18 ч. В результате исследований установлено, что концентрация белка 1,5 мг/мл в объеме 2,5 мл является оптимальной для полного насыщения сорбента антигеном в течение 2 ч.

В результате отработки всех параметров получен бифункциональный аффинный сорбент, пористая структура которого и селективные свойства эффективны для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител.

Технология получения бифункционального аффинного сорбента состояла из нескольких этапов: отмывка сорбента до нулевой экстинции на спектрофотометре; иммобилизация с гетерологичными антигенами; отмывка сорбента от несвязавшихся антигенов; очистка иммуноглобулинов флуоресцирующих от свободного ФИТЦ и гетерологичных антител; оценка полноты очистки препарата от несвязавшегося красителя; контроль иммунологических показателей препарата.

Иммуноглобулины флуоресцирующие диагностические освобождали от несвязавшегося флуорохрома традиционным методом хроматографии на колонке с сефадексом G-50 и с помощью разработанного аффинного сорбента, добавляя к нему (после центрифугирования при 6000 g в течение 10 мин) иммуноглобулины флуоресцирующие. Для их очистки в объеме 5 мл путем гельфильтрации необходимо 20 г сефадекса G-50, упакованного в хроматографическую колонку, а разработанного аффинного сорбента - 2,0 г.

Для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих туляремийных от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител их вносили в объеме 5 мл во флакон со взвесью разработанного аффинного сорбента (2,0 г) с рН 9,5, взвесь инкубировали 1 ч при температуре (22+4)°C и центрифугировали при 6000 g в течение 10 мин. Надосадочная жидкость представляла собой очищенные иммуноглобулины флуоресцирующие туляремийные диагностические.

Оценку результатов активности и специфичности иммуноглобулинов флуоресцирующих определяли на фиксированных мазках гомологичных и гетерологичных штаммов прямым методом окраски препаратов в РИФ, предварительно проверив активность иммуноглобулинов до сорбции и метки ФИТЦ в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) (табл. 1).

Микроскопию препаратов проводили в люминесцентном микроскопе серии "Люмам", используя соответствующие фильтры согласно инструкции по эксплуатации прибора. В результате экспериментов получены высокоактивные, специфичные иммунофлуоресцирующие препараты. Проанализировано 3 серии иммуноглобулинов флуоресцирующих туляремийных с концентрацией белка 9-10 мг/мл и молярным соотношением Мф/Мб (нагрузка красителя на белок) от 5,8 до 11,0. Специфическая активность всех приготовленных серий характеризовалась красящим титром, равным разведению 1:64 - 1:128 при исследовании мазков гомологичных возбудителей, рабочее разведение препаратов - 1:32 - 1:64. Наблюдалось яркое свечение гомологичных штаммов и отсутствие свечения гетерологичных штаммов, окрашенных рабочим разведением иммуноглобулинов флуоресцирующих.

Полноту очистки препарата от несвязавшегося флуорохрома определяли методом восходящей хроматографии на бумаге [7]. На хроматографической бумаге обнаруживалось одно ярко флуоресцирующее пятно на месте нанесения препарата, что свидетельствовало о полной очистке иммуноглобулинов флуоресцирующих от ФИТЦ.

Для сравнения проведена очистка иммуноглобулинов флуоресцирующих туляремийных от несвязавшегося флуорохрома по традиционной методике, используя колонку хроматографическую с сефадексом G-50 и от гетерологичных антител, используя полиакриламидный сорбент с фиксированным комплексным бруцеллезным водорастворимым антигеном.

При сравнительном изучении в РИФ активности и специфичности иммуноглобулинов флуоресцирующих туляремийных диагностических, полученных традиционным и модифицированным методами, установлена сопоставимость полученных результатов, а с учетом снижения временных, трудовых и материальных затрат - превосходство предложенного одномоментного метода очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител становится очевидным (стоимость сефадекса G-50 в 25-30 раз выше стоимости неосмектина).

Бифункциональность свойств сорбентов позволяла выполнять две задачи. Первая - освобождение иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося красителя - ФИТЦ - в результате физической сорбции последнего на сорбенте. Вторая - очистка иммуноглобулинов флуоресцирующих от гетерологичных антител за счет аффинных взаимодействий последних, входящих в состав иммуноглобулинов и соответствующих антигенов, фиксированных на сорбенте. Отработанная при этом методика может быть использована как основа для получения высокоактивных, специфических иммуноглобулинов флуоресцирующих диагностических при выявлении возбудителей различных инфекций.

Возможность практического применения заявляемого способа иллюстрируется примерами его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.

Пример 1. Получение бифункционального аффинного сорбента для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих лептоспирозных от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител, контроль в РИФ.

При контроле специфичности иммуноглобулинов лептоспирозных установлено, что наблюдается перекрестная реакция с L. biflexa серогруппы Semaranga, серовар patoc I. Для придания сорбенту - неосмектину биоспецифических свойств (получение аффинного сорбента) на его поверхность иммобилизовали водорастворимый антиген, полученный из биомассы L. biflexa серогруппы Semaranga, серовар patoc I. Для этого сорбент отмывали ФСБ, рН 7,2 и к 0,4 г сорбента вносили 2,5 мл водорастворимого антигена с концентрацией белка 1,5 мг/мл, инкубировали 2 ч, отмывали от несвязавшегося антигена.

Для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих лептоспирозных от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител их вносили в объеме 5 мл во флакон с разработанным аффинным сорбентом (2,0 г) с рН 9,5, инкубировали 1 ч при температуре (22+4)°C и центрифугировали при 6000 g в течение 10 мин. Надосадочная жидкость представляла собой очищенные иммуноглобулины флуоресцирующие диагностические лептоспирозные. Далее исследовали иммунологические показатели готовых препаратов (активность, специфичность) в РИФ (табл. 2).

Проанализировано 3 серии иммуноглобулинов флуоресцирующих лептоспирозных с концентрацией белка 10-11 мг/мл и молярным соотношением Мф/Мб от 6,5 до 11,5. Специфическая активность всех приготовленных серий характеризовалась красящим титром, равным 1:32 - 1:64 при исследовании мазков гомологичных возбудителей, рабочее разведение препаратов - 1:16 - 1:32.

Для изучения специфичности испытываемых серий иммуноглобулинов флуоресцирующих в опыт были взяты штаммы культур гетерологичных микроорганизмов: L. biflexa patoc I, L. biflexa Doberdo RPE, Listeria monocytogenes 1-7 серотип, Y. pseudotuberculosis I-II серовар, E.coli 0-10, F. tularensis Miura, B. abortus 19 ВА. В результате констатировано отсутствие специфической иммунофлуоресценции у всех гетерологичных микроорганизмов, взятых в опыт и окрашенных рабочим разведением иммуноглобулинов флуоресцирующих лептоспирозных.

Пример 2. Получение бифункционального аффинного сорбента для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих бруцеллезных от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител, контроль в РИФ.

При контроле специфичности иммуноглобулинов бруцеллезных установлено, что наблюдаются перекрестные реакции с F. tularensis Schu и F. tularensis 890 Аз. Для придания сорбенту - неосмектину биоспецифических свойств (получение аффинного сорбента) на его поверхность иммобилизовали водорастворимые антигены, полученные из биомасс вышеназванных штаммов. Для этого сорбент отмывали ФСБ, рН 7,2 и к 0,4 г сорбента вносили 2,5 мл водорастворимого антигена с концентрацией белка 1,5 мг/мл, инкубировали 2 ч, отмывали от несвязавшегося антигена.

Для очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих бруцеллезных от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител их вносили в объеме 5 мл во флакон со взвесью разработанного аффинного сорбента (2,0 г) с рН 9,5, взвесь инкубировали 1 ч при температуре (22+4)°C и центрифугировали при 6000 g в течение 5-10 мин. Надосадочная жидкость представляла собой очищенные иммуноглобулины флуоресцирующие бруцеллезные диагностические. Далее исследовали специфическую активность готовых препаратов в РИФ (табл. 3).

Специфическая активность всех приготовленных серий характеризовалась красящим титром, равным 1:64 - 1:128 при исследовании мазков гомологичных возбудителей, рабочее разведение препаратов - 1:32- 1:64.

Для изучения специфичности испытываемых серий иммуноглобулинов флуоресцирующих в опыт были взяты штаммы культур гетерологичных микроорганизмов: Y. pseudotuberculosis серовар 1, 2; Y. enterocolitica 64,178; E.coli 0-10, 0-11; F. tularensis Miura; F. tularensis 890 Аз; F. tularensis Schu; F. tularensis 15 НИИЭГ; F. tularensis 503/840. В результате констатировано отсутствие специфической иммунофлуоресценции у всех гетерологичных микроорганизмов, взятых в опыт и окрашенных рабочим разведением иммуноглобулинов флуоресцирующих туляремийных.

Источники информации

1. Патент РФ №2429484. Дондурей Е.А., Осидак Л.В., Потапенко Л.Б., Голованова А.К., Милькинт К.К., Суховецкая В.Ф., Сироткин А.К. Способ экспресс-диагностики ротавирусной инфекции в материалах из верхних дыхательных путей, иммуноглобулин флуоресцирующий сухой для его осуществления. Опубликован 20.09.2011 г. Бюл. №26.

2. Кретенчук О.Ф., Алексеева Л.П., Маркина О.В. Оптимизация условий получения диагностических флюоресцирующих моноклональных иммуноглобулинов для идентификации холерных вибрионов O1 и O139-серогрупп // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - Вып. №12 - С. 32-34.

3. Патент РФ №2175558. Пантюхина А.Н., Кротова М.Л. Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума. Опубликован 10.11.2001 г. Бюл. №31.

4. Патент РФ №2200324. Афанасьев Е.Н., Ефременко В.И., Тюменцева И.С., Жданова Е.В. Способ сорбции иммунной сыворотки крови. Опубликован 10.03.2003 г. Бюл. №7.

5. Ибрагимов А.Н., Бикмуллин А.Г., Сатаева Д.А., Лопухов Л.В., Зайнуллин Л.И., Алимова Ф.К. Хроматографические методы очистки белков. Учебно-методическое пособие. - Казань: ФГАОУВПОКФУ, 2013. - 48 с.

6. Носков Ф.С. Очистка конъюгатов от непрореагировавшего флюорохрома // Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / Под ред. Т.В. Перадзе, П. Халонена. - М., 1985. - С. 254.

7. Шторц X. Иммунофлюоресценция: Иммунологические методы. - М.: Медицина, 1987. - С. 128-148.

Способ получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих путем иммобилизации неосмектина с гетерологичными антигенами, дающими перекрестные реакции с иммуноглобулинами, отличающийся тем, что в качестве матрицы для получения бифункционального сорбента используется неосмектин, при этом к 0,4 г сорбента вносится 2,5 мл водорастворимого антигена с концентрацией белка 1,5 мг/мл с экспозицией в течение 2 ч, отмывается от несвязавшегося антигена, доводится рН до 9,5 и проводится одномоментная очистка иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител с контролем иммунологических показателей готовых препаратов в РИФ.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для выявления антиотцовских антител после иммунизации женщин с идиопатическим привычным выкидышем лимфоцитами полового партнера.

Способ скрининговой диагностики острого клеточного отторжения трансплантированного сердца // 2614726

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца.

Способы быстрого выявления риска т-хелперного дефицита у людей в условиях арктики // 2614702

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+.

Способ одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов и устройство иммунохроматографического анализа для его реализации // 2614689

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных.

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре беременности при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом а(h3n2) // 2613895

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2).

Способ прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического бронхита, обусловленного гриппом a(h3n2), у женщин во втором триместре беременности // 2613890

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2), у женщин во втором триместре беременности.

Антитела и иммуноконъюгаты, визуализируемые при помощи иммуно-позитрон-эмиссионной томографии, и способы их применения // 2613886

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, имеющего подозрение на метастатический рак предстательной железы.

Способ прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии // 2613301

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии.

Способ иммунологического определения антигенов анизакид в мышечной ткани рыб // 2613296

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской гельминтологии, в частности к иммунологическому методу обнаружения антигена личинок анизакид в мышечной ткани рыбы, и может быть рекомендовано для ветеринарно-санитарной экспертизы морепродуктов.

Карты иммунодиагностического тестирования с указательными индикаторами // 2613195

Изобретение относится к области иммунодиагностики и может быть использовано для иммунодиагностического тестирования биологического образца. Карта иммунодиагностического тестирования включает плоскую подложку и множество содержащихся на ней прозрачных колонок с инертным тестовым материалом, выполненным с возможностью формирования реакции агглютинации при добавлении биологического образца и реагента.

Способ подготовки периферической крови для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов // 2615354

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Сущность способа: осуществляют забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, перемешивают и оставляют на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов при комнатной температуре, после седиментации эритроцитов берут 0,5 мл лейкоцитарной взвеси и определяют в ней количество лейкоцитов любым способом (рутинным или автоматизированным), доводят ее концентрацию до величины 5*109 лейкоцитов/л дистиллированной водой, биологическую жидкость помещают в морозильную камеру при температуре -20°С до полного замораживания и используют ее после процесса размораживания для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов. Применение изобретения обеспечивает точность определения концентрации цитокинов методом ИФА, снижается индивидуальная вариабельность показателей. 1 табл.

Флуоресцентный оптический днк-биосенсор // 2616879

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к оптическим биосенсорам, предназначенным для определения белковых молекул в малых концентрациях. Заявленный флуоресцентный оптический ДНК-биосенсор состоит из подложки, адсорбированной на подложке тонкой пленки комплекса ДНК-белок, причем подложка выполнена из монокристаллического кремния с ориентацией поверхности (100), размером 18×18 мм и толщиной 380±20 мкм, шероховатость рабочей поверхности ≤0,06, а содержание белка в тонкой пленке составляет от 10-15 до 10-9 моль/л. Технический результат - разработка флуоресцентного оптического ДНК-биосенсора, обладающего возможностью многократного его использования без потери чувствительности, в частности, при определении белковых молекул в малых концентрациях. 3 табл.

Способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства // 2616898

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов. Изобретение раскрывает способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, отличающийся тем, что в лунки планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4, инкубируют, добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют, вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, отмывают лунки планшетов 0,1-0,2 фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют, добавляют 100-120 мкл на лунку однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Изобретение направлено на ускорение и упрощение определения иммуногенной активности вакцины против бешенства. 2 пр.

Способ определения пола плода // 2616901

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития. Способ определения пола плода заключается в определении уровня антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке крови, в сроки 7, а также 9-10 недель беременности, и при увеличении АМГ в 2,6 и более раз за этот период диагностируют наличие плода мужского пола, при увеличении его не выше чем в 1,5 раза - наличие плода женского пола. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью диагностировать пол плода в ранние сроки беременности. 4 пр.

Способ прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации // 2616902

Изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Способ состоит в том, что в лейкоцитах периферической крови беременной на 5-11 неделе гестации с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровни экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR4 и TLR9, гена противомикробного пептида HBD1. При одновременном снижении определяемых показателей, по меньшей мере, в 2,5 раза по сравнению с их уровнем, установленным при физиологически протекающей беременности, прогнозируют угрозу выкидыша в первом триместре гестации. Использование изобретения позволяет осуществить профилактику осложнений, обусловленных инвазивностью исследования (исключение забора биологического материала клеток эндометрия) при одновременном обеспечении точности прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации за счет использования в качестве биологического материала лейкоцитов периферической крови. 1 табл., 4 пр.

Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита // 2617044

Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого риносинусита. Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита включает исследование сыворотки крови больного до начала лечения и определение уровней цитокинов интерлейкина - 6 (IL-6) и γ-интерферона (γINF) пг/мл, после чего вычисляют коэффициент диагностики K по формуле: K=IL-6/γINF, и при значении K≤1,4 диагностируют вирусный риносинусит, при выполнении условия 1,4<K<2,5 диагностируют поствирусный риносинусит, при значении K≥2,5 диагностируют бактериальный риносинусит. Предложенный способ позволяет с высокой достоверностью проводить дифференциальную диагностику острого риносинусита за счет использования объективных критериев оценки, позволяющих четко, быстро и однозначно дифференцировать вирусный, поствирусный и бактериальный риносинусит. 3 пр.

Способ прогнозирования осложненного течения острых респираторных инфекций у детей // 2617046

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения ОРИ у детей. Для этого у детей путем в браш-биоптате слизистой носо-ротоглотки определяют местный неспецифический секреторный иммуноглобулин А, колонизационную активность: индекса инфицирования, индекса адгезии, степени деструкции эпителиоцитов и уровень внеклеточного фосфатидилхолина. По снижению уровня местного неспецифического иммуноглобулина А в пределах 4-16 lg, индекса инфицирования 50-100%, индекса адгезии клеточных эпителиоцитов 100-500 м.кл., деструкции эпителиоцитов 20-50%, уровня внеклеточного фосфатидилхолина 0,001-0,01 мг/мл прогнозируют осложненное течение острых респираторных инфекций у детей. Использование данного способа позволяет прогнозировать осложненное течение ОРИ у детей на ранних стадиях путем одновременного определения нескольких показателей, интегрально характеризующих антиинфекционную резистентность слизистой носо-ротоглотки. 2 пр.

Способ прогнозирования риска развития инфекционного эндокардита // 2617060

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и хирургии, и может быть использовано для прогнозирования генетической предрасположенности или повышенного риска развития инфекционного эндокардита (ИЭ) у пациентов из группы риска. Сущность способа: проводят генотипирование по полиморфному локусу I462V гена CYP1A1 и по полиморфному локусу I105V гена глутатион-S-трансферазы Пи1 GSTP1 у пациентов группы риска, при выявлении носительства сочетания генотипов CYP1A1 I462I и GSTP1 I105V у их носителей прогнозируют 22,6-кратный риск развития инфекционного эндокардита. В группу риска входят лица с внутривенной наркоманией, врожденными и приобретенными пороками сердца, протезированными клапанами и другими операциями на сердце, коронарных артериях, иммунодефицитными состояниями. Способ позволяет установить генетическую предрасположенность к ИЭ у пациентов из группы риска, помогает определить тактику ведения пациентов и индивидуализировать комплекс профилактических и лечебных мероприятий. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению // 2617061

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению, включающий обследование женщин в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), отличающийся тем, что у женщин с хроническим эндометритом на 19-21 день менструального цикла получают смыв из полости матки, в котором методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют содержание альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) и при содержании а2-МГ равном или более 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как низкую, рекомендуют дополнительное лечение и перенос сроков ЭКО, а при содержании а2-МГ менее 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как высокую и рекомендуют инициацию программы ЭКО. Осуществление изобретения обеспечивает неинвазивный способ оценки готовности к ЭКО, позволяющий повысить эффективность ЭКО за счет выбора оптимального периода начала программы. 3 пр., 1 табл.

Способ прегравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода // 2617249

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской кардиологии, и касается предгравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода. Способ включает молекулярно-генетическое тестирование семейной пары, планирующей беременность на догестационном этапе, с выявлением женского аллеля HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*12 и мужского генотипа HLA-DRB1*01,04. Вероятный прогноз развития врожденного порока рассчитывают по формуле ,где Y - вероятность риска формирования септальных форм врожденного порока сердца в последующих поколениях (%); X1 - женский аллель HLA-DRB1*03, при этом X1 принимает значение равное 0 при отсутствии аллеля в генотипе, X1=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гетерозиготе и X1=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гомозиготе; X2 - мужской генотип HLA-DRB1*01,04, X2=0 при отсутствии данного генотипа, X2=1 при наличии генотипа HLA-DRB1*01,04; X3 - женский аллель HLA-DRB1*12, соответственно X3=0 при отсутствии аллеля в генотипе, X3=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гетерозиготе и X3=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гомозиготе. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и достоверности прогнозирования развития септальных форм врожденных пороков сердца у плода в последующей беременности. 3 пр., 1 табл.