Способ оценки снижения оксигемоглобина при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции на структуру гемоглобина эритроцитов, приводящем к формированию телец гейнца

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

G01N33/49 - крови

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2617534:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу определения формирования гемолитической анемии у беременных в третьем триместре гестации при обострении хронической цитомегаловирусной инфекции. Способ определения формирования гемолитической анемии у беременных в третьем триместре гестации при обострении хронической цитомегаловирусной инфекции включает определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, определение в эритроцитах телец Гейнца, определение содержания глутатионредуктазы и оксигемоглобина, и при увеличении титра антител к цитомегаловирусу до титра 1:1600, снижении в эритроцитах глутатионредуктазы до 3,95±0,06 Ед/гHb, появлении в эритроцитах телец Гейнца от 2 до 5 на каждый эритроцит и снижении оксигемоглобина до 84,0±2,9% формируется у беременной гемолитическая анемия. Вышеописанный способ позволяет эффективно выявить формирование гемолитической анемии у беременных в третьем триместре гестации при обострении хронической цитомегаловирусной инфекции. 1 ил.

1. Цель изобретения - изучить механизм индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на гемоглобин эритроцитов, приводящий к формированию телец Гейнца и снижению оксигемоглобина.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке метода, позволяющего выявить в эритроцитах периферической крови при обострении цитомегаловирусной инфекции телец Гейнца, приводящих к снижению содержания оксигемоглобина.

3. Раскрытие изобретения

Тельца Гейнца впервые описаны автором в 1890 [5], представляют округлые глыбкообразные структурные элементы в эритроцитах, расположенные обычно на их периферии. Образование телец Гейнца связано с глубокими дегенеративными изменениями в эритроцитах, в основном связанными с повреждением молекул гема [8]. При появлении телец Гейнца наблюдается подавление оксигенации гемоглобина и увеличивается содержание метгемоглобина. Обнаруживаются тельца Гейнца при воздействии на гемоглобин факторов, приводящих к метгемоглобинобразованию. Исчезновение этих телец вместе с эритроцитами происходит через несколько дней после прекращения токсического воздействия на эритроциты. Таким образом, в основе образования телец Гейнца лежит окисление тиоловых групп глобина и переход гемоглобина в метгемоглобин, которое происходит в связи с окислением Fe²⁺ в Fe³⁺. Процесс окисления зависит от наличия в эритроците восстановленного глютатиона (Г-SH).

Восстановленный глютатион защищает [1] тиоловые группы глобина и препятствует инактивации тиоловых ферментов и сульфгидрильных групп в мембранах эритроцитов.

4. Новая техническая задача - найти новый метод оценки появления телец Гейнца как свидетеля нарушения оксигенации гемоглобина при обострении в организме хронической цитомегаловирусной инфекции, приводящей к снижению оксигенации гемоглобина.

5. Основной причиной формирования телец Гейнца в эритроцитах периферической крови многие авторы [3, 4, 6, 7, 9] считали происходит вследствие токсического воздействия на эритроцитарный гемоглобин N-нитропроизводных элементов, которые и вызывали метгемоглобинобразование при коагуляции гемоглобина. Однако изучая это явление, мы обнаружили, что белки gp64 цитомегаловируса, вступая в контакт с гликофорином мембран эритроцитов, приводят к дезорганизации белково-липидный слой мембран эритроцитов, снижают содержание в них активность SH-групп и стимулируют выработку перекисей жирных кислот, которые являются сильным токсичным фактором, разобщающим глобин от гема, одновременно подавляя активность глютатионредуктазы [1]. В результате на время высокого содержания в крови антигенов ЦМВ в эритроцитах происходит денатурация гемоглобина и появляется большое количество телец Гейнца, которые являются свидетелями снижения оксигенации гемоглобина.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследовано 5 беременных на третьем триместре гестации при обострении хронической цитомегаловирусной инфекции на 25-26 неделях гестации. Отмечалось тяжелое течение беременности в связи с диагностированием у них высоковыраженной анемии. Количество оксигемоглобина в периферической крови колебалось от 84 до 86%. В периферической крови на мазках, окрашенных метиленовым фиолетовым, обнаружены крупных размеров тельца Гейнца.

6.2. Диагноз обострения хронической цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Глутатионредуктаза определялась спектрофотометрически с помощью наборов реагентов «Sentinel Diagnostics» на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США).

6.4. Содержание оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Мэллой [2].

6.5. Выявление телец Гейнца осуществляли следующим образом:

1 г метилового фиолетового растворяют в 100 мл 0,6% раствора натрия хлорида. На предметное стекло наносят каплю этого раствора и в нее вносят каплю свежевзятой крови из пальца. Накрывают эту смесь покровным стеклом и в закрытой чашке Петри содержат 1-2 часа при комнатной температуре. Края покровного стекла, чтобы не происходило испарения красителя, окантовывали расплавленным парафином. Через 2 часа препарат изучали под цифровым микроскопом и документировали содержание в эритроцитах телец Гейнца (фигура 1).

7. Полученные данные

У беременных с выявленным обострением хронической цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации при выявлении признаков тяжелой анемии с уровнем оксигемоглобина 84-86% забирали кровь для определения в эритроцитах глутатионредуктазы и отмечали, что ее количество резко у этих беременных снижалось - до 3,95±0,06 Ед/гНb (контроль - 8,20±0,09 Ед/гНb). В окрашенных метиловым фиолетовым эритроцитах содержалось от 2 до 5 телец Гейнца (фигура 1). В норме, если они встречаются, их количество бывает не более 1-2 на один эритроцит. Однако это практически бывает очень редко. Следовательно, обострение ЦМВИ с высоким титром антител может привести к подавлению активности глутатионредуктазы до 3,95 Ед/гНb, на фоне чего происходит денатурация гемоглобина и формирование телец Гейнца, создавая снижение оксигенации гемоглобина до 84,0±2,9%, что приводит к формированию гемолитической анемии на фоне титра антител IgG к цитомегаловирусу 1:1600.

Литература

1. Луценко М.Т., Андриевская И.Α., Кутепова О.Л. Морфофункциональная характеристика глутатионового цикла эритроцитов периферической крови беременных, перенесших в период гестации обострение цитомегаловирусной инфекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2014. Т. 157, №2. С. 246-250.

2. Покровский А.А. Биохимические методы исследования. М.: Медицина. 1969. 337 с.

3. Шиффман Ф.Д. Патофизиология крови. Пер. с англ. М.: СПб изд. Бином - «Невский Диалект». 2000 г.

4. Han Т.Н., Qamirani Ε., Nelson A.G., Kuo L. Regulation of nitric oxid consumption by hypoxic red blood cells. Proc. Nate. Acad. USA. 2003. Vol.100. P. 12504-12509.

5. Heinz R. Morphologische Verunderungen des rotten Blutkurperchen durch Giffe. Virchow's Archiv fur pathalogische Anatomie and Physiologie and fur klinische Medizin. Berlin. 1890. Vol.122. S. 112-116.

6. Lukens J.N. Unstable Hemoglobin Disease Wintrobe's clinical Hematology Edit J.P. Greer, J. Foereter 11^th edition 2004. P. 1313-1318.

7. Pearson W., Bocmans H., Bettqer W., Mc Bride B.W. Accociation of maximum voluntary dietary intake of freeze-dried garlic with Heinz body anemia in horses // Amer. J. Vet. Res. 2005. Vol.66, №3. P. 457-465.

8. Scott J., Haut Α., Cartwright G., Wintrobe M. Congenital hemolytic disease associated with red cell inclusion bodies, abnormal pigment metabolism and an electrophoretic hemoglobin abnormality // Blood. 1960. Vol.16. P. 1239-1252.

9. Vaugh M.W., Huang K., Kuo L., Liao J.C. Erythrocyte consumption of nitric oxide: Competition and model analysis. Nitric Oxide-Biol. Ch. 2001. Vol.5. P. 18-31.

Способ определения формирования гемолитической анемии у беременных в третьем триместре гестации при обострении хронической цитомегаловирусной инфекции, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, определение в эритроцитах телец Гейнца, определение содержания глутатионредуктазы и оксигемоглобина, и при увеличении титра антител к цитомегаловирусу до титра 1:1600, снижении в эритроцитах глутатионредуктазы до 3,95±0,06 Ед/гHb, появлении в эритроцитах телец Гейнца от 2 до 5 на каждый эритроцит и снижении оксигемоглобина до 84,0±2,9% формируется у беременной гемолитическая анемия.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гинекологии, и предназначено для прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в «окно имплантации» в эндометрии женщин с бесплодием и неудачными попытками программ ЭКО.

Способ прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин с избыточной массой тела и ожирением // 2617491

Изобретение относится к клинической медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и касается прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с избыточной массой тела и ожирением.

Способ прогнозирования развития раннего тромбоза зоны реконструкции после реконструктивных операций на брюшной аорте и артериях нижних конечностей в зависимости от генетических вариантов наследственных тромбофилий и клинико-лабораторных показателей // 2617418

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития раннего тромбоза зоны реконструкции после реконструктивных операций на брюшной аорте и артериях нижних конечностей.

Способ прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса // 2617247

Способ количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма // 2617201

Изобретение относится к медицине, а именно к количественной гистохимической оценке адаптации организма к воздействию низкой температуры окружающей среды. Для этого устанавливают холодовую анестезию у экспериментального животного путем количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма.

Способ персонифицированного назначения стандартного или комбинированного режимов поддержки лютеиновой фазы в программе эко с использованием молекулярно-генетических маркеров // 2617047

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ персонифицированного назначения стандартного или комбинированного режимов поддержки лютеиновой фазы (ЛФ) в программе ЭКО.

Способ прогнозирования эффективности терапии эверолимусом у больных метастатическим раком почки // 2616533

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается прогнозирования эффективности терапии эверолимусом у больных с метастатическим раком почки. Для этого определяют phospho-m-TOR и дополнительно на дооперативном этапе лечения определяют содержание фактора, индуцированного гипоксией HIF-1α, сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF и его рецептора VEGFR2.

Способ оценки чувствительности опухоли к проводимой химиотерапии больных местно-распространенным раком молочной железы // 2616532

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для оценки эффективности химиотерапевтического лечения больных местно-распространенным раком молочной железы.

Способ диагностики аллергического ринита у детей, ассоциированного с токсическим действием формальдегида техногенного происхождения // 2616530

Изобретение относится к области медицины, к оториноларингологии, а именно к способам лабораторной диагностики токсического действия формальдегида, в виде проявления заболеваний аллергического ринита у детей, проживающих в условиях техногенной нагрузки среды обитания.

Способ прогнозирования риска кальцификации биологических протезов клапанов сердца, имплантированных в митральную позицию, на основании геномных предикторов // 2616507

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска кальцификации биологических протезов клапанов сердца, имплантированных в митральную позицию.

Кристалломорфологический способ диагностики и профилактики опухолевых заболеваний поджелудочной железы // 2616900

Изобретение относится к области медицины и представляет собой кристалломорфологический способ диагностики опухолевых заболеваний поджелудочной железы, включающий введение в пробу мочи пациента нингидрина с добавкой тинктуры болиголова и горечавки, высушивание смеси методом испарения, произвольный выбор 3 фракталов, для которых подсчитывают среднее значение фрактального масштаба F=P/S1/2, где P - периметр, S - площадь фрактала, и при значении F от 4,0 до 5,5 делают вывод об отсутствии опухоли или наличии медленно растущей опухоли, при значении F от 5,6 до 7.5 делают вывод о наличии доброкачественной или перерождающейся в злокачественную опухоли, при значении F от 7,6 до 9,0 делают вывод о наличии злокачественной опухоли, а при значении F более 9,0 делают вывод о наличии злокачественной опухоли и появлении метастазов.

Способ оценки степени апоптоза эритроцитов in vitro // 2616498

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтике для определения степени апоптоза эритроцитов in vitro. Для этого эритроциты отмывают в 10-кратном объеме физиологического раствора, а полученный супернатант инкубируют с хлористым гадолинием до конечной концентрации 400-600 мкМ.

Способ ранней дифференциальной диагностики острого аппендицита и острой кишечной инфекции // 2614723

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для ранней дифференциальной диагностики острого аппендицита и острой кишечной инфекции.

Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии // 2613910

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии. Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии, включающий определение ацетола (гидрооксиацетона C3H6O2 GAS116-09-6) в выдыхаемом воздухе испытуемого методом хроматомасс-спектрометрии, до начала гиподинами и в процессе её воздействия и при достоверном уменьшении ацетола в выдыхаемом воздухе диагностируют тканевую гипоксию скелетных мышц и миокарда при гиподинамии.

Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом // 2613908

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и иммунологии, в частности к лабораторной диагностике рассеянного склероза. Предложено исследование лимфоцитов проводить методом компьютерного микроэлектрофореза в условиях переменного электромагнитного поля при значении частоты переменного тока 0,25 Гц, напряжения 28 В.

Способ прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите // 2613081

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии. Для прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите проводят определение балльного индекса по результатам суммирования баллов.

Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов // 2612018

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может использоваться для автоматического подсчета количества ретикулоцитов на анализаторах мазков крови.

Способ выбора отделов предстательной железы для пункции при диагностике рака предстательной железы // 2611405

Изобретение относится к области медицины, в частности к области онкологии и урологии, и касается способа выбора отделов предстательной железы для пункции при диагностике рака предстательной железы.

Узел для разделения жидкости на фазы с разными плотностями (варианты) // 2610591

Группа изобретений относится к устройствам (вариантам) для разделения фракций с более низкой и более высокой плотностями пробы текучей среды. Узел содержит контейнер для пробы, запорный элемент, разделитель.

Способ определения содержания гомоаргинина в плазме крови и других биологических жидкостях человека // 2609873

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения гомоаргинина (гАрг) в плазме крови и других биологических жидкостях человека.

Способ диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей // 2617419

Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и касается способа диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей. Сущность способа заключается в изучении клинических, морфологических и иммуногистохимических показателей слизистой оболочки желудка на наличие антигенов простого герпеса, цитомегаловируса и вируса Эпштейн-Барр.