Композиция, содержащая n-ацетилцистеин в сочетании с пробиотическими бактериями, способная восстанавливать собственный барьерный эффект желудка, который утрачивается во время фармалогического лечения желудочной гиперацидности

Предложена фармацевтическая композиция для восстановления баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности. Композиция содержит в эффективных количествах штаммы бактерий Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980, Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021, Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981 и Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106 в сочетании с N-ацетилцистеином. Причем указанные штаммы способны колонизировать желудок при значении рН, составляющем от 4,0 до 5,5, и продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода. Предложена также фармацевтическая композиция, содержащая в эффективных количествах вышеуказанные штаммы бактерий и лекарственное средство, принадлежащее к классу ингибиторов протонной помпы (ИПП)., Причем указанная композиция предназначена для восстановления баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, диспепсии, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы желудка, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы двенадцатиперстной кишки, гастрита, вызванных Helicobacter pylori, и гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Предложены также пищевая композиция и пищевая добавка, содержащие указанные штаммы в эффективных количествах в сочетании с N-ацетилцистеином. Группа изобретений обеспечивает способность восстанавливать собственный барьерный эффект желудка, который утрачивается во время фармакологического лечения желудочной гиперацидности, и минимизировать вторичные эффекты, обусловленные этим фармакологическим лечением. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл.

 

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей N-ацетилцистеин и/или лизоцим или N-ацетилцистеин и микроинкапсулированный лизоцим в сочетании с пробиотическими бактериями, для применения в фармакологическом лечении желудочной гиперацидности. Указанная композиция способна восстанавливать собственный барьерный эффект желудка, который утрачивается во время фармакологического лечения желудочной гиперацидности, и минимизировать вторичные эффекты, обусловленные этим фармакологическим лечением. Кроме того, присутствие N-ацетилцистеина предпочтительно в немикроинкапсулированной форме в указанной композиции способно повысить эффективность используемых пробиотических бактерий в отношении патогенов, а присутствие лизоцима, предпочтительно микроинкапсулированного и защищенного от действия желудочного сока, способно бороться с чрезмерным бактериальным ростом и ингибировать прорастание любых имеющихся спор клостридий, не оказывая какого-либо ингибирующего действия в отношении пробиотической бактериальной флоры.

В течение последних нескольких десятилетий разрабатывались различные фармакологические подходы к фармакологическому лечению желудочной гиперацидности, состояния, которое, если оно имеется в значительной степени и в течение длительных периодов, может вызывать различные осложнения и патологии, такие как язва желудка и двенадцатиперстной кишки и гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь.

Среди наиболее широко используемых лекарственных средств находятся лекарственные средства, основанные на действующих компонентах, способных ингибировать ингибиторы H₂-гистаминовых рецепторов, такие как, например циметидин, фамотидин, низатидин, ранитидин, или основанные на действующих компонентах, способных ингибировать простагландины, такие как, например мизопростол. Другая категория лекарственных средств основана на действующих компонентах, которые осуществляют функцию протекторов слизистой оболочки желудка, таких как, например, соли висмута, сукралфат или антимускариновые или парасимпатолитические лекарственные средства, основанные на пирензепине и пипензолате. Наконец, существуют также антациды, такие как, например, бикарбонат натрия, гидроксид алюминия или гидроксид магния и ингибиторы протонной помпы, основанные на лансопразоле, эзомепразоле, рабепразоле, пантопразоле и омепразоле.

Ингибиторы протонной помпы (ИПП) представляют собой группу молекул, чье основное действие состоит в выраженном понижении кислотности желудочного сока в течение довольно длительного периода времени (от 18 до 24 часов).

Группа, содержащая ИПП, является альтернативой H₂ антигистаминным средствам, и ингибиторы ИПП более широко распространены, чем последние из-за их большей эффективности.

Лекарственные средства, упомянутые выше, используют при симптоматическом и этиологическом лечении различных синдромов, таких как:

(I) диспепсия; (II) язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. ИПП используют для лечения или предупреждения язв желудка и двенадцатиперстной кишки. Их также используют в сочетании с некоторыми антибиотиками при лечении гастрита, вызванного Helicobacter pylori; (III) синдрома Золлингера-Эллисона и (IV) гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

ИПП также используют для пациентов, получающих длительное лечение ацетилсалициловой кислотой или другими НПВП (нестероидные противовоспалительные препараты). Ингибируя функцию фермента циклооксигеназы 1 (ЦОГ 1), эти лекарственные средства обладают побочным эффектом снижения синтеза простагландина, процесса, который зависит от того же фермента. Поскольку одной из функций простагландина является защита слизистой оболочки желудка от повышенной кислотности, ИПП используют для снижения кислотности и защиты слизистой оболочки желудка.

Этот вид лекарственных средств ингибирует фермент желудочного сока Н⁺/K⁺-АТФазу (протонная помпа), катализатор Н⁺ и K⁺ ионного обмена. Это вызывает эффективное ингибирование секреции кислоты.

В микроканале, где pH низкий, близкий к 2, эти ингибиторы ионизируются и трансформируются в молекулы, способные устанавливать ковалентные связи с тиольной группой (SH) цистеина субъединицы помпы. Помпа, таким образом, необратимо ингибируется. Восстановление насосной функции требует выработки новых помп, явление, которое требует в среднем от 18 до 24 часов. Поэтому, однократная доза ИПП делает возможным ингибирование желудочной секреции примерно на 24 часа.

Тот факт, что ингибиторы являются активными только в кислой среде, объясняет, почему они обладают минимальным действием на внежелудочную H⁺/K⁺-АТФазу, находящуюся на уровне прямой и толстой кишки.

В любом случае, кроме механизма специфического действия, конечный эффект почти всех этих классов лекарственных средств при лечении желудочной гиперацидности или других патологических состояний, упомянутых выше, состоит в повышении pH желудочного сока исходя из кинетики и интенсивности, зависящей от конкретной взятой молекулы и ее дозировки. Одним исключением в этом смысле являются простагландины и лекарственные средства-протекторы слизистой оболочки желудка, которые вместо снижения концентрации ионов водорода в просвете желудка увеличивают синтез слизи и бикарбонатных ионов клетками стенок желудка, тем самым повышая защиту слизистой оболочки от повышенной кислотности в просвете желудка. В любом случае лекарственные средства, способные снижать желудочную гиперацидность, представляют собой предпочтительный способ лечения в случаях язвы желудка и двенадцатиперстной кишки или гастроэзофагеального рефлюкса, тогда как средства, защищающие слизистую оболочку, представляют собой комплементарную терапию.

Дополнительно известно, что нормальная кислотность желудочного сока представляет собой эффективный барьер против потенциально опасных организмов или патогенов, проглатываемых с обычной пищей. Многие из них по существу являются особо чувствительными к повышенной кислотности и не способны выживать дольше пяти минут, иногда даже меньше, при значениях pH ниже 3. Из этого следует, что многие патогены, в том числе патогены, принадлежащие к роду Salmonella, не достигают кишечника живыми и, исключая опасные воздействия на организм человека, опосредованные любыми токсинами, секретируемыми или уже присутствующими в пище, не способны вызывать кишечную инфекцию и, следовательно, резко выраженное пищевое отравление.

Следует сказать, однако, что повышение значений pH желудочного сока, обычно обнаруживаемое у пациентов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, делает этих пациентов более подверженными пищевым токсикоинфекциям, вызванным главным образом употреблением сырых пищевых продуктов, особенно рыбы, мяса и яиц.

Пациенты, принимающие лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, такие как ингибиторы протонной помпы, например, имеют значение pH в желудке около 5.

Это значение pH дает возможность бактериям, принадлежащим к семейству Enterobacteriaceae, и в частности штаммам E.coli с выраженным декарбоксилирующим действием, проходить через поврежденный желудочный барьер. Белки, проглатываемые во время приема пищи, под действием ферментов разрушаются до аминокислот, которые при наличии декарбоксилирующего действия преобразуются в ряд биогенных аминов, начиная с потенциально опасных и заканчивая особо опасными, такими как, например, гистамин, тирамин, путресцин и кадаверин. Наиболее распространенные симптомы, которые могут быть вызваны этими биогенными аминами, полностью совпадают с вторичными эффектами, вызванными посредством использования ингибиторов протонной помпы (ИПП), и являются следующими: диарея, головная боль, тошнота, боли в животе и метеоризм. Когда определенные биогенные амины затем взаимодействуют с нитритами, мы имеем образование N-нитрозаминов. Эти нитрозамины вызывают генетическую мутацию посредством алкилирования ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), и их присутствие связано с раком желудка, кишечника, поджелудочной железы и мочевого пузыря, а также с лейкемией.

Одно возможное решение для этих пациентов очевидно не состоит во временном прекращении фармакологического лечения, поскольку это еще раз подвергнет слизистую оболочку желудка или пищевода вредным воздействиям, опосредованным желудочным соком. С другой стороны также невозможно продолжать фармакологическое лечение и позволить пациентам подвергаться риску инфекции.

Таким образом, сохраняется необходимость дать возможность нуждающимся в этом пациентам, с одной стороны, принимать лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, а с другой стороны, избежать столкновения с особо опасными инфекциями, вызываемыми патогенами, или риска рецидивирующих инфекций, вызываемых патогенами.

В частности, сохраняется необходимость иметь возможность удовлетворить вышеупомянутые потребности с помощью композиции природного происхождения, без побочных эффектов, с улучшенной и избирательной антимикробной активностью против патогенов, таких как, например, колиформные бактерии, которые представляют собой группу бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae и которые включают, среди прочего, Citrobacter, Enterobacter, предпочтительно Enterobacter cloacae, Escherichia, предпочтительно E.coli, включая серотип 0157:H7, Hafnia, Klebsiella, предпочтительно Klebsiella pneumoniae, Serratia и Yersinia, или другие патогенны, такие как бактерии семейства Clostridiaceae, включая Clostridium difficile, Salmonella enteriditis, Campylobacter jejunii и Helicobacter pylori.

Заявитель удовлетворяет вышеупомянутые потребности с помощью композиции, которая, с одной стороны, способна восстанавливать функцию желудочного барьера, обладающего защитным действием против патогенных или опасных микроорганизмов, а с другой стороны, обладает улучшенной или избирательной активностью в отношении самих патогенов.

Композиция по настоящему изобретению способна восстанавливать функцию желудочного барьера, которая обычно осуществляется желудочным соком и которая прежде всего снижена у пациентов, принимающих лекарственные препараты для снижения или лечения желудочной гиперацидности. Указанная композиция способна минимизировать вторичные эффекты, связанные с приемом лекарственных средств на основе ингибиторов протонной помпы (сокращенно ИПП). Указанная композиция дополнительно демонстрирует улучшенную активность против патогенных или опасных микроорганизмов.

После интенсивной научно-исследовательской работы заявитель неожиданно обнаружил, что выбранная комбинация (или смесь) пробиотических бактерий, содержащая или, альтернативно, состоящая из по меньшей мере одного штамма бактерий, принадлежащих к одному или более чем одному нижеперечисленному виду, способна дать возможность нуждающимся в этом пациентам, с одной стороны, принимать лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, а с другой стороны, избежать столкновения с особо опасными инфекциями, вызываемыми патогенами, или риска рецидивирующих инфекций, вызываемых патогенами.

Антибактериальная активность, продемонстрированная каждым отдельным штаммом бактерий, объектом настоящего изобретения, как оказывается, в указанной композиции является повышенной и более избирательной в отношении патогенов вследствие присутствия N-ацетилцистеина и/или лизоцима; или N-ацетилцистеина и/или микроинкапсулированного лизоцима. В предпочтительном воплощении лизоцим является микроинкапсулированным в липидную матрицу. Преимущественно, липидная матрица имеет растительное происхождение и обладает температурой плавления, составляющей от 30°C до 80°C, предпочтительно от 40°C до 70°C, даже более предпочтительно от 50°C до 60°C.

Объектом настоящего изобретения является композиция, обладающая характеристиками, изложенными в прилагаемой независимой формуле изобретения.

Другие предпочтительные воплощения настоящего изобретения описаны в продолжении настоящего описания и будут заявлены в прилагаемых зависимых пунктах формулы изобретения.

В таблице 1 показана в качестве примера группа микроорганизмов, которые имеют обоснованное применение в контексте настоящего изобретения.

В таблице 2 показана группа микроорганизмов, которые имеют обоснованное применение в контексте настоящего изобретения.

В таблице 3 показаны результаты видоспецифических ПЦР-анализов, проводимых для идентификации вводимых бактериальных видов.

В таблице 4 показано количественное определение общего числа бактериальных клеток и общего числа бактерий рода Lactobacillus (величина±SEM (стандартная ошибка среднего), log₁₀ колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл желудочного сока или грамм материала из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки) в момент времени d₀ (все группы) и в момент времени d₁₀ (группа В).

В таблице 5 показаны результаты видоспецифических ПЦР-анализов в группе B в момент времени d₀ и в момент времени d₁₀. Наличие соответствующих видов обозначено знаком «+», тогда как их отсутствие обозначено знаком «-».

В таблице 6 показано количественное определение специфических групп микроорганизмов в фекальных образцах в момент времени d₀ (все группы) и d₁₀ (группа В). Результаты выражены в виде log₁₀ КОЕ/грамм фекалий (величина±SEM).

Фиг. 1 относится к общему количеству бактерий в образцах, взятых у субъектов клинического исследования (фиг.1A и B).

На фиг. 1A показано сравнение между субъектами, получающими длительное лечение ИПП (общая группа ИПП: ИПП плюс «ИПП плюс пробиотики»), и контрольной группой. Данные выражены в виде средней величины колониеобразующих единиц (КОЕ). На фиг. 1B показано сравнение между субъектами, получающими длительное лечение ИПП, и субъектами, получающими лечение «ИПП плюс пробиотики», и контрольной группой. Данные выражены в виде средней величины±SEM колониеобразующих единиц (КОЕ).

На фиг. 2 показаны количества бактерий, обнаруживаемых в желудочном соке и после соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, у субъектов, подвергающихся лечению.

Заявитель провел интенсивную научно-исследовательскую и селекционную работу, по окончании которой было обнаружено, что штаммы пробиотических бактерий, принадлежащих по меньшей мере к одному виду, выбранному из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, L. delbrueckii, L. delbr. subsp. delbrueckii, L. salivarius, L. casei, L. paracasei, L. plantarum, L. rhamnosus, L. reuteri, L. brevis, L. buchneri, L. fermentum, L. lactis, L. pentosus, B. adolescentis, B. angulatum, B. bifidum, B. breve, B. catenulatum, B. infantis, B. lactis, B. longum, B. pseudocatenulatum и S. thermophilus, имеют обоснованное применение в лечении субъектов, принимающих ингибиторы протонной помпы (ИПП) для снижения или лечения желудочной гиперацидности. Дополнительно, заявитель обнаружил, что антибактериальная активность, продемонстрированная штаммами бактерий, которые являются объектом настоящего изобретения, является повышенной и более избирательной в отношении патогенов вследствие присутствия N-ацетилцистеина (NAC) в указанной композиции.

Дополнительно, заявитель обнаружил, что антибактериальная активность, продемонстрированная штаммами бактерий, которые являются объектом настоящего изобретения, является повышенной и более избирательной в отношении патогенов вследствие присутствия микроинкапсулированного защищенного от желудочного сока лизоцима в указанной композиции. Лизоцим является микроинкапсулированным в липидную матрицу. Преимущественно, липидная матрица имеет растительное происхождение и обладает температурой плавления, составляющей от 30°C до 80°C, предпочтительно от 40°C до 70°C, даже более предпочтительно от 50°C до 60°C.

Дополнительно, заявитель обнаружил, что антибактериальная активность, продемонстрированная штаммами бактерий, которые являются объектом настоящего изобретения, является повышенной и более избирательной в отношении патогенов вследствие присутствия N-ацетилцистеина и микроинкапсулированного защищенного от желудочного сока лизоцима в указанной композиции. Лизоцим является микроинкапсулированным в липидную матрицу. Преимущественно, липидная матрица имеет растительное происхождение и обладает температурой плавления, составляющей от 30°C до 80°C, предпочтительно от 40°C до 70°C, даже более предпочтительно от 50°C до 60°C.

Композиция по настоящему изобретению содержит N-ацетилцистеин в сочетании со штаммами бактерий по настоящему изобретению: N-ацетилцистеин, который представляет собой N-ацетилатное производное аминокислоты цистеина.

Композиция по настоящему изобретению содержит микроинкапсулированный защищенный от желудочного сока лизоцим в сочетании со штаммами бактерий по настоящему изобретению.

Композиция по настоящему изобретению содержит N-ацетилцистеин и/или микроинкапсулированный защищенный от желудочного сока лизоцим в сочетании со штаммами бактерий по настоящему изобретению.

Заявитель обнаружил, что применение N-ацетилцистеина в сочетании с одним, или двумя, или тремя, или четырьмя, или пятью, или шестью штаммами бактерий, описанных в таблицах 1 и 2 или в различных предпочтительных воплощениях, описанных здесь, способствует разрушению бактериальной биопленки, продуцируемой самими патогенными бактериями и которая используется указанными патогенами в качестве защиты. На практике видно, что патогенные бактерии способны образовывать защитное покрытие (биопленку) вокруг клеток. Биопленка делает клетки патогенов более трудноуязвимыми и лучше защищенными. N-ацетилцистеин способен проникать в биопленку клеток и разрушать ее, облегчая атаку на патогенные клетки с помощью бактериоцинов, и/или метаболитов, и/или перекиси водорода, продуцируемых штаммами бактерий, которые являются объектом настоящего изобретения.

Заявитель дополнительно обнаружил, что применение микроинкапсулированного защищенного от желудочного сока лизоцима позволяет преодолеть гастродуоденальный барьер и достигнуть неповрежденным толстой кишки, где он успешно осуществляет свое действие по ингибированию бактерий рода Clostridiaceae, включая С. difficile, благодаря литическому действию фермента на споры, в сочетании с одним или более чем одним штаммом бактерий, которые являются объектом настоящего изобретения.

Количество N-ацетилцистеина, присутствующего в композиции, которая является объектом настоящего изобретения, составляет от 10 до 1000 мг/сутки, предпочтительно от 50 до 200 мг/сутки, даже более предпочтительно от 60 до 150 мг/сутки. N-ацетилцистеин, который имеется в продаже в немикроинкапсулированной форме и в фармацевтически приемлемой форме, предпочтительно в твердой форме, смешивают с пробиотическими бактериями предпочтительно в твердой или лиофилизированной форме при использовании методов и оборудования, известных специалистам в данной области техники, с получением гомогенной композиции.

Количество микроинкапсулированного защищенного от желудочного сока лизоцима, присутствующего в композиции, которая является объектом настоящего изобретения, составляет от 10 до 2000 мг/сутки, предпочтительно от 400 до 1000 мг/сутки, даже более предпочтительно от 500 до 800 мг/сутки, предпочтительно в твердой форме; его смешивают с пробиотическими бактериями предпочтительно в твердой или лиофилизированной форме при использовании методов и оборудования, известных специалистам в данной области техники, с получением гомогенной композиции. Лизоцим имеется в продаже в фармацевтически приемлемой форме.

Штаммы бактерий отбирали по их способности колонизировать желудок при значении pH, составляющем от 4 до 5,5; предпочтительно от 4,5 до 5. При этом значении pH отобранные штаммы оказывают действие посредством выработки активных веществ, таких как бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода.

Композиция по настоящему изобретению может представлять собой пищевую композицию, например симбиотическую композицию, или добавку, или фармацевтическую композицию, или медицинское устройство. В одном воплощении композиция может содержать или, альтернативно, состоять из одного, или двух, или трех, или четырех, или пяти, или шести отобранных штаммов из тех, которые перечислены в таблице 1 или, альтернативно, в таблице 2, в сочетании с N-ацетилцистеином (NAC) и/или лизоцимом, предпочтительно микроинкапсулированным лизоцимом.

Композиция содержит от одного до шести штаммов, предпочтительно от двух до пяти штаммов, даже более предпочтительно четыре штамма из перечисленных в таблице 1 и в таблице 2. Особенно предпочтительные штаммы выбраны из тех, которые перечислены в таблице 2.

Штаммы, представленные в таблице 2, тестировали по отдельности с целью определения патогенов, в отношении которых они способны проявлять антагонизм (ингибировать рост или уменьшать число одного или более чем одного опасного или патогенного вида/рода микроорганизмов), как указано в колонке 3 таблицы 2.

В таблице 2 показано, что бактерии обладают способностью продуцировать перекись водорода или по меньшей мере один бактериоцин, обладающий ингибирующим действием в отношении одного или более чем одного опасного или патогенного вида/рода микроорганизмов.

Все штаммы, описанные и/или заявленные в настоящей заявке на патент, депонированы в соответствии с Будапештским договором и предоставляются в распоряжение общественности по запросу в компетентный орган по депонированию.

Композиции по настоящему изобретению имеют обоснованное применение при использовании как в лечении субъектов, которые принимают лекарственные средства для снижения и/или лечения желудочной гиперацидности, так и в лечении язвы, вызванной недостаточным функционированием защитных механизмов слизистой оболочки (например, пониженная секреция или чувствительность к простагландину Е, как в случае приема аспирина или других НПВП) или инфекцией Н. pylori. Другими словами, композиция по настоящему изобретению имеет обоснованное применение также для тех субъектов, которым назначены ИПП/другие антацидные лекарственные средства, несмотря на то, что они не имеют признаков желудочной гиперацидности, но с повреждением слизистой оболочки желудка и/или двенадцатиперстной кишки вследствие измененного соотношения кислотность желудочного сока/механизмы, защищающие слизистую оболочку.

Было установлено, что композиции по настоящему изобретению могут быть обоснованно применены в лечении язвы желудка и двенадцатиперстной кишки или гастроэзофагеального рефлюкса.

В одном воплощении композиция содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно трех-четырех штаммов, выбранных из штаммов пробиотических бактерий, принадлежащих по меньшей мере к одному виду, выбранному из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, L. delbrueckii, L. delbr. subsp. delbrueckii, L. salivarius, L. casei, L. paracasei, L. plantarum, L. rhamnosus, L. reuteri, L. brevis, L. buchneri, L. fermentum, L. lactis, L. pentosus, B. adolescentis, B. angulatum, B. bifidum, B. breve, B. catenulatum, B. infantis, B. lactis, B. longum, B. pseudocatenulatum и S. thermophilus в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом.

В одном воплощении композиция содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно трех-четырех штаммов, выбранных из штаммов пробиотических бактерий, принадлежащих к одному или более чем одному виду, выбранному из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из L. delbrueckii, L. delbr. subsp. delbrueckii, L. plantarum, L. rhamnosus, L. pentosus, B. breve и В. longum в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом.

В одном воплощении композиция содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно трех-четырех штаммов, выбранных из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

1) Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980

2) Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021

3) Lactobacillus plantarum LP02 LMG P-21020

4) Lactobacillus plantarum LP03 LMG P-21022

5) Lactobacillus plantarum LP04 LMG P-21023

6) Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981

7) Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106

8) Bifidobacterium longum В1975 DSM 24709

9) Bifidobacterium breve B2274 DSM 24707

10) Bifidobacterium breve B632 DSM 24706

11) Bifidobacterium breve B7840 DSM 24708

12) Bifidobacterium longum PCB 133 DSM 24691

13) Bifidobacterium longum BL06 DSM 24689

в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом.

В одном воплощении композиция содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно трех-четырех штаммов, выбранных из штаммов пробиотических бактерий, принадлежащих к одному или более чем одному виду, выбранному из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из L. delbrueckii, L. delbr. subsp.delbrueckii, L. plantarum, L. rhamnosus и L. pentosus в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом.

В одном воплощении композиция содержит или, альтернативно, состоит из одного-четырех штаммов, выбранных из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

- Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980

- Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021

- Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981

- Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii LDD01 (MB386) DSMZ 20074 DSM 22106

в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом.

В контексте настоящего изобретения композиции могут содержать один штамм, принадлежащий к каждому отдельному виду, перечисленному выше, или, альтернативно, могут содержать более одного штамма, принадлежащего к тем же видам, например два штамма, или три штамма, или четыре штамма, причем все принадлежат к тем же видам, которые указаны выше.

В одном воплощении композиция содержит Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980, и/или Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021, и/или Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981, и/или Lactobacillus delbrueckii subsp.delbrueckii (MB386) LDD01 DSMZ 20074 (DSM 22106) в количестве, составляющем от 1×10⁹ до 10×10⁹ КОЕ/штамм/доза, предпочтительно от 3 до 5×10⁹ КОЕ/штамм/доза; NAC в количестве, составляющем от 10 до 200 мг, предпочтительно от 50 до 150 мг/доза, даже более предпочтительно от 60 до 100 мг/доза; картофельный мальтодекстрин в количестве, составляющем от 1 до 5 грамм/доза, предпочтительно от 2 до 3 грамм/доза.

Композиции, описанные выше, предназначены для применения в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекций, расстройств или заболеваний, вызванных присутствием Helicobacter pylori, в частности при профилактическом и/или терапевтическом лечении рецидивов инфекций, вызванных Helicobacter pylori; они дополнительно предназначены для применения в лечении язвы желудка и двенадцатиперстной кишки или гастроэзофагеального рефлюкса.

В другом воплощении композиция по настоящему изобретению содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно из двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно из трех-четырех, выбранных из штаммов, обозначенных выше номерами с 1 по 13, в сочетании со штаммом Lactobacillus fermentum LF 09 DSM 18298 и/или штаммом Lactococcus lactis NS 01 DSM 19072.

В другом воплощении композиция по настоящему изобретению содержит или, альтернативно, состоит из одного-шести штаммов, предпочтительно из двух-пяти штаммов, даже более предпочтительно из трех-четырех, выбранных из штаммов, обозначенных выше номерами с 1 по 13, в сочетании по меньшей мере с одним штаммом, выбранным из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: (a) Lactobacillus reuteri LRE 01 DSM 23877; (б) Lactobacillus reuteri LRE 02 DSM 23878; (в) Lactobacillus reuteri LRE 03 DSM 23879; (r) Lactobacillus reuteri LRE 04 DSM 23880.

Отобранные штаммы по настоящему изобретению способны продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода, а они являются веществами, которые способны эффективно бороться, ингибировать или уменьшать количество патогенных бактерий. Эти штаммы находят обоснованное применение и использование в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекций и/или патологий, связанных с патогенными грамотрицательными бактериями.

Патогенные бактерии выбраны из группы, содержащей колиформные бактерии. Колиформные бактерии представляют собой группу бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Группа включает более пятидесяти родов, среди них Citrobacter, Enterobacter, предпочтительно Enterobacter cloacae, Escherichia, предпочтительно E.coli, включая серотип 0157:H7, Hafnia, Klebsiella, предпочтительно Klebsiella pneumoniae, Serratia и Yersinia. Другие патогены всегда представляющие интерес в контексте настоящего изобретения принадлежат к видам, выбранным из группы, содержащей Clostridiaceae, С.difficile включительно, Salmonella enteriditis, Campylobacter jejunii и Helicobacter pylori. В предпочтительном воплощении фармацевтическая или пищевая композиция, или добавка, или медицинское устройство могут содержать по меньшей мере один штамм бактерий, принадлежащий к одному или более чем одному виду, выбранному из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus pentosus, Lactobacillus reuteri и Bifidobacterium breve в сочетании с N-ацетилцистеином и/или лизоцимом; или N-ацетилцистеином и микроинкапсулированным лизоцимом. Указанный штамм способен продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода. Указанная композиция имеет обоснованное применение в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекций и/или патологий, связанных с патогенами Е. coli. Патоген Е. coli выбран из Е. coli O157:Н7 и Е. coli О104:Н4. Предпочтительно, патоген Е. coli выбран из группы, содержащей Е. coli АТСС 8739, Е. coli АТСС 10536, Е. coli АТСС 35218 и Е. coli АТСС 25922. Еще одним патогеном, в отношении которого проявляют антагонизм штаммы бактерий по настоящему изобретению, является Clostridium difficile. В предпочтительном воплощении указанный по меньшей мере один штамм бактерий выбран из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из В. breve BR03 DSM 16604, В. breve В632 DSM 24706, L. rhamnosus LR04 DSM 16605, L. rhamnosus LR06 DSM 21981, L. plantarum LP01 LMG P-21021, L. plantarum LP02 LMG P-21020, L. pentosus LPS01 DSM 21980, L. delbr. subsp. delbrueckii LDD01 DSMZ 20074 DSM 22106. Даже более предпочтительно, указанный по меньшей мере один штамм выбран из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из L. rhamnosus LR06 DSM 21981, L. plantarum LP01 LMG P-21021, L. pentosus LPS01 DSM 21980 и L. delbr. subsp.delbrueckii LDD01 DSM 22106; эти штаммы были протестированы --in - vitro в отношении серотипа O157:Н7 и продемонстрировали сильную антагонистическую активность. Было обнаружено, что композиция, содержащая Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980, Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021, Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981 и Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (MB386) DSM 20074 Lactobacillus delbrueckii subsp.delbrueckii LDD01 DSMZ 20074 DSM 22106 в количествах, по массе находящихся в соотношении от 1:1:1:1 до 3:3:3:1 (например, 1×10⁹ КОЕ/штамм/доза и 3×10⁹ КОЕ/штамм/доза), и количество NAC, составляющее от 50 до 150 мг, демонстрирует сильное антагонистическое действие.

В композиции по настоящему изобретению смесь штаммов бактерий находится в количестве, составляющем от 0,5% до 20% по массе от общей массы композиции, предпочтительно от 2,5% до 8%.

В предпочтительном воплощении композиция может дополнительно содержать по меньшей мере одно пребиотическое волокно и/или углеводы, обладающие бифидогенным действием. Пребиотическое волокно, которое находит применение в композиции по настоящему изобретению, представляет собой волокно, которое должно быть использовано штаммами бактерий, присутствующими в композиции, но не патогенами, для противодействия которым оно предназначено. В том случае, когда патоген, в отношении которого проявляется антагонизм, принадлежит к роду Candida, фруктоолигосахариды (FOS) и галактоолигосахариды (GOS) имеют обоснованное применение, поскольку грибы рода Candida не используют указанные волокна; тогда как глюкоолигосахариды (GOSa) способны непосредственно ингибировать Е. coli с помощью нескольких метаболитов. Поэтому пребиотическое волокно может быть выбрано, в зависимости от потребностей в данном конкретном случае и патогена, в отношении которого проявляется антагонизм, из: инулина, фруктоолигосахаридов (FOS), галакто- и трансгалактоолигосахаридов (GOS и TOS), глюкоолигосахаридов (GOSa), ксилоолигосахаридов (XOS), олигосахаридов хитозана (COS), соевых олигосахаридов (SOS), изомальтоолигосахаридов (IMOS), резистентного крахмала, пектина, псиллиума (оболочки семян подорожника), арабиногалактанов, глюкоманнанов, галактоманнанов, ксиланов, лактосахарозы, лактулозы, лактита и различных других типов камедей, волокна акации, волокна каррубы, волокна овса, волокна бамбука, - цитрусовых волокон и, в основном, волокон, содержащих растворимую и нерастворимую часть в переменных соотношениях. В предпочтительном воплощении изобретения композиция содержит по меньшей мере одно пребиотическое волокно, выбранное из вышеупомянутых волокон и/или их подходящих смесей в любом относительном процентном отношении. Количество пребиотических волокон и/или углеводов, обладающих бифидогенным действием, если они присутствуют в композиции, составляет от 0 до 60% по массе, предпочтительно от 5 до 45% и даже более предпочтительно от 10 до 30% от общей массы композиции. В этом случае композиция или добавка обладает симбиотической активностью и функциональными свойствами.

Дополнительно композиция может также содержать другие активные ингредиенты и/или компоненты, такие как витамины, минералы, биоактивные пептиды, вещества с антиокислительным действием, гипохолестеринемический агент, гипогликемический агент, противовоспалительные и маскирующие сладкий вкус агенты, в количестве, обычно составляющем от 0,001% до 20% по массе, предпочтительно от 0,01% до 5% по массе, всегда в зависимости от вида активного компонента и его рекомендованной суточной дозы, если он присутствует, от общей массы композиции.

Пищевую композицию, которая является объектом настоящего изобретения (например, симбиотическую композицию, или добавку, или фармацевтическую композицию) готовят исходя из методов и оборудования, известных специалистам в данной области техники.

В предпочтительном воплощении композиция содержит бактерии в концентрации, составляющей от 1×10⁶ до 1×10¹¹ КОЕ/г смеси бактерий, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/г смеси бактерий.

В предпочтительном воплощении композиция содержит бактерии в концентрации, составляющей от 1×10⁶ до 1×10¹¹ КОЕ/доза, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/доза. Доза может составлять от 0,2 до 10 г, например, она составляет 0,25 г, 1 г, 3 г, 5 г или 7 г. Пробиотические бактерии, используемые в настоящем изобретении, могут находиться в твердой форме, в частности в форме порошка, дегидрированного порошка или в лиофилизированной форме. Все композиции по настоящему изобретению готовят согласно методам, известным специалистам в данной области техники, и при использовании известного оборудования.

В одном воплощении композиция по настоящему изобретению содержит дополнительно лекарственное средство для снижения или лечения желудочной гиперацидности. Эта композиция представляет собой фармацевтическую композицию и составляет объект настоящего изобретения. Указанное лекарственное средство выбрано из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: ингибиторов Н2 рецепторов, предпочтительно циметидина, фамотидина, низатидина или ранитидина; простагландинов, предпочтительно мизопростола; протекторов слизистой оболочки желудка, предпочтительно солей висмута или сукралфата; антимускариновых или парасимпатолитических лекарственных средств, предпочтительно пирензепина или пипензолата; антацидов, предпочтительно бикарбоната натрия, гидроксида алюминия или гидроксида магния; ингибиторов протонной помпы, предпочтительно лансопразола, эзомепразола, рабепразола, пантопразола и омепразола. Предпочтительно, указанное лекарственное средство выбрано из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: ингибиторов Н2 рецепторов, предпочтительно циметидина, фамотидина, низатидина или ранитидина; антимускариновых или парасимпатолитических лекарственных средств, предпочтительно пирензепина или пипензолата; антацидов, предпочтительно бикарбоната натрия, гидроксида алюминия, гидроксида магния; ингибиторов протонной помпы, предпочтительно выбранных из группы, содержащей лансопразол, эзомепразол, рабепразол, пантопразол и омепразол.

Даже более предпочтительно, указанное лекарственное средство выбрано из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: ингибиторов Н2 рецепторов, предпочтительно циметидина, фамотидина, низатидина или ранитидина; ингибиторов протонной помпы, предпочтительно выбранных из группы, содержащей лансопразол, эзомепразол, рабепразол, пантопразол и омепразол. В предпочтительном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую бактерии, описанные в таблице 1 или в таблице 2 или в предпочтительных воплощениях, перечисленных выше, причем указанные бактерии находятся в сочетании с лекарственным средством, назначаемым для снижения или лечения желудочной гиперацидности, как перечислено выше. Преимущественно, лекарственное средство представляет собой ингибитор протонной помпы, выбранный из группы, содержащей лансопразол, эзомепразол, рабепразол, пантопразол и омепразол. И бактерии, и лекарственное средство находятся в указанной композиции в тесном контакте. Например, бактерии и лекарственное средство присутствуют совместно в таблетке, пастилке или грануляте в лекарственной форме, подходящей для перорального введения.

Важно, чтобы бактерии и лекарственное средство вводились одновременно и действовали одновременно, поскольку необходимо восстанавливать утрачиваемый под действием ингибиторов протонной помпы (ИПП) барьерный эффект за счет действия пробиотических бактерий по настоящему изобретению, которые продуцируют бактериоцины и способны колонизировать желудок благодаря тому факту, что ингибиторы протонной помпы повышают pH до значения примерно от 4 до 5,5; предпочтительно от 4,5 до 5.

В другом предпочтительном воплощении композиция по настоящему изобретению находится в форме медицинского устройства. В этом случае бактерии находятся в композиции, подходящей для перорального введения, такой как, например таблетка, пастилка или гранулят, и отдельно лекарственное средство, назначаемое для снижения или лечения желудочной гиперацидности, как описано выше, находится в другой композиции, подходящей для перорального введения. Преимущественно, лекарственное средство представляет собой ингибитор протонной помпы, выбранный из группы, содержащей лансопразол, эзомепразол, рабепразол, пантопразол и омепразол.

Поэтому, например, вводят две таблетки, одну, содержащую бактерии, и другую, содержащую лекарственное средство. В любом случае две таблетки должны быть введены одновременно, поскольку необходимо, чтобы бактерии действовали одновременно с действием ингибиторов протонной помпы. В случае медицинского устройства также существенно, чтобы бактерии и лекарственное средство вводились с коротким промежутком времени, поскольку необходимо восстанавливать утрачиваемый под действием ингибиторов протонной помпы (ИПП) барьерный эффект за счет действия бактерий, которые продуцируют бактериоцины, которые способны колонизировать кишечник благодаря тому факту, что ингибиторы протонной помпы повышают pH до значения примерно от 4 до 5,5; предпочтительно от 4,5 до 5.

Заявитель обнаружил, что бактерии, отобранные и перечисленные в таблице 1, или таблице 2 или в предпочтительных воплощениях, упомянутых выше, способны колонизировать желудок при значении pH около 5, с тем, чтобы восстанавливать барьерный эффект, ослабленный или утраченный под действием повышения pH вследствие действия лекарственных средств, назначаемых для снижения или лечения желудочной гиперацидности, таких как, например, ингибитор протонной помпы, выбранный из группы, содержащей лансопразол, эзомепразол, рабепразол, пантопразол и омепразол.

В предпочтительном воплощении композиция, содержащая штаммы пробиотических бактерий по настоящему изобретению, указанные штаммы способны продуцировать специфические бактериоцины, также является полезным адъювантом при лечении, направленном на полное уничтожение Helicobacter pylori и устранение ее рецидивов.

Объектом настоящего изобретения, поэтому, является композиция, содержащая по меньшей мере один штамм бактерий, которые перечислены в таблице 1 или в таблице 2 или в одном из воплощений, упомянутых выше, для применения в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекций, расстройств или заболеваний, вызванных присутствием Helicobacter pylori, в частности в профилактическом и/или терапевтическом лечении рецидивов инфекций, вызванных Helicobacter pylori.

В самом широком смысле этого слова антибиотики определяют как химические соединения, продуцируемые организмом и активные в отношении роста других организмов. На деле, однако, антибиотики, в основном, рассматривают как вторичные метаболиты, в низких концентрациях играющие активную роль в задержке роста микроорганизмов. Вторичные продукты метаболизма, такие как органические кислоты, аммиак и перекись водорода, не должны быть включены в разряд антибиотиков. Антибиотики являются молекулами, которые могут представлять собой пептидные молекулы (пенициллин), продуцируемые мультиферментными системами, и чей биосинтез не блокирован ингибиторами синтеза белка. Бактериоцины, с другой стороны, являются продуктами рибосомального синтеза. Бактериоцины являются пептидными молекулами, продуцируемыми путем рибосомального синтеза, который также может быть связан с липидами или углеводами. Хотя некоторые бактериоцины, продуцируемые грамположительными бактериями (Lactobacillus, Lactococcus), обладают спектром ингибирования, ограниченным несколькими штаммами, принадлежащими к тому же виду, что и микроорганизм-продуцент, большинство из них демонстрируют широкий спектр действия в отношении различных бактериальных видов, как грамположительных, так и грамотрицательных. Современная классификация бактериоцинов основана как на их химической природе, так и на их спектре действия.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

А. МЕТОДЫ

Настоящее пробное клиническое исследование проводили на 10 субъектах, 9 из которых принимали ИПП в течение более чем одного месяца. Группу, состоящую из субъектов, получающих лечение ИПП, дополнительно делили на две подгруппы: пациенты, получающие лечение ИПП плюс смесью штаммов отобранных лактобацилл (3 миллиарда L. rhamnosus LR06 DSM 21981, 3 миллиарда L. plantarum LP01 LMG P-21021, 3 миллиарда L. pentosus LPS01 DSM 21980 и 1 миллиард L. delbrueckii subsp. delbrueckii LDD01) в течение 5-10 суток перед эндоскопическим исследованием. Биологические образцы, состоящие из желудочного сока и материала из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, брали во время гастроскопии, проводимой пациентам, которые воздерживались от пищи в течение 12-24 часов. Биологические материалы, консервированные в жидкой среде Эймса, подвергали микробиологическим анализам, подходящим для оценки бактериальной нагрузки. Неселективную культуральную питательную среду (LaptG) использовали для определения общей бактериальной нагрузки, тогда как для отбора гетероферментативных лактобацилл использовали бульон MRS (де Манн, Рогоза и Шарпа (deMann, Rogosa и Sharpe)) с добавлением антибиотика ванкомицина (2 мкг/мл), готовя серийные разведения исходного образца. Последнее разведение, в котором был обнаружен бактериальный рост (при использовании оптической плотности), позволяло установить порядок величины самой нагрузки.

Для подтверждения наличия введенных пробиотических штаммов проводили анализы ПЦР (полимеразная цепная реакция) со следующими наборами праймеров: Rhall/Prl для L. rhamnosus; pREV/pentF для L. pentosus; pREV/planF для L. plantarum и SS1/DB1 для L. delbr. subsp. delbruckii LDD01.

Б. РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты по общей бактериальной нагрузке показали, что субъекты, получавшие лечение ИПП (общая группа ИПП: ИПП плюс «ИПП плюс пробиотики»), демонстрируют большое количество бактерий и в желудочном соке, и в соскобе со слизистой двенадцатиперстной кишки по сравнению с контрольной группой (без ИПП, без пробиотиков), в которой, как обнаружено, все было практически стерильным (фиг. 1A). Анализ бактериальной нагрузки субъектов, получавших лечение ИПП плюс пробиотики, показал значительное различие между двумя анализируемыми группами (1,5 Log; фиг. 1Б).

На фиг. 1A показано сравнение между субъектами, получающими длительное лечение ИПП (общая группа ИПП: ИПП плюс «ИПП плюс пробиотики»), и контрольной группой. Данные выражены в виде средней величины колониеобразующих единиц (КОЕ). Фиг. 1Б относится к сравнению между субъектами, получающими длительное лечение ИПП, и субъектами, получающими лечение «ИПП плюс пробиотики». Данные выражены в виде средней величины±S.E.M. колониеобразующих единиц (КОЕ).

Отбор гетероферментативных лактобацилл по признаку роста в бульоне MRS с добавлением антибиотика ванкомицина в серийных разведениях позволил нам продемонстрировать, что большинство бактерий, обнаруженных у субъектов, получавших лечение «ИПП плюс пробиотики», принадлежало к гетероферментативной группе, как показано на круговой диаграмме, воспроизведенной на фиг. 2, на которой площадь пропорциональна общей микробной популяции.

Анализ при использовании видоспецифического ПЦР-анализа показал наличие видов L. rhamnosus, L. plantarum и L. delbr. subsp. delbrueckii у всех субъектов, получающих лечение «ИПП плюс пробиотики», тогда как вид L. pentosus не был обнаружен (таблица 3). Вероятно, этот вид не обладает свойствами, необходимыми для выживания во внутрижелудочной среде. Положительный результат для вида L. plantarum, продемонстрированный у субъекта, получающего лечение только ИПП, по-видимому, объясняется особенностями питания этого субъекта.

ПРОБНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Материалы и методы

1. Исследование

Все 30 индивидуумов (17 мужчин и 13 женщин) в возрасте от 19 до 57 лет, получавших лечение ИПП, были добровольно включены в исследование (февраль-март 2011). Другие 10 индивидуумов (4 мужчин и 6 женщин) в возрасте от 22 до 64 лет, которые не применяли ИПП (ингибиторы протонной помпы), были включены в исследование в качестве контрольной группы, представленной людьми с нормальной кислотностью желудочного сока.

Критерии включения для участия в исследовании включали: возраст от 18 до 70 лет, длительное лечение ИПП в течение по меньшей мере 3-12 месяцев подряд (для первых трех групп), никакой другой проблемы со здоровьем на момент включения в исследование, никакой патологии, требующей лечения антибиотиками; они были проинформированы и дали свое согласие на участие в пробном исследовании. Индивидуумов также отбирали исходя из определенных критериев исключения: возраст менее 30 лет, текущая беременность или грудное вскармливание, серьезные хронические дегенеративные заболевания, серьезные когнитивные расстройства, ранее проведенное хирургическое вмешательство на органах брюшной полости, дивертикулит, иммунодефицитные состояния, сопутствующее органическое кишечное заболевание, антибиотикотерапия. После получения информированного согласия индивидуумов делили на четыре группы (A, B, C и D). В группы A и B были включены субъекты, которые подвергались длительному лечению ИПП (по меньшей мере 12 месяцев подряд), тогда как в группу C. были включены субъекты, которые подвергались краткосрочному лечению ИПП, от 3 до 12 месяцев подряд. Наконец, в группу D были включены контрольные индивидуумы, которые не получали лечения ИПП, и с физиологическим барьерным эффектом желудка. Группа A (10 индивидуумов) являлась контрольной группой при длительном лечении ИПП и не получала лечения. Каждый субъект в группе В (10 индивидуумов) получал 10 саше, содержащих 30 мг каждого из штаммов L. rhamnosus LR06 (DSM 21981), L. pentosus LPS01 (DSM 21980) и L. plantarum LP01 (LMG P-21021), соответствующих 3×10⁹ КОЕ/штамм/саше, и 10 мг микроорганизма L. delbrueckii subsp. delbrueckii LDD01 (DSM 22106), эквивалентных 1×10⁹ КОЕ/саше, 60 мг N-ацетилцистеина (NAC) и 2,34 грамма картофельного мальтодекстрина. Общее число живых клеток на саше составляло 10 миллиардов (10×10⁹ КОЕ). Группа С (10 индивидуумов) являлась исследуемой группой при краткосрочном лечении ИПП и не получала пробиотики. Задача в этой группе состояла в сравнении бактериального роста в группе C с группой A, поскольку было сделано предположение, что концентрация бактерий в просвете желудка и в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки должна быть больше у субъектов, которые подвергались длительному лечению ИПП, чем у пациентов, которые подвергались лечению сроком не более 12 месяцев. Индивидуумы в группе В принимали одно саше/сутки во время основного приема пищи, предпочтительно за ужином, чтобы дать возможность бактериям дольше оставаться в просвете желудка и быть равномерно распределенными с N-ацетилцистеином. Содержимое саше растворяли в половине стакана холодной воды перед употреблением. Прием длился 10 суток. Желудочный сок и материал из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки собирали во время гастроскопии у субъектов после воздержания от пищи в течение по меньшей мере 12 часов после последнего приема пробиотиков. Таким образом, проходило не менее полусуток после последнего приема пробиотиков индивидуумами. Более конкретно, гастроскопию проводили в нулевой момент времени (d₀) во всех группах (А, В, С и D), а через 10 суток (d₁₀), то есть по окончании приема пробиотиков, в отношении только группы В. Фекальные образцы собирали в момент времени d₀ во всех группах (A, B, C и D) и в момент времени d₁₀ только для группы В. Субъекты в группах A, B и C продолжали - лечение конкретными лекарственными препаратами-ИПП в тех же дозах в течение всего периода пробного исследования.

2. Сбор фекальных образцов

Фекалии собирали в начале исследования (d₀) во всех группах (A, B, C и D) и в группе B в момент времени d₁₀. Фекальные образцы для подсчета специфических групп бактерий в кишечной флоре (примерно 10 грамм) собирали у добровольцев в стерильные пластиковые контейнеры, предварительно наполненные 20 мл жидкой транспортной среды Эймса (BD Italy, Милан, Италия), хранившиеся при 4°C у добровольцев дома и доставленные в лабораторию в пределах 24 часов после сбора.

3. Количественное определение общего числа живых бактериальных клеток и общего числа бактерий рода Lactobacillus и геномный анализ, проводимый с помощью ПЦР-анализов на желудочном соке и материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки.

Желудочный сок и материал из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки собирали во время гастроскопии, проводимой пациентам, которые воздерживались от пищи в течение 12-24 часов. Процедуры гастроскопии проводили в отделении гастроэнтерологии больницы Maggiore della Carita в Новаре. Образцы материала соскоба (примерно 1-2 грамма) консервировали в стерильных пластиковых контейнерах, предварительно наполненных 10 мл жидкой транспортной среды Эймса (BD Italy, Милан, Италия). Все образцы хранили при 4°C и доставляли в лабораторию в пределах 24 часов после сбора.

Образцы анализировали сразу после того, как они были получены лабораторией и в любом случае в пределах 24 часов после сбора. Образцы взвешивали и переносили в стерильный контейнер (Stobag), разбавляли средой Эймса 1:10 (масс./об.) и гомогенизировали с помощью аппарата Stomacher в течение 4 минут при 230 об/мин. Образцы подвергали серийным десятикратным разведениям при использовании 1 мл физиологического раствора в каждом разведении (10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5, 10^-6, 10^-7 и 10^-8 для подсчетов общего числа живых клеток и общего числа клеток бактерий рода Lactobacillus). Образцы высевали на чашки со специфическими агаризованными культуральными средами. В группе D на чашки высевали разведения с 10^-1 по 10^-6, поскольку ожидалось, что количество бактерий будет значительно ниже чем в других группах. Неселективную культуральную среду LAPTG использовали для подсчета общего числа живых клеток, тогда как выборочный подсчет общего числа только бактерий рода Lactobacillus проводили с помощью культуральной ацетатной агаризованной среды Рогоза (Oxoid, Милан, Италия). Все чашки, засеянные лактобациллами, инкубировали в течение 48-72 часов при 37°C в анаэробных условиях (GasPak) с помощью набора Anaerocult (Merck, Дармштадт, Германия), тогда как чашки с LAPTg инкубировали в аэробных условиях в течение 24-48 часов при 37°C. Видоспецифический ПЦР-анализ проводили на экстракте общей геномной ДНК, полученном из образцов обработанного желудочного сока и из материала соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, с целью подтверждения и количественной оценки присутствия пробиотических бактерий, вводимых добровольцам. В частности, использованные праймеры были следующими: L. rhamnosus (Rha/PRI), L. pentosus (PENT f/PLAN f/pREV), L. plantarum (LFPR /PLAN II) и L. delbrueckii subsp. delbrueckii (Ldel7/Lac2). Количественное определение общей популяции бактерий и общего числа лактобацилл в желудочном соке и в материале соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, а также видоспецифический ПЦР-анализ, проводили в лаборатории Biolab Research Srl в Новаре, Италия.

4. Количественное определение специфических микробных групп, присутствующих в фекальных образцах.

Образцы исследовали сразу после того, как они поступали в лабораторию. Образцы взвешивали (примерно 30 грамм) и переносили в стерильный контейнер (Stobag), разбавляли жидкой средой Эймса с получением разведения 1:10 (масс./об.) и затем гомогенизировали с помощью аппарата Stomacher в течение 4 минут при 230 об/мин. Образцы затем подвергали серийным десятикратным разведениям при использовании стерильного физиологического раствора и 0,1 мл соответствующего разведения (10^-4, 10^-5, 10^-6, 10^-7 и 10^-8 для подсчета общего числа колиформных бактерий, Escherichia coli и энтерококков; 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4 и 10^-5 для дрожжей и плесневых грибов). Образцы высевали на чашки с агаризованными культуральными средами. Энтерококки подсчитывали при использовании агара Сланеца-Бертли (SB) (Oxoid, Милан, Италия); общее количество колиформных бактерий и Escherichia coli подсчитывали на тест-пластинах Petrifilm СС (3М, Segrate, Милан, Италия) и на Chromo IDCPS (BioMerieux, Флоренция, Италия), общее число дрожжей и плесневых грибов подсчитывали на дрожжевом агаре с декстрозой и хлорамфениколом (YGC) (Sigma-Aldrech, Милан, Италия). Энтерококки, все колиформные бактерии и Escherichia coli инкубировали в аэробных условиях при 37°C в течение 24-48 часов, тогда как дрожжи и плесневые грибы инкубировали в аэробных условиях при 25°C в течение 24-48 часов.

Количественное определение микробных групп, перечисленных выше, в фекальных образцах осуществляли в лаборатории Biolab Research Sri в Новаре, Италия.

5. Статистический анализ

Все полученные значения концентрации общей бактериальной популяции и общего числа лактобацилл в желудочном соке и в материале соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки выражают в виде среднего количества живых клеток на мл или на грамм образца±стандартная ошибка среднего (m±SEM). Все значения, относящиеся к концентрации специфических фекальных микробных групп, выражены в виде среднего количества живых клеток/грамм фекалий±стандартная ошибка среднего (m±SEM). Критерий Стьюдента для статистических анализов парных или независимых выборок использовали для оценки результатов и сравнения их в моменты времени d₀ и d₁₀ в группе B (парные) и в момент времени d₀ между различными группами (независимые). В частности, результаты в группе A сравнивали с результатами в группах B, C и D в момент времени d₀ (исходные данные). Различия считали значимыми при p не более 0,05.

6. Результаты

6.1. Количественное определение общего числа бактериальных клеток, общего числа бактерий рода Lactobacillus и геномный анализ, проводимый с помощью ПЦР-анализов на желудочном соке и материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки.

Все 40 индивидуумов были подвергнуты гастроскопии в нулевой момент времени (d₀), тогда как группу В также подвергали гастроскопии по окончании приема пробиотиков (d₁₀). Случаев досрочного прекращения исследования не регистрировали, так как препарат очень хорошо переносился и принимался каждым участником исследования в группе B, единственной, в которой участники получали пробиотические добавки между моментами времени d₀ и d₁₀.

Результаты, касающиеся общего числа бактериальных клеток и общего числа бактерий рода Lactobacillus в желудочном соке и в материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки показаны в таблице 4.

Таблица (4): Количественное определение общего числа бактериальных клеток и общего числа бактерий рода Lactobacillus (значение±SEM, log₁₀ КОЕ/мл желудочного сока или грамм материала соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки) в момент времени d₀ (все группы) и в момент времени d₁₀ (группа B).

а) сравнение между четырьмя группами в момент времени d₀

б) процент общего числа бактерий рода Lactobacillus в момент времени d₀ в четырех группах

в) сравнение в нулевой момент времени (d₀) и в момент времени d₁₀ в группе B

** Сравнительные исходные данные в нулевой момент времени (d₀)

§ Сравнение между (d₀) и (d₁₀).

Интересно отметить, что значительное снижение в общих бактериальных параметрах присутствует в момент времени d₁₀ в группе B по сравнению с исходными данными (таблица 1в).

6.2. Результаты видоспецифического ГИДР-анализа

Результаты видоспецифического ПЦР-анализа

в группе B в момент времени d₁₀ в сравнении с моментом времени d₀ дополнительно подтвердили присутствие четырех видов введенных пробиотиков. Общая картина представлена в таблице 5.

Таблица 5. Результаты видоспецифического ПЦР-анализа в группе В в моменты времени d₀ и d₁₀. Наличие соответствующих видов обозначено знаком «+», тогда как их отсутствие обозначено знаком «-».

а) желудочный сок

и желудочном соке L. plantarum и L. delbrueckii subsp. delbrueckii являлись двумя наиболее представительными видами, поскольку 10 и 9 индивидуумов, соответственно, из 10 имели положительный результат в сравнении с 1 и 0 в исходных данных (d₀). В соскобе со слизистой двенадцатиперстной кишки L. plantarum и L. rhamnosus присутствовали у 9 и 10 субъектов, соответственно, из 10 в сравнении с 2 и 0 в исходных данных (d₀).

6.3. Подсчет специфических микробных групп в фекальных образцах.

Результаты по общему количеству бактерий рода Enterococcus, общему количеству колиформных бактерий, Escherichia coli, дрожжей и плесневых грибов в фекальных образцах представлены в таблице 6.

Таблица 6: Количественное определение специфических микробных групп в фекальных образцах в момент времени d₀ (все группы) и в момент времени d₁₀ (группа В). Результаты выражены в виде log₁₀ КОЕ/грамм фекалий (значение±SEM).

а) сравнение между четырьмя группами в момент времени d₀

б) процент общего количества колиформных бактерий, которые содержат Escherichia coli, в момент времени d₀ в четырех группах и в момент времени d₁₀ в группе B

в) сравнение между исходными данными (d₀) и в момент времени d₁₀ в группе B

** Сравнительные исходные данные в нулевой момент времени d₀

§ Сравнение между d₀ и d₁₀ в группе В.

Результаты

Исследование подтвердило значительный бактериальный рост в верхних отделах желудочно-кишечного тракта у субъектов, которые принимали ИПП более 12 месяцев подряд (р составляет 0,0011, и р составляет 0,0137 для общего числа бактерий в желудочном соке и в материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, соответственно, в группе A при сравнении с группой D, которая представляет собой генеральную совокупность; сходные статистические результаты были обнаружены при сравнении группы B и группы D аналогичным образом). Сравнение между группами A и C (субъекты, получавшие лечение ИПП в течение периода от 3 до 12 месяцев) показало статистическую значимость 3 из 4 параметров. Таким образом, продолжительность лечения ИПП является фактором, который может определять степень бактериальной пролиферации в верхних отделах желудочно-кишечного тракта. Индивидуумы, получавшие краткосрочное лечение, по-видимому, более сходны с генеральной совокупностью, нежели с субъектами, которые подвергались длительному лечению ИПП.

Интересный аспект относится к более высокому проценту общего числа бактерий рода Lactobacillus в желудочном соке субъектов, получавших краткосрочное лечение (34,91%; 5,01 log₁₀ КОЕ/мл в группе C), по сравнению с субъектами, получавшими длительное лечение (3,06%; 6,99 log₁₀ КОЕ/мл в группе А; 3,51%; 7,15 log₁₀ КОЕ/мл в группе В). Такая более высокая концентрация, однако, не отражает результаты, полученные при соскобе со слизистой двенадцатиперстной кишки (1,58%; 4,00 log₁₀ КОЕ/мл в группе С).

Введение 4 штаммов бактерий, перечисленных выше, то есть L. rhamnosus LR06, L. pentosus LPS01, L. plantarum LP01 и L. delbrueckii subsp.delbrueckii LDD01, включая 60 мг NAC, в течение 10 суток было достаточным для значительного изменения типичного бактериального роста у субъектов, получавших лечение ИПП в течение более 12 месяцев, направленного на восстановление защитного барьера против возможных патогенов пищевого происхождения (р составляет 0,0023, и p составляет 0,0256 для общего числа бактерий в желудочном соке и материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, соответственно, в группе В в момент времени d₁₀ по сравнению с моментом времени d₀, таблица 4в.

Другим интересным результатом был процент общего числа бактерий, представленных лактобациллами, в различных группах. У контрольных субъектов, которые не принимали ИПП, бактерии, принадлежащие к роду Lactobacillus, составляли примерно 14% от всей желудочной микрофлоры, тогда как у пациентов, получавших лечение ИПП в течение более 12 месяцев, лактобациллы составляли только лишь около 3% от общего числа бактерий, что, с учетом вышеизложенного, указывает на то, что подавляющее большинство микроорганизмов в желудке составлено из других, потенциально опасных микробных групп.В конце периода приема пробиотиков (d₁₀) в группе В лактобациллы составляли 98% от общего числа бактерий в желудочном соке, и было зарегистрировано увеличение их концентрации по сравнению с нулевым моментом времени, хотя оно не было статистически значимым (p составляет 0,074). Отсутствие статистической значимости могло быть объяснено в свете значительного параллельного снижения общего числа желудочных бактерий (7,71 log₁₀ КОЕ/мл по сравнению с 8,60 log₁₀ КОЕ/мл, p составляет 0,0023). С другой стороны, процент бактерий рода Lactobacillus в материале из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки был значительно выше в момент времени d₁₀ по сравнению с исходными данными (p составляет 0,0355).

Результаты видоспецифического ПЦР-анализа кроме того подтвердили способность пробиотиков, вводимых вместе NAC, эффективно колонизировать просвет желудка и слизистую двенадцатиперстной кишки у субъектов, получающих лечение ИПП более 12 месяцев подряд (таблицы 5а и 5б). Такой подход может помочь ингибировать или замещать возможные вредные патогенные бактерии или даже бактерии, которые обычно присутствуют у субъектов, получающих длительное лечение ИПП. Этот показатель является более значимым, если учесть, что гастроскопии все были подвергнуты по меньшей мере через 12 часов после последнего приема пробиотиков, что, таким образом, демонстрирует способность этих полезных бактерий сохраняться в значительной степени в желудке и на поверхности слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. NAC использовали из-за его механических эффектов в отношении бактериальных биопленок с целью предотвращения возможного нового образования биопленок у субъектов, подвергающихся длительному лечению ИПП.

Результаты, полученные для фекальных образцов, показали, с одной стороны, значительное увеличение всех микробных параметров, принимаемых во внимание, у индивидуумов, получающих лечение ИПП в течение периода по меньшей мере 12 месяцев (сравнение между группами А и D): p составляет 0,0021, p составляет 0,0147, p составляет 0,0227, p составляет 0,0223, и p составляет 0,0027 для Enterococcus spp., общего количества колиформных бактерий, Е. coli, дрожжей и плесневых грибов, соответственно). В любом случае краткосрочное введение ИПП, от 3 до 12 месяцев, было достаточным, чтобы привести к значительному увеличению в фекальных образцах всех пяти параметров, хотя статистическая значимость была ниже (смотри данные для группы C в сравнении с D: p составляет 0,0479, p составляет 0,0338, p составляет 0,0444, p составляет 0,0051, и p составляет 0,0187, соответственно) (таблица 6). С другой стороны, статистическое сравнение между субъектами, получающими лечение ИПП длительный период времени и короткий период времени, было значимым только для дрожжей и плесневых грибов (p составляет 0,0486, и p составляет 0,0078, соответственно), тем самым указывая на то, что для Enterococcus spp. и для грамотрицательных бактерий прием минимальных количеств ИПП в течение трех месяцев является достаточным, чтобы опосредовать большую часть случаев возрастания, наблюдаемых после 12 месяцев лечения. Дрожжам и плесневым грибам, весьма вероятно, необходимо больше времени, чтобы колонизировать кишечную флору после повреждения желудочного барьера, поскольку значительное дополнительное увеличение регистрировали у субъектов, получающих длительное лечение, по сравнению с субъектами, получающими краткосрочное лечение (группа A по сравнению с группой C).

Общее число колиформных бактерий обычно составляет примерно 1% от всей популяции человеческих фекальных бактерий в концентрации примерно 109 бактерий на грамм (37). Другим интересным результатом является процент общего числа колиформных бактерий, представленных Escherichia coli. Известно, фактически, что эта бактерия представляет собой большую часть всей популяции колиформных бактерий в кишечнике человека, обычно достигая 93-94% (38). Все колиформные бактерии, присутствующие в кишечнике человека, состоят из четырех родов семейства Enterobacteriaceae, в частности Escherichia, Klebsiella, Enterobacter и Citrobacter, при этом Klebsiella обычно достигает примерно 1%, a Enterobacter/Citrobacter spp.вместе составляют примерно 6%. Результаты для группы D по существу подтвердили эти данные, поскольку 92,6% всех колиформных бактерий было представлено Е. coli. У субъектов, которые подвергались длительному лечению ИПП, однако, этот процент был снижен до 83,9% (группа А) и до 77,4% (группа В), тем самым указывая на аномальный избыточный рост родов Klebsiella и/или Enterobacter!Citrobacter в кишечнике в результате повреждения желудочного барьера. Это увеличение можно считать опасным, так как некоторые виды, такие как Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca и Enterobacter cloacae могут оказывать значительное патогенное действие на организм хозяина, начиная с внутрибольничных инфекций крови (BSI) и заканчивая острым аппендицитом и антибиотик-ассоциированным геморрагическим колитом (ААНС).

Enterococcus spp. обычно присутствуют в человеческих фекалиях в концентрациях от 10⁵ до 10⁷ бактерий на грамм. Данные, полученные в контрольной популяции, подтвердили этот факт, так как в фекальных образцах было подсчитано 6,39 log¹⁰ КОЕ/мл. Длительное лечение ИПП вызывало значительное увеличение количества микроорганизмов этого рода в кишечнике человека (7,68 log₁₀ КОЕ/мл в группе А и 7,80 log₁₀ КОЕ/мл в группе В).

Наиболее важный вопрос, касающийся Enterococcus spp., в частности Enterococcus faecium, состоит в их врожденной антибиотикорезистентности, особенно к пенициллину и ванкомицину. Энтерококки являются третьей наиболее распространенной причиной инфекционного эндокардита, а влияние устойчивости к пенициллину на терапевтические результаты было обнаружено с конца 1940-х годов. В любом случае эпидемиологические исследования показали, что штаммы Е. faecium, связанные с внутрибольничными инфекциями, включая эндокардит, имеют типы последовательности, отличающиеся от симбиотических штаммов, которые колонизируют желудочно-кишечный тракт здоровых людей, хотя не может быть исключена вероятность того, что некоторые опасные биотипы могут колонизировать человеческую бактериальную флору субъектов, получающих лечение ИПП.

Комплексные анализы фекалий в исходный момент времени подтвердили ослабление или полное нарушение барьерного эффекта желудка, поскольку состав кишечной флоры показал, что он сильно изменен у субъектов, которые принимают ИПП в течение по меньшей мере трех месяцев. Количество грамотрицательных бактерий, таких как все колиформные бактерии и Escherichia coli, было значительно выше чем в контроле, тогда как количество дрожжей и плесневых грибов увеличилось примерно на 4 log₁₀. Фекальные энтерококки увеличились более чем на log₁₀. Также интересно отметить, что корреляция между продолжительностью приема ИПП и численностью фекальных микроорганизмов увеличивается в пяти анализируемых микробных группах, выбранных в качестве доказательства потенциального нарушения микробного равновесия.

Четыре изучаемых пробиотика в сочетании с NAC были способны уменьшать все параметры в фекальных образцах (p составляет 0,0155, p составляет 0,0064, р составляет 0,0105, p составляет 0,0066, и p составляет 0,0053 для Enterococcus spp., общего числа колиформных бактерий, Е. coli, дрожжей и плесневых грибов, соответственно, в момент времени d₁₀ по сравнению с исходной величиной). В частности, уменьшение общего числа колиформных бактерий, Е. coli, дрожжей и плесневых грибов составило более одного log₁₀ после 10 суток приема пробиотиков. По окончании приема пробиотиков в группе В общее число колиформных бактерий и концентрации Е. coli были значительно ниже чем величины, полученные в генеральной совокупности (группа D) (p составляет 0,0182, и p составляет 0,0229, соответственно), тем самым подтверждая значительное антагонистическое действие пробиотических бактерий в отношении Escherichia coli.

В заключение, введение ассоциации специфических штаммов L. rhamnosus LR06, L. pentosus LPS01, L. plantarum LP01 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii LDD01, включающей также эффективное количество N-ацетилцистеина, способно значительно уменьшить бактериальную пролиферацию на уровне желудка и двенадцатиперстной кишки, снижая количество грамотрицательных бактерий, Enterococcus spp., дрожжей и плесневых грибов в кишечной флоре после 10 суток перорального приема, тем самым быстро восстанавливая баланс в ее составе и восстанавливая защитный барьер против опасных бактерий, особенно на уровне желудка.

N-ацетилцистеин (NAC) использовали из-за его способности механически предотвращать возможное образование бактериальной биопленки, и он оказался эффективным, поскольку концентрация различных бактерий, отличных от лактобацилл, как в желудочном соке, так и в образцах из соскоба со слизистой двенадцатиперстной кишки, была значительно снижена.

Все пробиотические штаммы, использованные в этом исследовании, ранее продемонстрировали значительное антагонистическое действие in vitro в отношении специфических штаммов Escherichia coli, включая энтерогеморрагический серотип O157:Н7, и, поэтому, могли бы быть использованы для эффективного предупреждения инфекций, опосредованных этими опасными или патогенными микроорганизмами.

С учетом фактически более широкого применения ИПП, совместный пероральный прием пробиотиков и NAC, использованный в этом пробном исследовании, представляет собой инновационную стратегию, способную восстанавливать, по меньшей мере частично, нормальный барьерный эффект желудка, тем самым снижая риск желудочно-кишечных инфекций пищевого происхождения у большой части населения с пониженной кислотностью желудка.

1. Фармацевтическая композиция для восстановления баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, содержащая в эффективных количествах следующие штаммы бактерий:

1. Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980;

2. Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021;

3. Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981;

4. Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106

в сочетании с N-ацетилцистеином; причем указанные штаммы способны колонизировать желудок при значении рН, составляющем от 4,0 до 5,5, и продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода.

2. Композиция по п.1, содержащая каждый штамм бактерий в количестве, составляющем от 1×10⁹ до 10×10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ)/штамм/доза; N-ацетилцистеин в количестве, составляющем от 10 до 200 мг.

3. Композиция по п.1, содержащая указанные штаммы в сочетании со штаммом Lactobacillus fermentum LF 09 DSM 18298 и/или штаммом Lactococcus lactis NS 01 DSM 19072; или, альтернативно, в сочетании по меньшей мере с одним штаммом, выбранным из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

а) Lactobacillus reuteri LRE 01 DSM 23877;

б) Lactobacillus reuteri LRE 02 DSM 23878;

в) Lactobacillus reuteri LRE 03 DSM 23879;

г) Lactobacillus reuteri LRE 04 DSM 23880.

4. Композиция по п.1, где указанную композицию применяют для восстановления баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения диспепсии, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы желудка, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы двенадцатиперстной кишки, гастрита, вызванных Helicobacter pylori, и гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая в эффективных количествах штаммы бактерий Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980; Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021; Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981; Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106 и лекарственное средство, принадлежащее к классу ингибиторов протонной помпы (ИПП), причем указанная композиция предназначена для восстановления баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих лекарственные средства для снижения или лечения желудочной гиперацидности, диспепсии, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы желудка, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, язвы двенадцатиперстной кишки, гастрита, вызванных Helicobacter pylori, и гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

6. Композиция по п.5, содержащая каждый штамм бактерий в количестве, составляющем от 1×10⁹ до 10×10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ)/штамм/доза.

7. Композиция по п.5, содержащая указанные штаммы в сочетании со штаммом Lactobacillus fermentum LF 09 DSM 18298 и/или штаммом Lactococcus lactis NS 01 DSM 19072; или, альтернативно, в сочетании по меньшей мере с одним штаммом, выбранным из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

а) Lactobacillus reuteri LRE 01 DSM 23877;

б) Lactobacillus reuteri LRE 02 DSM 23878;

в) Lactobacillus reuteri LRE 03 DSM 23879;

г) Lactobacillus reuteri LRE 04 DSM 23880.

8. Композиция по п.5, где указанные штаммы бактерий и указанное лекарственное средство присутствуют совместно в лекарственной форме для перорального применения.

9. Композиция по любому из пп.1-8 для применения в восстановлении баланса кишечной микрофлоры у субъектов, принимающих ИПП, после инфекций, расстройств или заболеваний, вызванных присутствием Helicobacter pylori, предпочтительно у субъектов с рецидивами инфекций, вызванных Helicobacter pylori.

10. Пищевая композиция, содержащая в эффективных количествах следующие штаммы бактерий:

1. Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980;

2. Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021;

3. Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981;

4. Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106

в сочетании с N-ацетилцистеином; причем указанные штаммы способны колонизировать желудок при значении рН, составляющем от 4,0 до 5,5, и продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода.

11. Композиция по п.10, содержащая каждый штамм указанных бактерий в количестве, составляющем от 1×10⁹ до 10×10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ)/штамм/доза; N-ацетилцистеин в количестве, составляющем от 10 до 200 мг.

12. Композиция по п.10, содержащая указанные штаммы в сочетании со штаммом Lactobacillus fermentum LF 09 DSM 18298 и/или штаммом Lactococcus lactis NS 01 DSM 19072; или, альтернативно, в сочетании с по меньшей мере одним штаммом, выбранным из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

а) Lactobacillus reuteri LRE 01 DSM 23877;

б) Lactobacillus reuteri LRE 02 DSM 23878;

в) Lactobacillus reuteri LRE 03 DSM 23879;

г) Lactobacillus reuteri LRE 04 DSM 23880.

13. Пищевая добавка, содержащая в эффективных количествах следующие штаммы бактерий:

1. Lactobacillus pentosus LPS01 DSM 21980;

2. Lactobacillus plantarum LP01 LMG P-21021;

3. Lactobacillus rhamnosus LR06 DSM 21981;

4. Lactobacillus delbrueckii LDD 01 (DSMZ 20074) DSM 22106

в сочетании с N-ацетилцистеином; причем указанные штаммы способны колонизировать желудок при значении рН, составляющем от 4,0 до 5,5, и продуцировать бактериоцины, и/или метаболиты, и/или перекись водорода.

14. Пищевая добавка по п.13, содержащая каждый штамм указанных бактерий в количестве, составляющем от 1×10⁹ до 10×10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ)/штамм/доза; N-ацетилцистеин в количестве, составляющем от 10 до 200 мг.

15. Пищевая добавка по п.13, содержащая указанные штаммы в сочетании со штаммом Lactobacillus fermentum LF 09 DSM 18298 и/или штаммом Lactococcus lactis NS 01 DSM 19072; или, альтернативно, в сочетании с по меньшей мере одним штаммом, выбранным из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из:

а) Lactobacillus reuteri LRE 01 DSM 23877;

б) Lactobacillus reuteri LRE 02 DSM 23878;

в) Lactobacillus reuteri LRE 03 DSM 23879;

г) Lactobacillus reuteri LRE 04 DSM 23880.