Способ оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки

Изобретение относится к области медицины, а именно комбустиологии, гнойной хирургии, клинической микробиологии, и касается способа оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки. Сущность метода заключается в том, что оценивают влияние антисептического препарата на микробную биопленку, образованную смешанной культурой бактерий, представленной возбудителями инфекционных осложнений. Для этого полимикробные микробные биопленки, сформированные in vitro, подвергают 60-минутному воздействию антисептика, после чего оценивают и сравнивают с контролем (без воздействия антисептика) два показателя: массивность биопленки (в Ед ОП) и жизнеспособность (по числу КОЕ), входящих в ее состав бактерий. Если Ед ОП снизился на 70% и КОЕ не обнаружены, антисептик считают высокоэффективным; если Ед ОП снизился от 30 до 70% и число КОЕ снизилось на 4 порядка и более, антисептик считают среднеэффективным; при снижении Ед ОП менее 30% и снижении числа КОЕ менее чем на 4 порядка антисептик оценивают как низкоэффективный. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективности способа за счет оценки антибактериального действия антисептика на полимикробные биопленки. 3 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно комбустиологии, гнойной хирургии, клинической микробиологии, и может быть использовано для оценки антибактериального действия антисептика на микробные биопленки, сформированные несколькими бактериями. Известен количественный суспензионный метод изучения противомикробной активности антисептиков (Гудкова Е.И., Красильников А.П., Адарченко, А.А. Методы испытания противомикробной активности антисептиков профилактического назначения: методические указания №11-13-197, утв. МЗРБ 16.01.97, Минск, 1997. 8 с.), в котором оценку эффективности антисептиков проводят в отношении только моновидовых планктонных культур бактерий. Для испытания на устойчивость к антисептикам используют чистые культуры бактерий, выделенные с помощью стандартных методик.

Недостатки прототипа: определение антибактериальной активности антисептика согласно прототипу осуществляется в отношении только моновидовой культуры (одного штамма) бактерий, тогда как в материале хирургических, в том числе ожоговых больных, чаще обнаруживаются полимикробные ассоциации бактерий.

Технический результат: повышение точности и объективности способа за счет оценки антибактериального действия антисептика на полимикробные биопленки.

Сущность метода заключается в том, что оценивают влияние антисептического препарата на биопленку, образованную смешанной культурой бактерий, представленной возбудителями инфекционных осложнений. Для этого полимикробные биопленки, сформированные in vitro, подвергают кратковременному воздействию антисептика, после чего оценивают и сравнивают с контролем (без воздействия антисептика) два показателя: массивность биопленки и жизнеспособность входящих в ее состав бактерий.

Способ осуществляют следующим образом согласно O'Toole G.F. и KolterR. (1998): суточные культуры двух штаммов бактерий, например Pseudomonas aeruginosa и Staphylicoccus aureus, стандартизуют до 2,0 по McFarland и разводят 1:100 в бульоне Луриа Бертани (LB-бульоне). В лунки полистиролового 96-ти луночного плоскодонного планшета (Медполимер, Россия) вносят по 0,1 мл бульонных культур обоих видов бактерий и закрытые планшеты выдерживают статически в термостате при 37°С в течение 20 часов для формирования биопленок. После удаления планктонной культуры и 3-кратной отмывки биопленки фосфатно-буферной средой (ФБС) в опытную часть лунок вносят 200 мкл антисептика, в контрольные лунки - 0,89% NaCl, выдерживают 1 час и 3-кратно отмывают ФБС. Затем вносят 200 мкл 0,1% водного раствора генцианвиолета и выдерживают 30 мин. Биомассу биопленки оценивают по уровню экстракции этанолом красителя, который измеряют на микропланшетном ридере Benchmark Plus (Bio-Rad, США) при длине волны 580 нм в единицах оптической плотности (Ед, ОП580). Для оценки жизнеспособности клеток в биопленках последние 3-кратно отмывают, вносят в лунки 100 мкл ФБС и 5-кратно обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц, поместив планшеты в ультразвуковую ванну Elma Ultrasonic 30S (Elma, Германия). Жизнеспособность клеток оценивают по числу колониеобразующих единиц (КОЕ) после высева из последовательных децимальных разведений бактериальных суспензий на селективные среды. Далее сравнивают усредненные показатели оптической плотности элюата из смешанных биопленок, обработанных антисептиком, с аналогичным в контроле. Если показатель, характеризующий массивность биопленки (в Ед ОП) после экспозиции с антисептиком снизился на 70%) от контроля, регистрируют высокую эффективность антисептика, снижение на 30-70% - среднюю, менее 30% - низкую. Кроме того, оценивают количество жизнеспособных клеток (по числу КОЕ) в составе биопленки, обработанной антисептиком, и сравнивают его с контрольным. Если жизнеспособные клетки не обнаружены, то регистрируют высокую эффективность антисептика, если число клеток снизилось на 4 порядка и более - среднюю эффективность, менее чем на 4 порядка - низкую эффективность.

Примеры конкретного применения

Пример 1: Оценено влияние «Пронтосана®» на бинарную биопленку с использованием клинических штаммов Pseudomonas aeruginosa и Staphylicoccus aureus, изолированных из раневого отделяемого пациента, находящегося на лечении в ожоговом центре, с помощью предлагаемого способа. Для этого в лунках полистиролового планшета формировали 20-часовую смешанную биопленку, после чего удаляли планктонные клетки и питательную среду, биопленки 3-кратно отмывали. Сформированные биопленки выдерживали с «Пронтосаном®» в течение 1 ч и оценивали массивность биопленки и жизнеспособность клеток в ее составе. Результат: Ед ОП снизился на 70% и КОЕ не обнаружены, антисептик высокоэффективный (см. табл. 1).

Пример 2: Оценено влияние 0,05% раствора хлоргексидина на бинарную биопленку с использованием клинических штаммов Pseudomonas aeruginosa и Staphylicoccus aureus, изолированных из раневого отделяемого пациента, находящегося на лечении в ожоговом центре, методика выполнена аналогичным образом. Результат: Ед ОП снизился на 60% и число КОЕ снизилось на 4 порядка, антисептик среднеэффективный (см. табл. 1).

Пример 3: Оценено влияние 0,02% раствора фурацилина на бинарную биопленку с использованием клинических штаммов Pseudomonas aeruginosa и Staphylicoccus aureus, изолированных из раневого отделяемого пациента, находящегося на лечении в ожоговом центре, методика выполнена аналогичным образом. Результат: Ед ОП снизился на 20% и число КОЕ снизилось менее 4 порядков, антисептик низкоэффективный (см. табл. 1).

Положительный эффект заявляемого способа состоит в следующем: способ позволяет оценить эффективность применения антисептика для подавления жизнеспособности бактериальных клеток в смешанных биопленках, а также обеспечивает объективность получаемых результатов.

Способ оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки путем воздействия антисептика на микробные биопленки в течение не более 60 минут, промывания образцов, оценки жизнеспособности клеток в составе биопленки по числу колониеобразующих единиц (КОЕ) и сравнения с контролем, отличающийся тем, что используют полимикробные биопленки, сформированные несколькими бактериями, измеряют биомассу полимикробной биопленки в единицах оптической плотности (Ед ОП), подсчитывают жизнеспособность клеток в ее составе, сравнивают с контролем, и если Ед ОП снизился на 70% и КОЕ не обнаружены, антисептик считают высокоэффективным, если Ед ОП снизился от 30 до 70% и число КОЕ снизилось на 4 порядка и более, антисептик считают среднеэффективным, при снижении Ед ОП менее 30% и снижении числа КОЕ менее чем на 4 порядка оценивают антисептик как низкоэффективный.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к методам поиска антибактериальных веществ природного и синтетического происхождения с одновременным анализом механизма их действия, и может быть использовано для идентификации соединений, ингибирующих биосинтез белка и/или вызывающих SOS-ответ у бактерий.

Изобретение относится к способу высокоэффективного отбора микроорганизма, имеющего антагонистическую активность против грибкового или бактериального патогена растений.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена система культивирования клеток, система для оценки эффекторных агентов кишечника, содержащая систему культивирования клеток, также предложены способы культивирования клеток, получения кишечного органоида и оценки лечения эффекторных агентов кишечника.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа определения таких характеристик, как типирование, потенциальная устойчивость по меньшей мере к одному антимикробному средству и фактора вирулентности, по меньшей мере, одного микроорганизма из образца.

Изобретение относится к технической микробиологии и биокоррозионным испытаниям, а именно к способам моделирования процессов биокоррозионных поражений алюминиево-магниевых сплавов, применяемых в авиа-космической технике.

Изобретение относится к клинической микробиологии и может быть использовано при определении эффективных мер лечения хронических инфекционных заболеваний кожи и слизистых оболочек человека.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в гастроэнтерологии. Предложен способ определения чувствительности Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам.

Группа изобретений относится к области культивирования клеток. Предложена пластина, выполненная с возможностью переворачивания для образования висячих капель для культивирования клеток, комплект пластин для переноса трехмерных клеточных совокупностей и способ тестирования вещества на токсичность по отношению к клеткам.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен микрофлюидный чип для создания клеточных моделей органов млекопитающих.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ испытания чувствительности Mycobacterium tuberculosis к лекарственным средствам, применение индикатора для вышеуказанного способа, где индикатором является теллурит или смесь теллурита и мочевины, твердая среда для способа испытания чувствительности, применение твердой среды, нагревательный термостат для способа испытания чувствительности и бокс культивирования для способа испытания чувствительности.
Изобретение относится к новому меченному тритием по ацетильному и холиновому фрагментам ацетилхолину формулы CH3COOCH2CH2N+(СН3)3Br-, который может использоваться при изучении физиологически активных соединений.

Изобретение относится к области ядерной медицины, в частности к радиофармацевтическим препаратам (РФП) для визуализации метастатических поражений костной ткани методами позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) и планирования лучевой терапии.

Изобретение относится к медицине. Средство для использования в фотон-захватной терапии злокачественных солидных новообразований представляет собой фармацевтическую субстанцию, включающую в своем составе диэтилентриаминопентауксусную кислоту в виде ее динатриевой соли, отличающееся тем, что в качестве фармацевтической субстанции используют комплекс висмута с диэтилентриаминопентауксусной кислотой (H5dtpa) в виде его динатриевой соли BiNa2dtpa с общей формулой и в следующем весовом соотношении: BiNa2dtpa (BiNa2C14H18O10N3) 305,0-330,0 мг; диэтилентриаминопентауксусная кислота (H5dtpa) 0,1 мг, или 0,2 мг, или 0,3 мг.

Изобретение относится к области медицины и касается рентгеноконтрастного средства для диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта и способа его получения.

Изобретение относится к способу получения радиофармпрепаратов класса поли-N-виниламидов с металлами подгруппы марганца. Способ включает синтез полимера-носителя радиоизотопов, содержащего аминогруппы, и выполнение процесса радиомечения.

Настоящее изобретение относится к соединению формулы I Формула I в которой R1 представляет собой трифенилметил (тритил), А выбран из группы: a) моноциклический С6-10-арил, b) бициклический С6-10-арил, c) С12-20-биарил, d) моноциклический гетероарил и e) бициклический гетероарил, где гетероарил представляет собой ароматический, моно- или бициклический двухвалентный радикал, имеющий от 5 до 10 кольцевых атомов и гетероатом N, по выбору, А несет один или несколько заместителей, выбранных из группы, включающей: a) галоген, b) нитро, c) алкил, d) трифторметил и e) Z, где Z представляет собой R1 представляет собой трифенилметил (тритил), # указывает положение связи с А, и отдельным изомерам, таутомерам, диастереомерам, энантиомерам, стереоизомерам, их смесям и их приемлемым солям.

Изобретение относится к фтор-содержащим соединениям формулы III: где R3 выбирают из группы, включающей Н, F, CN и NO2; R7 выбирают из группы, включающей Y, -O(CH2)n-Y, -(OCH2CH2)m-Y, Z, -OCH2-Z; -CH2-CH2-Z, -CH=CH-Z и -C≡C-Z; X выбирают из CH или N; Y выбирают из 18F или F; Z представляет собой группу где * указывает атом присоединения Z; R5 выбирают из группы, включающей Н, CN и NO2; R8 выбирают из группы, включающей Y и -O(CH2)n-Y; n представляет собой 1-3; и m представляет собой 2-3; включая Е- и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и любую фармацевтически приемлемую соль или их комплекс, а также к способам их получения, промежуточным соединениям синтеза, их применению в качестве диагностических средств, в особенности для визуализации тромбов.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии Описаны выделенные антитела и их фрагменты, которые связываются с опухолевыми антигенами. Также описаны композиции и агенты для доставки, которые включают раскрываемые антитела; клетки, которые продуцируют эти антитела; способы продуцирования этих антител; способы применения этих антител, нацеливания на опухоли и/или метастатические клетки, образуемые ими, и/или опухолевые стволовые клетки, и лечение опухолей и/или метастатических клеток, образуемых ими, и/или опухолевых стволовых клеток; и способы прогнозирования рецидива рака у субъекта.

Изобретение относится к биохимии. Представлено химерное, CDR-привитое, гуманизированное или рекомбинантное человеческое антитело или его фрагмент, который специфически связывается с человеческим EFNA4.

Изобретение относится к медицине, в частности к нанокомпозиции для люминесцентной диагностики злокачественных опухолей. Нанокомпозиция для люминесцентной диагностики злокачественных опухолей на основе лексан-полимерной матрицы и иттербиевых комплексов диметилового эфира протопорфирина IX или тетраметилового эфира гематопорфирина IX, или копропорфирина III, в которой иттербиевые комплексы порфиринов помещены в полимерную оболочку на основе лексана и в структуру комплексов дополнительно введен комплексообразователь триоктилфосфиноксид, а в органическую фазу введен неионогенный детергент полиэтиленгликоль, n-(трет-октил)фенол.

Изобретение относится к области органической химии и касается способа синтеза линолевой и линоленовой кислоты, меченной изотопами углерода 13С и 14С в положении 1, которая может быть использована в качестве средства для выполнения дыхательных тестов, в частности, в интересах диагностики функциональной активности органов пищеварения и гепатобиллиарной системы. Способ синтеза 13С-линолевой, 13С-линоленовой, 14С-линолевой и 14С-линоленовой кислот включает конденсацию углекислого газа, меченного 14С или 13С, с реактивом Гриньяра, получаемым из 1-бром-8,11-гептадекандиена (в случае линолевой кислоты) или из 1-бром-8,11,14-гептадекантриена (в случае линоленовой кислоты), выполняемую в следующей последовательности стадий: а - получение реактива Гриньяра реакцией металлического магния с 1-бром-8,11-гептадекандиеном (в случае линолевой кислоты) или с 1-бром-8,11,14-гептадекантриеном (в случае линоленовой кислоты) в присутствии металлического йода; b - карбоксилирование реактива Гриньяра, полученного в пункте а, в течение 5-15 мин при температуре -20°C при постоянном перемешивании, углекислым газом, меченным 14С или 13С, получаемым разложением серной кислотой карбоната бария, меченного 14С и 13С, при давлении СО2 в приборе не свыше 500 мм рт.ст. (поддерживается капельным дозированием серной кислоты); после прекращения изменения давления в системе реакционную колбу охлаждают жидким азотом с целью количественного переноса в нее оставшегося в системе 14СО2 или 13CO2, закрывают кран, соединяющий прибор с источником CO2, и перемешивают реакционную массу в течение 15 мин при температуре -20°C с целью полного включения изотопно меченного углекислого газа в продукт синтеза: линолевую или линоленовую кислоту. Технический результат изобретения состоит в ускорении процесса получения целевых продуктов, сокращении потерь углекислого газа, меченного 14С или 13С, в повышении его суммарного химического и радиационного выхода по сравнению с прототипом, а также исключению распределения изотопно-меченных атомов по всей длине углеродной цепи ацила: включение происходит только в положении 1. Упрощение и удешевление процесса получения целевого продуктов линолевой (октадекадиен-9,12-овой-1) и линоленовой (октадекатриен-9,12,15-вой-1) кислот обеспечено уменьшением длительности, повышением радиационного и химического выхода продукта по источнику изотопа по сравнению с прототипом. В результате использования изобретения практически полностью исключается выброс радиоактивных отходов во внешнюю среду, так как включение его в целевой продукт приближается к количественному. 10 табл., 2 пр., 4 ил.
Наверх