Способ получения половых феромонов самцов домашних животных
Владельцы патента RU 2623085:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" (RU)
Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к получению биологически активных препаратов для стимуляции половой функции у самок домашних животных. Способ получения половых феромонов самцов домашних животных включает измельчение семенников, их гомогенизацию, добавление фермента протосубтилина, инкубирование, центрифугирование, смешивание с мочой и перегонку с водяным паром. При этом в гомогенизат добавляют в количестве 0,5-1,0% от общей массы полисорбат ТВИН-8. Затем смесь инкубируют в течение 50-60 мин при 37-39°С, смешивают с мочой самца в соотношении 1:3-3,5 и перегоняют с водяным паром. Вышеописанный способ позволяет повысить биологическую активность препарата и увеличить его выход. 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к получению биологически активных препаратов для стимуляции половой функции у самок домашних животных.
В настоящее время известен способ получения препарата 2α-метил-5α-антрост-16-ен-3-он, который используют в качестве обонятельного стимулятора воспроизводительной функции свиней и коров (Патент РФ №2183640, 2002 г., авт. Э.П. Зинкевич и др.). Существенным недостатком этого препарата является то, что он относится к синтетическим аналогам половых феромонов самцов и не содержит всех компонентов, свойственных натуральным феромонам. Поэтому этот препарат имеет относительно низкую биологическую активность.
Известен способ получения натуральных половых феромонов, которые получают из мочи быков (Авторское св. СССР №1666102, 1991 г., авт. В.П. Кононов и др.). Однако используемый при этом технологический процесс сложный, требует специального оборудования, дефицитных химических реактивов и квалифицированного обеспечения.
Известны способы получения натуральных половых феромонов хряка (Патент РФ №2034521. - 1992 г., авт. О.Б. Сеин и др.; Патент РФ №2431491. - 2011 г., авт. Д.О. Сеин и др.), которые предусматривают получение препаратов натуральных половых феромонов хряков и не могут использоваться для получения феромонов самцов других видов животных.
В качестве прототипа выбран способ получения препарата натуральных половых феромонов самцов (Патент РФ №2159597. - 2000 г., авт. Ю.В. Фурман и др.), который включает механическое измельчение семенников, их гомогенизацию, инкубирование, центрифугирование, смешивание с мочой и перегонку с водяным паром. При этом в гомогенизат вносят в количестве 1-1,5% от общей массы фермент протосубтилин, после чего смесь инкубируют в течение 50-60 мин при 37-39°С и смешивают с мочой самца в соотношении 1: 2,0-2,5. Недостатком способа-прототипа является относительно низкая его биологическая эффективность и малый выход конечного продукта.
Технической задачей изобретения является увеличение выхода препарата натуральных половых феромонов самцов домашних животных с высокой биологической активностью.
Решение технической задачи достигается тем, что в качестве исходного сырья используют семенники и мочу половозрелых самцов (быков, хряков, баранов). Семенники освобождают от соединительной ткани, подвергают измельчению на мясорубке и в гомогенизаторе до однородной массы, в которую вносят фермент протосубтилин ГЗ × 23636-79 в количестве 1-1,5% и полисорбат ТВИН-80 в количестве 0,5-1,0% от общей массы исходного сырья. Полученную смесь инкубируют при температуре 37-39°С в течение 50-60 мин и центрифугируют до разделения на две фракции. Надосадочную жидкость смешивают с мочой в соотношении 1,0:3,0-3,5 и перегоняют с водяным паром.
Указанные соотношения используемых компонентов подбирали экспериментальным путем. При увеличении количества мочи концентрация препарата уменьшается на 10-15%, а при уменьшении количества мочи получают на 50-55% меньше препарата по сравнению с оптимальным соотношением компонентов. Оптимальный режим инкубации (температура 37-39°С, продолжительность 50-60 мин) подбирался опытным путем. При температуре ниже 37°С и выше 39°С происходит снижение активности фермента и полисорбата ТВИН-80, процесс гидролиза осуществляется недостаточно полно, что приводит к уменьшению выхода препарата. При инкубации менее 50 мин также снижается выход конечного продукта на 10-15%, что связано с неполным завершением реакции. Увеличение времени инкубации более 60 мин проводить нецелесообразно, так как процесс гидролиза к этому времени заканчивается полностью и выход феромонов в раствор прекращается.
После центрифугирования смеси надосадочную жидкость сливают и подвергают перегонке с водяным паром. Полученный конденсат является препаратом, который представляет собой прозрачную жидкость, без оттенков, со слабовыраженным запахом, стерильную и нетоксичную.
Отличительной особенностью предлагаемого способа получения препарата натуральных половых феромонов самцов является использование полисорба ТВИН-80, который является эмульгатором и солюбилизатором жиров и эфирных масел, что способствует более активному переходу феромонов в раствор. При этом ТВИН-80, попадая в окружающую среду, легко распадается, не оказывая отрицательного влияния на животных и человека.
Для изготовления препарата натуральных половых феромонов быка проводили отбор семенников при убое половозрелых быков в условиях мясокомбината. Брали 500 г семенников, освобождали их от соединительной ткани, измельчали до фаршеобразного состояния, а затем гомогенизировали до однородной массы. В полученную массу вносили 5,0 г фермента протосубтилина и 2,5 г полисорбата ТВИН-80 и инкубировали в термостате при температуре 37-39°С в течение 60 мин. Затем смесь центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 мин до ее разделения на две фракции. Надосадочную жидкость смешивали с 3000 мл мочи половозрелых быков и перегоняли с водяным паром.
Полученный препарат представлял собой прозрачную жидкость без оттенков со слабовыраженным специфическим запахом. Выход препарата половых феромонов быка составлял 700 мл. Расфасовывали препарат в стеклянные флаконы, обкатывали алюминиевыми пробками и хранили до применения при 5°С. Срок хранения 12 мес.
Препараты натуральных половых феромонов хряка и барана получали аналогичным образом. При этом биологические свойства полученных препаратов сравнивали с препаратами - прототипами.
Проверку опытных серий препаратов на токсичность и безвредность проводили на лабораторных (кролики) и продуктивных животных (коровы, свиньи, овцы). Для этого использовали специальные аэрозольные камеры, в которые помещали подопытных животных и распыляли препарат с использованием аэрозольного генератора САГ-2. Проверка полученных серий препаратов натуральных половых феромонов быков, хряков и баранов показала их безвредность.
Биологическую активность изготовленных препаратов натуральных половых феромонов самцов определяли на коровах, свиньях, овцах.
Пример 1. Опыты на коровах проводили в условиях учебно-опытного хозяйства «Знаменское» Курской государственной сельскохозяйственной академии им. И.И. Иванова.
Объектом исследования являлись коровы черно-пестрой породы. Было сформировано по принципу аналогов три группы животных по 10 голов в каждой.
Коровы 1 опытной группы подвергались обработке разработанным препаратом натуральных половых феромонов быка. Коровы 2 опытной группы обрабатывались препаратом-прототипом. Коровы 3 контрольной группы стимуляции феромонами не подвергались. Обработку коров феромонами проводили ежедневно, начиная с третьего дня после отела и до появления половой охоты. Доза препаратов составляла 0,5 мл на одно животное. Применяли препараты путем распыления пульверизатором на носовое зеркало животных. Результаты исследований показали, что у коров, подвергавшихся стимуляции изготовленным препаратом, раньше наступила половая охота, и после их искусственного осеменения было больше стельных животных по сравнению с препаратом - прототипом и контролем (таблица 1).
Пример 2. Опыты на свиньях проводили в условиях свинокомплекса «ООО Любимовская» Курской области. Объектом исследований являлись ремонтные свинки крупной белой породы. Было отобрано три группы неполовозрелых свинок-налогов 5-месячного возраста по 20 голов в каждой. Свинки 1 опытной группы подвергались стимуляции изготовленным препаратом натуральных половых феромонов хряка. Свинки 2 опытной группы обрабатывались препаратом-прототипом. Животные 3 контрольной группы стимуляции не подвергались.
Обработку свинок феромонами проводили в дозе 0,5 мл/гол через день, путем распыления пульверизатором на уровне головы животных до наступления полового созревания (первой половой охоты). Охоту определяли с использованием хряка-пробника два раза в день (утром и вечером).
В ходе проведенных исследований было установлено, что у ремонтных свинок, подвергавшихся стимуляции изготовленным препаратом натуральных половых феромонов хряка, половое созревание наступило на 8-10 дней раньше, чем у свинок, обработанных препаратом-прототипом, и на 19-20 дней раньше по сравнению с контрольными животными. При этом было отмечено, что у большинства свинок 1 опытной группы половозрелость проявлялась в первые 10 дней эксперимента (таблица 2).
Пример 3. Опыты на овцах проводили в условиях ветеринарной клиники Курской государственной сельскохозяйственной академии им. И.И. Иванова, на овцах романовской породы.
Было отобрано 3 группы 5-месячных ярок-аналогов по 7 голов в каждой. Ярки опытной группы подвергались стимуляции изготовленным препаратом. Ярки 2 опытной группы обрабатывались препаратом-прототипом. Животные 3 группы были контрольными, их обрабатывали дистиллированной водой.
Обработку ярок феромонами проводили в дозе 0,5 мл/гол один раз в день до наступления полового созревания. Распыляли препарат на уровне головы животных.
Результаты исследований показали, что половое созревание у ярок, подвергавшихся стимуляции изготовленным препаратом, наступало в 184,0±3,7-дневном возрасте, у животных 2 опытных группы - в 195,0±3,0-дневном возрасте, а у контрольных животных - в 200,5±4,4-дневном возрасте.
При контрольном убое овец, подвергавшихся стимуляции в 205-дневном возрасте, было установлено, что у животных после стимуляции изготовленным препаратом половые органы были развиты лучше, чем у овец 2-опытной и 3-контрольной гриппы (таблица 3).
Таким образом, разработанный способ получения натуральных половых феромонов самцов домашних животных позволяет получить препарат, обладающий более выраженной биологической активностью, и увеличить его выход по сравнению со способом-прототипом.
Способ получения препарата натуральных половых феромонов самцов домашних животных, включающий измельчение семенников, их гомогенизацию, инкубирование, центрифугирование, смешивание с мочой, перегон с водяным паром и последующее добавление фермента протосубтилина, отличающийся тем, что в гомогенизат семенников дополнительно вносят 0,5-1,0% от общей массы полисорбат ТВИН-80, инкубируют смесь в течение 50-60 мин при 37-39°С и смешивают с мочой в соотношении 1:3-3,5.
